JP2017079719A - Production method and production device of cell assembly structure - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は細胞の集合構造体の作製方法および作製装置に関し、詳しくは培養液を収容した培養容器の内部に複数の細胞凝集塊を配置し、上記複数の細胞凝集塊が培養されて相互に融合した細胞の集合構造体を作製する細胞の集合構造体の作製方法および作製装置に関する。 The present invention relates to a method and apparatus for producing a cell aggregate structure, and more specifically, a plurality of cell aggregates are arranged inside a culture vessel containing a culture solution, and the plurality of cell aggregates are cultured and fused together. The present invention relates to a method and apparatus for manufacturing a cell aggregate structure.
損傷を受けた生体機能を幹細胞などを用いて復元させる再生医療においては、細胞を高密度に培養した細胞シートが使用されている。この細胞シートは極めて薄いため、何枚かの細胞シートを重ね合わせる積層化培養細胞シートの製造方法が知られている(特許文献1)。
また一方においては、予め細胞を略球状に培養した細胞凝集塊(スフェロイド)を相互に接触した状態に並べて浮遊培養を行い、細胞凝集塊同士が融合した50〜300μmの厚みを有するシート状細胞凝集塊の作製方法が知られている(特許文献2)。
さらには、細胞凝集塊を任意の空間に配置するための方法として、糸状体または針状体からなる支持体に細胞凝集塊を貫通させる細胞の立体構造体の作製方法が知られている(特許文献3)。
In regenerative medicine in which damaged biological functions are restored using stem cells or the like, cell sheets in which cells are cultured at high density are used. Since this cell sheet is extremely thin, a method for producing a laminated cultured cell sheet in which several cell sheets are superposed is known (Patent Document 1).
On the other hand, cell aggregates (spheroids) in which cells are cultured in a substantially spherical shape in advance are arranged in contact with each other and suspended in culture, and the cell aggregates having a thickness of 50 to 300 μm are formed by fusing the cell aggregates together. A lump production method is known (Patent Document 2).
Furthermore, as a method for arranging the cell aggregate in an arbitrary space, a method for producing a three-dimensional structure of a cell in which the cell aggregate is penetrated through a support composed of a filamentous body or a needle-shaped body is known (patent) Reference 3).
しかしながら、特許文献1のように細胞シートを積層化する場合、細胞シートは極めて薄いことから、取り扱いが難しく自動化することが困難であった。
また、特許文献2のように細胞凝集塊を浮遊培養してシート状細胞凝集塊を得ようとした場合、整列させた細胞凝集塊に粗密が生じて細胞凝集塊同士が不規則に融合するため、得られるシート状細胞凝集塊の形状が定まらず、厚さも不均一になるという問題があった。
さらに、特許文献3のように糸状体または針状体からなる支持体に細胞凝集塊を貫通させる場合には、細胞にダメージを与えるおそれがあった。
このような問題に鑑み、本発明は所要の形状および寸法を得ることができ、かつ細胞にダメージを与えることのない細胞の集合構造体の作製方法および作製装置を提供するものである。
However, when the cell sheets are laminated as in Patent Document 1, the cell sheets are extremely thin, so that they are difficult to handle and difficult to automate.
In addition, when a cell aggregate is suspended and cultured to obtain a sheet-like cell aggregate as in
Furthermore, when the cell aggregate is penetrated through a support made of a filamentous body or a needle-like body as in
In view of such problems, the present invention provides a method and apparatus for producing a cell aggregate structure that can obtain a required shape and size and that does not damage cells.
すなわち請求項1の発明にかかる細胞の集合構造体の作製方法は、培養液を収容した培養容器の内部に複数の細胞凝集塊を配置し、上記複数の細胞凝集塊が培養されて相互に融合した細胞の集合構造体を作製する細胞の集合構造体の作製方法において、
上記培養容器の内部に複数のピンを立設し、当該複数のピンとピンとの間を収容部として複数のピンにより上記細胞凝集塊を収容するよう構成し、
複数の隣接する収容部に細胞凝集塊を収容した状態で培養することを特徴としている。
That is, in the method for producing a cell aggregate structure according to the invention of claim 1, a plurality of cell aggregates are arranged inside a culture vessel containing a culture solution, and the plurality of cell aggregates are cultured and fused to each other. In a method for producing a cell aggregate structure,
A plurality of pins are erected inside the culture vessel, and the cell aggregates are accommodated by a plurality of pins as an accommodating portion between the plurality of pins.
It is characterized by culturing in a state in which the cell aggregates are accommodated in a plurality of adjacent accommodating portions.
また請求項7の発明にかかる細胞の集合構造体の作製装置は、培養液を収容した培養容器の内部に複数の細胞凝集塊を配置し、上記複数の細胞凝集塊が培養されて相互に融合した細胞の集合構造体を作製する細胞の集合構造体の作製装置において、
上記培養容器の内部に、複数のピンを立設した収容手段を設け、
さらに上記収容手段における複数のピンとピンとの間に上記細胞凝集塊を供給する供給手段を備え、
上記複数のピンとピンとの間を細胞凝集塊の収容部として、上記供給手段は複数の隣接する収容部に細胞凝集塊を収容することを特徴としている。
According to a seventh aspect of the present invention, there is provided an apparatus for producing a cell aggregate structure, in which a plurality of cell aggregates are arranged inside a culture vessel containing a culture solution, and the plurality of cell aggregates are cultured and fused together. In an apparatus for producing a cell aggregate structure,
Inside the culture vessel, provided with a storage means standing a plurality of pins,
Furthermore, comprising a supply means for supplying the cell aggregate between a plurality of pins in the housing means,
The supply means stores the cell aggregates in a plurality of adjacent storage units, with the plurality of pins between the pins serving as a cell aggregate storage unit.
上記請求項1および請求項7の発明によれば、複数のピンとピンとの間を収容部として、複数の隣接する収容部に細胞凝集塊を収容させるため、各細胞凝集塊は当該収容部で培養されることにより相互に融合し、所要の形状および寸法の細胞の集合構造体を作製することができる。また細胞凝集塊にピンを貫通させる必要がないため、細胞へのダメージも抑えることができる。 According to the first and seventh aspects of the present invention, a cell aggregate is accommodated in a plurality of adjacent accommodating portions with a space between the plurality of pins and the pins, and each cell aggregate is cultured in the accommodating portion. By doing so, it is possible to produce an aggregate structure of cells having a required shape and size by fusing each other. Moreover, since it is not necessary to penetrate a pin into the cell aggregate, damage to cells can be suppressed.
以下、図示実施例について説明すると、図1〜図6は第1実施例にかかる細胞の集合構造体の作製装置1を説明するものであって、複数の細胞凝集塊2(スフェロイド:図3参照)を培養容器3の内部で配置し、上記細胞凝集塊2が培養されて相互に融合した細胞の集合構造体としての癒合パッド4(図4参照)を作製するものとなっている。
上記細胞凝集塊2は、例えば特許第4517125号に開示される方法で作製することができる。すなわち、内面が非接着性の容器に細胞を播種して培養すると、細胞は足場を求めて互いに接着し合うことで凝集して細胞凝集塊2が形成され、これらがさらに融合することで外径寸法が500μm程度の略球状の細胞凝集塊2が形成される。
より効率的には、ウエルプレートの非接着性のウエル(略半球状の収容部)で培養することにより容易に細胞凝集塊2を得ることができる。なお、細胞凝集塊2の作製方法はこれに限らず、旋回している培養液中に細胞懸濁液を入れる旋回培養法、試験管に細胞懸濁液を入れて遠心分離器で沈殿させる方法、あるいはアルギン酸ビーズを用いて培養する方法など公知の様々な方法で作製することができる。
このように、細胞凝集塊2とは、細胞同士が集合し凝集化した100〜500μm程度の外径寸法を有した略球状の細胞集合体を指し、これらの細胞凝集塊2を平面的または立体的に接触または接近させて配置すると、各細胞凝集塊2の細胞が増殖して隣接する細胞凝集塊2と融合し、平面的または立体的な細胞の集合構造体が得られるようになっている。
本実施例で作製する癒合パッド4は、軟骨等に癒合させるために用いることができ、複数の細胞凝集塊2を平面的に配置して融合させたものとなっている。厚さは用いる細胞凝集塊2の寸法に応じて100〜500μm程度のものを作製することが可能で、平面的なサイズは整列させる細胞凝集塊2の個数によって調節可能となっている。
このように作製される上記癒合パッド4は、細胞懸濁液を平面的に培養することで細胞単体をシート状に培養して得られる細胞シートとは異なるものである。
Hereinafter, the illustrated embodiment will be described. FIG. 1 to FIG. 6 illustrate a cell aggregate structure manufacturing apparatus 1 according to the first embodiment, and a plurality of cell aggregates 2 (spheroid: see FIG. 3). ) Is placed inside the
The
More efficiently, the
Thus, the
The
The
本実施例の細胞の集合構造体の作製装置1は、図1に示す内部が無菌状態に維持されたアイソレータ5と、当該アイソレータ5に接続可能に設けられたインキュベータ6との内部に設けられている。また、アイソレータ5には、搬入物を除染するためのパスボックス5aが設けられている。
図2は上記アイソレータ5の内部に設けられた構成を示し、細胞凝集塊2を収容する収容容器7を支持する収容容器支持部8と、癒合パッド4の培養される培養容器3を支持する培養容器支持部9と、上記細胞凝集塊2を保持する複数の吸引ノズル10と、上記吸引ノズル10を上記収容容器7および培養容器3に対して相対的に移動させるノズル移動手段11とを備えている。
一方、図6は上記インキュベータ6の内部に設けられた構成を示し、培養容器3の細胞凝集塊2もしくは癒合パッド4に培養液を供給する培養液供給手段12を備えている。
なお、以下の説明において、図2における図示左右方向をX方向、前後方向をY方向、上下方向をZ方向とし、図5では図示左右方向をX方向、上下方向をY方向とする。
The cell assembly structure manufacturing apparatus 1 of the present embodiment is provided inside an
FIG. 2 shows a configuration provided inside the
On the other hand, FIG. 6 shows a configuration provided inside the
In the following description, the horizontal direction shown in FIG. 2 is the X direction, the front-rear direction is the Y direction, the vertical direction is the Z direction, and in FIG. 5, the horizontal direction is the X direction and the vertical direction is the Y direction.
