JP2016053032A - 不活化水痘帯状疱疹ウイルスワクチン、その生産方法及び使用 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】不活化された水痘帯状疱疹ウイルス(VZV)であって、前記VZVの感染性が検出限界以下であり、前記不活化VZVが患者に投与されたときにVZVに対する免疫応答を誘発する前記ウイルス。治療上有効量の該ウイルス及び薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物。該組成物の実施態様において、VZVは、例えば約5〜約50kGyのガンマ線照射により不活化される。
【選択図】図1
Description
本発明は不活化水痘帯状疱疹ウイルスワクチン(VZV)を含むワクチン組成物及び前記
組成物の生産方法に関する。
を引き起こす。水痘の臨床症状は一般的に医療行為を施さなくても短期間で解決するが、
VZVは感染後多年にわたって感覚神経に潜伏することができる。潜伏VZVの再活性化
及び複製は、しばしば数十年後に、一般的には単一の皮膚分節に限定される有痛性の発疹
であるshingles(帯状疱疹)として知られている帯状疱疹(herpes zo
ster(HZ))と結果としてなり得る。当該VZV再活性化は、高齢者又は免疫不全
者に発生する細胞媒介性免疫の低下と関連する(Weinberg et al., J
ournal of Infectious Diseases (2009) 200
: 1068−77)。何人かの患者においては、帯状疱疹後神経痛(PHN)と呼ばれ
る合併症であるHZに伴う疼痛は、HZ発疹が治癒した後数カ月又は数カ年さえも持続す
る可能性がある。
.,Whitehouse Station,NJ)が、高齢患者における帯状疱疹の予
防に現在利用可能である(米国特許第6,214,354号及び第5,997,880号
)。本ワクチンは免疫適格性患者個体群におけるHZの有害な影響を顕著に減少させた(
Oxman,MN,Clin Infect Dis.(2010)51(2):197
−213;Sanford and Keating,Drugs Aging(201
0)27(2):159−76;Oxman et al.,N.Engl.J.Med
.(2005)352:2271−83)。しかしながら、弱毒化生ワクチンは免疫不全
患者には適していないかもしれない。
又は臓器移植(SOT)を受けた患者、HIV感染患者、及び自己免疫疾患患者を含む免
疫不全個体は、一般の個体群と比較してHZの発生率がより高い。さらにこれらの患者個
体群は、重篤で生命を危うくする合併症(Gourishankar et al.(2
004)Am J.Transplant 4:108−115,Ragozzino
et al.(1982)Medicine (Baltimore)61:310−3
16、Wung et al.(2005)Am J Med 118:1416.e9
−1416.e18,Dworkin & Schmader(2003)Clinic
al Infectious Diseases 36:877−882,Gebo e
t al.(2005)J Acquir Immune Defic Syndr 4
0:169−174,Mattiuzzi et al.(2003)Clinical
Cancer Research 9:976−980,Dworkin et al
.(2003)Neurology 60:1274−1283))、例えば髄膜脳炎(
Tauro et al.(2000)Bone Marrow Transplant
26:795−796)、横断性脊髄炎、視力障害(Walton et al.(1
999)Bone Marrow Transplant 23:1317−1320)
、間質性肺炎(Wacker et al.(1989)Bone Marrow Tr
ansplant 4:191−194)、肝炎(Rogers et al.(199
5)Bone Marrow Transplant 15:805−807;Schi
ller et al.(1991)Bone Marrow Transplant
7:489−491)、細菌重複感染、皮膚瘢痕及び傷跡(Schuchter et
al.(1989) Blood 74:1424−1427)等の発症に関して非常に
危険な状態にある。免疫不全個体におけるHZに関連する罹患率及び死亡率の危険性が高
いにも関わらず、この個体群はHZに対するZOSTAVAX(登録商標)等の弱毒化生
ワクチンによる接種に適していない。従ってHZを予防する又はHZ若しくは伴う合併症
の重症度若しくは持続期間を減少するために、免疫不全患者個体群において安全で効果的
であろうワクチンに対する重要な必要性が存在する。
ばサブユニットワクチン、ウイルス様粒子ワクチン及び不活化ホールワクチン等の使用の
調査へと研究者を導いた。多数の認可された不活化ワクチンは、A型肝炎予防ワクチン、
ポリオワクチン、及び日本脳炎ワクチンを含み、ホルマリンを使用して不活化されたウイ
ルスを含んでいる。HZに対しては、免疫不全対象にとってより安全なワクチンは、VZ
Vの熱不活化によって又はサブユニットワクチンの使用によって開発されるだろうと示唆
されていた(Cohen,J.I.,(2008)J.Infect.Dis. 197
(Suppl 2):S237−S241)。Redmanら(J.Infectiou
s Diseeases(1997) 176:578−85)は、50℃での加熱によ
って不活化され、感染性ウイルス含量が1.2pfu/0.5mL以下となった不活化V
ZVワクチンを記載している。このレベルの非感染性は、免疫不全患者に投与するための
製品にとって好ましくないであろう。また米国特許第6,214,354号及び第5,9
97,880号も不活化VZVワクチン使用の可能性に言及し、当該製品の実施例および
熱処理ワクチンの試験を開示している。
疫原性と抗原性を保持しているVZV試料を結果として生じるような、VZVを不活化す
る方法が開発されれば医学的に重要な必要性を満たすことだろう。
結果試料中のVZVの感染性が検出限界以下のレベルとなることを示した。しかしながら
、本明細書記載の方法による不活化に関しては、不活化されなかったVZV試料と比較し
て免疫原性及び/又は抗原性における著しい低下並びにVZVの著しい構造変化が認めら
れない。
ZVの感染性は検出限界以下であり並びに不活化VZVは患者に投与されたときにVZV
に対する免疫応答を誘導する。また治療上有効量の不活化VZV及び薬学的に許容可能な
担体を含む医薬組成物/ワクチンも提供される。本発明の組成物は液体か凍結状態、例え
ば凍結乾燥のいずれかである。本明細書記載の組成物のいくつかの実施態様において、V
ZVはガンマ線照射により不活化される。
は約5kGyから約50kGyのガンマ線を使用してVZVを含む試料をガンマ線照射す
ることを含んでいる。好ましい実施態様において、ガンマ線源は60Coであるが、当該
技術分野において周知の他の同位体もこの点において有用でありえよう。本明細書に開示
される調製方法のいくつかの実施態様において、試料は照射の前に凍結乾燥される。他の
実施態様において、先に凍結乾燥されることなく、液体バルクがガンマ線に暴露される。
方法も提供し、当該方法は治療上有効量の不活化VZV及び薬学的に許容可能な担体を含
むワクチン又は医薬組成物を対象に投与することを含んでおり、ここでVZVはガンマ線
照射によって不活化されている。本明細書記載の治療方法のいくつかの実施態様において
、組成物/ワクチンの投与経路は皮下又は筋肉内である。本発明の本態様の具体的な実施
態様において、患者は50歳以上及び/又は免疫不全者である。
the」は、文脈にそうではないと明白に示されていない限り複数のものを含むものとす
る。
。
treatment)及び予防的(prophylactic)すなわち病気を防ぐ(p
reventative)処置(measure)の双方をいう。治療を必要とする個体
には、病気に罹り易い人々又は病気を予防しようとする人々と同様に既に病気に罹った人
々が含まれる。本発明の不活化VZVによる患者の治療には、以下の1又は複数が含まれ
る。患者におけるVZVに対する免疫応答を誘導/増強すること。水痘に感染した又はV
ZV生ワクチンを接種した患者におけるVZV再活性化の可能性を防止し、改善し、抑制
し、又は減少させること。HZ及び/又はPHN等のVZVの再活性化に関連する他の疾
病若しくは合併症の発症の可能性を防止し又は減少させること。HZ及び/又はPHN等
のVZVの再活性化に関連する他の疾病若しくは合併症の重症度又は持続期間を減少させ
ること。
unt)」とは、所期の効果を生むために十分なワクチン組成物を意味し、限定するもの
ではないが当該効果には以下が含まれる。患者におけるVZVに対する免疫応答を誘導/
増強すること、水痘に感染した又はVZV生ワクチンの接種を受けた患者におけるVZV
の再活性化を防止し、改善し、抑制し、又は減少させること、HZ及び/又はPHNを予
防すること、Z及び/又はPHNの重症度又は持続期間を減少させること。当業者であれ
ばこのレベルが変動しうることを認識している。
をいう。
薬組成物を受容する予定の、免疫適格性固体及び免疫不全個体の双方を含む任意のヒトを
いう。本明細書に定義する場合、「患者」には、自然感染かワクチン接種のいずれかによ
って既にVZVに感染した人々が含まれる。
物をいう。
々のワクチン製剤又は組成物の感染性に関して、製剤又は組成物が試料1mL当たり0.
