JP2016521539A - マラリアワクチン - Google Patents
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Abstract
Description
第一の局面において、本発明は、自己集合が可能な粒子であって、ポリペプチドと少なくとも1つのマラリア抗原とを含む粒子であって、該ポリペプチドが少なくとも1つの第一付着部位を含み、かかる少なくとも1つの抗原が、少なくとも1つの第二付着部位を含み、該ポリペプチドと該マラリア抗原が、かかる少なくとも1つの第一付着部位および少なくとも1つの第二付着部位を介して結合している、粒子を提供する。
アルファウイルスおよびフラビウイルスの例としては、アウラウイルス、ババンキウイルス(Babanki virus)、バーマフォレストウイルス(Barmah Forest virus) (BFV)、ベバルウイルス、カバソウウイルス(Cabassou virus)、チクングニアウイルス(CHIKV)、東部ウマ脳炎ウイルス(EEEV)、エイラートウイルス(Eilat virus)、エバーグレードウイルス(Everglades virus)、フォートモーガンウイルス(Fort Morgan virus)、ゲタウイルス、ハイランドJウイルス(Highlands J virus)、キジラガチウイルス(Kyzylagach virus)、マヤロウイルス、メトリウイルス(Me Tri virus)、ミデルバーグウイルス(Middelburg virus)、モッソダスペドラスウイルス(Mosso das Pedras virus)、ムカンボウイルス、ヌドゥムウイルス、オニョンニョンウイルス、ピクスナウイルス、リオネグロウイルス、ロスリバーウイルス(RRV)、サケ膵臓病ウイルス(Salmon pancreas disease virus)、セムリキ森林ウイルス、シンドビスウイルス、ミナミゾウアザラシウイルス(Southern elephant seal virus)、トナテウイルス(Tonate virus)、トロカラウイルス(Trocara virus)、ウナウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス(VEEV)、西部ウマ脳炎ウイルス(WEEV)、ワタロアウイルス、ウエストナイルウイルス、デングウイルス、ダニ媒介性脳炎ウイルスおよび黄熱ウイルスが挙げられるが、これらに限定されない。
(1) スポロゾイト; (2) 肝臓ステージ; (3) メロゾイト; (4) 感染RBC; (5) 寄生体毒素; (6) 有性ステージ。
態様の一において、本発明は、チクングニアまたはベネズエラウマ脳炎ウイルス構造ポリペプチドと少なくとも1つのマラリア抗原とを含む、チクングニアウイルス様粒子またはベネズエラウマ脳炎ウイルス様粒子を提供し、ここで、該チクングニアウイルス構造ポリペプチドまたは該ベネズエラウマ脳炎ウイルス構造ポリペプチドは、少なくとも1つの第一付着部位を含み、かかる少なくとも1つのマラリア抗原は、少なくとも1つの第二付着部位を含み、ここで、該チクングニアまたはベネズエラウマ脳炎ウイルス構造ポリペプチドおよびかかる少なくとも1つの抗原は、かかる少なくとも1つの第一付着部位および少なくとも1つの第二付着部位を介して結合している。
チクングニアウイルス(CHIKV)またはベネズエラウマ脳炎ウイルス (VEEV)の1つ以上のカプシド;
チクングニアウイルス(CHIKV)またはベネズエラウマ脳炎ウイルス (VEEV)の1つ以上のE1; および
チクングニアウイルス(CHIKV)またはベネズエラウマ脳炎ウイルス (VEEV)の1つ以上のE2
を含むか、またはこれらかなるウイルス様粒子を提供し、ここで、マラリア抗原は、チクングニアウイルス(CHIKV)またはベネズエラウマ脳炎ウイルス (VEEV)のE2に挿入されている。例えば、本発明は:
チクングニアウイルス(CHIKV)またはベネズエラウマ脳炎ウイルス (VEEV)の240のカプシド;
チクングニアウイルス(CHIKV)またはベネズエラウマ脳炎ウイルス (VEEV)の240のE1; および
チクングニアウイルス(CHIKV)またはベネズエラウマ脳炎ウイルス (VEEV)の240のE2
を含むか、またはこれらからなるウイルス様粒子を提供し、ここで、
マラリア抗原は、チクングニアウイルス(CHIKV)またはベネズエラウマ脳炎ウイルス (VEEV)のそれぞれのE2に挿入される。
該抗原が挿入されるE2は、配列番号53で表されるアミノ酸配列からなっていてよく; 該E1は、配列番号54で表されるアミノ酸配列でなっていてよく; 該カプシドは、配列番号55で表されるアミノ酸配列でなっていてよい。
また、該修飾カプシド、E1またはE2は、配列番号52または配列番号55で表されるアミノ酸配列からなるカプシド; 配列番号51または配列番号54で表されるアミノ酸配列からなるE1;および/または配列番号50または配列番号53で表されるアミノ酸配列からなるE2に基づいて、該アミノ酸の最大10%が欠損、置換および/または付加されている、変異体であってもよい。
第二の局面において本発明は、本発明の第一の局面にて提供する粒子を発現させるように設計された核酸分子を提供する。
第三の局面において、本発明は、本発明の第一の局面で提供する粒子および/または本発明の第二の局面で提供する核酸分子を含む組成物またはワクチンを提供する。
(a)本発明の第一の局面で提供する粒子を含むワクチン組成物;および
(b)本発明の第一の局面で提供する粒子を含む他のワクチン組成物
を含むキットを提供し、ここで、(a)に含まれる粒子は、(b)に含まれる粒子とは異なるウイルス様粒子である。この態様において、(a)に含まれる粒子は、チクングニアウイルス様粒子であってよく、(b) に含まれる粒子がベネズエラウマ脳炎ウイルスウイルス様粒子であってよい。
(a) 本発明の第一の局面で提供する粒子を含むワクチン組成物; および
(b) 本発明の第一の局面で提供する粒子を含む他のワクチン組成物、
(c) 本発明の第一の局面で提供する粒子をそれぞれが含む、1つ以上のワクチン組成物
を含むキットを提供し、ここで、(a)は免疫化を刺激するのに用いられ、(b)および(c)は免疫化の追加に使用され; (a)に含まれる粒子は、 (b)に含まれる粒子とは異なるウイルス様粒子であり; (c)に含まれる粒子は、(a) および(b)に含まれる粒子とは異なるか、または(a)または(b) に含まれる粒子と同じである。
1つ以上 (例えば240)のチクングニアウイルス(CHIKV)またはベネズエラウマ脳炎ウイルス (VEEV)のカプシド;
1つ以上 (例えば240)のチクングニアウイルス(CHIKV)またはベネズエラウマ脳炎ウイルス (VEEV)のE1; および
1つ以上 (例えば240)のチクングニアウイルス(CHIKV)またはベネズエラウマ脳炎ウイルス (VEEV)のE2
を含むか、またはこれらからなるチクングニアウイルスまたはベネズエラウマ脳炎ウイルス様粒子であって、マラリア抗原が、チクングニアウイルス(CHIKV)またはベネズエラウマ脳炎ウイルス (VEEV)のE2に挿入されているチクングニアウイルスまたはベネズエラウマ脳炎ウイルス様粒子は、本発明の第三の局面で提供する組成物またはワクチンの製造に使用し得る。該抗原が挿入されるE2は、配列番号50で表されるアミノ酸配列からなっていてよく; E1は配列番号51で表されるアミノ酸配列でなっていてよく; 該カプシドは、配列番号52で表されるアミノ酸配列でなっていてよいか; または
該抗原が挿入されるE2は、配列番号53で表されるアミノ酸配列でなっていてよく; 該E1は、配列番号54で表されるアミノ酸配列でなっていてよく;該カプシドは、配列番号55で表されるアミノ酸配列でなっていてよい。
第四の局面において、本発明は、本発明の第一の局面で提供する粒子および/または本発明の第二の局面で提供する核酸分子を哺乳動物に接触させることを含む、抗体の作製方法を提供する。
マラリアCSP1タンパク質の以下のポリヌクレオチドを用いる。N末端リンカーはSGGであり、C末端リンカーはGGSである。
VLP74 (NPNAアミノ酸配列の6リピート)
マラリアCSP1タンパク質の、実施例1で用いたものと同じポリヌクレオチド(VLP74およびVLP78)を用いる。N末端リンカーはSGGであり、C末端リンカーはGGSである。
該サルを0週目にX25-CHI (80μg) で、3週目にX6-VEE (80μg)で、筋肉内注射により、アジュバント(Sigma Adjuvant System, Sigma, S6322)を用いて、または用いずに免疫化した。X25-CHI は、CHIKV VLP粒子(VLP78_15)上の25回のマラリアCSPリピートアミノ酸NPNAを指す。X6-VEEは、VEEV VLP粒子(VLP74_25)上の6回のマラリアCSPリピートアミノ酸NPNAを指す。最初の免疫化後、2週目および5週目に採血を行う。
3回洗浄した後、ペルオキシダーゼ標識ヤギ抗ヒトIgGまたは抗マウスIgGを、1:4000 の希釈率で添加し、室温で1時間インキュベーションした。3回洗浄した後、ペルオキシダーゼ基質を添加して発色させて10分間インキュベーションし、2N H2SO4を添加して発色を止めた。データは、Gen5 (BioTek)およびGraphPad Prism6 (GraphPad software Inc)を用いて解析した。
RTS,S (GlaxoSmithKline) で免疫化したサル由来の血清中の抗Pf CSP抗体力価と比較して、X25-CHI (80μg)およびX6-VEE (80μg) を用いて、アジュバントの非存在下で免疫化したサル由来の血清中の抗Pf CSPの抗体力価は、RTS,S (GlaxoSmithKline)がアジュバントを含んでいてもさらに高いと考えられる。
マウスに対して、0週目にVLP78_15 10μg、3週目にVLP74_25 10μg、6週目にVLP78_15 10μgを用いて、アジュバント (Sigma Adjuvant System, Sigma, S6322)を用いて、または用いずに、筋肉内注射により免疫化を行った。
マウスのマラリアCSP (プラスモディウム・ヨエリCSP)に見られるQGPGAPを抗原として用いた。6x QGPGAP をCHIKV VLPに挿入した。該マウスをCHIKV VLPを用いて、アジュバントであるRibiを用いてまたは用いずに、0週目および8週目に、2回(マウス1匹あたりVLP 20μg)、筋肉内注射により免疫化した。
6x QGPGAPをCHIKV VLPに挿入した。該マウス (n=5)を、アジュバントであるRibiを用いてまたは用いずに、筋肉内注射により、0週目および8週目にCHIKV VLPを用いて2回免疫化した(マウス1匹あたり20μg VLP) (図10参照)。マウスマラリア: プラスモディウム・ヨエリによる負荷(i.v.)を17週目に行った (図10参照)。
6xまたは25x NPNAを含むチクングニアウイルス(CHIKV) 様粒子を実施例1にしたがって製造し、6x NPNAを含むベネズエラウマ脳炎ウイルス (VEEV)様粒子を実施例2にしたがって製造した。ワクチン組成物を製造するために、製造した粒子それぞれ80μgをリン酸スクロース溶液(pH 7.2、エンドトキシン不含有) (Teknova, SP buffer) 1mlと混合した。
Claims (44)
- ウイルス構造ポリペプチドおよび少なくとも1つのマラリア抗原を含む粒子であって、該ウイルス構造ポリペプチドが、少なくとも1つの第一付着部位を含み、少なくとも1つのマラリア抗原が少なくとも1つの第二付着部位を含み、該ウイルス構造ポリペプチドおよび該マラリア抗原が、少なくとも1つの第一付着部位および少なくとも1つの第二付着部位を介して結合している、ウイルス様粒子である、粒子。
- 該ウイルス様粒子が、アルファウイルスまたはフラビウイルス由来である、請求項1記載の粒子。
- 該アルファウイルスまたはフラビウイルスが、アウラウイルス、ババンキウイルス(Babanki virus)、バーマフォレストウイルス(Barmah Forest virus) (BFV)、ベバルウイルス、カバソウウイルス(Cabassou virus)、チクングニアウイルス(CHIKV)、東部ウマ脳炎ウイルス(EEEV)、エイラートウイルス(Eilat virus)、エバーグレードウイルス(Everglades virus)、フォートモーガンウイルス(Fort Morgan virus)、ゲタウイルス、ハイランドJウイルス(Highlands J virus)、キジラガチウイルス(Kyzylagach virus)、マヤロウイルス、メトリウイルス(Me Tri virus)、ミデルバーグウイルス(Middelburg virus)、モッソダスペドラスウイルス(Mosso das Pedras virus)、ムカンボウイルス、ヌドゥムウイルス、オニョンニョンウイルス、ピクスナウイルス、リオネグロウイルス、ロスリバーウイルス(RRV)、サケ膵臓病ウイルス(Salmon pancreas disease virus)、セムリキ森林ウイルス、シンドビスウイルス、ミナミゾウアザラシウイルス(Southern elephant seal virus)、トナテウイルス(Tonate virus)、トロカラウイルス(Trocara virus)、ウナウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス(VEEV)、西部ウマ脳炎ウイルス(WEEV)、ワタロアウイルス、ウエストナイルウイルス、デングウイルス、ダニ媒介性脳炎ウイルスおよび黄熱ウイルスからなる群から選択される、請求項2記載の粒子。
- 該アルファウイルスがチクングニアウイルス(CHIKV)またはベネズエラウマ脳炎ウイルス(VEEV)である、請求項3記載の粒子。
- 該ウイルス構造ポリペプチドが、エンベロープタンパク質を含む、請求項1〜4のいずれかに記載の粒子。
- 該ウイルス構造ポリペプチドが、カプシドおよび/またはエンベロープタンパク質E1およびE2を含む、請求項1〜5のいずれか記載の粒子。
- 少なくとも1つのマラリア抗原が、エンベロープタンパク質のE2に挿入されている、請求項6記載の粒子。
- 該ウイルス構造ポリペプチドが、チクングニアウイルス(CHIKV)またはベネズエラウマ脳炎ウイルス(VEEV)由来のポリペプチドである、請求項1〜7のいずれか記載の粒子。
- 抗原が挿入されるエンベロープタンパク質E2、エンベロープタンパク質E1およびカプシドを含む、請求項1〜8のいずれか記載の粒子。
- 抗原が挿入される1つ以上のエンベロープタンパク質E2、1つ以上のエンベロープタンパク質E1および1つ以上のカプシドからなるチクングニアウイルス様粒子であって、
抗原が挿入される該エンベロープタンパク質E2が配列番号50で表されるアミノ酸配列からなり; 該エンベロープタンパク質E1が配列番号51で表されるアミノ酸配列からなり; 該カプシドが、配列番号52で表されるアミノ酸配列からなる、請求項1〜8のいずれか記載の粒子。 - 抗原が挿入される1つ以上のエンベロープタンパク質E2、1つ以上のエンベロープタンパク質E1および1つ以上のカプシドからなるベネズエラウマ脳炎ウイルス様粒子であって、
抗原が挿入される該エンベロープタンパク質E2が、配列番号53で表されるアミノ酸配列からなり;該エンベロープタンパク質E1が配列番号54で表されるアミノ酸配列からなり;該カプシドが配列番号55で表されるアミノ酸配列からなる、
請求項1〜8のいずれか記載の粒子。 - 少なくとも1つのマラリア抗原および該ウイルス構造ポリペプチドが融合タンパク質として発現する、請求項1〜11のいずれかに記載の粒子。
- 該ウイルス構造ポリペプチドおよび少なくとも1つのマラリア抗原が直接融合している、請求項12記載の粒子。
- 少なくとも1つのマラリア抗原が、該ウイルス構造ポリペプチドと融合しており、1つまたは2つのリンカーが該抗原および該ポリペプチドのN末端残基および/または該抗原および該ウイルス構造ポリペプチドのC末端残基の間に介在する、請求項13記載の粒子。
- 少なくとも1つのマラリア抗原が、配列番号1または2の第531番および第532番の残基の間、または配列番号3の第518番および第519番の残基の間に挿入される、請求項9〜14のいずれか記載の粒子。
- 配列番号28、31、34、37、39、41または43で表されるアミノ酸配列に相当する核酸分子を哺乳類細胞に形質導入することによって、該融合タンパク質を含む粒子が発現する、請求項9〜15のいずれかに記載の粒子。
- 該融合タンパク質を含む該粒子が、配列番号28、31、34、37、39、41または43で表されるアミノ酸配列と90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列に相当する核酸分子を哺乳類細胞に形質導入することにより発現する、請求項9〜15のいずれか記載の粒子。
- 少なくとも1つのマラリア抗原が、化学架橋により該ウイルス構造ポリペプチドに結合している、請求項1〜8のいずれか記載の粒子。
- 少なくとも1つのマラリア抗原が、スポロゾイト周囲タンパク質由来の断片である、請求項1〜18のいずれか記載の粒子。
- 少なくとも1つのマラリア抗原が、(NPNA)nを含む抗原であり、式中、nが4〜30である、および/または (EYLNKIQSLSTEWSPCSVT)yを含む抗原であり、式中yが1〜6である、請求項1〜19のいずれか記載の粒子。
- 請求項1〜20のいずれか記載の粒子を発現するための核酸配列を含む単離された核酸分子。
- 配列番号26〜27、29〜30、32〜33、35〜36、38、40または42で表されるヌクレオチド配列からなる単離された核酸分子。
- 配列番号26〜27、29〜30、32〜33、35〜36、38、40または42で表されるヌクレオチド配列と90%以上の配列同一性を有するヌクレオチド配列からなる、単離された核酸分子。
- 請求項21〜23のいずれか記載の核酸分子を含むベクターであって、該核酸分子に操作可能に結合している発現制御配列を含んでいてよい、ベクター。
- 請求項1〜20のいずれか記載の粒子および/または請求項21〜24のいずれか記載の核酸分子を含む、組成物。
- (a) 請求項1〜20のいずれか記載の粒子および/または請求項21〜24のいずれか記載の核酸分子; および
(b) 薬学的に許容される担体
を含む、医薬組成物。 - 請求項1〜20のいずれか記載の粒子を含む、ワクチン組成物。
- 請求項21〜24のいずれか記載の核酸分子を含む、DNAワクチン組成物。
- 抗体の作製方法であって、請求項1〜20のいずれか記載の粒子および/または請求項21〜24のいずれか記載の核酸分子を哺乳動物に接触させることを含む、方法。
- 該抗体がモノクローナル抗体である、請求項29記載の方法。
- 免疫調節の方法であって、請求項25〜28のいずれか記載の組成物を免疫学的に有効な量で哺乳動物に投与することを含む、方法。
- 哺乳動物において、マラリア抗原に対する免疫応答を誘発および/または増強する方法であって、該哺乳動物に請求項25〜28のいずれか記載の組成物を有効量投与することを含む、方法。
- マラリアの処置方法であって、哺乳動物に請求項25〜28のいずれか記載の組成物を有効量投与することを含む、方法。
- マラリア発症性の病原体に対する受動免疫の方法であって、請求項29または30記載の方法により得られる抗体を哺乳動物に投与することを含む、方法。
- マクロファージ上に抗原を提示する方法であって、請求項1〜20のいずれか記載の粒子および/または請求項21〜24のいずれか記載の核酸分子を哺乳動物に接触させることを含む、方法。
- 請求項9〜20のいずれかに記載の粒子の製造方法であって、該粒子の発現用に設計されたベクターを製造すること; 該粒子を発現するように該ベクターで形質導入した細胞を培養すること; および該粒子を回収することを含む、方法。
- 請求項29〜36のいずれかに記載の方法であって、少なくとも1つのマラリア抗原が、少なくともスポロゾイト周囲ポリペプチドの断片を含む、方法。
- 請求項31〜33のいずれかに記載の方法で用いるためのワクチンであって、少なくとも1つの第一マラリア抗原または少なくとも1つの第一マラリア抗原をコードする少なくとも1つのポリヌクレオチドを含む、刺激組成物; および、少なくとも1つの第二マラリア抗原を含む少なくとも1つのポリペプチドまたは少なくとも1つの第二マラリア抗原をコードする少なくとも1つのポリヌクレオチドを含む、追加免疫組成物を別の成分として含む、ワクチン。
- 該ポリヌクレオチドが、スポロゾイト周囲タンパク質を実質的に全てコードする、請求項38記載のワクチン。
- マラリアの予防または処置に用いるための、請求項27記載のワクチン組成物であって、マラリア由来の抗原を複数含む、ワクチン組成物。
- (a) 請求項1〜20のいずれか記載の粒子を含むワクチン組成物; および
(b) 請求項1〜20のいずれか記載の粒子を含む他のワクチン組成物
を含むキットであって、(a)に含まれる粒子が、(b)に含まれる粒子とは異なるウイルス様粒子である、キット。 - (a) に含まれる粒子が、チクングニアウイルス様粒子であり、(b)に含まれる粒子がベネズエラウマ脳炎ウイルス様粒子であるか、または、(a) に含まれる粒子がベネズエラウマ脳炎ウイルス様粒子であり、 (b)に含まれる粒子がチクングニアウイルス様粒子である、請求項41記載のキット。
- (c)それぞれが請求項1〜20のいずれかに記載の粒子を含む、1つ以上のワクチン組成物をさらに含む、請求項41または42記載のキットであって、(a) が免疫化の刺激に用いられ、(b)および(c)が追加免疫化に用いられ、かつ、(c) に含まれる粒子が、(a)および(b)に含まれる粒子と異なるか、または(a)または(b)に含まれる粒子と同じである、キット。
- それぞれのワクチン組成物が、同時、別または連続的に投与される、請求項41〜43のいずれかに記載のキット。
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