JP2017136037A - Pcr container - Google Patents
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Abstract
Description
この発明はＰＣＲ用容器に関し、特に、ＤＮＡ検出装置によりＰＣＲを行う際に用いるＰＣＲ用容器に関するものである。 The present invention relates to a PCR container, and more particularly to a PCR container used when performing PCR with a DNA detection apparatus.
従来、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によりＤＮＡを増幅する際、図２１及び図２２に示すようなＰＣＲ用容器が用いられている。 Conventionally, when amplifying DNA by polymerase chain reaction (PCR), a PCR container as shown in FIGS. 21 and 22 is used.
図２１は従来のＰＣＲ用容器の外観形状を示す概略正面図であって、（１）は蓋体が開いた状態のものであり、（２）は蓋体が閉じた状態のものである。又、図２２は蓋体が閉じた状態の図２１で示したＰＣＲ用容器の断面図である。 FIG. 21 is a schematic front view showing the external shape of a conventional PCR container, wherein (1) shows a state in which the lid is open, and (2) shows a state in which the lid is closed. FIG. 22 is a cross-sectional view of the PCR container shown in FIG. 21 with the lid closed.
これらの図を参照して、ＰＣＲ用容器７１は、例えばポリプロピレンからなり、容器本体８１と蓋体７６と接続部７７とから主に構成されている。
Referring to these drawings, the
容器本体８１は、上（ＰＣＲ用容器を使用する際に容器本体に対して蓋体の存在する方向）側の開いた円筒形状であり、底部は閉じている。 The container main body 81 has an open cylindrical shape on the upper side (the direction in which the lid is present with respect to the container main body when the PCR container is used), and the bottom is closed.
蓋体７６は、円盤形状であり、その大きさは容器本体８１の開いた上面を完全に覆うことのできるものである。又、蓋体７６は、その下面に円形リング状に突出した係止部７８が形成されている。図２２に示すように、蓋体７６が閉じた状態にあっては、係止部７８の外面が容器本体８１の内面と係止することによって、蓋体７６は容器本体８１の開いた上面を完全に覆う状態で固定される。これによって、容器本体８１内部への異物の混入や、最高９０℃超に達するＰＣＲ中の容器本体８１の内容物の蒸発を防ぐものである。 The lid body 76 has a disk shape, and its size can completely cover the open upper surface of the container body 81. Further, the lid 76 has a locking portion 78 projecting in a circular ring shape on the lower surface thereof. As shown in FIG. 22, when the lid body 76 is closed, the outer surface of the locking portion 78 engages with the inner surface of the container body 81, so that the lid body 76 covers the open upper surface of the container body 81. Fixed in a completely covered state. This prevents foreign matter from entering the inside of the container body 81 and evaporation of the contents of the container body 81 during PCR reaching a maximum of over 90 ° C.
接続部７７は、一定の角度の範囲内で屈伸自在な帯形状であり、その一方端が蓋体７６の端部と接続され、他方端が容器本体８１の端部と接続されている。
The connecting
ＰＣＲ用容器７１を使用する際には、まず、図２１の（１）に示すような蓋体７６が開いた状態において、容器本体８１内部に、標的ＤＮＡを含んだ図示しない検体（例えば唾液）と、ＰＣＲの進行に必要な各試薬を混合した図示しない試薬（例えば水、緩衝液、プライマー、ｄＮＴＰ、ＤＮＡポリメラーゼ、蛍光試薬）とをマイクロピペット等の実験器具を用いて所定量投入する。次に、蓋体７６の上面に対して上方から押圧することによって、蓋体７６の係止部７８の外面が容器本体８１の内面と係止し、蓋体７６は図２１の（２）に示すような閉じた状態で固定される。この状態のＰＣＲ用容器７１を、図示しないサーマルサイクラー等のＤＮＡ検出装置に設置し、加熱及び冷却の周期を所定回数繰り返すことで、ＰＣＲが進行し、標的ＤＮＡが増幅する。
When using the
上記のような従来のＰＣＲ用容器では、ＰＣＲの進行に必要な量の検体を計り取るためにはマイクロピペット等の実験器具を用いなければならず、煩雑であると共に、実験室等の実験器具が揃った場所でしかＰＣＲを行うことができなかった。 In the conventional PCR container as described above, a laboratory instrument such as a micropipette must be used in order to measure the amount of specimen necessary for the progress of the PCR. PCR could only be performed at a place where
この発明は、上記のような課題を解決するためになされたもので、実験器具を用いず簡易に検体を計り取ることのできるＰＣＲ用容器を提供することを目的とする。 The present invention has been made to solve the above-described problems, and an object of the present invention is to provide a PCR container capable of easily measuring a sample without using a laboratory instrument.
上記の目的を達成するために、請求項１記載の発明は、容器本体と、容器本体に嵌合する蓋体とからなるＰＣＲ用容器であって、容器本体は、底部と、底部から立ち上がる筒状の第１側壁とからなる、試薬を収容するための試薬収容部と、第１側壁の上端に接続され、外方に拡がる拡張部と、拡張部の外方端に接続され、上方に延びる筒状の第２側壁からなる胴部とを備え、蓋体は、容器本体の胴部の内方に嵌合自在となるように構成され、嵌合時において、拡張部を含め試薬収容部の上方を覆う蓋部と、蓋部の外方端に接続され、嵌合時において、第２側壁の内面に密着状態である筒状の第１側壁部とを備え、蓋部の下面には、検体を収容するための上方に凹んだ凹部が形成されているものである。
In order to achieve the above object, the invention according to
このように構成すると、蓋体の凹部を利用して検体の計り取りが可能となる。 If comprised in this way, a sample will be measured using the recessed part of a cover body.
請求項２記載の発明は、請求項１記載の発明の構成において、容器本体の胴部及び蓋体の第１側壁部の各々は、上方に向かって拡がる形状を有するものである。 According to a second aspect of the present invention, in the configuration of the first aspect of the invention, each of the body portion of the container body and the first side wall portion of the lid body has a shape that expands upward.
このように構成すると、胴部の上端で構成される挿入口に対して蓋部の大きさが小さくなる。 If comprised in this way, the magnitude | size of a cover part will become small with respect to the insertion port comprised by the upper end of a trunk | drum.
請求項３記載の発明は、請求項１又は請求項２記載の発明の構成において、蓋体は、更に、第１側壁部の上端に段部を介して接続され、上方に延びる筒状の第２側壁部を備え、第２側壁部は、嵌合時において、胴部の外面に整列するものである。 According to a third aspect of the present invention, in the configuration of the first or second aspect of the present invention, the lid is further connected to the upper end of the first side wall portion via a step portion, and extends upward. 2 side wall parts are provided, and a 2nd side wall part aligns with the outer surface of a trunk | drum at the time of a fitting.
このように構成すると、嵌合時において、段部がストッパーとなり、容器本体と蓋体とは一体化する。 If comprised in this way, a step part becomes a stopper at the time of a fitting, and a container main body and a cover body are integrated.
請求項４記載の発明は、請求項３記載の発明の構成において、容器本体と蓋体とは、水平断面が円形リング状の弾性材料で形成され、第２側壁の内面において、周方向に連続する内方に突出したリング状の第１凸部が形成され、第１側壁部の外面において、周方向に連続する外方に突出したリング状の第２凸部が形成され、嵌合時において、第２凸部は第１凸部に接した状態でその下方に位置するように形成されているものである。 According to a fourth aspect of the present invention, in the configuration of the third aspect of the invention, the container main body and the lid are formed of an elastic material having a circular cross section in the horizontal cross section, and are continuous in the circumferential direction on the inner surface of the second side wall. A ring-shaped first convex portion projecting inward is formed, and a ring-shaped second convex portion projecting outward in the circumferential direction is formed on the outer surface of the first side wall portion. The second convex portion is formed so as to be positioned below the first convex portion in contact with the first convex portion.
