JP2016501182A - ペプチド - Google Patents
ペプチド Download PDFInfo
- Publication number
- JP2016501182A JP2016501182A JP2015541291A JP2015541291A JP2016501182A JP 2016501182 A JP2016501182 A JP 2016501182A JP 2015541291 A JP2015541291 A JP 2015541291A JP 2015541291 A JP2015541291 A JP 2015541291A JP 2016501182 A JP2016501182 A JP 2016501182A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- seq
- peptide
- fviii
- glu
- lys
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 238
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 claims abstract description 125
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 claims abstract description 122
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 claims abstract description 121
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 78
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 claims abstract description 45
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 claims abstract description 30
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 claims abstract description 22
- 208000013633 acquired hemophilia Diseases 0.000 claims abstract description 20
- 201000003542 Factor VIII deficiency Diseases 0.000 claims abstract description 18
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 44
- 208000031220 Hemophilia Diseases 0.000 claims description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 24
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 15
- 108010051539 HLA-DR2 Antigen Proteins 0.000 claims description 13
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 13
- 238000009256 replacement therapy Methods 0.000 claims description 10
- 229940124135 Factor VIII inhibitor Drugs 0.000 claims description 9
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 7
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 6
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Chemical group OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 4
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000004220 glutamic acid Chemical group 0.000 claims description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 3
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims description 3
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 abstract description 42
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 abstract description 30
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 11
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 abstract description 8
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 abstract description 8
- 238000012986 modification Methods 0.000 abstract description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 abstract description 5
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 abstract description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 abstract description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 27
- 230000004044 response Effects 0.000 description 18
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 17
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 17
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 14
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 14
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 14
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 14
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 14
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 14
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 13
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 13
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 13
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 13
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 13
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 13
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 13
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 12
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 12
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 12
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 12
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 11
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 11
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 10
- 108091005601 modified peptides Proteins 0.000 description 10
- 102000018713 Histocompatibility Antigens Class II Human genes 0.000 description 9
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 9
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 9
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 9
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 8
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 8
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 8
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 8
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 102000057593 human F8 Human genes 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 7
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 6
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 6
- 208000009429 hemophilia B Diseases 0.000 description 6
- 210000001503 joint Anatomy 0.000 description 6
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 6
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 5
- 206010011968 Decreased immune responsiveness Diseases 0.000 description 5
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 5
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 230000003614 tolerogenic effect Effects 0.000 description 5
- 102100022641 Coagulation factor IX Human genes 0.000 description 4
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 4
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 102100035703 Prostatic acid phosphatase Human genes 0.000 description 4
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 4
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 4
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 4
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 4
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 4
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 108010043671 prostatic acid phosphatase Proteins 0.000 description 4
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Natural products NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010027412 Histocompatibility Antigens Class II Proteins 0.000 description 3
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 3
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 3
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 3
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 3
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 3
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 230000024664 tolerance induction Effects 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VMQMZMRVKUZKQL-UHFFFAOYSA-N Cu+ Chemical compound [Cu+] VMQMZMRVKUZKQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 2
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 2
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 2
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 2
- 208000026552 Severe hemophilia A Diseases 0.000 description 2
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 2
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 2