上記アイソレータ5は内部が無菌環境に維持され、また無菌エア供給手段によって上方から下方へと向かう無菌エアによる一方向流が形成されるようになっている。
またアイソレータ5の正面には作業者が装着可能なグローブ5bが設けられており、各種の作業を行うことが可能となっている。なお、アイソレータ5の内部にロボットや所要の構成を有した移送手段を設けて、これらの作業を自動的に行うようにすることもできる。
次に、上記インキュベータ6は、内部が無菌環境に維持されるとともに、癒合パッド4の培養に適した所定の温度および湿度に維持され、細胞凝集塊2が融合して癒合パッド4へと形成される間、上記インキュベータ6を上記アイソレータ5より分離して、当該アイソレータ5より離れた場所に載置することが可能となっている。
そのため、上記アイソレータ5とインキュベータ6とは接続手段13によって接続されており、例えば特許第4656485号公報に記載されるような、インキュベータ6とアイソレータ5とを無菌状態を維持したまま接離させる接続手段を使用することができる。
The interior of the
In addition, a
Next, the inside of the
For this reason, the
図3は上記収容容器7の断面図を示し、上述したウエルプレートを使用することができる。収容容器7は平面視において縦横に複数の収容凹部7aを備え、各収容凹部7aの内部には培養液とともに略球状の細胞凝集塊2が一個ずつ収容されている。
上記収容容器7の収容凹部7aは、平面視におけるX方向およびY方向にそれぞれ所定個数ずつ整列しており、本実施例では培養容器3において作製する癒合パッド4を構成する細胞凝集塊2のX方向およびY方向の個数と同数、すなわちX方向に5個、Y方向に5個それぞれ設けられている。
FIG. 3 shows a cross-sectional view of the
The
上記収容容器7を支持する収容容器支持部8は、位置決め片8bによってその上面で上記収容容器7を位置決めするとともに、上記ノズル移動手段11を構成するY方向テーブル8aによって構成されている。
後述するように、本実施例の吸引ノズル10はX方向に5個設けられ、またX方向およびZ方向にのみ移動可能となっていることから、上記Y方向テーブル8aが収容容器7をY方向に移動させることで、吸引ノズル10と収容容器7とをXYZの各方向で相対的に移動させることができる。
具体的に説明すると、最初に上記Y方向テーブル8aが収容容器7の1列目の収容凹部7aを吸引ノズル10の下方に位置させて、当該一列目の収容凹部7aから吸引ノズル10が細胞凝集塊2を吸着保持すると、Y方向テーブル8aが1列分だけY方向に収容容器7を移動させて、2列目の収容凹部7aを吸引ノズル10の下方に位置させるようになっている。
The storage
As will be described later, five
Specifically, the Y-direction table 8a first positions the first row of
図4に示すように、培養容器3は有底箱状を有しており、内部には所定の深さで培養液が収容されるとともに、底面に設置された底面プレート14と、当該底面プレート14に設置された台座15および当該台座15に立設された複数のピン16から構成される収容手段と、上記ピン16に沿って上下に移動する下方支持部材としての支持プレート17とが設けられている。
上記底面プレート14は培養容器3の底面と略同形を有しており、底面プレート14が培養容器3の内部で移動しないように位置決めされている。また上記台座15は直方体形状を有しており、底面プレート14の上面に形成された凹部14aに嵌合して位置決めされるようになっている。
As shown in FIG. 4, the
The
上記ピン16は上記台座15の上面に形成された設置面15aにそれぞれZ方向を向くように規則的に立設されている。
図5は上記台座15に設けられたピン16と、当該ピン16によって保持される細胞凝集塊2についての平面図を示し、本実施例ではX方向およびY方向にそれぞれ5個の細胞凝集塊2を相互に接触した状態で平面的に整列させるようになっている。
上記ピン16は、各細胞凝集塊2の周囲に位置するように設けられており、本実施例では4本のピン16によって細胞凝集塊2を収容する収容部Hを構成している。より具体的には、平面視において4本のピン16が四隅に位置する略正方形の区画を上記収容部Hとしている。
本実施例では、上記収容部Hを構成する4本のピン16のうち、各対角位置の2本のピン16の間隔は、収容する細胞凝集塊2の直径よりも短くなるように配置されている。換言すると、細胞凝集塊2を作製する際に、各対角位置の2本のピン16の間隔よりも直径が大きくなるようにしている。
このように構成された収容部Hに細胞凝集塊2を収容すると、複数のピン16とピン16との間で細胞凝集塊2を挟持することができ、図4(a)のように細胞凝集塊2を上記ピン16の先端と根元との間の上下中間部分に位置させることが可能となる。
換言すると、上記収容部Hを上記複数のピン16を立設した設置面15aから離隔した位置に設定することができ、当該収容部Hに保持された細胞凝集塊2と設置面15aとの間に、培養液が流通可能な隙間gを形成することができる。
またピン16の直径にもよるが、各対角位置の2本のピン16の間隔を細胞凝集塊2の直径よりも短くすることで、各収容部Hの細胞凝集塊2同士を相互に接触させた状態で培養することができるようになっている。
The
FIG. 5 shows a plan view of the
The said
In the present embodiment, among the four
When the
In other words, the storage portion H can be set at a position separated from the
Further, although depending on the diameter of the
上記底面プレート14には、上記台座15を挟んで対向した位置に設けられるとともに、Z方向に向けて立設されて上記支持プレート17を上下に貫通する2本の棒状のガイド部材18が設けられ、上記支持プレート17には上記ピン16が貫通する貫通孔17aが穿設されている。
上記構成により、上記支持プレート17は上記ピン16およびガイド部材18に沿ってZ方向に昇降可能に設けられるとともに、通常は自重により上記台座15の設置面15aに載置される下降位置に位置している。
図4(a)に示す支持プレート17が下降位置に位置した際、上記ピン16の上下中間部分に保持された細胞凝集塊2と上記台座15の設置面15aとの間には、培養液が流通可能な隙間gが形成されるようになっている。
一方、図4(b)に示すように、支持プレート17を上昇させると、支持プレート17は上記ピン16とピン16との間に保持された細胞凝集塊2を下方から支持することができ、上記支持プレート17が上昇位置まで位置することで、細胞凝集塊2が培養された癒合パッド4を上記ピン16間から取り出すことができるようになっている。
上記支持プレート17の上昇は、グローブ5bを装着した作業者によって行える他、ロボット等によって行うことも可能である。その際、図示しないが上記支持プレート17の上面に上記培養液の液面より上方に突出する把持部材を設けることで、培養液に触れずに支持プレート17を上昇させることが可能となる。
The
With the above configuration, the
When the
On the other hand, as shown in FIG. 4B, when the
The
図2に示すように、培養容器支持部9は上記ノズル移動手段11を構成するY方向テーブル9aによって構成され、上記収容容器支持部8を構成するY方向テーブル8aと同様、吸引ノズル10に吸着保持された細胞凝集塊2が上記ピン16によって構成された収容部Hに供給されるたびに、培養容器3ごとピン16間に設定された収容部Hを上記Y方向に一列ずつ移動させるものとなっている。
As shown in FIG. 2, the
次に、上記吸引ノズル10について説明すると、図3に示すように図示しない負圧発生手段に接続された本体部10aと、当該本体部10aの下端部に設けられた管状の吸着部10bとを備えている。
上記吸着部10bの内径は上記細胞凝集塊2より小径となっており、上記収容容器7の収容凹部7aにおいて吸着部10bの先端に細胞凝集塊2を吸着保持した際に、細胞凝集塊2が当該吸着部10bの内部に吸い込まれないようになっている。
また培養容器3においては、上記吸着部10bの中心位置をピン16とピン16との間に形成した収容部Hの略中央に位置させ、かつ細胞凝集塊2を上記ピン16の上下中間位置に位置した状態で上記負圧発生手段による負圧を解消する。
なお細胞凝集塊2を吸着保持する吸引ノズル10に代えて、グリッパなどによって細胞凝集塊2を保持する等の構成を有したものを用いて細胞凝集塊2を保持するようにしてもよい。
Next, the
The inner diameter of the adsorbing
In the
Instead of the
また上記吸引ノズル10を移動させるノズル移動手段11は、上記収容容器支持部8および培養容器支持部9にかけてX方向に設けられたX方向レール21と、当該X方向レール21に沿って吸引ノズル10をX方向に移動させるX方向移動手段22と、当該X方向移動手段22に設けられてZ方向に吸引ノズル10を昇降させるZ方向移動手段23と、上記収容容器支持部8および培養容器支持部9における上記Y方向テーブル8a、9aとによって構成されている。そして、これら吸引ノズル10とノズル移動手段11とにより細胞凝集塊2の供給手段が構成されている。
なお、ノズル移動手段11としては、Y方向テーブル8a、9aに代えて、上記X方向レール21をY方向に移動させる構成を有したものであってもよい。このような構成とすることで、上記吸引ノズル10や後述するカメラ25をX−Y方向に移動させることができる。
Further, the nozzle moving means 11 for moving the
The nozzle moving means 11 may be configured to move the X-direction rail 21 in the Y direction instead of the Y-direction tables 8a and 9a. By setting it as such a structure, the said
また本実施例の吸引ノズル10はX方向に5個整列して設けられ、これら吸引ノズル10は間隔変更手段24によってX方向にその間隔が変更されるようになっている。
具体的には、上記吸引ノズル10が収容容器支持部8の上方に位置した際には、間隔変更手段24は上記収容容器7におけるX方向に整列した収容凹部7aと同じ間隔に上記吸引ノズル10の間隔を変更する。
一方、吸引ノズル10が培養容器支持部9の上方に位置した際には、間隔変更手段24は上記培養容器3の内部のピン16とピン16との間に形成された収容部Hにおける、X方向の間隔と同じ間隔に吸引ノズル10の間隔を変更する。
なお、吸引ノズル10についてはY方向に複数列設けることも可能であり、また収容容器支持部8の収容凹部7aの間隔と、上記ピン16とピン16との間に形成された収容部Hの間隔とが同じ場合には、上記間隔変更手段24を省略することができる。
また例えば上記収容部Hの間隔が狭い場合には、上記吸引ノズル10によって一つおきの収容部Hに細胞凝集塊2を保持させることも可能であり、その場合、最初に奇数番目の収容部Hに細胞凝集塊2を保持させ、その後偶数番目の収容部Hに細胞凝集塊2を保持させるようにすればよい。
なお、吸引ノズル10は少なくとも1本備えられていれば良く、また、細胞凝集塊2の供給手段としては、本実施例のように細胞凝集塊2を移載する構成の他、多数の細胞凝集塊2を収容した容器から1個ずつ繰り出すような構成であっても良い。
Further, five
Specifically, when the
On the other hand, when the
The suction nozzles 10 can be provided in a plurality of rows in the Y direction, and the space between the
In addition, for example, when the interval between the accommodating portions H is narrow, it is possible to hold the
In addition, it is sufficient that at least one
また上記X方向レール21にはX方向に移動するカメラ25が設けられており、上記カメラ25は上記吸引ノズル10によって細胞凝集塊2が収容部Hに保持されると、培養容器支持部9の上方まで移動して培養容器3内の収容部Hを撮影するようになっている。
撮影された画像により、上記全ての収容部Hに細胞凝集塊2が保持されているか否かが確認され、必要に応じて細胞凝集塊2の保持されていない収容部Hに対して細胞凝集塊2を供給するよう、指示することができる。
またカメラ25は、上記ノズル移動手段11が吸引ノズル10を培養容器支持部9の上方に位置させる際には、吸引ノズル10との接触を避けるために培養容器支持部9の上方から退避するようになっている。
The X-direction rail 21 is provided with a
It is confirmed from the photographed image whether or not the
Further, when the nozzle moving means 11 positions the
図6はインキュベータ6の内部に設けられた、培養途中の癒合パッド4に培養液を供給する培養液供給手段12を示し、インキュベータ6の内部に複数の培養容器3を収容する場合には、各培養容器3のそれぞれについて上記培養液供給手段12を設けることができる。
上記培養液供給手段12は、両端が上記培養容器3の上方から培養液の液面に挿入された配管31と、当該配管31に設けられて培養液を送液する送液ポンプ32とから構成されている。
上記配管31の一端は上記培養容器3における培養液の液面近傍、すなわち上記ピン16の間に保持された細胞凝集塊2の上方に位置するようになっており、他端は上記培養容器3における上記細胞凝集塊2と上記台座15の設置面15aとの間に形成された隙間gに位置している。
そして上記送液ポンプ32は、配管31の一端より培養容器3における上方側から培養液を吸引するとともに、当該培養液を他端より上記隙間gへと流入させ、培養容器3内において培養液を循環させるようになっている。
このような構成により、上記培養液供給手段12が供給した培養液は、下方に上記隙間gが形成された癒合パッド4の下面側に供給され、癒合パッド4の下面側にも培養液が十分に行き渡り、培養を良好に行うことができる。
なお、送液ポンプ32の送液方向を逆にして、上記隙間gに位置する上記配管31の他端から培養液を吸引するようにしてもよく、その場合には癒合パッド4の周囲から下面側に培養液が流入する流れが形成されるため、上記隙間gに培養液の供給が行われることとなる。
また、これら培養液の供給動作の前処理として、必要に応じて培養液の栄養分の補給や、酸素や炭酸ガスの供給、およびpHの調整を行うようにしてもよい。
FIG. 6 shows a culture solution supply means 12 for supplying a culture solution to the
The culture medium supply means 12 includes a
One end of the
The
With such a configuration, the culture solution supplied by the culture solution supply means 12 is supplied to the lower surface side of the
The liquid feeding direction of the
In addition, as a pretreatment for the supply operation of these culture solutions, supplementation of nutrients of the culture solution, supply of oxygen or carbon dioxide, and pH adjustment may be performed as necessary.