このように構成すると、試薬収容部の密閉性が向上する。 If comprised in this way, the sealing property of a reagent storage part will improve.
請求項５記載の発明は、請求項３記載の発明の構成において、容器本体と蓋体とは、水平断面が円形リング状の弾性材料で形成され、胴部の内面にはガイド溝が形成され、ガイド溝は、胴部の上端から下方に延びる第１溝部と、第１溝部の下方端に接続され、周方向下方に延びる第２溝部と、第２溝部の周方向端に接続され、周方向に延びる第３溝部とからなり、第１側壁部の外面にはガイド溝にスライド自在に係合する突起が形成され、容器本体と蓋体とを相対的に移動させることによって、突起は第１溝部及び第２溝部を介して第３溝部まで移動し、突起が第２溝部の途中に位置する時、蓋部は拡張部に当接状態になっているように移動するものである。 According to a fifth aspect of the present invention, in the configuration of the third aspect of the present invention, the container body and the lid are formed of an elastic material having a circular cross section in the horizontal cross section, and a guide groove is formed on the inner surface of the body portion. The guide groove is connected to the first groove portion extending downward from the upper end of the body portion, the second groove portion extending downward in the circumferential direction, and connected to the circumferential end of the second groove portion. And a protrusion that is slidably engaged with the guide groove is formed on the outer surface of the first side wall. By moving the container body and the lid relative to each other, the protrusion is When the projection moves to the third groove portion through the first groove portion and the second groove portion, and the protrusion is positioned in the middle of the second groove portion, the lid portion moves so as to be in contact with the expansion portion.
このように構成すると、突起とガイド溝によって試薬収容部の密閉性がより向上する。 If comprised in this way, the sealing performance of a reagent storage part will improve more with a processus | protrusion and a guide groove.
請求項６記載の発明は、請求項５記載の発明の構成において、ガイド溝及び突起は、容器本体と蓋体の周方向に等間隔で複数設けられるものである。 According to a sixth aspect of the present invention, in the configuration of the fifth aspect of the present invention, a plurality of guide grooves and protrusions are provided at equal intervals in the circumferential direction of the container body and the lid.
このように構成すると、容器本体に対する蓋体の押圧状態が偏らない。 If comprised in this way, the press state of the cover body with respect to a container main body will not be biased.
請求項７記載の発明は、請求項１から請求項６のいずれかに記載の発明の構成において、少なくとも容器本体の試薬収容部は、透明材料で構成されるものである。 A seventh aspect of the present invention is the structure of any one of the first to sixth aspects, wherein at least the reagent storage portion of the container body is made of a transparent material.
このように構成すると、試薬収容部は光を透過する。 If comprised in this way, a reagent accommodating part will permeate | transmit light.
以上説明したように、請求項１記載の発明は、蓋体の凹部を利用して検体の計り取りが可能となるため、容器本体と蓋体との嵌合によって検体と試薬とを一体化する容器となる。
As described above, in the invention described in
請求項２記載の発明は、請求項１記載の発明の効果に加えて、胴部の上端で構成される挿入口に対して蓋部の大きさが小さくなるため、容器本体と蓋体とが嵌合し易くなる。
In addition to the effect of the invention described in
請求項３記載の発明は、請求項１又は請求項２記載の発明の効果に加えて、嵌合時において、段部がストッパーとなり、容器本体と蓋体とは一体化するため、使い勝手が向上する。
In addition to the effects of the invention described in
請求項４記載の発明は、請求項３記載の発明の効果に加えて、試薬収容部の密閉性が向上するため、ＰＣＲ用容器としての信頼性が向上する。
In addition to the effect of the invention described in
請求項５記載の発明は、請求項３記載の発明の効果に加えて、突起とガイド溝によって試薬収容部の密閉性がより向上するため、ＰＣＲ用容器としての信頼性がより向上する。
In addition to the effect of the invention described in
請求項６記載の発明は、請求項５記載の発明の効果に加えて、容器本体に対する蓋体の押圧状態が偏らないため、試薬収容部の密閉性が更に安定する。 According to the sixth aspect of the invention, in addition to the effect of the fifth aspect of the invention, the pressing state of the lid against the container main body is not biased, so that the sealability of the reagent container is further stabilized.
請求項７記載の発明は、請求項１から請求項６のいずれかに記載の発明の効果に加えて、試薬収容部は光を透過するため、容器のままでのＤＮＡの光検出が容易となる。 According to the seventh aspect of the invention, in addition to the effect of the invention according to any one of the first to sixth aspects, the reagent container transmits light, so that the photodetection of DNA in the container is easy. Become.
図１はこの発明の第１の実施の形態によるＰＣＲ用容器の外観形状を示す正面図である。又、図２は図１で示したＩＩ−ＩＩラインの端面図である。 FIG. 1 is a front view showing the appearance of a PCR container according to the first embodiment of the present invention. FIG. 2 is an end view of the II-II line shown in FIG.
これらの図を参照して、ＰＣＲ用容器１は、例えばポリプロピレンからなり、水平断面が円形リング状の容器本体１１と、容器本体１１に嵌合する蓋体６とから構成されており、図においては容器本体１１と蓋体６とが嵌合状態である。
Referring to these drawings, the
容器本体１１は、底部１２と底部１２から立ち上がる筒状の第１側壁１３とからなる試薬収容部１４と、第１側壁１３の上端に接続され、外方に拡がる拡張部１５と、拡張部１５の外方端に接続され、上方に延びる筒状の第２側壁１６からなる胴部１７とから構成されている。又、各部分の厚さは０．０５〜０．５ｍｍの範囲内であれば良い。
The container body 11 includes a bottom portion 12 and a
蓋体６は、拡張部１５を含め試薬収容部１４の上方を覆う蓋部７と、蓋部７の外方端に接続され、第２側壁１６の内面に密着状態となる筒状の第１側壁部８とから構成されている。蓋部７の下面には、検体を収容するための上方に凹んだ凹部９が形成されている。又、各部分の厚さは０．０５〜０．５ｍｍの範囲内であれば良い。
The
ここで、容器本体１１の胴部１７及び蓋体６の第１側壁部８の各々は、上方に向かって拡がる形状を有しているため、嵌合時において、容器本体１１の第２側壁１６の内面に蓋体６の第１側壁部８が密着状態となり易い。これについては後述する。
Here, since each of the trunk | drum 17 of the container main body 11 and the 1st
又、蓋体６は、容器本体１１の内方に嵌合自在となるように構成されており、蓋体６を上方に引き抜くことで容器本体１１と蓋体６とは分離される。
The
次に、ＰＣＲ用容器１の使用方法について説明する。
Next, a method for using the
図３は図１で示したＰＣＲ用容器の第１の使用状態を示す端面図である。 FIG. 3 is an end view showing a first use state of the PCR container shown in FIG.
図を参照して、ＰＣＲ用容器は容器本体１１（図示せず）と蓋体６とが分離された状態である。
Referring to the figure, the PCR container is in a state where the container body 11 (not shown) and the
まず、この分離された状態において、蓋体６の凹部９を検体２（例えば口腔内粘膜）に対して押し付けることで、凹部９に検体２の一部（例えば唾液）を計り取ることができる。
First, in this separated state, by pressing the
次に、図４は図１で示したＰＣＲ用容器の第２の使用状態を示す端面図であって、（１）は容器本体と蓋体との嵌合前の状態を示すものであり、（２）は容器本体と蓋体との嵌合途中の状態を示すものである。 Next, FIG. 4 is an end view showing a second use state of the PCR container shown in FIG. 1, wherein (1) shows a state before the container body and the lid body are fitted, (2) shows a state in the middle of fitting between the container body and the lid.