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 2
- 238000007820 coagulation assay Methods 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 2
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 2
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 2
- 229930182912 cyclosporin Natural products 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 2
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 102000054766 genetic haplotypes Human genes 0.000 description 2
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 2
- 229960000900 human factor viii Drugs 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 229940047434 kogenate Drugs 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 229940124530 sulfonamide Drugs 0.000 description 2
- 150000003456 sulfonamides Chemical class 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000032116 Autoimmune Experimental Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 1
- 208000019838 Blood disease Diseases 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- PTOAARAWEBMLNO-KVQBGUIXSA-N Cladribine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC(Cl)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O1 PTOAARAWEBMLNO-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 108010076282 Factor IX Proteins 0.000 description 1
- 108010048049 Factor IXa Proteins 0.000 description 1
- 108010014173 Factor X Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 1
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 1
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 1
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 102100037611 Lysophospholipase Human genes 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 108020004485 Nonsense Codon Proteins 0.000 description 1
- 208000001388 Opportunistic Infections Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010058864 Phospholipases A2 Proteins 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 1
- 206010037379 Pulmonary embolism and thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000017274 T cell anergy Effects 0.000 description 1
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 1
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 208000027276 Von Willebrand disease Diseases 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 210000001766 X chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000005299 abrasion Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 206010000891 acute myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 208000005298 acute pain Diseases 0.000 description 1
- 210000005006 adaptive immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 108010018823 anti-inhibitor coagulant complex Proteins 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000011091 antibody purification Methods 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 230000006470 autoimmune attack Effects 0.000 description 1
- LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N azathioprine Chemical compound CN1C=NC([N+]([O-])=O)=C1SC1=NC=NC2=C1NC=N2 LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002170 azathioprine Drugs 0.000 description 1
- 239000003659 bee venom Substances 0.000 description 1
- 238000003339 best practice Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000000337 buffer salt Substances 0.000 description 1
- 239000004067 bulking agent Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 239000000701 coagulant Substances 0.000 description 1
- 238000011284 combination treatment Methods 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 230000004940 costimulation Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000000586 desensitisation Methods 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 208000009190 disseminated intravascular coagulation Diseases 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 1
- 208000012997 experimental autoimmune encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 229940105776 factor viii inhibitor bypassing activity Drugs 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 1
- 208000018706 hematopoietic system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002008 hemorrhagic effect Effects 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000008076 immune mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000003832 immune regulation Effects 0.000 description 1
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 229940125721 immunosuppressive agent Drugs 0.000 description 1
- 238000002650 immunosuppressive therapy Methods 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000004073 interleukin-2 production Effects 0.000 description 1
- 230000017307 interleukin-4 production Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 230000006623 intrinsic pathway Effects 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000001589 lymphoproliferative effect Effects 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 230000003039 myelosuppressive effect Effects 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000037434 nonsense mutation Effects 0.000 description 1
- 231100000862 numbness Toxicity 0.000 description 1
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 1
- 239000006179 pH buffering agent Substances 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N prednisone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 1
- 229960004618 prednisone Drugs 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 239000003805 procoagulant Substances 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 229940024790 prothrombin complex concentrate Drugs 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 229940047431 recombinate Drugs 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 238000011268 retreatment Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 206010040400 serum sickness Diseases 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 230000014599 transmission of virus Effects 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- 238000009966 trimming Methods 0.000 description 1
- 239000006200 vaporizer Substances 0.000 description 1
- 208000034280 venom allergy Diseases 0.000 description 1
- 244000052613 viral pathogen Species 0.000 description 1
- 230000003253 viricidal effect Effects 0.000 description 1
- 108010047303 von Willebrand Factor Proteins 0.000 description 1
- 208000012137 von Willebrand disease (hereditary or acquired) Diseases 0.000 description 1
- 102100036537 von Willebrand factor Human genes 0.000 description 1
- 229960001134 von willebrand factor Drugs 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0008—Antigens related to auto-immune diseases; Preparations to induce self-tolerance
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
- A61K2039/577—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 tolerising response
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本発明は、更なる抗原プロセシングなしにMHCクラスII分子に結合し、第VIII因子特異的T細胞によって認識される能力がある、FVIIIから部分的に誘導可能なペプチドを提供する。特に、本発明は、N及びC末端に修飾を有する配列DNIMVTFRNQASRPY又はPRCLTRYYSSFVNMEを含むペプチドを提供する。本発明は、血友病A及び/又は後天性血友病におけるインヒビター抗体の形成の予防又は抑制のためのそのようなペプチドの使用にも関する。【選択図】なし
Description
本発明は、少なくともその一部が、第VIII因子(FVIII)から誘導可能であるペプチドに関する。前記ペプチドを使用して、例えば、血友病Aの治療及び後天性血友病における、第VIII因子インヒビター抗体形成を低下又は予防することができる。
血友病
