JP2015059090A - イネ科植物用の細菌病防除剤および防除方法並びに該防除剤をコートした種子 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】非病原性パントエア アナナティス(Pantoea ananatis)細菌の培養液、培養上清液又は菌体からなる群から選択される少なくとも1種を含む、イネ苗立枯細菌病、イネもみ枯細菌病(苗腐敗症)又はイネもみ枯細菌病(もみ枯症)からなる群から選択される少なくとも1種のイネ科植物の細菌病害を防除するための細菌病防除剤、該細菌病防除剤を種子又は穂に付着させる防除処理工程を有するイネ科植物の細菌病害の防除方法、該細菌病防除剤をコートしたイネ科植物の種子により解決する。
【選択図】図1
Description
本発明の実施形態におけるイネ科植物の細菌病害に対する細菌病防除剤は、非病原性パントエア アナナティス(Pantoea ananatis)細菌の培養液、培養液上清液又は菌体を含む懸濁液(菌体懸濁液)である。なお、パントエア アナナティス(Pantoea ananatis)細菌は、病原性菌株と非病原性菌株の2種類が存在し、病原性のパントエア アナナティス(Pantoea ananatis)菌株を用いた場合にはイネ内穎褐変病を発病するなどイネ科植物の生育に悪影響を及ぼすため、非病原性のパントエア アナナティス(Pantoea ananatis)菌株を用いる。
本実施形態のイネ科植物の細菌病害の防除方法は、上述した細菌病防除剤をイネ科植物の種子又は穂に付着させる防除処理工程を有する。
本実施形態の種子は、非病原性パントエア アナナティス(Pantoea ananatis)細菌の培養液、培養上清液又は菌体懸濁液を含み、イネ科植物の細菌病害の防除に有効な細菌病防除剤をイネ科植物の種子にコートしたものである。
パントエア アナナティス(Pantoea ananatis)細菌は、イネ内穎褐変病を発病させる病原性細菌であることが知られている。一方、当該細菌には、イネ内穎褐変病を発病しない非病原性菌株も存在することが知られている。そこで、2001年に茨城県で栽培されたイネ穂から分離されたパントエア アナナティス(Pantoea ananatis)R31株及びR32株について、その病原性の有無を調べた。
供試菌株として、パントエア アナナティス(Pantoea ananatis)R31株及びR32株を用いた。また、病原性を示すパントエア アナナティス(Pantoea ananatis)菌株として、パントエア アナナティス(Pantoea ananatis)MAFF301720株を、病原性を示さないパントエア アナナティス(Pantoea ananatis)菌株として、パントエア アナナティス(Pantoea ananatis)MAFF301722株を使用した。
種籾は、コシヒカリを使用し、塩水選(比重1.13)および温湯消毒(60℃、10分間)を行った。
パントエア アナナティス(Pantoea ananatis)R31株、R32株、MAFF301722株又はMAFF301720株を、常法に従い、PPG液体培地(Bacto−Pepton 5g,グルコース 5g,Na2HPO4・12H2O 3g,KH2PO4 0.5g,NaCl 3g,ジャガイモ200gの煎汁 1000mL)に接種し、25℃で2日間振とう培養した。また、この培養液を遠心分離(8000rpm、7分間)によって菌体と培養上清液とに分離し、該培養上清液を除去することで菌体を回収し、この回収した菌体に除去した培養上清液と同量の滅菌水を加えることで菌体懸濁液を調製した。なお、菌体懸濁液の菌体濃度は、約108cfu/mLである。
供試種籾を25℃の蒸留水に48時間浸種した後、再度、新たな蒸留水(25℃)に48時間浸種し、その後、32℃の蒸留水中で16時間保持することで催芽させた。次いで、この催芽した種籾をバランスディッシュ(44mm×44mm×15mm;アズワン株式会社製)に入れたイネ育苗用培土(井関農機製)に均一に蒔き、軽く覆土することで播種を行った。また、播種後はガラス温室内で育苗した。その後、ワグネルポット(1/5000a)に3〜5株を移植し、屋外で生育した。なお、肥料は、窒素として硫安(あかぎ園芸株式会社製及び/又はエア・ウォーター株式会社製)、リン酸として過リン酸石灰(あかぎ園芸株式会社製)及び/又は熔成燐肥(朝日工業株式会社製)並びにカリウムとして加里(あかぎ園芸株式会社製)を用いた。
