JP2016539960A

JP2016539960A - イソオキサゾリン化合物の抗寄生生物薬使用

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Publication number: JP2016539960A
Application number: JP2016537438A
Authority: JP
Inventors: ウイリアムズ，ハイケ; ゾラー，ハルトムート; ヘツカロス，アンニヤ・レギーナ
Original assignee: インターベットインターナショナルベー．フェー．
Priority date: 2013-12-10
Filing date: 2014-12-09
Publication date: 2016-12-22
Anticipated expiration: 2034-12-09
Also published as: CN105992517A; ES2742815T3; AU2014363695B2; JP6530753B2; AU2014363695A1; PT3079474T; EP3079474B1; WO2015086551A1; CN105992517B; BR112016013020A2; RU2673723C1; CA2932790A1; US9655884B2; DK3079474T3; HUE046067T2; CA2932790C; EP3079474A1; PL3079474T3; US20160303086A1; BR112016013020B1

Abstract

本発明は、イソオキサゾリン化合物の全身投与による、動物およびそれの環境の成虫ノミによる侵襲を防止する方法に関する。

Description

本発明は、動物での寄生生物侵襲の予防に関するものである。

イソオキサゾリン化合物は当業界で公知であり、この種類の化合物はダニ類およびノミ類などの寄生生物侵襲に対する優れた活性を有することが知られている。

イソオキサゾリン化合物および抗寄生生物薬としてのそれらの使用が、例えばＵＳ特許出願ＵＳ２００７／００６６６１７、および国際特許出願ＷＯ２００５／０８５２１６、ＷＯ２００７／０７９１６２、ＷＯ２００９／００２８０９、ＷＯ２００９／０２４５４１、ＷＯ２００９／００３０７５、ＷＯ２０１０／０７００６８およびＷＯ２０１０／０７９０７７に記載されている。

ある好ましいイソオキサゾリン化合物は、［５−（３，５−ジクロロフェニル）−５−トリフルオロメチル−４，５−ジヒドロイソオキサゾール−３−イル］−２−メチル−Ｎ−［（２，２，２−トリフルオロ−エチルカルバモイル）−メチル］−ベンズアミド（ＣＡＳＲＮ８６４７３１−６１−３−ＵＳＡＮフルララネル）である。

虫に侵襲されたイヌに対する抗寄生生物薬のノミ成虫駆除剤（死滅）活性は重要であるが、ノミ群の効果的防除に必要なノミ防除プログラムの一部のみを代表するものである。

イヌにおける成虫群は住居におけるノミ侵襲全体の約５％のみを代表するものであり、その群の他の９５％はイヌの住居環境でのノミの幼若段階、すなわち卵、幼虫および蛹からなる［ＤｒｙｄｅｎＭＷ．Ｈｏｓｔａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ、ｏｎｈｏｓｔｌｏｎｇｅｖｉｔｙａｎｄｅｇｇｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆＣｔｅｎｏｃｅｐｈａｌｉｄｅｓｆｅｌｉｓ．ＶｅｔＰａｒａｓｉｔｏｌ１９８９，３４：１１７−１２２］。

これらの幼若（成熟）段階は、成体になるに連れて、イヌにとっての再侵襲源を代表するものとなる。

ＵＳ２００７／００６６６１７ＷＯ２００５／０８５２１６ＷＯ２００７／０７９１６２ＷＯ２００９／００２８０９ＷＯ２００９／０２４５４１ＷＯ２００９／００３０７５ＷＯ２０１０／０７００６８ＷＯ２０１０／０７９０７７

ＤｒｙｄｅｎＭＷ．Ｈｏｓｔａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ、ｏｎｈｏｓｔｌｏｎｇｅｖｉｔｙａｎｄｅｇｇｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆＣｔｅｎｏｃｅｐｈａｌｉｄｅｓｆｅｌｉｓ．ＶｅｔＰａｒａｓｉｔｏｌ１９８９，３４：１１７−１２２

環境ノミ群の非常に効果的な防除が、局所施用殺虫剤で記録されているが［ＤｒｙｄｅｎＭＷ，ＰａｙｎｅＰＡ，ＳｍｉｔｈＶ，ＨｅａｎｅｙＫ，ＳｕｎＦ．Ｅｆｆｉｃａｃｙｏｆｉｎｄｏｘａｃａｒｂａｐｐｌｉｅｄｔｏｃａｔｓａｇａｉｎｓｔｔｈｅａｄｕｌｔｃａｔｆｌｅａ，Ｃｔｅｎｏｃｅｐｈａｌｉｄｅｓｆｅｌｉｓ，ｆｌｅａｅｇｇｓａｎｄａｄｕｌｔｆｌｅａｅｍｅｒｇｅｎｃｅ．Ｐａｒａｓｉｔｅｓ＆Ｖｅｃｔｏｒｓ２０１３，６：１２６］、全身投与殺虫剤の特徴とは考えられない［ＤｒｙｄｅｎＭＷ，ＰａｙｎｅＰＡ，ＳｍｉｔｈＶ，ＲｉｔｃｈｉｅＬＤ，ＡｌｌｅｎＬ．ＥｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＯｖｉｃｉｄａｌＡｃｔｉｖｉｔｙｏｆＬｕｆｅｎｕｒｏｎａｎｄＳｐｉｎｏｓａｄｏｎＦｌｅａｓ′ＥｇｇｓｆｒｏｍＴｒｅａｔｅｄＤｏｇｓ．ＩｎｔｅｒｎＪＡｐｐｌＲｅｓＶｅｔＭｅｄ．２０１２，１０（３）：１９８−２０４］。

イソオキサゾリン化合物によるノミ繁殖（ノミの幼若段階から成熟（成体）段階までの発育）の防止が、先行技術において報告されている。

本発明で使用されるイソオキサゾリン化合物は、下記式（Ｉ）によって記述することができる。

式中、
Ｒ^１＝ハロゲン、ＣＦ_３、ＯＣＦ_３、ＣＮであり、
ｎ＝０から３の整数、好ましくは１、２または３であり、
Ｒ^２＝Ｃ_１−Ｃ_３−ハロアルキル、好ましくはＣＦ_３またはＣＦ_２Ｃｌであり、
Ｔ＝１以上の基Ｙによって置換されていても良い５員もしくは６員環であり、
Ｙ＝メチル、ハロメチル、ハロゲン、ＣＮ、ＮＯ_２、ＮＨ_２−Ｃ＝Ｓであり、または２個の隣接する基Ｙが一緒になって、鎖ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ、Ｎ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ、ＣＨ−Ｎ＝ＣＨ−ＣＨ、ＣＨ−ＣＨ＝Ｎ−ＣＨ、またはＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−Ｎ、ＨＣ＝ＨＣ−ＣＨ、ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ、ＣＨ＝ＣＨ−Ｎ、Ｎ−ＣＨ＝ＣＨを形成しており；
Ｑ＝Ｘ−ＮＲ^３Ｒ^４または５員Ｎ−ヘテロアリール環であり、それは１以上の基Ｚ^Ａ、Ｚ^ＢＺ^Ｄによって置換されていても良く；
Ｘ＝ＣＨ_２、ＣＨ（ＣＨ_３）、ＣＨ（ＣＮ）、ＣＯ、ＣＳであり、
Ｒ^３＝水素、メチル、ハロエチル、ハロプロピル、ハロブチル、メトキシメチル，メトキシエチル、ハロメトキシメチル、エトキシメチル、ハロエトキシメチル、プロポキシメチル、エチルアミノカルボニルメチル、エチルアミノカルボニルエチル、ジメトキシエチル、プロピニルアミノカルボニルメチル、Ｎ−フェニル−Ｎ−メチル−アミノ、ハロエチルアミノカルボニルメチル、ハロエチルアミノカルボニルエチル、テトラヒドロフリル、メチルアミノカルボニルメチル、（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−カルボニルメチル、プロピルアミノカルボニルメチル、シクロプロピルアミノカルボニルメチル、プロペニルアミノカルボニルメチル、ハロエチルアミノカルボニルシクロプロピル、

であり；
Ｒ^４＝水素、エチル、メトキシメチル、ハロメトキシメチル、エトキシメチル、ハロエトキシメチル、プロポキシメチル、メチルカルボニル、エチルカルボニル、プロピルカルボニル、シクロプロピルカルボニル、メトキシカルボニル、メトキシメチルカルボニル、アミノカルボニル、エチルアミノカルボニルメチル、エチルアミノカルボニルエチル、ジメトキシエチル、プロピニルアミノカルボニルメチル、ハロエチルアミノカルボニルメチル、シアノメチルアミノカルボニルメチル、またはハロエチルアミノカルボニルエチルであり；または
Ｒ^３およびＲ^４が一緒に、

からなる群から選択される置換基を形成しており、
Ｚ^Ａ＝水素、ハロゲン、シアノ、ハロメチル（ＣＦ_３）である。

式（Ｉ）におけるある好ましい実施形態において、Ｔは、

から選択され、
Ｔ−１、Ｔ−３およびＴ−４において、基Ｙは水素、ハロゲン、メチル、ハロメチル、エチル、ハロエチルである。

式（Ｉ）におけるある好ましい実施形態では、Ｑは、

から選択され、
Ｒ^３、Ｒ^４、ＸおよびＺ^Ａは上記で定義の通りである。

Ｚ^Ｂ＝

である。

Ｚ^Ｄ＝

である。

本発明で使用される式（Ｉ）の好ましいイソオキサゾリン化合物は下記の通りである。

本発明で使用される特に好ましいイソオキサゾリン化合物は下記の通りである。

本発明で使用されるより好ましいイソオキサゾリン化合物は、下記式（ＩＩ）を有する。

式中、
Ｒ^１ａ、Ｒ^１ｂ、Ｒ^１ｃは互いから独立に、水素、ＣｌまたはＣＦ_３であり、好ましくはＲ^１ａおよびＲ^１ｃはＣｌまたはＣＦ_３であり、Ｒ^１ｂは水素であり、
Ｔは

であり；
Ｙはメチル、臭素、Ｃｌ、Ｆ、ＣＮまたはＣ（Ｓ）ＮＨ_２であり、
Ｑは上記で定義の通りである。

式（ＩＩ）における別の好ましい実施形態では、Ｒ^３はＨであり、Ｒ^４は−ＣＨ_２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ_２−ＣＦ_３、−ＣＨ_２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ_２−ＣＨ_３、−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＦ_３または−ＣＨ_２−ＣＦ_３である。

好ましい実施形態において、前記イソオキサゾリン化合物は４−［５−（３，５−ジクロロフェニル）−５−トリフルオロメチル−４，５−ジヒドロイソオキサゾール−３−イル］−２−メチル−Ｎ−［（２，２，２−トリフルオロ−エチルカルバモイル）−メチル］−ベンズアミド（ＣＡＳＲＮ８６４７３１−６１−３−ＵＳＡＮフルララネル）である。

別の実施形態において、前記イソオキサゾリン化合物は、（Ｚ）−４−［５−（３，５−ジクロロフェニル）−５−トリフルオロメチル−４，５−ジヒドロイソオキサゾール−３−イル］−Ｎ−［（メトキシイミノ）メチル］−２−メチルベンズアミド（ＣＡＳＲＮ９２８７８９−７６−８）である。

別の実施形態において、前記イソオキサゾリン化合物は４−［５−（３，５−ジクロロフェニル）−５−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−イソオキサゾール−３−イル］−２−メチル−Ｎ−（チエタン−３−イル）ベンズアミド（ＣＡＳＲＮ１１６４２６７−９４−０）であり、それはＷＯ２００９／００８０２５０に開示されている。

別の実施形態において、前記イソオキサゾリン化合物は、４−［５−［３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］−４，５−ジヒドロ−５−（トリフルオロメチル）−３−イソオキサゾリル］−Ｎ−［２−オキソ−２−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］エチル］−１−ナフタレンカルボキサミド（ＣＡＳＲＮ１０９３８６１−６０−９、ＵＳＡＮ−アフォキソレイナー）であり、それはＷＯ２００７／０７９１６２−に開示されている。

別の実施形態において、前記イソオキサゾリン化合物は、５−［５−（３，５−ジクロロフェニル）−４，５−ジヒドロ−５−（トリフルオロメチル）−３−イソオキサゾリル］−３−メチル−Ｎ−［２−オキソ−２−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］エチル］−２−チオフェンカルボキサミド（ＣＡＳＲＮ１２３１７５４−０９−８）であり、それはＷＯ２０１０／０７００６８に開示されている。

本発明は、イソオキサゾリン化合物に曝露されて成虫段階に入った成虫ノミを起源とするノミの幼若段階の発育を阻害するためのそのようなイソオキサゾリン化合物またはそれの塩もしくは溶媒和物の使用に関する。

１実施形態において、本発明は、環境におけるノミの幼若段階の成虫ノミへの発育が、動物への治療量以下の量の当該イソオキサゾリン化合物の全身投与によって阻害される、イソオキサゾリン化合物のそのような使用に関する。

１実施形態において、本発明は、治療量以下の量の前記イソオキサゾリン化合物の動物への全身投与によって動物の再侵襲が阻害される、イソオキサゾリン化合物のそのような使用に関する。好ましい実施形態において、そのような全身投与は経口投与であり、別の実施形態では局所投与であり、別の実施形態では非経口（注射、特別には皮下）投与である。

ある好ましい実施形態において、本発明は、そのような化合物がフルララネルであるそのような使用に関する。

ある好ましい実施形態において、本発明は、動物の血漿が１．５から２５ｎｇ／ｍＬのイソオキサゾリン化合物濃度を含むイソオキサゾリン化合物のそのような使用に関する。

１実施形態において、本発明は、イソオキサゾリン化合物を幼若段階のノミに曝露された動物に投与する、イソオキサゾリン化合物の使用に関するものである。好ましい実施形態において、当該動物はイヌまたはネコである。

１実施形態において、投与によって、アレルギー性ノミ皮膚炎の徴候が低減する。

１実施形態において、ノミの侵襲を受けた動物に、そのようなノミの子孫が発育して成虫段階となるのを阻害するのに十分な用量の請求項１で定義のイソオキサゾリン化合物を投与することで、ノミによる動物の再侵襲を予防するのに、イソオキサゾリン化合物、特にはフルララネルを用いる。

好ましい実施形態において、イソオキサゾリン化合物の用量は、１．５から２５ｎｇ／ｍＬの血漿濃度に達するのに十分なものである。１実施形態において、そのようなイソオキサゾリン化合物に曝露されたノミを起源とする幼若段階のノミの成虫段階への発育を阻害するのに十分な用量の請求項１で定義のイソオキサゾリン化合物をノミ侵襲された動物に投与することで、イソオキサゾリン化合物、特にフルララネルを動物環境での幼若段階のノミの発育を防止するのに用いる。

本発明の方法は、ラセミ混合物、例えば等量のエナンチオマーを含む。さらに、本発明の方法は、ラセミ混合物と比較して、式１のエナンチオマーが豊富な化合物を含む。実質的に純粋な式Ｉの化合物のエナンチオマーも含まれる。

エナンチオマー豊富である場合、一方のエナンチオマーが他方より多量に存在し、豊富さの程度は、（２ｘ−１）−１００％（ｘは混合物中の支配的エナンチオマーのモル分率）と定義されるエナンチオマー過剰（「ｅｅ」）の過剰によって定義することができる（例えば、２０％ｅｅは、６０：４０のエナンチオマー比に相当する）。好ましくは、式１の組成は、より活性が高い異性体の少なくとも５０％エナンチオマー過剰；より好ましくは少なくとも７５％エナンチオマー過剰；さらにより好ましくは少なくとも９０％エナンチオマー過剰；および最も好ましくは少なくとも９４％エナンチオマー過剰を有する。特に注目すべきは、より活性の高い異性体のエナンチオマー的に純粋な実施形態である。

式１の化合物は、さらなるキラル中心を有することができる。本発明の方法は、これら別のキラル中心でのラセミ混合物ならびに豊富および実質的に純粋な立体配置を含む。式１の化合物は、式１におけるアミド結合周囲の回転が制限されていることによる１以上の立体配座異性体として存在し得る。本発明の方法は、立体配座異性体の混合物を含む。さらに、本発明の方法は、他のものに対して一つの配座異性体が豊富である化合物を含む。本明細書においてイソオキサゾリン化合物と言う場合、それはエナンチオマー、塩および溶媒和物ならびに従来の方法によって製造することができるＮ−オキサイドを含む。

フルララネルなどのイソオキサゾリン化合物は、イン・ビトロおよびイン・ビボの両方の実験結果で認められ得るノミ繁殖に対する強力な阻害効果を有する。実施例で示すように、低濃度のフルララネル（５０．０ｎｇ／ｍＬおよび２５．０ｎｇ／ｍＬ）によって、これらの濃度で摂食させて４から５日間生存したノミが卵を産まなかったことから、産卵の完全な抑制（１００％）が達成された（表２）。

当該実施例では、９９．６％（１２．５ｎｇ／ｍＬ）および８０．６％（６．２５ｎｇ／ｍＬ）などの殺虫活性以下のイソオキサゾリン濃度であっても、高い産卵抑制率が達成された。卵を産むことができるほとんど全てのノミ群で孵化が認められたことから、フルララネルが幼虫の孵化に影響しないことが示された（表３）。しかしながら、蛹発育が大きく低下し（１２．５ｎｇ／ｍＬで８５．１％、６．２５ｎｇ／ｍＬで８８．７％）、それはフルララネル曝露が強力な殺幼虫効果を有することを示している（表４）。１２．５ｎｇフルララネル／ｍＬで、同じ効果が、１００％抑制まで続いた（表５）。

ノミ繁殖を抑制する強力なイン・ビトロ効力は、摸擬家庭環境で未処理対照イヌと比較して、経口フルララネルによってイヌを処理するイン・ビボ試験によって裏付けられた。家庭環境は、カーペットを敷いた寝場所にイヌが近づけるようにし、フルララネル処理前の１ヶ月間重度のノミ曝露を受けるようにすることで作り上げた。これにより、処理投与前に全ての発育段階を含む繁殖したノミ群を有する環境となり、試験期間を通じて未処理対照イヌにおいてノミ負荷が高い状態となった。処理後に、ノミ群はフルララネル（Ｂｒａｖｅｃｔｏ（商標名））処理イヌで効果的に防除され、効力は、１２週処理後期間を通じて１００％またはほぼ１００％であった（表６）。

環境ノミ群の非常に有効な防除は、ノミに対する接触活性を有する局所施用殺虫剤で記録されているが、以前に評価された全身投与殺虫剤では信頼性良く達成されない。

「予防」または「防止」は、寄生生物の子孫の発生を低減もしくは阻害することで、例えば殺害もしくは幼若段階の発育の阻害によって、寄生生物、特にはノミによる動物の新たな侵襲が防止されることを意味する。従って、侵襲家庭環境（例えば、寝具、カーペット）で発育した幼若段階を起源とする成体ノミによるイヌの再侵襲が防止される。

概して、本発明で使用される組成物は、殺虫性以下の量を含み、それは成体ノミ１００％を死滅させる血漿／血清濃度となる「有効」量以下の量を意味する。

殺虫性以下（または治療性以下）の（血漿または血清）濃度は、完全および即座の成体ノミ死滅効果（イソオキサゾリン化合物投与後４８時間以内で１００％）を提供するものと予想されるレベル以下の濃度である。１実施形態において、殺虫性以下量（用量）は、イソオキサゾリン化合物投与から４８時間以内に成体ノミの１００％を死滅させる最小有効量の１０％から２０％である。別の実施形態において、殺虫性以下（治療）量は２０％から５０％であり、別の実施形態では最小有効量の５０％から７０％である。

代表的には、イソオキサゾリン化合物の有効（用量）量は、１ｍｇ／ｋｇ処理動物体重から４０ｍｇ／ｋｇ体重である。

「全身投与」は、標的寄生生物少なくとも一部が存在する部位から離れた部位での投与である。全身投与により、少なくともイソオキサゾリン化合物の一部が動物被投与者の血流、他の体液（リンパ液）および／または組織（例えば、皮膚もしくは脂肪組織）を介して標的寄生生物に到達する。これは、寄生生物身体の表面にイソオキサゾリン化合物に直接曝露させる「接触活性」とは対照的である。代表的には、寄生生物は、動物被投与者の血液、他の体液および／または組織とともに全身投与されたイソオキサゾンを摂取する。全身投与は、いくつかの形態で、例えば経口投与、非経口投与で、またはイソオキサゾリン化合物を経皮的に吸収させる局所投与によって行うことができる。

一部の実施形態において、イソオキサゾリン化合物は、単位製剤で、例えば軟もしくは硬カプセル、丸薬、粉剤、粒剤、錠剤（例えば咀嚼錠）、ペースト、液剤、懸濁液（水系もしくは非水系）、乳濁液（水中油型または油中水型）、エリキシル剤、シロップ、ボラス剤、水薬で経口経路を介して、または動物被投与者の飼料もしくは飲料水を介して全身投与される。あるいは、経口投与は、動物被投与者の飼料もしくは飲料水を介して行うことができ、例えば、それは、動物被投与者の通常の飼料中に十分に分散させたり、最上層として用いたり、または完成した飼料に加えるペレットもしくは液体の形態とすることができる。

経口投与の一つの形態は、咀嚼錠などの咀嚼組成物のような製剤である。式（Ｉ）のイソオキサゾリン化合物を含む咀嚼錠の例が、ＷＯ２０１３／１５００５２およびＷＯ２０１３／１５００５５に記載されている。これら文書の実施例に開示されている咀嚼錠の組成は、参照によって本明細書に組み込まれる。別の咀嚼錠がＷＯ２０１３／１１９４４２に記載されている。

「咀嚼錠」の形態での経口動物薬組成物は、「軟咀嚼組成物」または「軟咀嚼剤」と称される場合があり、通常は、ある種の動物、特にはネコおよびイヌ、好ましくはイヌに投与する上で簡便であり、これらの動物の動物薬を投与するのに効果的に使用することができる。

「咀嚼錠」、「軟咀嚼剤」または「軟咀嚼医薬製品」は、室温で固体であり、経口投与後には柔らかくなって動物が咀嚼し、口の中での咀嚼プロセス中に製品が若干の可塑的質感を有することから機能的に歯ごたえがある医薬単位用量を意味するものである。そのような軟咀嚼剤は、調理した挽肉の小粒と同様の柔らかさを有する。咀嚼錠または軟咀嚼剤は、担体および他の非活性成分を含む。

イソオキサゾリン化合物はあるいは（またはさらに）、経皮製剤（すなわち、皮膚を通過する製剤）を局所的に用いて全身投与することができる。あるいは（またはさらに）、その組成物は、局所的に粘膜を介して全身投与することができる。イソオキサゾリン組成物はあるいは（またはさらに）、非経口的に、例えば筋肉注射、静脈注射、皮下注射、インプラント（例えば、皮下インプラント）、注入、ボラスなどを介して全身投与することができる。

動物には、前記で定義のイソオキサゾリン化合物を含む医薬組成物を１、２、３、４、５または６ヶ月に１回投与することができるか、１年、半年、３ヶ月、２ヶ月、１ヶ月、１週間もしくは１日用量を投与する。３ヶ月に１回すなわち年４回、本発明による医薬組成物を投与することが好ましい。

概して、イソオキサゾリン化合物は、寄生生物侵襲を受ける全ての動物種に投与することができる。

当該製造物の投与を受ける者は、家畜動物、例えばヒツジ、ウシ、ぶた、ヤギもしくは家禽；臨床検査動物、例えばモルモット、ラットもしくはマウス；またはペット、例えばイヌ、ネコ、ウサギ、フェレットもしくはウマであることができる。特に好ましいのは、ペット、例えばイヌ、ネコもしくはフェレット、好ましくはイヌもしくはネコ、特別にはイヌでの使用である。

「侵襲」は、ヒトもしくは動物に対して迷惑または害をなすリスクをもたらす数での寄生生物の存在を指す。その存在は、環境（例えば、動物寝床）中、動物の皮膚もしくは毛皮上などであることができる。

別段の断りがない限り、侵襲が動物体内（例えば、血液中その他の体内組織中）である場合、侵襲という用語は、その用語が当業界で一般に理解されるように「感染」という用語と同義となる。

多くの動物被投与者において、全身投与されるイソオキサゾリン量は、約１．５から５０ｎｇ／ｍＬ、２から３０ｎｇ／ｍＬ、３ｎｇ／ｍＬから２５ｎｇ／ｍＬ、２から２０ｎｇ／ｍＬ、３から１５ｎｇ／ｍＬのイソオキサゾリン血漿もしくは血清レベル（特に、イソオキサゾリン化合物がフルララネルである場合）を維持するように選択される。好ましくはイソオキサゾリン類、特にはフルララネルの血清／血漿レベルは、５から１２．５ｎｇ／ｍＬまたは１．５６から５０ｎｇ／ｍＬ、特別には５０ｎｇ／ｍＬ、２５ｎｇ／ｍＬ、１２．５ｎｇ／ｍＬ、６．２５ｎｇ／ｍＬ、３．１３ｎｇ／ｍＬ、または１．５６ｎｇ／ｍＬである。

あるいは、上記のイソオキサゾリン化合物は、動物に投与して、下記のような他の外寄生生物の幼若段階の成熟を防止することができる。

Ａ．刺咬昆虫。これには、例えば、移動性双翅目幼虫、例えばウシでのヒフバエ属種（Ｈｙｐｏｄｅｒｍａｓｐ．）、ウマにおけるウマバエ（Ｇａｓｔｒｏｐｈｉｌｕｓ）および齧歯類におけるウサギヒフバエ属種（Ｃｕｔｅｒｅｂｒａｓｐ．）；サシバエ類、例えば、吸血バエ成虫（例えば、ノサシバエ（Ｈａｅｍａｔｏｂｉａｉｒｒｉｔａｎｓ）、ウマバエ（例えばアブ属種（Ｔａｂａｎｕｓｓｐｐ．））、サシバエ（例えば、Ｓｔｏｍｏｘｙｓｃａｌｃｉｔｒａｎｓ）、ブヨ（例えばブユ属種（Ｓｉｍｕｌｉｕｍｓｐｐ．））、メクラアブ（例えば、メクラアブ属種（Ｃｈｒｙｓｏｐｓｓｐｐ．））、シラミバエ（例えば、ヒツジシラミバエ（Ｍｅｌｏｐｈａｇｕｓｏｖｉｎｕｓ））、ツェツェバエ（例えばツェツェバエ属種（Ｇｌｏｓｓｉｎａｓｐｐ．））；寄生バエウジ、例えばウマバエ（例えば、ヒツジバエ（Ｏｅｓｔｒｕｓｏｖｉｓ）およびウサギヒフバエ属種（Ｃｕｔｅｒｅｂｒａｓｐｐ．））、クロバエ（例えばファエニシア属種（Ｐｈａｅｎｉｃｉａｓｐｐ．））、らせん虫（例えば、ラセンウジバエ（Ｃｏｃｈｌｉｏｍｙｉａｈｏｍｉｎｉｖｏｒａｘ））、ウシバエ（例えば、ヒフバエ属種（Ｈｙｐｏｄｅｒｍａｓｐ．））、およびフリースワーム（ｆｌｅｅｃｅｗｏｒｍｓ）；および蚊、例えばイエカ属種（Ｃｕｌｅｘｓｐｐ．）、ハマダラカ属種（Ａｎｏｐｈｅｌｅｓｓｐｐ．）、およびヤブカ属種（Ａｅｄｅｓｓｐｐ．）などがある。

Ｂ．ダニ類。これには、
ｉ．トゲダニ属種（Ｍｅｓｏｓｔｉｇｍａｔａｓｐｐ．）、例えば中気門類ダニ（ｍｅｓｏｓｔｉｇｍａｔｉｄｓ）、例えばワクモ類（ｃｈｉｃｋｅｎｍｉｔｅｓ）（例えば、Ｄｅｒｍａｎｙｓｓｕｓｇａｌｌｉｎａｅ）；
ｉｉ．コナダニ属種（Ａｓｔｉｇｍａｔａｓｐｐ．）、例えば疥癬虫またはヒゼンダニ、例えばヒゼンダニ属種（Ｓａｒｃｏｐｔｉｄａｅｓｐｐ．）（例えば、Ｓａｒｃｏｐｔｅｓｓｃａｂｉｅｉ）；およびキュウセンヒゼンダニ（ｍａｎｇｅｍｉｔｅｓ）、例えばキュウセンダニ属種（Ｐｓｏｒｏｐｔｉｄａｅｓｐｐ．）（例えば、ショクヒヒゼンダニ（Ｃｈｏｒｉｏｐｔｅｓｂｏｖｉｓ）およびヒツジキュウセンヒゼンダニ（Ｐｓｏｒｏｐｔｅｓｏｖｉｓ））；
ｉｉｉ．ケダニ属種（Ｐｒｏｓｔｉｇｍａｔａｓｐｐ）、例えばツツガムシ類、例えばツツガムシ属種（Ｔｒｏｍｂｉｃｕｌｉｄａｅｓｐｐ．）（例えば、北米ツツガムシ（ＮｏｒｔｈＡｍｅｒｉｃａｎｃｈｉｇｇｅｒｓ）、アメリカツツガムシ（Ｔｒｏｍｂｉｃｕｌａａｌｆｒｅｄｄｕｇｅｓｉ））；
ｉｖ．ニキビダニ。

Ｃ．マダニ。これには、軟体マダニ類、例えばヒメダニ属種（Ａｒｇａｓｉｄａｅｓｐｐ．）（例えば、ナガヒメダニ属種（Ａｒｇａｓｓｐｐ．）およびカズキダニ属種（Ｏｒｎｉｔｈｏｄｏｒｏｓｓｐｐ．））；および硬体マダニ類、例えばマダニ属種（Ｉｘｏｄｉｄａｅｓｐｐ．）（例えば、イヌダニ（Ｉｘｏｄｅｓｒｉｃｉｎｕｓ）、クリイロコイタマダニ（Ｒｈｉｐｉｃｅｐｈａｌｕｓｓａｎｇｕｉｎｅｕｓ）、チマダニ属種（Ｈａｅｍａｐｈｙｓａｌｉｓｓｐｐ）、アミメカクマダニ（Ｄｅｒｍａｃｅｎｔｏｒｒｅｔｉｃｕｌａｔｅｓ）、アメリカイヌカクマダニ（Ｄｅｒｍａｃｅｎｔｏｒｖａｒｉａｂｉｌｉｓ）、アムブリオンマ・アメリカヌム（Ａｍｂｌｙｏｍｍａａｍｅｒｉｃａｎｕｍ）、およびコイタマダニ（Ｒｈｉｐｉｃｅｐｈａｌｕｓ）（ウシマダニ（Ｂｏｏｐｈｉｌｕｓ））属種）などがある。

Ｄ．シラミ。これには、例えば、ハジラミ（ｃｈｅｗｉｎｇｌｉｃｅ）、例えばタンカクハジラミ属種（Ｍｅｎｏｐｏｎｓｐｐ．）およびボビコーラ属種（Ｂｏｖｉｃｏｌａｓｐｐ．）；およびシラミ（ｓｕｃｋｉｎｇｌｉｃｅ）、例えばブタジラミ属種（Ｈａｅｍａｔｏｐｉｎｕｓｓｐｐ．）、ケモノホソジラミ属種（Ｌｉｎｏｇｎａｔｈｕｓｓｐｐ．）およびソレノポテス属種（Ｓｏｌｅｎｏｐｏｔｅｓｓｐｐ）などがある。

Ｅ．ノミ類。これには、例えばイヌノミ属種（Ｃｔｅｎｏｃｅｐｈａｌｉｄｅｓｓｐｐ．）、例えばイヌノミ類（イヌノミ（Ｃｔｅｎｏｃｅｐｈａｌｉｄｅｓｃａｎｉｓ））およびネコノミ類（ネコノミ（Ｃｔｅｎｏｃｅｐｈａｌｉｄｅｓｆｅｌｉｓ））；ネズミノミ属種（Ｘｅｎｏｐｓｙｌｌａｓｐｐ．）、例えばケオプスネズミノミ類（Ｘｅｎｏｐｓｙｌｌａｃｈｅｏｐｉｓ）；ヒトノミ属種（Ｐｕｌｅｘｓｐｐ．）、例えばヒトノミ類（Ｐｕｌｅｘｉｒｒｉｔａｎｓ）；ハリネズミノミ類（Ａｒｃｈａｅｏｐｓｙｌｌａｅｒｉｎａｃｅｉ）；およびトリノミ類（Ｃｅｒａｔｏｐｈｙｌｌｕｓｇａｌｌｉｎａｅ）などがある。

Ｆ．半翅類昆虫。これには、例えばシミシダエ（Ｃｉｍｉｃｉｄａｅ）またはトコジラミ（Ｃｉｍｅｘｌｅｃｔｕｌａｒｉｕｓ）；およびサシガメ属種（Ｔｒｉａｔｏｍｉｎａｅｓｐｐ．）、例えばオオサシガメ類（オオサシガメ（ｋｉｓｓｉｎｇｂｕｇｓ）とも称される）（例えば、ベネズエラサシガメ（Ｒｈｏｄｎｉｕｓｐｒｏｌｉｘｕｓ）およびサシガメ属種（Ｔｒｉａｔｏｍａｓｐｐ．））などがある。

本発明はさらに、ノミによる侵襲を受けた動物に、請求項１で定義のイソオキサゾリン化合物に曝露された成体ノミ起源の幼若段階のノミの成虫段階（すなわち、子孫）への発育を阻害するのに十分な用量の当該イソオキサゾリン化合物を投与することで、ノミによる動物の再侵襲を防止する方法を提供する。

そのような方法において、イソオキサゾリン化合物は好ましくは、フルララネルである。

そのような方法において、その用量は、１．５から２５ｎｇ／ｍＬのイソオキサゾリン化合物血漿濃度に達するのに十分な量である。

そのような方法において、動物はイヌまたはネコである。

そのような方法において、全身投与は経口投与である。

あるいは、そのような方法において、全身投与は局所投与である。

あるいは、そのような方法において、全身投与は非経口投与である。

本発明はさらに、ノミによる侵襲を受けた動物に、請求項１で定義のイソオキサゾリン化合物に曝露された成体ノミ起源の幼若段階のノミの成虫段階（すなわち、子孫）への発育を阻害するのに十分な用量の当該イソオキサゾリン化合物を投与することで、動物環境における幼若段階のノミの発育を防止する方法を提供する。

そのような方法において、動物はイヌまたはネコである。

そのような方法において、全身投与は経口投与である。あるいは、そのような方法において、全身投与は局所投与である。あるいは、そのような方法において、全身投与は非経口投与である。

実施例
実施例１：ノミ繁殖を評価するためのイン・ビトロ膜給餌曝露
膜給餌法［ＷａｄｅＳＥ，ＧｅｏｒｇｉＪＲ．Ｓｕｒｖｉｖａｌａｎｄｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆａｒｔｉｆｉｃｉａｌｌｙｆｅｄｃａｔｆｌｅａｓ，ＣｔｅｎｏｃｅｐｈａｌｉｄｅｓｆｅｌｉｓＢｏｕｃｈｅ（Ｓｉｐｈｏｎａｐｔｅｒａ：Ｐｕｌｉｃｉｄａｅ）．ＪＭｅｄＥｎｔｏｍｏｌ１９８８，２５：１８６−１９０．］に変更を加えて、ノミ繁殖に対するフルララネル曝露の影響を評価した。フィブリン除去したヒツジ血液を、フルララネル含有連続希釈液中で調製して、５０．０から０．０９ｎｇ／ｍＬの濃度とした。これらの試験溶液を２回調製し、各調製液について二連で試験を行って、各濃度について合計４連の結果を得て、フルララネル陰性溶媒対照（最も高濃度のフルララネル試験溶液と等価な溶媒濃度）および未処理対照の試験も行った。

給餌されない成体ノミ（Ｃ．ｆｅｌｉｓ；雄２０匹および雌２０匹）をプラスチックユニットに入れ、それをガーゼの蓋で閉じた。プラスチックユニット内部の格子によってそのユニットを二つのチャンバに分割し、上側チャンバはノミ給餌用、下側チャンバは採卵用とした［８］。試験もしくは対照試験調製液（２ｍＬ）を、人工膜封止ガラス管に入れ、それを次に飼料源としてプラスチックユニットに入れた。給餌ユニットを１０日間インキュベートした（３８℃および６０％ＲＨ）。試験および陰性対照血液調製液を新たに調製し、交換して（第１日、３日、５日および８日）、連続ノミ給餌ができるようにした。第５日および第８日にノミを新鮮なプラスチックユニットに移し入れて、採卵しやすいようにした。集めた卵をノミ栄養培地と混合し、暗所で２２（±３）日間インキュベートして（２８℃および８０％ＲＨ）、ノミが発育できるようにした。記録したパラメータは、ノミ生存率、産卵抑制、卵孵化率、蛹抑制、ノミ発生抑制および繁殖阻害であった。

結果
イン・ビトロ膜給餌曝露後のノミ繁殖に対する影響
５０ｎｇフルララネル／ｍＬの濃度への給餌曝露により、７８．１％（第２日）、２０．０％（第３日）、８．７％（第４日）および１．２％（第５日）のノミ生存率となった。２５ｎｇ／ｍＬでは、ノミ生存率は９０．６％（第２日）、６７．５％（第３日）、３１．９％（第４日）および１１．３％（第５日）であった。ノミ生存率は、相対的に低い濃度で高くなった（表１）。５０および２５ｎｇフルララネル／ｍＬの濃度での給餌４から５日間を生き残ったノミは卵を全く産まなかったことから、これらの濃度によって産卵（１００％）の完全抑制が達成された。１２．５および６．２５ｎｇフルララネル／ｍＬの相対的に低い濃度で、産卵はそれぞれ、９９．６％および８０．６％抑制された（表２）。卵を産むことができるほとんど全てのノミ群で孵化が認められたことから、フルララネルの孵化に影響しなかった（表３）。蛹発育は大きく低下し（１２．５ｎｇフルララネル／ｍＬで８５．１％、６．２５ｎｇフルララネル／ｍＬで８８．７％）、フルララネル曝露が強力な幼虫駆除効果を有することが示された（表４）。同じ効果が、１２．５ｎｇフルララネル／ｍＬで成虫発生の１００％抑制まで続いた（表５）。

表１．殺虫量以下の濃度のフルララネルを含む血液で給餌した後のノミの生存率

表２．殺虫量以下の濃度のフルララネルを含む血液で給餌した後のノミ産卵抑制

表３．殺虫量以下の濃度のフルララネルを含む血液で給餌した親ノミの卵からのノミ幼虫発生

表４．殺虫量以下の濃度のフルララネルを含む血液で給餌した親ノミの卵からの蛹発育抑制

表５．殺虫量以下の濃度のフルララネルを含む血液で給餌した親ノミ後の成体ノミ発生抑制

実施例２：摸擬ヒト環境でのノミ抑制効力を評価するためのイヌでのイン・ビボ試験
試験手順
１２週齢以上の２０頭の健常な雄および雌雑種イヌを個々の檻で飼育した。イヌ１０頭を、フルララネル咀嚼錠（Ｂｒａｖｅｃｔｏ（商標名））投与または処理なしの無作為に割り当てた。各檻には、床敷きとしてカーペットを敷いたイヌ用キャリーバッグの下半分を入れた。処理前に、各イヌに、未給餌のＣ．ｆｅｌｉｓ成虫１００匹を２回つけて（処理前２８日および２１日）、各イヌでの処理前にノミ群を確立した。処理日の４週間前およびその後試験の残りの期間については週１回、ノミ培地をカーペットに加えて、各檻での幼若ノミ段階の活動的発育群の発育を促進した。処理当日、処理群のイヌに、経口投与によって２５ｍｇ／ｋｇに近い用量でフルララネルを投与した。舌を越えた口腔奥に置いて飲み込むようにすることで、咀嚼錠を投与した。陰性対照群のイヌは未処理のままとした。

処理１日前、処理後１日、その後は８４日後に試験が完了するまで７日毎に全てのイヌについて、ノミのカウントを行った。回収された全ての生存ノミを保持し、櫛カウントが完了した後にイヌに再度つけた。各イヌには、第２２日、５０日および７８日に新たに発生した未給餌ノミ成虫５０匹もつけて、処理後の自然侵襲のシミュレーションを行った。

統計解析
個々のイヌが実験単位であり、各ノミカウント時点からのデータを別個に解析した。固定効果としての処理および変量効果としてのブロックを含む混合線形モデルによって、ノミカウントデータを変換［Ｙ＝ｌｏｇ_ｅ（ｘ＋１）］および解析した。ケンワード−ロジャース（Ｋｅｎｗａｒｄ−Ｒｏｇｅｒｓ）調整を用いて、分母自由度を求めた。混合線形モデル内で両側検定を用いて処理群間の比較を行い、Ｐ≦０．０５の場合に統計的有意性を宣言した。ＳＡＳバージョン９．３は、解析に用いた主ソフトウェアであった。

効力は、アボットの式：効力（％）＝１００×（ＭＣ−Ｍ_Ｔ）／ＭＣ［式中、ＭＣは未処理イヌでの総生存ノミ成虫の算術平均または幾何平均数であり、Ｍ_Ｔは処理イヌでの総生存ノミ成虫の算術または幾何平均数である。］により、算術平均および幾何平均を用いて計算した。

結果
投与後のいずれのフルララネル（Ｂｒａｖｅｃｔｏ（商標名））処理イヌにおいても有害事象は全く認められなかった。未処理対照イヌでの平均ノミカウント（算術／幾何）は、処理日前（第−１日）でノミ５２．３／２６．４匹であり、処理後はノミ５．１／１．８匹から５７．１／４０．６匹の範囲であった。フルララネル処理イヌでの平均ノミカウント（算術／幾何）は、処理前でノミ３５．０／１４．１匹、第１日、７日、１４日、２１日、２８日、３５日、４２日、６３日、７７日および８４日でノミ０／０匹、処理後４９日、５６日および７０日でノミ０．１／０．１匹であった。対照と比較して、これらのカウントは、全ての処理後カウント日数で有意差があった（Ｐ≦０．０２１）。計算効力結果は、全ての処理後時点で１００％または１００％に非常に近かった（表６）。

表６．摸擬家庭環境での未処理イヌと比較した処理イヌ（フルラナレル（ｆｌｕｒａｎａｌｅｒ）２５ｍｇ／ｋｇ）でのノミ防除効力

Claims

イソオキサゾリン化合物に曝露された成体ノミを起源とする幼若段階のノミが成体段階に発育することを阻害するための、下記式（Ｉ）のイソオキサゾリン化合物または該化合物の塩もしくは溶媒和物。

［式中、
Ｒ^１＝ハロゲン、ＣＦ_３、ＯＣＦ_３、ＣＮであり、
ｎ＝０から３の整数、好ましくは１、２または３であり、
Ｒ^２＝Ｃ_１−Ｃ_３−ハロアルキル、好ましくはＣＦ_３またはＣＦ_２Ｃｌであり、
Ｔ＝１以上の基Ｙによって置換されていても良い５員もしくは６員環であり、
Ｙ＝メチル、ハロメチル、ハロゲン、ＣＮ、ＮＯ_２、ＮＨ_２−Ｃ＝Ｓであり、または２個の隣接する基Ｙが一緒になって、鎖、特に３または４員鎖を形成しており；
Ｑ＝Ｘ−ＮＲ^３Ｒ^４または５員Ｎ−ヘテロアリール環であり、それは１以上の基によって置換されていても良く；
Ｘ＝ＣＨ_２、ＣＨ（ＣＨ_３）、ＣＨ（ＣＮ）、ＣＯ、ＣＳであり、
Ｒ^３＝水素、メチル、ハロエチル、ハロプロピル、ハロブチル、メトキシメチル，メトキシエチル、ハロメトキシメチル、エトキシメチル、ハロエトキシメチル、プロポキシメチル、エチルアミノカルボニルメチル、エチルアミノカルボニルエチル、ジメトキシエチル、プロピニルアミノカルボニルメチル、Ｎ−フェニル−Ｎ−メチル−アミノ、ハロエチルアミノカルボニルメチル、ハロエチルアミノカルボニルエチル、テトラヒドロフリル、メチルアミノカルボニルメチル、（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−カルボニルメチル、プロピルアミノカルボニルメチル、シクロプロピルアミノカルボニルメチル、プロペニルアミノカルボニルメチル、ハロエチルアミノカルボニルシクロプロピル、

であり；
Ｚ^Ａ＝水素、ハロゲン、シアノ、ハロメチル（ＣＦ_３）であり；
Ｒ^４＝水素、エチル、メトキシメチル、ハロメトキシメチル、エトキシメチル、ハロエトキシメチル、プロポキシメチル、メチルカルボニル、エチルカルボニル、プロピルカルボニル、シクロプロピルカルボニル、メトキシカルボニル、メトキシメチルカルボニル、アミノカルボニル、エチルアミノカルボニルメチル、エチルアミノカルボニルエチル、ジメトキシエチル、プロピニルアミノカルボニルメチル、ハロエチルアミノカルボニルメチル、シアノメチルアミノカルボニルメチル、またはハロエチルアミノカルボニルエチルであり；
または、Ｒ^３およびＲ^４が一緒に、

からなる群から選択される置換基を形成している。］
環境での幼若段階のノミの成体ノミへの発育が、動物への治療量以下の量の前記イソオキサゾリン化合物の全身投与によって阻害される、請求項１に記載のイソオキサゾリン化合物。
動物の再侵襲が、動物への治療量以下の量の前記イソオキサゾリン化合物の全身投与によって阻害される、請求項１に記載のイソオキサゾリン化合物。
そのような化合物がフルララネルである請求項１、２または３に記載のイソオキサゾリン化合物。
動物の血漿が１．５から２５ｎｇ／ｍＬのイソオキサゾリン化合物濃度を含む、請求項１から４のいずれか１項に記載のイソオキサゾリン化合物。
請求項１で定義のイソオキサゾリン化合物を、幼若段階のノミに曝露された動物に投与する、請求項１から５のいずれか１項に記載のイソオキサゾリン化合物。
前記動物がイヌまたはネコである、請求項１から６のいずれか１項に記載のイソオキサゾリン化合物。
前記全身投与が経口投与である、請求項１から７のいずれか１項に記載のイソオキサゾリン化合物。
前記全身投与が局所投与である、請求項１から７のいずれか１項に記載のイソオキサゾリン化合物。
前記全身投与が非経口投与である、請求項１から７のいずれか１項に記載のイソオキサゾリン化合物。
前記投与によってアレルギー性ノミ皮膚炎の徴候が低減される、請求項１から１０のいずれか１項に記載のイソオキサゾリン化合物。
ノミ侵襲された動物に、そのようなノミの子孫の成虫段階への発育を阻害するのに十分な用量の請求項１で定義のイソオキサゾリン化合物を投与することで、ノミによる動物の再侵襲を予防するための請求項１で定義のイソオキサゾリン化合物の使用。
前記イソオキサゾリン化合物がフルララネルである、請求項１１に記載の使用。
前記イソオキサゾリン化合物の用量が１．５から２５ｎｇ／ｍＬの血漿濃度に到達するのに十分である、請求項１１または１２に記載の使用。
ノミ侵襲された動物に、請求項１で定義のイソオキサゾリン化合物に曝露されたノミを起源とする幼若段階のノミの成虫段階への発育を阻害するのに十分な用量のそのようなイソオキサゾリン化合物を投与することで、動物環境での幼若段階のノミの発育を防止するための、請求項１で定義のイソオキサゾリン化合物の使用。