血友病は、血友病A、血友病B(クリスマス病)及びフォンウィルブランド病を含む遺伝性血液障害の群に属する。
血友病は、血友病A、血友病B(クリスマス病)及びフォンウィルブランド病を含む遺伝性血液障害の群に属する。
血友病において、必須凝固因子が部分的又は完全に欠けているために血液の凝固能が大幅に低下しており、出血時間の増加をもたらす。
血友病Aは、第VIII凝固因子の欠乏症であるのに対し、血友病Bは、第IX凝固因子の欠乏症である。両疾患において、X染色体上に欠陥遺伝子が見出されるので、その状態はX連鎖性である。血友病Aは、血友病Bよりも5倍よく起こる。
血友病は、生涯続く遺伝性の遺伝的状態であり、保因者である女性及びこの状態を遺伝で受け継ぐ男性が罹患する。新規診断の約3分の1は、家族既往歴がない場合である。それは世界中でみられ、全ての人種集団で生じている。英国では、約6,000人が血友病に罹患している。
血友病患者は、傷害後、長期間出血する。切り傷及び擦り傷などの外傷は通常は大きな問題とはならず、ある程度圧迫し、患部を(例えば、絆創膏で)覆うことにより出血を止めることができる場合が多い。
主要な問題は、関節、筋肉及び軟組織中への内出血であり、これは自発的に起こり得る。脳内への大出血などの内出血は、管理が非常に困難であり、致命的であり得る。関節内での度重なる出血は、急性痛を引き起こし、関節炎及び/又は身体障害につながる長期関節損傷を引き起こし得る。
血友病のための治療は、通常、欠けている凝固因子の補充による。軽度又は中等度の血友病においては、出血が生じたときに注射を行うことができる(オンデマンド療法)。しかしながら、重度の血友病においては、血液が凝固するのを助け、長期関節損傷の可能性を最小限にするために、定期的な予防的注射が行われる。
血友病Aのための凝血因子補充療法の深刻になる恐れのある合併症は、第VIII因子の凝血促進性機能を中和する抗体の発達である。第VIII因子インヒビターは、重症血友病Aを有する人の約25%に生じる。先天性血友病A患者は、遺伝的にFVIII欠乏性であり得るので、インヒビターの合成は、出血エピソードを予防又は治療するために投与された外来タンパク質への同種免疫応答である。
CD4+T細胞は、FVIIIへの免疫応答において中心的な役割を果たしている。FVIIIは、抗原提示細胞(APC)によって取り込まれた後、タンパク質分解によりペプチド断片に分解される(Redingら(2006) Haemophilia 12(supp 6) 30-36)。次いで、これらのペプチドは、MHCクラスII分子と結合してAPCの表面に提示される。次いで、この複合体は、FVIIIに特異的なCD4+細胞のT細胞受容体によって認識される。適切な同時刺激シグナルの存在下で、この認識により、最終的に、CD4+細胞がB細胞による抗体の合成を方向付ける。
インヒビター形成の発生率は、最初は第VIII因子の処置回数とともに増加するが、曝露日数が50日〜100日の後に頭打ちになるように思われる。インヒビター形成は中等度又は軽度の疾患よりも重度の血友病においてはるかによく起こり、第VIII因子軽鎖内のいくつかの分子欠損、最も明瞭には大きな欠失及びナンセンス変異が、インヒビター形成の素因となるように思われる。補充因子の濃度、型(精製又は組換え)などのパラメーター及び治療歴も、抗体産生の可能性に影響を及ぼし得る。
インヒビターを有する血友病患者の管理は継続的課題である。脱感作技法を使用した免疫寛容誘導(ITI)は、第VIII因子に対する同種抗体を有する一部の患者において奏功している。この治療的手法は、因子補充療法への継続的な曝露を必要とするので、長期的戦略である。
ITIは奏功し得るが、著しい割合(約30%)の患者が、ITIに応答しない。高いインヒビター力価を有する患者は、治療に応答する見込みが非常に低い。別の重要な要因は、ITI開始時の年齢であり、患者が20歳を超えている場合、奏功率が大きく低下する(Hayら(2005) Seminars in Thrombosis and Hemostasis 32:15-21)。
ITI療法が奏功しない場合、インヒビターは、一般に、生涯存続し、そのような患者は、通常、高応答者であるため、活性化プロトロンビン複合体濃縮物(FEIBA(商標))、及び組換え活性化FVIIなどのFVIIIバイパス生成物で出血のエピソードを治療することが必要である。しかしながら、そのような薬剤の使用は、播種性血管内凝血、急性心筋梗塞、肺塞栓症及び血栓症などの有害事象と関連している(Acharya and DiMichele (2006) Best Practice & Research Clinical Haematology 19:51-66)。
ITIに応答しない患者には、免疫抑制療法が時折使用される。治療は、免疫系を非特異的に標的にするシクロホスファミド、プレドニゾン、アザチオプリン、シクロスポリンなどの免疫抑制剤の投与を含む。これらの治療は、一般的な免疫抑制と関連する副作用を有し得る。
B細胞CD20抗原に対するヒト化モノクロナール抗体であるRituximab(商標)を使用した、選択的B細胞枯渇に関する新たな関心がある。しかしながら、この薬剤で治療した一部の子供において輸注反応、血清病及び日和見感染が生じている(DiMichele (2007) J Thromb Haemost 5:143-50)。
後天性血友病
後天性血友病は、百万人ごとに1〜4人が罹患する希な自己免疫状態である。この状態において、血友病を持って生まれたのではない対象が、第VIII因子などの凝固因子のうちの1つに対して抗体を発生させる。妊娠及び関節リウマチなどの自己免疫疾患及び癌は、後天性血友病を発症するリスクを増大させ得ると考えられている。インヒビターの産生につながる根底にある免疫機構に違いはあるが、凝血因子補充療法に応答して産生されるFVIIIインヒビターと、後天性血友病において産生されるインヒビターの臨床的徴候は類似している。
後天性血友病は、百万人ごとに1〜4人が罹患する希な自己免疫状態である。この状態において、血友病を持って生まれたのではない対象が、第VIII因子などの凝固因子のうちの1つに対して抗体を発生させる。妊娠及び関節リウマチなどの自己免疫疾患及び癌は、後天性血友病を発症するリスクを増大させ得ると考えられている。インヒビターの産生につながる根底にある免疫機構に違いはあるが、凝血因子補充療法に応答して産生されるFVIIIインヒビターと、後天性血友病において産生されるインヒビターの臨床的徴候は類似している。
後天性血友病患者は、後天性インヒビターと重症出血合併症との関連が原因の一つであるが、25%に迫る死亡率を有する。後天性自己抗体インヒビターの療法は、しばしば生命及び四肢を脅かす急性大出血性合併症を調節又は予防し、二次的に自己抗体を根絶して正常な凝血を回復する必要性に主に基づく。
低力価の自己抗体インヒビター(<5ベセスダ単位)と関連している一部の出血は、FVIII濃縮物を高用量で投与して効果的に治療することができる。ブタFVIII濃縮物は、後天性血友病関連の出血のための重要な第一選択治療薬と以前は考えられていたが、これはブタFVIII濃縮物が、実験室で輸注後FVIII凝血活性レベルを実際に測定する機会を提供する唯一の補充治療薬であったからである。この製品は、ブタパルボウイルスによるブタ血漿プールの汚染のために、2004年に市場から撤去された。現在、「バイパス」剤が最もよく使用されているが、血栓形成の潜在的なリスクが存在し、各製品の有効性は、約80%のみである。バイパス剤又はFVIII補充が適切な止血を提供するのに十分にインヒビター力価を一時的に低下させるために、血漿交換療法による血漿交換及び体外免疫吸着が必要であり得る。
自己抗体インヒビターの根絶は、(1)3〜6週間で30%〜50%の有効性を有する副腎皮質ステロイドの投与、(2)細胞毒性及び骨髄抑制化学療法剤、例えば、シクロホスファミド、シクロスポリン、2-クロロデオキシアデノシンの使用、(3)免疫グロブリン静注での免疫調節、及び(4)リツキシマブでの選択的Bリンパ球の枯渇、などの免疫抑制手段に依存する。リツキシマブ（Rituximab(商標)）応答者は、ステロイドの同時使用を必要とし得、再発は、再治療に応答し得る。
したがって、血友病Aの治療に関連する同種抗体産生、及び後天性血友病における自己抗体産生を低下させるための現在利用可能な全ての方法は、欠点を有する。したがって、血友病A及び後天性血友病における抗FVIII抗体の問題に対処するための改善された方法が必要性である。
本発明者らは、FVIII由来ペプチドで患者を予め寛容化することによってFVIIIインヒビター抗体形成を予防すること、及びFVIIIインヒビター抗体を減少させるためにFVIII由来ペプチドを投与することによって、血友病などの状態を治療することが可能であることを見出した。
従って、本発明の第一の態様は、FVIIIを誘導するか、またはFVIIIに対する耐性を回復させることができる、その配列の少なくとも一部がFVIIIに由来するペプチドに関する。
本発明の第一の態様の第一の実施形態において、本発明は、以下の配列の1つを有するFVIII由来配列DNIMVTFRNQASRPYを含むペプチドを提供する：
Lys-Lys-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Lys-Lys (配列番号17)
Lys-Lys-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Lys-Glu (配列番号18)
Lys-Lys-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Glu-Lys (配列番号19)
Lys-Glu-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Lys-Lys (配列番号25)
Lys-Glu-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Lys-Glu (配列番号26)
Lys-Glu-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Glu-Lys (配列番号27)
Glu-Lys-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Lys-Lys (配列番号29)
Glu-Lys-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Lys-Glu (配列番号30)及び
Glu-Lys-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Glu-Lys (配列番号31)。
本発明の第一の態様の第一の実施形態において、本発明は、以下の配列の1つを有するFVIII由来配列DNIMVTFRNQASRPYを含むペプチドを提供する：
Lys-Lys-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Lys-Lys (配列番号17)
Lys-Lys-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Lys-Glu (配列番号18)
Lys-Lys-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Glu-Lys (配列番号19)
Lys-Glu-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Lys-Lys (配列番号25)
Lys-Glu-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Lys-Glu (配列番号26)
Lys-Glu-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Glu-Lys (配列番号27)
Glu-Lys-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Lys-Lys (配列番号29)
Glu-Lys-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Lys-Glu (配列番号30)及び
Glu-Lys-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Glu-Lys (配列番号31)。
第二の実施形態において、本発明は、以下の配列の1つを有する、FVIII由来の配列PRCLTRYYSSFVNMEを含むペプチドを提供する：
Lys-Lys-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Lys-Lys (配列番号1)
Lys-Lys-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Lys-Glu (配列番号2)
Lys-Lys-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Glu-Lys (配列番号3)
Glu-Glu-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Lys-Lys (配列番号5)
Glu-Glu-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Glu-Lys (配列番号7)
Lys-Glu-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Lys-Lys (配列番号9)
Lys-Glu-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Lys-Glu (配列番号10)
Lys-Glu-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Glu-Lys (配列番号11)及び
Glu-Lys-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Lys-Lys (配列番号13)。
Lys-Lys-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Lys-Lys (配列番号1)
Lys-Lys-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Lys-Glu (配列番号2)
Lys-Lys-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Glu-Lys (配列番号3)
Glu-Glu-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Lys-Lys (配列番号5)
Glu-Glu-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Glu-Lys (配列番号7)
Lys-Glu-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Lys-Lys (配列番号9)
Lys-Glu-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Lys-Glu (配列番号10)
Lys-Glu-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Glu-Lys (配列番号11)及び
Glu-Lys-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Lys-Lys (配列番号13)。
第二の態様において、本発明は、本発明の第一の態様の1種以上のペプチドを含む、複数のペプチドを含有する組成物を提供する。
組成物は、第一の実施形態の少なくとも1種のペプチドと、本発明の第一の態様の第二の実施形態の少なくとも1種のペプチドとを含有し得る。
組成物は、配列番号１を有するペプチドと、配列番号１７を有するペプチドとを含有し得る。
組成物は、複数のペプチドが別個に、続いて、連続的に、又は同時に投与するために別々に提供されるキットの形態であっても良い。
本発明のペプチド又は組成物は、第VIII因子インヒビター抗体の産生を抑制、低下、又は防止するのに使用するためのものであり得る。