前記(4)で育苗した苗の出穂・開花期に前記(3)で調製した菌体懸濁液を1穂あたり30mL噴霧することでパントエア アナナティス(Pantoea ananatis)細菌を接種した。また、噴霧から約3週間後にイネ内穎褐変症状の有無をそれぞれ調べた。
表1に示すように、パントエア アナナティス(Pantoea ananatis)R31株、R32株又は非病原性菌株であることが確認されているパントエア アナナティス(Pantoea ananatis)MAFF301722株を接種した場合は、発病した籾は認められず、これら菌株によるイネ内穎褐変症状は認められなかった。一方、病原性菌株であることが確認されているパントエア アナナティス(Pantoea ananatis)MAFF301720株を接種した場合は、発病した籾数が73(発病籾率7.3%)と、当該菌株によるイネ内穎褐変症状が認められた。以上の結果から、パントエア アナナティス(Pantoea ananatis)R31株及びR32株は、非病原性のパントエア アナナティス(Pantoea ananatis)菌株であることが分かった。
(1)供試菌株
供試菌株として、パントエア アナナティス(Pantoea ananatis)R31株、R32株、MAFF301722株及びMAFF301720株を使用した。また、イネ苗立枯細菌病菌として、バークホルデリア プランタリー(Burkholderia plantarii)MAFF301723株を用いた。
種籾は、上記1.(2)と同様、コシヒカリを使用し、塩水選(比重1.13)および温湯消毒(60℃、10分間)を行った。
イネ苗立枯細菌病菌であるバークホルデリア プランタリー(Burkholderia plantarii)MAFF301723株を、常法に従い、PPG液体培地(Bacto−Pepton 5g,グルコース 5g,Na2HPO4・12H2O 3g,KH2PO4 0.5g,NaCl 3g,ジャガイモ200gの煎汁 1000mL)に接種し、25℃で2日間振とう培養した。また、この培養液を遠心分離(8000rpm、7分間)によって菌体と培養上清液とに分離し、該培養上清液を除去することで菌体を回収した後、この回収した菌体に滅菌水を加えることでイネ苗立枯細菌病菌の菌体懸濁液を調製した。なお、この菌体懸濁液には、バークホルデリア プランタリー(Burkholderia plantarii)MAFF301723株が約108cfu/mL含まれている。
前記イネ苗立枯細菌病菌(Burkholderia plantarii MAFF301723)の菌体懸濁液(約108cfu/mL)に供試種籾を浸漬し、これを真空減圧下で約1時間保持することで種籾に病原細菌を接種した。その後、水気を切った該種籾をラボタオル等に広げ、室温で一晩風乾した。これをイネ苗立枯細菌病菌(Burkholderia plantarii MAFF301723)汚染種籾として、以下の試験に使用した。
パントエア アナナティス(Pantoea ananatis)R31株、R32株、MAFF301722株又はMAFF301720株を、常法に従い、PPG液体培地(Bacto−Pepton 5g,グルコース 5g,Na2HPO4・12H2O 3g,KH2PO4 0.5g,NaCl 3g,ジャガイモ200gの煎汁 1000mL)に接種し、25℃で2日間振とう培養することで培養液を得た。また、該培養液を培養液処理液として、以下の試験に使用した。
パントエア アナナティス(Pantoea ananatis)R31株、R32株、MAFF301722株又はMAFF301720株を、前記(5)と同様に培養することで得た培養液を遠心分離(8000rpm、7分間)し、得られた培養上清液を再度遠心分離(10000rpm、10分間)した後、回収した上清液を滅菌フィルターでろ過することで培養上清液を調製した。また、この培養上清液を培養上清液処理液として、以下の試験に使用した。
