JP2016140251A - がん幹細胞に対する増殖抑制能を有するマイクロrnaをスクリーニングする方法及びマイクロrnaを有効成分とするがん幹細胞の増殖抑制剤 - Google Patents
がん幹細胞に対する増殖抑制能を有するマイクロrnaをスクリーニングする方法及びマイクロrnaを有効成分とするがん幹細胞の増殖抑制剤 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2016140251A JP2016140251A JP2015015982A JP2015015982A JP2016140251A JP 2016140251 A JP2016140251 A JP 2016140251A JP 2015015982 A JP2015015982 A JP 2015015982A JP 2015015982 A JP2015015982 A JP 2015015982A JP 2016140251 A JP2016140251 A JP 2016140251A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- stem cells
- cancer stem
- stem cell
- cancer
- fraction
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
【解決手段】がん幹細胞及び前記がん幹細胞を含む悪性腫瘍が発生する組織における組織幹細胞それぞれからエクソソーム画分及び細胞質画分を調製する工程、前記各画分におけるマイクロRNAの発現レベルを網羅的に測定する工程、前記組織幹細胞のエクソソーム画分及び細胞質画分の両方で発現しており、かつ前記がん幹細胞のエクソソーム画分及び細胞質画分における発現レベルが組織幹細胞の対応する画分における発現レベルより低いマイクロRNAを特定する工程、及び前記特定されたマイクロRNAの前記がん幹細胞に対する増殖抑制能を試験する工程を含む、がん幹細胞に対する増殖抑制能を有するマイクロRNAをスクリーニングする方法。
【選択図】図1
Description
前記各画分におけるmiRの発現レベルを網羅的に測定する工程、
前記組織幹細胞のエクソソーム画分及び細胞質画分の両方で発現しており、かつ前記がん幹細胞のエクソソーム画分及び細胞質画分における発現レベルが組織幹細胞の対応する画分における発現レベルより低いmiRを特定する工程、及び
前記特定されたmiRの前記がん幹細胞に対する増殖抑制能を試験する工程
を含む、がん幹細胞に対する増殖抑制能を有するmiRをスクリーニングする方法。
(2)がん幹細胞及び組織幹細胞が、GICs及びNSCs、乳がん幹細胞及び乳腺組織幹細胞、大腸がん幹細胞及び腸管上皮幹細胞、白血病幹細胞及び造血幹細胞、肝臓がん幹細胞及び肝幹細胞、食道がん幹細胞及び食道上皮幹細胞、胃がん幹細胞及び胃粘膜上皮幹細胞、膵臓がん幹細胞及び膵臓幹細胞、悪性黒色腫及び色素幹細胞、頭頚部扁平上皮がん及び頭頚部扁平上皮幹細胞、又は前立腺がん及び前立腺幹細胞のいずれかの組合せである、(1)に記載のスクリーニング方法。
(3)miRを特定する工程が、がん幹細胞のエクソソーム画分及び細胞質画分における発現レベルが前記組織幹細胞の対応する画分における発現レベルの少なくとも1/16以下のmiRを特定する工程である、(1)又は(2)に記載のスクリーニング方法。
(4)hsa−miR−342−5p、hsa−miR−301b−3p及びそれらの機能的等価物よりなる群から選択される少なくとも一種以上の核酸を有効成分とするがん幹細胞増殖抑制剤。
(5)がん幹細胞がGICsである、(4)に記載のがん幹細胞増殖抑制剤。
(6)(4)又は(5)に記載のがん幹細胞増殖抑制剤を含む医薬。
本明細書においてmiRは、miRの配列情報等を集めたデータベースであるmiRBase(http://www.mirbase.org/)に定められたID及びアクセション番号によって示される。また、かかるID及びアクセッション番号によって示されるmiRの塩基配列は、各ID及びアクセッション番号の下で前記miRBaseに記録されているとおりである。
本発明において、がん幹細胞(Cancer stem cells)は、Cancer Initiating cellsとも呼ばれることのある、悪性腫瘍組織中に存在して自らと同じ細胞を作り出す自己複製能及び悪性腫瘍を構成する各種がん細胞に分化する多分化能を有する細胞を意味する。
本発明において、組織幹細胞(Tissue stem cells)は、成体幹細胞(Adult stem cells)又は体性幹細胞(somatic stem cells)とも呼ばれることのある、生体組織に存在して自らと同じ細胞を作り出す自己複製能及び正常な組織を構成する各種細胞に分化する多分化能を有する細胞を意味する。組織幹細胞は各種組織毎に存在し、組織中で死滅した細胞を補充し、損傷した組織を再生させる機能を有すると考えられている。
<スクリーニング方法>
本発明は、がん幹細胞及び前記がん幹細胞を含む悪性腫瘍が発生する組織における組織幹細胞それぞれからエクソソーム画分及び細胞質画分を調製する工程、前記各画分におけるmiRの発現レベルを網羅的に測定する工程、前記組織幹細胞のエクソソーム画分及び細胞質画分の両方で発現しており、かつ前記がん幹細胞のエクソソーム画分及び細胞質画分における発現レベルが組織幹細胞の対応する画分における発現レベルより低いmiRを特定する工程、及び前記特定されたmiRの前記がん幹細胞に対する増殖抑制能を試験する工程を含む、がん幹細胞に対する増殖抑制能を有するmiRをスクリーニングする方法を提供する。