本発明はまた、第VIII因子インヒビター抗体の産生を抑制、低下、又は防止するための医薬の製造における、このようなペプチド又は組成物の使用を提供する。
組成物は、第一の実施形態の少なくとも1種のペプチドと、本発明の第一の態様の第二の実施形態の少なくとも1種のペプチドとを含有し得る。
組成物は、配列番号１を有するペプチドと、配列番号１７を有するペプチドとを含有し得る。
組成物は、複数のペプチドが別個に、続いて、連続的に、又は同時に投与するために別々に提供されるキットの形態であっても良い。
本発明のペプチド又は組成物は、第VIII因子インヒビター抗体の産生を抑制、低下、又は防止するのに使用するためのものであり得る。
本発明はまた、第VIII因子インヒビター抗体の産生を抑制、低下、又は防止するための医薬の製造における、このようなペプチド又は組成物の使用を提供する。
本発明はまた、このようなペプチド又は組成物を対象に投与するステップを含む、対象における第VIII因子インヒビター抗体の産生を抑制、低下、又は防止するための方法を提供する。
対象は第VIII因子が欠乏している状態であり得る。特に、対象は血友病Aであり、第VIII因子補充療法を受けているか、もしくは受けようとしている患者であり得る。
あるいはまた、対象は、後天性血友病を有するか、またはこれに罹患するリスクを有する者であり得る。
第VIII因子インヒビターは、HLA-DR2を発現する個体においてより頻繁に見られる。従って、本発明の方法によって治療される対象はHLA-DR2陽性であり得る。
対象は第VIII因子が欠乏している状態であり得る。特に、対象は血友病Aであり、第VIII因子補充療法を受けているか、もしくは受けようとしている患者であり得る。
あるいはまた、対象は、後天性血友病を有するか、またはこれに罹患するリスクを有する者であり得る。
第VIII因子インヒビターは、HLA-DR2を発現する個体においてより頻繁に見られる。従って、本発明の方法によって治療される対象はHLA-DR2陽性であり得る。
ペプチド
本発明は、ペプチドに関する。
本発明は、ペプチドに関する。
「ペプチド」という用語は、典型的に、隣接するアミノ酸のα-アミノ基とカルボキシル基間のペプチド結合により一方が他方に結合した、一連の残基、典型的にL-アミノ酸を意味する通常の意味で使用される。この用語は、修飾ペプチド及び合成ペプチド類似体を含む。
本発明のペプチドは、化学的方法を使用して作製することができる(Peptide Chemistry, A practical Textbook. Mikos Bodansky, Springer-Verlag, Berlin.)。例えば、ペプチドは、固相技法(Roberge JYら(1995) Science 269: 202-204)によって合成し、樹脂から切断し、調製的高速液体クロマトグラフィーによって精製することができる(例えば、Creighton (1983) Proteins Structures And Molecular Principles, WH Freeman and Co, New York NY)。自動合成は、例えば、ABI 43 1 A Peptide Synthesizer(Perkin Elmer)を使用して、製造者によって提供された説明書に従って達成することができる。
あるいはまた、ペプチドは、組換え法によって、又は第VIII因子からのペプチドの切断後の1つ又は両方の末端の修飾によって作製することができる。ペプチドの組成は、アミノ酸分析又は配列決定(例えば、Edman分解手順)によって確認することができる。
実際的な目的のために、ペプチドが示し得る種々の他の特性がある。例えば、ペプチドが、治療的に有用であるためにin vivoで十分安定であることが重要である。ペプチドのin vivoでの半減期は、少なくとも10分、30分、4時間又は24時間であり得る。
ペプチドは、in vivoで良好な生物学的利用能を示すこともできる。ペプチドは、これが然るべき障害なしに細胞表面のMHC分子に結合することを可能にするコンフォメーションをin vivoで維持することができる。
アピトープ
適応免疫応答において、Tリンパ球はタンパク質抗原の内部エピトープを認識する能力がある。抗原提示細胞(APC)は、タンパク質抗原を取り込み、それらを短いペプチド断片に分解する。ペプチドは、細胞内の主要組織適合性複合体(MHC)クラスI又はII分子に結合し、細胞表面に運ばれ得る。MHC分子と結合して細胞表面に提示されると、ペプチドは、T細胞によって(T細胞受容体(TCR)を介して)認識され得、この場合、ペプチドはT細胞エピトープである。
適応免疫応答において、Tリンパ球はタンパク質抗原の内部エピトープを認識する能力がある。抗原提示細胞(APC)は、タンパク質抗原を取り込み、それらを短いペプチド断片に分解する。ペプチドは、細胞内の主要組織適合性複合体(MHC)クラスI又はII分子に結合し、細胞表面に運ばれ得る。MHC分子と結合して細胞表面に提示されると、ペプチドは、T細胞によって(T細胞受容体(TCR)を介して)認識され得、この場合、ペプチドはT細胞エピトープである。
したがって、エピトープは、MHCクラスI又はII分子のペプチド結合溝に結合し、T細胞によって認識される能力がある、抗原から誘導可能なペプチドである。
最小エピトープは、MHCクラスI又はII分子のペプチド結合溝に結合し、T細胞によって認識される能力がある、エピトープから誘導可能な最短の断片である。所与の免疫原性領域に関して、エピトープとして働く重複ペプチドの「入れ子セット（nested set）」を作製することが典型的に可能であり、それらの全てが最小エピトープを含有するが、それらの隣接領域は異なる。
同様に、末端切断ペプチドへの応答を測定することによって、特定のMHC分子:T細胞の組合せのための最小エピトープを同定することが可能である。例えば、重複ライブラリ内の残基1〜15を含むペプチドに対して応答が得られる場合、両端で切断されたセット(すなわち、1〜14、1〜13、1〜12など及び2〜15、3〜15、4〜15など)を使用して、最小エピトープを同定することができる。
本発明者らはこれまでに、更なる抗原プロセシングなしにMHCクラスI又はII分子に結合してT細胞に提示されるペプチドの能力と、in vivoで寛容を誘導するペプチドの能力との間に関連があることを決定した(WO02/16410)。あるペプチドが、更なるプロセシング(例えばトリミング)なしに、MHC分子のペプチド結合溝に結合するには長すぎる、又は不適切なコンフォメーションで結合する場合、それはin vivoで寛容原性ではない。他方、ペプチドが、MHCペプチド結合溝に直接結合し、T細胞に提示されるのに適切な大きさ及びコンフォメーションを有する場合、このペプチドは寛容誘導に有用であると予測することができる。
したがって、ペプチドが、in vitroで更なる抗原プロセシングなしにMHCクラスI又はII分子に結合し、T細胞に提示され得るかどうかを調査することによって、そのペプチドの寛容原性能力を調査することが可能である。
本発明のペプチドは、それらが更なる抗原プロセシングなしにMHCクラスII分子に結合し、第VIII因子特異的T細胞からの応答を刺激することができる点において、アピトープ(抗原プロセシング非依存性エピトープ)である。そのようなアピトープは、WO02/16410に記載された規定に基づいた方法に従って、FVIIIへの寛容を引き起こすと予測することができる。
本発明のペプチドは、更なるプロセシングなしにMHCクラスI又はII分子に結合する能力がある任意の長さとすることができる。典型的に、本発明のペプチドは、MHCクラスIIに結合する能力がある。
MHCクラスI分子に結合するペプチドは、典型的に7〜13、より普通には8〜10アミノ酸長である。ペプチドの結合は、ペプチドの主鎖内の原子と、全てのMHCクラスI分子のペプチド結合溝におけるインバリアント部位との間の接触によって、その両端が安定化されている。ペプチドのアミノ及びカルボキシ末端を結合する溝の両端にインバリアント部位がある。ペプチドの長さの変動は、ペプチド主鎖内の、しばしば必要な柔軟性を与えるプロリン又はグリジン残基におけるよじれによって調整される。
MHCクラスII分子に結合するペプチドは、典型的に8〜20アミノ酸長、より普通には10〜17アミノ酸長であり、より長くてもよい(例えば、最大40アミノ酸長)。これらのペプチドは、(MHCクラスIペプチド結合溝と異なって)両端が開放されているMHC IIペプチド結合溝に沿って伸長されたコンフォメーションである。ペプチドは、主に、ペプチド結合溝に沿って並ぶ保存残基との主鎖の原子の接触によって所定の位置に保持される。
ペプチド配列
本発明の第一の実施形態は、FVIII由来配列を含むペプチドに関する。実施例で検討したFVIII由来配列は以下の配列を有する：
配列番号1: Lys-Lys-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Lys-Lys
配列番号2: Lys-Lys-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Lys-Glu
配列番号3: Lys-Lys-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Glu-Lys
配列番号4: Lys-Lys-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Glu-Glu
配列番号5: Glu-Glu-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Lys-Lys
配列番号6: Glu-Glu-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Lys-Glu
配列番号7: Glu-Glu-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Glu-Lys
配列番号8: Glu-Glu-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Glu-Glu
配列番号9: Lys-Glu-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Lys-Lys
配列番号10: Lys-Glu-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Lys-Glu
配列番号11: Lys-Glu-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Glu-Lys
配列番号12: Lys-Glu-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Glu-Glu
配列番号13: Glu-Lys-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Lys-Lys
配列番号14: Glu-Lys-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Lys-Glu
配列番号15: Glu-Lys-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Glu-Lys
配列番号16: Glu-Lys-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Glu-Glu
配列番号17: Lys-Lys-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Lys-Lys
配列番号18: Lys-Lys-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Lys-Glu
配列番号19: Lys-Lys-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Glu-Lys
配列番号20: Lys-Lys-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Glu-Glu
配列番号21: Glu-Glu-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Lys-Lys
配列番号22: Glu-Glu-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Lys-Glu
配列番号23: Glu-Glu-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Glu-Lys
配列番号24: Glu-Glu-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Glu-Glu
配列番号25: Lys-Glu-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Lys-Lys
配列番号26: Lys-Glu-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Lys-Glu
配列番号27: Lys-Glu-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Glu-Lys
配列番号28: Lys-Glu-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Glu-Glu
配列番号29: Glu-Lys-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Lys-Lys
配列番号30: Glu-Lys-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Lys-Glu
配列番号31: Glu-Lys-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Glu-Lys
配列番号32: Glu-Lys-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Glu-Glu。
本発明の第一の実施形態は、FVIII由来配列を含むペプチドに関する。実施例で検討したFVIII由来配列は以下の配列を有する：
配列番号1: Lys-Lys-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Lys-Lys
配列番号2: Lys-Lys-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Lys-Glu
配列番号3: Lys-Lys-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Glu-Lys
配列番号4: Lys-Lys-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Glu-Glu
配列番号5: Glu-Glu-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Lys-Lys
配列番号6: Glu-Glu-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Lys-Glu
配列番号7: Glu-Glu-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Glu-Lys
配列番号8: Glu-Glu-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Glu-Glu
配列番号9: Lys-Glu-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Lys-Lys
配列番号10: Lys-Glu-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Lys-Glu
配列番号11: Lys-Glu-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Glu-Lys
