JP2016141657A - Melanogenesis inhibitor obtained from flower part of narcissus tazetta var.chinensis - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、ニホンスイセン（学名：Ｎａｒｃｉｓｓｕｓ ｔａｚｅｔｔａ ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）の花部、その花部の抽出液、その抽出液の分画、またはその分画より得ることができる化合物を有効成分（活性成分）として含有するメラニン産生抑制剤に関するものである。 The present invention relates to a flower part of Japanese daffodil (scientific name: Narcissus tazetta var. Chinensis), an extract of the flower part, a fraction of the extract, or a compound obtainable from the fraction as an active ingredient (active ingredient). As a melanin production inhibitor.
ニホンスイセンは、ヒガンバナ科（Ａｍａｒｙｌｌｉｄａｃｅａｅ）スイセン属（Ｎａｒｃｉｓｓｕｓ）に属する多年草である。本植物は、地中海沿岸を原産とし、日本においては、本州以南の比較的温暖な海岸近くで野生化し群生するとともに、観賞用としても広く栽培されている。 The Japanese daffodil is a perennial that belongs to the genus Narcissus of the family Amaryllidaceae. This plant is native to the Mediterranean coast, and in Japan, it becomes wild and grows near a relatively warm coast south of Honshu and is widely cultivated for ornamental purposes.
本植物の鱗茎は、古くからおたふく風邪、吹き出物、乳腺炎や虫のかみ傷の改善に利用され、特に本植物に含有されるアルカロイド成分には強い抗癌活性があることが非特許文献１に開示されている。また、非特許文献２には、本植物の花が、内服薬として解熱や子宮病の改善を目的に使用されていることが開示されている。 The bulb of this plant has been used for the improvement of mumps, pimples, mastitis and insect bites for a long time. Non-patent document 1 shows that the alkaloid component contained in this plant has a strong anticancer activity. It is disclosed. Non-Patent Document 2 discloses that the flower of this plant is used as an internal medicine for the purpose of antipyretic and improvement of uterine disease.
さらに特許文献１には、コウジ酸またはコウジ酸誘導体とスイセン等の植物のエキスを含有する皮膚外用剤が開示されている。しかし特許文献１では、スイセン等の植物のエキスは、メラニンの産生を抑制するコウジ酸またはコウジ酸誘導体の光分解を低減する目的で添加されており、そして、スイセン等の植物のエキスのみでは、色素沈着を防ぐ効果はないことが示されており（段落００３９、表２−１）、美白効果やメラニン産生抑制効果がないことが示唆されている。 Furthermore, Patent Document 1 discloses an external preparation for skin containing kojic acid or kojic acid derivatives and plant extracts such as narcissus. However, in Patent Document 1, plant extracts such as narcissus are added for the purpose of reducing the photodegradation of kojic acid or kojic acid derivatives that suppress the production of melanin. It has been shown that there is no effect of preventing pigmentation (paragraph 0039, Table 2-1), suggesting that there is no whitening effect or melanin production suppression effect.
本発明は、ニホンスイセンを原材料とし、優れたメラニン産生抑制作用を有し、メラニン産生抑制剤、美白剤等の化粧料等として適用可能な製剤（メラニン産生抑制剤）を提供することを課題とする。 An object of the present invention is to provide a preparation (melanin production inhibitor) that uses Japanese narcissus as a raw material, has an excellent melanin production inhibitory action, and can be applied as cosmetics such as a melanin production inhibitor and a whitening agent. To do.
本発明者は、前述の課題を解決するために、ニホンスイセンの花部、その抽出液もしくは抽出エキス、又はそれらを含有する成分について、種々の生物活性の検討を鋭意行った。その結果、ニホンスイセンの花部、その抽出液若しくは抽出エキス、又はそれらから調製される分画や単離される化合物の中のあるものは、メラノーマ細胞であるＢ１６ ４Ａ５におけるメラニンの産生を有意に抑制することを見出し、以下に示す態様の発明を完成した。 In order to solve the above-mentioned problems, the inventor diligently studied various biological activities of the flower part of Japanese narcissus, its extract or extract, or components containing them. As a result, some of the flower parts of Japanese daffodil, its extract or extract, or fractions and compounds prepared therefrom, significantly inhibit melanin production in B164A5 melanoma cells. The invention of the aspect shown below was completed.
本発明は、その第１の態様として、
ニホンスイセンの花部、該花部より抽出された抽出液を有効成分（活性成分）として含むことを特徴とするメラニン産生抑制剤（請求項１）を提供する。
As a first aspect of the present invention,
A melanin production inhibitor (Claim 1) comprising a flower part of Japanese narcissus and an extract extracted from the flower part as an active ingredient (active ingredient) is provided.
ここで「花部」とは、雌しべ、雄しべ、花弁、萼、包葉、花軸、花柄等を含むいわゆる花を意味するが、さらに花芽及び蕾等も含む意味である。 Here, “floral part” means so-called flowers including pistil, stamens, petals, buds, foliage, flower axes, floral patterns, etc., but also includes flower buds and buds.
花部の抽出液とは、花部を、水、低級脂肪族アルコールやグリコール及び低級脂肪族アルコールやグリコールの含水物等より選ばれる抽出溶媒により抽出した液を言う。以後、この明細書で「抽出液」とは、前記抽出液に加えて、その抽出液を濃縮して得られる抽出エキスや、その抽出液や抽出エキスを分配処理して得られる分配移行液（ｆｒａｃｔｉｏｎ）等も含む意味で用いる。 The flower part extract refers to a liquid obtained by extracting a flower part with an extraction solvent selected from water, lower aliphatic alcohols and glycols, and lower aliphatic alcohols and glycols. Hereinafter, in this specification, the “extract” refers to an extract obtained by concentrating the extract in addition to the extract, and a distribution transfer solution obtained by distributing the extract or extract ( (fraction) etc.
メラニン産生抑制剤とは、メラノサイトにおけるメラニンの産生を抑制する作用を有する薬剤である。このメラニン産生抑制剤は、メラニンの産生を抑制する作用を有することから、肌の黒化の予防・改善、すなわち肌の美白に寄与し、美白の効果を有する化粧料に好適に用いられる。又、このメラニン産生抑制剤は、ヒトに投与することにより前記の作用を奏するので、ヒト用の医薬や医薬組成物（以後、医薬組成物を含めて医薬と言う。）等として用いることができる。 A melanin production inhibitor is a drug having an action of suppressing melanin production in melanocytes. Since this melanin production inhibitor has an action of suppressing the production of melanin, it contributes to prevention and improvement of skin blackening, that is, whitening of the skin, and is suitably used for cosmetics having a whitening effect. In addition, since this melanin production inhibitor exhibits the above-mentioned effects when administered to humans, it can be used as human medicines or pharmaceutical compositions (hereinafter referred to as pharmaceuticals including pharmaceutical compositions). .
「有効成分として含む」とは、花部、抽出液自体が、（コウジ酸等の他の成分との組合せではなく）メラニンの産生を抑制する作用を、薬剤または化粧料としての効果が認められる程度まで発揮するように、薬剤または化粧料に配合されることを意味する。後述する第２の態様においても、同じ意味である。 “Contains as an active ingredient” means that the flower part or the extract itself suppresses the production of melanin (rather than in combination with other ingredients such as kojic acid) and is effective as a drug or cosmetic. It means that it is blended in a drug or cosmetic so as to exert to the extent. This also applies to the second aspect described later.
