JP2015500301A - 細菌感染症を治療するための組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
採集した植物材料を、目視検査して、本来のものでない、傷んでいる、または侵食されている部分を取り除く。
Origanum vulgareのすべての地上部を、抽出のために使用する。
Ribes nigrumの葉を、抽出のために使用する。
Cistus incanusの花および小枝を、抽出のために使用する。
Origanum vulgare(試験物質A)
調合:H2O中5mg/ml;固体物質(凍結乾燥)
試験モデル:ミューラー・ヒントン寒天培地(MH寒天培地)における黄色ブドウ球菌(USA300=MRSA)
試験群:物質A(5mg)
手順:凍結乾燥した抽出物を水に溶解した。100μlのMRSA溶液を、MH寒天培地で平板培養した。その後、MH寒天培地にあけた8mmの穴を、100μlの抽出溶液で満たした。37℃で22時間後、その穴を、増殖の阻害について光学的に調べた。
MRSA細菌の適用:10−3/1.63×105/100μl/寒天培地プレート
一晩のMRSA培養:8mlのTBS培地において10μl、22時間、37℃、振盪
調合:H2O中5mg/ml;固体物質(凍結乾燥)
試験モデル:ミューラー・ヒントン寒天培地(MH寒天培地)における黄色ブドウ球菌(USA300=MRSA)
試験群:物質B(5mg)
手順:凍結乾燥した抽出物を水に溶解した。100μlのMRSA溶液を、MH寒天培地で平板培養した。その後、MH寒天培地にあけた8mmの穴を、100μlの抽出溶液で満たした。37℃で22時間後、その穴を、増殖の阻害について光学的に調べた。
MRSA細菌の適用:10−3/1.63×105/100μl/寒天培地プレート
一晩のMRSA培養:8mlのTBS培地において10μl、22時間、37℃、振盪
調合:H2O中2.5mg/ml;固体物質(凍結乾燥)
試験モデル:ミューラー・ヒントン寒天培地(MH寒天培地)における黄色ブドウ球菌(USA300=MRSA)
試験群:物質C(2.5mg)
手順:凍結乾燥した抽出物を水に溶解した。100μlのMRSA溶液を、MH寒天培地で平板培養した。その後、MH寒天培地にあけた8mmの穴を、100μlの抽出溶液で満たした。37℃で22時間後、その穴を、増殖の阻害について光学的に調べた。
MRSA細菌の適用:10−3/1.63×105/100μl/寒天培地プレート
一晩のMRSA培養:8mlのTBS培地において10μl、22時間、37℃、振盪
試験対象物
試験物質:A(=Origanum vulgare)+B(=Ribes nigrum)
調合:物質A:H2O中5mg/ml;固体物質(凍結乾燥);物質B:H2O中5mg/ml;固体物質(凍結乾燥)
試験モデル:ミューラー・ヒントン寒天培地(MH寒天培地)における黄色ブドウ球菌(USA300=MRSA)
試験群:物質A(5mg)+物質B(5mg)
手順:凍結乾燥した抽出物を水に溶解した。100μlのMRSA溶液を、MH寒天培地で平板培養した。その後、MH寒天培地にあけた8mmの穴を、100μlの物質溶液で満たした。37℃で22時間後、その穴を、増殖の阻害について光学的に調べた。
MRSA細菌の適用:10−3/1.63×105/100μl/寒天培地プレート
一晩のMRSA培養:8mlのTBS培地において10μl、22時間、37℃、振盪
図1から分かるように、Origanum vulgareとRibes nigrumとの組み合わせを使用したとき、MRSAの増殖のより十分な阻害が得られる。
試験物質:A(=Origanum vulgare)+C(=Cistus)
調合:物質A:H2O中5mg/ml;固体物質(凍結乾燥);物質C:H2O中2.5mg/ml;固体物質(凍結乾燥)
試験モデル:ミューラー・ヒントン寒天培地(MH寒天培地)における黄色ブドウ球菌(USA300=MRSA)
試験群:物質A(5mg)+物質C(2.5mg)
手順:凍結乾燥した抽出物を水に溶解した。100μlのMRSA溶液を、MH寒天培地で平板培養した。その後、MH寒天培地にあけた8mmの穴を、100μlの物質溶液で満たした。37℃で22時間後、その穴を、増殖の阻害について光学的に調べた。
MRSA細菌の適用:10−3/1.63×105/100μl/寒天培地プレート
一晩のMRSA培養:8mlのTBS培地において10μl、22時間、37℃、振盪
図2から分かるように、Origanum vulgareとCistus incanusとの組み合わせを使用したとき、MRSAの増殖のより十分な阻害が得られる。
OriganumおよびRibes nigrumの液体抽出物の調製
Origanum vulgareのすべての地上部、およびRibes nigrumの葉を、抽出のために使用する。
Origanum vulgareのすべての地上部を、抽出のために使用する。
Ribes nigrumの葉を、抽出のために使用する。
Origanum vulgareの乾燥抽出物とRibes nigrumの乾燥抽出物とを、1:1の重量比でよく混合する。
in vitro実験における、BacLightによる生存率アッセイ
LIVE/DEAD BacLight Bacterial Viability Kit(Invitrogen、Molecular probes、Darmstadt、Germany)は、2種の核酸染色剤、すなわち、緑色蛍光SYTO9染色剤および赤色蛍光ヨウ化プロピジウム染色剤を採用している。生細胞について、小分子のSYTO9は、生細胞および死(非生存)細胞に浸透させるために使用するのに対して、対比染色剤のヨウ化プロピジウムは、死細胞のみを染める。
1)8mg/mlのOriganum vulgareおよび8mg/mlのRibes nigrum(上記の乾燥抽出物から)
2)0.8mg/mlのOriganum vulgareおよび0.8mg/mlのRibes nigrum(上記の乾燥抽出物から)
3)30.5mg/ml(上記の液体抽出物から)
を調製し、Streptococcus mutansに対する抗菌活性について試験した。
図3から分かるように、Origanum vulgareおよびRibes nigrumの抽出物は、Streptococcus mutansに対する抗菌活性を示す。
Origanum vulgareのすべての地上部、およびRibes nigrumの葉を、抽出のために使用する。
試験系:
一晩のMRSA培養:8mlのTBS培地において10μl、22時間、37℃、振盪
試験モデル:ミューラー・ヒントン寒天培地(MH寒天培地)におけるStaphylococcus aureus(USA300=MRSA)
試験群:上記のOriganum vulgareおよびRibes nigrumの液体抽出物;純粋、1:2および1:4希釈
手順:100μlのMRSA溶液を、MH寒天培地で平板培養した。その後、MH寒天培地にあけた8mmの穴を、所与の濃度の100μlの液体抽出物で満たした。37℃で22時間後、その穴を、増殖の阻害について光学的に調べた。
MRSA細菌の適用::10−3/1.63×105/100μl/寒天培地プレート
MRSAの増殖の阻害を認めた。Origanum vulgareおよびRibes nigrumの純粋な抽出物を使用したとき、MH寒天培地に28mmの阻止域を認めた。1:2の希釈(抽出物:LB培地)で、阻止域は、19mmであり、1:4の希釈(抽出物:LB培地)で、阻止域は、13mmであった。
試験系:
一晩のSalmonella typhimurium培養:8mlのLB培地において10μl、22時間、37℃、振盪、LB培地において1:100で希釈
試験モデル:ミューラー・ヒントン寒天培地(MH寒天培地)におけるSalmonella typhimurium
試験群:上記のOriganum vulgareおよびRibes nigrumの液体抽出物;純粋
手順:100μlのSalmonella typhimurium溶液を、MH寒天培地で平板培養した。その後、MH寒天培地にあけた8mmの穴を、所与の濃度の100μlの液体抽出物で満たした。37℃で22時間後、その穴を、増殖の阻害について光学的に調べた。
Salmonella typhimuriumの増殖の阻害を認めた。MH寒天培地に10mmの阻止域を認めた。
試験系:
一晩のYersinia enterocolitica培養:8mlのLB培地において10μl、22時間、27℃、振盪、LB培地において1:1000で希釈
試験モデル:ミューラー・ヒントン寒天培地(MH寒天培地)におけるYersinia enterocolitica
試験群:上記のOriganum vulgareおよびRibes nigrumの液体抽出物;純粋、1:2希釈
手順:100μlのYersinia enterocolitica溶液を、MH寒天培地で平板培養した。その後、MH寒天培地にあけた8mmの穴を、所与の濃度の100μlの液体抽出物で満たした。27℃で22時間後、その穴を、増殖の阻害について光学的に調べた。
Yersinia enterocoliticaの増殖の阻害を認めた。Origanum vulgareおよびRibes nigrumの純粋な抽出物を使用したとき、MH寒天培地に14mmの阻止域を認めた。1:2の希釈(抽出物:LB培地)で、阻止域は10mmであった。
試験系:
一晩のSalmonella typhimuriumの培養:8mlのLB培地において10μl、22時間、37℃、振盪
試験モデル:ミューラー・ヒントン寒天培地(MH寒天培地)におけるSalmonella typhimurium
10mlの混合物を、以下の通りに調製した:
a)LB培地
b)LB培地+50μlのSalmonella typhimurium
c)LB培地+上記のOriganum vulgareおよびRibes nigrumの液体抽出物(4:1)
d)LB培地+上記のOriganum vulgareおよびRibes nigrumの液体抽出物(4:1)+50μlのSalmonella typhimurium。
手順:これらの混合物50μlを、測光キュベット中で450μlのLB培地で希釈し、OD測定を、0時間、1時間、2時間、3時間、4時間、5時間、6時間、7時間、8時間、24時間、48時間後に600nmにて行った。
Origanum vulgareおよびRibes nigrumの液体抽出物は、48時間をも超える長時間にわたりSalmonella typhimuriumの増殖を強力に阻害する。
試験系:
一晩のPseudomonas aeruginosa培養:8mlのLB培地において10μl、22時間、37℃、振盪
10mlの混合物を、以下の通りに調製した:
a)LB培地
b)LB培地+50μlのPseudomonas aeruginosa
c)LB培地+上記のOriganum vulgareおよびRibes nigrumの液体抽出物(2:1)
d)LB培地+上記のOriganum vulgareおよびRibes nigrumの液体抽出物(4:1)
e)LB培地+上記のOriganum vulgareおよびRibes nigrumの液体抽出物(2:1)+50μlのPseudomonas aeruginosa
f)LB培地+上記のOriganum vulgareおよびRibes nigrumの液体抽出物(4:1)+50μlのPseudomonas aeruginosa。
手順:これらの混合物100μlを、測光キュベット中で900μlのLB培地で希釈し、OD測定を、0時間、1時間、2時間、3時間、4時間、5時間、6時間、7時間、8時間、24時間、48時間後に600nmにて行った。
Origanum vulgareおよびRibes nigrumの液体抽出物を1:2の希釈で使用した場合、その液体抽出物は、Pseudomonas aeruginosaの増殖を約8時間阻害する。その液体抽出物は、1:4の希釈では8時間後に細菌増殖を強力に阻害する。
試験系:
一晩のYersinia enterocoliticaの培養:8mlのLB培地において10μl、22時間、27℃、振盪
10mlの混合物を以下の通り調製した:
a)LB培地
b)LB培地+50μlのYersinia enterocolitica
c)LB培地+上記のOriganum vulgareおよびRibes nigrumの液体抽出物(2:1)
d)LB培地+上記のOriganum vulgareおよびRibes nigrumの液体抽出物(4:1)
e)LB培地+上記のOriganum vulgareおよびRibes nigrumの液体抽出物(2:1)+50μlのYersinia enterocolitica
f)LB培地+上記のOriganum vulgareおよびRibes nigrumの液体抽出物(4:1)+50μlのYersinia enterocolitica。
手順:これらの混合物100μlを、測光キュベット中で900μlのLB培地で希釈し、OD測定を、0時間、1時間、2時間、3時間、4時間、5時間、6時間、7時間、8時間、24時間、48時間後に600nmにて行った。
Origanum vulgareおよびRibes nigrumの液体抽出物は、両方の希釈でYersinia enterocoliticaの増殖を約8時間阻害する。
MIC50値は、50%の微生物の増殖を阻害するのに必要とされる最小阻害濃度を示す。
試験系:
一晩のSalmonella typhimurium培養:8mlのLB培地において10μl、22時間、37℃、振盪
試験群:上記のOriganum vulgareおよびRibes nigrumの液体抽出物;純粋、1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、および1:128(LB培地中で希釈)
手順:9mlのLB培地に、一晩の培養物を1ml播種し、光度計で0.5から0.6の間のOD600が測定されるまで、撹拌器中、37℃でインキュベートした。細菌を、Neubauer Zahlkammerで計数し、25×105/ml培地へと希釈した。上記のOriganum vulgareおよびRibes nigrumの液体抽出物2ml(純粋、LB培地で1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、および1:128に希釈)に、200μl(約5×105)のSalmonella typhimuriumを播種した。細菌を含まない液体抽出物の希釈物ならびに2mlのLB培地または細菌を含むLB培地を、対照として供した。撹拌器中、37℃で19時間インキュベーション。その混合物を測光キュベット中で1:10に希釈し、ODを600nmで決定した。
MIC50に達した平均希釈は、1:9(抽出物:LB培地)である。
試験系:
一晩のPseudomonas aeruginosa培養:8mlのLB培地において10μl、22時間、37℃、振盪
試験群:上記のOriganum vulgareおよびRibes nigrumの液体抽出物;純粋、1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128、1:256、1:512(LB培地中で希釈)
手順:9mlのLB培地に、一晩の培養物を1ml播種し、光度計で0.5から0.6の間のOD600が測定されるまで、撹拌器中、37℃でインキュベートした。細菌を、Neubauer Zahlkammerで計数し、25×105/ml培地へと希釈した。上記のOriganum vulgareおよびRibes nigrumの液体抽出物2ml(純粋、LB培地で1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128、1:256、1:512に希釈)に、200μl(約5×105)のPseudomonas aeruginosaを播種した。細菌を含まない液体抽出物の希釈物ならびに2mlのLB培地または細菌を含むLB培地を、対照として供した。撹拌器中、37℃で19時間インキュベーション。その混合物を、測光キュベット中で1:10に希釈し、ODを600nmで決定した。
MIC50に達した平均希釈は、1:70(抽出物:LB培地)である。
試験系:
一晩のYersinia enterocolitica培養:8mlのLB培地において10μl、22時間、27℃、振盪
試験群;上記のOriganum vulgareおよびRibes nigrumの液体抽出物;純粋、1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128、1:256、1:512(LB培地中で希釈)
手順:9mlのLB培地に、一晩の培養物を1ml播種し、光度計で0.5から0.6の間のOD600が測定されるまで、撹拌器中、37℃でインキュベートした。細菌を、Neubauer Zahlkammerで計数し、25×105/ml培地へと希釈した。上記のOriganum vulgareおよびRibes nigrumの液体抽出物2ml(純粋、LB培地で1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128、1:256、1:512に希釈)に、200μl(約5×105)のYersinia enterocoliticaを播種した。細菌を含まない液体抽出物の希釈物ならびに2mlのLB培地または細菌を含むLB培地を、対照として供した。撹拌器中、27℃で19時間インキュベーション。その混合物を、測光キュベット中で1:10に希釈し、ODを600nmで決定した。
MIC50に達した平均希釈は、1:50(抽出物:LB培地)である。
試験系:
一晩のMRSAの培養:8mlのLB培地において10μl、22時間、37℃、振盪
試験群;上記のOriganum vulgareおよびRibes nigrumの液体抽出物;純粋、1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128、1:256、1:512(LB培地中で希釈)
手順:9mlのLB培地に、一晩の培養物を1ml播種し、光度計で0.5から0.6の間のOD600が測定されるまで、撹拌器中、37℃でインキュベートした。細菌を、Neubauer Zahlkammerで計数し、25×105/ml培地へと希釈した。上記のOriganum vulgareおよびRibes nigrumの液体抽出物2ml(純粋、LB培地で1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128、1:256、1:512に希釈)に、200μl(約5×105)の黄色ブドウ球菌を播種した。細菌を含まない液体抽出物の希釈物ならびに2mlのLB培地または細菌を含むLB培地を、対照として供した。撹拌器中、37℃で19時間インキュベーション。その混合物を、測光キュベット中で1:10に希釈し、ODを600nmで決定した。
MIC50に達した平均希釈は、1:73(抽出物:LB培地)である。
Claims (16)
- オリガヌムの濃縮物または抽出物を、別の植物の少なくとも1種の濃縮物または抽出物と組み合わせて含む、細菌感染症の治療に使用するための組成物。
- 前記濃縮物または抽出物が、植物の地上部に由来する、請求項1に記載の使用のための組成物。
- 前記植物が、セリ科、ヒユ科、バラ科、スグリ科、キク科、ハンニチバナ科、シソ科、マメ科、およびグミ科の植物から選択される、請求項1または2に記載の使用のための組成物。