配列番号12: Lys-Glu-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Glu-Glu
配列番号13: Glu-Lys-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Lys-Lys
配列番号14: Glu-Lys-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Lys-Glu
配列番号15: Glu-Lys-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Glu-Lys
配列番号16: Glu-Lys-Gly-Pro-Arg-Cys-Leu-Thr-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ser-Phe-Val-Asn-Met-Glu-Gly-Glu-Glu
配列番号17: Lys-Lys-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Lys-Lys
配列番号18: Lys-Lys-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Lys-Glu
配列番号19: Lys-Lys-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Glu-Lys
配列番号20: Lys-Lys-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Glu-Glu
配列番号21: Glu-Glu-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Lys-Lys
配列番号22: Glu-Glu-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Lys-Glu
配列番号23: Glu-Glu-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Glu-Lys
配列番号24: Glu-Glu-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Glu-Glu
配列番号25: Lys-Glu-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Lys-Lys
配列番号26: Lys-Glu-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Lys-Glu
配列番号27: Lys-Glu-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Glu-Lys
配列番号28: Lys-Glu-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Glu-Glu
配列番号29: Glu-Lys-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Lys-Lys
配列番号30: Glu-Lys-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Lys-Glu
配列番号31: Glu-Lys-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Glu-Lys
配列番号32: Glu-Lys-Gly-Asp-Asn-Ile-Met-Val-Thr-Phe-Arg-Asn-Gln-Ala-Ser-Arg-Pro-Tyr-Gly-Glu-Glu。
用語「有する(has）」又は「有している（having）」は、そのペプチドが所定のアミノ酸配列からなることを意味することが意図される。
本発明は、配列 DNIMVTFRNQASRPYを含み、以下の配列：配列番号17、18、19、25、26、27、29、30又は31の1つを有するペプチドを提供する。
ペプチドは以下の配列：配列番号17、18、25又は26の1つを有し得る。
ペプチドは配列番号17又は18を有し得る。
ペプチドは配列番号17を有し得る。
本発明は、配列 DNIMVTFRNQASRPYを含み、以下の配列：配列番号17、18、19、25、26、27、29、30又は31の1つを有するペプチドを提供する。
ペプチドは以下の配列：配列番号17、18、25又は26の1つを有し得る。
ペプチドは配列番号17又は18を有し得る。
ペプチドは配列番号17を有し得る。
本発明はまた、配列PRCLTRYYSSFVNMEを含み、かつ以下の配列：配列番号1、2、3、5、7、9、10、11又は13の1つを有するペプチドを提供する。
ペプチドは以下の配列：配列番号１、２、９又は１０の1つを有し得る。
ペプチドは配列番号１又は２を有し得る。
ペプチドは配列番号１を有し得る。
ペプチドは以下の配列：配列番号１、２、９又は１０の1つを有し得る。
ペプチドは配列番号１又は２を有し得る。
ペプチドは配列番号１を有し得る。
第VIII因子
本発明のペプチドの中心部分を形成する配列DNIMVTFRNQASRPY及びPRCLTRYYSSFVNMEは、両方とも第VIII因子から誘導可能である。
本発明のペプチドの中心部分を形成する配列DNIMVTFRNQASRPY及びPRCLTRYYSSFVNMEは、両方とも第VIII因子から誘導可能である。
第VIII因子は血液凝血の内因性経路に関与し、第VIII因子は、Ca+2及びリン脂質の存在下で第X因子を活性化型Xaに転換する第IXa因子の補因子である。
第VIII因子遺伝子は、2つの選択的にスプライスされる転写物を産生する。転写物変異体1は、血漿中を循環し、フォンウィルブランド因子と非共有結合複合体で結合する大きな糖タンパク質、アイソフォームaをコードする。このタンパク質は、複数の切断事象を経る。転写物変異体2は、主に第VIIIc因子のリン脂質結合ドメインからなる推定小タンパク質、アイソフォームbをコードする。この結合ドメインは、凝血活性に必須である。
ヒト第VIII因子遺伝子の完全な186,000塩基対配列は、1980年代半ばに解明された(Gitschierら(1984) Nature 312 326-330)。同時に、完全な2,351個のアミノ酸配列をコードするDNAクローンを使用して、培養哺乳動物細胞において生物学的に活性な第VIII因子が作製された(Woodら(1984) Nature 312:330-337)。ヒト第VIII因子の完全な2,351個のアミノ酸配列を配列番号33に示す。
溶解性
本発明の第一の実施形態のペプチドは、下記ペプチドのうちの1種についての修飾形態である:
本発明の第一の実施形態のペプチドは、下記ペプチドのうちの1種についての修飾形態である:
これらのペプチドは、アピトープとして働き、in vivoで寛容原性（tolerogenic）であることが既に示されている(実施例及び国際特許出願PCT/GB2008/003996を参照されたい)。
ペプチド媒介寛容誘導において、溶解性が重要な考慮点であることが、それ以来明らかになっている。
本発明者らは、溶解性が、両端のグリシンスペーサーの組込み、それに続く、N及びC両末端のリジン(K)及び/又はグルタミン酸(E)とすることができる2個の追加のアミノ酸の組合せによって改善され得ることを発見した。したがって、所与の末端での可能な組合せは、KK、KE、EK又はEEである。
したがって、本発明の修飾ペプチドは、親DNIVM及びPRCLTペプチドと比較して、6個の追加のアミノ酸(各末端に3個)を有する。
本発明のペプチドは、一般式:
XXGDNIMVTFRNQASRPYGXX 又は
XXGPRCLTRYYSSFVNMEGXX
［式中、Xは、リジン又はグルタミン酸である。］
を有する。
XXGDNIMVTFRNQASRPYGXX 又は
XXGPRCLTRYYSSFVNMEGXX
［式中、Xは、リジン又はグルタミン酸である。］
を有する。
修飾ペプチドは、親(非修飾)ペプチドよりも可溶性であり得る。修飾ペプチドは、親ペプチドよりも2、3、4、又は5倍大きい溶解性を有し得る。ペプチドは、最大0.5mg/ml、1mg/ml、又は5mg/mlの濃度で可溶性であり得る。
寛容
T細胞エピトープは、自己のものであろうと外来性であろうと、任意の抗原への適応免疫応答において、中心的な役割を果たす。過敏性疾患(アレルギー、自己免疫疾患及び移植片拒絶反応を含む)においてT細胞エピトープが果たす中心的な役割は、実験モデルの使用を通して実証された。炎症性又はアレルギー性疾患を、アジュバントと組み合わせた(T細胞エピトープの構造に基づいた)合成ペプチドの注射によって誘導することが可能である。
T細胞エピトープは、自己のものであろうと外来性であろうと、任意の抗原への適応免疫応答において、中心的な役割を果たす。過敏性疾患(アレルギー、自己免疫疾患及び移植片拒絶反応を含む)においてT細胞エピトープが果たす中心的な役割は、実験モデルの使用を通して実証された。炎症性又はアレルギー性疾患を、アジュバントと組み合わせた(T細胞エピトープの構造に基づいた)合成ペプチドの注射によって誘導することが可能である。
対照的に、特定の抗原への免疫寛容は、可溶型のペプチドエピトープの投与によって誘導することが可能であることが示された。可溶性ペプチド抗原の投与は、実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE-多発性硬化症(MS)のモデル)(Metzler and Wraith (1993) Int. Immunol. 5:1159-1165、Liu and Wraith (1995) Int. Immunol. 7:1255-1263、Anderton and Wraith (1998) Eur. J. Immunol. 28:1251-1261)、並びに関節炎、糖尿病及びブドウ膜網膜炎の実験モデル(上記のAnderton and Wraith(1998)で概説されている)において疾患を阻害する効果的な手段であることが実証された。これは、EAEにおいて進行中の疾患を治療する手段となることも実証された(上記のAnderton and Wraith(1998))。
寛容は、抗原に応答しないことである。自己抗原への寛容は免疫系の本質的な特徴であり、これが失われた場合、自己免疫疾患が生じ得る。適応免疫系は、それ自体の組織内に含まれる自己抗原の自己免疫性攻撃を回避する一方で、膨大な種類の感染病原体に応答する能力を維持しなければならない。これは、胸腺における未熟Tリンパ球のアポトーシス細胞死への感受性によって、かなりの程度まで調節されている(中枢性寛容)。しかしながら、全ての自己抗原が胸腺において検出される訳ではないので、自己反応性胸腺細胞の死は不完全なままである。したがって、末梢組織の成熟自己反応性Tリンパ球によって寛容が獲得され得る機構もある(末梢性寛容)。中枢性及び末梢性寛容の機構は、Andertonら(1999)(Immunological Reviews 169:123-137)において概説されている。
血友病Aにおいて、患者は第VIII因子遺伝子における欠損を有する。これは、第VIII因子が免疫系によって「自己」抗原として認識されないことを意味する。したがって、凝血因子補充療法中に第VIII因子が投与された場合、外来タンパク質への同種免疫応答が発生し、FVIIIインヒビター抗体の産生につながる。
本発明のペプチドは、FVIIIが予防的に投与される場合に、免疫応答を誘発せず、FVIIIインヒビターが発達しないように、治療的に投与される場合に進行中のFVIIIインヒビター産生が低下又は阻害されるように、第VIII因子への寛容を誘導する能力がある。
後天性血友病は、第VIII因子への寛容が崩壊している自己免疫疾患である。この場合、本発明のペプチドを投与して、この自己タンパク質への寛容を元通りにし、病因となる免疫応答を抑えることができる。
寛容は、CD4+T細胞の少なくとも一部におけるアネルギーの誘導から生じ得る、又はこれによって特徴付けられ得る。T細胞を活性化するために、ペプチドは、T細胞に2つのシグナルを送達する能力がある「プロフェッショナル」APCと結合しなければならない。第一のシグナル(シグナル1)は、APCの細胞表面のMHC-ペプチド複合体によって送達され、TCRを介してT細胞によって受け取られる。第二のシグナル(シグナル2)は、CD80、CD86などの、APCの表面の共刺激分子によって送達され、T細胞の表面のCD28によって受け取られる。T細胞が、シグナル2の非存在下でシグナル1を受け取ると、それは活性化されず、実際、アネルギー性になると考えられている。アネルギー性T細胞は、その後の抗原接種に不応性であり、他の免疫応答を抑制する能力があり得る。アネルギー性T細胞は、T細胞寛容の媒介に関与していると考えられている。
理論に拘束されることを望まないが、本発明者らは、MHC分子と結合して提示され得る前にプロセシングを必要とするペプチドは、成熟抗原提示細胞により処理される必要があるので、寛容を誘導しないと予測する。(マクロファージ、B細胞及び樹状細胞などの)成熟抗原提示細胞は、抗原プロセシングの能力があるが、シグナル1及び2の両方をT細胞に送達する能力もあり、これがT細胞活性化につながる。他方、アピトープは、未熟APCのクラスII MHCに結合することができる。したがって、それらは共刺激なしにT細胞に提示されることになり、T細胞アネルギー及び寛容をもたらす。
当然のことながら、アピトープは、成熟APCの細胞表面でMHC分子に結合する能力もある。しかしながら、免疫系は、成熟APCよりも未熟APCをより豊富に含有する(樹状細胞の10%未満が活性化されることが示唆されている、Summersら(2001) Am. J. Pathol. 159: 285-295)。したがって、アピトープへのデフォルトの位置(default position)は、活性化ではなくアネルギー/寛容となる。
FVIIIへの寛容の誘導は、当技術分野で公知の技法によって
(i)FVIII阻害性抗体、
(ii)FVIIIに特異的なCD4+T細胞
(iii)FVIII阻害性抗体を分泌する能力があるB細胞
のレベルの低下を調べることによって、in vivoでモニターすることができる。
(i)FVIII阻害性抗体、
(ii)FVIIIに特異的なCD4+T細胞
(iii)FVIII阻害性抗体を分泌する能力があるB細胞
のレベルの低下を調べることによって、in vivoでモニターすることができる。
したがって、寛容の誘導は、
(a)CD4+T細胞におけるアネルギーの誘導(その後のin vitroでのFVIII接種によって検出することができる)
(b)(i)増殖の低下、
(ii)IL-2、IFN-γ及びIL-4の産生の下方制御、及び
(iii)IL-10の産生の増加
を含む、CD4+T細胞集団の変化
を含む様々な技法によってモニターすることもできる。
(a)CD4+T細胞におけるアネルギーの誘導(その後のin vitroでのFVIII接種によって検出することができる)
(b)(i)増殖の低下、
(ii)IL-2、IFN-γ及びIL-4の産生の下方制御、及び
(iii)IL-10の産生の増加
を含む、CD4+T細胞集団の変化
を含む様々な技法によってモニターすることもできる。
本明細書では、「寛容原性の」という用語は、寛容を誘導する能力があることを意味する。
組成物
本発明は、本発明による1種以上のペプチドを含む医薬組成物などの組成物にも関する。
本発明は、本発明による1種以上のペプチドを含む医薬組成物などの組成物にも関する。
組成物は、ペプチドDNIMVTFRNQASRPYの修飾形態及びペプチドPRCLTRYYSSFVNMEの修飾形態を含むことができる。
ペプチドは、複数のペプチド、例えば、2、3、4、5又は6種のペプチドを含むことができる。
本発明の組成物は、予防的又は治療的使用のためのものとすることができる。
予防的使用のために投与する場合、組成物は、FVIIIへの免疫応答の発生を低下又は予防することができる。免疫応答のレベルは、組成物で治療されなかった患者において得られるレベル未満である。「低下する」という用語は、組成物で治療されなかった患者において観察される応答の(又は同じ時間枠にわたって治療されていない患者において観察される応答の)50%、70%、80%又は90%の低下などの、免疫応答の部分的な低下が観察されることを意味する。「予防する」という用語は、FVIIIへの測定可能な免疫応答が観察されないことを意味する。