050以下の感染単位すなわちプラーク形成単位(「PFU‘s」)の感染性VZVウイ
ルスを含むことを意味し、好ましくは0.040PFU‘s/mL以下、0.030PF
U‘s/mL以下、0.020PFU‘s/mL以下、0.015PFU‘s/mL以下
、0.010PFU‘s/mL以下、0.009PFU‘s/mL以下、又は0.008
PFU‘s/mL以下、より好ましくは0.007PFU‘s/mL以下、0.006P
FU‘s/mL以下、0.005PFU‘s/mL以下、0.004PFU‘s/mL以
下、0.003PFU‘s/mL以下、さらに好ましくは0.002PFU‘s/mL以
下、又は0.001PFU‘s/mL以下の感染性VZVウイルスを含むことを意味する
。個々の試料のPFU’sは、例えば実施例1に記載され、さらにKrahらにより記載
された(J.Virol.Methods (1990) 27:319−26)アッセ
イ等の水痘帯状疱疹プラークアッセイ法を使用して定量することができる。また試料の感
染性は、実施例1に記載の通り免疫染色法によって確認することもできる。
例えば、本明細書記載の不活化VZV試料の感染性は0.001PFUs/mL以下であ
った)となるようにガンマ線照射により不活化することができることが、本明細書に示さ
れている。本明細書記載の方法によって産生された不活化VZVは、本発明の治療/免疫
化の方法で使用するための医薬組成物又はワクチンを生産するために、薬学的に許容可能
な担体と製剤化することが可能である。本明細書記載の方法による不活化に関する、不活
化されなかったVZV試料と比較して、免疫原性及び/又は抗原性における著しい低下並
びにVZVの著しい構造変化は認められない。従って、本発明の医薬組成物を患者に投与
するならば、本組成物によって誘発される免疫応答は、不活化されなかった同量のVZV
を含む対照試料によって誘発される免疫応答と著しく異ならない。本明細書で使用する場
合、非不活化対照試料と「著しく異ならない」不活化試料によって誘発された免疫応答は
、約50%以下、より好ましくは約40%以下、約30%以下、さらに好ましくは約20
%以下、15%以下、10%以下、又は5%以下だけ対照試料と異なっている。
体群における臨床試験において、例えば以下のパラメータの1又は複数を測定することに
よって求めることができよう。(1)VZV特異的応答細胞数(Calandraら、W
O 94/002596に記載)、(2)抗VZV細胞障害性T細胞(CTL)、又はV
ZV特異的CD8+細胞、(3)抗VZVヘルパーT細胞、又はVZV特異的CD4+細
胞、(4)抗VZV特的抗体レベル、又は(5)インターフェロン、又はインターロイキ
ン等のリンホカインレベル。
、T細胞応答アッセイ、力価試験、VZVのIFNγ ELISPOTアッセイ、及びE
LISAアッセイを含んでいる。
発された免疫応答の充足性並びに不活化ワクチンの効力を定量するためには、ヒトボラン
ティア/対象の臨床試験における臨床成績を評価することが、例えば、HZの持続期間又
は重症度の減少、及び/又は個体におけるPHN持続期間の帯状疱疹発症後一月未満の期
間までの減少、統計的レベルでの患者個体群における帯状疱疹の発症率の一般個体群に見
出される発症率又は同様に危険な状態にある個体若しくは免疫不全個体の発生率の低下、
を評価することが有用でありえよう。
ながら、VZV調製品が検出限界以下のレベルに不活化され得ることを示している。それ
故に本発明の一態様は、VZVの感染性が検出限界以下であり並びに不活化VZVが患者
に投与されたときにVZVに対し免疫応答を誘導するような不活化VZVを提供する。
容易に決めることができる。当該量は使用目的、又は具体的な患者個体群等の他の要因に
よって変動するであろう。本明細書記載の方法及び組成物のいくつかの実施態様において
、VZVの量は約1から約10VZV抗原単位/用量である。ここで1VZV抗原単位は
およそ1μgのVZV精製タンパク質と等価である。特定の実施態様において、組成物中
のVZV抗原量は、約2と約8VZV抗原単位/用量の間又は約3と約6VZV抗原単位
/用量の間である。抗原量は、適切な抗原アッセイ法、例えば本明細書の実施例2記載の
競合ELISA法により定量することができる。当業者であれば試料中の抗原量を測定す
るために他の適切なアッセイ法を決めることができる。
賦形剤又は希釈剤を含む医薬組成物も提供する。本発明の組成物に有用な薬学的に許容可
能な担体には、使用される投薬量と濃度において患者に無毒である任意の適合性のある薬
剤、例えば水、生理食塩水、ブドウ糖、グリセリン、エタノール、緩衝液、等、及びその
混合物が含まれる。また担体には、追加の成分、例えば安定剤、可溶化剤、NaCl、M
gCl2、又はCaCl2等の浸透圧調整剤、界面活性剤、及びその混合物が含まれても
よい。
際の偶発性の微生物汚染を防止する抗菌性保存料、及び薬学的に許容可能な担体を含有す
る多用量組成物も提供する。当該多用量組成物は、一人の患者に対し予定の時間が過ぎた
後1回よりも多く又は一人より多い患者に提供することができる。
る液体バルクである。他の実施態様において、組成物は凍結乾燥品されている。凍結乾燥
法は当該技術分野で周知である。また本発明によって、注射用滅菌水又は注射用静菌水等
の適切な希釈剤により元に戻される凍結乾燥製剤ももたらされる。
たそれは、任意の生物学的製剤、例えば血液製剤及び抗体製剤中の任意の潜在病原体を滅
菌するためにも使用される。これらの使用に対して、微生物はその機能を保持するような
顧慮はされずに不活化される。ガンマ線照射によるウイルス不活化を記載する文献源は限
られている。
87))は、60Co線処理後の単純疱疹ウイルスのインタクトなウイルス粒子のプラー
ク形成能の生残性及び精製ゲノムのDNA分子に対する損傷を評価した。当該研究は、照
射後のウイルスの抗原性又は免疫原性を評価しなかった。Elliottら(J. Cl
in. Micobiol. 16: 704−708 (1982))による他の研究
は、60Co線を使用してラッサ、マールブルグ、及びエボラウイルスの不活化を評価し
た。不活化の線形動力学がラッサ、マールブルグ、及びエボラウイルスについて観察され
、ウイルスの不活化が60Co線を使用したガンマ線照射によって達成された。Elli
ottらは、液体状態よりも凍結状態のウイルスの不活化のためにより大量の放射線量が
要求されることを観察した。Rosenらと同様、この研究もガンマ線照射後のウイルス
の抗原性又は免疫原性を検討し損なった。Alsharifiら(WO 2010/01
2045)は、ワクチンとしての使用のために、オルトミクソウイルス科のRNAウイル