パントエア アナナティス(Pantoea ananatis)R31株、R32株、MAFF301722株又はMAFF301720株を、前記(5)と同様に培養することで得た培養液を遠心分離(8000rpm、7分間)し、菌体と培養上清液とに分離した後、該培養上清液を除去することで菌体を回収した。この回収した菌体に除去した培養上清液と同量の滅菌水を加えることで菌体懸濁液を調製した。また、該菌体懸濁液を菌体懸濁液処理液として、以下の試験に使用した。
前記イネ苗立枯細菌病菌汚染種籾を重量比で1%を含む種籾約2.8gを、前記(5)〜(7)で調製した各種処理液にそれぞれ浸漬し、25℃、48時間の浸漬処理を行った。その後、これらを25℃の蒸留水に48時間浸種した後、32℃の蒸留水中で16時間保持することで催芽させた。次いで、これら催芽した種籾をバランスディッシュ(44mm×44mm×15mm;アズワン株式会社製)に入れたイネ育苗用培土(井関農機製)に均一に蒔き、軽く覆土することで播種を行った。また、播種後はガラス温室内でそれぞれ育苗し、播種から約2週間後に発病調査を行った。なお、処理液の代わりに蒸留水を用いた場合を対照とした。
各区の全苗について発病程度を調査し、程度別に指数を与え、発病度および防除価を以下の式から算出した。また、指数は、枯死苗:5、枯死以外の発病苗(白化・わい化・抽出異常):3、健全苗:0とした。
発病度={Σ(発病程度別苗数×指数)/(5×調査苗数)}×100
防除価=(1−処理区の発病度/無処理区の発病度)×100
各種パントエア アナナティス(Pantoea ananatis)菌株の培養液、培養上清液又は菌体懸濁液をそれぞれ処理液として用いた場合のイネ苗立枯細菌病の発病苗率、発病度及び防除価を表2〜4に示した。また、その時のイネ苗の様子を図1に示した。
(1)供試菌株
供試菌株として、パントエア アナナティス(Pantoea ananatis)R31株、R32株、MAFF301722株及びMAFF301720株を使用した。また、イネもみ枯細菌病(苗腐敗症)菌として、バークホルデリア グルメ(Burkholderia glumae)MAFF301441株を用いた。
種籾は、上記1.(2)と同様、コシヒカリを使用し、塩水選(比重1.13)および温湯消毒(60℃、10分間)を行った。
イネもみ枯細菌病(苗腐敗症)菌であるバークホルデリア グルメ(Burkholderia glumae)MAFF301441株を用い、上記2.(3)同様の方法によってイネもみ枯細菌病(苗腐敗症)菌の菌体懸濁液を調製した。なお、この菌体懸濁液には、バークホルデリア グルメ(Burkholderia glumae)MAFF301441株が約108cfu/mL含まれている。
前記イネもみ枯細菌病(苗腐敗症)菌(Burkholderia glumae MAFF301441)の菌体懸濁液(約108cfu/mL)を用い、上記2.(4)と同様の方法によってイネもみ枯細菌病(苗腐敗症)菌(Burkholderia glumae MAFF301441)に汚染された汚染種籾を調製した。また、調製した該汚染種籾を以下の試験に使用した。
上記2.(5)〜(7)と同様の方法で各種処理液を調製した。
前記イネもみ枯細菌病(苗腐敗症)菌汚染種籾を重量比で10%を含む種籾約2.8gを用い、上記2.(8)と同様の方法によって種籾の処理を行った。なお、各種処理液で種籾を処理する際の浸漬処理温度は、10、15、20、25又は30℃とした。また、この処理した種籾を上記2.(8)と同様の方法によって播種及び育苗した。なお、処理液の代わりに蒸留水を用いた場合を対照とした。
発病程度の調査は、上記2.(10)と同様の方法によって行い、発病度及び防除価を算出した。
各種パントエア アナナティス(Pantoea ananatis)菌株の培養液、培養上清液又は菌体懸濁液をそれぞれ処理液として用いた場合のイネもみ枯細菌病(苗腐敗症)の発病苗率、発病度及び防除価を表5〜16に示した。また、その時のイネ苗の様子を図2〜4に示した。
(1)供試菌株
供試菌株として、パントエア アナナティス(Pantoea ananatis)R31株、R32株、MAFF301722株及びMAFF301720株を使用した。また、イネもみ枯細菌病(もみ枯症)菌として、バークホルデリア グルメ(Burkholderia glumae)MAFF301441株を用いた。
種籾は、コシヒカリ又はキヌヒカリを使用し、塩水選(比重1.13)および温湯消毒(60℃、10分間)を行った。なお、コシヒカリは2011年、キヌヒカリは2012年の試験において使用した。