- 前記植物が、Aegopodium属、Salicornia属、Chenopodium属、Cydonia属、Sorbus属、Ribes属、Cichorium属、Cistus属、Geum属、Sideritis属、Cicer属、Hippophae属、およびPrunus属から選択される、請求項3に記載の使用のための組成物。
- 食用の植物が、Aegopodium podagraria、Chenopodium bonus−henricus、Sorbus terminalis、Ribes nigrum、Ribes rubrum、Cistus incanus、Cydonia oblonga、Cichorium intybus、Salicornia europaea、Geum urbanum、Hippophae rhamnoides、Sideritis scardica、Cicer arietinum、およびPrunus spinosaから選択される、請求項4に記載の使用のための組成物。
- 前記細菌感染症が、病原細菌により引き起こされる、請求項1から5のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
- 前記病原細菌が、Staphylococcus属、Streptococcus属、Pseudomonas属、Escherichia属、Salmonella属、Helicobacter属、Neisseria属、Campylobacter属、Chlamydia属、Clostridium属、Vibrio属、Triponema属、Mycobacterium属、Klebsiella属、Actinomyces属、Bacterioides属、Bordetella属、Borrelia属、Brucella属、Corynebacterium属、Diplococcus属、Enterobacter属、Fusobacterium属、Leptospira属、Listeria属、Pasteurella属、Proteus属、Rickettsia属、Shigella属、Sphaerophorus属、Yersinia属、またはそれらの組み合わせから選択される、請求項6に記載の使用のための組成物。
- 前記細菌が、抗生物質耐性細菌である、請求項6または7に記載の使用のための組成物。
- 前記抗生物質耐性細菌が、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌である、請求項8に記載の使用のための組成物。
- 前記組成物が、液体、乾燥または半固体の形態である、請求項1から9のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
- 前記抽出物が、水性抽出物またはアルコール性抽出物である、請求項1から10のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
- 前記組成物が、経口、鼻腔内、または局所投与される、請求項1から11のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
- 前記組成物が、点鼻剤、吸入用混合物、エアゾール、口内洗浄液、マウススプレー、点鼻スプレー、またはルームスプレーの形態である、請求項1から12のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
- 前記組成物が、錠剤、コーティング錠、発泡錠、カプセル、粉剤、顆粒、糖衣錠、トローチ、丸剤、アンプル、ドロップ、坐剤、エマルション、軟膏、ゲル、チンキ剤、パスタ剤、クリーム、湿布、うがい液、または植物ジュースの形態である、請求項1から12のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
- 前記細菌感染症が、消化管の感染症、尿生殖路の感染症、鼻炎、扁桃炎、咽頭炎、気管支炎、肺炎を含めた気道の感染症、腎炎、肝炎、腹膜炎、心内膜炎、髄膜炎、骨髄炎を含めた内臓の感染症、眼、耳の感染症ならびに皮膚および皮下の感染症、下痢、皮膚疾患、毒素性ショック症候群、菌血症、敗血症、ならびに結核である、請求項1から14のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
- 前記細菌が、Streptococcus mutans、Salmonella typhimurium、Pseudomonas aeruginosa、およびYersinia enterocoliticaから選択される、請求項1から8または10から15のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
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