JP2015509002A

JP2015509002A - 自家癌細胞ワクチン

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Publication number: JP2015509002A
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Inventors: トーメクロイツ、フェルナンド
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Priority date: 2012-01-20
Filing date: 2013-01-18
Publication date: 2015-03-26
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Abstract

自家癌細胞ワクチンは、その細胞表面上にＭＨＣＩ及びＭＨＣＩＩの両方を発現する癌細胞を含む。このＭＨＣＩは癌抗原を提示し、ＭＨＣＩＩは非自己抗原を提示する。一態様によれば、単離された免疫原性癌細胞を作製する方法が提供され、この方法は、対象から単離された癌細胞上のＭＨＣＩＩの発現を誘導する工程；発現されたＭＨＣＩＩに非自己抗原が結合するように、この癌細胞をこの非自己抗原と共にインキュベートする工程；及びこの癌細胞を死滅させる工程、を含む。

Description

本発明は、癌の処置に関する。より具体的には、本発明は、いくつかの態様では、単離され変更された免疫原性癌細胞、この免疫原性癌細胞を含む免疫原性組成物及びワクチン、癌の処置の方法、並びに免疫原性癌細胞、免疫原性組成物及びワクチンを作製する方法に関する。

主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）は、全ての脊椎動物において大きい遺伝子ファミリーによってコードされる細胞表面分子である。ＭＨＣ遺伝子ファミリーは、３つのクラス：クラスＩ；クラスＩＩ；及びクラスＩＩＩ、に分割される。

ＭＨＣクラスＩ分子は、身体の全ての有核細胞上で見出される。それらの機能は、サイトゾルタンパク質の断片を、細胞内から細胞傷害性Ｔ細胞へと提示することである。「自己」ペプチドを提示する細胞は無視されるが、非自己ペプチドを提示する細胞は認識され、細胞傷害性Ｔ細胞によって死滅させられる。

ＭＨＣクラスＩＩ分子は、マクロファージ、樹状細胞及びＢ細胞を含む抗原提示細胞（ＡＰＣ）上でのみ見出される。ＭＨＣクラスＩＩ分子は、細胞外タンパク質の断片をヘルパーＴ細胞に提示する。「自己」ペプチドを提示する細胞は無視されるが、非自己ペプチドを提示する細胞はヘルパーＴ細胞によって認識され、このヘルパーＴ細胞は、種々のサイトカインの産生を主に介して、貪食細胞の動員に起因する局所的な炎症及び腫脹、又はＢ細胞の活性化に起因する抗体媒介性免疫応答が含まれ得る、適切な免疫応答を誘発することを助ける。

例えば国際特許出願公開公報ＷＯ１９９５／１３０９２、国際特許出願公開公報ＷＯ２００１／７７３０１及びＢｅｒｇｅｒら（Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｓｃｉ．、１０（２）：１４４〜１５２、２００７）から、インターフェロン（ＩＦＮ）が、腫瘍細胞が癌ワクチンにおいて使用され得るように、この細胞上のＭＨＣクラスＩの発現を増加させるために使用され得ることが公知である。しかし、ＩＦＮによる処理後の腫瘍細胞によるＭＨＣＩＩ発現は、高度に変動しやすく、いくつかの細胞は、ＩＦＮ処理に対して応答性であり、いくつかはＩＦＮ処理に対して応答性でない。さらに、ＭＨＣＩＩを発現する任意の腫瘍細胞は、ＭＨＣＩ及びＭＨＣＩＩと関連して自己抗原又は癌抗原を提示できるだけである。癌抗原は、常に免疫原性であるわけではなく、多くは自己抗原として認識される。これは、癌が発達してより侵襲性になる場合に特に当てはまる。ＭＨＣＩＩと関連して提示される高度に免疫原性の抗原の欠如は、Ｔヘルパー細胞が活性化されず、強力で頑強な免疫応答が先行技術の癌ワクチンによって一貫して生成され得ないことを意味している。

従って、先行技術の欠点の少なくともいくつかを克服又は軽減する代替的治療が必要とされる。

本発明は、いくつかの態様では、単離された免疫原性癌細胞、この免疫原性癌細胞を使用する免疫原性組成物及び癌ワクチン、かかる免疫原性癌細胞、免疫原性組成物及び癌ワクチンを作製する方法、並びに癌の処置の方法に関する。本発明の組成物及び方法は、その表面上にＭＨＣＩＩを発現するように改変された単離された癌細胞の使用を含む。癌細胞が一旦ＭＨＣＩＩを発現するように改変されると、それらの癌細胞は、ＭＨＣＩＩ発現細胞を非自己抗原と共にインキュベートすることによって、免疫原性にされる。癌細胞が単離された対象中への注射の際に、この方法で改変された癌細胞は、ＭＨＣＩと関連した癌抗原をＣＤ８^＋細胞傷害性Ｔ細胞に提示し、ＭＨＣＩＩと関連した非自己抗原をＣＤ４^＋ヘルパーＴ細胞に提示する。従って、改変された癌細胞は二機能性であり、ヘルパーＴ細胞及び細胞傷害性Ｔ細胞の両方を活性化することが可能であり、サイトカイン産生並びに驚くほど頑強な癌特異的免疫応答を導く。

この方法で産生された免疫原性癌細胞は、免疫原性組成物及びワクチン中に取り込まれ得る。かかる組成物及びワクチンは、自家対象において癌を処置する方法において有用である。

一態様によれば、単離された免疫原性癌細胞を作製する方法が提供され、この方法は、
・対象から単離された癌細胞上のＭＨＣＩＩの発現を誘導する工程；
・発現されたＭＨＣＩＩに非自己抗原が結合するように、これらの癌細胞をこの非自己抗原と共にインキュベートする工程；及び
・これらの癌細胞を死滅させる工程、
を含む。

一態様では、この方法は、ＭＨＣＩＩ誘導後にＭＨＣＩＩ陽性細胞を同定する工程をさらに含む。別の態様では、この方法は、ＭＨＣＩＩ陰性癌細胞からＭＨＣＩＩ陽性癌細胞を分離して、ＭＨＣＩＩ陽性細胞を含む精製された組成物を取得する工程をさらに含む。

別の態様では、この方法は、対象から癌細胞を単離する工程をさらに含む。一態様では、これらの細胞は、生検手順の間又は腫瘍の外科的除去の間に単離される。

別の態様では、この方法は、癌細胞を凍結保存する工程をさらに含む。

一態様では、これらの細胞は、致死的照射、凍結保存剤の非存在下での凍結及び解凍、又は細胞傷害性化合物による処理によって、例えば致死的照射によって、死滅される。

別の態様では、このＭＨＣＩＩは、ＭＨＣＩＩ誘導剤を使用して癌細胞上で誘導される。一態様では、このＭＨＣＩＩ誘導剤は、サイトカイン、例えばＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、ＩＬ−１３、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−α又はそれらの組み合わせ、例えばＩＦＮ−γである。別の態様では、このＭＨＣＩＩ誘導剤は、ＭＨＣＩＩ発現構築物、又は癌細胞と融合するＭＨＣＩＩ発現細胞である。

別の態様では、この非自己抗原は非ヒト抗原である。

別の態様では、この非自己抗原は、サイログロブリン、β−ガラクトシダーゼ、デキストラン、ポリリシン、ツベルクリン由来タンパク質、オボアルブミン（ＯＶＡ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ヒツジ血清アルブミン、ヤギ血清アルブミン又は魚類血清アルブミンなどの血清アルブミン、及びキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、並びにそれらの組み合わせ、例えばオボアルブミン又はＫＬＨ、或いは例えばＢＳＡから選択される。

別の態様では、この非自己抗原は、ＢＳＡなどのウシ抗原ではない。

別の態様では、この誘導する工程は、ＢＳＡを含まない培地中である。

別の態様によれば、その細胞表面上にＭＨＣＩ及びＭＨＣＩＩの両方を発現する単離された免疫原性癌細胞が提供され、癌抗原がＭＨＣＩに結合し、非自己抗原がＭＨＣＩＩに結合する。

一態様では、この非自己抗原は非ヒト抗原である。

別の態様では、この非自己抗原は、サイログロブリン、β−ガラクトシダーゼ、デキストラン、ポリリシン、ツベルクリン由来タンパク質、オボアルブミン（ＯＶＡ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ヒツジ血清アルブミン、ヤギ血清アルブミン又は魚類血清アルブミンなどの血清アルブミン、及びキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、並びにそれらの組み合わせから選択され、例えば、非自己抗原は、オボアルブミン又はＫＬＨ、或いは例えばＢＳＡである。

別の態様によれば、その細胞表面上にＭＨＣＩ及びＭＨＣＩＩの両方を発現する単離された免疫原性癌細胞を含む免疫原性組成物が提供され、癌抗原がＭＨＣＩに結合し、非自己抗原がＭＨＣＩＩに結合する。

一態様では、この組成物は、少なくとも１つの賦形剤、担体、緩衝液、安定剤又はそれらの組み合わせをさらに含む。

別の態様では、この非自己抗原は非ヒト抗原である。

別の態様では、この組成物は、組成物中の細胞の総数に基づいて、約５％〜約１００％のＭＨＣＩＩ陽性癌細胞、例えば、少なくとも約５０％のＭＨＣＩＩ陽性癌細胞、少なくとも約９０％のＭＨＣＩＩ陽性癌細胞又は少なくとも約９９％のＭＨＣＩＩ陽性癌細胞を含む。

別の態様によれば、その細胞表面上にＭＨＣＩ及びＭＨＣＩＩの両方を発現する単離された免疫原性癌細胞を含む自家癌ワクチンが提供され、癌抗原がＭＨＣＩに結合し、非自己抗原がＭＨＣＩＩに結合する。

一態様では、このワクチンは、少なくとも１つのアジュバント、例えば、モノホスホリルリピドＡ／合成トレハロースジコリノミコラート（ＭＰＬ−ＴＤＭ）、ＡＳ０２１／ＡＳ０２、非イオン性ブロックコポリマーアジュバント、ＣＲＬ１００５、リン酸アルミニウム、ＡＩＰＯ_４）、Ｒ−８４８、イミキモド、ＰＡＭ３ＣＹＳ、ポリ（Ｉ：Ｃ）、ロキソリビン、カルメット・ゲラン桿菌（ＢＣＧ）、コリネバクテリウム・パルバム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｐａｒｖｕｍ）、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、コレラ毒素由来抗原、ＣＴＡ１−ＤＤ、リポ多糖アジュバント、フロイント完全アジュバント、フロイント不完全アジュバント、サポニン、鉱物ゲル、水酸化アルミニウム、界面活性物質、リゾレシチン、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、水中の油又は炭化水素乳濁物、ＭＦ５９、ＭｏｎｔａｎｉｄｅＩＳＡ７２０、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、ジニトロフェノール及びそれらの組み合わせ、例えばＢＣＧをさらに含む。

別の態様では、このワクチンは、少なくとも１つの賦形剤、担体、緩衝液、安定剤又はそれらの組み合わせをさらに含む。

一態様では、この非自己抗原は非ヒト抗原である。

別の態様では、このワクチンは、ワクチン中の細胞の総数に基づいて、約５％〜約１００％のＭＨＣＩＩ陽性癌細胞、例えば、少なくとも約５０％のＭＨＣＩＩ陽性癌細胞、少なくとも約９０％のＭＨＣＩＩ陽性癌細胞又は少なくとも約９９％のＭＨＣＩＩ陽性癌細胞を含む。

別の態様では、このワクチンは、複数接種のための分割された用量で、例えば、７つの分割された用量で提供される。

一態様では、各用量は、約１×１０^４〜約１×１０^９の癌細胞、例えば約１×１０^７の癌細胞を含む。

別の態様によれば、対象において癌を処置する方法が提供され、この方法は、単離された免疫原性癌細胞をこの対象に投与する工程を含み、これらの細胞は、この対象に対して自家であり、その細胞表面上にＭＨＣＩ及びＭＨＣＩＩの両方を発現し、癌抗原がＭＨＣＩに結合し、非自己抗原がＭＨＣＩＩに結合する。

一態様では、これらの細胞は免疫原性組成物として製剤化される。別の態様では、これらの細胞は癌ワクチンとして製剤化される。

別の態様では、この非自己抗原は非ヒト抗原である。

一態様では、この非自己抗原は、ＢＳＡなどのウシ抗原ではない。

別の態様では、投与される細胞の総数に基づいて、投与される癌細胞のうち約５％〜約１００％がＭＨＣＩＩ陽性癌細胞であり、例えば、投与される癌細胞のうち少なくとも約５０％がＭＨＣＩＩ陽性癌細胞であり、投与される癌細胞のうち少なくとも約９０％がＭＨＣＩＩ陽性癌細胞であり、又は投与される癌細胞のうち少なくとも約９９％がＭＨＣＩＩ陽性癌細胞である。