本発明は、その第２の態様として、
下記の構造式（１）で表される化合物：
As a second aspect of the present invention,
Compound represented by the following structural formula (1):
、下記の構造式（２）で表される化合物またはその塩： , A compound represented by the following structural formula (2) or a salt thereof:
、下記の構造式（３）で表される化合物またはその塩： , A compound represented by the following structural formula (3) or a salt thereof:
、下記の構造式（４）で表される化合物またはその塩： , A compound represented by the following structural formula (4) or a salt thereof:
、下記の構造式（５）で表される化合物： And a compound represented by the following structural formula (5):
、下記の構造式（６）で表される化合物： And a compound represented by the following structural formula (6):
及び、下記の構造式（７）で表される化合物： And a compound represented by the following structural formula (7):
からなる群の中から選ばれる１又は２以上を有効成分として含むことを特徴とするメラニン産生抑制剤（請求項２）を提供する。 The present invention provides a melanin production inhibitor (Claim 2) characterized by containing one or more selected from the group consisting of as active ingredients.
前記式（１）、式（２）、式（３）、式（４）、式（５）、式（６）又は式（７）で表される化合物（またはそれらの塩）は、ニホンスイセンの花部、該花部より抽出された抽出液に含まれる化合物であり、前記抽出液より単離することができる。本発明者は、前記の抽出液を分離、精製し、含有成分の詳細な探索等を行い、さらにその含有成分のメラニン産生抑制活性について検討を行ったところ、前記の抽出液中には、メラノサイトにおけるメラニンの産生を抑制する作用を有する種々の化合物が含まれており、これらの化合物は、メラニン産生抑制剤として用いることができることを見出した。 The compound represented by formula (1), formula (2), formula (3), formula (4), formula (5), formula (6) or formula (7) (or a salt thereof) And a compound contained in an extract extracted from the flower, and can be isolated from the extract. The present inventor separated and purified the above extract, conducted a detailed search for the contained components, and further examined the melanin production inhibitory activity of the contained components. It has been found that various compounds having an action of suppressing the production of melanin are contained, and these compounds can be used as a melanin production inhibitor.
そして、それらの化合物について構造の解析を行ったところ、それらの化合物は、前記の式（１）、式（２）、式（３）、式（４）、式（５）、式（６）、又は式（７）で表されることを見出し、第２の態様の発明を完成した。 And when the structure was analyzed about those compounds, those compounds are the said Formula (1), Formula (2), Formula (3), Formula (4), Formula (5), Formula (6). Or the formula (7) was found, and the invention of the second aspect was completed.
第２の態様における「有効成分として含む」、「メラニン産生抑制剤」の意味は、前記第１の態様における同じ用語の意味と同じである。このメラニン産生抑制剤はメラノサイトにおけるメラニン産生を抑制し、これをヒトに投与することによりメラニンの産生を抑制する。従って、皮膚の黒化の改善または予防剤としての利用が期待できる。又、肌の美白に寄与し、美白の効果を有する化粧料に好適に用いられる。さらに、第２の態様のメラニン産生抑制剤は、ヒトに投与することにより前記の作用を奏するので、医薬や医薬組成物等として用いることができる。 The meanings of “containing as an active ingredient” and “melanin production inhibitor” in the second aspect are the same as the meanings of the same terms in the first aspect. This melanin production inhibitor suppresses melanin production in melanocytes, and suppresses melanin production by administering it to humans. Therefore, it can be expected to improve skin blackening or be used as a preventive agent. Moreover, it contributes to skin whitening and is suitably used for cosmetics having a whitening effect. Furthermore, since the melanin production inhibitor of the second aspect exhibits the above-described action when administered to humans, it can be used as a medicine or a pharmaceutical composition.
前記の化合物の中で、式（２）、式（３）、式（４）、式（５）、式（６）、又は式（７）で表される化合物は、既知の化合物であり、それぞれ、タゼッチン、３，４−ジヒドロ−３−メトキシ［１，３］ジオキソロ［４，５−ｊ］フェナントリジン、５，６−ジヒドロ−５−メチル［１，３］ジオキソロ［４，５−ｊ］フェナントリジン、２−（３，４−ジメトキシフェニル）エチル６−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−β−Ｄ−グルコピラノシド、３−フェニルプロピル−β−Ｄ−グルコピラノシド又は３−フェニル−２−プロペニル６−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−β−Ｄ−グルコピラノシドである。 Among the compounds, the compound represented by the formula (2), the formula (3), the formula (4), the formula (5), the formula (6), or the formula (7) is a known compound, Tazetine, 3,4-dihydro-3-methoxy [1,3] dioxolo [4,5-j] phenanthridine, 5,6-dihydro-5-methyl [1,3] dioxolo [4,5- j] Phenanthridine, 2- (3,4-dimethoxyphenyl) ethyl 6-O-β-D-glucopyranosyl-β-D-glucopyranoside, 3-phenylpropyl-β-D-glucopyranoside or 3-phenyl-2- Propenyl 6-O-β-D-glucopyranosyl-β-D-glucopyranoside.
式（１）で表されるフェニルエタノイド配糖体は、新規化合物である。そこで、本発明は、第３の態様として、前記構造式（１）で表されるフェニルエタノイド配糖体（請求項３）を提供する。この新規なフェニルエタノイド配糖体は、メラニン産生抑制剤として用いられる。 The phenylethanoid glycoside represented by the formula (1) is a novel compound. Therefore, the present invention provides, as a third aspect, a phenylethanoid glycoside represented by the structural formula (1) (claim 3). This novel phenylethanoid glycoside is used as a melanin production inhibitor.
第１の態様、第２の態様のメラニン産生抑制剤は、美白剤として化粧料等に用いることができ、又、メラニン産生抑制のための皮膚用外用剤等の医薬として用いることもできる。そこで、本発明の第４の態様として、前記第１の態様、第２の態様のメラニン産生抑制剤を配合することを特徴とする美白化粧料（請求項４）が提供され、本発明の第５の態様として、前記第１の態様、第２の態様のメラニン産生抑制剤を配合することを特徴とする医薬（請求項５）が提供される。 The melanin production inhibitor of the first aspect and the second aspect can be used as a whitening agent in cosmetics and the like, and can also be used as a medicine such as an external preparation for skin for inhibiting melanin production. Therefore, as a fourth aspect of the present invention, there is provided a whitening cosmetic (claim 4) characterized in that the melanin production inhibitor of the first aspect and the second aspect is blended. As a fifth aspect, there is provided a medicament (Claim 5) characterized in that the melanin production inhibitor of the first aspect and the second aspect is blended.
第１の態様及び第２の態様のメラニン産生抑制剤は、メラノサイトにおけるメラニンの産生を抑制する作用、メラニン産生抑制作用を示し、ヒトの肌の黒化を抑制する効果がある。従って、美白剤として化粧料等に用いることができ、又、メラニン産生抑制のための皮膚用外用剤等の医薬として用いることもできる。 The melanin production inhibitor of the 1st aspect and the 2nd aspect shows the effect | action which suppresses the production of melanin in a melanocyte, the melanin production inhibitory effect, and has the effect which suppresses the blackening of human skin. Therefore, it can be used in cosmetics and the like as a whitening agent, and can also be used as a medicine such as an external preparation for skin for suppressing melanin production.
第３の態様の新規フェニルエタノイド配糖体は、メラニン産生抑制作用を示し、ヒトの肌の黒化を抑制する効果を有する。 The novel phenylethanoid glycoside of the third aspect has an effect of suppressing melanin production and has an effect of suppressing blackening of human skin.
次に、本発明を実施するための形態につき説明するが、本発明の範囲はこの実施の形態のみに限定されるものではない。 Next, although the form for implementing this invention is demonstrated, the range of this invention is not limited only to this embodiment.
第１の態様のメラニン産生抑制剤としては、
１）ニホンスイセン花部を、抽出等の処理を行わずに、そのまま有効成分として用いるもの、
２）ニホンスイセン花部を、水、低級脂肪族アルコールやグリコール又は低級脂肪族アルコールやグリコールの含水物等により抽出した抽出液を有効成分として用いるもの、
３）前記抽出液を濃縮して得られる抽出エキスを有効成分として用いるもの、
４）前記抽出液又は抽出エキスを分配処理して、分配により得られる分配移行液（分画）もしくは分配移行液の濃縮、乾固物を有効成分として用いるもの、
を例示することができる。
As the melanin production inhibitor of the first aspect,
1) The Japanese narcissus flower part is used as it is as an active ingredient without being subjected to processing such as extraction,
2) An extract obtained by extracting Japanese narcissus flower parts with water, a lower aliphatic alcohol or glycol or a hydrated product of lower aliphatic alcohol or glycol, and the like as an active ingredient,
3) What uses the extract obtained by concentrating the said extract as an active ingredient,
4) Distributing the extract or extract and distributing the distribution transfer liquid (fraction) or concentration of the distribution transfer liquid obtained by distribution, using the dried solid as an active ingredient,
Can be illustrated.
花部を用いる場合は、花部をそのまま用いることができるし、又は、粉砕、破砕、切断、すりつぶし等による形状変化を行ったもの、又は、乾燥等の調製をしたものを用いることもできる。 When the flower part is used, the flower part can be used as it is, or a flower part that has undergone a shape change by crushing, crushing, cutting, grinding, or the like, or a substance that has been prepared by drying or the like can be used.
抽出液は、ニホンスイセン花部をそのまま又は粉砕、破砕、切断、すりつぶし等による形状変化を行ったものを、水、低級脂肪族アルコールやグリコール及び低級脂肪族アルコールやグリコールの含水物等の抽出溶媒により抽出して得ることができる。抽出効率の点からは、粉砕、破砕、切断、すりつぶし等による形状変化を行ったものを用いる方法が望ましい。 The extract is a narcissus flower part as it is or after having undergone shape change by pulverization, crushing, cutting, mashing, etc., extraction solvent such as water, lower aliphatic alcohol or glycol and lower aliphatic alcohol or glycol hydrate Can be obtained by extraction. From the viewpoint of extraction efficiency, a method using a material whose shape has been changed by crushing, crushing, cutting, grinding or the like is desirable.
抽出溶媒として用いられる低級脂肪族アルコールとしては、炭素数１〜４の低級アルコール類が挙げられ、具体的には、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール又はこれらの混液等が挙げられる。グリコールとしては、エチレングリコール、プロピレングリコール等が挙げられる。 Examples of the lower aliphatic alcohol used as the extraction solvent include lower alcohols having 1 to 4 carbon atoms. Specifically, methanol, ethanol, propanol, isopropanol, n-butanol, isobutanol, tert-butanol, or these And the like. Examples of the glycol include ethylene glycol and propylene glycol.
抽出溶媒としては、好ましくはこれらのアルコールやグリコール、又はこれらのアルコールやグリコールに３０容量％までの水を含有する含水アルコールや含水グリコールが用いられる。前記のアルコールやグリコールの中でもメタノール及びエタノールが好ましい。これらの抽出溶媒は、抽出材料に対して、１〜５０質量倍程度、好ましくは１０〜３０質量倍程度用いられる。 As the extraction solvent, these alcohols and glycols, or hydroalcohols and glycols containing up to 30% by volume of water in these alcohols and glycols are preferably used. Of the alcohols and glycols, methanol and ethanol are preferred. These extraction solvents are used in an amount of about 1 to 50 times, preferably about 10 to 30 times, with respect to the extraction material.
抽出温度は、室温〜溶媒の沸点の間で任意に設定できるが、５０℃〜抽出溶媒の沸点の温度が好ましい。抽出は、振盪下もしくは非振盪下又は還流下に、前記の抽出材料、即ち、ニホンスイセン花部そのもの、又はそれを粉砕、破砕、切断、すりつぶし等による形状変化を行ったもの等を、前記の抽出溶媒に浸漬することによって行うのが適当である。 Although extraction temperature can be arbitrarily set between room temperature and the boiling point of a solvent, the temperature of the boiling point of 50 degreeC-extraction solvent is preferable. For extraction, the above-mentioned extraction material, that is, the Japanese narcissus flower part itself, or the one that has undergone shape change by crushing, crushing, cutting, grinding, etc. under shaking or non-shaking or refluxing is used. It is suitable to immerse in an extraction solvent.
好ましい抽出時間は、抽出温度や抽出の際の振盪の有無等により変動し、特に限定されない。例えば、抽出材料を振盪下に浸漬する場合には、３０分間〜１０時間程度行うのが適当であり、非振盪下に浸漬する場合には、１時間〜２０日間程度行うのが適当である。又、抽出溶媒の還流下に抽出するときは、３０分間〜数時間加熱還流するのが好ましい。なお、５０℃より低い温度で浸漬して抽出することも可能であるが、その場合には、前記の時間よりも長時間浸漬するのが好ましい。抽出操作は、同一材料について１回だけ行ってもよいが、複数回、例えば２〜５回程度繰り返すのが好ましい。 The preferred extraction time varies depending on the extraction temperature and the presence or absence of shaking during extraction, and is not particularly limited. For example, when the extraction material is immersed under shaking, it is appropriate to carry out for about 30 minutes to 10 hours, and when it is immersed under non-shaking, it is appropriate to carry out for about 1 hour to 20 days. Moreover, when extracting under reflux of an extraction solvent, it is preferable to heat to reflux for 30 minutes to several hours. In addition, although it is possible to extract by immersing at a temperature lower than 50 ° C., in that case, it is preferable to immerse for a longer time than the above time. The extraction operation may be performed only once for the same material, but is preferably repeated a plurality of times, for example, about 2 to 5 times.
前記の抽出工程により得られた抽出液には、ニホンスイセン花部の含有成分が溶出されている。本発明の、第１の態様のメラニン産生抑制剤としては、このようにして得られた抽出液を濃縮して（抽出エキスとして）用いてもよい。濃縮は、低温で減圧下に行うのが好ましい。濃縮する前に濾過して濾液を濃縮してもよい。なお、濃縮等の操作を行わず抽出液をそのまま用いても、メラニン産生抑制剤としての作用を奏する。 In the extract obtained by the extraction step, the components contained in the Japanese narcissus flower part are eluted. As the melanin production inhibitor of the first aspect of the present invention, the extract thus obtained may be concentrated (as an extract extract). Concentration is preferably carried out at a low temperature and under reduced pressure. The filtrate may be concentrated by filtration before concentration. In addition, even if operation, such as concentration, is not performed, even if it uses an extract as it is, there exists an effect | action as a melanin production inhibitor.
また、濃縮は乾固するまで行ってもよく、粉末状又は凍結乾燥品等として用いてもよい。濃縮する方法、粉末状及び凍結乾燥品とする方法は当該分野での公知の方法を用いることができる。 Further, the concentration may be performed until it is solidified, or may be used as a powder or lyophilized product. As a method of concentrating, a method of forming a powder and a freeze-dried product, a method known in the art can be used.
分配は、前記抽出液（水層）に、酢酸エチル、ブタノール、ヘキサン、ジエチルエーテル、イソプロピルエーテル等の水に対して層を形成する任意の溶媒を加えて、前記抽出液中の成分を前記溶媒中に抽出・移行させ、分配移行液（分配抽出液・分画）を得る操作である。また、分配時の水溶液の液性を、例えば、酢酸や炭酸水素ナトリウムを使用して酸性またはアルカリ性にして分配することもできる。 In the partitioning, an arbitrary solvent that forms a layer with respect to water such as ethyl acetate, butanol, hexane, diethyl ether, isopropyl ether or the like is added to the extract (aqueous layer), and the components in the extract are mixed with the solvent. This is an operation for extracting and transferring the solution to obtain a distribution transfer solution (distribution extract / fraction). Moreover, the liquidity of the aqueous solution at the time of distribution can be made acidic or alkaline using, for example, acetic acid or sodium hydrogen carbonate.
前記のようにして得られる抽出液（抽出エキス、分配により得られる分配移行液等も含む）は、精製処理に付し、含有されている各成分に分離することができる。前記の、構造式（１）〜（７）のいずれかで表される化合物は、この精製、分離により得ることができる。 The extraction liquid obtained as described above (including the extract extract and the distribution transfer liquid obtained by distribution) can be subjected to purification treatment and separated into each component contained therein. The compound represented by any one of the structural formulas (1) to (7) can be obtained by this purification and separation.
精製処理は、例えば、クロマトグラフ法、イオン交換樹脂を使用する溶離法、溶媒による分配抽出等を単独、又は組み合わせて採用することができる。クロマトグラフ法としては、順相クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、遠心液体クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー等を挙げることができ、これらのいずれか、又はそれらを組み合わせて行う方法が挙げられる。この際の担体、溶出溶媒等の精製条件は、各種クロマトグラフィーに対応して適宣選択することができる。 As the purification treatment, for example, a chromatographic method, an elution method using an ion exchange resin, partition extraction with a solvent, or the like can be employed alone or in combination. Examples of the chromatographic method include normal phase chromatography, reverse phase chromatography, thin layer chromatography, centrifugal liquid chromatography, high performance liquid chromatography, etc. Can be mentioned. In this case, purification conditions such as a carrier and an elution solvent can be appropriately selected according to various chromatographies.
前記のように、本発明の第１の態様のメラニン産生抑制剤を含有させることにより、ヒト用の医薬を製造することができる。本発明のメラニン産生抑制剤が、ヒト用の医薬として用いられる場合は、ニホンスイセン花部そのもの、ニホンスイセン花部の抽出液、もしくは前記式（１）〜（７）で表される化合物を、そのままの状態で又は適当な媒体で希釈して、医薬品等の製造分野における公知の方法により、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、軟膏、クリーム又は液剤等の種々の形態にして用いられる。 As described above, a human medicine can be produced by containing the melanin production inhibitor of the first aspect of the present invention. When the melanin production inhibitor of the present invention is used as a pharmaceutical for humans, the Japanese narcissus flower part itself, the extract of the Japanese narcissus flower part, or the compound represented by the above formulas (1) to (7), It is used in various forms such as powders, granules, tablets, capsules, ointments, creams or liquids by a known method in the field of production of pharmaceuticals and the like as it is or diluted with an appropriate medium.
これらの形態においては、適当な媒体を添加してもよい。適当な媒体としては、医薬的に許容される賦形剤、例えば結合剤（例えばシロップ、アラビアゴム、ゼラチン、ソルビトール、トラガント又はポリビニルピロリドン）、充填剤（例えば乳糖、砂糖、トウモロコシ澱粉、リン酸カルシウム、ソルビトール又はグリシン）、錠剤用滑剤（例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコール又はシリカ）、崩壊剤（例えば馬鈴薯澱粉）又は湿潤剤（例えばラウリル硫酸ナトリウム）が挙げられる。 In these forms, an appropriate medium may be added. Suitable vehicles include pharmaceutically acceptable excipients such as binders (eg syrup, gum arabic, gelatin, sorbitol, tragacanth or polyvinylpyrrolidone), fillers (eg lactose, sugar, corn starch, calcium phosphate, sorbitol). Or glycine), tablet lubricants (eg magnesium stearate, talc, polyethylene glycol or silica), disintegrants (eg potato starch) or wetting agents (eg sodium lauryl sulfate).
錠剤とする場合は、通常の製薬における周知の方法でコートしてもよい。液体製剤とする場合は、例えば水性又は油性の懸濁液、溶液、エマルジョン、シロップ又はエリキシルの形態であってもよい。又、使用前に水や他の適切な賦形剤と混合する乾燥製品として提供してもよい。 In the case of a tablet, it may be coated by a well-known method in ordinary pharmaceuticals. In the case of a liquid preparation, it may be in the form of, for example, an aqueous or oily suspension, solution, emulsion, syrup or elixir. It may also be provided as a dry product that is mixed with water or other suitable excipients prior to use.
液体製剤は、通常の添加剤、例えば、ソルビトール、シロップ、メチルセルロース、グルコースシロップ、ゼラチン水添加食用脂等の懸濁化剤、レシチン、ソルビタンモノオレエート、アラビアゴム等の乳化剤（食用脂を含んでもよい）、アーモンド油、分画ココヤシ油又はグリセリン、プロピレングリコールやエチレングリコールのような油性エステル等の非水性賦形剤、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、ｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピル又はソルビン酸等の保存剤を含んでもよく、さらに所望により着色剤又は香料等を含んでもよい。 Liquid preparations include usual additives such as suspending agents such as sorbitol, syrup, methylcellulose, glucose syrup, gelatin water-added edible fat, and emulsifiers (including edible fat including lecithin, sorbitan monooleate, gum arabic). Good), non-aqueous excipients such as almond oil, fractionated coconut oil or glycerin, oily esters such as propylene glycol and ethylene glycol, methyl p-hydroxybenzoate, propyl p-hydroxybenzoate or sorbic acid A colorant or a fragrance may be further contained as desired.
本発明の医薬における、抽出液、前記式（１）〜（７）で表される化合物の使用量は、濃縮、精製の程度、活性の強さ等、使用目的、対象疾患や自覚症状の程度、使用者の体重、年齢等によって適宣調整される。例えば、医薬として成人について使用する場合は、１回の投与毎に、抽出エキスや分画の場合では、１ｍｇ〜２０ｇ程度の範囲で使用し、この範囲内で精製度や水分含量等に応じて調整することが適当な場合が多い。又、前記式（１）〜（７）で表される化合物を使用する場合は、１ｍｇ〜１ｇ程度が適当な場合が多い。 The amount of the extract and the compound represented by the formulas (1) to (7) used in the medicament of the present invention is the degree of concentration, the degree of purification, the strength of activity, etc. It is appropriately adjusted according to the weight, age, etc. of the user. For example, when used for adults as a medicine, it is used in the range of about 1 mg to 20 g for each extract, and in the case of an extract or fraction, within this range, depending on the degree of purification, water content, etc. It is often appropriate to adjust. Moreover, when using the compound represented by said Formula (1)-(7), about 1 mg-1g are suitable in many cases.
以下、実施例により、本発明をさらに具体的に説明するが、実施例は本発明の範囲を限定するものではない。なお、以下の実施例では、特に記載がない限り、以下に示す各種溶媒、濾紙、クロマトグラフィー用担体及びＨＰＬＣカラムを用いた。また、特に明記しない試薬については、和光純薬工業社製試薬（特級）を用いた。 EXAMPLES Hereinafter, the present invention will be described more specifically with reference to examples. However, the examples do not limit the scope of the present invention. In the following examples, unless otherwise specified, the following various solvents, filter paper, chromatography carrier and HPLC column were used. Moreover, about the reagent which is not specified in particular, the reagent (special grade) by Wako Pure Chemical Industries Ltd. was used.
［溶媒］
メタノール：ナカライテスク社製、一級
ＨＰＬＣ用メタノール：ナカライテスク社製、特級
[solvent]
Methanol: Nacalai Tesque, first grade Methanol for HPLC: Nacalai Tesque, special grade
［濾紙］
アドバンテック社製：Ｎｏ．２
[filter paper]
Advantech: No. 2
［クロマトグラフィー用担体］
順相シリカゲルカラムクロマトグラフ用担体：関東化学社製、Ｓｉｌｉｃａ Ｇｅｌ ６０Ｎ
逆相ＯＤＳカラムクロマトグラフ用担体：富士シリシア社製、Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ ＯＤＳ１０２０Ｔ
[Chromatographic carrier]
Normal phase silica gel column chromatograph carrier: Silica Gel 60N, manufactured by Kanto Chemical Co., Inc.
Reverse-phase ODS column chromatograph carrier: manufactured by Fuji Silysia Co., Ltd., Chromatorex ODS1020T
［ＨＰＬＣカラム］
ナカライテスク社製、Ｃｏｓｍｏｓｉｌ ５Ｃ１８−ＭＳ−ＩＩ、２０ｍｍ（ｉ．ｄ．）×２５０ｍｍ
[HPLC column]
Nacalai Tesque, Cosmosil 5C 18 -MS-II, 20mm (i.d.) × 250mm
実施例１
和歌山県由良町産のニホンスイセン（Ｎａｒｃｉｓｓｕｓ ｔａｚｅｔｔａ ｖａｒ． ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）の乾燥花部（４．７ｋｇ）を、メタノール（ＭｅＯＨ、１０Ｌ）で３時間熱時抽出し、抽出液を濾取した。残渣にメタノールを加え、同様の抽出操作を計３回行った。得られたメタノール抽出液を合わせ、減圧下溶媒を留去し、ＭｅＯＨ抽出エキス（収量３４８ｇ、収率８．１４％）（以下、括弧内で収量及び／又は収率を表す場合は、「収量」、「収率」を略して示す。なお、「収率」とは、ニホンスイセン乾燥花部の質量に対する収量の割合：（単離）収率である。）を得た。
Example 1
A dried flower part (4.7 kg) of Japanese daffodil (Narcissus tazetta var. Chinensis) from Yura-cho, Wakayama Prefecture was extracted with methanol (MeOH, 10 L) for 3 hours, and the extract was collected by filtration. Methanol was added to the residue, and the same extraction operation was performed three times. The obtained methanol extracts were combined, the solvent was distilled off under reduced pressure, and MeOH extract (yield 348 g, yield 8.14%) (hereinafter, when yield and / or yield is shown in parentheses, “yield “Yield” is abbreviated. “Yield” is the ratio of the yield to the mass of the dried Japanese narcissus flower part: (isolation).
このＭｅＯＨ抽出エキス（２９１ｇ）を、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）と３％（ｗ／ｖ）酒石酸水溶液（１：１）で分配し、ＥｔＯＡｃ移行部（３５．８ｇ、１．０％）と酒石酸水溶液移行部を得た。酒石酸水溶液移行部にＮａＨＣＯ３を加えてアルカリ性（ｐＨ９）にした。アルカリ性にした酒石酸水溶液移行部から、ＣＨＣｌ３（酒石酸水溶液移行部に対して容積比で１：１の割合）にて分配抽出しＣＨＣｌ３移行部（８．１２ｇ、０．２３％）を得た。さらにこのアルカリ性にした酒石酸水溶液移行部を、ｎ−ブタノール（ｎ−ＢｕＯＨ）（酒石酸水溶液移行部に対して容積比で１：１の割合）で分配し、ｎ−ＢｕＯＨ移行部（４０．１ｇ、０．２３％）を得た。 The MeOH extract (291 g) was partitioned between ethyl acetate (EtOAc) and 3% (w / v) tartaric acid aqueous solution (1: 1), and the EtOAc transfer part (35.8 g, 1.0%) and tartaric acid aqueous solution transfer. Got a part. NaHCO 3 was added to the tartaric acid aqueous solution transfer part to make it alkaline (pH 9). From the alkaline tartaric acid aqueous solution transfer part, CHCl 3 (volume ratio of 1: 1 with respect to the tartaric acid aqueous solution transfer part) was subjected to partition extraction to obtain a CHCl 3 transfer part (8.12 g, 0.23%). . Furthermore, this tartaric acid aqueous solution transition part made alkaline was distributed by n-butanol (n-BuOH) (ratio of the volume ratio of 1: 1 with respect to the tartaric acid aqueous solution transfer part), and the n-BuOH transition part (40.1 g, 0.23%) was obtained.
ＣＨＣｌ３移行部（６．５０ｇ）を順相シリカゲルカラムクロマトグラフィ−［１９５ ｇ、ＣＨＣｌ３→（ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ→１０：１→５：１→３：１→１：１，ｖ／ｖ） →ＭｅＯＨ］で分画し、Ｆｒ．Ｃ１（４１９．４ｍｇ）、Ｆｒ．Ｃ２（５０．８ｍｇ）、Ｆｒ．Ｃ３（４１．７ｍｇ）、Ｆｒ．Ｃ４（８４．１ｍｇ）、Ｆｒ．Ｃ５（１４２．９ｍｇ）、Ｆｒ．Ｃ６（２８７．３ ｍｇ）、Ｆｒ．Ｃ７（８２４．７ｍｇ）、Ｆｒ．Ｃ８（７１４．１ｍｇ）、Ｆｒ．Ｃ９（８６４．０ｍｇ）およびＦｒ．Ｃ１０（８１５．５ｍｇ）を得た。 CHCl 3 transition part (6.50 g) was subjected to normal phase silica gel column chromatography [195 g, CHCl 3 → (CHCl 3 -MeOH → 10: 1 → 5: 1 → 3: 1 → 1: 1, v / v) → MeOH], Fr. C1 (419.4 mg), Fr. C2 (50.8 mg), Fr. C3 (41.7 mg), Fr. C4 (84.1 mg), Fr. C5 (142.9 mg), Fr. C6 (287.3 mg), Fr. C7 (824.7 mg), Fr. C8 (714.1 mg), Fr. C9 (864.0 mg) and Fr. C10 (815.5 mg) was obtained.
Ｆｒ．Ｃ４（８４．１ｍｇ）を逆相ＨＰＬＣ［Ｃｏｓｍｏｓｉｌ ５Ｃ１８−ＭＳ−ＩＩ、ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ：ＵＶ（２５４ ｎｍ）、ＭｅＯＨ−０．０３％ａｑ．Ｅｔ２ＮＨ（６０：４０，ｖ／ｖ）］で分離精製し、分離精製物Ａ（４．８ｍｇ、０．０００５８％）および分離精製物Ｂ（３．４ｍｇ、０．０００４１％）を得た。Ｆｒ．Ｃ６（２８７．３ｍｇ）を逆相ＨＰＬＣ［Ｃｏｓｍｏｓｉｌ ５Ｃ１８−ＭＳ−ＩＩ、ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ：ＵＶ（２５４ｎｍ）、ＭｅＯＨ−０．０３％ａｑ．Ｅｔ２ＮＨ（６０：４０，ｖ／ｖ）］で分離精製し、分離精製物Ｃ（４３．０ｍｇ、０．００５２％）を得た。 Fr. C4 (84.1 mg) was subjected to reverse phase HPLC [Cosmosil 5C 18 -MS-II, detection: UV (254 nm), MeOH-0.03% aq. Et 2 NH (60:40, v / v)] to obtain separated and purified product A (4.8 mg, 0.00058%) and separated and purified product B (3.4 mg, 0.00041%). . Fr. C6 (287.3 mg) was subjected to reverse phase HPLC [Cosmosil 5C 18 -MS-II, detection: UV (254 nm), MeOH-0.03% aq. Et 2 NH (60:40, v / v)] was separated and purified to obtain separated and purified product C (43.0 mg, 0.0052%).
ｎ−ＢｕＯＨ移行部（３５．１ｇ）を順相シリカゲルカラムクロマトグラフィ−［１０５０ｇ、（ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ−Ｈ２Ｏ→１５：３：０．３→１０：３：０．４→７：３：０．５→６：４：１→５：５：１，ｖ／ｖ／ｖ）→ＭｅＯＨ］で分画しＦｒ．Ｂ１（１５４．３ ｍｇ）、Ｆｒ．Ｂ２（４４４．６ｍｇ）、Ｆｒ．Ｂ３（１．４３ｇ）、Ｆｒ． Ｂ４（６０７．４ｍｇ）、Ｆｒ．Ｂ５（１．９５ｇ）、Ｆｒ．Ｂ６（３．８４ｇ）、Ｆｒ．Ｂ７（１９．１６ｇ）、Ｆｒ．Ｂ８（５．８４ ｇ）、Ｆｒ．Ｂ９（２．３７ｇ）およびＦｒ．Ｂ１０（８１８．７ｍｇ）を得た。 n-BuOH transfer part (35.1 g) was subjected to normal phase silica gel column chromatography [1050 g, (CHCl 3 -MeOH—H 2 O → 15: 3: 0.3 → 10: 3: 0.4 → 7: 3: 0.5 → 6: 4: 1 → 5: 5: 1, v / v / v) → MeOH], and Fr. B1 (154.3 mg), Fr. B2 (444.6 mg), Fr. B3 (1.43 g), Fr. B4 (607.4 mg), Fr. B5 (1.95 g), Fr. B6 (3.84 g), Fr. B7 (19.16 g), Fr. B8 (5.84 g), Fr. B9 (2.37 g) and Fr. B10 (818.7 mg) was obtained.
Ｆｒ．Ｂ２（４４４．６ｍｇ）を逆相ＨＰＬＣ［Ｃｏｓｍｏｓｉｌ ５Ｃ１８−ＭＳ−ＩＩ、ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ：ＵＶ（２５４ｎｍ）、ＭｅＯＨ−１％ａｑ．ＡｃＯＨ（４５：５５，ｖ／ｖ）］で分離精製し、分離精製物Ｄ（９．１ｍｇ、０．００１１％）を得た。 Fr. B2 (444.6 mg) was subjected to reverse phase HPLC [Cosmosil 5C 18 -MS-II, detection: UV (254 nm), MeOH-1% aq. AcOH (45:55, v / v)] was separated and purified to obtain separated and purified product D (9.1 mg, 0.0011%).
Ｆｒ．Ｂ７（１９．１６ｇ）を逆相ＯＤＳカラムクロマトグラフィ−［５７０ｇ、Ｈ２Ｏ→ＭｅＯＨ−Ｈ２Ｏ（１０：９０→２０：８０→３０：７０→６０：４０→８０：２０→９０：１０，ｖ／ｖ）→ＭｅＯＨ→ａｃｅｔｏｎｅ］で分画しＦｒ．Ｂ７−１（７．６３ｇ）、Ｆｒ．Ｂ７−２（７３１．１ｍｇ）、Ｆｒ．Ｂ７−３（１６３．０ｍｇ）、Ｆｒ．Ｂ７−４（４５０．２ｍｇ）、Ｆｒ．Ｂ７−５（７．１８ｇ）およびＦｒ．Ｂ７−６（２．６２ｇ）を得た。 Fr. B7 (19.16 g) was subjected to reverse phase ODS column chromatography [570 g, H 2 O → MeOH—H 2 O (10: 90 → 20: 80 → 30: 70 → 60: 40 → 80: 20 → 90: 10, v / v) → MeOH → acetone] and Fr. B7-1 (7.63 g), Fr. B7-2 (731.1 mg), Fr. B7-3 (163.0 mg), Fr. B7-4 (450.2 mg), Fr. B7-5 (7.18 g) and Fr. B7-6 (2.62 g) was obtained.
Ｆｒ．Ｂ７−４（４５０．２ｍｇ）を逆相ＨＰＬＣ［Ｃｏｓｍｏｓｉｌ ５Ｃ１８−ＭＳ−ＩＩ、ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ：ＵＶ（２３０ｎｍ）、ＭｅＯＨ−１％ａｑ．ＡｃＯＨ（３０：７０，ｖ／ｖ）］で分離精製し、分離精製物ｎｔ−４（６８．０ ｍｇ、０．００７８％）および分離精製物Ｆ（１０．６ ｍｇ、０．００１２％）および分離精製物Ｇ（８．６ｍｇ、０．００１０％）を得た。 Fr. B7-4 (450.2 mg) was subjected to reverse phase HPLC [Cosmosil 5C 18 -MS-II, detection: UV (230 nm), MeOH-1% aq. AcOH (30:70, v / v)] and separated and purified product nt-4 (68.0 mg, 0.0078%) and separated and purified product F (10.6 mg, 0.0012%) and Separated and purified product G (8.6 mg, 0.0010%) was obtained.
前記で得られた分離精製物Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、ｎｔ−４、Ｆ及びＧについて、旋光度［α］Ｄ、質量分析、ＵＶスペクトル、ＩＲスペクトル及び１Ｈ−ＮＭＲ及び１３Ｃ−ＮＭＲの測定を、以下に示す測定装置、条件により行った。分離精製物Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｆ及びＧについては、旋光度［α］Ｄ、質量分析、１Ｈ−ＮＭＲ及び１３Ｃ−ＮＭＲデータを文献値あるいは標品と比較し同定した結果、それぞれ以下に示すように、前記構造式（２）、（３）、（４）、（５）、（６）及び（７）のいずれかで表される既知の化合物であることがわかった。 About the separated and purified products A, B, C, D, nt-4, F and G obtained above, the optical rotation [α] D , mass spectrometry, UV spectrum, IR spectrum, 1 H-NMR and 13 C-NMR Was measured with the following measuring apparatus and conditions. As for the separated and purified products A, B, C, D, F and G, as a result of identifying the optical rotation [α] D , mass spectrometry, 1 H-NMR and 13 C-NMR data by comparing with literature values or samples, As shown below, it was found to be a known compound represented by any one of the structural formulas (2), (3), (4), (5), (6) and (7).
分離精製物Ａ：３，４−ジヒドロ−３−メトキシ［１，３］ジオキソロ［４，５−ｊ］フェナントリジン（式（３）の化合物）
分離精製物Ｂ：５，６−ジヒドロ−５−メチル［１，３］ジオキソロ［４，５−ｊ］フェナントリジン（式（４）の化合物）
分離精製物Ｃ：タゼッチン（式（２）の化合物）
分離精製物Ｄ：３−フェニルプロピルβ−Ｄ−グルコピラノシド（式（６）の化合物）
分離精製物Ｆ：２−（３，４−ジメトキシフェニル）エチル６−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−β−Ｄ−グルコピラノシド（式（５）の化合物）
分離精製物Ｇ：３−フェニル−２−プロペニル６−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−β−Ｄ−グルコピラノシド（式（７）の化合物）
Separation and purification product A: 3,4-dihydro-3-methoxy [1,3] dioxolo [4,5-j] phenanthridine (compound of formula (3))
Separated and purified product B: 5,6-dihydro-5-methyl [1,3] dioxolo [4,5-j] phenanthridine (compound of formula (4))
Separation and purification product C: Tazetin (compound of formula (2))
Separation and purification product D: 3-phenylpropyl β-D-glucopyranoside (compound of formula (6))
Separation and purification product F: 2- (3,4-dimethoxyphenyl) ethyl 6-O-β-D-glucopyranosyl-β-D-glucopyranoside (compound of formula (5))
Separated and purified product G: 3-phenyl-2-propenyl 6-O-β-D-glucopyranosyl-β-D-glucopyranoside (compound of formula (7))
［旋光度］［α］Ｄ
堀場高感度ＳＥＰＡ−３００デジタルポラリメーター（ｌ＝０．５）（堀場製作所社製）を用いて測定した。
[Optical rotation] [α] D
It measured using the Horiba high sensitivity SEPA-300 digital polarimeter (l = 0.5) (made by Horiba Seisakusho).
［質量分析］
高分解能質量分析（高分解能ＦＡＢ−ＭＳ）及び質量分析（ＦＡＢ−ＭＳ）は、日本電子社製ＪＭＳ−ＳＸ １０２型質量分析装置を用いて測定した。
[Mass spectrometry]
High resolution mass spectrometry (high resolution FAB-MS) and mass spectrometry (FAB-MS) were measured using a JMS-SX 102 type mass spectrometer manufactured by JEOL.
［ＩＲスペクトル］
Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＦＴ−ＩＲ ＤＲ−８０００ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ（島津製作所社製）を用いて測定した。
[IR spectrum]
Measurement was performed using a Shimadzu FT-IR DR-8000 spectrometer (manufactured by Shimadzu Corporation).
［核磁気共鳴スペクトル］
１Ｈ−ＮＭＲ及び１３Ｃ−ＮＭＲは、日本電子社製のＪＮＭ−ＬＡ５００（５００ＭＨｚ）を用い、テトラメチルシラン（ＴＭＳ）を内部標準として用いて、測定した。
[Nuclear magnetic resonance spectrum]
1 H-NMR and 13 C-NMR were measured using JNM-LA500 (500 MHz) manufactured by JEOL Ltd. and tetramethylsilane (TMS) as an internal standard.
［高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）］
ポンプは、Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＬＣ−６ＡＤを、示差屈折計検出器は、Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＲＩＤ−１０Ａを、紫外可視分光光度計検出器は、Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＳＰＤ−１０Ａを用いた。（いずれも島津製作所社製）
[High-performance liquid chromatography (HPLC)]
Shimadzu LC-6AD was used as the pump, Shimadzu RID-10A was used as the differential refractometer detector, and Shimadzu SPD-10A was used as the UV-visible spectrophotometer detector. (Both made by Shimadzu Corporation)
分離精製物ｎｔ−４について測定した外観性状、旋光度［α］Ｄ、質量分析、ＵＶスペクトル、ＩＲスペクトル、１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲの測定結果を以下に示す。この測定結果に基づき構造解析した結果、分離精製物ｎｔ−４は、前記構造式（１）で表される新規化合物であることが判明した。 The appearance properties, optical rotation [α] D , mass spectrometry, UV spectrum, IR spectrum, 1 H-NMR, and 13 C-NMR measurement results of the separated and purified product nt-4 are shown below. As a result of structural analysis based on this measurement result, it was found that the separated and purified product nt-4 was a novel compound represented by the structural formula (1).
・外観性状：白色粉末
・旋光度：［α］Ｄ ２５−１４．９°（ｃ＝０．５２、ＭｅＯＨ）
・ＵＶ［ＭｅＯＨ、ｎｍ（ｌｏｇε）］：２７６（４．４２）
・ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）：νｍａｘ ３４２５、１４７３、１２７１、１０７６ｃｍ−１
・ｐｏｓｉｔｉｖｅ−ｉｏｎ ＦＡＢ−ＭＳ： ｍ／ｚ ４９９［Ｍ＋Ｎａ］＋
・Ｈｉｇｈ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｐｏｓｉｔｉｖｅ−ｉｏｎ ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）
Ｃａｌｃｄ． ｆｏｒ Ｃ２１Ｈ３２Ｏ１２Ｎａ（Ｍ＋Ｎａ）＋：４９９．１７７５
Ｆｏｕｎｄ ：４９９．１７８６
・１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ジメチルスルフォキシドｄ６）：測定結果（化学シフトδＨ）は表１に記載
・１３Ｃ−ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ、ジメチルスルフォキシドｄ６）：測定結果（化学シフトδＣ）は表１に記載
Appearance property: White powder Optical rotation: [α] D 25 -14.9 ° (c = 0.52, MeOH)
UV [MeOH, nm (log ε)]: 276 (4.42)
IR spectrum (KBr): ν max 3425, 1473, 1271, 1076 cm −1
Positive-ion FAB-MS: m / z 499 [M + Na] +
・ High resolution positive-ion ESI-MS (m / z)
Calcd. for C 21 H 32 O 12 Na (M + Na) + : 499.1775
Found: 499. 1786
1 H-NMR (500 MHz, dimethyl sulfoxide d 6 ): measurement results (chemical shift δ H ) are listed in Table 1. 13 C-NMR (125 MHz, dimethyl sulfoxide d 6 ): measurement results (chemical shift) δ C ) is listed in Table 1.