本発明は、hsa−miR−342−5p、hsa−miR−301b−3p(以下、これらを纏めてmiRsと表す)及びそれらの機能的等価物よりなる群から選択される少なくとも一種以上の核酸を有効成分とするがん幹細胞、特にGICsに対する増殖抑制剤を提供する。上記のmiRsはいずれも、GICsとNSCsとの組合せに対して本発明のスクリーニング法を実施して特定されたものである。
本発明は、miRsの機能的等価物を有効成分とするがん幹細胞、特にGICsに対する増殖抑制剤を含む。ここで機能的等価物とは、下記のいずれかの核酸を意味する。
a)miRsの各塩基配列と少なくとも70%以上、好ましくは80%以上、より好ましくは90%以上、さらに好ましくは95%以上の同一性を示す塩基配列からなり、かつGICsに対する増殖抑制能を有するRNA
b)生体内においてmiRs又はa)のRNAを産生することができる核酸
c)miRs、a)又はb)のRNAの塩基配列において一部の塩基がデオキシリボヌクレオチドに置き換えられたキメラ核酸であって、かつGICsに対する増殖抑制能を有する核酸
d)miRs又はa)〜c)のRNA若しくは核酸とこれに相補するDNA鎖又はRNA鎖とのハイブリッド核酸であって、かつGICsに対する増殖抑制能を有する核酸
e)miRs又はa)〜d)のRNA若しくは核酸の塩基配列の一部が修飾された又は非天然塩基によって置換された塩基配列からなり、かつGICsに対する増殖抑制能を有する核酸。
1)GICs及びNSCsの培養
ヒトGBM組織からPapain Dissociation System(Worthington社)にて調製したヒトGICs及びInvitrogen社から購入したH9 hESC由来ヒトNSCsを、10nMのbFGF、10nMのヒトEGF、5μMのヘパリン、N2supplement(Wako社)、10μg/mLのインスリン、GlutaMAXsupplement(Life Technologies社)、100units/mLのペニシリンG及び100μg/mLのストレプトマイシンを含む塩基性無血清ダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)/Ham’sF−12(Wako社)(NSC培地)で、37℃でそれぞれ10日間以上培養した。
ExoMirキット(BIOO Scientific社)を用いて、1)で培養したGICs及びNSCsの培養液からエクソソーム画分を調製し、TRIzol(Invitrogen社)を用いてエクソソーム画分の全RNAを抽出した。また、Total RNA preparationキット(QIAGEN社)を用いて、細胞質画分の全RNAを抽出した。
2)で得たGICs及びNSCsのエクソソーム画分の全RNA100ngをmicroRNA Microarray kitを用いてラベルして、Human miRNA Microarray Release 16.0(アジレントテクノロジー社)に対してハイブリダイズさせた。さらに、ハイブリダイゼーションシグナルをDNA microarray scanner(Agilent Technologies)を用いて検出し、スキャンイメージをAgilent feature extraction softwareによって分析した。
2)で得たGICs及びNSCsの細胞質画分の全RNAを増幅し、one−color Agilent Low Input Quick Amp Labeling Kit (Agilent Technologies)を用いてCyanine3(Cy3)で標識化した。標識された増幅RNAをフラグメント化し、Agilent Human GE 8x60K Microarrayにハイブリダイズさせた。洗浄後、マイクロアレイをAgilent DNA microarray scannerを用いてスキャンした。スキャンした各特徴の強度を、Agilent feature extraction softwareを用い、バックグラウンドを差し引くことで定量化した。
5)発現レベルの比較
Agilent GeneSpring GX version 11.0.2を用いて、3)及び4)のマイクロアレイで得た各強度に対してノーマライゼーションを行い、ユークリッド距離及び平均結合方法(Agilent GeneSpring GX)を用いて、発現遺伝子の階層的なサンプルのクラスタリングを行った。
pBApoCMV−Neoを基にしたタカラマウスmiR発現ライブラリー(タカラ)から、5)で特定した7種類のmiRに関する発現ベクターを作製した。コントロールmiR発現ベクターはタカラから購入した。
Claims (6)
- がん幹細胞及び前記がん幹細胞を含む悪性腫瘍が発生する組織における組織幹細胞それぞれからエクソソーム画分及び細胞質画分を調製する工程、
前記各画分におけるマイクロRNAの発現レベルを網羅的に測定する工程、
前記組織幹細胞のエクソソーム画分及び細胞質画分の両方で発現しており、かつ前記がん幹細胞のエクソソーム画分及び細胞質画分における発現レベルが組織幹細胞の対応する画分における発現レベルより低いマイクロRNAを特定する工程、及び
前記特定されたマイクロRNAの前記がん幹細胞に対する増殖抑制能を試験する工程
を含む、がん幹細胞に対する増殖抑制能を有するマイクロRNAをスクリーニングする方法。 - がん幹細胞及び組織幹細胞が、神経膠芽腫幹細胞及び神経幹細胞、乳がん幹細胞及び乳腺組織幹細胞、大腸がん幹細胞及び腸管上皮幹細胞、白血病幹細胞及び造血幹細胞、肝臓がん幹細胞及び肝幹細胞、食道がん幹細胞及び食道上皮幹細胞、胃がん幹細胞及び胃粘膜上皮幹細胞、膵臓がん幹細胞及び膵臓幹細胞、悪性黒色腫及び色素幹細胞、頭頚部扁平上皮がん及び頭頚部扁平上皮幹細胞、又は前立腺がん及び前立腺幹細胞のいずれかの組合せである、請求項1に記載のスクリーニング方法。
- マイクロRNAを特定する工程が、がん幹細胞のエクソソーム画分及び細胞質画分における発現レベルが前記組織幹細胞の対応する画分における発現レベルの少なくとも1/16以下のマイクロRNAを特定する工程である、請求項1又は2に記載のスクリーニング方法。
- hsa−miR−342−5p、hsa−miR−301b−3p及びそれらの機能的等価物よりなる群から選択される少なくとも一種以上の核酸を有効成分とするがん幹細胞増殖抑制剤。
- がん幹細胞が神経膠芽腫幹細胞である、請求項4に記載のがん幹細胞増殖抑制剤。
- 請求項4又は5に記載のがん幹細胞増殖抑制剤を含む医薬。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2015015982A JP2016140251A (ja) | 2015-01-29 | 2015-01-29 | がん幹細胞に対する増殖抑制能を有するマイクロrnaをスクリーニングする方法及びマイクロrnaを有効成分とするがん幹細胞の増殖抑制剤 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2015015982A JP2016140251A (ja) | 2015-01-29 | 2015-01-29 | がん幹細胞に対する増殖抑制能を有するマイクロrnaをスクリーニングする方法及びマイクロrnaを有効成分とするがん幹細胞の増殖抑制剤 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2016140251A true JP2016140251A (ja) | 2016-08-08 |
Family
ID=56567918
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2015015982A Pending JP2016140251A (ja) | 2015-01-29 | 2015-01-29 | がん幹細胞に対する増殖抑制能を有するマイクロrnaをスクリーニングする方法及びマイクロrnaを有効成分とするがん幹細胞の増殖抑制剤 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP2016140251A (ja) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2019107487A1 (ja) * | 2017-11-29 | 2019-06-06 | 国立大学法人 東京医科歯科大学 | マイクロrna及びその誘導体を有効成分とする医薬組成物 |
CN112824531A (zh) * | 2019-11-20 | 2021-05-21 | 上海赑犇生物工程有限公司 | 一种维持干细胞特性的试剂盒、维持方法及应用 |
CN113082216A (zh) * | 2021-04-25 | 2021-07-09 | 吉林大学 | 含miR-124的胶质瘤细胞外泌体及其制备方法和应用 |
-
2015
- 2015-01-29 JP JP2015015982A patent/JP2016140251A/ja active Pending
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
ADVANCED DRUG DELIVERY REVIEWS, AVAILABLE ONLINE 22 MAY 2014, vol. Vol.81, JPN6018049119, pages 128 - 141 * |
BRITISH J. CANCER, 2012年, vol. Vol.106, JPN6018049117, pages 1320 - 1330 * |
医学のあゆみ, 2014年, vol. 250, no. 1, JPN6018049115, pages 40 - 44 * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2019107487A1 (ja) * | 2017-11-29 | 2019-06-06 | 国立大学法人 東京医科歯科大学 | マイクロrna及びその誘導体を有効成分とする医薬組成物 |
CN112824531A (zh) * | 2019-11-20 | 2021-05-21 | 上海赑犇生物工程有限公司 | 一种维持干细胞特性的试剂盒、维持方法及应用 |
CN113082216A (zh) * | 2021-04-25 | 2021-07-09 | 吉林大学 | 含miR-124的胶质瘤细胞外泌体及其制备方法和应用 |
CN113082216B (zh) * | 2021-04-25 | 2022-07-01 | 吉林大学 | 含miR-124的胶质瘤细胞外泌体及其制备方法和应用 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6526164B2 (ja) | 神経幹細胞および運動ニューロンの生成 | |
Wang et al. | miR-33a promotes glioma-initiating cell self-renewal via PKA and NOTCH pathways | |