スであるインフルエンザウイルスを不活化するためのガンマ線照射の使用を記載している
。
性及び構造特性を保持しながら、VZVウイルス調製品の感染性を検出限界以下のレベル
に減少させることができることが示されている。従って本発明
の好ましい実施態様においてVZVは、60Co、137Cesium(セシウム137
)、99Technetium(テクネチウム99)又は99mTC(テクネチウム99
m)等の適切な同位体への暴露によってVZVへ搬送され得るガンマ線照射によって不活
化される。より好ましい実施態様において、ガンマ線は60Co線への暴露によってVZ
Vに搬送される。
y)のガンマ線照射である。1グレイ(Gy)は吸収線量の基本単位であり、1グレイは
1ジュール/キログラム(100ラド)の吸収線量に等しい。当業者であれば、試料に暴
露される放射線量及び所要時間は、照射の所期の吸収線量(線量=フルエンスx時間)に
達するように変動されるべきことを理解するであろう。また当業者であれば、試料の一部
、例えば放射線源に最も近い部分を過剰暴露することなく適切な照射線量が試料全体に搬
送されるように、試料が格納されている容器のサイズに応じて試料が暴露される照射線量
を変動することができるであろう。
化するために使用されるガンマ線照射量は約25kGy以下である。他の実施態様におい
て、ガンマ線照射量は、約5kGyないし約40kGy、約5kGyないし約35kGy
、約5kGyないし約30kGy、約5kGyないし約25kGy、約5kGyないし約
20kGy、約5kGyないし約10kGy、約10kGyないし約50kGy、10k
Gyないし約40kGy、約10kGyないし約35kGy、約10kGyないし約30
kGy、約10kGyないし約25kGy、約10kGyないし約20kGy、約15k
Gyないし約50kGy、約15kGyないし約40kGy、約15kGyないし約35
kGy、約15kGyないし約30kGy、約15kGyないし約25kGy、約15k
Gyないし約20kGyの範囲である。
物は液体バルクであり、VZVを不活化するために使用するガンマ線照射量は約5kGy
から約10kGy又は約5kGyから約12.5kGyである。他の特定の実施態様にお
いて、組成物はガンマ線照射の前に凍結乾燥されるが、当該実施態様において、ガンマ線
照射量は約5kGyから約25kGy又は約15kGyから約25kGyである。
明細書で示しているが、そのことは不活化のモデル化、すなわち不活化VZVを含む試料
中の残存感染性レベルの確実な推定を可能にする上で、非常に有用である。当該不活化の
動力学は熱処理不活化VZVについては観察されなかった。Griebら(Biolog
icals(2002) 30:207−216及びBiomaterials(200
5) 26:2033−2042)は、ガンマ線照射によるウイルスの不活化について2
の特異的機構を記載したが、それはVZVについて観察された不活化の線形動力学を支持
する。第一の機構は「標的中への光子蒸着エネルギーの直接の結果」である。この直接の
エネルギー移動は「分子からの外殻電子の転位及び共有結合の切断」という結果になる。
第二の「間接的な」機構は、典型的には放射線照射の水分子及び酸素との相互作用によっ
て生成されたフリーラジカル及び活性酸素種への化学攻撃の結果である。本明細書記載の
組成物及び方法の特定の実施態様において、VZVはガンマ線照射による不活化の前に凍
結乾燥される。従って、水が凍結乾燥行程で除去されるので水分子との相互作用は起こり
そうもない。
:578−85)は、50℃への加熱によって不活化され、感染性ウイルス含量が1.2
pfu/0.5mL以下となった不活化VZVワクチンを記載している。Redman及
び共同研究者によって記載された熱処理ワクチンは、自家骨髄移植又は抹消血幹細胞注入
又は他の骨髄移植を受ける予定の患者24名間のVZV再活性化に関連する疾患の重症度
を減少させることを示した。このレベルの感染性は免疫不全である患者の全てにとって適
当でない。さらに熱処理を使用するVZVの不活化方法は、低レベルの感染性を達成する
ために長時間を要し、非効率的であり対費用効果が良くない。
供し、ここで当該VZVの感染性は検出限界以下のレベル、すなわち0.050PFU‘
s/mL以下であり、前記不活化VZV組成物は、HZ若しくはVZV再活性化に関連す
る疾病の治療及び/又は予防のために以前に開示されたワクチンよりもより安全であり、
より効率的な製造工程に適している。本発明の不活化VZVは、不活性化後も非不活化V
ZV対照の構造物理的特性、免疫原性及び抗原性を保持する。いくつかの実施態様におい
て感染性は、0.040PFU’s/mL以下、0.030PFU’s/mL以下、又は
0.020PFU’s/mL以下である。また本発明は、感染単位数が0.015PFU
’s/mL以下、0.010PFU’s/mL以下、0.009PFU’s/mL以下、
又は0.008PFU’s/mL以下である実施態様も提供する。他の実施態様において
VZVの感染性は、0.007PFUs/mL以下、0.006PFU’s/mL以下、
0.005PFU’s/mL以下、0.004PFU’s/mL以下又は0.003PF
U’s/mL以下である。さらに他の実施態様において感染性は、0.002PFU’s
/mL以下又は0.001PFU’s/mL以下である。
FU)は、実施例1に記載されKrahら(J.Virol.Methods(1990
) 27:319−26)にさらに記載されたアッセイ等の水痘帯状疱疹プラークアッセ
イ法を使用して定量される。当業者であれば、また他の方法もVZV試料又は組成物の感
染性を定量するために有用であり水痘帯状疱疹プラークアッセイ法に代えて使用されるこ
とを理解するだろう。
本明細書記載の組成物及び方法には、野生型の水痘帯状疱疹ウイルス株、又は米国特許第
3,985,615号に記載され、アメリカ合衆国培養細胞系統保存機関から入手するこ
とができる(寄託番号VR−795TM、ATCC、Manassas、VA)岡株等の
弱毒化ウイルス株を含む任意のVZV株を使用することができる。岡株は元は水痘に自然
感染した健康な少年から得られ、ヒト肺細胞の胚細胞で継代培養された。それはモルモッ
トの胚細胞の細胞培養液及びヒト二倍体胚線維芽細胞の細胞培養液(例えば、MRC−5
細胞)で増殖するように馴化された。本明細書記載の組成物及び方法の好ましい実施態様
において、VZVは岡株又は岡/メルクVZV株等の岡株の派生株である。本明細書で使
用する場合「岡株の派生株」とは、例えば弱毒化生ワクチンとして有用であるようにウイ
ルス株を十分に弱毒化するために、岡株を適切な細胞型中で継代培養をさらに継続する過
程によって得られるウイルス株である。本明細書記載の方法及び組成物において、岡株若
しくはその派生株等の生又は弱毒化VZVは、患者への投与の前にガンマ線照射により不
活化される。
料をガンマ線照射することを含む不活化VZVを調製する方法も提供する。本発明のこの
態様の好ましい実施態様において、ガンマ線照射は試料を60Co線に暴露することによ
って試料に提供される。本発明のこの態様の特定の実施態様において、ガンマ線照射量は
上述の通りである。
供する。さらに、本明細書記載の方法によって産生される治療上有効量の不活化VZV及
び薬学的に許容可能な担体を含むワクチンが提供される。
のVZVの再活性化に関連する他の疾病若しくは合併症についての治療、予防、免疫化、
又は可能性の減少のための方法も提供し、当該方法は不活化VZV及び薬学的に許容可能
な担体を含む、治療上有効量のワクチン又は医薬組成物を患者に投与することを含み、こ
こでVZVはガンマ線照射により不活化されている。VZV再活性化は細胞媒介性免疫の
低下と関連するので本明細書の治療方法は、自然感染又はワクチン接種によって以前に水
痘に暴露されたが、加齢及び/又は免疫系機能障害の結果としてその免疫応答が低下して
しまった患者において、細胞媒介性免疫応答を追加免疫するために有用である。
のではないが、皮下注射、皮内導入、皮膚圧入、又は静脈内送達、筋肉内送達若しくは吸
入送達等の他の投与方法を含む、任意の適切な経路によって患者に投与することができよ
う。本明細書記載の方法の好ましい実施態様において、投与方法は皮下又は筋肉内である
。
不全患者個体群におけるその重症度若しくは持続期間の低下に有用であり、これらの患者
個体群には、限定するものではないが、健康な患者及び同種造血幹細胞移植(HCT)又
は臓器移植(SOT)受容免疫不全患者、HIV感染患者、自己免疫疾患患者、血液癌に
罹患した個体;広い範囲の悪性固形腫瘍にわたる化学療法受容個体;リウマチ性関節炎(
RA)、全身性エリテマトーデス(SLE)、クローン病、乾癬、及び多発性硬化症を含
む広い範囲の病態にわたる免疫抑制療法の長期受容患者が含まれる。本明細書記載の方法
のいくつかの実施態様において、不活化VZVワクチンは、疾病、例えば上記の疾病又は
疾病の治療(例えば、血液系腫瘍、悪性固形腫瘍又は化学療法、自己免疫疾患)のために
HZに対し非常に危険な状態にある患者に投与される。
、健康又は免疫不全であってよい。他の実施態様において、患者は55歳以上、60歳以
上、65歳以上、70歳以上、又は75歳以上である。他の実施態様において、患者は約
50から約55歳、約55から約60歳、約60から約65歳、又は約65から70歳で
ある。
常施される「標準治療」の療法;又は標的患者個体用の他のワクチンと同時に投与され、
当該ワクチンには、例えば、PNEUMOVAX(登録商標)23(PN23,Merc
k&Co.,Inc.)等の肺炎球菌ワクチン、RECOMBIVAX(登録商標)HB
又はENGERIX−B(登録商標)(GlaxoSmithKline Biolog
icals)等のB型肝炎ワクチン(HBV)及びインフルエンザワクチン等が含まれる
。
本明細書で提供される治療/予防方法の特定の実施態様において、当該方法には予定され
た所要時間が適切に経過することを可能にすること及び医薬組成物の1又は複数の追加用
量を患者に投与することがさらに含まれる。前記の実施態様において、時間が適切に経過
した後に1の追加用量が患者に投与されてよく、代わりに時間が適切に経過した後に2、
3又は4の追加用量が各々投与されてよい。代表的な実施態様において、経時的に適切な
間隔を置いた投与計画の一環として3又は4用量が患者に投与される。当業者であれば投
与間の時間が患者個体群、ワクチンの投与量及び/又は患者の投薬遵守に依存して変動し
得ることを理解するであろう。代表的な実施態様において、患者への各用量の投与の間に
、約3週、約1月、約6週、約2月、又は約3月以上の期間が過ぎることが許される。1
の特定の実施態様においてワクチンは、当該移植前、例えば移植前の3週、1月又は2月
等に移植を受ける予定の患者に投与され、それから追加の1又は複数の用量が移植後の適
切な時期、例えば移植後3週、1月又は2月等に、予定された各用量間の時間の経過を経
て患者に与えられる。
示する目的のために参照され援用される。本明細書のいかなるものも、本発明が先願発明
を理由として当該開示より日時が前である資格を与えられないことを認めるものと解され
てはならない。
らと寸分違わない実施態様に限定されないこと、及び添付の請求項で定義した通りの本発
明の範囲又は意図から逸脱することなく当業者によってその中で種々の変更及び改変が果
たされ得ることを了解されたい。
材料及び方法
水痘帯状疱疹ウイルス(VZV)調製品の感染性力価は、Krahら(J.Virol
Methods(1990) 27:319−326)によって記載された液体オーバ
ーレイ法を使用して測定した。アッセイは以下の通り実施した。MRC−5(ヒト二倍体
胚線維芽細胞)を、乳糖100mg/L、ネオマイシン50μg/mL、2mMのL−グ
ルタミンを含むBME(イーグル基礎培地ハンクス液)5mL容中600、000細胞に
て60mmの組織培養プレートに播種し、それから5%±1%CO2の湿った雰囲気下、
35±1℃でインキュベートした。24〜56時間インキュベートした後に、細胞は50
〜80%の培養密度に達し、プラークアッセイに使用した。細胞増殖培地を吸引で除去し
、PGS安定剤(ショ糖及び加水分解ゼラチンを含むPBS)等の適切な希釈剤で希釈し
たVZV溶液の一定分量100μLで細胞を感染させた。
。次に培養液は、5mL容の維持培地(加熱不活化ウシ胎児血清2%、ネオマイシン50
μg/mL及び2mMのL−グルタミンを含む最小必須培地・アール塩(MEM))でオ
ーバーレイし、プラーク形成のために5%±1%CO2の湿った雰囲気下、35±1℃で
6〜7日間のインキュベーションに戻した。次に培地はプレートから吸引し、プラークを
0.2%(w/v)クマシーブルーR−250・エタノール溶液(1%酢酸を含む)によ
る細胞染色によって可視化した。プラーク数は、3〜5枚のレプリカプレートの平均であ
り、プラーク形成単位/mL(PFU/mL)を与えるために希釈係数(試験ウイルスの
相当する希釈度の逆数)及び接種容量補正係数(10、0.1mLから1mLに調整する
ため)によって乗じた。
を考慮して(ここで偶発性の単層のひっかきのために又は細胞凝集隗の存在のために、プ
ラークアッセイに使用した細胞単層中にプラーク様のスポットが現れるかもしれない)、
1の免疫染色法を開発しそれからプラークとして計数された増殖巣が実際にVZV感染し
た細胞の増殖巣(VZVプラーク)であることを確認するために適用した。手短に言えば
、標準プラークアッセイにおけるクマシーブルーによる染色の後に、目に見えるプラーク
を有する培養液を、0.05%Tween20を含むPBSで希釈したポリクローナル抗
VZV血清と共に35℃で1時間インキュベートした。結合していない抗体を除去するた
めに細胞を0.05%Tween20を含むPBSにより洗浄し、結合した抗体は、ペル
オキシダーゼ結合ヤギ抗ヒトIgG抗体及びペルオキシダーゼと反応して沈殿を生じるペ
ルオキシダーゼ基質(ジアミノベンジジン溶液)を使用して検出した。褐色の沈殿がVZ
Vを含有する増殖巣の周りに生じ、クマシーブルー染色を使用して観察された増殖巣以外
にいかなる追加のプラークも検出されなかった。従って、本免疫染色法は、抗VZV一次
血清、ペルオキシダーゼ結合抗一次種抗体及びペルオキシダーゼ基質の組み合せを使用し
て、不活化試料中の疑わしいプラークが実際に残存する感染性VZVを表しているかどう
か確認する方法を提供する。
ding)ELISAアッセイ
VZV抗原を特性化し及び定量化するために、2の抗原アッセイフォーマットを使用し
た。VZV市販品中のVZV抗原を推定するために使用される試験法を模倣し、VZV抗
原を検出するために単一のポリクローナル血清を利用する、1の競合ELISAを選抜研
究に使用した。ガンマ線照射又は他の不活化処理の後のVZV抗原の反応性の特性評価を
さらに提供するために、1の直接結合ELISAを開発し使用し、ここで試験試料はEL
ISAのマイクロタイタープレートに直接吸着し、次にモノクローナル又はポリクローナ
ル抗体を使用して検出した。
VZV抗原定量のための競合ELISA
手短に言えば本アッセイは、一定量のポリクローナル抗VZV血清と試験試料由来のV
ZV抗原とを溶液中のインキュベーションによって実施した。残存する遊離抗体(抗原非
結合)は、ELISAのマイクロタイタープレートに固相化されたVZV標準抗原に結合
させた。プレートに結合可能な抗体量は、試験試料中の抗原量に逆比例する。プレートに
結合する抗体は、酵素結合抗ヒト抗体と、分光測定で定量される着色産物を提供する適切
な基質との反応によって定量した。
のMRC−5細胞由来の糖タンパク質(gps)により被覆し、プレートへの非特異的な
抗体の吸着を減らすために1%(w/v)ウシ血清アルブミンでその上から被覆した。(
2)試験VZV抗原をポリプロピレンのマイクロチューブ中のPGS安定剤で希釈した。
抗原力価が既知のVZV抗原調製品を対照として含めた。試料は、2.6から0.9抗原
単位/mLの範囲の抗原濃度を含むように、典型的には1:1.25倍系列希釈により希
釈した。試験試料中の抗原測定用の標準曲線を作製するために、VZV標準品の希釈系列
を使用した。(3)2の倍数の所期の最終希釈まで、ヒト抗VZV血清をPGS安定剤で
希釈した。(4)300μL容の希釈した抗原をポリプロピレンのマイクロチューブに分
注し、300μLの希釈抗VZV血清と混合し、33〜37℃で15〜30分間インキュ
ベートした。抗VZV血清に希釈剤を加えてもの(抗原不含)を対照として使用した。(
5)各血清−抗原混合液(及び対照)由来の一定分量100μLを、VZVgpを被覆し
た2のレプリカウェル及びMRC−5gpを被覆した2のウェルに添加した。(6)プレ
ートは、プレート上に固相化されたgp抗原に遊離抗体(溶液中の試験抗原と複合化して
いない)を結合させるために、35〜37℃で15〜30分間インキュベートした。(7
)結合していない抗体を洗浄によって除去し、結合したヒト抗体を検出するためにアルカ
リフォスファターゼヤギ抗ヒトIgG抗体複合体溶液をウェルに分注した。(8)35〜
37℃、15〜30分間のインキュベーション後、非結合複合体を洗浄により除去した。
結合複合体を基質p−ニトロフェニルリン酸と35〜37℃、10〜15分間のインキュ
ベーションによって検出した。(9)発色(405nmでのOD)は、3MのNaOH5
0μLの添加による基質反応停止後にマイクロプレート分光光度計を使用して定量した。
被覆レプリカウェルに対するそれぞれの繰り返しのOD値を平均した。経験からMRC−
5のODは、異なる試料及び希釈の間で矛盾しないことが知られていた。そこで、試験し
たセット全部に対するMRC−5gpのOD値を典型的に平均し、一次抗体(抗VZV血
清)の非特異的結合を較正するために使用した。VZVに特異的な値(ΔOD)を与える
ために、それぞれのVZVgpの平均ODからMRV−5gpの平均ODを差し引いた。
(2)抗原量測定用標準曲線の作製:既知の抗原濃度(VZV抗原単位/mL)に対して
標準曲線のΔOD値をプロットした。データを適切なグラフィックプログラムに入力し、
曲線の直線部を確認し、この線形曲線に対する「直線当てはめ式」(y=a+bx)を得
た。(3)試験試料の抗原量の計算:a及びbに対する値は直線当てはめ式によって与え
られ、y(ΔOD)は既知であるので、次に単位/mL抗原を表す未知の値xを計算する
ことができ、元の(未希釈の)試験試料の抗原濃度を得るために試料の希釈度によって修
正することができた。報告した抗原濃度は、標準曲線の直線部内でΔOD値を提供する最
小希釈試料により得られたものである。
VZV抗原の直接吸着ELISA
手短に言えば本アッセイは、抗原を固相化するための96ウェルマイクロタイタープレ
ート中での試験試料由来のVZV抗原の希釈液のインキュベーションを実施し、引き続い
てモノクローナル又はポリクローナル抗VZV抗体と結合した抗原の検出を行った。結合
した抗VZV抗体は、酵素結合抗指標種抗体と分光光度的に定量される着色産物を与える
適切な基質との反応によって定量した。次に試料の希釈度に対するODの滴定曲線を比較
した(滴定曲線間の希釈系列の差異(「曲線シフト」)として定量)。
系列希釈で1:20から1:2560まで希釈した抗原(ワクチン)200μLで被覆し
た。プレートに蓋をして2〜8℃で一晩保管した。(2)段階(1)の液体を注ぎ出して
、プレートを0.05%のTween20を含むPBSで3回すすいだ。最後のすすぎ液
を除去して希釈した抗体(100μl/ウェル)を添加した。プレートを35℃で1時間
インキュベートした。(3)段階(2)の液体を注ぎ出して、プレートを0.05%のT
ween20を含むPBSで3回すすいだ。最後のすすぎ液を除去して希釈した複合体(
100μl/ウェル)を添加した。プレートを35℃で1時間インキュベートした。(4
)段階(3)の液体を注ぎ出して、プレートを0.05%のTween20を含むPBS
で3回すすいだ。最後のすすぎ液を除去して基質(無希釈)を添加した。次にプレートを
35℃で30分間インキュベートした。(5)NaOHで反応を停止した。(6)405
nmでプレートを読み取って光学密度(OD)を定量した。
本試験に使用した抗体は以下の通りであった:EPP(流行性肺炎ブタ)血清及びgE(
Biodesign catalog#mab8612)、gB(Chemicon c
atalog#C05102M,Millipore Corp.,Billerica
,MA)、及びgH(Biodesign cat#C05104M及びVirusys
cat#VA033−100,Virusys Corp.,Taneytown,M
D)に対する精製モノクロール抗体。使用した複合体は、抗ヒトIgG(BioSour
ce catalog#AHI0305,Invitrogen Corp.,Carl
sbad,CA)又はヤギ抗マウスIgG(Pierce catalog#31322
,Pierce Biotechnology Inc.,Rockford,IL)の
いずれかであった。アルカリフォスファターゼpNPP(p−ニトロフェニルリン酸)(
Sigma cat#p7988,Sigma−Alcrich Co.,St.Lou
is,MO)100mLを基質として使用した。
手短に言えば、1から0.125までのVZV抗原単位/mLの試験抗原の系列希釈液
を6名のドナー由来のPBMCと共に二つ組ウェル中でインキュベートした。インキュベ
ーション後、VZV抗原に応答する細胞をそのインターフェロンガンマ産生能によって同
定した。インターフェロンガンマ産生は、マイクロタイタープレート上に被覆したマウス
抗インターフェロンガンマ、及び同等の酵素抗マウスIgG二次抗体複合体及び基質を使
用し、インターフェロンガンマ産生細胞のまわりに沈殿した物質(「スポット」)の検知
に導いて検出した。スポット形成細胞(SFC:インターフェロンガンマ分泌を示すスポ
ットを形成する細胞)の数を自動ELISPOTリーダーで定量し、結果を106PBM
C当たりのSFCとして表した。
結果
発明者らは以前、免疫不全患者用ワクチンとして使用するために、凍結乾燥したワクチ
ンを不活化する一方法として熱処理を検討したが、当該方法はウイルス調製品の残存感染
性という結果になることを見出した(以下を参照)。当該残存感染性は、「不活化」ワク
チンの最適の特性ではないと考えられた。凍結乾燥ワクチンと比較して液体バルクワクチ
ンの不活化がより広範囲に行われたが、バルクワクチンの熱処理は最適の製造工程を提供
しないと判定された。そこで、熱処理よりもより広範な感染性の不活化(より好ましい安
全特性をもたらす)方法と確認され得るか否かを見るために、60Co線ガンマ線照射を
使用する水痘帯状疱疹ウイルス凍結乾燥ワクチン(岡/メルク)に対する代わりの不活化
方法が研究された。当該評価の目標は、第一に60Co線照射によってより広範な感染性
の不活化が達成され得るか否かを特定することであり、第二にガンマ線照射後に達せられ
る抗原特性が熱処理物質のそれと異なるかいなか及び臨床応用研究に許容可能か否かを特
定することであった。VZV入りのバイアルを〜1、2、3、4、5、6、7、8kGy
(2007)又は0.45、1.35、及び2.7kGyで照射した。照射は、Gamm
acell(登録商標)60Co線照射器(Best Theratronics Lt
d.Corporation,Ottawa,Ontario,Canada)を使用し
て実施した。
水痘帯状疱疹プラークアッセイを使用して定量した。照射線量に対してlog PFU/
mLをプロットしたところ、データポイントは不活化の線形回帰を示した(図1)。動力
学的検討後に発明者らは、不活化範囲に関する拡張した確証を可能とするために(より大
きな総容積を検討することによって)、60Co線により12kGyに照射した100m
Lの不活化VZVワクチン(凍結乾燥品の不活化)を試験した。試料100mLにプラー
クは検出されなかった。
5、1、2、3、4、5、6kGyでの照射のためにPETGボトルに分取した(図2)
。残存感染性に関しMRC−5細胞を使用する水痘帯状疱疹プラークアッセイで照射バル
クを分析した。照射バルク(6kGy)の試料100mLにプラークは検出されなかった
。照射時間に対してlog pfu/mL力価をプロットすることによって線形の不活化
動力学が観察された。
異なる不活化方法の免疫原性に関する影響を評価するために、実施例3記載の通り6名
のドナーの末梢血単核球(PBMC)試料を使用して、VZVのIFNγELISPOT
アッセイを実施した。本研究は、VZVが異なる条件下で不活化された後にIFN‐γ応
答が減少するか否かを判定するために行った。2のガンマ線照射VZVバルク調製品と共
に、5の熱処理VZVバルク調製品を試験した。熱処理VZV調製品は、以下の条件下で
処理された試料から成った:(1)40℃、24時間、(2)45℃、3.5時間、(3
)45℃、4.5時間、(4)56℃、30分間、及び(5)56℃、90分間。ガンマ
線照射試料は、5.92kGyで3又は4時間、ガンマ線照射したVZVバルクから成っ
た。また比較のために、不活化試料を作製するために上で使用したのと同じバルク調製品
由来の生(未処理)のVZV試料も試験した。
陰性対照)と共にアッセイ行程の対照としてと同様にELISPOTの抗原(VZVロッ
ト番号96.07)として含めた。全ての抗原は、1:40から1:320にわたる2倍
系列希釈で評価した。1アッセイ行程は、VZV応答レベルの範囲を代表するように選択
された6名のPMBC試料を試験して実施した。
ナーの間で未処理の抗原調製品と比較して不活化した抗原調製品に対する、VZV応答に
おける差異を示唆する証拠は認められなかった。また、個々の希釈レベルでの調製(処理
)と応答の間の顕著な相互作用に関する証拠も認められなかった。生VZV調製品と比較
して、元のVZVロット番号96.07を含む8の不活化VZV調製品に対するELIS
OT数の差異は、生VZV調製品の1.15倍低いもの(56℃、90分間)から1.1
4倍高いもの(40℃、24時間;ロット番号96.07)まで変動する。生VZV調製
品と比較して8の不活化VZV調製品のいずれも、試験したドナーで統計的に有意差のあ
る低いELISPOT数を得るものはなかった。
処理又はガンマ線照射)によって不活化されたVZV調製品に関し、ドナーパネル由来の
PBMCを使用する応答において顕著な差異を示さなかった。
熱処理及びガンマ線照射バルク及び凍結乾燥ワクチンのEM分析は、不活化VZV調製
品への不活化の影響の追加の特性化を提供するために実施した。選択した分析方法は、E
M分析の間ウイルスのインテグリティを最良に保つために、ガラス状氷中でのクライオ透
過電子顕微鏡法であった。クライオTEMは、NanoImaging Service
s,Inc(San Diego,CA)によって実施した。
にpEM分析用に調製した。凍結乾燥試料は、滅菌水700μLで再水和して、画像撮影
の前にそれ以上希釈しなかった。試料は、400メッシュ銅グリッド上の2.0x0.5
μmC−Flat穴開カーボンフィルム(Protochips,Inc.,Ralei
gh,NC)上に支持されたガラス状氷の薄膜中に保持した。グリッドは、使用直前にS
olarusプラズマ洗浄装置の中で洗浄した(10秒間、25%O2、75%Ar)。
全ての試料は、FEIのVitrobot(登録商標)(4℃、RH95%)を使用して
、試料懸濁液の1滴(〜3μL)をプラズマ洗浄したグリッドへ載せ、ろ紙でブロッティ
ングして、液体エタン中で即時ガラス化処理することによって調製した。グリッドは、画
像撮影のために電子顕微鏡に移すまで液体窒素下に貯蔵した。電子顕微鏡法は、FEIの
Tecnai(登録商標)T12電子顕微鏡(FEI Company,Hillsbo
ro,OR)を使用し、FEIのEagle(登録商標)4Kx4K CCDカメラ(F
EI Company)を装備して120KeVで作動して実施した。各グリッドの画像
は、検体の全体的な分布を評価するために複数のスケールで撮影した。低倍率で画像撮影
のための標的領域を確認した後に、1対の高倍率画像を撮影した。
K〜52K)を使用して評価した。未処理凍結乾燥VZV、56℃、77日間の熱処理凍
結乾燥VZV、及び60Co線源を使用して25又は50kGyで照射した凍結乾燥VZ
Vを比較した。
る)を伴う高ガンマ線照射量での潜在的な粒子効果を示すが、凍結乾燥試料に対する総体
的な粒子及びタンパク質の外観への著しい効果は示さない。しかしながら、凍結乾燥不活
化試料が電子密度の減少を示したので、凍結乾燥はこれらの変化から保護するのかもしれ
ないが、粒子は高線量において無傷のままであった。(図4参照)
VZV抗原ELISAアッセイは、熱若しくはガンマ線照射不活化バルク試料又はガン
マ線照射凍結乾燥VZVの抗原(Ag)含量を定量するために、検出抗体としてヒトポリ
クローナル血清及びVZVのgB、gH、gEに対するモノクローナル抗体(mAb)を
使用して実施した。ガンマ線照射バルク又は凍結乾燥試料は抗原反応性において変化を示
さなかった。しかし56℃、90分間で熱処理した試料は、ポリクローナル抗体、gE及
びgHモノクローナル抗体との抗原反応性において変化を示した。
料を25kGy及び50kGyでさらにガンマ線照射した。これらの試料は、ポリクロー
ナル抗VZV血清及びgpE、gB、及びgHのmAbに対し直接抗原結合(吸着)EL
ISAアッセイで試験した。
ローナル血清又はgE若しくはgBのモノクローナル抗体とのELISAの抗原反応性に
検出可能な悪影響を及ぼさなかった。gHのmAbを使用した結果は、高いバックグラウ
ンド染色のために確定的でなかった。当該モノクローナル抗体(gE又はgBに対する抗
体ではなく)に伴うバックグランド信号の増加は、また他のELISAプレート(Max
isorp)の使用の際にも観察された。
マウス免疫原性研究は、不活化のための種々の方法を使用して作製した一組の不活化V
ZV(iVZV)調製品を評価するために実施した。当該研究から作製された血清試料は
、異なる不活化VZV製剤によって作製されたVZVに対する抗体の相対力価を定量する
ために、VZVのELISAアッセイで評価した。異なる2のVZVバルク調製品を作製
し評価した。(1)VZVバルク、熱処理56℃、90分間、及び(2)VZVバルク、
ガンマ線照射5、924.7グレイ(Gy)、3時間。また異なる2のVZV凍結乾燥ワ
クチン調製品も作製し評価した。(1)VZV凍結乾燥ワクチン、熱処理56℃、50日
間、及び(2)VZV凍結乾燥ワクチン、ガンマ線照射25、000Gy。生(未処理)
VZVバルク及び生(未処理)VZV凍結乾燥ワクチンを、iVZVバルク調製品との比
較のために評価した。
BALB/cマウス(各群n=16)を4.5VZV抗原単位(U)/マウス(9U/m
L)により、0、14及び29日目に腹腔内で(i.p.)免疫した。瀉血(血清)を−
1(前−瀉血)及び13、28及び43日目に採取した。28日の血清(投与2の14日
)は、IgG応答に関してVZVのELISAで評価した。
VZVに対する力価の足きり値(titer cut−off)を決定するために、28
日からの相当する群に関して前瀉血の血清を試験した。ELISAプレートのウェルは、
UV処理VZV又はMRC−5抽出液で被覆し、次にマウス血清中のVZVに特異的な抗
体の相対量を定量するために試験マウス血清の希釈液とインキュベートした。
(95%CI(信頼区間)=(3.45、8.99))並びにガンマ線照射バルクのIg
G力価が平均して2.43倍低かった(95%CI=(1.51、3.93))ことを示
す。熱処理凍結乾燥力価は、未処理凍結乾燥ウイルスよりも平均して1.38倍低く(9
5%CI=(1.00、1.90))並びにガンマ線照射凍結乾燥力価は平均して1.6
6倍低かった(95%CI=(1.22、2.26))。ガンマ線照射バルクの抗体力価
は、熱処理バルクによる免疫化後に得られた力価よりも平均して2.29倍高かった(9
5%CI=(1.54、3.41))。ガンマ線照射凍結乾燥ウイルスの抗体力価は、熱
処理凍結乾燥調製品による免疫化後に得られた力価よりも平均して1.20倍低かった(
95%CI=(0.89、1.61))。全体のデータは、本モデルにおいて免疫原性へ
最小の影響しか有さないゆえに、凍結乾燥ウイルスのガンマ線照射を支持している。
疫化後にマウスにおいて減少したことを示している。
ワクチンの安全性、耐容性、及び免疫原性を評価するために計画された、ランダム化さ
れた、二重盲検の、2部構成の、多施設治験において、ガンマ線照射VZVワクチンを5
0ないし59歳の健康な成人に投与した。本治験の目的は、ガンマ線照射又は熱処理方法
によって不活化されたワクチンロットの安全性、耐容性、及び免疫原性を研究することで
あった。
、熱処理VZVワクチン(n=63)、又はプラセボ(n=33)のいずれかを4用量の
投与計画で投与するために、総計161名の50ないし59歳の健康な個体を2:2:1
にランダム化した。各用量を約30日の間隔で投与した。熱処理ワクチン及びガンマ線放
射ワクチン「A」は、別個のバルクロット由来であったが同一の抗原濃度を標的にするこ
とによって制御した。