治療的使用のために投与する場合、組成物は、FVIIIへの既に進行中の免疫応答を抑制することができる。「抑制する」という用語は、ペプチド治療前のレベル又は治療がされなかった場合に同時点で観察されるレベルと比較した、進行中の免疫応答のレベルの低下を意味する。
本発明の組成物での治療は、下記のいずれか又は全てについてレベルの低下を引き起こすことができる:
(i)FVIII阻害性抗体、
(ii)FVIIIに特異的なCD4+T細胞
(iii)FVIII阻害性抗体を分泌するB細胞。
(i)FVIII阻害性抗体、
(ii)FVIIIに特異的なCD4+T細胞
(iii)FVIII阻害性抗体を分泌するB細胞。
これらの因子は全て、ELISA、フローサイトメトリー、発色凝固アッセイなどの、当技術分野で公知の技法によって検出することができる。
加えて又は代わりに、本発明の組成物での治療は、FVIIIに特異的なCD4+T細胞においてアネルギーを引き起こすこともできる。アネルギーは、例えばその後のin vitroでのFVIII接種によって、検出することができる。
FVIIIへの全ての免疫応答が病因となる訳ではないことを念頭に置いておくことは重要である。インヒビターを有さない血友病患者(Moreauら(2000) Blood 95:3435-41)及び健康な献血者の約15%(Algimanら(1992) 89:3795-9)において、非阻害性抗FVIII抗体が見出され得る。
FVIIIインヒビターは、正常血漿中のFVIIIを不活化する患者の血漿の能力を試験する、ベセスダ凝固アッセイのNijmegen変法によって、検出することができる。ベセスダ単位は、血漿FVIII活性の50%を中和する抗体の量と定義され、0.6BU以上の力価は、抗体の存在を示唆する。
インヒビターは、一般に、そのレベルが<5BUである場合低力価に、≧5BUである場合高力価に分類される。
循環FVIII阻害性抗体のレベルは、患者が治療を受けなかった場合に観察される抗体のレベルの90%、75%、50%、20%、10%、5%まで低下させることができる。
循環FVIII阻害性抗体のレベルは、5、4、3、2、1又は0.5BUまで低下させることができる。
本発明のペプチド及び組成物は、患者における凝固を助けるのに利用可能な治療的に投与されるFVIIIの量又は割合を増加させることができる。これは、ある割合のFVIIIをその治療的機能を発揮することから効果的に排除し得るFVIIIインヒビターの減少による。本発明のペプチド又は組成物は、利用可能なFVIIIの量を、例えば、10%、25%、50%、75%又は100%増加させることができる。
したがって、本発明のペプチド及び組成物は、患者における凝固を助けるために投与する必要があるFVIIIの量を減少させることができる。
製剤化
組成物は、溶液又は懸濁液としての注射剤として調製することができ、注射前に液体中に溶解又は懸濁させるのに適した固体形態を調製することもできる。この調製物は、乳化することもでき、又はペプチドは、リポソームに封入することができる。活性成分は、薬学的に許容され、活性成分と適合性の賦形剤と混合することができる。適した賦形剤は、例えば、水、生理食塩水(例えば、リン酸緩衝生理食塩水)、デキストロース、グリセロール、エタノールなど及びそれらの組合せである。
組成物は、溶液又は懸濁液としての注射剤として調製することができ、注射前に液体中に溶解又は懸濁させるのに適した固体形態を調製することもできる。この調製物は、乳化することもでき、又はペプチドは、リポソームに封入することができる。活性成分は、薬学的に許容され、活性成分と適合性の賦形剤と混合することができる。適した賦形剤は、例えば、水、生理食塩水(例えば、リン酸緩衝生理食塩水)、デキストロース、グリセロール、エタノールなど及びそれらの組合せである。
さらに、望ましい場合、組成物は、湿潤剤又は乳化剤及び/又はpH緩衝剤などの補助物質を少量含有することができる。緩衝塩は、リン酸塩、クエン酸塩、酢酸塩を含み、塩酸及び/又は水酸化ナトリウムは、pH調整に使用することができる。安定化のために、スクロース又はトレハロースなどの二糖類を使用することができる。
組成物が、複数のペプチドを含む場合、ペプチドの相対比はほぼ等しいものとすることができる。あるいはまた、例えば、自己反応性T細胞の特定のサブセットに寛容原性応答を集中させるために、又は特定のHLA型においてあるペプチドが他のペプチドよりもよく作用することが発見されている場合に、各ペプチドの相対比を改変することができる。
製剤化後、組成物を滅菌容器に入れ、次いでこれを密封して低温、例えば4℃で保存することができ、又は組成物をフリーズドライすることができる。
好都合に、組成物は、凍結乾燥(フリーズドライ)粉末として調製される。凍結乾燥は、安定化した形での長期保存を可能にする。凍結乾燥手順は、当技術分野で周知であり、例えば、http://www.devicelink.com/ivdt/archive/97/01/006.htmlを参照されたい。フリーズドライに先だって、マンニトール、デキストラン、又はグリシンなどの増量剤が通例使用される。
組成物は、経口、静脈内(水溶性の場合)、筋肉内、皮下、舌下、鼻腔内、皮内若しくは坐剤経路又は埋め込み(例えば、持続放出分子を使用して)によってなどの都合のよい様式で投与することができる。
組成物は、鼻腔内、皮下又は皮内経路を介して有利に投与することができる。
本発明のペプチド及び組成物を使用して、ヒト対象を治療することができる。対象は、血友病A、特に重症血友病Aを有し得る。対象は、遺伝的にFVIIIを欠乏し得る。対象は、後天性血友病を有し得る。対象は、阻害性抗FVIII抗体を有し得る。
対象は、FVIIIでの凝血剤補充療法を受けているか、受けようとしていてもよい。
対象は、[FVIIIでの凝血剤補充療法とともに又はこれなしに]バイパス剤での療法を受けているか、受けようとしていてもよい。
対象は、FVIII遺伝子での遺伝子療法を受けているか、受けようとしていてもよい。
対象は、阻害性抗FVIII同種抗体又は自己抗体を発達させる素因と関連しているHLAハプロタイプとすることができる。対象は、HLA-DR2を発現する対象であり得る。個体のHLAハプロタイプを決定するための方法は、当技術分野で公知である。
典型的に、医師は、個々の対象に最も適した実際の投与量を決定し、それは、特定の患者の年齢、体重及び応答によって異なる。
好ましい実施形態において、複数の用量を濃度を段階的に上げて患者に投与する、「用量漸増」プロトコールに従うことができる。そのような手法は、例えば、ハチ毒アレルギーに対する免疫療法適用におけるホスホリパーゼA2ペプチドに使用されてきた(Mullerら(1998) J. Allergy Clin Immunol. 101:747-754及びAkdisら(1998) J. Clin. Invest. 102:98-106)。
キット
組成物が複数のペプチドを含む場合、それらを好都合に混合組成物又はカクテルの形態で一緒に投与することができる。しかしながら、同時、個別、連続又は組合せ投与のために、ペプチドをキットの形態で別々に提供することが好ましい状況があり得る。
組成物が複数のペプチドを含む場合、それらを好都合に混合組成物又はカクテルの形態で一緒に投与することができる。しかしながら、同時、個別、連続又は組合せ投与のために、ペプチドをキットの形態で別々に提供することが好ましい状況があり得る。
キットは、混合及び/又は投与手段(例えば、鼻腔内投与のための気化器、又は皮下/皮内投薬のための注射器及び注射針)を含むこともできる。キットは、使用説明書を含むこともできる。
本発明の医薬組成物又はキットを使用して、疾患を治療及び/又は予防することができる。
特に、組成物/キットを使用して、血友病A又は後天性血友病患者における抗FVIIIインヒビター形成を治療及び/又は予防することができる。組成物/キットを使用して、中和FVIII抗体の存在によって損なわれた血友病を治療することができる。
血友病A
血友病A(古典的血友病)は、第VIII因子の欠乏によって引き起こされる。
血友病A(古典的血友病)は、第VIII因子の欠乏によって引き起こされる。
血友病Aは、男性10,000人当たり1人の推定発症率を有し、一方、血友病Bは、男性40,000人当たり1人発症すると推定されている。女性5,000人当たり約1人が、血友病Aの保因者であり、20,000人当たり1人が、血友病Bの保因者である。
血友病は、血中の凝固因子のレベルに基づいて、3つのクラス:重症、中等症及び軽症に典型的に分類される。重症血友病では、正常凝固因子は1%未満である。重症度は何世代にもわたって一貫している傾向がある。
通念に反して、小さな切り傷及び創傷は、血友病患者にとって通常は脅威ではない。むしろ、最大の危険は、関節及び筋肉内に生じ得る自発的出血から来る。これは、急成長の年齢期、典型的に5〜15歳で最も生じやすい。
関節における度重なる自発的出血は、関節炎を引き起こし得、隣接する筋肉が弱くなる。血液の蓄積によって引き起こされる神経への圧迫は、痛み、しびれ及び患部の一時的動作不能をもたらし得る。
血友病Aは、凝固の有効性を決定し、凝固因子のレベルが異常かどうかを調査する血液検査で通常診断される。
献血された血液から単離された、1970年代における精製凝固因子の開発により、血友病患者の長期予後が著しく改善した。軽症から中等症血友病患者は、FVIIIでの治療を臨時的に使用することができ、一方、重症血友病患者は、定期的、無期限の治療を必要とし得る。
以前、患者は、何千もの献血血漿からプールされた第VIII因子濃縮物を投与された。これは、ウイルス性の病原体、特にヒト免疫不全ウイルス及び肝炎ウイルスでの汚染という重大な問題につながる。モノクローナル抗体精製技法、熱不活化及び殺ウイルス性界面活性剤処置により、血漿由来濃縮物は比較的安全になった。
現在、組換えDNA技術によって、Recombinate(商標)、Kogenate(商標)などの一連の合成製品が提供されている。Kogenateは、ヒト第VIII因子を発現するベビーハムスター腎細胞を使用して作製される。得られた因子は、高度に精製され、血漿からのウイルスの伝染のあらゆる可能性が排除されている。
本発明のペプチド又は組成物は、第VIII因子補充療法前及び/又は療法中に投与することができる。
血友病Aは、遺伝子治療の理想的な疾患標的である。何故なら、i)それは、単一の同定された遺伝子の変異によって引き起こされ、ii)in vivoでの凝固因子レベルの僅かな増加により、重症血友病をより軽症の疾患に転換することができ、且つiii)現行の補充療法が次善と考えられているからである。また、凝血活性の所望のレベルの「超過」がある場合、幅広い安全性がある。
残念ながら、主として、凝固因子の長期発現を可能にするのに十分非免疫原性である遺伝子送達系を見出す困難さのために、血友病の治療法としての遺伝子療法の将来性は現在に至るまで実現されていない。
本発明のペプチドは、第VIII因子での遺伝子療法前に対象を寛容化する、及び/又は遺伝子療法後の患者におけるFVIIIインヒビター形成を管理するのにも適している。
後天性血友病
後天性血友病は、以前は正常な凝血を有した個体におけるFVIIIに対する自己抗体インヒビターの存在によって特徴付けられる。それは、年間の推定発症率が人口百万人当たり1〜3人である、希な状態である。後天性自己抗体インヒビターと関連している死亡率は、同種抗体を有する人における実質的により低い死亡リスクと比較して25%に達する。
後天性血友病は、以前は正常な凝血を有した個体におけるFVIIIに対する自己抗体インヒビターの存在によって特徴付けられる。それは、年間の推定発症率が人口百万人当たり1〜3人である、希な状態である。後天性自己抗体インヒビターと関連している死亡率は、同種抗体を有する人における実質的により低い死亡リスクと比較して25%に達する。
同種抗体インヒビター患者と比較して、後天性血友病は、(1)より重症の出血パターン、(2)高齢集団におけるより高い発症率、(3)約50%の症例における、特定可能な根底にある自己免疫疾患、リンパ球増殖性又は固形腫瘍悪性疾患、妊娠、及びペニシリン及びスルホンアミドなどのいくつかの抗生物質の使用に関連した発生、及び(4)患者血漿中の2%〜18%の範囲の残存第VIII因子レベルを典型的にもたらす、自己抗体による標的凝固因子活性の不完全な中和を有するII型薬物動態パターンに従うin vitroインヒビター活性、によって特徴付けられる。
本発明のペプチド又は組成物は、後天性血友病を有する患者に、又は、例えば、
i)例えばペニシリン又はスルホンアミドでの差し迫った治療、
ii)腫瘍又は他の悪性疾患の進行、
iii)差し迫った妊娠又は妊娠初期
のために後天性血友病を発症するリスクがあると考えられる患者に投与することができる。
i)例えばペニシリン又はスルホンアミドでの差し迫った治療、
ii)腫瘍又は他の悪性疾患の進行、
iii)差し迫った妊娠又は妊娠初期
のために後天性血友病を発症するリスクがあると考えられる患者に投与することができる。
ここで、実施例を介して本発明をさらに記載するが、これらは、本発明の実施において当業者を助けるのに役立つものであるとし、本発明の範囲を限定することは決して意図されていない。
[実施例1]
FVIII由来ペプチドの溶解性を調査する
合計32種のペプチドを試験した:そのうちの16種は、FVIIIペプチドPRCLTRYYSSFVNME(「PRCLT」)に基づき、そのうちの16種は、FVIIIペプチドDNIMVTFRNQASRPY(「DNIMV」)に基づくものとした。ペプチドを、下記表1及び2に要約する。
FVIII由来ペプチドの溶解性を調査する
合計32種のペプチドを試験した:そのうちの16種は、FVIIIペプチドPRCLTRYYSSFVNME(「PRCLT」)に基づき、そのうちの16種は、FVIIIペプチドDNIMVTFRNQASRPY(「DNIMV」)に基づくものとした。ペプチドを、下記表1及び2に要約する。
20mg/mLの各試験ペプチドの原液を、DMSO中で調製した。4Yとして知られるMBP由来ペプチドである、対照ペプチドの原液も、DMSO中で調製した。ペプチド4Yは、配列Ac-ASQYRPSQRを有する。それは、構造的に試験ペプチドに似ていないが、寛容化抗原としての適用に十分に溶解性であることが知られている。
96ウェルプレートに水を加えることによって、40μL量のペプチド溶液の段階的な希釈を行い、10、5、2.5及び1.25mg/mLの濃度を得た。
プレートを、室温で1時間放置してあらゆる沈殿物を形成させ、次いで14,800rpmで10分間遠心分離して、完全に溶解した溶質から沈殿した/コロイド性ペプチドを分離した。
2μL試料を、各チューブの最上部から分析のために取り出した。吸光度を、280nmの波長で測定し、濃度(mg/mL)を算出した。
結果を、図1に示す。いくつかのタグを付けたペプチドは、高濃度でさえも4Yに等しい溶解性を示した。緑にコードされたペプチドは、対照ペプチド4Yと同じくらいの溶解性であり、赤にコードされたペプチドは、溶解性が乏しく、琥珀にコードされた1種のペプチドは、中間の溶解性を有した。
[実施例2]
臨床的に関連する濃度でのタグを付けたペプチドの水性溶媒への直接溶解
各試験ペプチド及び親ペプチド(PRCLT及びDNIMV)に関して、DMSO(対照)又はPBS中の4mg/mLで、2つのチューブを調製した。
臨床的に関連する濃度でのタグを付けたペプチドの水性溶媒への直接溶解
各試験ペプチド及び親ペプチド(PRCLT及びDNIMV)に関して、DMSO(対照)又はPBS中の4mg/mLで、2つのチューブを調製した。
各チューブを、小型遠心機において最高速度で5分間回転させた。各溶液の上部から10μL試料を取り出し、分子量及び吸収の係数を各ペプチドに関して記録した。
上清の吸光度を、NanoDropを使用して測定し、濃度を算出した。実際の濃度を、4mg/mLの期待値と比較し、結果を図2に示す。この図において、実際と期待濃度間のより大きな差異は、より低い比溶解性に相当する。
図2において示されるように、タグを付けたペプチド配列番号1、2、9、10、17、18、25及び26は全て、親ペプチドと比較して、PBS中の改善された溶解性を有した。
[実施例3]
タグを付けたペプチドは、アピトープとして働く
HLA-DR2トランスジェニックマウスを、親ペプチドPRCLT又はDNIMVで抗原刺激した。次いで、脾臓及びリンパ節を採取し、CD4精製後、細胞を、1ug/mlヒト組換えFVIIIで再刺激した。BW5147細胞との融合後、得られたクローンを増殖させ、DNIMV又はPRCLTへの特異性を「スクリーニングした」。これは、5×104DR2陽性抗原提示細胞(MGAR細胞系)及び10ug/ml PRCLT/DNIMV又は培地で48時間、ハイブリドーマ細胞をインキュベートすることによって行われる。次いで、上清を、ELISAによってIL-2産生に関して分析した。
タグを付けたペプチドは、アピトープとして働く
HLA-DR2トランスジェニックマウスを、親ペプチドPRCLT又はDNIMVで抗原刺激した。次いで、脾臓及びリンパ節を採取し、CD4精製後、細胞を、1ug/mlヒト組換えFVIIIで再刺激した。BW5147細胞との融合後、得られたクローンを増殖させ、DNIMV又はPRCLTへの特異性を「スクリーニングした」。これは、5×104DR2陽性抗原提示細胞(MGAR細胞系)及び10ug/ml PRCLT/DNIMV又は培地で48時間、ハイブリドーマ細胞をインキュベートすることによって行われる。次いで、上清を、ELISAによってIL-2産生に関して分析した。
ペプチドと共にインキュベートした場合に特異的にIL-2を産生したクローンを増殖させ、FVIII(1ug/ml)を用いて再びスクリーニングした。
次いで、FVIIIとペプチドの両方に応答してIL-2を産生したクローンを使用して、修飾DNIMV及びPRCLTペプチドがアピトープであるかどうか、すなわち、それらが、MHC分子に結合し、固定と新鮮APCの両方によりT細胞に提示される能力があるかどうかを評価した。
5×104ハイブリドーマ細胞を、5×104新鮮又は固定MGAR細胞、及び10ug/mlのペプチド、1ug/ml FVIII又は培地中で48時間インキュベートした。次いで、上清を、ELISAを使用してIL-2に関して分析した。結果を、PRCLTに関して図3aに、DNIMVに関して図3bに示す。
タグを付けたペプチドの全ては、固定抗原提示細胞によって提示される能力があり、それらは全て親ペプチドPRCLT及びDNIMVのようにアピトープであることを示した。
[実施例4]
Ex vivo T細胞寛容
修飾アピトープが親ペプチドへのT細胞応答を制御する能力があるかどうかを決定するために、雄HLA-DR2トランスジェニックマウスを、3×100μgペプチド(ペプチド配列番号1、2、17又は18)又は対照としてPBSで処置し、次いで、完全フロイントアジュバント中のそれぞれ100μgの親ペプチド(PRCLT及びDNIMV)で免疫化した。10日後、流入領域リンパ節及び脾臓を採取し、PRCLT又はDNIMVでin vitroで刺激した。結果を、図4(PRCLT)及び5(DNIMV)に示す。修飾ペプチド配列番号1又は配列番号2での処置は、PRCLTへのT細胞応答を低下させ、修飾ペプチド配列番号17又は配列番号18での処置は、DNIMVへのT細胞応答を低下させる。したがって、修飾ペプチドは、親ペプチドで免疫されたマウスからの免疫応答を低下させることができる。
Ex vivo T細胞寛容
修飾アピトープが親ペプチドへのT細胞応答を制御する能力があるかどうかを決定するために、雄HLA-DR2トランスジェニックマウスを、3×100μgペプチド(ペプチド配列番号1、2、17又は18)又は対照としてPBSで処置し、次いで、完全フロイントアジュバント中のそれぞれ100μgの親ペプチド(PRCLT及びDNIMV)で免疫化した。10日後、流入領域リンパ節及び脾臓を採取し、PRCLT又はDNIMVでin vitroで刺激した。結果を、図4(PRCLT)及び5(DNIMV)に示す。修飾ペプチド配列番号1又は配列番号2での処置は、PRCLTへのT細胞応答を低下させ、修飾ペプチド配列番号17又は配列番号18での処置は、DNIMVへのT細胞応答を低下させる。したがって、修飾ペプチドは、親ペプチドで免疫されたマウスからの免疫応答を低下させることができる。
[実施例5]
Ex vivo T細胞寛容
親ペプチドへのT細胞応答の制御に対する修飾アピトープの効果が、FVIIIへの応答の制御にまで及ぶかどうかを決定するために、雌HLA-DR2トランスジェニックマウスを、3×100μgペプチド(ペプチド配列番号1又は配列番号17)で処置し、次いで、完全フロイントアジュバント中のそれぞれ100μgの親ペプチド(PRCLT及びDNIMV)で抗原刺激した。10日後、流入領域リンパ節を採取し、PRCLT、DNIMV又は組換えFVIIIでin vitroで刺激した。結果を、図6に示す。ペプチド配列番号1は、PRCLTペプチドへのT細胞応答を有意に(p<0.01)低下させた。ペプチド配列番号17は、DNIMVへのT細胞応答を有意に(p<0.02)低下させた。
Ex vivo T細胞寛容
親ペプチドへのT細胞応答の制御に対する修飾アピトープの効果が、FVIIIへの応答の制御にまで及ぶかどうかを決定するために、雌HLA-DR2トランスジェニックマウスを、3×100μgペプチド(ペプチド配列番号1又は配列番号17)で処置し、次いで、完全フロイントアジュバント中のそれぞれ100μgの親ペプチド(PRCLT及びDNIMV)で抗原刺激した。10日後、流入領域リンパ節を採取し、PRCLT、DNIMV又は組換えFVIIIでin vitroで刺激した。結果を、図6に示す。ペプチド配列番号1は、PRCLTペプチドへのT細胞応答を有意に(p<0.01)低下させた。ペプチド配列番号17は、DNIMVへのT細胞応答を有意に(p<0.02)低下させた。
ペプチド配列番号1は、PRCLTへの応答を制御し、ペプチド配列番号17は、DNIMVへの応答を制御した。個々のペプチドを有するFVIIIに応答した、有意でないいくつかの低下もあった。FVIII免疫応答に対するペプチドの有効性を強化するために、修飾DNIMV及び修飾PRCLTの組合せを更なる実験において使用した。
[実施例6]
PRCLT及びDNIMV修飾ペプチドの組合せの用量漸増での抗体産生予防
雄HLA-DR2トランスジェニックマウスを、用量漸増プロトコールに従って、ペプチド配列番号1及びペプチド配列番号17の組合せで処置した。組合せの6回の注射を、以下の用量で投与した:(組合せ中の各ペプチドに関して)0.1、1.0、10及び3×100μg。
PRCLT及びDNIMV修飾ペプチドの組合せの用量漸増での抗体産生予防
雄HLA-DR2トランスジェニックマウスを、用量漸増プロトコールに従って、ペプチド配列番号1及びペプチド配列番号17の組合せで処置した。組合せの6回の注射を、以下の用量で投与した:(組合せ中の各ペプチドに関して)0.1、1.0、10及び3×100μg。
次いで、動物を、1μg組換えヒトFVIII、及びペプチド配列番号1/配列番号17(各100μg)の組合せでの併用処置(rFVIII免疫化3日後)で毎週プライムし、4回及び8回のFVIII免疫化後に採取した血液試料から抗FVIII抗体の産生を分析した(それぞれ、28日目、図7a、56日目、図7b)。血清を滴定し、直接ELISAによって分析した。非免疫マウスの抗体価は、全ての場合において陰性であり、一方、抗FVIII抗体は処置マウスの血清中に存在していると考えられ、結合割合は(割合を算出するために陰性血清を使用して)、1.9より大きかった。結果を、実験の28日目及び56日目について図7a及びbにそれぞれ示す。
さらに、中和FVIII抗体を、56日目に測定した。FVIII中和抗体を、発色法を使用して決定した。簡潔に述べると、試料を、1IU/ml FVIIIと混合し、凝血を、FIX、FX、トロンビン、CaCl2及びリン脂質の添加によって開始させた。インキュベーション後、生成したFXaの量を、発色基質S-2760の添加によって決定し、ODシグナルを測定した。ODシグナルは、試料中のFVIII活性と比例し、既知量のFVIIIを含有し、中和抗体を含有しない試料と比較する。試験試料の残存活性%を、標準試料と比較して算出し、ベセスダ様単位で表し、図8に示した。ペプチド配列番号1及び配列番号17で処置したマウスは、PBSで処置したマウスよりも有意に低いレベルの中和抗FVIII抗体を有した。
[実施例7]
PRCLT及びDNIMV修飾ペプチドの組合せの用量漸増を使用したEx vivo T細胞寛容
雄/雌DR2マウスを、実施例6に記載した用量漸増プロトコールに従って、ペプチド配列番号1/配列番号17の組合せで処置した。
PRCLT及びDNIMV修飾ペプチドの組合せの用量漸増を使用したEx vivo T細胞寛容
雄/雌DR2マウスを、実施例6に記載した用量漸増プロトコールに従って、ペプチド配列番号1/配列番号17の組合せで処置した。
動物を、CFA中の100μg PRCLT及び100μg DNIMVで免疫刺激した。10日後、流入領域リンパ節細胞及び脾細胞を単離し、組換えヒトFVIIIでin vitroで再刺激した。
T細胞応答を、増殖アッセイにより評価した(図9)。マウスをペプチド配列番号1及び配列番号17の組合せで処置した場合、試験したFVIIIの全ての濃度にわたって、FVIIIへのT細胞応答の有意な低下がみられた。
[実施例8]
治療動物モデルにおける、PRCLT及びDNIMV修飾ペプチドの組合せの用量漸増での中和抗体産生の抑制
HLA-DR2トランスジェニックマウスを、CFA中の3μg rFVIIIで抗原刺激し、免疫化の3週間後、用量漸増プロトコールに従ってペプチド配列番号1及びペプチド配列番号17の組合せで処置した。組合せの6回の注射を、以下の用量で投与した:(組合せ中の各ペプチドに関して)0.1、1.0、10及び3×100μg。対照動物を、同じ用量漸増プロトコールを使用して、関係のないFVIII DR2結合前立腺酸性ホスファターゼ(PAP)133〜152ペプチド(PCT/US2006/031961に記載された配列、配列番号15)で処置した。全ての動物に、rFVIII免疫化の5週間後及びペプチド処置の最後のラウンドの4日後に、IFA中の3μg rhFVIIIで追加免疫をほどこした。中和抗体の産生を、最初のFVIII免疫化の3週間後及びあらゆるペプチド処置の前、5週目(FVIII追加免疫化前及びペプチド処置後)及び7、9及び13週目での追跡調査期間中に、採取した血漿試料から分析した。血漿試料中の中和FVIII抗体レベルを、実施例6に記載したように決定した。
治療動物モデルにおける、PRCLT及びDNIMV修飾ペプチドの組合せの用量漸増での中和抗体産生の抑制
HLA-DR2トランスジェニックマウスを、CFA中の3μg rFVIIIで抗原刺激し、免疫化の3週間後、用量漸増プロトコールに従ってペプチド配列番号1及びペプチド配列番号17の組合せで処置した。組合せの6回の注射を、以下の用量で投与した:(組合せ中の各ペプチドに関して)0.1、1.0、10及び3×100μg。対照動物を、同じ用量漸増プロトコールを使用して、関係のないFVIII DR2結合前立腺酸性ホスファターゼ(PAP)133〜152ペプチド(PCT/US2006/031961に記載された配列、配列番号15)で処置した。全ての動物に、rFVIII免疫化の5週間後及びペプチド処置の最後のラウンドの4日後に、IFA中の3μg rhFVIIIで追加免疫をほどこした。中和抗体の産生を、最初のFVIII免疫化の3週間後及びあらゆるペプチド処置の前、5週目(FVIII追加免疫化前及びペプチド処置後)及び7、9及び13週目での追跡調査期間中に、採取した血漿試料から分析した。血漿試料中の中和FVIII抗体レベルを、実施例6に記載したように決定した。
図10における結果は、FVIIIでの免疫化の3週間後(3週目)のペプチド配列番号1及び配列番号17での処置が、対照ペプチドでの処置と比較して、追加免疫化(5週目)後の中和抗FVIII抗体の形成を有意に抑制することを示している。
上記の明細書に記載した全ての刊行物は、参照によって本明細書に組み込まれる。記載した方法及び本発明の体系の様々な変更形態及び変形形態は、本発明の範囲及び精神から逸脱することなく、当業者に明らかであろう。本発明を特定の好ましい実施形態に関連づけて記載したが、特許請求した本発明が、そのような特定の実施形態に不当に制限されるべきではないことが理解されよう。実際に、分子免疫学又は関連分野の当業者には明白である、本発明を実行するための記載した様式の様々な変更形態は、下記特許請求の範囲の範囲内であることが意図される。
Claims (12)
- FVIII由来の配列DNIMVTFRNQASRPYを含むペプチドであって、
（ａ）以下の式：XXGDNIMVTFRNQASRPYGXX
［式中、Xはリジンまたはグルタミン酸である。］
を有し、かつ
（ｂ）以下の配列：
KKGDNIMVTFRNQASRPYGKK (配列番号17)
KKGDNIMVTFRNQASRPYGKE (配列番号18)
KKGDNIMVTFRNQASRPYGEK (配列番号19)
KEGDNIMVTFRNQASRPYGKK (配列番号25)
KEGDNIMVTFRNQASRPYGKE (配列番号26)
KEGDNIMVTFRNQASRPYGEK (配列番号27)
EKGDNIMVTFRNQASRPYGKK (配列番号29)
EKGDNIMVTFRNQASRPYGKE (配列番号30)及び
EKGDNIMVTFRNQASRPYGEK (配列番号31)
の1つを有する、上記ペプチド。 - FVIII由来の配列PRCLTRYYSSFVNMEを含むペプチドであって、
（ａ）以下の式：XXGPRCLTRYYSSFVNMEGXX
［式中、Xはリジンまたはグルタミン酸である。］
を有し、かつ
（ｂ）以下の配列：
KKGPRCLTRYYSSFVNMEGKK (配列番号1)
KKGPRCLTRYYSSFVNMEGKE (配列番号2)
KKGPRCLTRYYSSFVNMEGEK (配列番号3)
EEGPRCLTRYYSSFVNMEGKK (配列番号5)
EEGPRCLTRYYSSFVNMEGEK (配列番号7)
KEGPRCLTRYYSSFVNMEGKK (配列番号9)
KEGPRCLTRYYSSFVNMEGKE (配列番号10)
KEGPRCLTRYYSSFVNMEGEK (配列番号11)及び
EKGPRCLTRYYSSFVNMEGKK (配列番号13)
の1つを有する、ペプチド。 - 請求項１又は２記載の1種以上のペプチドを含む、複数のペプチドを含む組成物。
- 少なくとも1種の請求項１記載のペプチド及び少なくとも1種の請求項２記載のペプチドを含む、請求項３記載の組成物。
- 配列番号１を有するペプチドと、配列番号１７を有するペプチドとを含む、請求項４記載の組成物。
- in vivoにおける第VIII因子インヒビター抗体の産生の抑制又は予防において使用するための、請求項１もしくは２記載のペプチド、又は請求項３〜５のいずれか１項記載の組成物。
- in vivoにおける第VIII因子インヒビター抗体の産生の抑制又は予防のための医薬の製造における、請求項１もしくは２記載のペプチド、又は請求項３〜５のいずれか１項記載の組成物の使用。
- 対象における第VIII因子インヒビター抗体の産生を抑制又は予防する方法であって、請求項１もしくは２記載のペプチド、又は請求項３〜５のいずれか１項記載の組成物を対象に投与するステップを含む、上記方法。
- 請求項１もしくは２記載のペプチド、又は請求項３〜５のいずれか１項記載の組成物を対象に投与するステップを含む、対象の血友病を治療する方法。
- 対象が血友病Aを有し、第VIII因子補充療法及び／又はFVIIIバイパス療法を受けているか、あるいは受けようとしている、請求項８又は９記載の方法。
- 対象が後天性血友病を有するか、又はこれに罹患するリスクを有する、請求項８又は９記載の方法。
- 対象がHLA-DR2である、請求項８〜１１のいずれか１項記載の方法。
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GBGB1220328.7A GB201220328D0 (en) | 2012-11-12 | 2012-11-12 | Peptides |
| GB1220328.7 | 2012-11-12 | ||
| GB1316660.8 | 2013-09-19 | ||
| GBGB1316660.8A GB201316660D0 (en) | 2013-09-19 | 2013-09-19 | Peptides |