一態様では、これらの細胞は、従来の化学療法、放射線療法、ホルモン療法及び生物療法のうち少なくとも１つと同時に又は逐次的に投与される。

別の態様では、これらの細胞は、外科的腫瘍切除の前又は後に投与される。

別の態様では、これらの細胞は、複数用量で投与される。

一態様では、これらの細胞は、所定数の週にわたって週に１回投与される。別の態様では、これらの細胞は、進行中の維持療法として投与される。

一態様では、これらの細胞は、週に１回、月に１回、３か月毎に１回、６か月毎に１回、年に１回又はそれらの組み合わせで投与される。

別の態様では、これらの細胞は、癌再発の徴候が観察される場合に投与される。

別の態様によれば、対象において癌を処置するための、この対象に対して自家の単離された免疫原性癌細胞の使用が提供され、これらの細胞は、その細胞表面上にＭＨＣＩ及びＭＨＣＩＩの両方を発現し、癌抗原がＭＨＣＩに結合し、非自己抗原がＭＨＣＩＩに結合する。

一態様では、これらの細胞は、免疫原性組成物として又は癌ワクチンとして製剤化される。

別の態様では、この非自己抗原は非ヒト抗原である。

別の態様では、この使用は、細胞の総数に基づいて、約５％〜約１００％のＭＨＣＩＩ陽性癌細胞、例えば、少なくとも約５０％のＭＨＣＩＩ陽性癌細胞、少なくとも約９０％のＭＨＣＩＩ陽性癌細胞又は少なくとも約９９％のＭＨＣＩＩ陽性癌細胞の使用を含む。

一態様では、これらの細胞は、従来の化学療法、放射線療法、ホルモン療法及び生物療法のうち少なくとも１つと同時に又は逐次的に使用するためのものである。

別の態様では、これらの細胞は、外科的腫瘍切除の前又は後に使用するためのものである。

別の態様では、これらの細胞は、複数用量で使用するためのものである。

一態様では、これらの細胞は、所定数の週にわたって週に１回使用するためのもの、又は進行中の維持療法として使用するためのものである。

別の態様では、これらの細胞は、週に１回、月に１回、３か月毎に１回、６か月毎に１回、年に１回又はそれらの組み合わせで使用するためのものである。

別の態様では、これらの細胞は、癌再発の徴候が観察される場合に使用するためのものである。

別の態様によれば、患者が、単離された免疫原性癌細胞を用いた治療の候補であるかどうかを決定するための方法が提供され、この方法は、
・対象由来の単離された癌細胞をＭＨＣＩＩ誘導剤で処理する工程；及び
・これらの癌細胞をスクリーニングして、発現されたＭＨＣＩＩの存在を決定する工程、
を含み、
癌細胞上の発現されたＭＨＣＩＩの存在は、その患者がこの治療の候補であることを示す。

一態様では、この方法は、対象から癌細胞を単離する工程をさらに含む。

別の態様では、これらの細胞は、生検手順の間又は腫瘍の外科的除去の間に単離される

別の態様では、このＭＨＣＩＩ誘導剤は、サイトカイン、例えばＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、ＩＬ−１３、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−α又はそれらの組み合わせ、例えばＩＦＮ−γである。

別の態様では、このＭＨＣＩＩ誘導剤は、ＭＨＣＩＩ発現構築物、又は癌細胞と融合するＭＨＣＩＩ発現細胞である。

別の態様によれば、癌を有する対象を免疫するための癌ワクチンが提供され、この癌ワクチンは、対象に対して自家の単離された免疫原性癌細胞を含み、これらの癌細胞は、ＭＨＣＩＩ誘導剤による処理とその後の非自己抗原とのインキュベーションとによって改変されることによって、その細胞表面上にＭＨＣＩＩと関連して非自己抗原を提示しており、この癌ワクチンは、増加した濃度のＭＨＣＩＩ発現細胞を含むように精製されている。

別の態様によれば、免疫原性抽出物を作製する方法が提供され、この方法は、
・対象から単離された癌細胞上のＭＨＣＩＩの発現を誘導する工程；
・発現されたＭＨＣＩＩに非自己抗原が結合するように、これらの癌細胞をこの非自己抗原と共にインキュベートする工程；及び
・これらの癌細胞から、結合した非自己抗原を有するＭＨＣＩＩを抽出する工程、
を含む。

一態様では、この免疫原性抽出物は膜画分である。別の態様では、この免疫原性抽出物は、精製されたＭＨＣＩＩを含む。

別の態様では、この方法は、ＭＨＣＩＩ誘導後にＭＨＣＩＩ陽性細胞を同定する工程をさらに含む。

別の態様では、この方法は、ＭＨＣＩＩ陰性癌細胞からＭＨＣＩＩ陽性癌細胞を分離して、ＭＨＣＩＩ陽性細胞を含む精製された組成物を取得する工程をさらに含む。

別の態様では、これらの細胞は、致死的照射、凍結保存剤の非存在下での凍結及び解凍、又は細胞傷害性化合物による処理によって、例えば致死的照射によって、死滅される。

別の態様では、このＭＨＣＩＩは、ＭＨＣＩＩ誘導剤、例えばサイトカイン、例えばＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、ＩＬ−１３、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−α又はそれらの組み合わせ、例えばＩＦＮ−γを使用して、癌細胞上で誘導される。

別の態様では、この非自己抗原は非ヒト抗原である。

一態様では、この非自己抗原は、サイログロブリン、β−ガラクトシダーゼ、デキストラン、ポリリシン、ツベルクリン由来タンパク質、オボアルブミン（ＯＶＡ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ヒツジ血清アルブミン、ヤギ血清アルブミン又は魚類血清アルブミンなどの血清アルブミン、及びキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、並びにそれらの組み合わせ、例えばオボアルブミン又はＫＬＨ、或いは例えばＢＳＡから選択される。

別の態様によれば、本明細書に記載される細胞の免疫原性抽出物が提供され、この抽出物は、これらの細胞由来の結合した非自己抗原を有するＭＨＣＩＩを含む。

一態様では、この抽出物は膜画分である。別の態様では、この抽出物は、精製されたＭＨＣＩＩを含む。

別の態様によれば、本明細書に記載される抽出物を含む免疫原性組成物が提供される。

別の態様によれば、本明細書に記載される抽出物を含む自家癌ワクチンが提供される。

一態様では、このワクチンは、少なくとも１つのアジュバント、例えば、モノホスホリルリピドＡ／合成トレハロースジコリノミコラート（ＭＰＬ−ＴＤＭ）、ＡＳ０２１／ＡＳ０２、非イオン性ブロックコポリマーアジュバント、ＣＲＬ１００５、リン酸アルミニウム、ＡＩＰＯ_４）、Ｒ−８４８、イミキモド、ＰＡＭ３ＣＹＳ、ポリ（Ｉ：Ｃ）、ロキソリビン、カルメット・ゲラン桿菌（ＢＣＧ）、コリネバクテリウム・パルバム、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、コレラ毒素由来抗原、ＣＴＡ１−ＤＤ、リポ多糖アジュバント、フロイント完全アジュバント、フロイント不完全アジュバント、サポニン、鉱物ゲル、水酸化アルミニウム、界面活性物質、リゾレシチン、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、水中の油又は炭化水素乳濁物、ＭＦ５９、ＭｏｎｔａｎｉｄｅＩＳＡ７２０、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、ジニトロフェノール及びそれらの組み合わせ、例えばＢＣＧをさらに含む。

別の態様によれば、対象において癌を処置する方法が提供され、この方法は、本明細書に記載される抽出物を対象に投与する工程を含み、これらの細胞は、対象に対して自家である。

一態様では、この抽出物は、免疫原性組成物として製剤化される。別の態様では、この抽出物は、癌ワクチンとして製剤化される。

別の態様では、この抽出物は、従来の化学療法、放射線療法、ホルモン療法及び生物療法のうち少なくとも１つと同時に又は逐次的に投与される。

別の態様では、この抽出物は、外科的腫瘍切除の前又は後に投与される。

別の態様では、この抽出物は、複数用量で投与される。

別の態様では、この抽出物は、所定数の週にわたって週に１回投与される。

別の態様では、この抽出物は、進行中の維持療法として投与される。

別の態様では、この抽出物は、週に１回、月に１回、３か月毎に１回、６か月毎に１回、年に１回又はそれらの組み合わせで投与される。

別の態様では、この抽出物は、癌再発の徴候が観察される場合に投与される。

別の態様によれば、対象において癌を処置するための、本明細書に記載される抽出物の使用が提供され、これらの細胞は、対象に対して自家である。

別の態様では、この抽出物は、従来の化学療法、放射線療法、ホルモン療法及び生物療法のうち少なくとも１つと同時に又は逐次的に使用するためのものである。

別の態様では、この抽出物は、外科的腫瘍切除の前又は後に使用するためのものである。

別の態様では、この抽出物は、複数用量で使用するためのものである。

別の態様では、この抽出物は、所定数の週にわたって週に１回使用するためのものである。

別の態様では、この抽出物は、進行中の維持療法として使用するためのものである。

別の態様では、この抽出物は、週に１回、月に１回、３か月毎に１回、６か月毎に１回、年に１回又はそれらの組み合わせで使用するためのものである。

別の態様では、この抽出物は、癌再発の徴候が観察される場合に使用するためのものである。

本発明の他の特徴及び利点は、以下の詳細な説明から明らかになる。しかし、本発明の精神及び範囲内の種々の変化及び改変は、この詳細な説明から当業者に明らかになるので、この詳細な説明及び具体的な例は、本発明の実施形態を示しつつも、例示のみとして与えられることを理解すべきである。

本発明は、図面を参照して以下の説明からさらに理解される。

異なる量のＩＦＮ−γとの７２時間のインキュベーション期間後の、種々の細胞系由来のＭＨＣＩＩ陽性癌細胞の百分率を示す図である。異なる量のＩＦＮ−γとの７２時間のインキュベーション期間後の、種々の細胞系由来のＭＨＣＩＩ陽性癌細胞上のＭＨＣＩＩ発現のレベルを示す図である。生存癌細胞によるチャレンジの３０日後の、コントロールマウス又は自家癌細胞ワクチンで免疫したマウスにおける腫瘍の２次元平均腫瘍サイズ及び標準偏差を示す図である。生存癌細胞によるチャレンジの３０日後の、コントロールマウス又は自家癌細胞ワクチンで免疫したマウスにおける検出可能な腫瘍の発生率を示す図である。腫瘍細胞とのインキュベーション後の、免疫したマウス又はナイーブマウスから取得されたＴ細胞におけるＴ細胞増殖応答を示す図である。ＩＦＮ−γで処理した細胞から抽出されたＢＳＡ−ビオチンペプチドを提示するＭＨＣＩＩを示す図である。生存癌細胞によるチャレンジ後の、コントロールマウス又は自家癌細胞ワクチンで免疫したマウスにおける検出可能な腫瘍の発生率を示す図である。自家癌細胞ワクチンを受けているヒト対象の生存曲線を示す図である。前立腺腫瘍の外科的切除後に、且つホルモン遮断治療と同時に自家癌細胞ワクチンを受けている患者１の前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）測定値を示す図である。前立腺腫瘍の外科的切除後に、且つホルモン遮断治療と同時に自家癌細胞ワクチンを受けている患者２のＰＳＡ測定値を示す図である。前立腺腫瘍の外科的切除後に、且つホルモン遮断治療と同時に自家癌細胞ワクチンを受けている患者３のＰＳＡ測定値を示す図である。前立腺腫瘍の外科的切除後に、且つホルモン遮断治療と同時に自家癌細胞ワクチンを受けている患者４のＰＳＡ測定値を示す図である。前立腺腫瘍の外科的切除後に、且つホルモン遮断治療と同時に自家癌細胞ワクチンを受けている患者５のＰＳＡ測定値を示す図である。自家癌細胞ワクチンで処置した患者又はコントロールにおける第Ｉ／ＩＩ相臨床試験からの臨床結果を示す図である。図１４Ａは、前立腺癌による死亡率を示す図である。図１４Ｂは、平均血清ＰＳＡレベルを示す図である。図１４Ｃは、７年間の追跡後の検出不能なレベルのＰＳＡ（０．０４ｎｇ／ｍｌ未満）の提示を示す図である。

一態様では、本発明は、単離された免疫原性癌細胞、この免疫原性癌細胞を含む免疫原性組成物及びワクチン、かかる免疫原性組成物及びワクチンを作製する方法、並びに癌の処置の方法に関する。この単離された免疫原性癌細胞は、その表面上にＭＨＣＩＩと関連して非自己抗原を提示するように変更又は改変され、その結果、このＭＨＣＩＩは、非自己抗原をヘルパーＴ細胞に提示して、サイトカイン産生を導く。これらの単離された免疫原性癌細胞は、その細胞表面上にＭＨＣＩもまた発現させ、これは、癌抗原を細胞傷害性Ｔ細胞に提示する。予期しなかったことに、単一の改変された癌細胞は、それによって自家対象において両方の型のＴ細胞を活性化でき、強力且つ特異的な抗癌免疫応答を導く。

癌は、制御されない増殖、アポトーシス機構の喪失、並びに癌細胞が宿主組織を浸潤する能力及び離れた部位に転移する能力などの、いくつかの悪性特徴を導く複数の変異から生じる。さらに、癌細胞は、その細胞表面上に、ＭＨＣＩと関連して、ＣＤ８^＋細胞傷害性Ｔ細胞によって非自己として認識される腫瘍特異的抗原を頻繁に発現するが、癌細胞は、宿主免疫系を逃れる能力を発達させる場合が多い。癌細胞が免疫系を逃れ得る異なる機構が存在する、例えば：
ａ）ＭＨＣＩは、癌細胞上で下方調節され得、その結果、この癌細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞によって認識され得ない。
ｂ）癌細胞は、非自己として認識され且つ免疫応答を惹起することが可能な腫瘍特異的抗原の発現を喪失し得る。
ｃ）癌細胞は、共刺激因子もＭＨＣＩＩ分子も発現しないので、細胞傷害性Ｔ細胞を誘導できない可能性がある。
ｄ）癌細胞は、抗癌免疫応答を抑制する分子を産生し得る。
ｅ）特定の腫瘍抗原は、癌細胞に対する特異的免疫寛容を誘導し得る。

抗癌免疫応答を増強又は復元する方法は、癌免疫学の分野においてかなりの研究の対象になってきた。

ＭＨＣＩＩ分子は、細胞傷害性Ｔ細胞の脱分化を刺激する、ＣＤ４^＋ヘルパーＴ細胞の活性化に必要とされる。従って、癌特異的Ｔ細胞応答の誘導は、共刺激因子及びＭＨＣＩＩ分子を発現する専門のＡＰＣによる交差提示を必要とする場合が多い。かかるＡＰＣが適切に腫瘍特異的抗原を取り上げて提示せず、ヘルパーＴ細胞を活性化しない場合、癌細胞に対して特異的な細胞傷害性Ｔ細胞は発生しない可能性がある。

証拠は、抗原誘導されたＴ細胞増殖が、その特異的細胞表面レセプターに対するインターロイキン−２（ＩＬ−２）の作用によって主に調節されることを示唆している。ヘルパーＴ細胞がＩＬ−２を分泌するために一旦刺激されると、可溶性ＩＬ−２は、可溶性ＩＬ−２が産生された細胞とオートクライン様式で相互作用し得る、又はＩＬ−２レセプターを発現する他の細胞とパラクライン様式で相互作用し得る。従って、抗原活性化されたＩＬ−２産生ヘルパーＴ細胞は、それ自体のクローン性増殖を促進し得、細胞傷害性Ｔ細胞の増殖を促進し得、メモリーＴ細胞の生成を促進し得、Ｂ細胞及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の生成を促進し得る。ナイーブ細胞傷害性Ｔ細胞では、産生されるＩＬ−２の量は、典型的には、ヘルパーＴ細胞によって産生される量の少なくとも１０分の１であり、この量は、免疫応答を持続するのに通常は不十分であり、これが、ヘルパーＴ細胞による共刺激が重要であることの理由である。

従って、癌に応答して免疫系を十分に活性化するために、４つの細胞相互作用モデルが一般に必要とされる：１）ＭＨＣＩと関連して腫瘍特異的抗原を提示する癌細胞であって、この抗原は非自己として認識される；２）ＭＨＣＩＩと関連して腫瘍特異的抗原を提示するＡＰＣであって、この抗原は非自己として認識される；３）ＭＨＣＩ−抗原複合体と相互作用する細胞傷害性Ｔ細胞；及び４）ＭＨＣＩＩ−抗原複合体と相互作用するヘルパーＴ細胞。このモデルでは、細胞傷害性Ｔ細胞によるＭＨＣＩ−抗原複合体の認識は、寛容誘導の拡大及び防止のためにこれがＩＬ−２を必要とする状況まで、細胞傷害性Ｔ細胞を活性化する。ＩＬ−２は、細胞傷害性Ｔ細胞にごく接近した活性化されたヘルパーＴ細胞によって効率的に提供される。典型的には、腫瘍細胞にごく接近して、ＭＨＣＩＩと関連して非自己抗原をヘルパーＴ細胞に提示するＡＰＣが不十分であるという点において、腫瘍細胞は、この４つの細胞相互作用モデルにおける欠損に起因して、免疫系をしばしば逃れる。従って、ヘルパーＴ細胞は活性化されず、ＩＬ−２は産生されない。

本発明の態様では、４つの細胞モデルは、３つの細胞モデルによって置き換えられ、それにより、癌細胞は、ＭＨＣＩＩと関連して非自己ペプチドをヘルパーＴ細胞に提示するようにそれ自体改変され、従ってＡＰＣの機能を効果的に置き換える。改変された癌細胞は、ＭＨＣＩと関連して腫瘍特異的抗原もまた細胞傷害性Ｔ細胞に提示するので、二機能性とみなされる。

本発明の態様では、癌細胞は、癌を有する対象から単離され、培養される。これらの細胞は、例えば、例えばＩＦＮ−γなどのＭＨＣＩＩ誘導剤を用いた処理を介して、その細胞表面においてＭＨＣＩＩを発現するように改変される。次いで、ＭＨＣＩＩ陽性であると同定された細胞は、例えばウシペプチドなどの免疫原性非自己抗原と共にインキュベートされる。インキュベーションの間に、非自己抗原は、癌細胞によって飲作用され、プロセシングされ、最後にＭＨＣＩＩと関連して細胞表面上に提示される。次いで、改変された癌細胞は、この癌細胞が元々単離された対象を意味する自家対象への戻し注射のために調製される。

かかる改変された細胞は、免疫原性であり、非自己ペプチドに対する強力なヘルパーＴ細胞応答を生じて、このヘルパーＴ細胞によるＩＬ−２産生を導く。その一方、ＭＨＣＩと関連して癌細胞上に提示された腫瘍抗原を認識した細胞傷害性Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞にごく接近するので、ＩＬ−２によって刺激されるが、これは、ＭＨＣＩ及びＭＨＣＩＩの両方が同じ癌細胞の表面上に存在するからである。これは、癌細胞によって産生される腫瘍抗原に対する特異的免疫応答を導く。多数の異なる腫瘍抗原が典型的に、癌細胞の表面上でＭＨＣＩによって提示されるので、改変された癌細胞によって生成される免疫応答は、性質がポリクローナルである場合が多い。

定義：
用語「単離する」、「単離された」及び「単離すること」は、本明細書で使用する場合、癌に罹患している患者の身体から癌細胞を取り出すことを指す。細胞は、例えば、標準的な生検手順の間又は癌の外科的除去の間に単離され得る。特に明記しない限り、これらの用語は、癌細胞が精製されていることも他の細胞型を含まないことも意味しない。

本明細書で使用する場合、さらに当該分野で理解されるように、「処置」は、臨床結果を含む有益な又は所望の結果を取得するためのアプローチである。有益な又は所望の臨床結果には、検出可能であれ検出不能であれ、１又は複数の症状又は状態の軽減又は回復、疾患の程度の減退、疾患の安定化された（即ち、悪化していない）状況、疾患の伝播の防止、疾患進行の遅延又は減速、疾患状況の回復又は寛解、及び緩解（部分的であれ全体的であれ）が含まれ得るが、これらに限定されない。「処置」は、処置を受けていない場合に予測される生存と比較して延長した生存もまた意味し得る。

用語「治療有効量」、「有効量」又は「十分量」は、ヒトなどの哺乳動物を含む対象に投与される場合に、所望の結果を達成するのに十分な量、例えば、癌を処置するのに有効な量を意味する。治療剤の有効量は、対象の疾患状況、年齢、性別及び体重などの因子に従って変動し得る。投薬量又は処置レジメンは、当業者に理解されるように、最適な治療応答を提供するために調整され得る。

さらに、治療有効量を用いた対象の処置レジメンは、単一の投与からなり得る、又は一連の適用を代替的に含み得る。処置期間の長さは、疾患の重症度、対象の年齢、癌ワクチンの濃度、癌ワクチンに対する患者の応答性又はそれらの組み合わせなどの種々の因子に依存する。処置に使用される癌ワクチンの有効投薬量は、特定の処置レジメンの過程にわたって増加又は減少し得ることもまた理解される。投薬量における変化が生じ得、かかる変化は、当該分野で公知の標準的な診断アッセイによって明らかになり得る。本発明の癌ワクチンは、いくつかの態様では、従来の抗癌剤、放射線療法、ホルモン療法、生物療法及び／又は外科的腫瘍切除による処置の前、その間、又はその後に、投与され得る。

用語「対象」とは、本明細書で使用する場合、動物界の任意の成員、好ましくは哺乳動物を指す。一実施形態では、この哺乳動物は、イヌ、ネコ、ハムスター、マウス、ラット、ブタ、ウマ、ウシ又はヒトである。別の実施形態では、この哺乳動物はヒトである。

用語「自家」とは、ある対象から取得され、その同じ対象を処置するために使用される細胞を指す。

用語「自己抗原」又は「自己ペプチド」とは、その特定の対象に由来し、通常は免疫系によって寛容される、対象の身体内の抗原を指す。用語「非自己抗原」又は「非自己ペプチド」とは、その特定の対象に由来しない、通常は免疫系によって同定されて攻撃される、対象の身体内の抗原を指す。「癌抗原」又は「癌ペプチド」とは、対象内の癌に由来する、対象の身体内の抗原を指す。当該分野で理解されるように、癌抗原は、免疫系によって寛容されることもあり、免疫系によって同定され従って攻撃されることもある。各癌細胞は、任意の所与の時点においてその細胞表面上にＭＨＣＩと関連して多数の異なる癌抗原を提示し、そのうちいくつかは免疫系によって寛容され得、そのうちいくつかは免疫系によって同定され攻撃され得ることが理解される。

本発明の癌細胞は、記載されるように、ＭＨＣＩ及びＭＨＣＩＩの両方を発現し、ヘルパーＴ細胞及び細胞傷害性Ｔ細胞の両方を活性化することが可能であるので、「二機能性」と言われ得る。ＭＨＣＩ及びＭＨＣＩＩを発現するこれらの二機能性腫瘍細胞は、腫瘍提示細胞（ＴＰＣ）とも記載され得る。

用語「アジュバント」とは、ワクチン中に存在し、ワクチン中に存在する抗原に対する免疫応答を増強する化合物又は混合物を指す。例えば、アジュバントは、本明細書で企図される自家癌細胞ワクチン中に存在するポリペプチドに対する免疫応答、又は本明細書で企図される免疫原性断片若しくはそのバリアントに対する免疫応答を増強し得る。アジュバントは、抗原を緩徐に放出する組織デポーとして機能し得、免疫応答を非特異的に増強するリンパ系活性化因子としても機能し得る。使用され得るアジュバントの例には、ＭＰＬ−ＴＤＭアジュバント（モノホスホリルリピドＡ／合成トレハロースジコリノミコラート、例えば、ＧＳＫＢｉｏｌｏｇｉｃｓから入手可能）が含まれる。別の適切なアジュバントは、免疫賦活性アジュバントＡＳ０２１／ＡＳ０２（ＧＳＫ）である。これらの免疫賦活性アジュバントは、強力なＴ細胞応答を与えるために製剤化され、これらには、脂質又はリポソーム担体中で一緒になった、ＱＳ−２１、キレイ・サポナリア（Ｑｕｉｌｌａｙｓａｐｏｎａｒｉａ）由来のサポニン、ＴＬ４リガンド、モノホスホリルリピドＡが含まれる。他のアジュバントには、非イオン性ブロックコポリマーアジュバント（例えば、ＣＲＬ１００５）、リン酸アルミニウム（例えば、ＡＩＰＯ_４）、Ｒ−８４８（Ｔｈ１様アジュバント）、イミキモド、ＰＡＭ３ＣＹＳ、ポリ（Ｉ：Ｃ）、ロキソリビン、ＢＣＧ（カルメット・ゲラン桿菌）及びコリネバクテリウム・パルバム、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、コレラ毒素由来抗原（例えば、ＣＴＡ１−ＤＤ）、リポ多糖アジュバント、フロイント完全アジュバント、フロイント不完全アジュバント、サポニン、鉱物ゲル、例えば水酸化アルミニウム、界面活性物質、例えばリゾレシチン、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、水中の油又は炭化水素乳濁物（例えば、ＮｏｖａｒｔｉｓＶａｃｃｉｎｅｓから入手可能なＭＦ５９、又はＭｏｎｔａｎｉｄｅＩＳＡ７２０）、キーホールリンペットヘモシアニン並びにジニトロフェノールが含まれるがこれらに限定されない。

用語「精製された」は、本明細書において、出発材料に対して活性薬剤の濃度を増強する１又は複数の精製工程によって出発材料から取得される組成物を包含するために使用される。例えば、本発明の態様では、生検又は外科的腫瘍サンプルから取得されたＩＦＮ−γ処理された細胞は、増加した濃度のＭＨＣＩＩ陽性細胞を提供するために、セルソーティング技術によって精製され得る。精製された組成物は、例えば、約５％〜約１００％のＭＨＣＩＩ陽性細胞、及びその間の任意の量、例えば、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％又は約９０％のＭＨＣＩＩ陽性細胞を含み得る。用語「精製された」は、精製プロセスによって取得されてもそうでなくても、不純物に対して顕著な量の活性薬剤を含む組成物もまた包含する。用語「精製された」は、絶対的純度を含意すると解釈すべきではない。

本出願の範囲を理解するにあたり、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」及びその派生語は、本明細書で使用する場合、記述された特徴、要素、構成要素、群、整数及び／又は工程の存在を特定するが、他の記述されていない特徴、要素、構成要素、群、整数及び／又は工程の存在を排除しない、オープンエンドの用語であることを意図する。上記は、類似の意味を有する単語、例えば用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」及びそれらの派生語にも適用される。最後に、程度の用語、例えば、「実質的に」、「約」及び「およそ」は、本明細書で使用する場合、最終結果が顕著に変化されないような、修飾された用語の合理的な量の偏差を意味する。これらの程度の用語は、これらの用語が修飾する単語の意味をこの偏差が否定しない場合、修飾された用語の少なくとも±５％の偏差を含むと解釈すべきである。

予期しなかったことに、ＭＨＣＩＩが非自己抗原をヘルパーＴ細胞に提示し、ＭＨＣＩが癌抗原を免疫系の細胞傷害性Ｔ細胞に提示するように、癌細胞がその細胞表面上にＭＨＣＩＩを発現するように改変され得ることがここで示された。こうして改変された癌細胞は、免疫原性であり、対象において癌を処置するのに有効な自家癌ワクチン組成物において使用され得る。

従って、その細胞表面上にＭＨＣＩ及びＭＨＣＩＩの両方を発現する単離された免疫原性癌細胞が提供され、癌抗原がＭＨＣＩに結合し、非自己抗原がＭＨＣＩＩに結合する。

これらの癌細胞は自家対象から単離され、これは、これらの癌細胞が由来する同じ対象を処置するために、これらの癌細胞が使用されることを意味する。或いは、これらの癌細胞は、ＨＬＡが一致した異種対象において使用され得る。典型的には、これらの細胞は、生検手順の間又は外科的腫瘍除去の間に単離される。これらの癌細胞は任意の型の悪性腫瘍由来であり得、一態様では、これらの癌細胞は、小細胞肺癌及び非小細胞肺癌（例えば、腺癌）を含む肺癌、膵臓癌、結腸癌（例えば、結腸直腸癌腫、例えば結腸腺癌及び結腸腺腫など）、食道癌、口腔扁平上皮癌腫、舌癌腫、胃癌腫、肝臓癌、上咽頭癌、リンパ系細胞系譜の造血器腫瘍（例えば、急性リンパ球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫）、非ホジキンリンパ腫（例えば、マントル細胞リンパ腫）、ホジキン病、骨髄球性白血病（例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）若しくは慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ））、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、甲状腺濾胞癌、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、間葉系起源の腫瘍、軟部組織肉腫、脂肪肉腫、消化管間葉性肉腫、悪性末梢神経鞘腫瘍（ＭＰＮＳＴ）、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、間葉系軟骨肉腫、リンパ肉腫、線維肉腫、横紋筋肉腫、黒色腫、奇形腫、神経芽腫、脳腫瘍、髄芽腫、神経膠腫、皮膚の良性腫瘍（例えば、角化棘細胞腫）、乳房癌腫（例えば、進行乳癌）、腎臓癌腫、腎芽腫、卵巣癌腫、子宮頸部癌腫、子宮内膜癌腫、膀胱癌腫、進行疾患及びホルモン難治性前立腺癌を含む前立腺癌、精巣癌、骨肉腫、頭頸部癌、表皮癌腫、多発性骨髄腫（例えば、難治性多発性骨髄腫）又は中皮腫由来である。一態様では、これらの癌細胞は固形腫瘍由来である。典型的には、これらの癌細胞は、乳癌、結腸直腸癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、胃癌又は前立腺癌由来である。より典型的には、これらの癌細胞は前立腺癌由来である。

ほとんどの癌細胞は、その細胞表面上に、存在するとしてもあまり多くのＭＨＣＩＩを天然には発現しないが、癌細胞が例えばＢ細胞癌などの抗原提示細胞に由来する場合、これらの細胞は、その細胞表面上にＭＨＣＩＩを既に発現していてもよいことが理解される。ＭＨＣＩＩを既に発現している未改変の癌細胞は、本発明から明確に排除され得ることが企図される。言い換えると、本発明は、本発明に従う改変の前に、ＭＨＣＩＩ陰性、ＭＨＣＩＩ陽性又はそれら両方である癌細胞を包含し得ることが企図される。或いは、かかる細胞は、本発明中に含まれ得、これらの細胞はＭＨＣＩＩを既に発現しているので、ＭＨＣＩＩ誘導剤とのインキュベーションは、発現のレベルを増加させるための任意選択に過ぎないことが理解される。

癌細胞がその細胞表面上にＭＨＣＩＩを発現するために、これらの癌細胞は、ＭＨＣＩＩ誘導剤と共にインキュベートされる。ＭＨＣＩＩ誘導剤は、例えば、サイトカイン、化学剤及び遺伝子構築物を包含する。

例えば、このＭＨＣＩＩ誘導剤はＩＦＮ−γであり得、又は癌細胞をトランスフェクト若しくは形質導入するために使用されるＭＨＣＩＩ発現ベクターであり得る。このＭＨＣＩＩ誘導剤は、ＭＨＣＩＩを発現する細胞が、癌細胞をＭＨＣＩＩ陽性にするために細胞融合を介して癌細胞と融合され得るという点において、ＭＨＣＩＩ発現細胞もまた包含する。かかる細胞の例には、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ及び単球が含まれる。別の態様では、このＭＨＣＩＩ誘導剤は、ＭＨＣＩＩトランス活性化因子（ＣＩＩＴＡ）配列を活性化する薬剤であり得る。しかし、典型的には、このＭＨＣＩＩ誘導剤は、サイトカイン、例えばＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、ＩＬ−１３、ＩＬ−２３又はＴＮＦ−αなどである。サイトカインの組み合わせもまた使用され得る。特定の態様では、このＭＨＣＩＩ誘導剤はＩＦＮ−γである。このＭＨＣＩＩ誘導剤は、癌細胞上のＭＨＣＩの発現を増加させることに対しても影響を有し得ることが理解される。例えば、ＩＦＮ−γがＭＨＣＩＩ誘導剤として使用される場合、これはまた、癌細胞の表面上のＭＨＣＩにおける増加を引き起こす傾向がある。

ＭＨＣＩＩ誘導剤とのインキュベーション後、単離された癌細胞は、ＭＨＣＩＩが細胞表面上で発現されていることを確認するために、従来の方法によってスクリーニングされ得る。これらの細胞はまた、ＭＨＣＩＩ陽性細胞の濃度を増加させるために、この段階において精製され得る。

一旦癌細胞がＭＨＣＩＩを発現するように改変されると、これらの細胞は、ＭＨＣＩＩと関連して非自己抗原を提示するように、この非自己抗原と共にインキュベートされる。この非自己抗原は、非自己とみなされ、且つＭＨＣＩＩによって提示された場合に対象において免疫応答を誘導することが可能な、任意の抗原であり得る。適切な抗原には、ハプテン担体として有用であることが公知の抗原、例えば、サイログロブリン、β−ガラクトシダーゼ、デキストラン、ポリリシン、ツベルクリン由来タンパク質、オボアルブミン（ＯＶＡ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ヒツジ血清アルブミン、ヤギ血清アルブミン又は魚類血清アルブミンなどの血清アルブミン、及びキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）などが含まれることが理解される。この抗原は、対象と同じ種由来又は異なる種由来であり得る。例えば、対象がヒトである場合、この抗原は、ヒト抗原又は非ヒト抗原であり得る。典型的には、この抗原は、非ヒト抗原、例えばウシ、ウサギ、マウス、イヌ又はネコの抗原などである。より典型的には、この抗原は、ウシ抗原、例えばウシ血清抗原（ＢＳＡ）などである。ＫＬＨ及びアルブミンは、他の典型的に使用される抗原である。一態様では、ウシ抗原一般が、本発明から具体的に排除される。別の態様では、ＢＳＡだけが、本発明から具体的に排除される。

いくつかの態様では、本発明に従って調製された単離された免疫原性癌細胞は、その細胞表面上にＭＨＣＩ及びＭＨＣＩＩの両方を発現する。ＭＨＣＩ分子及びＭＨＣＩＩ分子は、当該分野で理解されるように、多数の異なる抗原を提示するが、ＭＨＣＩ分子の少なくともいくつかは腫瘍特異的抗原を提示し、ＭＨＣＩＩ分子の少なくともいくつかは非自己抗原を提示する。これらの細胞は、次いで、対象における癌の処置のために、自家対象において使用され得る。

これらの細胞は、生で使用され得る、弱毒化され得る又は死滅され得る。典型的には、これらの細胞は、例えば、致死的照射、ＤＭＳＯなどの凍結保存剤の非存在下での凍結及び解凍、又は化学療法剤若しくは毒素などの細胞傷害性化合物による処理によって、対象における使用の前に死滅される。これらの細胞が即座の使用のためのものではない場合、これらの細胞は、自家対象への後の投与のために、例えば凍結保存などによって保存され得る。

これらの細胞の抽出物もまた、対象における癌の処置のために、自家対象において使用され得る。例えば、これらの細胞は、そのネイティブの形態全体でなくなるように、解離され得、超音波処理され得又は他の方法で破壊され得る。非自己抗原に結合したＭＨＣＩＩ分子を含む膜画分が、これらの細胞から抽出され得、自家対象において癌を処置するための免疫原性組成物中に提供され得る。さらに、非自己抗原に結合したＭＨＣＩＩ分子だけを含む画分が、これらの細胞から抽出され得、自家対象において癌を処置するための免疫原性組成物中に提供され得る。従って、ＭＨＣＩＩ分子を含む細胞性抽出物が提供され、このＭＨＣＩＩ分子は非自己抗原を提示する。この抽出物は、膜画分をさらに含み得、ＭＨＣＩ分子をさらに含み得、このＭＨＣＩ分子は癌抗原を提示する。この抽出物は、免疫原性組成物又は癌ワクチン中に提供され得、癌を有する自家対象を処置するために使用され得る。

ＭＨＣＩＩと関連して非自己抗原を提示するように記載されたように改変された癌細胞もまた、癌を処置するための免疫原性組成物において使用され得る。従って、その細胞表面上にＭＨＣＩ及びＭＨＣＩＩの両方を発現する癌細胞を含む組成物が提供され、このＭＨＣＩは癌抗原を提示し、ＭＨＣＩＩは非自己抗原を提示する。かかる免疫原性組成物は、自家対象において癌を処置するための、自家癌細胞ワクチンとしての使用を見出す。

改変された癌細胞に加えて、これらの免疫原性組成物及びワクチンは、１つ又は複数の医薬的に許容される賦形剤、担体、緩衝液、安定剤、アジュバント又はそれらの混合物をさらに含み得る。

本明細書に記載される免疫原性組成物及びワクチンは、対象に投与され得る医薬的に許容される組成物の調製のために自体公知の方法によって調製され得、その結果、有効量の活性物質が、医薬的に許容されるビヒクルとの混合物中で組み合わされる。適切なビヒクルは、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ、第２０版、ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ．、ＵＳＡ、２０００）に記載されている。これに基づき、組成物は、排他的にではないが、１つ又は複数の医薬的に許容されるビヒクル又は希釈剤と関連して癌細胞を含み得、生理的流体と等張な、適切なｐＨを有する緩衝化溶液中に含まれ得る。

医薬組成物には、限定ではなく、組成物を対象の組織又は血液と実質的に適合性にする抗酸化剤、緩衝液、静菌剤及び溶質をさらに含み得る、凍結乾燥粉末又は水性若しくは非水性の無菌の注射可能な溶液若しくは懸濁物が含まれる。かかる組成物中に存在し得る他の構成要素には、例えば、水、界面活性剤（例えばＴｗｅｅｎ）、アルコール、ポリオール、グリセリン及び植物油が含まれる。即時注射溶液及び懸濁物は、無菌の粉末、顆粒、錠剤又は濃縮された溶液若しくは懸濁物から調製され得る。この医薬組成物は、例えば、限定ではなく、患者への投与の前に無菌の水又は生理食塩水で再構成される凍結乾燥粉末として供給され得る。

適切な医薬的に許容される担体には、医薬組成物の生物学的活性の有効性を妨害しない、本質的に化学的に不活性な非毒性組成物が含まれる。適切な医薬的担体の例には、水、生理食塩水溶液、グリセロール溶液、エタノール、Ｎ−（１（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル）Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、ジオレシルホスホチジル−エタノールアミン（ｄｉｏｌｅｓｙｌｐｈｏｓｐｈｏｔｉｄｙｌ−ｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ）（ＤＯＰＥ）及びリポソームが含まれるがこれらに限定されない。かかる組成物は、患者への直接的投与のための形態を提供するように、適切な量の担体と一緒に、治療有効量の改変された癌細胞を含むべきである。

任意の適切なアジュバントが、本発明のワクチンにおいて使用され得る。例えば、適切なアジュバントには、ＭＰＬ−ＴＤＭアジュバント、ＡＳ０２１／ＡＳ０２、非イオン性ブロックコポリマーアジュバント、リン酸アルミニウム、Ｒ−８４８、イミキモド、ＰＡＭ３ＣＹＳ、ポリ（Ｉ：Ｃ）、ロキソリビン、ＢＣＧ、コリネバクテリウム・パルバム、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド、コレラ毒素由来抗原、リポ多糖アジュバント、フロイント完全アジュバント、フロイント不完全アジュバント、サポニン、鉱物ゲル、例えば水酸化アルミニウム、界面活性物質、例えばリゾレシチン、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、水中の油又は炭化水素乳濁物、キーホールリンペットヘモシアニン、及びジニトロフェノールが含まれる。典型的には、使用されるアジュバントはＢＣＧである。

本発明の免疫原性組成物及びワクチンは、いくつかの態様では、例えば、非経口、静脈内、皮下、皮内、筋内、頭蓋内、眼窩内、眼、脳室内、関節内、脊髄内、大槽内、腹腔内、鼻腔内、直腸内、エアロゾル又は経口投与によって、投与され得る。典型的には、本発明の組成物は、皮下、筋内又は皮内で投与される。より典型的には、本発明の組成物は、皮膚において生じる特異的抗原プロセシングに起因して、上肢に皮内投与される。

本発明の免疫原性組成物及びワクチンは、いくつかの態様では、例えば化学療法、ホルモン療法、生物療法及び放射線治療を含む従来の癌の処置と組み合わせて、同時に又は逐次的に投与され得る。本発明の組成物は、適切な場合、かかる従来の処置と一緒に処方され得る。

本発明の組成物は、任意の適切な量で使用され得るが、典型的には、約１×１０^４〜約１×１０^９の癌細胞を含む用量中に提供される。例えば、本発明の組成物は、いくつかの態様では、約１×１０^４、１×１０^５、約１×１０^６、約１×１０^７、約１×１０^８又は約１×１０^９の癌細胞を含み得る。典型的には、この組成物は、約１×１０^７の癌細胞を含む。

さらに、癌細胞によるワクチン接種は、１回行われ得、又は数回反復され得る。例えば、ワクチン接種は、疾患の状況に依存して、１日１回、週に１回、月に１回、年に１回又はそれらの組み合わせで行われ得る。例えば、対象は、活性な癌を処置するために、週に１回を基礎として数用量が投与され得る。一旦癌の成長が減速するか又は緩解に進むと、追跡維持用量は、例えば、月に１回を基礎として、３か月毎に１回、６か月毎に１回、又は年に１回を基礎として、提供され得る。一般に、生物学的材料が入手可能である限り、対象をワクチン接種し続けることが望まれる。従って、癌患者は典型的に、癌再発の任意の徴候を迅速に同定するために、緩解後数年間にわたって追跡される。任意のかかる兆候が同定される場合、癌細胞ワクチンの追跡用量（単数又は複数）が、再発している癌を処置するために、必要に応じて投与され得る。

用量の数は、患者の腫瘍から取得された癌細胞の数によってのみ制限されると理解される。例えば、癌細胞が対象から単離される場合、これらの癌細胞は生存能を確実にし、細胞数を増加させるために、ある時間期間にわたって培養される。所定の数の用量が望まれる場合、これらの細胞は、所定の数の用量を調製するのに十分な数の細胞が存在するようになるまで、培養され得る。元の細胞材料の全てが一旦使用され尽くすと、さらなる生検又は外科的サンプルが取得されない限り、さらなる用量は調製され得ない。

従って、癌細胞は、ＭＨＣＩＩ誘導剤及び非自己抗原による処置の前又は後のいずれかに、培養した後に凍結保存され得、その結果、例えば癌が再発した場合などの未来の時点においてさらなる用量が必要とされる場合に、これらの癌細胞は再培養され得、細胞数が拡大され得ることが企図される。再発の具体的な場合において、再発した癌由来の第２の生検又は外科的サンプルが、さらなるワクチン用量のためのさらなる生物学的材料を提供するために取得され得る。可能な場合、再発した癌は、ＭＨＣＩと関連して元の癌とは異なる癌抗原を提示し得るので、再発した癌由来の第２の生検又は外科的サンプルを取得することが望ましい。

本発明の組成物、ワクチン、細胞及び方法が癌を処置するために使用され得ることが上に記述されてきたが、これらは、癌を予防するためにも使用され得ることが理解される。この態様では、対象から取得された腫瘍細胞は、どのヒト白血球抗原（ＨＬＡ）がその表面上に発現されるかを決定するためにスクリーニングされ得る。これらの細胞は、ＨＬＡが一致した対象において癌を予防するためのワクチンへと製剤化され得る。

上の開示は、本発明を一般に記載している。より完全な理解は、以下の具体的な例を参照して得ることができる。これらの例は、例示目的のためにのみ記載され、本発明の範囲を限定することを意図しない。形態における変化及び等価物の置換は、状況が示唆し得る又は好都合になり得る場合に、企図される。特定の用語が本明細書で使用されているが、かかる用語は、記述的な意味で意図され、限定を目的としていない。

（例１）
ヒトＬＳＴ１７４Ｔ、ＬｏＶｏ、ＳＷ１１１６、Ｃｏｌｏ２０５及びＨＴ２９結腸癌細胞並びにヒトＳＫ−ＯＶ−３卵巣癌細胞を、種々の濃度のＩＦＮ−γと共に７２時間カルチベートした。次いで、これらの細胞を、ＩＦＮ−γがこれらの細胞においてＭＨＣＩＩ発現を誘導したかどうかを決定するために、特異的抗ＭＨＣＩＩ（ＤＰ、ＤＱ及びＤＲ）抗体を使用して、フローサイトメトリーによって分析した。これらの結果を、表１及び２並びに対応する図１及び２に示す。

この例は、異なる起源のいくつかの異なる細胞型が、ＩＦＮ−γとのインキュベーション後にＭＨＣＩＩを発現するようにされ得ることを示している。

（例２）
マウス４１３−ＢＣＲ乳腺腫瘍細胞を、１００Ｕ／ｍＬＩＦＮ−γと共に４８時間インキュベートし、５０μｇ／ｍＬＢＳＡと共に２４時間インキュベートした。より具体的には、これらの細胞を、１０ｍｌの培地を含むＴ２５フラスコ中に配置した。これらの細胞を、ＩＦＮ−γを含む培地と共に４８時間インキュベートし、次いで、無血清ＲＰＭＩ１６４０で３回洗浄した。次いで、これらの細胞を、２ｍｌのＢＳＡ溶液と共に２時間インキュベートし、次いで、１００Ｕ／ｍｌＩＦＮ−γ及び５０μｇ／ｍｌＢＳＡを含む完全培地を添加した。この４１３−ＢＣＲ細胞を、致死的に照射し、凍結保存した。ＢＡＬＢ／ｃマウスを、それぞれ１×１０^５の４１３−ＢＣＲ細胞を含む、アジュバントなしでｉ．ｐ．投与される３回の注射で、チャレンジの２１日前、１４日前及び７日前に事前免疫した。次いで、これらのマウスを、２．５×１０^６の生存４１３−ＢＣＲ細胞のｓ．ｃ．注射でチャレンジした。全ての事前免疫したマウスは、腫瘍を発症できなかったが（ｎ＝５）、全ての未処置のコントロールマウス（ｎ＝５）は、３０日後に腫瘍を発症した。

この例は、その細胞表面上にＭＨＣＩＩと関連して非自己ペプチドを提示するように改変された癌細胞による事前免疫が、マウスにおける自家の非改変癌細胞によるチャレンジに対して保護的であったことを示している。

（例３）
２０匹のＢＡＬＢ／ｃ雌性マウスを、それぞれ５匹のマウスの４つの群に分割し、Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤと表示した。これらのマウスは、表３に以下に示すように、２回の事前免疫を受けた。簡潔に述べると、群Ａを、その細胞表面上にＭＨＣＩＩと関連して非自己抗原を提示する癌細胞で免疫し；群Ｂを、非自己抗原なしでその細胞表面上にＭＨＣＩＩを発現する癌細胞で免疫し；群Ｃを非自己抗原で免疫し；群ＤをＰＢＳで免疫した。全ての注射はｓ．ｃ．で実施し、チャレンジの１４日前ではアジュバントとしてＱｕｉｌ−Ａを含み、チャレンジの７日前ではアジュバントを含まなかった。０日目に、５×１０^５の生存４１３−ＢＣＲ細胞をｓ．ｃ．注射した。

表４並びに図３及び４は、この研究の結果を示す。表４及び対応する図３は、その事前免疫においてＭＨＣＩＩ発現癌細胞を受けた群Ａ及びＢ由来のマウスが、その事前免疫において細胞を受けなかったマウスの腫瘍サイズよりも小さい腫瘍サイズを有したことを示している。７０日目のマウスの肉眼評価により、群Ａのマウスは検出可能な腫瘍を有さなかったが、群Ｂ、Ｃ及びＤは、それぞれ５匹のマウスのうち１匹、４匹及び５匹が、検出可能な腫瘍を有したことが明らかになった（図４）。

この例は、その細胞表面上にＭＨＣＩＩと関連して非自己ペプチドを提示するように改変された癌細胞による事前免疫が、特に腫瘍のサイズ及び発生率における低減に関して、マウスにおける自家非改変癌細胞によるチャレンジに対して保護的であったことを示している。

（例４）
例３の群Ａ由来のマウスを屠殺し、その膵臓を取り出して、Ｔ細胞増殖アッセイを実施した。ナイーブ動物由来の脾臓を、コントロールとして使用した。群Ａのマウス由来のおよそ１．２×１０^５Ｔ細胞／ウェルを、以下の薬剤又は細胞の存在下で培養した：２ｍｇ／ｍＬフィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）（陽性コントロール）；標準的な培地（陰性コントロール）；１０^４の照射された腫瘍細胞、１０^４の照射されたＩＦＮ−γ処理した腫瘍細胞、又は５０μｇ／ｍＬＢＳＡ。これらのＴ細胞を、３７℃で４８時間インキュベートし、その後１ｍＣｉの３Ｈ−チミジンと共に２０時間インキュベートした。取り込まれた放射能を、固体シンチレーションを使用して測定した。

表５及び図５はこの研究の結果を示し、免疫したマウス由来のＴ細胞が、腫瘍細胞及びＢＳＡに応答して増殖したが、ナイーブマウス由来のＴ細胞は増殖しなかったことを示している。これは、癌ワクチンで免疫した動物が、腫瘍細胞がＩＦＮ−γで処置されているかいないかに関わらず、この腫瘍細胞上に存在する異なる腫瘍抗原に対する独立した免疫を発生させたことを意味している。さらに、癌ワクチンで免疫した動物は、ＢＳＡに対する免疫を示した。

（例５）
１０^６の４１３−ＢＣＲ細胞を、１００Ｕ／ｍｌＩＦＮ−γと共に４８時間インキュベートした。これらの細胞を、ＰＢＳで５回洗浄し、次いで、高いビオチンモル比（ビオチン２０モルに対してＢＳＡ１モル）を使用して、１００μｇ／ｍｌ又は１０μｇ／ｍｌ（２ｍｌ）のビオチン−ＢＳＡと共に２時間インキュベートした。次いで、これらの細胞を、ＩＦＮ−γ＋ビオチン−ＢＳＡを含む培地中で２４時間インキュベートした。これらの細胞を、ＰＢＳで５回洗浄し、Ｔｒｉｔｏｎ−１００^ＴＭで一晩可溶化した。抗マウスＭＨＣＩ又はＭＨＣＩＩ（ＰＢＳ中１０μｇ／ｍｌ）捕捉抗体で、９６ウェルのＥＬＩＳＡプレート上を被覆した。このプレートを、ＰＢＳ中３％のＢＳＡで１時間ブロッキングした。可溶化細胞を含むサンプルを、室温で４時間インキュベートした。これらのプレートを洗浄し、ストレプトアビジン−ペルオキシダーゼコンジュゲートを、３７℃で４５分間添加した。次いで、プレートを５回洗浄し、ＴＭＢ基質を添加した。光学密度を４５０ｎｍで決定した。コントロールサンプル（未処理細胞）と処理細胞との間の比率を、図６に示す。

この例は、ＢＳＡが、用量依存的な様式で、ＩＦＮ−γで事前処置した癌細胞によって発現されたＭＨＣＩＩに結合することが可能であることを示している。

（例６）
ヒトＰＢＬで再構築したＳＣＩＤ−ベージュマウスの群を、本明細書に記載される自家癌ワクチンのｉｎｖｉｖｏ評価のために再構築した。より具体的には、２５匹のＳＣＩＤ−ベージュマウス（雌性、８〜１０週）に、部分的一致ドナー（ＨＬＡ型Ａ２、Ｂ４４、ＤＲ１３）由来の１０^７のｈＰＢＬをｉ．ｐ．注射した（２０％ｖ／ｖのＭａｔｒｉｇｅｌと共に０．５ｍＬ／マウス）。マウス血液を、再構築の７日後及び１４日後に収集して、ｈＩｇＧレベルを検証した。１０μｇ／ｍＬより大きいｈＩｇＧを有するマウスだけを、さらなる実験に利用した。表６は、再構築したマウスのｈＩｇＧ測定値を示す。

ＳＣＩＤ−ベージュマウスのうち１７匹（６８％）が、１４日目までに再構築された。次いで、これらの動物を、自家癌ワクチンのｉｎｖｉｖｏ評価に使用する。これらのマウスを、以下のように、免疫のために４つの群に無作為に分割した：
Ａ）Ｎ＝５、１０^６の照射した改変された腫瘍細胞であって、これらの腫瘍細胞は、上記したように、１００Ｕ／ｍｌＩＦＮ−γで４８時間＋５０μｇ／ｍｌＢＳＡで２４時間の処理によって改変した；
Ｂ）Ｎ＝４、１０^６の照射した改変された腫瘍細胞であって、これらの腫瘍細胞は、ＩＦＮ−γでの７２時間の処理によって改変した；
Ｃ）Ｎ＝４、１００μｇ／マウスのＢＳＡ；及び
Ｄ）Ｎ＝４、ＰＢＳ。

免疫及びチャレンジに使用した腫瘍細胞は、細胞系ＳＷ１１１６（ＨＬＡ型Ａ２、２３、Ｂ４４、６０、ＤＲ１１、１３、５２、ＤＱ６、７）由来であった。免疫プロトコールを表７に示す。全ての群を、Ｒｉｂｉアジュバントを用いてｉ．ｐ．免疫した。ＲｉＢｉは、その毒性に起因して、第１の免疫でのみ使用した。

この研究の結果を表８及び図７に示す。これらの結果は、ＢＳＡ又はＰＢＳ単独による免疫を受けている全てのマウスが、チャレンジの１７日後までに検出可能な腫瘍を有したことを示している。対照的に、改変された癌細胞を受けているマウスは、チャレンジの１７日後までに検出可能な腫瘍を有さず、５匹のうち２匹だけが、チャレンジの２１日後までに検出可能な腫瘍を有した。

（例７）
この自家癌ワクチンをヒトにおいて試験した。細胞を、手術又は生検手順によって取得した。外科医は、肉眼で腫瘍細胞を含むように見えた腫瘍の小さい断片（最大約０．５ｃｍ^３まで）を収集した。針生検を使用した場合、複数の針サンプルを収集した。これらの細胞を、輸送培地（ＲＰＭＩ１６４０、＋２０％ＦＢＳ、＋ペニシリン、＋ストレプトマイシン又はゲンタマイシン、＋１０ｍＭオキサロ酢酸、４．５ｍＭピルバート、及び２．０Ｕ／ｍｌインスリン（ヒト又はウシ））を含むチューブ中に即座に配置した。収集したサンプルを、収集の３０分〜７２時間後に細胞培養ラボで処理されるまで、氷上（約２〜８℃）に配置した。典型的には、腫瘍収集と腫瘍処理との間の時間は、約２４時間未満であった。材料がラボに届くとすぐに、細胞を、冷ＲＰＭＩ１６４０で３回洗浄し、ガラス粉砕、ハサミ又はメスを使用して機械的に解離させた。これらの細胞は、例えばトリプシンを使用して酵素的に解離させることもできたが、機械的解離は、表在性の細胞膜タンパク質を妨害しないので、これを使用した。いくつかの腫瘍は、腹水又は骨髄サンプルとして現れた。これらの場合、機械的解離は必要なかった。

解離した細胞を、いくつかのより小さい腫瘍断片と共に、ＶＡＰ培地（ＲＰＭＩ１６４０、＋１０％ＦＢＳ、＋ペニシリン、＋ストレプトマイシン又はゲンタマイシン、＋１０ｍＭオキサロ酢酸、４．５ｍＭピルバート、及び２．０Ｕ／ｍｌインスリン（ヒト又はウシ））を使用した培養物中に配置した。Ｔ２５又はＴ７５培養フラスコを使用した。少なくとも７×１０^７細胞に達するまでの平均時間は２８日間であったが、これらのサンプルでは、１０〜９１日間の範囲であった。培地を、腫瘍細胞の成長特徴に基づいて、３日毎又は必要に応じて交換した。

十分な細胞（少なくとも３つのコンフルエントなＴ２５フラスコ）になったところで、１つのＴ２５フラスコにつき、新たなＶＡＰ培地（７ｍｌ）１ｍｌ当たり１０００ＩＵのＩＦＮ−γを添加した。ＩＦＮ−γを含む細胞を、３７℃で４８時間インキュベートした。次いで、これらの細胞を、５ｍｌのＲＰＭＩ１６４０で３回洗浄し、ＲＰＭＩ１６４０中５０μｇ／ｍｌのＢＳＡと共に３７℃でインキュベートした。ＢＳＡ含有培地を除去し、ＶＡＰ培地＋１０００ＵＩＦＮ−γ＋５０μｇ／ｍｌのＢＳＡで置き換え、さらに２４時間インキュベートした。これらのインキュベーション時間後、細胞を、スクレーパーを使用して機械的に回収し、生理食塩水で５回洗浄した。洗浄した細胞を、無菌ＰＢＳ中に再懸濁して、１ｍｌ当たり少なくとも１×１０^７細胞が存在するようにし、１ｍｌのマイクロチューブ中に配置した。各患者サンプルを、ＭＨＣＩ及びＭＨＣＩＩの存在並びに利用可能な場合には表面腫瘍マーカーの存在を確認するために、フローサイトメトリーによって評価した。

次いで、サンプルを、２００Ｇｙの放射線によって照射した。次いで、照射した細胞を、それぞれ１５０μＬの細胞（およそ１０^７細胞）を含む７つ以上のマイクロチューブへと分割した。サンプル１及び２を含むチューブを、２〜８℃で冷蔵し、残りのサンプルを−８０℃で凍結させた。１０^７微生物のＢＣＧを添加して（５０μｌ）、２つの最初のサンプルについての最終容積を２００μｌ（１５０μｌの細胞＋５０μｌのＢＣＧ）にした。次いで、これらのサンプルを、ツベルクリンシリンジに移し、上肢に皮内注射した。最初の２回の免疫を、７日間の間隔を挟んで、異なる腕に対して実施した。最初の免疫の前に、入手可能な場合、血液を、体液性及び細胞性免疫応答の分析のために収集した。

第３の用量のワクチンは、ＰＢＳ中に希釈された照射された腫瘍細胞のみ（１０^７細胞）を含み、第２の用量の７日後に接種した。第４の用量は、別の腕に、第３の用量と同じ方法で実施した。第５及び第６の用量は、３０日間間隔で実施した。最後に、第７の用量を、第６の用量の３か月後に投与した。生物学的材料が入手可能な場合、引き続く用量を、患者の評価に依存して３か月毎又は２か月毎に投与した。臨床的及び生化学的評価を、各用量において実施した。標準的な癌処置を、全ての免疫手順の間維持した。遅延型過敏（ＤＴＨ）反応が、ＢＣＧを含んだ最初の２つの用量を除いて、各免疫の２４時間後、４８時間後又は７２時間後に測定された。ワクチンを、表９に示すように、多くの患者及び腫瘍部位から首尾よく調製した。

首尾よいワクチン調製の後、ワクチンを使用してヒトを処置したところ、安全且つ有効であることが見出された。この研究の結果を表１０及び対応する図８に示す。

（例８）
前立腺癌を有する５人の患者についての臨床試験の症例研究がここに記載され、ワクチン接種の前、その間及びその後の彼らの前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）測定値が提供される。ワクチン調製及び処置は、例７と同様であった。

患者１：
患者１を、手術の２６９日後に開始して、月に１回を基礎としてホルモン遮断治療で処置した。第１の用量の自家癌ワクチンを、４４１日目に提供し、引き続く用量を、４４８日目、４５４日目、４６１日目、４９１日目、５２１日目及び６１１日目に提供した。図９は、ホルモン遮断が、３７３日目に測定したとき、ＰＳＡレベルの低減を最初に引き起こしたが、それらは再度上昇し始め、４６３日目にピークに達したことを示している。自家癌ワクチンによる処置は、５８７日目及び６５１日目において、０．０３の低さまでの、この患者におけるＰＳＡレベルのさらなる持続した低減を引き起こした。

患者２：
患者２を、手術の１４日後に開始して、月に１回を基礎としてホルモン遮断治療で処置した。第１の用量の自家癌ワクチンを、１６８日目に提供し、引き続く用量を、１７５日目、１８２日目、１８９日目、２１９日目、２４９日目及び３３９日目に提供した。図１０は、ホルモン遮断が、１３８日目に測定したとき、ＰＳＡレベルの低減を最初に引き起こしたが、それらは再度上昇し始め、１６４日目にピークに達したことを示している。自家癌ワクチンによる処置は、４０２日目までＰＳＡレベルのさらなる持続した低減を引き起こし、この時点でレベルは再度上昇し始めた。

患者３：
患者３を、外科的サンプル収集の６か月前に開始して、月に１回を基礎としてホルモン遮断治療で処置した。第１の用量の自家癌ワクチンを、６８日目に提供し、引き続く用量を、７４日目、７９日目、８６日目、１０７日目、１４６日目、２３６日目、４００日目、５２０日目及び６８４日目に提供した。図１１は、ホルモン抵抗性患者においてさえ、組み合わされたホルモン遮断及びワクチン接種処置が、この患者におけるＰＳＡレベルの着実な低減を引き起こしたことを示している。

患者４：
患者４を、手術の０日後に開始して、月に１回を基礎としてホルモン遮断治療で処置した。第１の用量の自家癌ワクチンを、５日目に提供し、引き続く用量を、１１日目、１８日目、２６日目、５５日目、８３日目及び１７３日目に提供した。図１２は、組み合わされたホルモン遮断及びワクチン接種処置が、４４日目の３５４の高さから、測定値を記録した最後の日である１３６日目の１７５の低さまでの、この患者におけるＰＳＡレベルの低減を引き起こしたことを示している。

患者５：
患者５を、およそ３０日目に手術の直後に開始して、月に１回を基礎としてホルモン遮断治療で処置した。第１の用量の自家癌ワクチンを、１４１日目に提供し、引き続く用量を、１４８日目、１５５日目、１６２日目及び１９２日目に提供した。図１３は、組み合わされたホルモン遮断及びワクチン接種処置が、４３日目の５０．３の高さから、測定値を記録した最後の日である１８０日目の１．１２の低さまでの、この患者におけるＰＳＡレベルの低減を引き起こしたことを示している。

（例９）
本明細書に記載される自家癌ワクチンは、局所進行前立腺癌患者による最初の第Ｉ相試験において、安全であることが実証されている。この試験は、第ＩＩｂ相に進んでいる。第ＩＩｂ相研究の主要エンドポイントは、局所進行（Ｔ２及びＴ３）前立腺癌患者における臨床的応答（ＰＳＡレベル及び生存）であり、安全性及び免疫学的応答は二次エンドポイントであった。

方法：
１０７人の前立腺切除術患者由来の腫瘍細胞を収集した（ＨＣＰＡ−ＰｏｒｔｏＡｌｅｇｒｅ−Ｂｒａｚｉｌ）。併存症因子と共にＴ４、Ｔ３又はＴ２の前立腺癌を有する６３人（５９％）の患者を登録した。２３人の患者はワクチンを受け、４０人はコントロール群中であった。ワクチン接種群は、より進行した腫瘍を有する患者から構成され、ワクチン接種群中の患者の８３％は、コントロール群の３５％と比較して、Ｔ３又はＴ４のいずれかの前立腺癌を有した。ワクチン接種群では、患者の２２％がＮ＋（局所リンパ節への伝播）であり、コントロール群では、患者の２．５％がＮ＋であった。ＰＳＡの手術前平均は、ワクチン接種群では１６．１５ｎｇ／ｍｌであり、コントロール群では１５．７４ｎｇ／ｍｌであった。平均Ｇｌｅａｓｏｎスコアは、７．５（ワクチン接種）及び６．９（ワクチン接種なし）であり、年齢は類似の６４歳（ワクチン接種なし）及び６３歳（ワクチン接種）であった。

この自家癌ワクチンは、例７に従って調製し、皮内注射によって、４週間にわたり１週間に１回、次いで２か月間にわたり月に１回、次いで３か月後に１回与えた。最初の２つの用量の自家癌ワクチンは、アジュバントとしてＢＧＣもまた含んだ。ＤＴＨを、ＢＣＧを含まないワクチン用量の４８時間後に測定した。ＰＢＭＣを、幾人かの患者において、Ｔ細胞増殖アッセイのためにベースライン及びＤ５４において、アフェレーシスを介して収集した。臨床的追跡を実施し、全ての標準的な看護を全ての患者に与えた。

結果：
全体的な平均追跡は７年間であった。ワクチンに起因するグレード３又は４の毒性は留意されなかった。副作用は、グレード１又は２の注射部位反応に主に限定された。ＤＴＨは、ワクチン接種患者の７３％において陽性（５ｍｍ以上）であった。癌関連の死亡率は、ワクチン接種群において４％（１／２３）であり、非ワクチン接種群において１０％（４／４０）であった（図１４Ａ）。７年後の平均ＰＳＡレベルは、ワクチン接種群において２０．４ｎｇ／ｍｌであり、非ワクチン接種群において４２ｎｇ／ｍｌであった（図１４Ｂ）。ＰＳＡは、５年間の追跡後に、ワクチン接種患者の７０％（１６／２３）及び非ワクチン接種患者の４２．５％（１７／４０）において、検出不能（０．０４ｎｇ／ｍｌ未満）であった（ｐ＝０．０３８５３）（図１４Ｃ）。ｉｎｖｉｔｒｏの特異的Ｔ細胞増殖が、ワクチン接種患者において実証された。

結論：
本明細書に記載される自家癌ワクチンは、安全で、十分に許容されるワクチンである。選択された患者において、臨床的活性及び免疫変化の証拠が存在する。

上記開示は、本発明を一般的に記載している。特定の用語が本明細書で使用されているが、かかる用語は、記述的な意味で意図され、限定を目的としていない。

全ての刊行物、特許及び特許出願は、各個々の刊行物、特許又は特許出願が、その全体が参照によって組み込まれると具体的且つ個々に示されるのと同じ程度まで、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。

本発明の好ましい実施形態が本明細書で詳細に記載されているが、本発明の精神又は添付の特許請求の範囲から逸脱することなしに、好ましい実施形態に対するバリエーションが行われ得ることが、当業者に理解される。

Claims

単離された免疫原性癌細胞を作製する方法であって、
・対象から単離された癌細胞上のＭＨＣＩＩの発現を誘導する工程；
・発現されたＭＨＣＩＩに非自己抗原が結合するように、前記癌細胞を前記非自己抗原と共にインキュベートする工程；及び
・前記癌細胞を死滅させる工程、
を含む上記方法。
ＭＨＣＩＩ誘導後にＭＨＣＩＩ陽性細胞を同定する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
ＭＨＣＩＩ陰性癌細胞から前記ＭＨＣＩＩ陽性癌細胞を分離して、前記ＭＨＣＩＩ陽性細胞を含む精製された組成物を取得する工程をさらに含む、請求項２に記載の方法。
対象から前記癌細胞を単離する工程をさらに含む、請求項１から３までのいずれか一項に記載の方法。
前記細胞が、生検手順の間又は腫瘍の外科的除去の間に単離される、請求項４に記載の方法。
前記癌細胞を凍結保存する工程をさらに含む、請求項１から５までのいずれか一項に記載の方法。
前記細胞が、致死的照射、凍結保存剤の非存在下での凍結及び解凍、又は細胞傷害性化合物による処理によって死滅される、請求項１から６までのいずれか一項に記載の方法。
前記細胞が致死的照射によって死滅される、請求項７に記載の方法。
前記ＭＨＣＩＩが、ＭＨＣＩＩ誘導剤を使用して前記癌細胞上で誘導される、請求項１から８までのいずれか一項に記載の方法。
前記ＭＨＣＩＩ誘導剤がサイトカインである、請求項９に記載の方法。
前記サイトカインが、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、ＩＬ−１３、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−α又はそれらの組み合わせである、請求項１０に記載の方法。
前記サイトカインがＩＦＮ−γである、請求項１１に記載の方法。
前記ＭＨＣＩＩ誘導剤がＭＨＣＩＩ発現構築物である、請求項９に記載の方法。
前記ＭＨＣＩＩ誘導剤が、前記癌細胞と融合するＭＨＣＩＩ発現細胞である、請求項９に記載の方法。
前記非自己抗原が非ヒト抗原である、請求項１から１４までのいずれか一項に記載の方法。
前記非自己抗原が、サイログロブリン、β−ガラクトシダーゼ、デキストラン、ポリリシン、ツベルクリン由来タンパク質、オボアルブミン（ＯＶＡ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ヒツジ血清アルブミン、ヤギ血清アルブミン又は魚類血清アルブミンなどの血清アルブミン、及びキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、並びにそれらの組み合わせから選択される、請求項１５に記載の方法。
前記非自己抗原がオボアルブミン又はＫＬＨである、請求項９に記載の方法。
前記非自己抗原がＢＳＡである、請求項９に記載の方法。
前記非自己抗原がウシ抗原ではない、請求項１から１４までのいずれか一項に記載の方法。
前記非自己抗原がＢＳＡではない、請求項１９に記載の方法。
前記誘導する工程が、ＢＳＡを含まない培地中である、請求項１から２０までのいずれか一項に記載の方法。
その細胞表面上にＭＨＣＩ及びＭＨＣＩＩの両方を発現する単離された免疫原性癌細胞であって、癌抗原が前記ＭＨＣＩに結合し、非自己抗原が前記ＭＨＣＩＩに結合する上記細胞。
前記非自己抗原が非ヒト抗原である、請求項２２に記載の細胞。
前記非自己抗原が、サイログロブリン、β−ガラクトシダーゼ、デキストラン、ポリリシン、ツベルクリン由来タンパク質、オボアルブミン（ＯＶＡ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ヒツジ血清アルブミン、ヤギ血清アルブミン又は魚類血清アルブミンなどの血清アルブミン、及びキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、並びにそれらの組み合わせから選択される、請求項２３に記載の細胞。
前記非自己抗原がオボアルブミン又はＫＬＨである、請求項２４に記載の細胞。
前記非自己抗原がＢＳＡである、請求項２４に記載の細胞。
前記非自己抗原がウシ抗原ではない、請求項２２に記載の細胞。
前記非自己抗原がＢＳＡではない、請求項２７に記載の細胞。
その細胞表面上にＭＨＣＩ及びＭＨＣＩＩの両方を発現する単離された免疫原性癌細胞を含む免疫原性組成物であって、癌抗原が前記ＭＨＣＩに結合し、非自己抗原が前記ＭＨＣＩＩに結合する上記組成物。
少なくとも１つの賦形剤、担体、緩衝液、安定剤又はそれらの組み合わせをさらに含む、請求項２９に記載の組成物。
前記非自己抗原が非ヒト抗原である、請求項２９又は３０に記載の組成物。
前記非自己抗原が、サイログロブリン、β−ガラクトシダーゼ、デキストラン、ポリリシン、ツベルクリン由来タンパク質、オボアルブミン（ＯＶＡ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ヒツジ血清アルブミン、ヤギ血清アルブミン又は魚類血清アルブミンなどの血清アルブミン、及びキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、並びにそれらの組み合わせから選択される、請求項３１に記載の組成物。
前記非自己抗原がオボアルブミン又はＫＬＨである、請求項３２に記載の組成物。
前記非自己抗原がＢＳＡである、請求項３２に記載の組成物。
前記非自己抗原がウシ抗原ではない、請求項２９又は３０に記載の組成物。
前記非自己抗原がＢＳＡではない、請求項３５に記載の組成物。
前記組成物中の細胞の総数に基づいて、約５％〜約１００％のＭＨＣＩＩ陽性癌細胞を含む、請求項２９から３６までのいずれか一項に記載の組成物。
少なくとも約５０％のＭＨＣＩＩ陽性癌細胞を含む、請求項３７に記載の組成物。
少なくとも約９０％のＭＨＣＩＩ陽性癌細胞を含む、請求項３８に記載の組成物。
少なくとも約９９％のＭＨＣＩＩ陽性癌細胞を含む、請求項３９に記載の組成物。
その細胞表面上にＭＨＣＩ及びＭＨＣＩＩの両方を発現する単離された免疫原性癌細胞を含む自家癌ワクチンであって、癌抗原が前記ＭＨＣＩに結合し、非自己抗原が前記ＭＨＣＩＩに結合する上記ワクチン。
少なくとも１つのアジュバントをさらに含む、請求項４１に記載のワクチン。
前記アジュバントが、モノホスホリルリピドＡ／合成トレハロースジコリノミコラート（ＭＰＬ−ＴＤＭ）、ＡＳ０２１／ＡＳ０２、非イオン性ブロックコポリマーアジュバント、ＣＲＬ１００５、リン酸アルミニウム、ＡＩＰＯ_４）、Ｒ−８４８、イミキモド、ＰＡＭ３ＣＹＳ、ポリ（Ｉ：Ｃ）、ロキソリビン、カルメット・ゲラン桿菌（ＢＣＧ）、コリネバクテリウム・パルバム（ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｐａｒｖｕｍ）、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、コレラ毒素由来抗原、ＣＴＡ１−ＤＤ、リポ多糖アジュバント、フロイント完全アジュバント、フロイント不完全アジュバント、サポニン、鉱物ゲル、水酸化アルミニウム、界面活性物質、リゾレシチン、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、水中の油又は炭化水素乳濁物、ＭＦ５９、ＭｏｎｔａｎｉｄｅＩＳＡ７２０、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、ジニトロフェノール及びそれらの組み合わせから選択される、請求項４２に記載のワクチン。
前記アジュバントがＢＣＧである、請求項４３に記載のワクチン。
少なくとも１つの賦形剤、担体、緩衝液、安定剤又はそれらの組み合わせをさらに含む、請求項４１から４４までのいずれか一項に記載のワクチン。
前記非自己抗原が非ヒト抗原である、請求項４１から４５までのいずれか一項に記載のワクチン。
前記非自己抗原が、サイログロブリン、β−ガラクトシダーゼ、デキストラン、ポリリシン、ツベルクリン由来タンパク質、オボアルブミン（ＯＶＡ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ヒツジ血清アルブミン、ヤギ血清アルブミン又は魚類血清アルブミンなどの血清アルブミン、及びキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、並びにそれらの組み合わせから選択される、請求項４６に記載のワクチン。
前記非自己抗原がオボアルブミン又はＫＬＨである、請求項４７に記載のワクチン。
前記非自己抗原がＢＳＡである、請求項４７に記載のワクチン。
前記非自己抗原がウシ抗原ではない、請求項４１から４５までのいずれか一項に記載のワクチン。
前記非自己抗原がＢＳＡではない、請求項５０に記載のワクチン。
前記ワクチン中の細胞の総数に基づいて、約５％〜約１００％のＭＨＣＩＩ陽性癌細胞を含む、請求項４１から５１までのいずれか一項に記載のワクチン。
少なくとも約５０％のＭＨＣＩＩ陽性癌細胞を含む、請求項５２に記載のワクチン。
少なくとも約９０％のＭＨＣＩＩ陽性癌細胞を含む、請求項５３に記載のワクチン。
［請求項５３］
少なくとも約９９％のＭＨＣＩＩ陽性癌細胞を含む、請求項５４に記載のワクチン。
［請求項５４］
複数接種のための分割された用量で提供される、請求項４１から５３までのいずれか一項に記載のワクチン。
７つの分割された用量で提供される、請求項５４に記載のワクチン。
各用量が、約１×１０^４〜約１×１０^９の癌細胞を含む、請求項４１から５５までのいずれか一項に記載のワクチン。
各用量が約１×１０^７の癌細胞を含む、請求項５６に記載のワクチン。
対象において癌を処置する方法であって、前記方法は、単離された免疫原性癌細胞を前記対象に投与する工程を含み、前記細胞が、前記対象に対して自家であり、その細胞表面上にＭＨＣＩ及びＭＨＣＩＩの両方を発現し、癌抗原が前記ＭＨＣＩに結合し、非自己抗原が前記ＭＨＣＩＩに結合する上記方法。
前記細胞が免疫原性組成物として製剤化される、請求項５８に記載の方法。
前記細胞が癌ワクチンとして製剤化される、請求項５８に記載の方法。
前記非自己抗原が非ヒト抗原である、請求項５８から６０までのいずれか一項に記載の方法。
前記非自己抗原が、サイログロブリン、β−ガラクトシダーゼ、デキストラン、ポリリシン、ツベルクリン由来タンパク質、オボアルブミン（ＯＶＡ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ヒツジ血清アルブミン、ヤギ血清アルブミン又は魚類血清アルブミンなどの血清アルブミン、及びキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、並びにそれらの組み合わせから選択される、請求項６１に記載の方法。
前記非自己抗原がオボアルブミン又はＫＬＨである、請求項６２に記載の方法。
前記非自己抗原がＢＳＡである、請求項６２に記載の方法。
前記非自己抗原がウシ抗原ではない、請求項５８から６０までのいずれか一項に記載の方法。
前記非自己抗原がＢＳＡではない、請求項６５に記載の方法。
投与される細胞の総数に基づいて、投与される前記癌細胞のうち約５％〜約１００％がＭＨＣＩＩ陽性癌細胞である、請求項５８から６６までのいずれか一項に記載の方法。
投与される前記癌細胞のうち少なくとも約５０％がＭＨＣＩＩ陽性癌細胞である、請求項６７に記載の方法。
投与される前記癌細胞のうち少なくとも約９０％がＭＨＣＩＩ陽性癌細胞である、請求項６８に記載の方法。
投与される前記癌細胞のうち少なくとも約９９％がＭＨＣＩＩ陽性癌細胞である、請求項６９に記載の方法。
前記細胞が、従来の化学療法、放射線療法、ホルモン療法及び生物療法のうち少なくとも１つと同時に又は逐次的に投与される、請求項５８から７０までのいずれか一項に記載の方法。
前記細胞が、外科的腫瘍切除の前又は後に投与される、請求項５８から７１までのいずれか一項に記載の方法。
前記細胞が複数用量で投与される、請求項５８から７２までのいずれか一項に記載の方法。
前記細胞が、所定数の週にわたって週に１回投与される、請求項７３に記載の方法。
前記細胞が、進行中の維持療法として投与される、請求項７３に記載の方法。
前記細胞が、週に１回、月に１回、３か月毎に１回、６か月毎に１回、年に１回又はそれらの組み合わせで投与される、請求項７５に記載の方法。
前記細胞が、癌再発の徴候が観察される場合に投与される、請求項５８から７６までのいずれか一項に記載の方法。
対象において癌を処置するための、前記対象に対して自家の単離された免疫原性癌細胞の使用であって、前記細胞が、その細胞表面上にＭＨＣＩ及びＭＨＣＩＩの両方を発現し、癌抗原が前記ＭＨＣＩに結合し、非自己抗原が前記ＭＨＣＩＩに結合する上記使用。
前記細胞が免疫原性組成物として製剤化される、請求項７８に記載の使用。
前記細胞が癌ワクチンとして製剤化される、請求項７８に記載の使用。
前記非自己抗原が非ヒト抗原である、請求項７８から８０までのいずれか一項に記載の使用。
前記非自己抗原が、サイログロブリン、β−ガラクトシダーゼ、デキストラン、ポリリシン、ツベルクリン由来タンパク質、オボアルブミン（ＯＶＡ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ヒツジ血清アルブミン、ヤギ血清アルブミン又は魚類血清アルブミンなどの血清アルブミン、及びキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、並びにそれらの組み合わせから選択される、請求項８１に記載の使用。
前記非自己抗原がオボアルブミン又はＫＬＨである、請求項８２に記載の使用。
前記非自己抗原がＢＳＡである、請求項８２に記載の使用。
前記非自己抗原がウシ抗原ではない、請求項７８から８０までのいずれか一項に記載の使用。
前記非自己抗原がＢＳＡではない、請求項８５に記載の使用。
細胞の総数に基づいて約５％〜約１００％のＭＨＣＩＩ陽性癌細胞の使用を含む、請求項７８から８６までのいずれか一項に記載の使用。
少なくとも約５０％のＭＨＣＩＩ陽性癌細胞の使用を含む、請求項８７に記載の使用。
少なくとも約９０％のＭＨＣＩＩ陽性癌細胞の使用を含む、請求項８８に記載の使用。
少なくとも約９９％のＭＨＣＩＩ陽性癌細胞の使用を含む、請求項８９に記載の使用。
前記細胞が、従来の化学療法、放射線療法、ホルモン療法及び生物療法のうち少なくとも１つと同時に又は逐次的に使用するためのものである、請求項７８から９０までのいずれか一項に記載の使用。
前記細胞が外科的腫瘍切除の前又は後に使用するためのものである、請求項７８から９１までのいずれか一項に記載の使用。
前記細胞が複数用量で使用するためのものである、請求項７８から９２までのいずれか一項に記載の使用。
前記細胞が、所定数の週にわたって週に１回使用するためのものである、請求項９３に記載の使用。
前記細胞が、進行中の維持療法として使用するためのものである、請求項９３に記載の使用。
前記細胞が、週に１回、月に１回、３か月毎に１回、６か月毎に１回、年に１回又はそれらの組み合わせで使用するためのものである、請求項９５に記載の使用。
前記細胞が、癌再発の徴候が観察される場合に使用するためのものである、請求項７８から９６までのいずれか一項に記載の使用。
患者が、単離された免疫原性癌細胞を用いた治療の候補であるかどうかを決定するための方法であって、前記方法は、
・対象由来の単離された癌細胞をＭＨＣＩＩ誘導剤で処理する工程；及び
・前記癌細胞をスクリーニングして、発現されたＭＨＣＩＩの存在を決定する工程、
を含み、
前記癌細胞上の発現されたＭＨＣＩＩの存在が、前記患者が前記治療の候補であることを示す上記方法。
対象から前記癌細胞を単離する工程をさらに含む、請求項９９に記載の方法。
前記細胞が、生検手順の間又は腫瘍の外科的除去の間に単離される、請求項９９に記載の方法。
前記ＭＨＣＩＩ誘導剤がサイトカインである、請求項９８又は１００のいずれか一項に記載の方法。
前記サイトカインが、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、ＩＬ−１３、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−α又はそれらの組み合わせである、請求項１０１に記載の方法。
前記サイトカインがＩＦＮ−γである、請求項１０２に記載の方法。
前記ＭＨＣＩＩ誘導剤がＭＨＣＩＩ発現構築物である、請求項９８から１００までのいずれか一項に記載の方法。
前記ＭＨＣＩＩ誘導剤が、前記癌細胞と融合するＭＨＣＩＩ発現細胞である、請求項９８から１００までのいずれか一項に記載の方法。
癌を有する対象を免疫するための癌ワクチンであって、前記癌ワクチンは、前記対象に対して自家の単離された免疫原性癌細胞を含み、前記癌細胞は、ＭＨＣＩＩ誘導剤による処理とその後の非自己抗原とのインキュベーションとによって改変されることによって、その細胞表面上にＭＨＣＩＩと関連して前記非自己抗原を提示しており、前記癌ワクチンが、増加した濃度のＭＨＣＩＩ発現細胞を含むように精製されている上記癌ワクチン。
免疫原性抽出物を作製する方法であって、
・対象から単離された癌細胞上のＭＨＣＩＩの発現を誘導する工程；
・発現されたＭＨＣＩＩに非自己抗原が結合するように、前記癌細胞を前記非自己抗原と共にインキュベートする工程；及び
・前記癌細胞から、結合した非自己抗原を有する前記ＭＨＣＩＩを抽出する工程、
を含む上記方法。
前記免疫原性抽出物が膜画分である、請求項１０７に記載の方法。
前記免疫原性抽出物が精製されたＭＨＣＩＩを含む、請求項１０７に記載の方法。
ＭＨＣＩＩ誘導後にＭＨＣＩＩ陽性細胞を同定する工程をさらに含む、請求項１０７から１０９までのいずれか一項に記載の方法。
ＭＨＣＩＩ陰性癌細胞から前記ＭＨＣＩＩ陽性癌細胞を分離して、前記ＭＨＣＩＩ陽性細胞を含む精製された組成物を取得する工程をさらに含む、請求項１１０に記載の方法。
対象から前記癌細胞を単離する工程をさらに含む、請求項１０７から１１１までのいずれか一項に記載の方法。
前記細胞が、生検手順の間又は腫瘍の外科的除去の間に単離される、請求項１１２に記載の方法。
前記癌細胞を凍結保存する工程をさらに含む、請求項１０７から１１３までのいずれか一項に記載の方法。
前記細胞が、致死的照射、凍結保存剤の非存在下での凍結及び解凍、又は細胞傷害性化合物による処理によって死滅される、請求項１０７から１１４までのいずれか一項に記載の方法。
前記細胞が致死的照射によって死滅される、請求項１１５に記載の方法。
前記ＭＨＣＩＩが、ＭＨＣＩＩ誘導剤を使用して前記癌細胞上で誘導される、請求項１０７から１１６までのいずれか一項に記載の方法。
前記ＭＨＣＩＩ誘導剤がサイトカインである、請求項１１７に記載の方法。
前記サイトカインが、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、ＩＬ−１３、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−α又はそれらの組み合わせである、請求項１１８に記載の方法。
前記サイトカインがＩＦＮ−γである、請求項１１９に記載の方法。
前記ＭＨＣＩＩ誘導剤がＭＨＣＩＩ発現構築物である、請求項１１７に記載の方法。
前記ＭＨＣＩＩ誘導剤が、前記癌細胞と融合するＭＨＣＩＩ発現細胞である、請求項１１７に記載の方法。
前記非自己抗原が非ヒト抗原である、請求項１０７から１２２までのいずれか一項に記載の方法。
前記非自己抗原が、サイログロブリン、β−ガラクトシダーゼ、デキストラン、ポリリシン、ツベルクリン由来タンパク質、オボアルブミン（ＯＶＡ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ヒツジ血清アルブミン、ヤギ血清アルブミン又は魚類血清アルブミンなどの血清アルブミン、及びキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、並びにそれらの組み合わせから選択される、請求項１２３に記載の方法。
前記非自己抗原がオボアルブミン又はＫＬＨである、請求項１１７に記載の方法。
前記非自己抗原がＢＳＡである、請求項１１７に記載の方法。
前記非自己抗原がウシ抗原ではない、請求項１０７から１２２までのいずれか一項に記載の方法。
前記非自己抗原がＢＳＡではない、請求項１２７に記載の方法。
前記誘導する工程が、ＢＳＡを含まない培地中である、請求項１０７から１２８までのいずれか一項に記載の方法。
請求項２２から２８までのいずれか一項に記載の細胞の免疫原性抽出物であって、前記細胞由来の結合した非自己抗原を有するＭＨＣＩＩを含む上記抽出物。
膜画分である、請求項１３０に記載の抽出物。
精製されたＭＨＣＩＩを含む、請求項１３０に記載の抽出物。
請求項１３０から１３２までのいずれか一項に記載の抽出物を含む、免疫原性組成物。
少なくとも１つの賦形剤、担体、緩衝液、安定剤又はそれらの組み合わせをさらに含む、請求項１３３に記載の組成物。
請求項１３０から１３２までのいずれか一項に記載の抽出物を含む、自家癌ワクチン。
少なくとも１つのアジュバントをさらに含む、請求項１３５に記載のワクチン。
前記アジュバントが、モノホスホリルリピドＡ／合成トレハロースジコリノミコラート（ＭＰＬ−ＴＤＭ）、ＡＳ０２１／ＡＳ０２、非イオン性ブロックコポリマーアジュバント、ＣＲＬ１００５、リン酸アルミニウム、ＡＩＰＯ_４）、Ｒ−８４８、イミキモド、ＰＡＭ３ＣＹＳ、ポリ（Ｉ：Ｃ）、ロキソリビン、カルメット・ゲラン桿菌（ＢＣＧ）、コリネバクテリウム・パルバム（ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｐａｒｖｕｍ）、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、コレラ毒素由来抗原、ＣＴＡ１−ＤＤ、リポ多糖アジュバント、フロイント完全アジュバント、フロイント不完全アジュバント、サポニン、鉱物ゲル、水酸化アルミニウム、界面活性物質、リゾレシチン、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、水中の油又は炭化水素乳濁物、ＭＦ５９、ＭｏｎｔａｎｉｄｅＩＳＡ７２０、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、ジニトロフェノール及びそれらの組み合わせから選択される、請求項１３６に記載のワクチン。
前記アジュバントがＢＣＧである、請求項１３７に記載のワクチン。
少なくとも１つの賦形剤、担体、緩衝液、安定剤又はそれらの組み合わせをさらに含む、請求項１３５から１３８までのいずれか一項に記載のワクチン。
対象において癌を処置する方法であって、前記方法は、請求項１３０から１３２までのいずれか一項に記載の抽出物を前記対象に投与する工程を含み、前記細胞が、前記対象に対して自家である上記方法。
前記抽出物が免疫原性組成物として製剤化される、請求項１４０に記載の方法。
前記抽出物が癌ワクチンとして製剤化される、請求項１４０に記載の方法。
前記抽出物が、従来の化学療法、放射線療法、ホルモン療法及び生物療法のうち少なくとも１つと同時に又は逐次的に投与される、請求項１４０から１４２までのいずれか一項に記載の方法。
抽出物が、外科的腫瘍切除の前又は後に投与される、請求項１４０から１４３までのいずれか一項に記載の方法。
前記抽出物が複数用量で投与される、請求項１４０から１４４までのいずれか一項に記載の方法。
前記抽出物が、所定数の週にわたって週に１回投与される、請求項１４５に記載の方法。
前記抽出物が、進行中の維持療法として投与される、請求項１４５に記載の方法。
前記抽出物が、週に１回、月に１回、３か月毎に１回、６か月毎に１回、年に１回又はそれらの組み合わせで投与される、請求項１４７に記載の方法。
前記抽出物が、癌再発の徴候が観察される場合に投与される、請求項１４０から１４８までのいずれか一項に記載の方法。
対象において癌を処置するための、請求項１３０から１３２までのいずれか一項に記載の抽出物の使用であって、前記細胞が前記対象に対して自家である上記使用。
前記抽出物が免疫原性組成物として製剤化される、請求項１５０に記載の使用。
前記抽出物が癌ワクチンとして製剤化される、請求項１５０に記載の使用。
前記抽出物が、従来の化学療法、放射線療法、ホルモン療法及び生物療法のうち少なくとも１つと同時に又は逐次的に使用するためのものである、請求項１５０から１５２までのいずれか一項に記載の使用。
前記抽出物が、外科的腫瘍切除の前又は後に使用するためのものである、請求項１５０から１５３までのいずれか一項に記載の使用。
前記抽出物が複数用量で使用するためのものである、請求項１５０から１５４までのいずれか一項に記載の使用。
前記抽出物が、所定数の週にわたって週に１回使用するためのものである、請求項１５５に記載の使用。
前記抽出物が、進行中の維持療法として使用するためのものである、請求項１５５に記載の使用。
前記抽出物が、週に１回、月に１回、３か月毎に１回、６か月毎に１回、年に１回又はそれらの組み合わせで使用するためのものである、請求項１５７に記載の使用。
前記抽出物が、癌再発の徴候が観察される場合に使用するためのものである、請求項１５０から１５８までのいずれか一項に記載の使用。