US20160263160A1 (en) | Mesenchymal Stem Cells Producing Inhibitory RNA for Disease Modification | |
Huang et al. | Mesenchymal stem cells modified with miR-126 release angiogenic factors and activate Notch ligand Delta-like-4, enhancing ischemic angiogenesis and cell survival | |
JP6362596B2 (ja) | 神経栄養因子を分泌する間葉系幹細胞の作製方法 | |
JP5845493B2 (ja) | miRNA導入による新規hiPSC作製法 | |
JP5840119B2 (ja) | 誘導多能性幹細胞の製造方法 | |
Terada et al. | Human pluripotent stem cell-derived tumor model uncovers the embryonic stem cell signature as a key driver in atypical teratoid/rhabdoid tumor | |
WO2007088372A2 (en) | Cell culture | |
EP2580328A2 (en) | Micrornas for the detection and isolaton of human embryonic stem cell-derived cardiac cell types | |
JP2015514392A (ja) | 星状膠細胞作製のためのミクロrna | |
Goranci-Buzhala et al. | Cilium induction triggers differentiation of glioma stem cells | |
US20210147853A1 (en) | Use of Trinucleotide Repeat RNAs To Treat Cancer | |
JP2016140251A (ja) | がん幹細胞に対する増殖抑制能を有するマイクロrnaをスクリーニングする方法及びマイクロrnaを有効成分とするがん幹細胞の増殖抑制剤 | |
Mela et al. | The tetraspanin KAI1/CD82 is expressed by late-lineage oligodendrocyte precursors and may function to restrict precursor migration and promote oligodendrocyte differentiation and myelination | |
US20150283164A1 (en) | Treatment of Myelodysplastic Syndrome by Inhibition of NR2F2 | |
WO2023102471A1 (en) | Human cortical organoids with engineered microglia-like cells | |
WO2013162027A1 (ja) | 神経分化促進剤 | |
JP6548184B2 (ja) | がんの悪性度、予後及び/又は抗がん剤治療の有効性を判定するためのバイオマーカー、抗がん剤を選択するためのコンパニオン診断薬並びに抗がん剤 | |
CA3234811A1 (en) | Rejuvenation treatment of age-related white matter loss | |
WO2021188467A1 (en) | Compositions and methods of treating glioma | |
Zhao et al. | Rui Wu, Yue Tang, Wenqiao Zang, Yuanyuan Wang, Min Li, Yuwen Du | |
Chang et al. | Zhong Liu, Cheng Zhang, 3 Maria Skamagki, 2 Alireza Khodadadi-Jamayran, Wei Zhang, Dexin Kong |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20180129 |
|
RD02 | Notification of acceptance of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7422 Effective date: 20180129 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20180129 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20181009 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20181009 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20181218 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190125 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20190618 |