イネもみ枯細菌病(もみ枯症)菌であるバークホルデリア グルメ(Burkholderia glumae)MAFF301441株を用い、前記2.(3)と同様の方法によってイネもみ枯細菌病(もみ枯症)菌の菌体懸濁液を調製した。なお、この菌体懸濁液には、バークホルデリア グルメ(Burkholderia glumae)MAFF301441株が約108cfu/mL含まれている。
パントエア アナナティス(Pantoea ananatis)R31株、R32株、MAFF301722株又はMAFF301720株を用い、上記2.(6)と同様の方法で各種菌体懸濁液処理液を調製した。
前記供試種籾を用い、上記1.(4)と同様の方法で行った。
前記育苗した苗の出穂・開花期に1穂あたりイネ内穎褐変病菌の菌体懸濁液約30mL及び菌体懸濁液処理液約30mLをそれぞれ噴霧した。なお、菌体懸濁液処理液の噴霧は、イネ内穎褐変病菌の菌体懸濁液を噴霧する前日に行う場合(前日処理)、イネ内穎褐変病菌の菌体懸濁液を噴霧する同日に行う場合(同日処理)又はイネ内穎褐変病菌の菌体懸濁液を噴霧した翌日に行う場合(翌日処理)の3種の処理方法でそれぞれ行い、それぞれの場合について、噴霧から約2〜3週間後に発病調査を行った。
各区の全穂について発病程度を調査し、程度別に区分し、発病度および防除価を以下の式から算出した。また、区分は、1穂中の罹病籾率が61%以上の穂数:A、1穂中の罹病籾率が31〜60%の穂数:B、1穂中の罹病籾率が11〜30%の穂数:C、1穂中の罹病籾率が10%以下の穂数:Dとした。
発病度={(4A+3B+2C+1D)/4×調査穂数}×100
防除価=(1−処理区の発病度/無処理区の発病度)×100
各種パントエア アナナティス(Pantoea ananatis)細菌の菌体懸濁液処理液をイネもみ枯細菌病(もみ枯症)菌の菌体懸濁液を噴霧する前日、同日又は翌日に噴霧した場合のイネもみ枯細菌病(もみ枯症)の発病度及び防除価を表17〜19に示した。また、その時のイネの穂の様子を図5〜7に示した。
Claims (11)
- 非病原性パントエア アナナティス(Pantoea ananatis)細菌の培養液、培養上清液又は菌体懸濁液からなる群から選択される少なくとも1種を含む、イネ苗立枯細菌病、イネもみ枯細菌病(苗腐敗症)又はイネもみ枯細菌病(もみ枯症)からなる群から選択される少なくとも1種のイネ科植物の細菌病害を防除するための細菌病防除剤。
- 前記パントエア アナナティス(Pantoea ananatis)細菌が、パントエア アナナティス(Pantoea ananatis)R31株(寄託番号:MAFF311647)、R32株(寄託番号:MAFF311648)又はMAFF301722株である、請求項1に記載の細菌病防除剤。
- 請求項1又は2に記載の細菌病防除剤をイネ科植物の種子に付着させる防除処理工程を有するイネ苗立枯細菌病及び/又はイネもみ枯細菌病(苗腐敗症)の防除方法。
- 前記防除処理工程が、前記細菌病防除剤に前記種子を浸漬する工程である、請求項3に記載のイネ苗立枯細菌病及び/又はイネもみ枯細菌病(苗腐敗症)の防除方法。
- 前記種子浸漬工程における浸漬処理温度が、10〜30℃である、請求項4に記載のイネ苗立枯細菌病及び/又はイネもみ枯細菌病(苗腐敗症)の防除方法。
- 請求項1又は2に記載の細菌病防除剤をイネ科植物の穂に付着させる防除処理工程を有するイネもみ枯細菌病(もみ枯症)の防除方法。
- 前記防除処理工程が、イネ科植物の穂に前記細菌病防除剤を噴霧する工程である、請求項6に記載のイネもみ枯細菌病(もみ枯症)の防除方法。
- 前記防除処理工程が、イネ科植物の出穂開花期に行われる、請求項6又は7に記載のイネもみ枯細菌病(もみ枯症)の防除方法。
- 請求項1又は2に記載の細菌病防除剤をイネ科植物の種子にコートした種子。
- 請求項1又は2に記載の細菌病防除剤を含む液にイネ科植物の種子を浸漬処理することによって該細菌病防除剤を該種子にコートした種子。
- パントエア アナナティス(Pantoea ananatis)R31株(寄託番号:MAFF311647)及びR32株(寄託番号:MAFF311648)。
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