以下、上記構成を有する細胞の集合構造体の作製装置1を用いた癒合パッド4の作製方法を説明する。
最初に、上記パスボックス5aを介して上記細胞凝集塊2が収容された収容容器7や培養容器3を上記アイソレータ5内に搬入したり、培養容器3に所定量の培養液を供給する準備工程を行う。
また培養容器3には上記台座15および複数のピン16からなる収容手段が設置され、また上記支持プレート17は自重により上記台座15の設置面15aに接触した下降位置に位置している。
さらに準備工程において、アイソレータ5の内部に上記収容容器7や培養容器3を複数搬入すれば、複数の培養容器3を用いて複数の癒合パッド4を連続して作成することが可能となる。
Hereinafter, a method for manufacturing the
First, a preparation step of carrying the
The
Further, in the preparation step, if a plurality of the
上記準備工程が完了したら、続いて上記吸引ノズル10を移動させて、上記培養容器3に細胞凝集塊2を移動させて、上記ピン16の間に設定された収容部Hに細胞凝集塊2を供給する供給工程を行う。
上記ノズル移動手段11が吸引ノズル10を移動させ、また間隔変更手段24が吸引ノズル10の間隔を変更して、上記収容容器支持部8において収容容器7の収容凹部7aから細胞凝集塊2を吸着保持する。
続いて、ノズル移動手段11が吸引ノズル10を培養容器支持部9へと移動させ、また間隔変更手段24が上記ピン16とピン16との間に形成された収容部Hの間隔に合わせて吸引ノズル10の間隔を変更し、吸引ノズル10を下降させる。
すると、吸引ノズル10に保持された各細胞凝集塊2は4本のピン16の間に形成された収容部Hに挿入され、細胞凝集塊2の下方に隙間gが形成されるよう、上記ピン16の上下中間位置に細胞凝集塊2が保持される。
このとき、上記収容部Hに収容された細胞凝集塊2は、周囲を囲繞する4本のピン16によって挟持されることから、図4(a)に示すように当該収容部Hから浮き上がることが無く細胞凝集塊2の配置状態を維持することができ、かつ細胞凝集塊2と台座15の設置面15aとの間に上記隙間gが形成された状態を維持することができる。
このようにして全ての収容部Hに細胞凝集塊2が収容されると、その後上記カメラ25が培養容器支持部9の上方に移動して培養容器3内の細胞凝集塊2を撮影し、細胞凝集塊2が全ての収容部Hに収容されているか否かを確認する。
When the preparation step is completed, the
The nozzle moving means 11 moves the
Subsequently, the nozzle moving means 11 moves the
Then, each
At this time, since the
When the cell aggregates 2 are stored in all the storage parts H in this way, the
このようにして培養容器3内に細胞凝集塊2が配置されると、ロボットもしくは作業者の手作業により、上記培養容器3はインキュベータ6に移送され、当該取り培養容器3内の細胞凝集塊2を培養する培養工程が行われる。
まず上記培養容器3をインキュベータ6に移送したら、作業者は上記培養液供給手段12の配管31の両端をそれぞれ培養容器3の内部に設置し、具体的には一端を培養液の液面近く、他端をピン16の間に保持された細胞凝集塊2の下方の隙間gに挿入する。
その後、インキュベータ6を上記アイソレータ5より分離して、アイソレータ5より離隔した位置に載置し、内部を所定の温度、湿度に維持するとともに、所定の炭酸ガスや酸素の濃度を維持する。
培養容器3内において、細胞凝集塊2が培養されると隣接する細胞凝集塊2が相互に融合し、これにより細胞凝集塊2が平面的に配置された形状を維持した細胞の集合構造体としての癒合パッド4を得ることができる。
つまり、細胞凝集塊2を配置した通りに任意の形状の癒合パッド4を作製することが可能であり、また細胞凝集塊2は上記収容部Hによって隙間なく配置されているため、上記細胞凝集塊2が融合して平面的に形成された癒合パッド4の厚さは略均一となる。
また各細胞凝集塊2は上記ピン16によって移動が規制されているため、形成される癒合パッド4の寸法を、はじめに細胞凝集塊2を配置した際の大きさと略同一にすることができる。
これは、細胞凝集塊2が接触している上記ピン16の周囲に密着するように増殖または移動し、隣接する細胞凝集塊2同士の間に形成される間隙を埋めるためであり、ピン16を介さず細胞凝集塊2を平面的に配置して培養する場合のように、全体的な寸法はほとんど縮むことがない。
When the
First, when the
Thereafter, the
When the
That is, the
In addition, since the movement of each
This is because the
上記培養工程の間、インキュベータ6内では所定の間隔で、収容部Hに保持された細胞凝集塊2もしくは癒合パッド4に培養液を供給する培養液供給工程が行われる。
上記培養液供給工程として、培養液供給手段12は培養容器3内で培養液を循環させるようになっており、その際上記細胞凝集塊2の下方には上記隙間gが形成されていることから、癒合パッド4と台座15の設置面15aとの間に培養液が供給され、癒合パッド4の裏面側についても効率的に培養することができる。
つまり、細胞凝集塊2を上記設置面15aに載置させて癒合パッド4を作製する場合、中央に位置する細胞凝集塊2の下面側には十分に培養液が行き渡らないという問題があったが、細胞凝集塊2を下方に隙間gを形成した状態で保持することにより、当該部分に位置する細胞も良好に培養することが可能となった。
During the culturing step, a culture solution supplying step for supplying a culture solution to the
As the culture solution supply step, the culture solution supply means 12 circulates the culture solution in the
That is, when the
上記培養工程により細胞凝集塊2が培養されて癒合パッド4が作成されると、インキュベータ6をアイソレータ5に接続して、当該癒合パッド4を培養容器3から回収する回収工程を行う。
回収工程では、上記培養容器3を培養容器支持部9に支持させ、その状態で上記培養容器3の内部で上記支持プレート17をZ方向に上昇させて上昇位置に位置させる。
支持プレート17は上昇しながら癒合パッド4の下部に接触し、そのまま癒合パッド4を下方から支持して、ピン16およびガイド部材18に沿って上昇させることで、癒合パッド4をピン16の間から離脱させる。
図4(b)に示すように、支持プレート17が上昇位置に位置し、癒合パッド4がピン16の間から離脱したら、当該支持プレート17上の癒合パッド4を所要の容器に移し替えて回収することができる。
その際、培養工程において癒合パッド4は支持プレート17に密着していないため、癒合パッド4は支持プレート17に張り付くことはなく、これを容易に回収することができる。
なお、上記培養工程から回収工程の間に、所定期間ごとにインキュベータ6をアイソレータ5に接続して、培養途中の癒合パッド4の培養状態を検査する検査工程を行うようにしてもよい。
When the
In the recovery step, the
The
As shown in FIG. 4B, when the
At that time, since the
In addition, between the said culture | cultivation process and collection | recovery processes, you may make it perform the test process which connects the
図7は第2実施例としての細胞の集合構造体の作製方法を説明する図であり、詳しくは上記第1実施例における上記培養工程の途中に実施する作業であって、培養容器3等には共通のものを使用する。
本実施例にかかる作業は、インキュベータ6において上記培養工程を開始した後、細胞凝集塊2同士が融合した状態となり、培養途中の癒合パッド4が形成されてから行うものとなっている。
この培養途中の癒合パッド4は上記ピン16が貫通した状態となっており、第1実施例のように回収工程において癒合パッド4をピン16の間から離脱させた場合には、回収された癒合パッド4には上記ピン16が貫通した部分に貫通孔4aが形成されたままとなる。
そこで本実施例では、ある程度細胞凝集塊2が培養されて融合した培養途中の癒合パッド4が得られたら、インキュベータ6をアイソレータ5に接続して培養容器3をアイソレータ5内部の上記培養容器支持部9に載置する。
そして培養容器支持部9では、作業者もしくはロボット等が上記下降位置に位置した支持プレート17を上昇位置に位置させ、培養途中の癒合パッド4をピン16の間から離脱させる。
続いて図7(a)に示すように、支持プレート17に載置された状態の癒合パッド4を移動させ、例えば癒合パッド4を構成する細胞凝集塊2の中心位置がピン16の先端の上方に位置するようにする。
その後、図7(b)のように上記支持プレート17を再度上昇位置から下降位置に移動させると、支持プレート17だけが上記ピン16に沿って下降し、上記培養途中の癒合パッド4は上記ピン16によって下方から支持されることとなる。
この状態となったら、培養容器3を再びアイソレータ5からインキュベータ6へと移載して培養工程を再開する。これにより上記貫通孔4aが埋められることとなる。
また、癒合パッド4は上記ピン16によって下方から支持されるため、当該癒合パッド4の下部には隙間gが形成されており、癒合パッド4の下部への培養液の供給が継続して行われるようになっている。
FIG. 7 is a diagram for explaining a method for producing a cell aggregate structure as a second embodiment. Specifically, the operation is performed in the middle of the culturing process in the first embodiment. Use a common one.