図を参照して、蓋体６は、分離された状態において、上述のようにその凹部９に検体２を収容している。容器本体１１は、分離された状態において、マイクロピペット等の実験器具を用いて試薬３を試薬収容部１４に収容している。Ｘは、蓋体６の蓋部７の径である。Ｙは、容器本体１１の、胴部１７の上端で構成される挿入口１８の径である。
Referring to the figure,
容器本体１１の胴部１７及び蓋体６の第１側壁部８の各々は、上述のように上方に向かって拡がる形状を有しているため、Ｘ＜Ｙ、即ち、挿入口１８に対して蓋部７の大きさが小さくなっている。又、（２）に示す嵌合途中の状態にあっても、蓋部７の大きさはその通過位置の胴部１７内部の大きさよりも大きく、図２に示した嵌合状態に至るまで蓋部７の胴部１７内部の通過は容易である。
Since each of the
そして、図２に示したように蓋部７の端部が拡張部１５と接し、試薬収容部１４の上方を覆う嵌合状態に至ると、容器本体１１の第２側壁１６の内面と蓋体６の第１側壁部８の外面とが密着状態となる。これによって、試薬収容部１４への異物の混入や内容物の蒸発を防ぐ効果を発揮する。
Then, as shown in FIG. 2, when the end portion of the
このように、ＰＣＲ用容器１は、容器本体１１と蓋体６とが嵌合し易い形状を有しているものである。
Thus, the
そして、上述のように容器本体１１と蓋体６とが嵌合することによって、容器本体１１に収容された試薬３と蓋体６に収容された検体２とが一体化され、ＰＣＲの進行に必要な混合溶液が形成される。
Then, as described above, the container body 11 and the
次に、検体と試薬とを収容したＰＣＲ用容器１を用いたＤＮＡ検出装置によってＰＣＲを進行させる工程について説明する。
Next, a process of advancing PCR with a DNA detection apparatus using a
図５は図１で示したＰＣＲ用容器を用いたＤＮＡ検出装置の動作前の状態を示す概略正面図である。又、図６は図５に対応した図であって、ＤＮＡ検出装置の第１の動作状態を示す概略正面図である。 FIG. 5 is a schematic front view showing a state before the operation of the DNA detection apparatus using the PCR container shown in FIG. FIG. 6 corresponds to FIG. 5 and is a schematic front view showing a first operation state of the DNA detection apparatus.
これらの図を参照して、ＤＮＡ検出装置９１は、ＤＮＡ増幅構造体９２と、検出部１１２と、制御部（図示せず）とを中心として構成されている。
With reference to these drawings, the
ＤＮＡ増幅構造体９２は、ＰＣＲ用容器１を保持する容器ホルダー９７と、容器ホルダー９７を支持する支持部９８と、プレート状の第１のヒーター１０１と、プレート状の第２のヒーター１０６と、第１のヒーター１０１及び第２のヒーター１０６をその上面に固定する台座１１０とを中心として構成されている。
The DNA amplification structure 92 includes a
ＰＣＲ用容器１は、上述のように試薬収容部１４に試薬３と検体２とを一体化した混合溶液が収容されており、蓋体６によって密閉されている。図５の一点鎖線で描いた矢印で示すように、ＰＣＲ用容器１を容器ホルダー９７及び支持部９８を通過させ、固定部９４を上方から取り付けることで、ＰＣＲ用容器１はＤＮＡ増幅構造体９２に設置され、図６に示す第１の動作状態となる。
As described above, the
容器ホルダー９７は、ＰＣＲ用容器１の底面が第１のヒーター１０１及び第２のヒーター１０６の表面と水平になるようにしてＰＣＲ用容器１を保持する。又、容器ホルダー９７はその上面に着脱自在に取り付けられた固定部９４を有する。更に、固定部９４は、その内部に例えばバネ等の付勢手段９５を有する。更に、付勢手段９５がＰＣＲ用容器１の蓋体６に対して上方から付勢することで、ＰＣＲ用容器１は下方向に付勢された状態で保持される。この付勢による効果は後述する。
The
支持部９８は、容器ホルダー９７を支持するように構成されている。又、制御部からの指示に従って、支持部９８は容器ホルダー９７を図６の上部の一点鎖線で描いた矢印の方向にスライド自在に移動させることができる。それによってＰＣＲ用容器１が水平移動する。
The support part 98 is configured to support the
第１のヒーター１０１は、加熱体１０２と発熱体１０３とを中心として構成されている。発熱体１０３は、その温度を制御部によって調整自在に構成されており、加熱体１０２を加熱する。加熱体１０２は、例えばシリコンゴムからなり、発熱体１０３の上に設置され、ＰＣＲ用容器１の試薬収容部１４が嵌入できる凹み１０４を有する。凹み１０４の表面は、制御部によって例えば１２０℃の高温に設定されている。
The first heater 101 is configured with a
第２のヒーター１０６は、加熱体１０７と発熱体１０８とを中心として構成されている。発熱体１０８は、その温度を制御部によって調整自在に構成されており、加熱体１０７を加熱する。加熱体１０７は、例えばシリコンゴムからなり、発熱体１０８の上に設置され、ＰＣＲ用容器１の試薬収容部１４が嵌入できる凹み１０９を有する。凹み１０９の表面は、制御部によって例えば５０℃の低温に設定されている。
The second heater 106 is configured around a
台座１１０は、その上面に第１のヒーター１０１及び第２のヒーター１０６が固定されている。又、台座１１０は、制御部によって、図６の下部の一点鎖線で描いた矢印の方向にスライド上昇又は下降自在に制御されている。それによって、第１のヒーター１０１及び第２のヒーター１０６は上昇又は下降することができる。 The first heater 101 and the second heater 106 are fixed to the upper surface of the pedestal 110. Further, the pedestal 110 is controlled by the control unit so as to be able to slide up and down in the direction of the arrow drawn by the one-dot chain line in the lower part of FIG. Thereby, the first heater 101 and the second heater 106 can be raised or lowered.
次に、図７は図５に対応した図であって、ＤＮＡ検出装置の第２の動作状態を示す概略正面図である。 Next, FIG. 7 is a diagram corresponding to FIG. 5 and a schematic front view showing a second operation state of the DNA detection apparatus.
図を参照して、まず制御部（図示せず）からの指示に従って台座１１０が図の実線で描いた矢印の方向に上昇し、ＰＣＲ用容器１の試薬収容部１４が加熱体１０２の凹み１０４に嵌入する。
Referring to the figure, first, pedestal 110 rises in the direction of the arrow drawn by the solid line in the figure in accordance with an instruction from a control unit (not shown), and
このとき、上述したようにＰＣＲ用容器１は付勢手段９５によって下方向（ＰＣＲ用容器１に対して第１のヒーター１０１が存在する方向）に付勢されているため、上昇する加熱体１０２の凹み１０４に接触したときもＰＣＲ用容器１が浮き上がってしまう虞が無く、接触位置が安定する。
At this time, as described above, since the
そして、このＰＣＲ用容器１の表面と第１のヒーター１０１の表面との接触（第１の接触）によって、ＰＣＲ用容器１の試薬収容部１４内に収容されたＤＮＡが加熱される。
The DNA accommodated in the
ここで、第１の接触によるＤＮＡの加熱の状態について説明する。 Here, the state of DNA heating by the first contact will be described.
図８は図７で示したＡ部分の拡大端面図である。 FIG. 8 is an enlarged end view of a portion A shown in FIG.
図を参照して、ＰＣＲ用容器１の試薬収容部１４にはＤＮＡを含んだ検体と試薬とが一体化された混合溶液４が収納されている。加熱体１０２は例えばシリコンゴムからなるため、弾力性（圧縮変形からの形状回復性）及び熱伝導性に優れる。そのため、第１の接触にあっては、試薬収容部１４は凹み１０４に高い密着性で嵌入しており、加熱体１０２から試薬収容部１４への直接的な熱伝導により、混合溶液４が加熱される。
Referring to the figure, the
ここで、加熱中の混合溶液４においては、Ｌで示す混合溶液４上部は外気に近いため温度は相対的に低く、Ｈで示す混合溶液４下部は加熱体１０２からの熱が強く伝わる部分であるため温度が相対的に高く、Ｍで示す混合溶液４中部はＬ及びＨの中間程度の温度となる。これにより、図の矢印で示すように、加熱された下部の溶液は上昇を始め、溶液天井で折り返す対流を起こす。この熱対流により、混合溶液４は効率的に加熱される。
Here, in the
次に、図９は図５に対応した図であって、ＤＮＡ検出装置の第３の動作状態を示す概略正面図である。 Next, FIG. 9 is a diagram corresponding to FIG. 5 and a schematic front view showing a third operation state of the DNA detection apparatus.
第１の接触によって例えば９２℃に加熱されＤＮＡの変性が行われた後、制御部（図示せず）からの指示に従って、図の下部の矢印で示すように台座１１０は下降し、第１の接触は解除される。その後、制御部からの指示に従って、支持部９８は容器ホルダー９７を図の上部の矢印で示すように水平移動させる。これによって、ＰＣＲ用容器１は第２のヒーター１０６の上方に移動し、ＰＣＲ用容器１の試薬収容部１４が加熱体１０７の凹み１０９の上方に位置することとなる。
After the DNA is denatured by heating to, for example, 92 ° C. by the first contact, the pedestal 110 descends as shown by the arrow at the bottom of the figure in accordance with an instruction from a control unit (not shown), and the first Contact is released. Thereafter, in accordance with an instruction from the control unit, the support unit 98 moves the
次に、図１０は図５に対応した図であって、ＤＮＡ検出装置の第４の動作状態を示す概略正面図である。 Next, FIG. 10 is a diagram corresponding to FIG. 5 and a schematic front view showing a fourth operation state of the DNA detection apparatus.
制御部（図示せず）からの指示に従って、台座１１０が図の実線で描いた矢印の方向に上昇し、第１の接触と同様に、ＰＣＲ用容器１の試薬収容部１４が加熱体１０７の凹み１０９に安定的に嵌入する。
In accordance with an instruction from a control unit (not shown), the pedestal 110 rises in the direction of the arrow drawn by the solid line in the figure, and the
そして、このＰＣＲ用容器１の表面と第２のヒーター１０６の表面との接触（第２の接触）によって、ＰＣＲ用容器１内に収納されたＤＮＡが例えば６５℃に冷却され、アニーリングが行われる。
Then, due to the contact (second contact) between the surface of the
第２の接触が完了すると、制御部からの指示に従って台座１１０が下降し、容器ホルダー９７が水平移動し、ＰＣＲ用容器１は第１のヒーター１０１の上方に位置する図５で示した状態に戻る。
When the second contact is completed, the pedestal 110 is lowered according to the instruction from the control unit, the
そして、上述した第１の接触と第２の接触が交互に繰り返されることにより、ＰＣＲが進行する。又、第１の接触と第２の接触が所定回数繰り返されＰＣＲが完了すると、増幅したＤＮＡの検出工程に進む。 And PCR advances by repeating the 1st contact and 2nd contact which were mentioned above alternately. When the first contact and the second contact are repeated a predetermined number of times and the PCR is completed, the process proceeds to the detection process of the amplified DNA.
次に、図１１は図５に対応した図であって、ＤＮＡ検出装置の第５の動作状態を示す概略正面図である。 Next, FIG. 11 is a diagram corresponding to FIG. 5 and is a schematic front view showing a fifth operation state of the DNA detection apparatus.
図を参照して、ＰＣＲが完了した後、制御部からの指示に従って、支持部９８が容器ホルダー９７を図の矢印で示す方向に移動させることにより、ＰＣＲ用容器１は検出部１１２に移動する。
Referring to the figure, after the PCR is completed, the support container 98 moves the
図１２は図１１で示したＸＩＩ−ＸＩＩラインの矢視図である。 FIG. 12 is an arrow view of the XII-XII line shown in FIG.
図を参照して、検出部１１２は、発光素子１１３及び受光素子１１４を中心として構成されている。発光素子１１３と受光素子１１４とは水平方向に同軸直線上で対面するように位置する。ＰＣＲ用容器１は、増幅したＤＮＡが収容されている試薬収容部１４を当該直線が貫くように位置する。発光素子１１３は有効波長が４５０ｎｍ〜５７０ｎｍのＬＥＤランプである。受光素子１１４は有効波長が３００ｎｍ〜８２０ｎｍのフォトダイオードである。
Referring to the figure, the detection unit 112 is configured with a light emitting element 113 and a light receiving element 114 as the center. The light emitting element 113 and the light receiving element 114 are positioned so as to face each other on a coaxial straight line in the horizontal direction. The
検出に際しては、制御部（図示せず）からの指示に従って、発光素子１１３がＰＣＲ用容器１の試薬収容部１４に向かって励起光を発光する。試薬収容部１４内の増幅したＤＮＡは試薬中に含まれる蛍光試薬と結合しているため、励起光に反応し蛍光する。試薬収容部１４は透明材料で構成されているため、光を透過し、受光素子１１４は蛍光したＤＮＡの発光強度を受光することができる。試薬収容部から他の検出用容器に移し替えることなくＤＮＡの光検出が可能である。そして、この受光した発光強度に基づいて、増幅したＤＮＡの定量化による検出を行うことができる。このように、ＰＣＲ用容器１は試薬収容部１４が透明材料で構成されているため、他の検出用容器に内容物を移し替えることなくＤＮＡの光検出を行うことができるものである。
At the time of detection, the light emitting element 113 emits excitation light toward the
以上説明したように、ＰＣＲ用容器１の試薬収容部１４内に収容されたＤＮＡは、ＤＮＡ検出装置９１のＤＮＡ増幅構造体９２によって加熱及び冷却周期が形成されＰＣＲが進行する。そして加熱及び冷却周期が所定回数繰り返されＰＣＲが完了すると、ＤＮＡ検出装置９１の検出部１１２によってＰＣＲ用容器１の試薬収容部１４内の増幅したＤＮＡが検出される。
As described above, the DNA housed in the
次に、図１３はこの発明の第２の実施の形態によるＰＣＲ用容器の外観形状を示す正面図である。又、図１４は図１３で示したＸＩＶ−ＸＩＶラインの端面図であって、（１）は嵌合前の状態を示すものであり、（２）は嵌合後の状態を示すものである。 Next, FIG. 13 is a front view showing the appearance of the PCR container according to the second embodiment of the present invention. 14 is an end view of the XIV-XIV line shown in FIG. 13, wherein (1) shows a state before fitting, and (2) shows a state after fitting. .
これらの図を参照して、ＰＣＲ用容器２１は、容器本体３１と、容器本体３１に嵌合する蓋体２６とから構成されている。又、容器本体３１と蓋体２６とは、水平断面が円形リング状である。尚、ＰＣＲ用容器２１の基本的な構成及び使用方法は第１の実施の形態によるＰＣＲ用容器１と同様であるため、差異点を中心に以下説明する。
With reference to these drawings, the PCR container 21 is composed of a container main body 31 and a lid body 26 fitted to the container main body 31. The container main body 31 and the lid body 26 have a circular ring shape in the horizontal cross section. The basic configuration and method of use of the PCR container 21 are the same as those of the
容器本体３１は、第１の実施の形態における容器本体３１の構成に加えて、第２側壁３６の内面下方において、周方向に連続する内方に突出したリング状の第１凸部３９が形成されている。
In addition to the configuration of the container main body 31 in the first embodiment, the container main body 31 is formed with a ring-shaped first
蓋体２６は、第１の実施の形態における蓋体６の構成に加えて、第１側壁部２８の上端に段部２２を介して接続され、上方に延びる筒状の第２側壁部２３を備えている。又、第１側壁部２８の外面下方において、周方向に連続する外方に突出したリング状の第２凸部３０が形成されている。
In addition to the configuration of the
図１４の（１）に示す嵌合前の状態にあっては、第１の実施の形態と同様に、容器本体３１の胴部３７及び蓋体２６の第１側壁部２８の各々は、上方に向かって拡がる形状を有しているため、嵌合が容易である。蓋体２６を下方に押し込むことによって、第２凸部３０は第１凸部３９に一旦引っ掛かるが、ＰＣＲ用容器２１は弾性材料で形成されているため押し広がり、第２凸部３０が第１凸部３９の下方に到達し、これらが接触した状態で拡張部３５の上面と蓋部２７の下面とが接触した状態になることで嵌合が完了し、図１４の（２）に示す状態となる。
In the state before the fitting shown in (1) of FIG. 14, each of the
図１４の（２）に示す嵌合後の状態にあっては、第２側壁部２３は胴部３７の外面に整列するため、段部２２が嵌合時のストッパーとなり、容器本体３１と蓋体２６とは外観形状において一体化している。そのため、第１の実施の形態のＰＣＲ用容器１と同様に使用することができ、又、蓋体２６の外面と容器本体３１の外面とを指で持ち嵌合の開始及び解除も自在にできるため、使い勝手が向上している。
In the state after fitting shown in (2) of FIG. 14, the second
又、第２凸部３０は第１凸部３９に接しその下方に位置した状態で嵌合するため、蓋体２６が容器本体３１に対して上下方向に動いてしまう虞が少なく、試薬収容部３４の密閉性が向上しており、そのためＰＣＲ用容器としての信頼性も向上している。
Further, since the second convex portion 30 is fitted in a state where it is in contact with and located below the first
次に、図１５はこの発明の第３の実施の形態によるＰＣＲ用容器の外観形状を示す正面図である。又、図１６は図１５で示したＰＣＲ用容器であって、容器本体と蓋体とが分離した状態を示す正面図である。更に、図１７は図１６で示したＸＶＩＩ−ＸＶＩＩラインの断面図である。更に、図１８は図１７で示したＸＶＩＩＩ−ＸＶＩＩＩラインの端面図である。更に、図１９は図１７で示したＸＩＸ−ＸＩＸラインの端面図である。 Next, FIG. 15 is a front view showing the appearance of the PCR container according to the third embodiment of the present invention. FIG. 16 is a front view showing the PCR container shown in FIG. 15 in a state where the container main body and the lid are separated. FIG. 17 is a cross-sectional view taken along line XVII-XVII shown in FIG. Further, FIG. 18 is an end view of the XVIII-XVIII line shown in FIG. Further, FIG. 19 is an end view of the XIX-XIX line shown in FIG.
これらの図を参照して、ＰＣＲ用容器４１は、容器本体５１と、容器本体５１に嵌合する蓋体４６とから構成されている。尚、ＰＣＲ用容器４１の基本的な構成及び使用方法は、第２の実施の形態によるＰＣＲ用容器２１と同様であるため、差異点を中心に以下説明する。 With reference to these drawings, the PCR container 41 is composed of a container main body 51 and a lid body 46 fitted to the container main body 51. The basic configuration and method of use of the PCR container 41 are the same as those of the PCR container 21 according to the second embodiment, and will be described below with a focus on the differences.
容器本体５１は、その胴部５７の内面の対向位置に一対のガイド溝６２が形成されている。ガイド溝６２の一方は、胴部５７の上端から下方に延びる第１溝部６３と、第１溝部６３の下方端に接続され、周方向下方に延びる第２溝部６４と、第２溝部６４の周方向端に接続され、周方向に延びる第３溝部６５とから構成されている。図１９に示すように、ガイド溝６２は一点鎖線で描いた蓋体４６に形成されている後述する突起６１が通過することのできる大きさである。
The container main body 51 has a pair of guide grooves 62 formed at opposed positions on the inner surface of the body 57. One of the guide grooves 62 is connected to the
蓋体４６は、第２の実施の形態における蓋体２６の構成に加えて、その第１側壁部４８の対向位置には一対の突起６１が形成されており、突起６１の各々はガイド溝６２の各々にスライド自在に係合する。 In addition to the configuration of the lid body 26 in the second embodiment, the lid body 46 is formed with a pair of projections 61 at positions facing the first side wall portion 48, and each projection 61 has a guide groove 62. Each of these is slidably engaged.
次に、突起６１のガイド溝６２中のスライド状態について説明する。 Next, the sliding state of the protrusion 61 in the guide groove 62 will be described.
図２０は図１７で示したＰＣＲ用容器の容器本体と蓋体との嵌合の各過程を示す断面図である。 20 is a cross-sectional view showing each process of fitting the container body and the lid of the PCR container shown in FIG.
まず（１）を参照して、突起６１とガイド溝６２の第１溝部６３の上端との位置を合わせ、蓋体４６を容器本体５１に向け下方に押し込むことで突起６１が第１溝部６３中を進む。
First, referring to (1), the protrusion 61 and the upper end of the
次に（２）を参照して、蓋体４６を容器本体５１に向け下方に更に押し込むことで、突起６１が第１溝部６３の下端に到達する。このとき、容器本体５１の拡張部５５（試薬収容部５４）の上面と蓋体４６の蓋部４７の下面とは未だ接触していない。
Next, referring to (2), the protrusion 46 reaches the lower end of the
次に（３）を参照して、蓋体４６のみを時計回りにひねることで、突起６１が第２溝部６４に誘導され、周方向かつ下方に進む。これによって蓋体４６も下方に進み、蓋部４７の下面と拡張部５５（試薬収容部５４）の上面とが接触する。即ち、突起６１が第２溝部６４の途中に位置する時、蓋部４７は拡張部５５に当接状態となり、試薬収容部５４は密閉状態となる。
Next, referring to (3), by twisting only the lid 46 clockwise, the protrusion 61 is guided to the second groove portion 64 and advances in the circumferential direction and downward. As a result, the lid body 46 also moves downward, and the lower surface of the lid portion 47 comes into contact with the upper surface of the extension portion 55 (reagent storage portion 54). That is, when the protrusion 61 is positioned in the middle of the second groove portion 64, the lid portion 47 is in contact with the expansion portion 55, and the
次に（４）を参照して、蓋体４６を時計回りに更にひねることで、突起６１が第３溝部６５に誘導され、周方向に進む。突起６１が第３溝部６５の端部に到達すると、突起６１は第３溝部６５の上端に対して押圧する状態となる。即ち、蓋部４７の下面が拡張部５５（試薬収容部５４）の上面に対して下方に更に押圧されながら接触を維持する状態となる。これによって、試薬収容部５４の密閉性がより向上しており、そのためＰＣＲ用容器としての信頼性がより向上している。
Next, referring to (4), by further twisting the lid 46 clockwise, the protrusion 61 is guided to the third groove portion 65 and advances in the circumferential direction. When the protrusion 61 reaches the end of the third groove portion 65, the protrusion 61 is pressed against the upper end of the third groove portion 65. That is, the lower surface of the lid 47 is in a state of maintaining contact while being further pressed downward with respect to the upper surface of the extended portion 55 (reagent storage portion 54). Thereby, the sealing property of the
又、第２溝部６４と第３溝部６５との接続位置において、ガイド溝６２の上面が下方に突出することにより邪魔部６６が形成されている。突起６１は邪魔部６６によって周方向の位置が固定されるため、移動時の衝撃等によっても不用意に第２溝部６４に戻る虞が小さく、ＰＣＲ用容器としての信頼性が更に向上している。 Further, at the connecting position between the second groove portion 64 and the third groove portion 65, the baffle portion 66 is formed by the upper surface of the guide groove 62 protruding downward. Since the circumferential position of the projection 61 is fixed by the baffle portion 66, there is little possibility that the projection 61 will inadvertently return to the second groove portion 64 due to an impact during movement, and the reliability as a PCR container is further improved. .
尚、上記の各実施の形態では、容器本体の胴部及び蓋体の第１側壁部の各々は、上方に向かって拡がる形状を有するが、拡がらない形状であっても良い。 In each of the above embodiments, each of the body portion of the container body and the first side wall portion of the lid body has a shape that expands upward, but may have a shape that does not expand.
又、上記の第１の実施の形態では、容器本体と蓋体とは、水平断面が円形リング状であるが、円形リング状でなくとも良い。その場合でも、蓋体の凹部に検体を計り取ることができる。 In the first embodiment described above, the container main body and the lid body have a circular ring shape in the horizontal cross section, but may not have a circular ring shape. Even in such a case, the specimen can be measured in the concave portion of the lid.
更に、上記の第１の実施の形態では、容器本体と蓋体とは弾性材料からなるが、弾性を有しない材料からなるものでも良い。 Furthermore, in the first embodiment, the container body and the lid are made of an elastic material, but may be made of a material having no elasticity.
更に、上記の第２及び第３の実施の形態では、容器本体と蓋体とは共に弾性材料からなるが、容器本体と蓋体とのいずれか一方が弾性を有しない材料からなるものでも良い。 Furthermore, in the second and third embodiments described above, the container body and the lid are both made of an elastic material, but either the container body or the lid may be made of a material having no elasticity. .
更に、上記の各実施の形態では、容器本体の試薬収容部が透明材料で構成されているが、透明材料でなくとも良い。この場合でも、ＰＣＲは可能であり、光検出以外の方法で増幅したＤＮＡの検出を行うことも可能である。 Furthermore, in each of the above embodiments, the reagent storage part of the container body is made of a transparent material, but it need not be a transparent material. Even in this case, PCR is possible, and it is also possible to detect amplified DNA by a method other than light detection.
更に、上記の各実施の形態では、ＰＣＲ用容器がポリプロピレンからなるが、ポリエチレン、ポリスチレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリエチレンナフタレート、ポリカーボネート、ポリアミド、アクリル、環状ポリオレフィン、芳香族ナイロン等を用いても良い。 Further, in each of the above embodiments, the PCR container is made of polypropylene, but polyethylene, polystyrene, polyethylene terephthalate, polyethylene naphthalate, polycarbonate, polyamide, acrylic, cyclic polyolefin, aromatic nylon, or the like may be used.
更に、上記の各実施の形態では、ＤＮＡの増幅及び増幅したＤＮＡの検出において特定のＤＮＡ検出装置を用いているが、他のＤＮＡの増幅を行う装置及び増幅したＤＮＡの検出を行う装置を用いても良い。 Further, in each of the above embodiments, a specific DNA detection device is used for amplification of DNA and detection of amplified DNA. However, a device for performing amplification of other DNA and a device for detecting amplified DNA are used. May be.
更に、上記の各実施の形態では、試薬収容部がそれぞれ特定の形状を有しているが、他の形状でも良い。例えば、底部が広く第１側壁の短い形状でも良い。又、底部が狭く第１側壁の長い形状でも良い。更に、従来のＰＣＲ用容器のように底部に向かって先細りの形状でも良い。 Furthermore, in each of the above-described embodiments, each reagent storage unit has a specific shape, but other shapes may be used. For example, a shape having a wide bottom and a short first side wall may be used. Further, the bottom may be narrow and the first side wall may be long. Further, it may be tapered toward the bottom as in a conventional PCR container.
更に、上記の各実施の形態では、容器本体と蓋体とを分離した後に容器本体に対して試薬を投入しているが、分離する前に容器本体に対して所定量の試薬を収容しておいても良い。これによって、蓋体を用いて検体を計り取ることのみでＰＣＲ用の混合溶液を作製することができることとなるため、実験器具を用いず簡易にＰＣＲをすることが可能なＰＣＲ用容器となる。又、このとき、容器本体中の試薬の構成成分ごとにワックス類の層で完全に分離してあっても良い。ＰＣＲにおける加熱によってワックス類は溶解するため、ＰＣＲは正常に進行する。これによって、試薬の各構成成分が混ざり合うことが無いため、保管時に試薬が反応する虞が無くなる。又、蓋部に試薬が接触することが無くなるため、検体の計り取り時の安全性が向上する。このような目的を達成するために、試薬収容部の側壁内面を段形状に形成しても良い。 Further, in each of the above embodiments, the reagent is put into the container main body after separating the container main body and the lid, but a predetermined amount of reagent is stored in the container main body before the separation. You can leave it. As a result, a PCR mixed solution can be prepared simply by measuring the sample using the lid, and thus a PCR container capable of performing PCR easily without using experimental instruments. At this time, the components of the reagent in the container main body may be completely separated by a wax layer. Since waxes are dissolved by heating in PCR, PCR proceeds normally. Thereby, since each component of a reagent does not mix, there is no possibility that a reagent reacts at the time of storage. In addition, since the reagent does not come into contact with the lid, the safety when measuring the sample is improved. In order to achieve such an object, the inner surface of the side wall of the reagent container may be formed in a step shape.
更に、上記の第３の実施の形態では、ガイド溝及び突起は、容器本体と蓋体の周方向に等間隔で各々一対設けられているが、１つでも良い。又、等間隔で３以上の複数個所に設けられていても良い。等間隔で２以上の複数個所に設けられている場合は、容器本体に対する蓋体の押圧状態が偏らないこととなるため、試薬収容部の密閉性が更に向上する。更に、上記の第３の実施の形態では、ガイド溝が容器本体に、及び突起が蓋体にそれぞれ設けられているが、ガイド溝が蓋体に、及び突起が容器本体に、それぞれ第３の実施の形態における形状に対して反転した形状で設けられていても良い。 Furthermore, in the third embodiment described above, a pair of guide grooves and protrusions are provided at equal intervals in the circumferential direction of the container body and the lid, but one guide groove and protrusion may be provided. Further, it may be provided at three or more places at equal intervals. When two or more places are provided at equal intervals, the pressing state of the lid against the container main body is not biased, and the sealing performance of the reagent container is further improved. Furthermore, in the third embodiment, the guide groove is provided on the container body and the protrusion is provided on the lid body. However, the guide groove is provided on the lid body and the protrusion is provided on the container body. You may provide in the shape reversed with respect to the shape in embodiment.
更に、上記の第３の実施の形態では、容器本体と蓋体との嵌合の際に、突起がガイド溝を移動するように蓋体を移動させているが、容器本体を移動させても良いし、容器本体及び蓋体を移動させても良い。 Furthermore, in the third embodiment, the lid is moved so that the protrusion moves in the guide groove when the container body and the lid are fitted, but the container body may be moved. The container body and the lid may be moved.
更に、上記の第３の実施の形態では、容器本体と蓋体との嵌合の際に、突起を第２溝部に移動させるために蓋体を上方から見て時計回りにひねっているが、反時計回りにひねっても良い。この場合、ガイド溝の各々の第２溝部及び第３溝部は、図１７下部に示した方向とは逆方向に形成すれば良い。 Furthermore, in the third embodiment, when the container body and the lid are fitted, the lid is twisted clockwise as viewed from above in order to move the protrusion to the second groove. You may twist counterclockwise. In this case, the second groove portion and the third groove portion of each guide groove may be formed in a direction opposite to the direction shown in the lower part of FIG.
更に、上記の第３の実施の形態では、容器本体に第１凸部と、蓋体に第２凸部とが形成されているが、第１凸部及び第２凸部は無くとも良い。又、第１凸部及び第２凸部の組が複数あっても良い。 Furthermore, in the third embodiment described above, the first convex portion and the second convex portion are formed on the container body and the lid body, but the first convex portion and the second convex portion may not be provided. Further, there may be a plurality of sets of the first convex portion and the second convex portion.
更に、上記の第２及び第３の実施の形態では、蓋体の第２側壁部は嵌合時において容器本体の胴部の外面に整列する形状であるが、整列しない形状であっても良い。 Furthermore, in the second and third embodiments described above, the second side wall portion of the lid is shaped to align with the outer surface of the body portion of the container body when fitted, but may be shaped to be unaligned. .
更に、上記の第３の実施の形態では、突起が第２溝部の途中に位置する時に蓋部が拡張部に当接するが、第１溝部の途中に位置する時に蓋部と拡張部とが当接しても良い。即ち、突起が第２溝部の途中に位置する時、蓋部は拡張部に当接状態となっていれば良い。 Furthermore, in the third embodiment described above, the lid abuts on the extension when the protrusion is located in the middle of the second groove, but the lid and the extension are not in contact with each other when located in the middle of the first groove. You may touch. That is, when the projection is positioned in the middle of the second groove portion, the lid portion only needs to be in contact with the expansion portion.
以下、本発明に係るＰＣＲ用容器を用いてＤＮＡを検出する工程について具体的に説明する。尚、本発明は以下に示す実施例に限定されるものではない。 Hereinafter, the step of detecting DNA using the PCR container according to the present invention will be specifically described. In addition, this invention is not limited to the Example shown below.
以下では、上記のＤＮＡ検出装置（例えば図５におけるＤＮＡ検出装置９１）及び第３の実施の形態によるＰＣＲ用容器を用いて、Ｐ．ｇ．菌（歯周病菌）ＤＮＡの増幅及び増幅したＤＮＡの検出を行った。
１．使用した検体及び試薬
ＰＣＲ用の検体として、ヤマトエスロン株式会社調製のＰ．ｇ．菌ＤＮＡ（濃度１０４ｃｅｌｌ／μＬ）を準備した。
In the following, using the above-described DNA detection apparatus (for example, the
1. Samples and Reagents Used As a sample for PCR, P.P. g. Bacterial DNA (
まず、ＰＣＲ用容器を容器本体と蓋体とに分離させ、容器本体にマイクロピペットを用いて、以下の表１に示す試薬を分注した。 First, the PCR container was separated into a container body and a lid, and the reagents shown in Table 1 below were dispensed using a micropipette on the container body.
次に、容器本体と蓋体とを嵌合させた。 Next, the container main body and the lid were fitted.
以上の操作によって、容器本体に収容された表１に示す試薬と、蓋体に収容された検体とが混合され、容器本体の試薬収容部に混合溶液を得た。 By the above operation, the reagents shown in Table 1 housed in the container body and the specimen housed in the lid were mixed, and a mixed solution was obtained in the reagent housing part of the container body.
尚、表１に示した各試薬の詳細は、以下の通りであった。
・水：超純水
・緩衝液（Ｍｇ２＋濃度：３０ｍＭ）：タカラバイオ株式会社製、商品名：Ｆａｓｔ Ｂｕｆｆｅｒ Ｉ
・２．５ｍＭ ｄＮＴＰ：タカラバイオ株式会社製、商品名：ｄＮＴＰ Ｍｉｘｔｕｒｅ（各２．５ｍＭ）
・１００μＭ プライマーＩ：サーモフィッシャーサイエンティフィック社製、Ｐ．ｇ．菌用プライマーＩ
・１００μＭ プライマーＩＩ：サーモフィッシャーサイエンティフィック社製、Ｐ．ｇ．菌用プライマーＩＩ
・５Ｕ／μＬ ＤＮＡポリメラーゼ：タカラバイオ株式会社製、商品名：ＳｐｅｅｄＳＴＡＲ（登録商標） ＨＳ ＤＮＡ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ
・蛍光試薬：タカラバイオ株式会社製、商品名：ＳＹＢＲ（登録商標） Ｇｒｅｅｎ ＩＩ
又、プライマーＩ及びプライマーＩＩの配列は、以下の表２に示す通りである。
The details of each reagent shown in Table 1 were as follows.
-Water: Ultrapure water-Buffer solution (Mg 2+ concentration: 30 mM): manufactured by Takara Bio Inc., trade name: Fast Buffer I
・ 2.5 mM dNTP: manufactured by Takara Bio Inc., trade name: dNTP Mixture (each 2.5 mM)
100 μM primer I: manufactured by Thermo Fisher Scientific, P.I. g. Bacteria primer I
100 μM primer II: manufactured by Thermo Fisher Scientific Co., Ltd. g. Bacteria primer II
-5U / μL DNA polymerase: manufactured by Takara Bio Inc., trade name: SpeedSTAR (registered trademark) HS DNA Polymerase
・ Fluorescent reagent: manufactured by Takara Bio Inc., trade name: SYBR (registered trademark) Green II
The sequences of Primer I and Primer II are as shown in Table 2 below.
２．ＤＮＡ増幅構造体の設定及びその操作
上記のＤＮＡ検出装置を室内（気温２６℃）に設置し、そのＤＮＡ増幅構造体（例えば図５におけるＤＮＡ増幅構造体９２）の容器ホルダーに、上述のＰ．ｇ．菌検出用溶液を含むＰＣＲ用容器を取り付けた後、固定部及び付勢手段により付勢しつつ位置を固定した。又、第１のヒーターの温度を１２０℃に設定し、第２のヒーターの温度を５０℃に設定した。そして、以下のａ．〜ｆ．に示す工程を行った。
ａ．初めに、第１及び第２のヒーターを取り付けた台座を上昇させ、検出用溶液を含むＰＣＲ用容器の試薬収容部を第１のヒーターの凹みに嵌入させ、６０秒間接触させ加熱した。尚、ＰＣＲ用容器の試薬収容部の表面と第１のヒーターの凹みの表面との接触面積は２８．７ｍｍ２であった。
ｂ．次に、台座を下降させＰＣＲ用容器を第１のヒーターから離すと共に、ＰＣＲ用容器を第２のヒーターの上方に移動させた。
ｃ．次に、台座を上昇させ、ＰＣＲ用容器の試薬収容部を第２のヒーターの凹みに嵌入させ、３０秒間接触させ冷却した。
ｄ．次に、台座を下降させＰＣＲ用容器を第２のヒーターから離すと共に、ＰＣＲ用容器を第１のヒーターの上方に移動させた。
ｅ．次に、台座を上昇させ、ＰＣＲ用容器の試薬収容部を第１のヒーターの凹みに嵌入させ、１５秒間接触させ加熱した。
ｆ．上記ａ．〜ｄ．までの工程を１サイクルとして（但し、２サイクル目からは上記のａ．工程はｅ．工程に変更した。）、このサイクルを４０回繰り返す操作を行った。尚、１サイクルにおけるＰＣＲ用容器の移動所要時間は合計で５秒であった。
３．検出部における増幅したＤＮＡの検出
ＤＮＡ増幅構造体を使用したことでＰＣＲが進行したかを確認するために、上述したＤＮＡ増幅構造体の操作後、ＰＣＲ用容器を検出部（例えば図１１における検出部１１２）側に移動させ、ＰＣＲ用容器の試薬収容部に向かって発光素子としてＬＥＤランプ（日亜化学工業株式会社製、発光中心波長：４９５ｎｍ）を使用して励起光を照射した。
2. Setting of DNA amplification structure and its operation The above-mentioned DNA detection apparatus is installed indoors (at an air temperature of 26 ° C.), and the above-mentioned P.A. g. After the PCR container containing the bacteria detection solution was attached, the position was fixed while being urged by the fixing part and the urging means. The temperature of the first heater was set to 120 ° C., and the temperature of the second heater was set to 50 ° C. And the following a. ~ F. The steps shown in FIG.
a. First, the pedestal to which the first and second heaters were attached was raised, the reagent container of the PCR container containing the detection solution was fitted into the recess of the first heater, and contacted and heated for 60 seconds. The contact area between the surface of the reagent container of the PCR container and the surface of the recess of the first heater was 28.7 mm 2 .
b. Next, the pedestal was lowered to separate the PCR container from the first heater, and the PCR container was moved above the second heater.
c. Next, the pedestal was raised, the reagent storage part of the PCR container was fitted into the recess of the second heater, and contacted for 30 seconds to cool.
d. Next, the pedestal was lowered to separate the PCR container from the second heater, and the PCR container was moved above the first heater.
e. Next, the pedestal was raised, the reagent storage part of the PCR container was fitted into the recess of the first heater, and contacted and heated for 15 seconds.
f. A. ~ D. The steps up to and including 1 cycle (however, from the second cycle, the a. Step was changed to the e. Step), this cycle was repeated 40 times. The total time required for moving the PCR container in one cycle was 5 seconds.