試験例１
実施例１で得られたＭｅＯＨ抽出エキス、ＣＨＣｌ３移行部、ＥｔＯＡｃ移行部、ｎ-ＢｕＯＨ移行部のメラニン産生抑制作用について、以下に示す方法でメラニン産生抑制試験を行った。その結果を表２に記す。
Test example 1
MeOH extract obtained in Example 1, CHCl 3 transitions, EtOAc transition, the melanin production inhibitory effect of n-BuOH transition were melanin production inhibition test by the following method. The results are shown in Table 2.
［メラニン産生抑制試験］
理化学研究所から購入したＢ１６ｍｅｌａｎｏｍａ４Ａ５を、１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、１００ｕｎｉｔ／ｍｌペニシリン及び１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを含むＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ、ｇｌｕｃｏｓｅ４５００ｍｇ／Ｌ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）で培養（５％ＣＯ２、３７℃）した。
[Melanin production inhibition test]
B16 melanoma 4A5 purchased from RIKEN is a Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM, glucose 4500 mg / L, Sigma) containing 10% (v / v) fetal bovine serum (FBS), 100 units / ml penicillin and 100 μg / ml streptomycin. It was cultured (5% CO 2, 37 ℃ ) in -Aldrich).
４８穴培養プレート（住友ベークライト社製）に８．０×１０３個／穴（２００μＬ／穴）を播種し、２４時間培養後、６ｍＭテオフィリン含有培地（５０μＬ／穴）および被検サンプル含有培地（５０μＬ／穴）を添加した。なお、被検サンプルはＤＭＳＯに溶解し、培地に添加した（ＤＭＳＯ終濃度０．１ ％（ｖ／ｖ））。 A 48-well culture plate (manufactured by Sumitomo Bakelite Co., Ltd.) was seeded with 8.0 × 10 3 cells / well (200 μL / well) and cultured for 24 hours. 50 μL / well) was added. The test sample was dissolved in DMSO and added to the medium (DMSO final concentration 0.1% (v / v)).
７２時間培養後、培地を除去し、蒸留水１００μＬ／穴を添加し、超音波破砕機により細胞を破砕した。破砕後、破砕液に６Ｎ ＮａＯＨを加えて細胞を溶解（２０μＬ／穴、８０℃、３０分）し、細胞溶解液を別の９６穴プレートに移して（１００μＬ／穴）、生成したメラニンをマイクロプレートリーダーにて測定した（測定波長：４０５ｎｍ、参照波長：６５５ｎｍ）。 After culturing for 72 hours, the medium was removed, 100 μL / well of distilled water was added, and the cells were disrupted with an ultrasonic disrupter. After disruption, 6N NaOH is added to the disrupted solution to lyse cells (20 μL / well, 80 ° C., 30 minutes), the cell lysate is transferred to another 96-well plate (100 μL / well), and the produced melanin is micronized. Measurement was performed with a plate reader (measurement wavelength: 405 nm, reference wavelength: 655 nm).
以下の式に従って、生成したメラニンの産生抑制率を算出した。
メラニン産生抑制率（％）＝（（Ａ−Ｂ）／Ａ）ｘ１００
［Ａ：被験試料未添加（対照群）のＯ．Ｄ．値、 Ｂ：被験試料添加のＯ．Ｄ．値］
The production inhibition rate of the produced melanin was calculated according to the following formula.
Melanin production inhibition rate (%) = ((A−B) / A) × 100
[A: O.I. with no test sample added (control group) D. Value, B: O.D. of test sample addition D. value]
また、対照群との有意差の検定にはＤｕｎｎｅｔｔの方法により、多重比較検定を行い、ｐ＜０．０５を有意として＊の記号を付した。 For the test of significant difference from the control group, multiple comparison test was performed by Dunnett's method, and p <0.05 was regarded as significant and marked with *.
上記の表の結果は、ニホンスイセン花部より調製したＭｅＯＨ抽出エキス及びＣＨＣｌ３移行部は、メラニンの産生を抑制する効果があることを示している。 Results of the above table, MeOH extract and CHCl 3 transitions prepared from Nihon daffodil flower section indicates that there is the effect of suppressing the production of melanin.
試験例２
実施例１で得られた構造式（１）、（２）、（３）、（４）、（５）、（６）又は（７）で表される化合物のメラニン産生抑制作用について、試験例１で行った方法と同じ方法でメラニン産生抑制試験を行った。その結果を表３に記す。
Test example 2
Test example of melanin production inhibitory action of the compound represented by the structural formula (1), (2), (3), (4), (5), (6) or (7) obtained in Example 1 The melanin production suppression test was conducted by the same method as in 1. The results are shown in Table 3.
また、化粧品に配剤されて美白作用を示す化合物として使用されているアルブチンを陽性対照薬として使用し、試験例１で行った方法と同じ方法でメラニン産生抑制試験を行った。その結果を表４に記す。 Moreover, the melanin production suppression test was done by the same method as the method performed in Test Example 1 using arbutin used as a compound which is dispensed in cosmetics and has a whitening effect as a positive control agent. The results are shown in Table 4.
上記の表３および４の結果は、構造式（１）〜（７）の化合物（本発明のメラニン産生抑制剤）は、化粧品に頻用されるアルブチンよりも、強いメラニン産生抑制作用を有することを示している。 The results in Tables 3 and 4 show that the compounds of structural formulas (1) to (7) (the melanin production inhibitor of the present invention) have a stronger melanin production inhibitory action than arbutin frequently used in cosmetics. Show.
Claims (5)
、下記の構造式（２）で表される化合物またはその塩：
、下記の構造式（３）で表される化合物またはその塩：
、下記の構造式（４）で表される化合物またはその塩：
、下記の構造式（５）で表される化合物：
、下記の構造式（６）で表される化合物：
及び、下記の構造式（７）で表される化合物：
からなる群の中から選ばれる１又は２以上を有効成分として含むことを特徴とするメラニン産生抑制剤。 Compound represented by the following structural formula (1):
, A compound represented by the following structural formula (2) or a salt thereof:
, A compound represented by the following structural formula (3) or a salt thereof:
, A compound represented by the following structural formula (4) or a salt thereof:
And a compound represented by the following structural formula (5):
And a compound represented by the following structural formula (6):
And a compound represented by the following structural formula (7):
The melanin production inhibitor characterized by including 1 or 2 or more selected from the group which consists of as an active ingredient.
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