JP2015526065A - 超音波キャビテーションによる脂肪組織からの幹細胞の単離および使用方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本願は、2012年6月26日に出願されたオーストラリア国仮出願第2012902719号からの優先権を主張し、その内容の全体は参照により本明細書に組み入れられる。
本発明は、幹細胞調製物を利用する方法に関する。
本明細書を通してなされる先行技術の議論は、どのような形であれ、そのような先行技術が広く公知となっていることまたは当技術分野の共通の一般知識の一部を形成していることに関する承認とみなされるべきではない。
・酵素処理により細胞死が高いレベルで起こり、それによって単離される幹細胞の数が減少し、細胞の残骸が増える;
・酵素は特有の細胞型に損傷を与え、それを破壊し得る;
・単離される幹細胞への酵素の混入は、それらを移植に適さないものにし得る;および
・規制当局は、幹細胞の単離における酵素の使用が薬物承認を必要とする細胞製品を生成するとみなす可能性がある。
1つの態様において、本発明の方法は、脂肪組織中の脂肪細胞を破裂または溶解させて間質血管画分を放出させるよう脂肪組織に配置して接触させるプローブを有する超音波キャビテーション装置を使用する。使用される個別の超音波キャビテーション装置は本発明にとって重要ではない。1つの適当な選択は、最先端の高出力超音波プロセッサである、HIELSCHLER超音波プロセッサである。この装置は、マイクロリットルからリットルまでの広範囲の有機および無機物質を安全に処理することができる。使用され得る他の装置は、Vibra-Cell(商標)装置(Sonics)、VASER(SoltaMedical)またはQSonica超音波プロセッサを含む。
(a)超音波キャビテーション装置用プローブを約40gの脂肪組織に配置し、振幅を約50%に設定しサイクルを約0.4〜0.5に設定する;
(b)プローブを、脂肪組織の2つの異なる位置で、約1分間次いで約40秒間脂肪組織中を上下させる;
(c)脂肪組織を800g/5分間遠心分離する;
(d)上部脂質層を廃棄し、脂肪組織を混合する;
(e)等張溶液を添加し、脂肪組織を800g/5分間遠心分離する;
(f)得られる細胞ペレットが、細胞外マトリクスおよび生存能力のある幹細胞を含む間質血管画分を含んでいる。
(a)超音波キャビテーション装置用プローブを約40gの脂肪組織に配置し、振幅を約50%に設定しサイクルを約0.4〜0.5に設定する;
(b)プローブを、脂肪組織の上部で、約1分間次いで約30秒間脂肪組織中を上下させる;
(c)脂肪組織を800g/5分間遠心分離する;
(d)上部脂質層を廃棄し、脂肪組織を混合する;
(e)等張溶液を添加し、脂肪組織を800g/5分間遠心分離する;
(f)得られる細胞ペレットが、細胞外マトリクスおよび生存能力のある幹細胞を含む間質血管画分を含んでいる。
脂肪吸引術の前に、吸引される吸引脂肪量を超える過剰量のチューメセント溶液(1リットルの標準生理食塩水中に、1mgのアドレナリン、400mg〜800mgのリグノカインおよび10mLの8.4%炭酸水素ナトリウム溶液を含む)を、皮下脂肪層に注入し(チューメセント法)、その後に、例えば2〜3mmの内径を有するカニューレ(アスピレータを有する金属製のもの)を脂肪吸引術に使用した。脂肪吸引術は当技術分野で周知であり、例えば、その全体が参照により本明細書に組み入れられるBiyo Seikei Shujutsu Practice 2(Cosmetic Operation Practice 2), ed. Masanari ICHIDA, Ryusaburo TANINO, and Yoshiaki HOSAKA, published by BUNKODO, pp.429-469を参照することができる。
脂肪組織は、インフォームドコンセントを得たヒト対象から手術によって取得される。分離は、当技術分野で周知の技術を用いて行った。簡単に説明すると、ヒト脂肪組織を、インフォームドコンセントを得たヒト対象から吸引した脂肪組織から無菌的に分離した。得られた脂肪組織由来細胞物質を、間質血管画分の取得のために使用した。
1)脂肪組織を脂肪吸引物から入手し、45mlを50mlチューブに入れる。
2)過剰な液体を、200g/2分間の遠心分離により過剰な液体と脂肪組織を分離することによって除去する。チューブの下部にある過剰な液体を除去し、これにより典型的には40mlの脂肪組織が残る。