ン(A)が、投与4の28日後にgpELISAによって測定されたときに、許容可能な
VZV特異的免疫応答を誘発するだろうということだった。第二の仮説は、熱処理VZV
ワクチンが、投与4の28日後にgpELISAによって測定されたときに、許容可能な
VZV特異的免疫応答を誘発するだろうということだった。成功の統計的基準は、熱処理
VZVワクチンのレシピエントにおける幾何平均上昇倍数(GMFR、抗体変化比)に関
する両側95%信頼区間の下限が>1.0であることに相当する。本研究におけるワクチ
ンのレシピエント間の免疫原性の結果を図6に提供する。
結果は、第一及び第二の仮説の試験に関する成功基準が満たされたこと、すなわちガンマ
線照射VZVワクチンA及び熱処理VZVワクチンが健康な個体に投与されたときに免疫
原性であったことを示している。双方のワクチン群は、プラセボ群と同様の安全性プロフ
ァイルを有していた。
Vワクチンロットの投与
第二の研究は、より広範囲なガンマ線照射により不活化されたワクチンロットに関する
臨床データを提供するために実施した。本研究において、16ないし25kGyで照射さ
れたガンマ線照射VZVワクチン「B」(n=64)、又は25ないし50kGyで照射
されたガンマ線照射VZVワクチン「C」(n=65)のいずれかを、各用量を約30日
の間隔で投与する4用量の投与計画に従って投与するために、総計129名の50ないし
59歳の健康な個体を1:1にランダム化した。本研究で利用したワクチンロットB&C
は、同一のVZV抗原含量を有する同一のバルクロット及び同一の充填/製剤に由来する
が、異なるガンマ線照射レベルで不活化した。
Vワクチン(C)が、投与4の28日後にgpELISAによって測定されたときに許容
可能なVZV特異的免疫反応を誘発するだろうということであった。第二の仮説は、16
ないし25kGyレベルで不活化され同時に25ないし50kGyで不活化されたワクチ
ンと抗原含量を一致されたガンマ線照射VZVワクチン(B)が、投与4の28日後にg
pELISAによって測定されたときに許容可能なVZV特異的免疫応答を誘発するだろ
うということであった。各仮説の成功の統計的基準は、ガンマ線照射ワクチンのレシピエ
ントにおけるGMFRに関する両側95%信頼区間の下限が>1.0であることに相当す
る。本研究におけるワクチンのレシピエント間の免疫原性の結果を図7に提供する。
本研究の結果は、主要な仮説の試験に関する成功基準が満たされたこと、すなわちガンマ
線照射VZVワクチンB(ガンマ線照射16〜25kGy)及びガンマ線照射VZVワク
チンC(ガンマ線照射25〜50kGy)が健康な個体に投与されたときに免疫原性であ
ったことを示している。ワクチン群の双方とも同様の安全性プロファイルを有していた。
ラインのGMTが〜313であり群CのベースラインのGMTが〜429であった)が存
在したことも示す。上昇倍数の差異は著しくなかったとはいえ、ベースライン力価の差異
が試験中に観察された上昇倍数の差異を説明するかもしれない。さらに分析データは、ガ
ンマ線照射量が高いほど(>25kGy)結果として抗原の分解が高くなることを示して
いる。
Claims (26)
- 不活化された水痘帯状疱疹ウイルス(VZV)であって、前記VZVの感染性が検出限
界以下であり並びに前記不活化VZVが患者に投与されたときにVZVに対する免疫応答
を誘発する前記ウイルス。 - 治療上有効量の請求項1記載のVZV及び薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物。
- 不活化VZVの感染性が0.040プラーク形成単位(PFU‘s)/mL以下である
請求項2記載の医薬組成物。 - 不活化VZVの感染性が0.010プラーク形成単位(PFU‘s)/mL以下である
請求項3記載の医薬組成物。 - 不活化VZVの感染性が0.002プラーク形成単位(PFU‘s)/mL以下である
請求項4記載の医薬組成物。 - VZV株が岡株又は岡株の派生株である任意の請求項2〜5記載の医薬組成物。
- 組成物が凍結乾燥されている請求項6記載の医薬組成物。
- VZVがガンマ線照射によって不活化されている請求項7記載の医薬組成物。
- 組成物によって誘発される免疫応答が同量の不活化されていないVZVを含む対照試料
によって誘発される免疫応答と著しく異ならない請求項8記載の医薬組成物。 - 不活化VZVによって誘発される免疫応答が対照試料によって誘発される免疫応答と2
5%以下だけ異なる請求項9記載の医薬組成物。 - VZVの感染性が水痘帯状疱疹プラークアッセイによって定量される請求項2〜5のい
ずれかに記載の医薬組成物。 - 約5から50kGyのガンマ線を使用してVZVを含む試料にガンマ線照射することを
含む、不活化水痘帯状疱疹ウイルス(VZV)を調製する方法。 - ガンマ線が試料を60Co線に暴露することによってガンマ線を試料に供給する請求項
12記載の方法。 - VZVが岡株又は岡株の派生株である請求項13記載の方法。
- 試料が照射される前に凍結乾燥される請求項13記載の方法。
- 使用されるガンマ線照射線量が約25kGy以下である請求項14又は請求項15記載
の方法。 - ワクチンが液体バルク製剤であり、使用されるガンマ線照射量が約5kGyから12.
5kGyである請求項16記載の方法。 - 使用されるガンマ線照射量が約10kGyから約25kGyである請求項15記載の方法
。 - 請求項12〜18のいずれかに記載の方法によって産生される又は得られる不活化VZ
V。 - 治療上有効量の請求項19記載の不活化VZV及び薬学的に許容可能な担体を含むワク
チン。 - 対象における帯状疱疹の治療のための方法であって、前記方法が、治療上有効量の不活
化水痘帯状疱疹ウイルス(VZV)及び薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物を対象
に投与することを含み、ここで前記VZVがガンマ線照射により不活化されている前記方
法。 - 医薬組成物の投与経路が皮下又は筋肉内である請求項21記載の方法。
- 対象が50歳以上である請求項22記載の方法。
- 対象が免疫不全状態である請求項22又は23記載の方法。
- 対象が、血液系腫瘍罹患、免疫抑制療法受容、同種造血幹細胞被移植、臓器被移植、HI
V感染、及び自己免疫疾患罹患から成る群から選択される少なくとも1容態を有する請求
項24記載の方法。 - 当該方法が、予め決められた時間を終過させて、1又は複数用量の当該医薬組成物を対
象に投与することをさらに含む請求項22又は23記載の方法。
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