The work according to this example is performed after the cell culture agglomerates 2 are fused after the culture process is started in the
The
Therefore, in this embodiment, when the
In the culture
Subsequently, as shown in FIG. 7A, the
Thereafter, when the
In this state, the
Further, since the
図8は第3実施例としての細胞の集合構造体の作製方法を説明する図であり、詳しくは上記第2実施例と同様、上記第1実施例における上記培養工程の途中に実施する作業であって、培養容器3等は共通のものを使用する。
本実施例にかかる工程も、上記第2実施例と同様、細胞凝集塊2がある程度融合した培養途中の癒合パッド4が形成されたら行うものとなっている。
上記培養途中の癒合パッド4を収容した培養容器3をインキュベータ6からアイソレータ5へと移載するとともに、アイソレータ5では新たな培養容器3を準備する。この培養容器3は上記台座15およびピン16からなる収容手段を備えておらず、また上記支持プレート17に代えてメッシュ状の支持プレート41がガイド部材18によって底面プレート14に対して上方に離隔した位置に設けられている。
作業者は、インキュベータ6から移送した培養容器3の内部から、上記ピン16の間に保持された培養途中の癒合パッド4を上記支持プレート17を用いて取り出し、これを上記新たな培養容器3の支持プレート41上に移載する。
その後、上記培養途中の癒合パッド4を収容した培養容器3をインキュベータ6へと移載し、培養工程を再開する。
また、図8に示す培養液供給手段12は、上記癒合パッド4の下方の隙間gに位置する配管31に、複数の噴射孔31aを設けたものとなっており、当該複数の噴射孔31aから培養液を排出するようになっている。
これにより、癒合パッド4の下面に対して広範囲に培養液の流れを生じさせることができ、癒合パッド4を構成する下面側の細胞により良く培養液を接触させることができる。
なお、本実施例における上記培養液供給手段12の構成は、上記第1、第2実施例にも適用することが可能である。
FIG. 8 is a diagram for explaining a method for producing a cell aggregate structure as a third embodiment. Specifically, in the same manner as in the second embodiment, the operation is performed in the middle of the culturing process in the first embodiment. Therefore, the
The process according to this example is also performed when the
While the
The operator takes out the
Thereafter, the
Moreover, the culture solution supply means 12 shown in FIG. 8 is provided with a plurality of
Thereby, the flow of the culture solution can be generated in a wide range with respect to the lower surface of the
The configuration of the culture solution supply means 12 in the present embodiment can also be applied to the first and second embodiments.
図9〜12は第4実施例としての細胞の集合構造体の作製方法を説明する図であり、このうち図10は上記第2、第3実施例と同様、上記第1実施例における上記培養工程の途中に実施する作業と、上記回収作業の際に実施する作業とを示している。
本実施例で使用する培養容器3において、上記台座15に固定されるピン16は、癒合パッド4の中央部を保持する第1ピン群(16a)と、癒合パッド4の外周縁部を保持する黒色で示した第2ピン群(16b)とから構成されている。
具体的には、図9において、上記第2ピン群を構成するピン16bは、最外周およびこれよりも一列内側に配置された額縁状に配置されている。このため、供給工程において培養容器3に細胞凝集塊2を収容すると、その最外周に配置された細胞凝集塊2は上記第2ピン群のピン16bによって囲繞されて、保持されるようになっている。
また図10に示すように、上記第1ピン群を構成するピン16aは上記第2ピン群を構成するピン16bよりも短くなっており、上記細胞凝集塊2を保持する収容部Hの高さは上記第1ピン群のピン16aの先端部近傍の高さに設定されている。
このような構成により、上記各実施例と同様、上記収容部Hに保持された細胞凝集塊2の下方には台座15との間に隙間gを形成することが可能となっている。
9 to 12 are diagrams for explaining a method for producing a cell aggregate structure as a fourth embodiment. Of these, FIG. 10 is similar to the second and third embodiments, and the culture in the first embodiment is described above. The work to be performed in the middle of the process and the work to be performed at the time of the collection work are shown.
In the
Specifically, in FIG. 9, the
As shown in FIG. 10, the
With such a configuration, a gap g can be formed between the
上記培養容器3を用いた細胞の集合構造体の作製方法を説明すると、図10(a)に示すように、供給工程では上記第1実施例と同様、上記第1、第2ピン群のピン16a、16bの収容部Hに細胞凝集塊2を保持させる。
その後、上記第2、第3実施例と同様培養工程を行い、その途中で細胞凝集塊2がある程度融合した培養途中の癒合パッド4が形成されると、当該培養途中の癒合パッド4を収容した培養容器3をインキュベータ6からアイソレータ5へと移載する。
そして図10(b)に示すように、下降位置に位置した支持プレート17を上昇させて、上記癒合パッド4を第2ピン群のピン16bの先端部近傍の高さまで移動させる。
これにより、上記培養途中の癒合パッド4から上記第1ピン群のピン16aが離脱し、当該癒合パッド4は上記第2ピン群のピン16bによって保持されることとなる。
The method for producing a cell aggregate structure using the
Thereafter, the culture process was performed in the same manner as in the second and third examples. When the
Then, as shown in FIG. 10B, the
Thereby, the
その後、上記第2、第3実施例と同様、培養途中の癒合パッド4は再びアイソレータ5からインキュベータ6へと移載されて培養工程が再開される。
このとき、癒合パッド4の中央部にはそれまで貫通していた第1ピン群のピン16aによる貫通孔4aが形成されていることから、培養工程を再開することにより、上記貫通孔4aが細胞によって埋められることとなる。
ここで、上記貫通孔4aが細胞によって埋められる際、細胞同士が相互にひきつけ合って癒合パッド4が中央部に向けて収縮し、湾曲するおそれがある。
しかしながら、本実施例では、癒合パッド4の外周縁部を上記第2ピン群のピン16bによって保持しており、癒合パッド4の中央部の収縮が防止され、湾曲のない厚さが均一な癒合パッド4を得ることができる。
Thereafter, as in the second and third embodiments, the
At this time, since the through
Here, when the through-
However, in this embodiment, the outer peripheral edge portion of the
上記培養工程が終了し、上記癒合パッド4の中央部に形成された貫通孔4aが細胞によって埋められると、上記培養容器3をインキュベータ6からアイソレータ5へと移載し、その後上記回収工程を行う。
この回収工程では、上記支持プレート17を再び下降位置から上昇位置まで上昇させ、癒合パッド4を上記第2ピン群のピン16bより離脱させる。
このようにして回収された癒合パッド4の外周縁部には、上記第2ピン群のピン16bによる貫通孔4aが形成されているため、本実施例の回収工程では、図10(c)に示すように癒合パッド4の外周縁部Lを切断して除去し、中央部のみを回収するようになっている。
具体的に癒合パッド4の外周縁部を切断する切断手段としては、例えばアイソレータの内部においてグローブを装着した作業者が用いるメスや、アイソレータの外部に設けたレーザ切断装置を用いることができる。
When the culturing process is completed and the through-
In this recovery step, the
Since the through-
Specifically, as a cutting means for cutting the outer peripheral edge of the
なお上記図9を用いて説明したピン16のうち、上記第2ピン群を構成するピン16bについては図11に示す構成とすることもできる。
図9において、第2ピン群のピン16bはすべて同じ長さであるが、図11においては、第2ピン群のピン16bのうち図示黒色で示したピン16baだけを長くし、それ以外のピン16bbを上記第1ピン群のピン16aと同じ長さとしている。
具体的に説明すると、上記長いピン16baは最外周に設けられたピン16bの一列内側で略正方形に整列したピン16bのうち、4つの頂点部分と各辺の中央部分とにそれぞれ設けられている。
このように第2ピン群を構成した場合、上記培養工程の途中で第1ピン群のピン16aを癒合パッド4から離脱させると、上記第2ピン群のうち短いピン16bbも癒合パッド4から離脱することとなる。
その場合であっても、上記長いピン16baが癒合パッド4の外周縁部を保持するため、上記癒合パッド4の中央部で貫通孔4aが細胞で埋められる際の収縮を防止することができる。なお、上記第2ピン群における長いピン16baの配置については、癒合パッド4の形状に応じて適宜設定することができる。
Of the
In FIG. 9, all the
More specifically, the long pins 16ba are provided at the four apex portions and the central portions of the respective sides of the
When the second pin group is configured in this manner, when the
Even in that case, since the long pin 16ba holds the outer peripheral edge of the
さらに、上記第4実施例では図12に示す構成を有した培養容器3を使用することができる。この構成では、上記第1ピン群を構成するピン16aと、第2ピン群を構成するピン16bとは同じ長さに形成されている。
そして上記第1ピン群のピン16aと、第2ピン群のピン16bとはそれぞれ第1台座15aおよび第2台座15bに設けられており、第2台座15bは第1台座15aを囲繞するように設けられている。
そして上記第1ピン群のピン16aが設けられた第1台座15aは上下に昇降可能に設けられ、当該第1台座15aには図示しないが作業者やロボットによって操作可能な把持用の部材が固定されている。
図12(a)に示すように、上記供給工程において上記第1台座15aは上昇位置に位置しており、第1ピン群を構成するピン16aは第2ピン群を構成するピン16bと同じ高さに保持されている。
このため、各ピン16の先端部近傍に収容部Hを設定することで、保持された細胞凝集塊2と第1、第2台座15a、15bとの間には隙間gが形成されるようになっている。
そして培養工程の途中で培養途中の癒合パッド4が得られると、図12(b)に示すように上記第1台座15aを下降させ、これにより第1ピン群のピン16aを癒合パッド4から離脱し、培養途中の癒合パッド4は第2ピン群のピン16bによって保持されることとなる。
その後、回収工程において癒合パッド4を回収する際には、上記支持プレート17を上昇させ、これにより癒合パッド4を第2ピン群のピン16bから離脱させることができる。
Furthermore, in the fourth embodiment, the
The
The
As shown in FIG. 12A, in the supplying step, the
For this reason, by setting the accommodating portion H in the vicinity of the tip portion of each
When the
Thereafter, when the
図13は第5実施例としての細胞の集合構造体の作製方法を説明する図であり、上記第1実施例における上記供給工程に代えて実施し、さらに培養工程に追加して実施するものとなっている。
本実施例は、細胞凝集塊2の直径が収容部Hの各対角位置のピン16の間隔よりも小径であり、当該細胞凝集塊2をピン16とピン16との間で保持できない場合に対応するものとなっている。
具体的には、作製される癒合パッド4を薄くするために、極力小さな細胞凝集塊2を用いる場合や、作製された細胞凝集塊2の大きさにばらつきがあり、収容部Hから落下する細胞凝集塊2を含んでいる場合が想定される。
そこで本実施例の供給工程では、図13(a)に示すように、上記吸引ノズル10は細胞凝集塊2を、上記台座15の設置面15a上に位置させた支持プレート17の上面に載置するようになっている。
そして、上記細胞凝集塊2が支持プレート17に載置された状態のままで、当該培養容器3をインキュベータ6に移送して上記培養工程を開始し、図13(b)に示すように細胞凝集塊2がピン16間の収容部Hで保持可能な大きさとなるまで培養を行う。
このようにして、収容部Hで保持可能な十分な大きさの細胞凝集塊2が得られたら、培養容器3をアイソレータ5へと移送し、図13(c)に示すように培養容器3内の支持プレート17を上昇させる。
すると、上記培養途中の細胞凝集塊2が支持プレート17と共にピン16に沿って上昇され、当該培養途中の細胞凝集塊2が上記ピン16の上下中間位置に設定した収容部Hに保持される。その後上記支持プレート17を下降させ、下方に退避させる。
これにより、上記第1実施例と同様に、上記複数のピン16を立設した設置面15aから離隔して設定された収容部Hに、細胞凝集塊2を保持させることができるため、その後培養工程を再開した場合には、設置面15aとの間に形成された隙間gに培養液を流通させることによって、培養途中の癒合パッド4の下部に培養液を十分に接触させることが可能となっている。
ここで、上記支持プレート17の表面を細胞非接着性とすることで、培養途中の癒合パッド4を容易に支持プレート17から離脱させることができる。ここで、細胞非接着性は、支持プレート17の表面の性質を撥水性や超親水性とすることで得られ、これら性質を有する公知の材料を採用したり、表面処理やコーティング処理を施すことにより実現できる。また、その他にもDLC(ダイアモンド ライク カーボン)膜を形成することも可能である。
FIG. 13 is a diagram for explaining a method for producing a cell aggregate structure as a fifth embodiment, which is carried out in place of the supplying step in the first embodiment and further added to the culturing step. It has become.
In the present embodiment, when the diameter of the
Specifically, in order to make the produced
Therefore, in the supply process of the present embodiment, as shown in FIG. 13A, the
Then, while the
In this way, when a sufficiently
Then, the
Thus, as in the first embodiment, the
Here, by making the surface of the
上記第5実施例にかかる細胞の集合構造体の作製方法については、図13(a)の供給工程と図13(b)の培養工程との間に、図14に示すように上記下方支持部材としての支持プレート17に支持される細胞凝集塊2の上部に、上部当接部材としての当接プレート51を配置する工程を加えてもよい。
上記当接プレート51は支持プレート17と同様の構成を有しており、上記ピン16およびガイド部材18に沿ってZ方向に昇降可能に設けられており、また細胞凝集塊2と接触する裏面側は細胞非接着性となっている。
使用方法を説明すると、図13(a)の供給工程において上記吸引ノズル10が細胞凝集塊2を支持プレート17の上面に載置したら、作業者もしくはロボットにより載置された細胞凝集塊2の上部に上記当接プレート51を載置して、支持プレート17と当接プレート51とで挟んだ状態で細胞凝集塊2を支持する。
このように、当接プレート51を載置することにより、4本のピン16によって移動しないように保持されていない細胞凝集塊2の浮き上がりを防止することができ、細胞凝集塊2が融合した癒合パッド4の形を整えることができる。
この状態で、培養容器3をインキュベータ6に移送して上記培養工程を開始し、図13(b)に示すような、細胞凝集塊2がピン16の間で支持される大きさとなり、かつ隣接する細胞凝集塊2が融合した培養途中の癒合パッド4が得られるまで培養を行う。
このようにして十分な大きさの細胞凝集塊2が得られたら、培養容器3をアイソレータ5へと移送し、図13(c)に示すように培養容器3内の支持プレート17を上昇させる。その際、上記当接プレート51については取り除いてもよいし、そのまま載置しておいてもよい。
As for the method for producing a cell aggregate structure according to the fifth embodiment, the lower support member as shown in FIG. 14 is provided between the supplying step of FIG. 13 (a) and the culturing step of FIG. 13 (b). A step of placing the
The
Explaining how to use, when the
As described above, by placing the
In this state, the
When a sufficiently
さらに上記第5実施例のように、細胞凝集塊2の直径が収容部Hの各対角位置のピン16の間隔よりも小径で、当該細胞凝集塊2をピン16の上下中間位置で保持することができない場合には、上記第4実施例において、予め所要の高さに設定した収容部Hの高さに対応させて、支持プレート17を位置させるようにしてもよい。
つまり、収容部Hの高さに合わせて位置させた支持プレート17の上面に細胞凝集塊2を載置させ、その状態で各細胞凝集塊2をそれぞれ収容部Hで保持可能な大きさまで培養する。これにより各細胞凝集塊2が収容部Hに保持された状態となったら、支持プレート17を下方に退避させて、培養途中の癒合パッド4の下方に上記隙間gが形成されるようにする。
その場合も、上記支持プレート17に載置した細胞凝集塊2の上部に上記当接プレート51を載置して、支持プレート17と当接プレート51とで細胞凝集塊2を挟んで支持することで、細胞凝集塊2の浮き上がりを防止するとともに癒合パッド4の形を整えるようにして培養することができる。
Further, as in the fifth embodiment, the diameter of the
That is, the
Also in this case, the
図15、16は第6実施例にかかる細胞の集合構造体の作製方法を説明する図となっており、上記第1〜第5実施例において作製した細胞の集合構造体としての平面的な癒合パッド4に対し、本実施例ではZ方向に細胞凝集塊2を整列させた立体的な細胞の集合構造体を作製する方法を説明するものである。
ただし、当該立体的な細胞の集合構造体を作製する場合であっても、上記第1実施例で使用した細胞の集合構造体の作製装置1と同様の構成を有した装置を使用することが可能であり、また略同様の工程を用いて作製することができるため、詳細な説明については省略する。
図15に示す本実施例で使用する培養容器3において、上記ピン16の長さは所望される立体的な細胞の集合構造体の高さに応じて設定され、4本のピン16によって形成された収容部Hには細胞凝集塊2をZ方向に複数保持することが可能となっている。
そして上記供給工程では、上記吸引ノズル10は予め設定された細胞凝集塊2の立体的な配置に基づいて、上記細胞凝集塊2を上記ピン16によって形成された収容部Hに供給する。
具体的には、最初に培養容器支持部9が培養容器3をY方向に順次移動させて、最下段に配置すべき細胞凝集塊2を供給し、その後収容部Hに保持させた細胞凝集塊2の上部に順次細胞凝集塊2を供給するようにすればよい。
この時も、上記各実施例と同様、最下段に位置する細胞凝集塊2の下方に隙間gを形成するようになっており、これにより立体的な細胞の集合構造体の下面への培養液の供給が行われるようにする。
本実施例では、上記培養容器3の略中央に上記ピン16を備えた収容手段が位置していることから、上記ピン16に支持された立体的な細胞の集合構造体の側面部分と培養容器3の側面部分との間にも隙間gが形成されるようになっており、細胞の集合構造体の側面部分にも培養液の供給が行われるようになっている。
FIGS. 15 and 16 are diagrams for explaining a method for producing a cell aggregate structure according to the sixth embodiment. Planar union as a cell aggregate structure produced in the first to fifth embodiments is shown in FIGS. In this embodiment, a method for producing a three-dimensional aggregate structure of cells in which cell aggregates 2 are aligned in the Z direction will be described.
However, even in the case of producing the three-dimensional cell assembly structure, it is possible to use an apparatus having the same configuration as the cell assembly structure preparation apparatus 1 used in the first embodiment. The detailed description is omitted because it is possible and can be manufactured using substantially the same process.
In the
In the supplying step, the
Specifically, first, the culture
At this time, as in each of the above embodiments, a gap g is formed below the
In the present embodiment, since the accommodating means having the
また、上記立体的な細胞の集合構造体を作製する場合には、図16に示すように隣接する収容部Hに保持された細胞凝集塊2の高さを、例えば細胞凝集塊2半個分だけずらした高さにすることが考えられる。
既に説明したように、上記ピン16に支持された細胞凝集塊2を構成する細胞は上記ピン16の周囲に沿って増殖することから、図16のように隣接する収容部Hの細胞凝集塊2の高さを異ならせることで、効率的に細胞凝集塊2を融合させることが可能となる。
なお、このような立体的な細胞の集合構造体を作製する場合であっても、第2〜第5実施例で行った作業を用いることが可能である。
In the case of producing the above-described three-dimensional aggregate structure of cells, as shown in FIG. 16, the height of the
As already explained, since the cells constituting the
Even when such a three-dimensional aggregate structure of cells is produced, the work performed in the second to fifth embodiments can be used.
なお、上記各実施例において、上記細胞凝集塊2を支持するピン16の配置としては、複数のピン16によって細胞凝集塊2を支持することが可能であれば、例えば6本のピン16で各細胞凝集塊2を囲繞するように配置してもよい。
その場合、上記収容部Hは千鳥状に配置されることとなり、またこの配置を用いて第6実施例のように立体的な細胞の集合構造体を作製することも可能である。
In each of the above-described embodiments, the
In this case, the accommodating portions H are arranged in a staggered manner, and a three-dimensional cell assembly structure can be produced using this arrangement as in the sixth embodiment.
さらに上記各実施例において、培養容器3に設けられるピン16の太さや、ピン16によって形成される収容部Hの大きさ、もしくは使用する細胞凝集塊2の直径に応じて、図17に示すようにさまざまな態様が考えられる。
図17(a)は、対角位置の2本のピン16の間隔よりも細胞凝集塊2の直径が小さく、4本のピン16によって細胞凝集塊2を保持できない場合を示している。
この場合であっても、上記供給工程では上記支持プレート上に細胞凝集塊を載置すればよく、このとき隣接する収容部Hの細胞凝集塊2は相互に接触しないが、上記第5実施例に示したように、培養工程において細胞凝集塊2が培養されることで隣接する細胞凝集塊2が融合するため、細胞の集合構造体を得ることができる。
また図17(b)は、上記ピン16の直径が上記各実施例で示したピン16の直径よりも大径であり、対角位置の2本のピン16の間隔よりも細胞凝集塊2の直径が大きい場合であっても、上記収容部Hに保持された隣接する細胞凝集塊2同士が接触しない場合を示している。
このような場合であっても、上記培養工程において細胞凝集塊2が培養されて隣接する細胞凝集塊2が融合するため、細胞の集合構造体を得ることができる。
Further, in each of the above embodiments, as shown in FIG. 17, depending on the thickness of the
FIG. 17A shows a case where the diameter of the
Even in this case, in the supplying step, the cell aggregates may be placed on the support plate, and the cell aggregates 2 of the adjacent accommodating portions H are not in contact with each other at this time. As shown in FIG. 2, since the
FIG. 17B shows that the diameter of the
Even in such a case, since the
1 細胞の集合構造体の作製装置 2 細胞凝集塊
3 培養容器 4 癒合パッド(細胞の集合構造体)
10 吸引ノズル 12 培養液供給手段
16 ピン 17 支持プレート(下方支持部材)
H 収容部 g 隙間
DESCRIPTION OF SYMBOLS 1 Production apparatus of cell
DESCRIPTION OF
H receiving part g gap
Claims (12)
上記培養容器の内部に複数のピンを立設し、当該複数のピンとピンとにより上記細胞凝集塊を収容する収容部を構成し、
複数の隣接する収容部に細胞凝集塊を収容した状態で培養することを特徴とする細胞の集合構造体の作製方法。 In a method for producing a cell aggregate structure, a plurality of cell aggregates are arranged inside a culture vessel containing a culture solution, and a plurality of cell aggregates are cultured to produce a cell aggregate structure fused together ,
A plurality of pins are erected inside the culture container, and the plurality of pins and pins constitute an accommodating portion that accommodates the cell aggregate,
A method for producing a cell aggregate structure, comprising culturing a cell aggregate in a plurality of adjacent storage portions.
これにより、上記収容部に保持された細胞凝集塊と上記設置面との間に、培養液が流通可能な隙間が形成されることを特徴とする請求項1に記載の細胞の集合構造体の作製方法。 By arranging so that the interval between the two pins at the diagonal position is shorter than the diameter of the cell aggregate, it is possible to hold the cell aggregate in the storage part, and to attach the plurality of pins to the storage part. Set it away from the standing installation surface,
Thus, a gap through which the culture medium can flow is formed between the cell aggregate held in the housing portion and the installation surface. The cell aggregate structure according to claim 1, Manufacturing method.
当該下方支持部材で支持した状態で細胞凝集塊を培養し、当該細胞凝集塊が上記収容部で保持可能となったら、当該細胞凝集塊を上記収容部に保持させて上記下方支持部材を退避させることを特徴とする請求項1に記載の細胞の集合構造体の作製方法。 A lower support member for supporting a cell aggregate from below between the plurality of pins;
The cell aggregate is cultured in a state of being supported by the lower support member, and when the cell aggregate can be held in the storage unit, the cell support is held in the storage unit and the lower support member is retracted. The method for producing a cell aggregate structure according to claim 1.
細胞凝集塊を培養して培養途中の細胞の集合構造体が形成されたら、上記第1ピン群に属するピンを当該細胞の集合構造体より離脱させ、上記第2ピン群に属するピンにより細胞の集合構造体の外周縁部を保持することを特徴とする請求項1ないし請求項3のいずれかに記載の細胞凝集塊の作製方法。 The pin is constituted by a first pin group that holds the central part of the cell assembly structure and a second pin group that holds the outer peripheral edge part of the cell assembly structure,
When the aggregate structure of cells in the middle of culture is formed by culturing the cell aggregate, the pins belonging to the first pin group are detached from the aggregate structure of the cells, and the cells belonging to the second pin group are separated by the pins belonging to the second pin group. The method for producing a cell aggregate according to any one of claims 1 to 3, wherein an outer peripheral edge of the aggregate structure is held.
上記培養容器の内部に、複数のピンを立設した収容手段を設け、
さらに上記収容手段における複数のピンとピンとの間に上記細胞凝集塊を供給する供給手段を備え、
上記複数のピンとピンとの間を細胞凝集塊の収容部として、上記供給手段は複数の隣接する収容部に細胞凝集塊を収容することを特徴とする細胞の集合構造体の作製装置。 In a cell assembly structure manufacturing apparatus, a plurality of cell aggregates are arranged inside a culture vessel containing a culture solution, and the plurality of cell aggregates are cultured to produce a cell aggregate structure fused together ,
Inside the culture vessel, provided with a storage means standing a plurality of pins,
Furthermore, comprising a supply means for supplying the cell aggregate between a plurality of pins in the housing means,
An apparatus for producing an aggregate structure of cells, characterized in that a cell aggregate lump accommodating portion is provided between the plurality of pins, and the supply means accommodates the cell aggregate lump in a plurality of adjacent accommodating portions.
上記供給手段により当該収容部に細胞凝集塊を保持させることを特徴とする請求項7に記載の細胞の集合構造体の作製装置。 By arranging so that the interval between the two pins in the diagonal position is shorter than the diameter of the cell aggregate, the storage unit can hold the cell aggregate and the storage unit is configured to store the storage unit in the storage unit. Set the pins apart from the standing installation surface,
The apparatus for producing a cell aggregate structure according to claim 7, wherein a cell aggregate is held in the container by the supply unit.
上記下方支持部材と上部当接部材とで挟んだ状態で細胞凝集塊を支持することを特徴とする請求項9に記載の細胞の集合構造体の作製装置。 An upper contact member that contacts the upper part of the cell aggregate supported by the lower support member;
The apparatus for producing a cell aggregate structure according to claim 9, wherein the cell aggregate is supported while being sandwiched between the lower support member and the upper contact member.
上記第1ピン群を構成するピンを上記第2ピン群を構成するピンよりも短く形成するとともに、上記細胞凝集塊を保持する収容部を第1ピン群の先端部近傍に設定し、
さらに上記細胞の集合構造体に対して上記第1ピン群および上記第2ピン群を構成するピンが一体的に相対移動可能に設け、
細胞凝集塊が培養されて培養途中の細胞の集合構造体が形成された状態で、上記第1ピン群および上記第2ピン群を構成するピンが移動することにより、上記第1ピン群を構成するピンが細胞の集合構造体より離脱し、上記第2ピン群を構成するピンが細胞の集合構造体を保持することを特徴とする請求項7ないし請求項10のいずれかに記載の細胞の集合構造体の作製装置。 The pin is constituted by a first pin group that holds the central part of the cell assembly structure and a second pin group that holds an outer peripheral edge part of the cell assembly structure,
The pin constituting the first pin group is formed shorter than the pin constituting the second pin group, and the accommodating portion for holding the cell aggregate is set near the tip of the first pin group,
Further, the pins constituting the first pin group and the second pin group are provided so as to be integrally movable relative to the cell assembly.
The first pin group is configured by moving the pins constituting the first pin group and the second pin group in a state in which the cell aggregate is cultured and the aggregate structure of the cells being cultured is formed. 11. The cell according to any one of claims 7 to 10, wherein a pin to be detached from a cell aggregate structure and the pins constituting the second pin group hold the cell aggregate structure. An apparatus for producing an aggregate structure.
上記第1ピン群を構成するピンと上記第2ピン群を構成するピンとを相対移動可能に設け、
細胞凝集塊が培養されて培養途中の細胞の集合構造体が形成された状態で、上記第1ピン群を構成するピンを移動させて細胞の集合構造体より離脱させ、上記第2ピン群を構成するピンが細胞の集合構造体を保持することを特徴とする請求項7ないし請求項10のいずれかに記載の細胞の集合構造体の作製装置。 The pin is constituted by a first pin group that holds the central part of the cell assembly structure and a second pin group that holds an outer peripheral edge part of the cell assembly structure,
A pin constituting the first pin group and a pin constituting the second pin group are provided so as to be relatively movable,
In a state where the cell aggregate is cultured and the aggregate structure of cells in the middle of the culture is formed, the pins constituting the first pin group are moved away from the aggregate structure of the cells, and the second pin group is The device for producing a cell aggregate structure according to any one of claims 7 to 10, wherein the pins constituting the cell hold the cell aggregate structure.
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Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP6256853B1 (en) * | 2016-09-13 | 2018-01-10 | 次郎 大野 | Method for producing three-dimensional cell structure and support used therefor |
WO2018105255A1 (en) * | 2016-12-05 | 2018-06-14 | 澁谷工業株式会社 | Method and apparatus both for producing cell aggregate structure |
JP2019071842A (en) * | 2017-10-17 | 2019-05-16 | 澁谷工業株式会社 | Apparatus for producing cell aggregate structure |
CN111315864A (en) * | 2018-03-19 | 2020-06-19 | 细胞网络株式会社 | Apparatus, system and method for manufacturing cell structure |
CN113574163A (en) * | 2019-03-15 | 2021-10-29 | 国立大学法人佐贺大学 | Culture apparatus for drug development and research |
EP3940055A4 (en) * | 2019-03-15 | 2022-12-14 | Saga University | Method for manufacturing luminal structure |
Citations (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2005312343A (en) * | 2004-04-28 | 2005-11-10 | Hitachi Ltd | Container for observation and container for culture, and cultured cell |
JP2008054566A (en) * | 2006-08-30 | 2008-03-13 | Hitachi Ltd | Method for culturing chondrocyte cell, base material for culturing chondrocyte cell, material for regeneration of biomedical tissue containing chondrocyte cell and chondrocyte cell |
WO2008123614A1 (en) * | 2007-03-30 | 2008-10-16 | Kyushu University, National University Corporation | Method for production of three-dimensional structure of cells |
JP2009178050A (en) * | 2008-01-29 | 2009-08-13 | Koji Okajima | Cell sheet having ordered structure and method for producing the same |
WO2010150521A1 (en) * | 2009-06-23 | 2010-12-29 | 株式会社日立製作所 | Culture substrate, culture sheet, and cell culture method |
WO2013073672A1 (en) * | 2011-11-18 | 2013-05-23 | 国立大学法人佐賀大学 | Device for manufacturing supporting body for cell structure manufacture |
JP2017063732A (en) * | 2015-09-30 | 2017-04-06 | 澁谷工業株式会社 | Culture apparatus for cell masses |
JP2017063731A (en) * | 2015-09-30 | 2017-04-06 | 澁谷工業株式会社 | Apparatus for culturing cell mass sheet |
JP2017063730A (en) * | 2015-09-30 | 2017-04-06 | 澁谷工業株式会社 | Apparatus for producing cell mass sheet |
JP2017063729A (en) * | 2015-09-30 | 2017-04-06 | 澁谷工業株式会社 | Production method of cell mass sheet, and cell mass sheet |
-
2016
- 2016-09-09 JP JP2016176819A patent/JP6882658B2/en active Active
- 2016-10-27 TW TW105134729A patent/TW201730332A/en unknown
- 2016-10-28 KR KR1020160141972A patent/KR20170051331A/en unknown
Patent Citations (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2005312343A (en) * | 2004-04-28 | 2005-11-10 | Hitachi Ltd | Container for observation and container for culture, and cultured cell |
JP2008054566A (en) * | 2006-08-30 | 2008-03-13 | Hitachi Ltd | Method for culturing chondrocyte cell, base material for culturing chondrocyte cell, material for regeneration of biomedical tissue containing chondrocyte cell and chondrocyte cell |
WO2008123614A1 (en) * | 2007-03-30 | 2008-10-16 | Kyushu University, National University Corporation | Method for production of three-dimensional structure of cells |
JP2009178050A (en) * | 2008-01-29 | 2009-08-13 | Koji Okajima | Cell sheet having ordered structure and method for producing the same |
WO2010150521A1 (en) * | 2009-06-23 | 2010-12-29 | 株式会社日立製作所 | Culture substrate, culture sheet, and cell culture method |
WO2013073672A1 (en) * | 2011-11-18 | 2013-05-23 | 国立大学法人佐賀大学 | Device for manufacturing supporting body for cell structure manufacture |
JP2017063732A (en) * | 2015-09-30 | 2017-04-06 | 澁谷工業株式会社 | Culture apparatus for cell masses |
JP2017063731A (en) * | 2015-09-30 | 2017-04-06 | 澁谷工業株式会社 | Apparatus for culturing cell mass sheet |
JP2017063730A (en) * | 2015-09-30 | 2017-04-06 | 澁谷工業株式会社 | Apparatus for producing cell mass sheet |
JP2017063729A (en) * | 2015-09-30 | 2017-04-06 | 澁谷工業株式会社 | Production method of cell mass sheet, and cell mass sheet |
Cited By (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP6256853B1 (en) * | 2016-09-13 | 2018-01-10 | 次郎 大野 | Method for producing three-dimensional cell structure and support used therefor |
US10513684B2 (en) | 2016-09-13 | 2019-12-24 | Jiro Ono | Manufacturing method and device for three-dimensional engineered tissue |
WO2018105255A1 (en) * | 2016-12-05 | 2018-06-14 | 澁谷工業株式会社 | Method and apparatus both for producing cell aggregate structure |
JP2019071842A (en) * | 2017-10-17 | 2019-05-16 | 澁谷工業株式会社 | Apparatus for producing cell aggregate structure |
JP7037038B2 (en) | 2017-10-17 | 2022-03-16 | 澁谷工業株式会社 | Equipment for making a cell aggregate structure |
CN111315864A (en) * | 2018-03-19 | 2020-06-19 | 细胞网络株式会社 | Apparatus, system and method for manufacturing cell structure |
EP3690020A4 (en) * | 2018-03-19 | 2020-11-04 | Tissuebynet Corporation | Production device, production system and production method for cell structure |
CN113574163A (en) * | 2019-03-15 | 2021-10-29 | 国立大学法人佐贺大学 | Culture apparatus for drug development and research |
EP3940055A4 (en) * | 2019-03-15 | 2022-12-14 | Saga University | Method for manufacturing luminal structure |
EP3940054A4 (en) * | 2019-03-15 | 2022-12-14 | Saga University | Culture apparatus for use in studies on drug development |
Also Published As
Publication number | Publication date |
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