3. Detection of amplified DNA in the detection unit In order to confirm whether PCR has progressed by using the DNA amplification structure, after the operation of the DNA amplification structure described above, the PCR container is connected to the detection unit (for example, detection in FIG. 11). Part 112) side, and was irradiated with excitation light using an LED lamp (manufactured by Nichia Chemical Co., Ltd., emission center wavelength: 495 nm) as a light emitting element toward the reagent container of the PCR container.
又、対比実験として、上記検定用溶液に対して検体を含まないものを準備し、上記と同様のＤＮＡ増幅構造体における操作後、ＰＣＲ用容器を検出部側に移動させ、その試薬収容部に向かってＬＥＤランプ（発光中心波長：４９５ｎｍ）を使用して励起光を照射した。 Also, as a comparison experiment, prepare an assay solution that does not contain a sample, move the PCR container to the detection unit side after operation in the same DNA amplification structure as above, and place it in the reagent storage unit. The LED lamp (light emission center wavelength: 495 nm) was used to irradiate excitation light.
更に、上記の照射による検出用溶液（ＤＮＡと結合した蛍光試薬）の発光強度を受光素子（フォトダイオード、浜松ホトニクス株式会社製、分光感度特性：３００ｎｍ〜８５０ｎｍ）によって受光した。 Furthermore, the light emission intensity of the detection solution (fluorescent reagent combined with DNA) by the irradiation was received by a light receiving element (photodiode, manufactured by Hamamatsu Photonics, Inc., spectral sensitivity characteristics: 300 nm to 850 nm).
そして、以上のＤＮＡの増幅及び増幅したＤＮＡの検出の工程を、１０回反復した。１回のＤＮＡの増幅及び増幅したＤＮＡの検出には、約４０分を要した。 Then, the above steps of DNA amplification and amplified DNA detection were repeated 10 times. About 40 minutes were required for one amplification of the DNA and detection of the amplified DNA.
以上の測定において受光素子によって受光した発光強度は、以下の表３に示す通りとなった。 The emission intensity received by the light receiving element in the above measurement is as shown in Table 3 below.
これによって、ＰＣＲ用容器によって計り取られた検体のＤＮＡが増幅されていること、即ち、ＰＣＲ用容器によって標的ＤＮＡを含む検体を確実に計り取ることができることが確認された。 Thus, it was confirmed that the sample DNA sampled by the PCR container was amplified, that is, the sample containing the target DNA could be reliably measured by the PCR container.
１、２１、４１…ＰＣＲ用容器
２…検体
３…試薬
６、２６、４６…蓋体
７、２７、４７…蓋部
８、２８、４８…第１側壁部
９…凹部
１１、３１、５１…容器本体
１２…底部
１３…第１側壁
１４、３４、５４…試薬収容部
１５、３５、５５…拡張部
１６、３６…第２側壁
１７、３７、５７…胴部
２２…段部
２３…第２側壁部
３０、５０…第２凸部
３９…第１凸部
６１…突起
６２…ガイド溝
６３…第１溝部
６４…第２溝部
６５…第３溝部
尚、各図中同一符号は同一又は相当部分を示す。
1, 21, 41 ...
Claims (7)
前記容器本体は、
底部と、前記底部から立ち上がる筒状の第１側壁とからなる、試薬を収容するための試薬収容部と、
前記第１側壁の上端に接続され、外方に拡がる拡張部と、
前記拡張部の外方端に接続され、上方に延びる筒状の第２側壁からなる胴部とを備え、
前記蓋体は、前記容器本体の前記胴部の内方に嵌合自在となるように構成され、
嵌合時において、前記拡張部を含め前記試薬収容部の上方を覆う蓋部と、
前記蓋部の外方端に接続され、嵌合時において、前記第２側壁の内面に密着状態である筒状の第１側壁部とを備え、
前記蓋部の下面には、検体を収容するための上方に凹んだ凹部が形成されている、ＰＣＲ用容器。 A container for PCR comprising a container body and a lid fitted to the container body,
The container body is
A reagent storage section for storing a reagent, comprising a bottom portion and a cylindrical first side wall rising from the bottom portion;
An extension connected to the upper end of the first side wall and extending outward;
A body part connected to the outer end of the extension part and comprising a cylindrical second side wall extending upward;
The lid is configured to be freely fitted inside the body portion of the container body,
At the time of fitting, a lid that covers the upper part of the reagent containing part including the extended part,
A cylindrical first side wall portion that is connected to the outer end of the lid portion and is in close contact with the inner surface of the second side wall during fitting;
A PCR container, wherein a concave portion recessed upward is formed on the lower surface of the lid portion to accommodate a specimen.
前記第１側壁部の上端に段部を介して接続され、上方に延びる筒状の第２側壁部を備え、
前記第２側壁部は、嵌合時において、前記胴部の外面に整列する、請求項１又は請求項２記載のＰＣＲ用容器。 The lid further includes
A cylindrical second side wall portion connected to the upper end of the first side wall portion via a stepped portion and extending upward;
The PCR container according to claim 1 or 2, wherein the second side wall portion is aligned with the outer surface of the trunk portion when fitted.
前記第２側壁の内面において、周方向に連続する内方に突出したリング状の第１凸部が形成され、
前記第１側壁部の外面において、周方向に連続する外方に突出したリング状の第２凸部が形成され、
嵌合時において、前記第２凸部は前記第１凸部に接した状態でその下方に位置するように形成されている、請求項３記載のＰＣＲ用容器。 The container body and the lid are formed of an elastic material having a circular cross section in a horizontal section,
On the inner surface of the second side wall, a ring-shaped first convex portion that protrudes inward in the circumferential direction is formed,
On the outer surface of the first side wall portion, a ring-shaped second convex portion projecting outward in the circumferential direction is formed,
The PCR container according to claim 3, wherein the second convex portion is formed so as to be positioned below the first convex portion when fitted.
前記胴部の内面にはガイド溝が形成され、
前記ガイド溝は、
前記胴部の上端から下方に延びる第１溝部と、
前記第１溝部の下方端に接続され、周方向下方に延びる第２溝部と、
前記第２溝部の周方向端に接続され、周方向に延びる第３溝部とからなり、
前記第１側壁部の外面には前記ガイド溝にスライド自在に係合する突起が形成され、
前記容器本体と前記蓋体とを相対的に移動させることによって、前記突起は第１溝部及び前記第２溝部を介して前記第３溝部まで移動し、前記突起が前記第２溝部の途中に位置する時、前記蓋部は前記拡張部に当接状態になっているように移動する、請求項３記載のＰＣＲ用容器。 The container body and the lid are formed of an elastic material having a circular cross section in a horizontal section,
A guide groove is formed on the inner surface of the body portion,
The guide groove is
A first groove extending downward from the upper end of the body,
A second groove connected to the lower end of the first groove and extending downward in the circumferential direction;
A third groove connected to the circumferential end of the second groove and extending in the circumferential direction;
A protrusion that is slidably engaged with the guide groove is formed on the outer surface of the first side wall,
By relatively moving the container body and the lid body, the protrusion moves to the third groove part via the first groove part and the second groove part, and the protrusion is positioned in the middle of the second groove part. The PCR container according to claim 3, wherein the lid portion moves so as to be in contact with the expansion portion.
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