3)(任意)チューブを冷却環境下に置き、組織/細胞の温度が2℃を下回らないよう注意する。
4)超音波キャビテーション装置用プローブHielschler UP200Sを脂肪組織に配置し、振幅を50%、サイクルを0.5に設定する。プローブを、チューブ内の2つの異なる位置(すなわち、チューブの底部および上部)で、1分間次いで40秒間上下させ、3分間静止し、そして任意でこの処理を繰り返す。脂肪組織の温度が43℃を超えて、好ましくは37℃を超えて上昇しないよう注意する。
5)超音波処理後に濃溶液がチューブ内で観察され、これを300g/5分間遠心分離する。
6)遠心分離後、3つの層 - 上部脂質層、細胞外マトリクスおよび間質血管細胞を含む中間浮動層、ならびに底部液体層が存在する。
7)上部脂質層を、混合用カニューレおよび注射器を用いて除去および廃棄し(脂質層を除去することにより、等張液を添加したときに細胞の分離が可能になる)そしてチューブの残りの内容物を十分に混合してさらに細胞外マトリクスを分断する。
8)等張溶液(典型的には0.9%生理食塩水またはPBS)をチューブに添加して50mlにし、そしてチューブを600g/5分間遠心分離することにより、細胞および細胞外マトリクスの降下を開始させ、底部でペレット化させる。
9)細胞外マトリクスおよび生存能力があり機能的な幹細胞を含む間質血管画分を含む大きなペレットがチューブの底部で観察される。次いでこのペレットを、混合用カニューレおよび注射器を用いておよそ15mlの液体にて取り出し、そして任意の大きな残骸を除去するために100umフィルターを通して濾過する。
10)この細胞溶液はそのまま使用することができ、またはさらなる遠心分離および過剰な液体の除去によってさらに濃縮することができる。
1)脂肪組織を脂肪吸引物から入手し、25mlを2 x 50ml遠心チューブに入れる。
2)過剰な液体を、200g/2分間の遠心分離により過剰な液体と脂肪組織を分離することによって除去する。チューブの下部にある過剰な液体を除去し、これにより典型的には20mlの脂肪組織が残る。
3)(任意)チューブを冷却環境下または室温下に置き、組織/細胞の温度が2℃を下回らないよう注意する。
4)超音波キャビテーション装置用プローブHielschler UP200Sを脂肪組織に配置し、振幅を50%、サイクルを0.5に設定する。プローブを、各チューブの上部で1分間次いで30秒間上下させる。脂肪組織の温度が43℃を超えて、好ましくは37℃を超えて上昇しないよう注意する。
5)超音波処理後に濃溶液がチューブ内で観察され、これを300g/5分間遠心分離する。
6)遠心分離後、3つの層 - 上部脂質層、細胞外マトリクスおよび間質血管細胞を含む中間浮動層、ならびに底部液体層が存在する。
7)上部脂質層を、混合用カニューレおよび注射器を用いて除去および廃棄し(脂質層を除去することにより、等張液を添加したときに細胞の分離が可能になる)そしてチューブの残りの内容物を十分に混合してさらに細胞外マトリクスを分断する。
8)等張溶液(典型的には0.9%生理食塩水またはPBS)をチューブに添加して50mlにし、そしてチューブを600g/5分間遠心分離することにより、細胞および細胞外マトリクスの降下を開始させ、底部でペレット化させる。
9)細胞外マトリクスおよび生存能力があり機能的な幹細胞を含む間質血管画分を含む大きなペレットがチューブの底部で観察される。次いでこのペレットを、混合用カニューレおよび注射器を用いておよそ15mlの液体にて取り出し、そして任意の大きな残骸を除去するために100umフィルターを通して濾過する。
10)この細胞溶液はそのまま使用することができ、またはさらなる遠心分離および過剰な液体の除去によってさらに濃縮することができる。
1)脂肪組織を脂肪吸引物から入手し、45mlを50mlチューブに入れる。
2)過剰な液体を、200g/2分間の遠心分離により過剰な液体と脂肪組織を分離することによって除去する。チューブの下部にある過剰な液体を除去し、これにより典型的には40mlの脂肪組織が残る。
3)超音波キャビテーション装置用プローブHielschler UP200Sを脂肪組織に配置し、振幅を50%、サイクルを0.4に設定する。プローブを、チューブ内の2つの異なる位置(すなわち、チューブの中間部および上部)で、1分間次いで40秒間上下させ、脂肪組織の温度が43℃を超えて、好ましくは37℃を超えて上昇しないよう注意する。
4)超音波処理後に濃溶液がチューブ内で観察され、これを800g/5分間遠心分離する。
5)遠心分離後、3つの層 - 上部脂質層、細胞外マトリクスおよび間質血管細胞を含む中間浮動層、ならびに底部液体層が存在する。
6)上部脂質層を、混合用カニューレおよび注射器を用いて除去および廃棄し(脂質層を除去することにより、等張液を添加したときに細胞の分離が可能になる)そしてチューブの残りの内容物を十分に混合してさらに細胞外マトリクスを分断する。
7)等張溶液(典型的には0.9%生理食塩水またはPBS)をチューブに添加して50mlにし、そしてチューブを800g/5分間遠心分離することにより、細胞および細胞外マトリクスの降下を開始させ、底部でペレット化させる。
8)細胞外マトリクスおよび生存能力があり機能的な幹細胞を含む間質血管画分を含む大きなペレットがチューブの底部で観察される。次いでこのペレットを、混合用カニューレおよび注射器を用いておよそ15mlの液体にて取り出し、そして任意の大きな残骸を除去するために100umフィルターを通して濾過する。
9)この細胞溶液はそのまま使用することができ、またはさらなる遠心分離および過剰な液体の除去によってさらに濃縮することができる。
1)脂肪組織を脂肪吸引物から入手し、25mlを2 x 50mlの遠心チューブに入れる。
2)過剰な液体を、200g/2分間の遠心分離により過剰な液体と脂肪組織を分離することによって除去する。チューブの下部にある過剰な液体を除去し、これにより典型的には20mlの脂肪組織が残る。
3)超音波キャビテーション装置用プローブHielschler UP200Sを脂肪組織に配置し、振幅を50%、サイクルを0.4に設定する。プローブを、各チューブの上部で1分間次いで30秒間上下させる。脂肪組織の温度が43℃を超えて、好ましくは37℃を超えて上昇しないよう注意する。
4)超音波処理後に濃溶液がチューブ内で観察され、これを800g/5分間遠心分離する。
5)遠心分離後、3つの層 - 上部脂質層、細胞外マトリクスおよび間質血管細胞を含む中間浮動層、ならびに底部液体層が存在する。
6)上部脂質層を、混合用カニューレおよび注射器を用いて除去および廃棄し(脂質層を除去することにより、等張液を添加したときに細胞の分離が可能になる)そしてチューブの残りの内容物を十分に混合してさらに細胞外マトリクスを分断する。
7)等張溶液(典型的には0.9%生理食塩水またはPBS)をチューブに添加して50mlにし、そしてチューブを800g/5分間遠心分離することにより、細胞および細胞外マトリクスの降下を開始させ、底部でペレット化させる。
8)細胞外マトリクスおよび生存能力があり機能的な幹細胞を含む間質血管画分を含む大きなペレットがチューブの底部で観察される。次いでこのペレットを、混合用カニューレおよび注射器を用いておよそ15mlの液体にて取り出し、そして任意の大きな残骸を除去するために100umフィルターを通して濾過する。
9)この細胞溶液はそのまま使用することができ、またはさらなる遠心分離および過剰な液体の除去によってさらに濃縮することができる。
1)脂肪組織を脂肪吸引物から入手し、25mlを2 x 50mlの遠心チューブに入れる。
2)過剰な液体を、200g/2分間の遠心分離により過剰な液体と脂肪組織を分離することによって除去する。チューブの下部にある過剰な液体を除去し、これにより典型的には20mlの脂肪組織が残る。
3)超音波キャビテーション装置用プローブHielschler UP200Sを脂肪組織に配置し、振幅を50%、サイクルを0.4に設定する。プローブを、各チューブの上部で1分間次いで30秒間上下させる。脂肪組織の温度が43℃を超えて、好ましくは37℃を超えて上昇しないよう注意する。
4)超音波処理後に濃溶液がチューブ内で観察され、これを800g/5分間遠心分離する。
5)遠心分離後、3つの層 - 上部脂質層、細胞外マトリクスおよび間質血管細胞を含む中間浮動層(P層)ならびに底部液体層、が存在する(図1)。
9)上部脂質層および底部液体層を除去し、混合用カニューレを用いて中間P層を回収する。
実施例3または実施例4の方法によって得た細胞を、標準的な細胞培養培地(例えば、典型的にはウシ胎仔血清、ヒト血清を補充されたアルファMEMまたは無血清培地)を用いて分化させずに培養した。初代培養物を1 x 106/100mmとなるようプレーティングし、そして細胞を5% CO2または低酸素環境下で1〜2継代増幅した。
脂肪組織の温度に対する超音波キャビテーションの振幅およびサイクルの効果を評価する実験を行った(図4および5)。その結果は、脂肪組織の温度が以下の際に43℃を超えて上昇することを示した:
・(サイクル0.4および時間1分30秒間で)50%を超える振幅 - 図4参照;ならびに
・(振幅50%および時間1分30秒間で)0.5を超えるサイクル - 図5参照。
1)麻酔前に血液を回収する。2 x 9mLのクエン酸デキストロース(ACD-A)血液回収チューブ(BDバキュテナー)に、(減圧により)血液を満たす。せん断による血小板の活性化を回避するために、血液を18G針またはそれより大きいものを用いて吸い込む。血液チューブの内容物を、チューブを3〜4回ひっくり返すことによって混合する。
2)ACD-A血液充填チューブを450g x 10分間遠心分離する。
3)同じ移動用ピペットを用いて血漿層(上層)を各チューブから取り出し、15mL滅菌チューブに移す。血液はかき乱すべきではなく、血液の上にのっている白血球の薄い層は避けるべきである。赤血球の上に5mmの血漿層を残すのが最も良い。この濃縮血小板含有血漿(PRP)は、そのまま使用することができ、または以下のようにしてさらに処理することができる。
4)この血漿を含むチューブを2000g/10分間遠心分離する - チューブの底部に血小板の小さなペレットが形成されるはずである。
5)上部の低血小板血漿(platelet poor plasma)は、移動用ピペットで1.5mLになるまで除去しそして廃棄するべきである。ペレットは、同じ移動用ピペットを用いて残りの1.5mL中で再懸濁するべきである。これが、多血小板血漿(PRP)である。
6)PRPはそのまま使用してもよく、または所望の場合、150μlのグルコン酸カルシウム(1mL注射器および針)をPRPに添加しよく混合することによって凝固処理してもよい。チューブは温水槽(37℃ - 振盪なし)内に置くかまたはより長い時間室温で静置すべきである。PRPは、固形のゲルを形成するはずである。
7)固化の後、それを細胞に添加する準備ができた時のために、PRPは、37℃(処理を速めるため)または室温のいずれかで静置させて、次の1〜2時間かけて部分的に溶解させる - これは、現在、多成長因子血漿(PRGF)として公知である。
実施例3〜9の方法によって得られる細胞は、注射前にPRPまたはPRGFで処理され得る。PRGFは、典型的に2.5mlが、注射前に細胞ペレットに直接添加される。細胞およびPRGFは、実施例12のようにして適用される。PRPが間質/幹細胞(典型的に5ml)と共に使用される場合、それは、固形ゲルの形成が開始し得る場合は注射直前に細胞に添加され得、またはそれは間質血管画分の投与の直後に別個に注射され得る。
ウェスタンオンタリオ大学およびマクマスター大学の関節炎インデックス(Western Ontario and McMaster Universities Arthritis Index:WOMAC)は、痛み、こわばりおよび関節の物理的機能を含む膝および股関節の変形性関節症を有する患者の状態を評価するために医療専門家によって使用される、広く使用されている独自の標準化された質問集である。
・痛み(5項目):歩いている間、階段を使用するとき、ベッド上にいるとき、座っているまたは横になっているとき、および立っているとき
・こわばり(2項目):最初の歩行の後およびその日の遅い段階
・物理的機能(17項目):階段を使用するとき、座っている状態から立つとき、立っているとき、曲げるとき、歩いているとき、車の乗り/降りのとき、買い物のとき、靴下を履く/脱ぐとき、ベッドから立ち上がるとき、ベッドに横になっているとき、風呂に入る/風呂から出るとき、座っているとき、トイレに入る/トイレから出るとき、重い家事を行うとき、軽い家事を行うとき。
脂肪組織の間質血管画分を、実施例3にしたがい調製し、PRGFで処理し、そして各々の股関節への関節内注射(84 x 106細胞)および静脈内注射(130 x 106細胞)により投与した。患者の処置前HOOSスコアは処置前102点であり、処置5週間後のHOOSスコアは23点に減少した - 77%の改善。
脂肪組織の間質血管画分を、実施例3にしたがい調製し、PRGFで処理し、そして各々の膝への関節内注射(100 x 106細胞)および静脈内注射(79 x 106細胞)により投与した。患者の処置前WOMACスコアは59点であり、処置4週間後のWOMACスコアは28点に減少した - 61%の改善。
脂肪組織の間質血管画分を、設定を振幅90%およびサイクル0.9で3分間とした(温度が43℃を超えて上昇するのを防ぐため脂肪組織を20℃のゲルパックで冷却した)ことを除いて実施例3にしたがい調製し、PRGFで処理し、そして各々の膝への関節内注射(100 x 106細胞)および静脈内注射(236 x 106細胞)により投与した。患者の処置前WOMACスコアは37点であり、処置11週間後のWOMACスコアは7点に減少した - 81%の改善。
脂肪組織の間質血管画分を、実施例4にしたがい調製し、PRPで処理し、そして各々の膝への関節内注射(86 x 106細胞)および静脈内注射(86 x 106細胞)により投与した。患者の処置前WOMACスコアは39点であり、処置6週間後のWOMACスコアは17点に減少した - 56%の改善。
脂肪組織の間質血管画分を、実施例6にしたがい調製し、そして各々の膝への関節内注射(175 x 106細胞)および静脈内注射(150 x 106細胞)により投与した。患者の処置前WOMACスコアは38点であり、処置2ヶ月後のWOMACスコアは8点に減少した - 78%の改善。
脂肪組織の間質血管画分を、実施例5にしたがい調製し、そして各々の膝への関節内注射(85 x 106細胞)および静脈内注射(85 x 106細胞)により投与した。患者の処置前WOMACスコアは56点であり、処置7ヶ月後のWOMACスコアは28点に減少した - 50%の改善。
患者7 - 膝の変形性関節症
P層細胞(5ml)を、実施例7にしたがい調製し、そして膝への関節内注射および静脈内注射(170 x 109細胞)によって投与した。患者の処置前WOMACスコアは58点であり、処置3ヶ月後のWOMACスコアは10点に減少した - 82%の改善。
P層細胞(2.5ml)を、実施例7にしたがい調製し、そして左膝への関節内注射および静脈内注射(200 x 106細胞)によって投与した。患者の処置前WOMACスコアは37点であり、処置2ヶ月後のWOMACスコアは2点に減少した - 94%の改善。
患者9 - 関節リウマチ
脂肪組織の間質血管画分を、実施例5にしたがい調製し(以下の変更を加える - 振幅90%、サイクル0.2、4分間)、そして静脈内注射(276 x 107細胞)によって投与した。最初の週は、患者は良い感じであったがその後関節リウマチが再燃した。患者はより多くの警告を感じるようになった。
Claims (19)
- 間質/幹細胞の生存能力を維持しつつ脂肪組織を分解して成熟脂肪細胞を溶解させるのに十分な、時間、振幅、およびサイクルの超音波キャビテーションによって、脂肪組織を処理する工程を含む、脂肪組織から、生存能力のある間質/幹細胞を含む間質血管画分を単離する方法。
- 超音波キャビテーション中の脂肪組織の温度が、間質/幹細胞の生存能力を保証する温度で維持される、請求項1記載の方法。
- 脂肪組織の温度が、約43℃〜約45℃を超えない、請求項1または請求項2記載の方法。
- 振幅が約20〜約90%およびサイクルが約0.2〜約0.9に設定された超音波装置を用いる約10秒間〜約10分間の超音波キャビテーションによって脂肪組織が処理される、請求項1〜3のいずれか一項記載の方法。
- 脂肪組織の温度が約43℃〜約45℃を超えないよう時間、振幅、およびサイクルが選択される、請求項1〜4のいずれか一項記載の方法。
- 振幅が約50%およびサイクルが約0.4〜約0.5に設定された超音波プローブを用いる約1分30秒間〜約1分40秒間の超音波キャビテーションによって脂肪組織が処理される、請求項1〜5のいずれか一項記載の方法。
- 超音波キャビテーションによって生じる脂質層が、等張液の添加前に除去される、請求項1〜6のいずれか一項記載の方法。
- 請求項1〜7のいずれか一項記載の方法によって単離された、生存能力のある間質/幹細胞を含む間質血管画分。
- 請求項8記載の生存能力のある間質/幹細胞を含む間質血管画分を対象に投与する工程を含む、対象における変形性関節症、関節関連炎症障害、炎症性関節炎障害、軟組織損傷もしくは裂傷、軟骨障害、骨障害、自己免疫障害、筋ジストロフィー、慢性疲労、肺障害、肺炎症障害、神経系障害、脊椎障害または神経学的障害を処置する方法。
- 生存能力のある間質/幹細胞を含む間質血管画分を対象に投与する工程を含み、生存能力のある間質/幹細胞を含む該間質血管画分が請求項1〜7のいずれか一項記載の方法によって単離されたものである、対象における変形性関節症、関節関連炎症障害、炎症性関節炎障害、軟組織損傷もしくは裂傷、軟骨障害、骨障害、自己免疫障害、筋ジストロフィー、慢性疲労、肺障害、肺炎症障害、神経系障害、脊椎障害または神経学的障害を処置する方法。
- 変形性関節症、関節関連炎症障害、炎症性関節炎障害、軟組織損傷もしくは裂傷、軟骨障害、骨障害、自己免疫障害、筋ジストロフィー、慢性疲労、肺障害、肺炎症障害、神経系障害、脊椎障害または神経学的障害を処置するための医薬の製造のための、請求項8記載の生存能力のある間質/幹細胞を含む間質血管画分の使用。
- 生存能力のある間質/幹細胞を含む間質血管画分が請求項1〜7のいずれか一項記載の方法によって単離されたものである、変形性関節症、関節関連炎症障害、炎症性関節炎障害、軟組織損傷もしくは裂傷、軟骨障害、骨障害、自己免疫障害、筋ジストロフィー、慢性疲労、肺障害、肺炎症障害、神経系障害、脊椎障害または神経学的障害を処置するための医薬の製造のための、生存能力のある間質/幹細胞を含む該間質血管画分の使用。
- 変形性関節症、関節関連炎症障害、炎症性関節炎障害、軟組織損傷もしくは裂傷、軟骨障害、骨障害、自己免疫障害、筋ジストロフィー、慢性疲労、肺障害、肺炎症障害、神経系障害、脊椎障害または神経学的障害の処置に使用するための、請求項8記載の生存能力のある間質/幹細胞を含む間質血管画分。
- 生存能力のある間質/幹細胞を含む間質血管画分が請求項1〜7のいずれか一項記載の方法によって単離されたものである、変形性関節症、関節関連炎症障害、炎症性関節炎障害、軟組織損傷もしくは裂傷、軟骨障害、骨障害、自己免疫障害、筋ジストロフィー、慢性疲労、肺障害、肺炎症障害、神経系障害、脊椎障害または神経学的障害の処置に使用するための、生存能力のある間質/幹細胞を含む該間質血管画分。
- 脂肪組織の温度が約43℃〜約45℃を超えないことを保証する振幅およびサイクルに設定された超音波装置を用いる約1分30秒間〜約1分40秒間の超音波キャビテーションにより脂肪組織を処理する工程を含む、脂肪組織から生存能力のある間質/幹細胞を含む間質血管画分を単離する方法。
- 振幅が約50%に設定された超音波装置を用いて脂肪組織を処理する工程を含む方法であって、該装置が、脂肪組織の温度が約43℃〜約45℃を超えないことを保証するサイクルに設定され、かつそれを保証する時間にわたって適用される、脂肪組織から生存能力のある間質/幹細胞を含む間質血管画分を単離する方法。
- サイクルが約0.4〜約0.5に設定された超音波装置を用いて脂肪組織を処理する工程を含む方法であって、該装置が、脂肪組織の温度が約43℃〜約45℃を超えないことを保証する振幅に設定され、かつそれを保証する時間にわたって適用される、脂肪組織から生存能力のある間質/幹細胞を含む間質血管画分を単離する方法。
- 振幅が約50%およびサイクルが約0.4〜約0.5に設定された超音波プローブを用いる約1分30秒間〜約1分40秒間の超音波キャビテーションによって脂肪組織を処理する工程を含む、脂肪組織から生存能力のある間質/幹細胞を含む間質血管画分を単離する方法。
- 間質/幹細胞が48時間の細胞培養後に生存能力があるように、超音波キャビテーションの時間、振幅、およびサイクルが選択される、超音波キャビテーションによって脂肪組織から単離された間質血管画分中の間質/幹細胞の生存能力を維持するための方法。
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---|---|---|---|---|
JP2020089344A (ja) * | 2018-12-07 | 2020-06-11 | 学校法人慶應義塾 | 細胞処理装置及び細胞処理方法 |
JP2020530857A (ja) * | 2017-08-14 | 2020-10-29 | ジナーバ・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | 経皮カンナビジオールゲルを用いた変形性関節症の治療方法 |
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KR102075596B1 (ko) * | 2017-12-04 | 2020-02-10 | 이일훈 | 덱스트란 또는 폴록사머를 포함하는 관절 질환 또는 결체조직 질환 치료용 조성물 |
JP6865933B2 (ja) * | 2018-02-23 | 2021-04-28 | 株式会社Meis Technology | 勃起不全治療剤 |
CZ2018190A3 (cs) * | 2018-04-19 | 2019-04-10 | Národní Centrum Tkání A Buněk A.S. | Způsob přípravy stromální vaskulární frakce buněk adipózní tkáně |
CN112251400A (zh) * | 2019-07-22 | 2021-01-22 | 宠爱细胞科技股份有限公司 | 无酵素前处理与培养脂肪间质干细胞的方法 |
CN114761113A (zh) * | 2019-10-02 | 2022-07-15 | 微声系统公司 | 用于使用超声能量将生物组织解离成单细胞的方法和系统 |
US20210177906A1 (en) * | 2019-12-11 | 2021-06-17 | Roger S. Hogue | Adipose tissue particle processing, transfer and storage system |
US20220025316A1 (en) | 2020-07-22 | 2022-01-27 | Prim Sigma Technologies, Inc. | Trituration devices for tissue disaggregation |
IL302833A (en) * | 2020-11-13 | 2023-07-01 | Advanced Therapeutic Lab Inc | Medicinal compositions and methods using SVF derived from adipose tissue |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20060051865A1 (en) * | 2004-08-31 | 2006-03-09 | Higgins Joel C | Systems and methods for isolating stromal cells from adipose tissue and uses thereof |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU2004280616A1 (en) * | 2003-10-08 | 2005-04-21 | Vet-Stem Inc. | Methods of preparing and using stem cell compositions and kits comprising the same |
US8518681B2 (en) * | 2009-12-04 | 2013-08-27 | Sound Surgical Technologies Llc | Selective lysing of cells using ultrasound |
CN201752668U (zh) * | 2010-05-12 | 2011-03-02 | 宁波新芝生物科技股份有限公司 | 一种超声波细胞粉碎机 |
US8440440B2 (en) * | 2010-12-27 | 2013-05-14 | Intellicell Biosciences Inc. | Ultrasonic cavitation derived stromal or mesenchymal vascular extracts and cells derived therefrom obtained from adipose tissue and use thereof |
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Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20060051865A1 (en) * | 2004-08-31 | 2006-03-09 | Higgins Joel C | Systems and methods for isolating stromal cells from adipose tissue and uses thereof |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2020530857A (ja) * | 2017-08-14 | 2020-10-29 | ジナーバ・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | 経皮カンナビジオールゲルを用いた変形性関節症の治療方法 |
JP2020089344A (ja) * | 2018-12-07 | 2020-06-11 | 学校法人慶應義塾 | 細胞処理装置及び細胞処理方法 |
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