| PCT/IB2013/060060 WO2014072958A1 (en) | 2012-11-12 | 2013-11-11 | Peptides |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2016501182A true JP2016501182A (ja) | 2016-01-18 |
| JP6247696B2 JP6247696B2 (ja) | 2017-12-13 |
Family
ID=49627013
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2015541291A Active JP6247696B2 (ja) | 2012-11-12 | 2013-11-11 | ペプチド |
Country Status (29)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20150306192A1 (ja) |
| EP (1) | EP2917232B1 (ja) |
| JP (1) | JP6247696B2 (ja) |
| KR (1) | KR102165486B1 (ja) |
| CN (1) | CN104903347B (ja) |
| AU (1) | AU2013343024B2 (ja) |
| BR (1) | BR112015010625B1 (ja) |
| CA (1) | CA2890835C (ja) |
| CY (1) | CY1119164T1 (ja) |
| DK (1) | DK2917232T3 (ja) |
| EA (1) | EA036483B1 (ja) |
| ES (1) | ES2626881T3 (ja) |
| HK (1) | HK1209138A1 (ja) |
| HR (1) | HRP20170794T1 (ja) |
| HU (1) | HUE033586T2 (ja) |
| IL (1) | IL238627B (ja) |
| IN (1) | IN2015DN03814A (ja) |
| LT (1) | LT2917232T (ja) |
| MX (1) | MX350777B (ja) |
| MY (1) | MY176708A (ja) |
| NZ (1) | NZ708812A (ja) |
| PH (1) | PH12015501033B1 (ja) |
| PL (1) | PL2917232T3 (ja) |
| PT (1) | PT2917232T (ja) |
| RS (1) | RS56069B1 (ja) |
| SG (1) | SG11201503657UA (ja) |
| SI (1) | SI2917232T1 (ja) |
| WO (1) | WO2014072958A1 (ja) |
| ZA (1) | ZA201503127B (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2018206358B2 (en) | 2017-01-04 | 2021-05-27 | Worg Pharmaceuticals (Zhejiang) Co., Ltd. | S-Arrestin peptides and therapeutic uses thereof |
| EP3715374A1 (en) | 2019-03-23 | 2020-09-30 | Ablevia biotech GmbH | Compound for the sequestration of undesirable antibodies in a patient |
| US11986536B2 (en) | 2019-03-23 | 2024-05-21 | Ablevia Biotech Gmbh | Compound for the sequestration of undesirable antibodies in a patient |
| GB201909774D0 (en) | 2019-07-08 | 2019-08-21 | Apitope Tech Bristol Limited | Method |
| WO2022063887A1 (en) | 2020-09-23 | 2022-03-31 | Ablevia Biotech Gmbh | Compound for increasing the efficacy of factor viii replacement therapy |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006188507A (ja) * | 2004-12-10 | 2006-07-20 | Tokyo Univ Of Agriculture & Technology | 蛋白質の溶解度向上方法 |
| WO2009095646A2 (en) * | 2008-01-28 | 2009-08-06 | Circassia Limited | Peptides from factor viii |
| JP2011505414A (ja) * | 2007-12-04 | 2011-02-24 | アピトープ テクノロジー （ブリストル） リミテッド | Ｆｖｉｉｉペプチドおよび血友病を寛容化することにおけるその使用 |
| WO2011060372A2 (en) * | 2009-11-13 | 2011-05-19 | Puget Sound Blood Center | Factor viii b cell epitope variants having reduced immunogenicity |
| WO2012058480A1 (en) * | 2010-10-27 | 2012-05-03 | Baxter International Inc. | Fviii peptides for immune tolerance induction and immunodiagnostics |
| JP2012527440A (ja) * | 2009-05-18 | 2012-11-08 | アピトープ テクノロジー （ブリストル） リミテッド | Ｆｖｉｉｉ由来ペプチド |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030191063A1 (en) | 2000-08-21 | 2003-10-09 | Wraith David Cameron | Peptide selection method |
| WO2002060917A2 (en) * | 2000-12-01 | 2002-08-08 | Regents Of The University Of Minnesota | Method to treat hemophilia |
| FR2842812A1 (fr) * | 2002-07-26 | 2004-01-30 | Pf Medicament | Procede de solubilisation de peptides hydrophobes et leur utilisation pour generer une reponse de type ctl antitumorale ou anti-infectueuse |
| CA2627247C (en) * | 2005-10-28 | 2013-04-02 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Hepatitis c virus ns2/3 activity assay |
-
2013
- 2013-11-11 LT LTEP13795002.8T patent/LT2917232T/lt unknown
- 2013-11-11 EA EA201590927A patent/EA036483B1/ru unknown
- 2013-11-11 HU HUE13795002A patent/HUE033586T2/hu unknown
- 2013-11-11 MY MYPI2015001224A patent/MY176708A/en unknown
- 2013-11-11 CA CA2890835A patent/CA2890835C/en active Active
- 2013-11-11 KR KR1020157012787A patent/KR102165486B1/ko active IP Right Grant
- 2013-11-11 RS RS20170542A patent/RS56069B1/sr unknown
- 2013-11-11 SI SI201330663A patent/SI2917232T1/sl unknown
- 2013-11-11 US US14/441,923 patent/US20150306192A1/en not_active Abandoned
- 2013-11-11 SG SG11201503657UA patent/SG11201503657UA/en unknown
- 2013-11-11 DK DK13795002.8T patent/DK2917232T3/en active
- 2013-11-11 PT PT137950028T patent/PT2917232T/pt unknown
- 2013-11-11 CN CN201380069078.2A patent/CN104903347B/zh active Active
- 2013-11-11 MX MX2015005973A patent/MX350777B/es active IP Right Grant
- 2013-11-11 PL PL13795002T patent/PL2917232T3/pl unknown
- 2013-11-11 ES ES13795002.8T patent/ES2626881T3/es active Active
- 2013-11-11 IN IN3814DEN2015 patent/IN2015DN03814A/en unknown
- 2013-11-11 BR BR112015010625-0A patent/BR112015010625B1/pt active IP Right Grant
- 2013-11-11 EP EP13795002.8A patent/EP2917232B1/en active Active
- 2013-11-11 WO PCT/IB2013/060060 patent/WO2014072958A1/en active Application Filing
- 2013-11-11 NZ NZ708812A patent/NZ708812A/en unknown
- 2013-11-11 AU AU2013343024A patent/AU2013343024B2/en active Active
- 2013-11-11 JP JP2015541291A patent/JP6247696B2/ja active Active
-
2015
- 2015-05-04 IL IL238627A patent/IL238627B/en active IP Right Grant
- 2015-05-07 ZA ZA2015/03127A patent/ZA201503127B/en unknown
- 2015-05-08 PH PH12015501033A patent/PH12015501033B1/en unknown
- 2015-10-07 HK HK15109790.6A patent/HK1209138A1/xx unknown
-
2017
- 2017-05-28 HR HRP20170794TT patent/HRP20170794T1/hr unknown
- 2017-05-31 CY CY20171100568T patent/CY1119164T1/el unknown
-
2021
- 2021-04-23 US US17/239,251 patent/US20210346476A1/en active Pending
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006188507A (ja) * | 2004-12-10 | 2006-07-20 | Tokyo Univ Of Agriculture & Technology | 蛋白質の溶解度向上方法 |
| JP2011505414A (ja) * | 2007-12-04 | 2011-02-24 | アピトープ テクノロジー （ブリストル） リミテッド | Ｆｖｉｉｉペプチドおよび血友病を寛容化することにおけるその使用 |
| WO2009095646A2 (en) * | 2008-01-28 | 2009-08-06 | Circassia Limited | Peptides from factor viii |
| JP2012527440A (ja) * | 2009-05-18 | 2012-11-08 | アピトープ テクノロジー （ブリストル） リミテッド | Ｆｖｉｉｉ由来ペプチド |
| WO2011060372A2 (en) * | 2009-11-13 | 2011-05-19 | Puget Sound Blood Center | Factor viii b cell epitope variants having reduced immunogenicity |
| WO2012058480A1 (en) * | 2010-10-27 | 2012-05-03 | Baxter International Inc. | Fviii peptides for immune tolerance induction and immunodiagnostics |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20210346476A1 (en) | Modified FVIII Apitope Peptides | |
| JP6063402B2 (ja) | Ｆｖｉｉｉペプチドおよび血友病を寛容化することにおけるその使用 | |
| JP5784009B2 (ja) | Ｆｖｉｉｉ由来ペプチド |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| RD01 | Notification of change of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7426 Effective date: 20151020 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20151020 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20160909 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20170627 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170927 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20170928 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20170928 |
|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20171024 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20171117 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6247696 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313113 |
|
| S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
| S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |