JP2016508714A - 改善されたマイクロマニピュレーション及び保存のための方法、システム並びに装置 - Google Patents
改善されたマイクロマニピュレーション及び保存のための方法、システム並びに装置 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2016508714A JP2016508714A JP2015551089A JP2015551089A JP2016508714A JP 2016508714 A JP2016508714 A JP 2016508714A JP 2015551089 A JP2015551089 A JP 2015551089A JP 2015551089 A JP2015551089 A JP 2015551089A JP 2016508714 A JP2016508714 A JP 2016508714A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- vitrification
- embryo
- solution
- biological material
- pod
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/02—Preservation of living parts
- A01N1/0236—Mechanical aspects
- A01N1/0242—Apparatuses, i.e. devices used in the process of preservation of living parts, such as pumps, refrigeration devices or any other devices featuring moving parts and/or temperature controlling components
- A01N1/0252—Temperature controlling refrigerating apparatus, i.e. devices used to actively control the temperature of a designated internal volume, e.g. refrigerators, freeze-drying apparatus or liquid nitrogen baths
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/02—Preservation of living parts
- A01N1/0236—Mechanical aspects
- A01N1/0242—Apparatuses, i.e. devices used in the process of preservation of living parts, such as pumps, refrigeration devices or any other devices featuring moving parts and/or temperature controlling components
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/02—Preservation of living parts
- A01N1/0236—Mechanical aspects
- A01N1/0242—Apparatuses, i.e. devices used in the process of preservation of living parts, such as pumps, refrigeration devices or any other devices featuring moving parts and/or temperature controlling components
- A01N1/0252—Temperature controlling refrigerating apparatus, i.e. devices used to actively control the temperature of a designated internal volume, e.g. refrigerators, freeze-drying apparatus or liquid nitrogen baths
- A01N1/0257—Stationary or portable vessels generating cryogenic temperatures
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/02—Preservation of living parts
- A01N1/0236—Mechanical aspects
- A01N1/0263—Non-refrigerated containers specially adapted for transporting or storing living parts whilst preserving, e.g. cool boxes, blood bags or "straws" for cryopreservation
- A01N1/0268—Carriers for immersion in cryogenic fluid, both for slow-freezing and vitrification, e.g. open or closed "straws" for embryos, oocytes or semen
-
- G—PHYSICS
- G05—CONTROLLING; REGULATING
- G05B—CONTROL OR REGULATING SYSTEMS IN GENERAL; FUNCTIONAL ELEMENTS OF SUCH SYSTEMS; MONITORING OR TESTING ARRANGEMENTS FOR SUCH SYSTEMS OR ELEMENTS
- G05B15/00—Systems controlled by a computer
- G05B15/02—Systems controlled by a computer electric
-
- G—PHYSICS
- G05—CONTROLLING; REGULATING
- G05D—SYSTEMS FOR CONTROLLING OR REGULATING NON-ELECTRIC VARIABLES
- G05D7/00—Control of flow
- G05D7/06—Control of flow characterised by the use of electric means
- G05D7/0617—Control of flow characterised by the use of electric means specially adapted for fluid materials
Landscapes
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Thermal Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Mechanical Engineering (AREA)
- Zoology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Automation & Control Theory (AREA)
- Hematology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
本出願は、Genea株式会社により2013年1月7日にオーストラリア特許庁に出願されたオーストラリア仮特許出願第2013900039号、発明の名称「改善されたマイクロマニピュレーション及び保存のための方法、システム並びに装置」、に基づく優先権を主張するものであり、オーストラリア仮特許出願第2013900039号の全内容を参照により本出願に援用する。
[技術分野]
本発明は、生体物質のマニピュレーション(manipulation)及びハンドリング(handling)の分野に関する。特に、この発明は、生体物質のマイクロマニピュレーション(micromanipulation)のための装置及び方法に関する。例えば、人間及び人類以外の卵母細胞、胚、胚盤胞、配偶子及び幹細胞を含む生体物質の凍結保存で使用される、装置及び方法論に関する。生体物質の範囲を有する広範囲のマイクロマニピュレーションの状況及び技術において発明が開発されており、適用されている。同時に、体外受精(IVF)のプロシージャ等中に適用されるようなガラス化による人間の卵母細胞、胚及び幹細胞の凍結保存での使用において特定の用途が見受けられる。しかし、本発明はその使用のみに限定されない。
[背景技術]
本明細書全体に亘って、用語、単数形の「発明者」の使用は、本発明の一人(単数)の発明者又は二人以上(複数)の発明者のことを指すように解釈される。
「ガラス化」とは、結晶のない固体状態へ、液体を冷却することである。
「凍結保存」とは、細胞が冷却により氷点下温度に、典型的には−196℃に保存されるプロセスである。
−使用されているガラス化デバイスのタイプ。現在、市場では15以上のタイプがある。
−使用されているメディア。現在、10以上のメディアサプライヤが存在する。
−胎生学者及び経験。
−プロトコル(ステップ時間、温度、冷却速度、加温速度、メディア体積)。
−環境(温度、湿度)。
従って、環境を制御すると共に生体物質の反復可能な凍結保存を確実にするために、自動システムの提供によりバラツキをなくすことは好ましい。
Cryotip(登録商標)プロトコルの例
Cryotip(登録商標)システムの注目すべき例では、実際、低いレベルから、中レベル、高レベルに至るまで多くの危険なプロセスステップがある。例えば、ガラス化のステージでは、平衡メディア、次にガラス化メディアを導入し、次に、ロード及びガラス化のステップを含み、これは一般には見積りで約16分の時間を要する。このステージのための開始プロトコルとして、胚は、タイマを開始した状態で、培養皿から平衡溶液(ES)投げ入れ口まで、通常、一度に最大2個移される。その後、平衡メディアのために、胚は約6〜10分間、乱されず培養され、培養完了2分前、ガラス化溶液(VS−4)の4つの20μLの液滴が一列に分配される。胚をESからVS1まで最小限の体積の媒体と共に5秒間移し、次にVS2に5秒間移し、次にVS3に10秒間移すことにより、平衡時間終了までに、胚はガラス化溶液(VS)に移され、ロードされ、シールされ、そして90秒間沈められる。Cryotip(登録商標)コネクタを使用してluer注射器のようなCryotip(登録商標)デバイスの広い端を無菌的に吸入ツールへ取り付けることが要求される、実際の投入及びガラス化を伴ってハイリスクのステップがその後、生じる。試料がCryotip(登録商標)にロードする準備ができている場合、金属カバースリーブは、細いティップ端を露出させるためにストロに沿って無菌的に注意深く滑らせられる。卵母細胞又は胚を第3マーカーより上に満たさないように注意しながら媒体と試料の持ち上げを制御するために注射器上のプランジャを使用しながら、試料はその後、Cryotip(登録商標)にその第2及び第3のマーク間に吸引により静かにロードされる。その後、細いティップは第1マークの下でヒートシールされ、金属カバースリーブは細いティップ上にそれを保護するためにスライドされる。その後、コネクタ及び注射器は取り除かれ、Cryotip(登録商標)の広い端は第4マークの上でヒートシールされる。最後に、密封されたCryotip(登録商標)は、金属カバーサイドを下向きにしてLN2貯槽内に沈められる。
[発明の概要]
ここに記載された実施形態の目的は、関連技術又は従来技術システムの上述した短所の少なくとも1つを克服又は緩和すること、或いは従来技術システムに代わる有用なものを少なくとも提供することである。
前記壁の厚みは約0.08mm〜0.12mmであるのが好ましい。この範囲では、速い伝熱が促進されると共に、厚みとしてはガス及び液体の移動を防止するのに十分であることが発明者により明らかになっている。
本発明及びその実施形態の別の態様において、生体物質のマイクロマニピュレーションのための装置であって、前記装置は前記生体物質を収容すると共に液体処理溶液の通過を許容するチャンネルを含み、前記装置は2部構造を含み、前記装置の2部分は、ガラス化プロセスステップに先立って、前記2つの部分の中間において2次材料でヒートシールされるように構成されている、装置が提供される。
本発明及びその実施形態の更に別の態様において、生体物質のマイクロマニピュレーションのための装置であって、前記装置は前記生体物質を収容すると共に液体処理溶液の通過を許容するチャンネルを含み、前記装置は2部構造を含み、前記装置の2部分は、ガラス化プロセスステップに先立って前記2つの部分の中間において2次材料でヒートシールされるように構成されている、装置が提供される。
前記装置は前記生体物質を収容するためのポッド又は前記生体物質を移すためのピペットの1つを含んでいてもよい。
前記流体注入及び吸入体積は、約0.1μlから約15μlの範囲、精密には約1μl±0.2μlから約10μl±1μlの範囲に制御されてもよい。
実施形態の他の更なる態様において、生体物質をマイクロマニピュレートするためのシステムであって、前記システムは、固定されたアセンブリに各単軸ロボットアームが取り付けられた、独立した前記単軸ロボットアームの内の1つ又は組み合わせを含み、ロボットアームの組み合わせは、少なくとも2つの自由度における移動のための広範囲座標システムを提供し、前記システムは、次のプロセスステップ、即ち、胚ロード、平衡、ヒートシール、ガラス化の内の2つ又は組合せを通して、ここに記載されているように装置をハンドルすることに適合している、システムが提供される。
緩衝液中の装置に少なくとも1つの胚をロードする工程と、
所定流量で前記緩衝溶液を平衡溶液で置換する工程と、
前記ロードした胚を所定平衡期間、前記平衡溶液内で平衡に保つ工程と、
所定流量で前記平衡溶液をガラス化溶液で置換する工程と、
前記装置をヒートシールする工程と、
液体冷却槽内に前記装置を沈める工程と、を含む方法が提供される。
前記ステップは、固定されたアセンブリに各単軸ロボットアームが取り付けられた、独立した前記単軸ロボットアームの内の1つ又は組み合わせにより実行され、ロボットアームの組み合わせは、少なくとも2つの自由度における移動のための広範囲座標システムを提供する、のが好ましい。
要するに、本発明の実施形態は、ガラス化プロセスが自動化されていないままであるといる認識に由来する。現在の方法は、手動でピペットを使用してメディアを変えることにより、卵母細胞/胚の多重移送を行う胎生学者を必要とする。胚がプロセスを経ると、その後すぐに、この胚は、熱質量を低減させるためにプラスチックデバイスに移動させられ、早い冷却と保存とが可能となる。ガラス化プロセスは時間がかかり、退屈で、手間がかかる。より重大なのは、アウトプットの品質は技術者の技術に大きく依存するということである。本発明の実施形態は、胚のプロセシングと同一デバイス内への凍結/保存とを一体化することにより、ガラス化が自動化されるのを許容する。1つの実施形態では、ピペット移送無しで胚の培養をしながらメディアが交換されるのを許容するデバイスが開発されている。このデバイスは、熱質量が殆どないので、このデバイスは、それ自体、凍結/保存デバイスとして使用するのに役立つ。加えて、本発明の実施形態は、独自の消耗品及び機器ワークステーションを提供する。
−好ましい実施形態の改良されたピペット及び制御機構は、許容誤差をより小さくさせる、ガラス化プロセスの大きな制御を提供する。
−胚を破損しないようにヒートシールすること。
−占有されたカセット上に作用するのみのための光学検知に基づいてヒートシールチューブが選択的に作動される。
−機械の全体的構成が溶液交換機構からのシーリング機構の分離を許容する。
−強い剥離可能シールを与えるためにガラス化保存場所に対して封止する丈夫なラミネート材を使用すること。この点において、他のガラス化保存デバイスは2次シールを使用しない。それらは通常互いに封止され、従って、開封するのに切断する必要がある。ラミネートはポリプロピレン素材に封止されることができる。
−シールがLN2の内部への侵入を防ぐ。
−シールの完全な状態がLN2温度内で維持される。
−好ましい実施形態の機器は、毎回一貫した胚プロセシングを確実にするために、制御された環境を提供することができる。
−同時に多数のガラス化デバイスがプロセシングすること。
−一回の動作における一対多数のデバイス。
−ユーザは機器を起動させ、プロトコルを選択する。
−バケットにLN2を充填し、機器にロードする。
−適切な列を成したメディアカートリッジと消費可能カートリッジとを操作トレーにロードする。
−(理想的には)予期されたプロトコル温度に操作トレーを事前加温する。
−胚と2〜8μlの適切な緩衝溶液、例えば、Cryobase(登録商標)とを適切なポッド内に入れ、(もしまだ載置されていないならば)カセット内に載置する。
−機器内に操作トレーをロードする。
−機器中にカセットをロードする。
−スタートを押す。
−機器が警告アラームを発する時は機器を注意して見る。
−LN2バケットから蓋を除去したり開けたりする。
−「カセット取り外し」アラームが発する時は速やかにアクセスドアを開けカセットを除去する。
−速やかにLN2内にカセットを浸す。
−長期保存場所へカセットを移すために、LN2バケットはその後、機器から除去される。
画像検出
−検出のために起動する(ドアセンサ又はユーザ画面入力)。
−消耗し得るトレーの画像を取得する。
−成分を検出するために画像解析/検出アルゴリズムを実行する。
−許容された状態で成分がロードされることをチェックする。
−問題がなければ継続し、問題があれば修正をするためにユーザにフィードバックする。
光学的切り換え検出
−検出のために起動する(ドアセンサ又はユーザ画面入力)。
−ポッド、メディアカートリッジ、ティップ及び蓋の光学チェックをする。
−許容された状態で成分がロードされることをチェックする。
−問題がなければ継続し、問題があれば修正をするためにユーザにフィードバックする。
−ポッド、カートリッジ、及び部品(瓶、ティップ、蓋)を検出するための適切な分解能(及び適用可能な場合、色)。
−上記のリストされた部品の存在の検出。
−上記のリストされた部品の正確な方向の検出。
−「合理的な」検出アルゴリズムが典型的な実験室照明で機能することを許容する照明条件制御(照明条件制御は極端な状態において検出アルゴリズムがロバストであることを要求しないかもしれない)。
−LED輝度調節。
−外部照明の制御された影響(例、着色カバー)。
−ポッド、消耗し得るカートリッジ、及びメディアカートリッジを確保するための機器チェックが正確に位置する。
−流体システムに新しい無菌の使い捨てティップを嵌合させる。
−形成されたディボット内に胚を保護している約0.1μLの必要な体積だけを所望の位置から残しながら、緩衝溶液をポッドから吸引する。
−排水された溶液を廃棄容器内に供給する。
−平衡溶液3(ES3)を吸引する。
−秒速0.1〜3.0ulのディスペンス速度でゆっくり、約5μLの平衡溶液3を所望の位置でポッド内に供給する。
−必要なプロトコル時間(4〜20分)待機する。
−デボット内に胚を保護している約0.1μLだけを所望の位置から残しながら、平衡溶液3をポッドからゆっくり排水する。
−排水された溶液を廃棄容器内に、又は所望の廃棄位置に供給する。
−ガラス化溶液4(VS4)を収集する。
−所望の位置でポッド内に約1μLのガラス化溶液4を供給する。
−必要なプロトコル時間(30〜120分)待機する。
−システムからティップを押し出す。
−蓋をピックアップしてポッド上に置く。
−ポッド上に蓋をヒートシールする。
−手動又は自動でカセットを取り外し、LN2内に置く。
−凍結保存タンク内にカセットを置く。
機器は以下のように動作する。
−ポッドに入る溶液の無菌を維持する。
−同一過程又は後続過程での胚同士間のいかなる相互汚染をも防止する。
−約2ul〜8ul(約10μLまでの)緩衝溶液、及びVS3を再度、ポッドから排水する。
−約5μL±15%ES3を供給する。
−約1μL±20%VS3を供給する。毎秒0.01ul〜2ulで吸引及び供給速度が制御される。
−約19〜37度の温度で処理温度が所定温度に制御される。
−ポッド毎に新しい使い捨て無菌ティップを使用する。
−流体工学がポッドから使い捨てティップまでを連結し、ポッドに対する使い捨てティップは考慮すべき事項である。このインタフェースは信頼し得るものであるべきであり、ティップのプッシュオン高さにおける差及びティップの振れ公差(最大約1.016mm)を考慮すべきである。
−流体工学メカニズムは、電子制御システムに連結するように構成されている。
−流体ディスペンサはティップ位置決めシステムに取り付けるように構成されている。
1つの実施形態において、自動システムは、ピペット軸による垂直方向上向きの動きがティップを下方の容器内に解放するようにティップ上のピペットに係合する湾曲したステンレススチールプロフィールを使用する。この形式の除去は信頼性がある。また、本発明の実施形態におけるティップ除去の使い勝手について、システムが、汚染されたティップや溶液にユーザを容易に接触させないようにユーザフレンドリで安全であることを保証するために、注意深く考慮されるべきである。このことを考慮して、実施形態は以下のことを提供する仕様を有するインタフェースを備える。
−過程毎のピペット毎に1つのティップ。
−ティップは1つのティップ当たり約10Nの力で典型的には押される。
−ティップはそれらを押すのに必要とされる少ない力で典型的には除去される。
−容易で安全なティップ廃棄のために閉鎖されたボトム及び側面を有する(但し、トップは開口可能)容易に除去可能な容器内にティップは押し出されるべきである。
−ヒートシーラのヘッドを予熱する。
−ロボットを移動して位置を合わせ、蓋をピックアップする。
−Z−ロボットに蓋をしっかり固定するために吸引をオンにする。
−蓋をポッド位置に移動させる。
−蓋を解放する。
−ロボットを移動して位置を合わせ、必要な時間、蓋を密封する。1実施形態において、蓋上に空気を吹かせるために気流が逆方向にされることがこのステップ後に想定される。
−速やかに、ロボットを邪魔にならない所に移動させる。
−速やかに、カセットをアンロード位置に移動させる。
−ユーザによるアンロードのためアラームを鳴らす。
−シール時間は名目上、約2.5秒±0.5秒である。
−シール温度は、ヒートシール完全性テストに示されるように、名目上、約140℃から155℃である。
−シール面での目標温度を±2.5℃以内に正確に維持すること。
−シール力は名目上、約0.08MPa〜0.2MPaである。
−紛失した蓋を検出し、ヒートシーラが露出したポッドに接触することを防止する。
−シールに妥協することなくポッド/蓋の位置ずれを考慮すること。
−機器は約19℃と約37℃との間の温度範囲でプロトコルを実行するように構成されている。
−機器は約18℃と約27℃との間で動作するように更に構成されている。
−トレーを操作している機器は、当業者により容易に理解されるような、最適な、ソフトウェア制御された温度設定手段を介して達成される意図されたプロトコル温度の約0〜2℃以内で動作する。
−当業者により容易に理解されるような、最適な、ソフトウェア制御された温度設定手段を介して達成される、消耗品内の流体とガラス化溶液の温度差は約0〜2℃以内である。
−ポッド、メディアガラス瓶及びピペットティップは、少なくとも1つのペルチェモジュールの使用を介して制御された温度であってもよい。
−約18℃と約27℃との間の環境において30分間持続するために十分なLN2を保存すべきである。
−器具類は機器シャーシや蓋に嵌る。
−カセット内の全てのポッドが約30分後沈んだままになることが幾何学により確実になる。
−機器不使用時の蓋を含む。
−LN2が入っている容器を移送する際、OH&Sの理由によりハンドルを含む。
消耗品とアクセサリ
好ましい実施形態でのポッドは自動流体交換及び胚ガラス化を可能にする。胚は、典型的には、プロセス中であっても直径が約50μm〜300μmであり、それより小さいときには、胚は崩壊し再度膨張するかもしれない。従って、それらは時々これよりはるかに小さいが。凍結保存による破壊をなくし又は減らす目的で胚のセル内及び周囲の水を抗凍結剤と置換するために特定期間、特定温度で胚が幾つかの溶液に晒されることをガラス化プロセスは必要とする。また、上述したように破壊は典型的には氷結晶により生じる。好ましい実施形態によれば、ポッドデバイスは吸引された流体共に引き上げられるのを防止するが、流体交換が生じるのを許容し、「クローズ」システム内での高い伝熱率を許容する。この場合の「クローズ」システムは、LN2と胚との間の直接接触を防止するガラス化システムを指す。図9は、本発明の好ましい実施形態による典型的なポッドを示している。本質的には、好ましい実施形態のポッドは3つの部品、即ち、指示用台車、蓋、及びチャンネルを備えている。チャンネルは試料胚を収容するためのディボットを備えている。これは、公開されたPCT出願明細書(No.WO2011/146998)に記載されている。好ましい胚設計は次の特徴を有する。
−図18に示すようなディボットにより、明白に識別可能な胚載置領域による容易なロードを許容する。
−オペレータが胚を位置付けるのを支援する目的で、光学上透明であってもよい。
−流体が胚の上で交換されることを可能にするために、湿潤性の表面を有していてもよい。
−LN2汚染を防止するために密封されている。 約7000℃/分より速いガラス化及び加温率を許容する。
−溶液のキャリオーバを最小限にする(例えば、緩衝液と平衡溶液との間、及び平衡溶液とガラス化溶液との間)。
−胚の異なるタイプ及び胚の発達年齢とステージに役に立つ。例えば、人間の胚の役に立たなければならない。しかし、開発の必要の為にマウスの胚にも役に立たなければならない。また、他の哺乳類及び哺乳類以外の種の胚に役立つ、少なくとも可能性(未解決の更なるプロトコル最適化)を有さなければならない。それは、完全に孵化された胚盤胞に完結するまで卵母細胞に役立つかもしれない。
−現在確立されているクローズ手動プロセスにより、回復及び残存率に対処する。
−人間の胚と使用される際、1つの胚と2つまでの卵母細胞が同一の容器内でガラス化されるのを可能にする。
−胚及び卵母細胞の加温化及び再平衡を許容する。
−ポッドはユーザにより容易に開かれるべきである。
−ポッドは、胚が加温化後に容易に見つかることを考慮すべきである。また、これは、ポッドは良好な光学的鮮明さを有するが、胚を見ることを妨害する形状を有さないということを示す。
−ポッドは約 20kGyと約35kGy(名目上25kGy)との間で殺菌することができる。
−ポッドはアルミニウム/ポリプロプラミネート材へのヒートシールを許容する。これは、ポッドの上のシーリング面がポリプロピレン/ポリエチレンであることを要求する。
−破壊的なヒートシールと比較して剥離可能なヒートシール。
−ポッドのキャリアの特徴的な形状設計により、ポッドのロード、アンロードが容易で直観的である。
−ユーザの指を火傷させることなく、LN2内にカセットを素早く浸しアジテイト(激しく動かす)することが容易である。
−格納場所から特定のカセットを取り出そうとする時、キャニスタ又は他の保存形態から他のカセットを取り除くことなくユーザはカセットを識別することができることを欲する。
−約28.5mmのピッチに適合する必要がある。
Claims (39)
- 生体物質のマイクロマニピュレーションのための装置であって、前記装置は貯留層を有する容器を含み、前記容器は前記貯留層の一部に形成されたチャンネルを有し、前記チャンネルは前記生体物質の通過に抵抗するが液体処理溶液の通過を許容するように寸法が与えられた中間絞りを含み、前記チャンネルは約0.01mmから約0.09mmの範囲の厚さの壁を有する、装置。
- 前記チャンネルは、胚を少なくとも僅かな溶液内に保持/位置決めするように構成されている、約0.04μlから0.30μlまでの間の容積を有するディボットを更に含む、請求項1に記載の装置。
- 生体物質及び液体処理溶液に晒されたチャンネルの表面は、流体が上記チャンネルの表面上を濡らし広がるように処理されている表面である、請求項1又は2に記載の装置。
- 前記チャンネル壁はポリマー材料から成る、請求項1、2、又は3に記載の装置。
- 前記装置は2部構造を含む圧縮成形により形成される、請求項4に記載の装置。
- 前記2部構造はポリマー材料の第1成形インジェクションとポリマー材料の第2成形インジェクションとを含む、請求項5に記載の装置。
- 前記第1又は第2成形インジェクションの一方は前記チャンネルの形成を含む、請求項6に記載の装置。
- 前記2部構造は前記装置の2つの別々に形成される部分を含む、請求項5に記載の装置。
- ポリマーはポリプロピレンを含む、請求項4から請求項8のいずれか1項に記載の装置。
- 前記壁厚さは約0.08mm〜0.12mmである、請求項4から請求項9のいずれか1項に記載の装置。
- 表面処理は、プラズマ表面処理、
化学表面処理、
殺菌表面処理、
コロナ表面処理、又は
フレーム表面処理の内の1つ又はその組合せを含む、請求項3から請求項10のいずれか1項に記載の装置。 - 生体物質のマイクロマニピュレーションのための装置であって、前記装置は前記生体物質を収容すると共に液体処理溶液の通過を許容するチャンネルを含み、前記装置は2部構造を含み、前記装置の2部分は、ガラス化プロセスステップに先立って前記2つの部分の中間において2次材料でヒートシールされるように構成されている、装置。
- 前記2部構造はポリマー材料の第1成形インジェクションとポリマー材料の第2成形インジェクションとを含む、請求項12に記載の装置。
- 前記第1又は第2成形インジェクションの一方は前記チャンネルの形成を含む、請求項13に記載の装置。
- 前記2部構造は前記装置の2つの別々に形成される部分を含んでいてもよい、請求項12に記載の装置。
- 前記2次材料は前記2部構造の剥離を許容する、請求項12に記載の装置。
- 前記装置は前記生体物質を収容するためのポッド又は前記生体物質を移すためのピペットの一方を含む、請求項12から請求項16のいずれか1項に記載の装置。
- マグネットの配置との操作的関連により、前記装置は位置決めすること、接続すること、位置付けすること又は熱接触を提供することの内の1つ又は組合せに適合する、請求項1から請求項17のいずれか1項に記載の装置。
- 前記装置が挿入又は移動に適合する既存の構造内に前記磁石は位置付けされる、請求項18に記載の装置。
- 前記既存構造はカセット、カートリッジ又はキャニスタの内の1つ又は組合せを含む、請求項19に記載の装置。
- 前記装置はLN2内に浮かぶことに適した、請求項1から請求項20のいずれか1項に記載の装置。
- 前記2部構造はポリマー材料を含む、請求項12から請求項17のいずれか1項に記載の装置。
- 前記2つの部分はポリプロピレンを含み、前記2次材料はLN2の装置への進入を防止するように構成されたラミネートである、請求項12から請求項22のいずれか1項に記載の装置。
- 温度環境を制御するためのソフトウェア操作可能手段と、
液体処理溶液を前記生体試料につける(加える)ための流体ディスペンス体積及び速度と吸入体積及び速度とを制御するためのソフトウェア操作可能な手段と、
プロトコル時間を制御するためのソフトウェア操作可能手段と
の内の1つ又は組合せを含む、生体試料のガラス化のためのシステム。 - 前記温度は約5℃から約40℃の範囲で制御される、請求項24に記載のシステム。
- 前記温度は約19℃から約37℃の範囲で制御される、請求項25に記載のシステム。
- 前記流体注入及び吸入体積は約0.1μlから約15μlの範囲、精密には約1μl±0.2μlから約10μl±1μlの範囲に制御される、請求項24に記載のシステム。
- 前記流体注入及び吸入速度は約0.01μl/sから約5μl/sの範囲に制御される、請求項24に記載のシステム。
- 生体物質をマイクロマニピュレートするためのシステムであって、前記システムは、固定されたアセンブリに各単軸ロボットアームが取り付けられた、独立した前記単軸ロボットアームの内の1つ又は組み合わせを含み、ロボットアームの組み合わせは、少なくとも2つの自由度における移動のための広範囲座標システムを提供し、前記システムは、次のプロセスステップ、即ち、胚ロード、平衡、ヒートシール、ガラス化の内の2つ又は組合せを通して、請求項1から19に記載されているように装置をハンドルすることに適合している、システム。
- 請求項1から22いずれか1項に記載されている装置を利用して生体物質をマイクロマニピュレートするための方法であって、前記方法は、
緩衝液中の装置に少なくとも1つの胚をロードする工程と、
所定流量で前記緩衝溶液を平衡溶液で置換する工程と、
前記ロードした胚を所定平衡期間、前記平衡溶液内で平衡に保つ工程と、
所定流量で前記平衡溶液をガラス化溶液で置換する工程と、
前記装置をヒートシールする工程と、
液体冷却槽内に前記装置を沈める工程と、を含む方法。 - 前記ヒートシールする工程は、前記装置内にロードした生体物質を含むための消耗品の存在の光学検出を必須条件で実行される請求項30に記載のシステム。
- 前記ステップは、固定されたアセンブリに各単軸ロボットアームが取り付けられた、独立した前記単軸ロボットアームの内の1つ又は組み合わせにより実行され、ロボットアームの組み合わせは、少なくとも2つの自由度における移動のための広範囲座標システムを提供する、請求項30又は31に記載の装置。
- 生体物質をマイクロマニピュレートするように構成された装置であって、前記装置は所定の指示セットに従って動作するように構成されたプロセッサ手段を含み、前記指示セットに連動して前記装置は、請求項30から32いずれか1項に記載された方法ステップに関わるタイミングと温度とディスペンス体積と流量とを制御するように構成されている、装置。
- 胚への浸透圧衝撃を減少させると共に凍結保存品質を高めるように前記ガラス化溶液の濃度の徐々なる上昇を考慮するために、前記装置内で流体交換を制御することに適合したコンピュータソフトウェアを、前記指示セットは含む、請求項34に記載された装置。
- 前記液体冷却槽はLN2を含み、前記指示セットに連動して前記装置はLN2の前記液体冷却槽への及び該冷却槽からの移送を自動化することに適合する、請求項35に記載の装置。
- コンピュータプログラムプロダクトであって、前記コンピュータプログラムプロダクトは、前記データ処理システム内で生体物質のマイクロマニピュレーションのために前記媒体上で具体化される、コンピュータが読み取り可能なプログラムコードとコンピュータが読み取り可能なシステムコードとを有するコンピュータが使用可能なメディアを有し、前記コンピュータプログラムプロダクトは、請求項30から32のいずれか1項に記載された前記方法ステップを実行するために前記コンピュータが使用可能なメディア内にコンピュータが読み取り可能なコードを含む、コンピュータプログラムプロダクト。
- 胚への浸透圧衝撃を減少させると共に凍結保存品質を高めるように前記ガラス化溶液の濃度の徐々なる上昇を考慮するために、前記装置内で流体交換を制御することに適合したコンピュータソフトウェアを、前記コンピュータが読み取り可能なコードは含む、請求項36に記載のコンピュータプログラムプロダクト。
- ここに開示された方法及びプロトコル。
- ここに開示された装置、システム、及び/又は装置。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
AU2013900039A AU2013900039A0 (en) | 2013-01-07 | Method, System and Apparatus for Improved Micromanipulation and Storage | |
AU2013900039 | 2013-01-07 | ||
PCT/AU2014/000005 WO2014106286A1 (en) | 2013-01-07 | 2014-01-07 | Method, system and apparatus for improved micromanipulation and storage |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2016508714A true JP2016508714A (ja) | 2016-03-24 |
JP2016508714A5 JP2016508714A5 (ja) | 2018-06-14 |
JP6535284B2 JP6535284B2 (ja) | 2019-06-26 |
Family
ID=51062103
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2015551089A Active JP6535284B2 (ja) | 2013-01-07 | 2014-01-07 | 改善されたマイクロマニピュレーション及び保存のための方法、システム並びに装置 |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9826733B2 (ja) |
EP (1) | EP2941124B1 (ja) |
JP (1) | JP6535284B2 (ja) |
CN (1) | CN105101790B (ja) |
AU (1) | AU2014204411B2 (ja) |
CA (1) | CA2897219C (ja) |
ES (1) | ES2953310T3 (ja) |
HK (1) | HK1217876A1 (ja) |
HU (1) | HUE063344T2 (ja) |
IL (1) | IL239808A (ja) |
PL (1) | PL2941124T3 (ja) |
WO (1) | WO2014106286A1 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2018000191A (ja) * | 2016-07-01 | 2018-01-11 | エスコメディカル ユーエービーEsco Medical Uab | 生物学的材料のインキュベーション及びガラス化のための装置 |
Families Citing this family (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2017122210A1 (en) * | 2016-01-13 | 2017-07-20 | Fertilesafe Ltd. | Automatic devices configured to perform a cryoprocedure on at least one biological sample carried by one or more carriers |
US11617365B2 (en) | 2015-10-13 | 2023-04-04 | Fertilesafe Ltd. | Devices and methods for preparation of a biological sample for a cryoprocedure |
US11122796B1 (en) | 2016-02-19 | 2021-09-21 | Regents Of The University Of Minnesota | Cryoprotection compositions and methods |
WO2017184721A1 (en) | 2016-04-19 | 2017-10-26 | Regents Of The University Of Minnesota | Cryopreservation compositions and methods involving nanowarming |
CN108913532B (zh) * | 2018-07-16 | 2021-10-29 | 东北大学 | 面向工业恶臭污泥的生物降解细菌分离培养仪及使用方法 |
US20210293674A1 (en) * | 2018-07-23 | 2021-09-23 | Regents Of The University Of Minnesota | Systems and methods for cryopreservation of biomaterials |
US11116206B2 (en) | 2018-10-01 | 2021-09-14 | Cook Medical Technologies Llc | Cryocontainer |
WO2020139819A1 (en) | 2018-12-28 | 2020-07-02 | Overture Life, Inc. | Cryostorage device for oocytes and embryos during cryopreservation |
US11660598B2 (en) | 2020-08-07 | 2023-05-30 | Overture Life, Inc. | Microfluidic devices and methods for delivering solutions to biological material |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2004329202A (ja) * | 2003-04-15 | 2004-11-25 | Kitazato Supply:Co Ltd | 卵凍結保存用具 |
JP2005530165A (ja) * | 2002-06-20 | 2005-10-06 | ビジョン・バイオシステムズ・リミテッド | 流体排出機構を備えた生物反応装置 |
JP2011514882A (ja) * | 2007-11-12 | 2011-05-12 | ヴァンス プロダクツ インコーポレイテッド | 形状転換ガラス化装置 |
JP2011528907A (ja) * | 2008-07-23 | 2011-12-01 | マリポサ バイオテクノロジー, インコーポレイテッド | 卵母細胞、胚または胚盤胞の凍結保存のための自動化システム |
WO2011146998A1 (en) * | 2010-05-28 | 2011-12-01 | Sydney Ivf Limited | Improved micromanipulation and storage apparatus and methods |
Family Cites Families (27)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6000603A (en) | 1997-05-23 | 1999-12-14 | 3M Innovative Properties Company | Patterned array of metal balls and methods of making |
US20080277007A1 (en) | 1999-06-28 | 2008-11-13 | California Institute Of Technology | Microfabricated elastomeric valve and pump systems |
US6929030B2 (en) | 1999-06-28 | 2005-08-16 | California Institute Of Technology | Microfabricated elastomeric valve and pump systems |
AU779988B2 (en) | 1999-06-28 | 2005-02-24 | California Institute Of Technology | Microfabricated elastomeric valve and pump systems |
US7501245B2 (en) | 1999-06-28 | 2009-03-10 | Helicos Biosciences Corp. | Methods and apparatuses for analyzing polynucleotide sequences |
US7052545B2 (en) | 2001-04-06 | 2006-05-30 | California Institute Of Technology | High throughput screening of crystallization of materials |
US6899137B2 (en) | 1999-06-28 | 2005-05-31 | California Institute Of Technology | Microfabricated elastomeric valve and pump systems |
US7306672B2 (en) | 2001-04-06 | 2007-12-11 | California Institute Of Technology | Microfluidic free interface diffusion techniques |
US7244402B2 (en) | 2001-04-06 | 2007-07-17 | California Institute Of Technology | Microfluidic protein crystallography |
US8550119B2 (en) | 1999-06-28 | 2013-10-08 | California Institute Of Technology | Microfabricated elastomeric valve and pump systems |
US7217321B2 (en) | 2001-04-06 | 2007-05-15 | California Institute Of Technology | Microfluidic protein crystallography techniques |
US7195670B2 (en) | 2000-06-27 | 2007-03-27 | California Institute Of Technology | High throughput screening of crystallization of materials |
US6818395B1 (en) | 1999-06-28 | 2004-11-16 | California Institute Of Technology | Methods and apparatus for analyzing polynucleotide sequences |
US7459022B2 (en) | 2001-04-06 | 2008-12-02 | California Institute Of Technology | Microfluidic protein crystallography |
US7144616B1 (en) | 1999-06-28 | 2006-12-05 | California Institute Of Technology | Microfabricated elastomeric valve and pump systems |
US8052792B2 (en) | 2001-04-06 | 2011-11-08 | California Institute Of Technology | Microfluidic protein crystallography techniques |
US8709153B2 (en) | 1999-06-28 | 2014-04-29 | California Institute Of Technology | Microfludic protein crystallography techniques |
US7670429B2 (en) | 2001-04-05 | 2010-03-02 | The California Institute Of Technology | High throughput screening of crystallization of materials |
AU2003901871A0 (en) * | 2003-03-31 | 2003-05-08 | Vision Biosystems Limited | A method and apparatus for fluid dispensation, preparation and dilation |
WO2005054441A2 (en) | 2003-12-01 | 2005-06-16 | California Institute Of Technology | Device for immobilizing chemical and biomedical species and methods of using same |
JP4710468B2 (ja) | 2005-07-28 | 2011-06-29 | セイコーエプソン株式会社 | 印刷要求装置、印刷システムおよび印刷要求方法 |
US20070249038A1 (en) * | 2006-04-21 | 2007-10-25 | Andrea Adamo | Microfluidic device for single cell targeted operations |
DK2257155T3 (en) | 2008-02-25 | 2019-01-21 | Genea Ip Holdings Pty Ltd | CRYO CONSERVATION OF BIOLOGICAL CELLS AND TISSUE |
US8656985B2 (en) | 2008-09-30 | 2014-02-25 | International Business Machines Corporation | Rackmount rear door heat exchanger |
CN101947124B (zh) * | 2010-06-25 | 2012-07-04 | 博奥生物有限公司 | 一种集成式微流控芯片装置及其使用方法 |
JP2012232370A (ja) * | 2011-04-28 | 2012-11-29 | Seiko Epson Corp | ロボットコントローラー、簡易設置型ロボット、及び簡易設置型ロボットの制御方法 |
CN102835389B (zh) * | 2012-09-11 | 2014-11-05 | 苏州大学 | 玻璃化冷冻自动化操作系统及操作方法 |
-
2014
- 2014-01-07 WO PCT/AU2014/000005 patent/WO2014106286A1/en active Application Filing
- 2014-01-07 ES ES14735286T patent/ES2953310T3/es active Active
- 2014-01-07 JP JP2015551089A patent/JP6535284B2/ja active Active
- 2014-01-07 US US14/759,419 patent/US9826733B2/en active Active
- 2014-01-07 CN CN201480011612.9A patent/CN105101790B/zh active Active
- 2014-01-07 AU AU2014204411A patent/AU2014204411B2/en active Active
- 2014-01-07 HU HUE14735286A patent/HUE063344T2/hu unknown
- 2014-01-07 EP EP14735286.8A patent/EP2941124B1/en active Active
- 2014-01-07 CA CA2897219A patent/CA2897219C/en active Active
- 2014-01-07 PL PL14735286.8T patent/PL2941124T3/pl unknown
-
2015
- 2015-07-06 IL IL239808A patent/IL239808A/en active IP Right Grant
-
2016
- 2016-05-25 HK HK16105953.6A patent/HK1217876A1/zh unknown
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2005530165A (ja) * | 2002-06-20 | 2005-10-06 | ビジョン・バイオシステムズ・リミテッド | 流体排出機構を備えた生物反応装置 |
JP2004329202A (ja) * | 2003-04-15 | 2004-11-25 | Kitazato Supply:Co Ltd | 卵凍結保存用具 |
JP2011514882A (ja) * | 2007-11-12 | 2011-05-12 | ヴァンス プロダクツ インコーポレイテッド | 形状転換ガラス化装置 |
JP2011528907A (ja) * | 2008-07-23 | 2011-12-01 | マリポサ バイオテクノロジー, インコーポレイテッド | 卵母細胞、胚または胚盤胞の凍結保存のための自動化システム |
WO2011146998A1 (en) * | 2010-05-28 | 2011-12-01 | Sydney Ivf Limited | Improved micromanipulation and storage apparatus and methods |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2018000191A (ja) * | 2016-07-01 | 2018-01-11 | エスコメディカル ユーエービーEsco Medical Uab | 生物学的材料のインキュベーション及びガラス化のための装置 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2014106286A1 (en) | 2014-07-10 |
EP2941124A1 (en) | 2015-11-11 |
EP2941124B1 (en) | 2023-06-07 |
IL239808A (en) | 2017-12-31 |
US9826733B2 (en) | 2017-11-28 |
AU2014204411B2 (en) | 2017-11-02 |
CN105101790B (zh) | 2018-09-21 |
CA2897219C (en) | 2021-10-19 |
CA2897219A1 (en) | 2014-07-10 |
EP2941124C0 (en) | 2023-06-07 |
JP6535284B2 (ja) | 2019-06-26 |
CN105101790A (zh) | 2015-11-25 |
US20150351381A1 (en) | 2015-12-10 |
IL239808A0 (en) | 2015-08-31 |
PL2941124T3 (pl) | 2023-12-27 |
HK1217876A1 (zh) | 2017-01-27 |
HUE063344T2 (hu) | 2024-01-28 |
EP2941124A4 (en) | 2016-08-10 |
ES2953310T3 (es) | 2023-11-10 |
AU2014204411A1 (en) | 2015-08-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CA2897219C (en) | Method, system and apparatus for improved micromanipulation and storage | |
JP6114185B2 (ja) | 改良された顕微操作ならびに保管装置および方法 | |
US8739556B2 (en) | Cryopreservation device | |
US9228925B2 (en) | Automated vitrification device | |
US9781918B2 (en) | Substrate unit, preservation device and method for the cryopreservation of a biological sample | |
WO2010056755A2 (en) | Microfluidic embryo and gamete culture systems | |
CN106342789B (zh) | 一种细胞玻璃化冷冻处理设备及其处理方法 | |
AU2018214954B2 (en) | Devices for tissue cryopreservation and recovery | |
CN112384809A (zh) | 流体自动采样器和培育器 | |
JP2016508714A5 (ja) | ||
JP2018000191A (ja) | 生物学的材料のインキュベーション及びガラス化のための装置 | |
Roy et al. | Chapter 20 gavi-automated vitrification instrument | |
Taft | Mouse sperm cryopreservation using cryoprotectant containing monothioglycerol (MTG) | |
Fuller et al. | Cryopreservation of mammalian embryos | |
CN113439739A (zh) | 冷冻保存作业辅助治具 | |
JP7133514B2 (ja) | 細胞又は組織の凍結融解方法 | |
US11653644B2 (en) | System for rapid cooling and warming of cells and other biological material | |
Guan et al. | Conservation of mouse models through embryo freezing | |
Bolton | “Lost” Embryo in the Laboratory | |
Schiewe | Microsecure vitrification (µS-VTF) procedure: optimum simplicity, security, cost-saving and effectiveness combining FDA-approved products | |
Neubauer et al. | Vitrification in pluripotent stem cell banking: Requirements and technical solutions for large-scale biobanks | |
WO2023141217A1 (en) | Methods and systems for evaluation of tissue samples | |
Schiewe | Cryopreservation of Post-Compaction Embryos for IVF |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20161114 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20161114 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20170426 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20170426 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20170922 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20171024 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20180124 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20180326 |
|
A524 | Written submission of copy of amendment under article 19 pct |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A524 Effective date: 20180424 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20180703 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20181002 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20181130 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20181226 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20190514 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20190531 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6535284 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |