JP2014525926A5

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Publication number: JP2014525926A5
Application number: JP2014525434A
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Filing date: 2012-08-14
Publication date: 2015-10-01
Anticipated expiration: 2032-08-14

Description

抗ＣＤ１９抗体とナイトロゲンマスタードとの併用療法

［クロスリファレンス］
本出願は、２０１２年６月１日に出願した米国暫定特許出願第６１／６５４，０９７号、２０１２年５月１６日に出願した米国暫定特許出願第６１／６４７，５３９号、２０１１年８月１６日に出願した米国暫定特許出願第６１／５２３，８６１号の利益を請求する。これらの出願は、全体が引用により組み込まれている。

本開示は、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、及び／又は、急性リンパ球性白血病に対する、抗ＣＤ１９抗体とナイトロゲンマスタードの薬学的併用に関する。

Ｂ細胞は、液性免疫反応において大きな役割を果たすリンパ球である。この細胞は、ほとんどの哺乳類の骨髄中で作られ、循環するリンパ球プールの５−１５％を占める。Ｂ細胞の主な作用は、様々な抗原に対する抗体を作ることであり、適応免疫系の必須要素である。

免疫系の調整におけるその重要な役割のために、Ｂ細胞の異常調節は、リンパ腫や白血病など様々な疾患に関連している。これらの疾患には、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、及び急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）が含まれる。

ＮＨＬは、リンパ球由来の異種悪性腫瘍である。米国では、その発生率は６５，０００／年、死亡率は約２０，０００と推定されている。（米国がん学会、２００６；及びＳＥＥＲＣａｎｃｅｒＳｔａｔｉｓｔｉｃｓＲｅｖｉｅｗ）。この疾患はすべての年齢で生じ、通常の発病は４０歳以上の成人に始まり、年齢に伴って発生率が上がる。ＮＨＬは、リンパ節、血液、骨髄、脾臓に蓄積したリンパ球のクローン増殖によって特徴づけられるが、あらゆる主な器官が関係する。病理学者や医師が用いている現在の分類システムは、腫瘍の世界保健機構（ＷＨＯ）分類であり、この分類は、ＮＨＬを前駆体又は成熟Ｂ−細胞又はＴ−細胞腫瘍に分類している。ＰＤＱは、現在、臨床試験への参加にあたり、ＮＨＬを無痛又は悪性に分けている。無痛ＮＨＬグループは、主に、小胞亜型、小リンパ球性リンパ腫、ＭＡＬＴ（粘膜関連リンパ組織）、及び辺縁帯からなり、無痛性は、新たに診断されたＢ−細胞ＮＨＬ患者の約５０％に及ぶ。悪性ＮＨＬは、主にびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＬ、ＤＬＢＣＬ、又はＤＬＣＬ）（新たに診断された全患者の４０％がびまん性大細胞型細胞を有する）、バーキット型細胞、および外套細胞の組織学的診断を受けた患者を含む。ＮＨＬの臨床経過は極めて価値がある。臨床経過の主たる決定要因は組織学的亜型である。ほとんどの無痛型のＮＨＬは、不治の疾患であると考えられている。患者は初期には、化学療法又は抗体療法に反応するが、ほとんどが再発する。これまでの研究は、治療介入による生存率の改善を示していない。無症状の患者では、患者が症状を示すようになるか、あるいは、疾患の進み具合が加速して見えるまで「成り行きを見守る」ことを受け入れることができる。時間がたつと、疾患がより悪性の組織構造に変化する。平均生存期間は８乃至１０年であり、無痛の患者は、通常、その疾患の治療段階で３回又はそれ以上の治療を受ける。症候性無痛ＮＨＬ患者の初期治療は、過去においては、併用化学療法であった。最も普通に使用されている薬剤には：シクロホスファミド、ビンクリスチン、プレドニゾン（ＣＶＰ）；又は、シクロホスファミド、アドリアミシン、ビンクリスチン、プレドニゾン（ＣＨＯＰ）がある。患者の約７０％乃至８０％が、この初期の化学療法に反応し、寛解期間は２−３年のオーダーで終わる。最終的には、ほとんどの患者が再発する。抗−ＣＤ２０抗体である、リツキシマブの発見と臨床的使用は、反応率と生存率を有意に改善した。ほとんどの患者の現在の治療標準は、リツキシマブ＋ＣＨＯＰ（Ｒ−ＣＨＯＰ）又はリツキシマブ＋ＣＶＰ（Ｒ−ＣＶＰ）である。アルキル化剤と併用して、ＮＨＬの初期治療にインターフェロンを用いることが認められているが、米国における使用は制限されていた。リツキシマブ治療は、いくつかのタイプのＮＨＬに効果があることが示されており、現在は、無痛（濾胞性リンパ腫）と悪性ＮＨＬ（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫）の両方の第一線治療として認められている。しかしながら、抗−ＣＤ２０モノクロナール抗体（ｍＡｂ）には、一次耐性（再発した無痛患者では５０％の応答）、獲得性耐性（再治療時に５０％の応答率）、まれな完全応答（再発した者の完全応答率２％）、及び再発の継続パターンといった、大きな限界がある。最終的には、多くのＢ細胞がＣＤ２０を発現せず、したがって、ほとんどのＢ細胞疾患は、抗ＣＤ２０抗体治療では治療できない。

ＮＨＬに加えて、Ｂ細胞の調節異常に起因するいくつかのタイプの白血病がある。慢性リンパ球性白血病（「ＣＬＬ」ともいう）は、Ｂリンパ球の異常蓄積によって生じるある種の成人白血病である。ＣＬＬでは、悪性リンパ球が正常かつ成熟して見えるが、これらのリンパ球は、感染に対して有効に戦うことができない。ＣＬＬは、成人白血病の最も普通の型のものである。男性はＣＬＬの発現が女性の２倍である。しかしながら、重要なリスク要因は年齢である。新たな例ケースの７５％異常が、５０歳を超えた患者に診断されている。毎年１０，０００例以上が診断されており、死亡率は１年で約５，０００人である（米国癌学会、２００６；及びＳＥＥＲＣａｎｃｅｒＳｔａｔｉｓｔｉｃｓＲｅｖｉｅｗ）。ＣＬＬは不治の病であるが、多くの場合進行が遅い。ＣＬＬにかかった多くの人は、何年も正常で活動的な生活を送っている。発現がゆっくりであるため、初期のＣＬＬへの治療介入は、生存期間や生活の質を改善しないと考えられているため、初期のＣＬＬでは通常治療が行われない。代わりに、時間をかけて症状を観察する。初期のＣＬＬの治療は、正しい診断と、疾病の進行具合によって異なる。ＣＬＬ治療に使用される薬は数多くある。ＦＣＲ（フルダラビン、シクロホスファミド、及びリツキシマブ）と、ＢＲ（ベンダムスチンとリツキシマブ）といった、併用化学療法レジメは、新規に診断されたＣＬＬと、再発したＣＬＬの両方に有効である。同種骨髄（幹細胞）移植は、リスクがあるため、ＣＬＬの最初に使う治療として稀に使用される。

もう一つのタイプの白血病は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）であり、急性リンパ性白血病として知られている。ＡＬＬは、骨髄中の悪性で未成熟な白血球（リンパ芽球ともいう）の過剰産生と連続増殖が特徴である。「急性」とは、分化していない未成熟な状態の循環リンパ球（芽球）を意味し、治療を受けなければ、数週間乃至数か月の平均余命で疾病が急激に進行することを意味する。ＡＬＬは、発生のピークが４乃至５歳であり、小児期に良く見られる。１２歳乃至１６歳の小児は、他よりも容易に死亡する。現在、小児ＡＬＬの少なくとも８０％が治療可能であると考えられている。４，０００例を下回る診断が毎年なされ、死亡率は年間１，５００例である（米国癌学会、２００６；及びＳＥＥＲＣａｎｃｅｒＳｔａｔｉｓｔｉｃｓＲｅｖｉｅｗ）。

ヒトＣＤ１９分子は、限定するものではないが、プレＢ細胞、初期発生段階のＢ細胞（すなわち、未成熟Ｂ細胞）、プラズマ細胞に最終分化する間の成熟Ｂ細胞、及び悪性Ｂ細胞を含む、ヒトＢ細胞の表面に発現した構造的に異なる細胞表面レセプタである。ＣＤ１９は、ほとんどのプレＢ急性リンパ芽球白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、前リンパ球性白血病、ヘアリー細胞白血病、通常の急性リンパ球性白血病、及びいくつかのヌル細胞型急性リンパ芽球白血病によって、発現する。（Ｎａｄｌｅｒｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３１：２４４−２５０（１９８３），Ｌｏｋｅｎｅｔａｌ，Ｂｌｏｏｄ，７０：１３１６−１３２４（１９８７），Ｕｃｋｕｎｅｔａｌ，Ｂｌｏｏｄ，７１：１３−２９（１９８８），Ａｎｄｅｒｓｏｎｅｔａｌ，１９８４，Ｂｌｏｏｄ，６３：１４２４−１４３３（１９８４），Ｓｃｈｅｕｅｒｍａｎｎ，Ｌｅｕｋ．Ｌｙｍｐｈｏｍａ，１８：３８５−３９７（１９９５））。プラズマ細胞でのＣＤ１９の発現は、更に、多発性骨髄腫、形質細胞腫、ヴァルデンストレーム腫瘍などの、分化したＢ細胞腫瘍に発現することを示唆している（Ｇｒｏｓｓｂａｒｄｅｔａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ，１０２：５０９−１５（１９９８）；Ｔｒｅｏｎｅｔａｌ，Ｓｅｍｉｎ．Ｏｎｃｏｌ，３０：２４８−５２（２００３））。

したがって、ＣＤ１９抗原は、非ホジキンリンパ腫（ここに記載した各サブタイプを含む）、慢性リンパ球性白血病、及び／又は急性リンパ芽球白血病、の治療における免疫治療ターゲットである。

ＣＤ１９治療を以下に示す。ＣＤ３−ζ及び４−ＢＢ共刺激ドメインを両方含む抗−ＣＤ１９キメラ抗原レセプタ（ＣＡＲ）を発現するＴ細胞を、進行性ＣＬＬを罹患している３人の患者に投与した。Ｋａｌｏｓｅｔａｌ．，ＴｃｅｌｌｗｉｔｈＣｈｉｍｅｒｉｃＡｎｉｇｅｎＲｅｃｅｐｔｏｒｓＨａｖｅＰｏｔｅｎｔＡｎｔｉｔｕｍｏｒＥｆｆｅｃｔｓａｎｄＣａｎＥｓｔａｂｌｉｓｈＭｅｍｏｒｙｉｎＰａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＡｄｖａｎｃｅｄＬｅｕｋｅｍｉａ，ＳｃｉｅｎｃｅＴｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ，ｖｏｌ．３，ｎｏ．９５（１０Ａｕｇｕｓｔ２０１１）。この文献は、引用により全体が組み込まれている。Ｓａｄｅｌａｉｎｅｔａｌ．，Ｔｈｅｐｒｏｍｉｓｅａｎｄｐｏｔｅｎｔｉａｌｐｉｔｆａｌｌｓｏｆｃｈｉｍｅｒｉｃａｎｔｉｇｅｎｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，ＣｕｒｒｅｎｔＯｐｉｎｉｏｎｉｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，ｖｏｌ．２１，ｎｏ．２，２Ａｐｒｉｌ２００９．この文献も、引用により全体が組み込まれており、抗−ＣＤ１９キメラ抗原レセプタ（ＣＡＲｓ）について記載している。しかしながら、Ｋａｌｏｓｅｔａｌ．もＳａｄｅｌａｉｎｅｔａｌ．も、ここに例示されているような、ベンダムスチンと併用したＣＤ１９に特異的な抗体については述べていない。

非ホジキンリンパ腫の治療に用いる治療薬としてのベンダムスチンは、引用により全体が組み込まれているＢｒｅｍｅｒｅｔａｌ．，Ｈｉｇｈｒａｔｅｓｏｆｌｏｎｇｌａｓｔｉｎｇｒｅｍｉｓｓｉｏｎａｆｔｅｒ５−ｄａｙｂｅｎｄａｍｕｓｔｉｎｅｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙｃｙｃｌｅｓｉｎｐｒｅ−ｔｒｅａｔｅｄｌｏｗ−ｇｒａｄｅｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓｌｙｍｐｈｏｍａｓ，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌＯｎｃｏｌｏｇｙ，ＳｐｒｉｎｇｅｒＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｂｅｒｌｉｎ，ＤＥ，ｖｏｌ．１２８．ｎｏ．１１，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ２００２、及び引用により全体が組み込まれているＷＯ２００６０６５３９２号に記載されている。しかし、どちらの文献も、ここに例示されているようなベンダムスチンと併用したＣＤ１９に特異的な抗体については示唆していない。

非特異的Ｂ細胞リンパ腫におけるＣＤ１９の使用は、全体が引用により組み込まれているＷＯ２００７０７６９５０号（ＵＳ２００７１５４４７３号）で、潜在的な併用パートナーの長いリストに大まかに乗っているベンダムスチンと共に、考察されている。しかし、いずれも、ここに例示されている抗体については教示しておらず、また、ここに例示しているような、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病及び／又は急性リンパ芽球性白血病の治療における併用の相乗効果は示唆していない。

ＣＬＬ、ＮＨＬ及びＡＬＬにおけるＣＤ１９の使用は、全体が引用により組み込まれているＳｃｈｅｕｅｒｍａｎｎｅｔａｌ．，ＣＤ１９ＡｎｔｉｇｅｎｉｎＬｅｕｋｅｍｉａａｎｄＬｙｍｐｈｏｍａＤｉａｇｎｏｓｉｓａｎｄＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，ＬｅｕｋｅｍｉａａｎｄＬｙｍｐｈｏｍａ，Ｖｏｌ．１８，３８５−３９７（１９９５）に記載されているが、ここに例示されている併用は示唆していない。

ＣＤ１９に特異的な更なる抗体は、ＷＯ２００５０１２４９３号（ＵＳ７１０９３０４号）、ＷＯ２０１００５３７１６号（ＵＳ１２／２６６，９９９号）（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）；ＷＯ２００７００２２２３号（ＵＳ８０９７７０３号）（Ｍｅｄａｒｅｘ）；ＷＯ２００８０２２１５２号（１２／３７７，２５１号）及びＷＯ２００８１５０４９４号（Ｘｅｎｃｏｒ）、ＷＯ２００８０１３０５６号（ＵＳ１１／８５２，１０６号）（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）；ＷＯ２００７０７６９５０号（ＵＳ１１／６４８，５０５号）（ＭｅｒｃｋＰａｔｅｎｔＧｍｂＨ）；ＷＯ２００９／０５２４３１号（ＵＳ１２／２５３，８９５号）（ＳｅａｔｔｌｅＧｅｎｅｔｉｃｓ）；及びＷＯ２０１００９５０９３１号（１２／７１０，４４２号）（ＧｌｅｎｍａｒｋＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）に記載されている。これらは、すべて全体が引用として組み込まれている。

ＣＤ１９に特異的な抗体とその他の薬剤の併用は、ＷＯ２０１０１５１３４１号（ＵＳ１３／３７７，５１４号）（ＴｈｅＦｅｉｎｓｔｅｉｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅ）；ＵＳ５６８６０７２号（ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｘａｓ）、及びＷＯ２００２０２２２１２号（ＰＣＴ／ＵＳ０１／２９０２６号）（ＩＤＥＣＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）に記載されている。これらは、すべて全体が引用により組み込まれている。

抗ガン剤の発見と開発における近年の進歩にもかかわらず、ＣＤ１９発現腫瘍を含む多くの形の癌の予後が良くないことは明らかである。したがって、これらの形の癌を治療するための改善された方法が求められている。

単独でも、組合せでも、これらの従来技術は、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、及び／又は、急性リンパ芽球性白血病の治療における、例示した抗体とベンダムスチンとを併用する相乗効果はなんら示唆していない。

一の態様では、本開示は、ＣＤ１９に特異的な抗体とナイトロゲン・マスタードの相乗的組合せに関する。このような組合せは、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、及び／又は、急性リンパ芽球性白血病、などのＢ細胞悪性腫瘍の治療に有益である。

インビトロ及びインビボでは、所定の化合物又は化合物の組合せがヒトにおいてどのように挙動するかをモデルで表示できると考えられる。更に、化合物がインビトロ又はインビボで組み合わされたときに、その組合せは相加効果にすぎないと予測される。驚いたことに、発明者らは、ＣＤ１９に特異的な特定の抗体とベンダムスチンの組合せが、この抗体とベンダムスチン単独の場合に比べて、慢性Ｂ細胞白血病細胞株（ＭＥＣ−１）を殺す相乗レベルの特定の細胞を媒介することを発見した。このインビボモデルは、この組合せがヒトの慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）でどのように作用するかを示している。更に、また、予想外に、発明者らは、ＣＤ１９に特異的な特定の抗体とベンダムスチンの組合せが、抗体とベンダムスチンを単独で使用した場合に比べて、バーキッドリンパ腫と重症複合免疫不全（ＳＣＩＤ）のマウスモデルの両方において、腫瘍の成長を阻害し、相乗的に平均生存期間を延ばすとともに、寿命を延ばすことを発見した。これらのモデルは、この組合せがヒトの非ホジキンリンパ種でどのように作用するかを示している。まとめると、例示した抗ＣＤ１９抗体とベンダムスチンの組合せが、ＮＨＬとＣＬＬに関連するモデルにおいて相乗的に作用した。ＮＨＬとＣＬＬは双方とも、Ｂ細胞に関連する疾患であり、ＣＤ１９は、Ｂ細胞に良く発現するため、例示した組合せは、同じ作用機序を有しており、例えば、ＡＬＬなどのその他のＢ細胞関連疾患の治療にも相乗的に作用する。

したがって、例示したＣＤ１９に特異的な抗体とベンダムスチンの組合せは、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、及び／又は、急性リンパ芽球白血病におけるヒトの治療に有効である。更に、本明細書に例示されているＣＤ１９に特異的な抗体は、すでに臨床試験に入っており、このような組合せをヒトで確認することができる。

ベンダムスチンとその他のナイトロゲン・マスタードの作用機序は、これらがＤＮＡ塩基間鎖間架橋（ＩＣＬｓ）を形成するアルキル化剤であり、したがって、複製と転写といった基本プロセスをブロックすることが似ているので、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、及び／又は、急性リンパ芽球白血病にかかっているヒトを、例示した抗ＣＤ１９抗体と、ベンダムスチン以外のナイトロゲン・マスタードとの組合せで治療する場合にも、相乗効果がみられると考えられている。

例示した抗ＣＤ１９抗体とその他の抗ＣＤ１９抗体は、ＣＤ１９に結合するため、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、及び／又は、急性リンパ芽球白血病にかかっているヒトを、いずれかの抗ＣＤ１９抗体と、例えばベンダムスチンなどのナイトロゲン・マスタードとを併用して治療する際にも、相乗効果がみられると考えられている。

例示した抗ＣＤ１９抗体がＣＤ１９の特定のエピトープに結合するので、例示した抗体と交差競合する又は例示した抗体と同じエピトープに結合する抗体は、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、及び／又は、急性リンパ芽球白血病にかかっているヒトを、例えばベンダムスチンなどのナイトロゲン・マスタードと組合せて使用して治療する際にも、相乗的に作用すると考えられている。

本開示の一態様は、相乗的組合せを含み、ＣＤ１９に特異的な抗体が配列ＳＹＶＭＨ（配列番号：１）のＨＣＤＲ１領域と、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号：２）とのＨＣＤＲ２領域と、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号：３）のＨＣＤＲ３領域と、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号：４）のＬＣＤＲ１領域と、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域と、配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域と、ベンダムスチンを含む。好ましい態様では、この組合せが、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、及び／又は、急性リンパ芽球白血病の治療に使用される。

図は、ＭＯＲ００２０８とベンダムスチンの単用時及び併用時のＭＥＣ−１細胞上の細胞毒性効果を示す。図２は、ＭＥＣ−１細胞中でのＭＯＲ００２０８とベンダムスチンの組合せのＡＤＣＣ容量反応曲線を示す。図３は、ＭＯＲ００２０８の可変ドメインのアミノ酸配列を示す。図４は、ＭＯＲ００２０８のＦｃ領域のアミノ酸配列を示す。図５は、表２の標準化した特異的殺データを示す。図６は、実施例３に述べるＳＣＩＤマウスにおけるヒトＲａｍｏｓバーキットＢ細胞リンパ腫生存モデルの結果を示す。この図は、表６に示すデータを表しているが、治療に関連する死亡は除外されている。図７は、実施例２に記載されている、ＳＣＩＤマウス中の皮下（ＳＣ）埋め込み型ヒトＲａｍｏｓバーキットＢ細胞リンパ腫腫瘍成長モデルの結果の統計的分析を示す。図８は、実施例２に記載されている、ＳＣＩＤマウス中の皮下（ＳＣ）埋め込み型ヒトＲａｍｏｓバーキットＢ細胞リンパ腫腫瘍成長モデルの結果の結果を示す。図９は、実施例２に記載されている、ＳＣＩＤマウス中の皮下（ＳＣ）埋め込み型ヒトＲａｍｏｓバーキットＢ細胞リンパ腫腫瘍成長モデルの結果の結果を示す。この図では、ＢＥＮ投与量は、１３ｍｇ／ｋｇである。図１０は、実施例２に記載されている、ＳＣＩＤマウス中の皮下（ＳＣ）埋め込み型ヒトＲａｍｏｓバーキットＢ細胞リンパ腫腫瘍成長モデルの結果の結果を示す。この図では、ＢＥＮ投与量は、１６ｍｇ／ｋｇである。

相乗効果（ｓｙｎｅｒｇｙ）、相乗作用（ｓｙｎｅｒｇｉｓｍ）、相乗的（ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ）は、組合せの期待された相加効果以上であることを意味する。組合せの相乗効果（ｓｙｎｅｒｇｙ）、相乗作用（ｓｙｎｅｒｇｉｓｍ）、相乗的（ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ）は、ここでは、Ｃｈｏｕｅｔａｌ．，Ｃｌａｒｋｅｅｔａｌ．及び／又は、Ｗｅｂｂｅｔａｌ．の方法によって決定する。Ｔｉｎ−ＣｈａｏＣｈｏｕ，ＴｈｅｏｒｅｔｉｃａｌＢａｓｉｓ，ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＤｅｓｉｇｎ，ａｎｄＣｏｍｐｕｔｅｒｉｚｅｄＳｉｍｕｌａｔｉｏｎｏｆＳｙｎｅｒｇｉｓｍａｎｄＡｎｔａｇｏｎｉｓｍｉｎＤｒｕｇＣｏｍｂｉｎａｔｉｏｎＳｔｕｄｉｅｓ，ＰｈａｒｍａｃｏｌＲｅｖ５８：６２１−６８１（２００６）参照。これは、引用によって全体が組み込まれている。また、Ｃｌａｒｋｅｅｔａｌ．，Ｉｓｓｕｅｓｉｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｄｅｓｉｇｎａｎｄｅｎｄｐｏｉｎｔａｎａｌｙｓｉｓｉｎｔｈｅｓｔｕｄｙｏｆｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｃｙｔｏｔｏｘｉｃａｇｅｎｔｓｉｎｖｉｖｏｉｎｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒａｎｄｏｔｈｅｒｍｏｄｅｌｓ，ＢｒｅａｓｔＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＴｒｅａｔｍｅｎｔ４６：２５５−２７８（１９９７）参照。これは、引用によって全体が組み込まれている。また、Ｗｅｂｂ，Ｊ．Ｌ．（１９６３）ＥｎｚｙｍｅａｎｄＭｅｔａｂｌｉｃＩｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ参照。これは、引用によって全体が組み込まれている。

用語「抗体」は、モノクロナール抗体を意味し、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥなどのアイソタイプを含む。ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合によって結合した二つの同じ重鎖と二つの同じ軽鎖からなる。各重鎖及び軽鎖は、定常領域と可変領域を含む。各可変領域は、「相補性決定領域（ＣＤＲｓ）」、又は、「超可変領域」と呼ばれる３つのセグメントを含む。これらの領域は、光源のエピトープとの結合を担っている。これらの領域は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３と呼ばれ、Ｎ末端から順に番号が付けられている。ＣＤＲｓの他に最も高度に保存された部分は、「骨格領域」と呼ばれる。「抗体フラグメント」は、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’Ｆ（ａｂ’）２断片、又は、少なくとも一方の可変重鎖又は可変軽鎖を含むその他の断片を意味し、各々がＣＤＲｓ及び骨格領域を含む。

「ナイトロゲン・マスタード」は、化学療法として使用される、非特異的ＤＮＡアルキル化剤である。アルキル化剤は、例えば、イミダゾール環の７番窒素原子のＤＮＡのグアニン基に、アルキル基を加えるなど、核酸塩基にアルキル基（ＣｎＨ２ｎ＋１）を加える。アルキル化工程によって、鎖間架橋（ＩＣＬｓ）が形成される。これらのＩＣＬｓは、複製と転写といった基礎代謝工程をブロックするため、細胞毒性が高い。ナイトロゲン・マスタードは、シクロホスファミド、クロラムブシル、ウラムスチン、イホスファミド、メルファラン、及びベンダムスチンを含む。

シクロホスファミドは、エンドキサン、シトキサン、ネオサール、プロサイトックス、及びレビミューンとして市販されており、シトホスファンとしても知られている。シクロホスファミド、又はシクロホスファミドを含む組合せは、リンパ腫、白血病、およびある種の固形腫瘍の治療に使用される。シクロホスファミドは、以下の化学構造を有する。

クロラムブシルは、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ社のロイケランとして市販されている。これは、主に慢性リンパ球性白血病の治療に使用される。クロラムブシルは、以下の化学構造を有する。

ウラムスチンは、非ホジキンリンパ腫の治療に使用される。ウラムスチンは、以下の化学構造を有する。

イホスファミドは、ＭｉｔｏｘａｎａとＩｆｅｘとして販売されている。イホスファミドは、以下の化学構造を有する。

メルファランは、Ａｌｋｅｒａｎとして販売されている。メルファランは、以下の化学構造を有する。

ベンダムスチンは、Ｒｉｂｏｍｕｓｔｉｎ（登録商標）、及びＴｒｅａｎｄａ（登録商標）の名前で販売されており、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、無痛性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、及びその他のリンパ腫の治療用の、ＭｕｎｄｉｐｈａｒｍａＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎＬｉｍｉｔｅｄ（ＡｓｔｅｌｌａｓＰｈａｒｍａＧｍｂＨのライセンス）によるＳＤＸ−１０５、及びＣｅｐｈａｌｏｎとしても知られている。ベンダムスチンは、以下の化学構造を有する。

「ＢＥＮ」はベンダムスチンを意味する。

「ＶＨ」は、抗体又は抗体断片の免疫グロブリン重鎖可変領域を意味する。「ＶＬ」は、抗体又は抗体断片の免疫グロブリン軽鎖可変領域を意味する。

用語「ＣＤ１９」は、ＣＤ１９として知られているタンパク質を意味し、以下と同義であるＢ４，Ｂ−リンパ球抗原ＣＤ１９，Ｂ−リンパ球表面抗原Ｂ４，ＣＶＩＤ３，分化抗原ＣＤ１９，ＭＧＣ１２８０２，及びＴ−細胞表面抗原Ｌｅｕ−１２。

ヒトＣＤ１９は、以下のアミノ酸配列を有する：

「ＭＯＲ００２０８は、抗ＣＤ１９抗体である。可変ドメインのアミノ酸配列が図３に示されている。ＭＯＲ００２０８の重鎖及び軽鎖Ｆｃ領域のアミノ酸配列が図４に示されている。「ＭＯＲ００２０８」と「ＸｍＡｂ５５７４」は、図３及び図４に示す抗体と同義に用いられている。ＭＯＲ００２０８抗体は、米国特許出願第１２／３７７，２５１号に記載されており、これは引用によって全体が組み込まれている。

ＣＤ１９に特異的な更なる抗体は、引用によって全体が組み込まれている米国特許第７，１０９，３０４号（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）；引用によって全体が組み込まれている米国特許出願第１１／９１７，７５０号（Ｍｅｄａｒｅｘ）；引用によって全体が組み込まれている米国特許出願第１１／８５２，１０６号（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）；引用によって全体が組み込まれている米国特許出願第１１／６４８，５０５号（ＭｅｒｃｋＰａｔｅｎｔＧｍｂＨ）；引用によって全体が組み込まれている米国特許第７，９６８，６８７号（ＳｅａｔｔｌｅＧｅｎｅｔｉｃｓ）；引用によって全体が組み込まれている米国特許出願第１２／７１０，４４２号（ＧｌｅｎｍａｒｋＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；に記載されている。

「Ｆｃ領域」は、抗体の定常領域を意味し、ヒトでは、ＩｇＧ１，２，３，４サブクラスあるいはその他である。ヒトＦｃ領域の配列は、ＩＭＧＴ，ヒトＩＧＨＣ−ＲＥＧＩＯＮｓ，ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／ＩＭＧＴｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ／Ｐｒｏｔｅｉｎｓ／ｐｒｏｔｅｉｎ／ｈｕｍａｎ／ＩＧＨ／ＩＧＨＣ／Ｈｕ＿ＩＧＨＣａｌｌｇｅｎｅｓ，ｈｔｍｌ（２０１１年５月１６日検索）で入手可能である。

「ＲｅｆｍＡｂ３３」は、抗体であり、そのアミノ酸配列は以下のとおりである：
Ｆｃ領域を含む重鎖：

Ｆｃ領域を含む軽鎖

ＲｅｆｍＡｂ３３はＲＳＶに特異的であり、ＭＯＲ００２０８と同じＦｃ領域を共有しているため、イソタイプ対照として使用される。

「組合せ」は、例えば、抗体とベンダムスチンの化合物など、一以上のアイテムを意味する。

本開示は、また、組合せ、この組合せを含む薬剤及び医薬組成物に関する。例えば、ＣＤ１９に特異的な抗体とベンダムスチンといった、本発明の相乗的組合せの二つの成分は、一緒に、同時に、あるいは別々に投与してもよい。一緒に投与した場合、二つの成分は、一つの医薬組成物中で一緒に調整することができる。この組成物は、薬学的に許容可能なキャリア又は賦形剤を含んでいてもよい。代替的に、二つの成分は、異なる医薬組成物中で整してもよい。この場合、二つの成分は、同時にあるいは連続して投与することができる。一実施例では、ベンダムスチンを、例えば、ＭＯＲ００２０８などのＣＤ１９に特異的な抗体の投与の前に、及び／又は、この投与と別に投与している。

医薬組成物は、例えばヒトの治療的使用のための抗体などの活性成分を含む。医薬組成物は、許容可能なキャリアまたは賦形剤を含んでいてもよい。

「投与した」又は「投与」は、限定するものではないが、例えば、静脈投与、筋肉投与、皮内投与、皮下投与ルートといった注入可能な形で、あるいは、例えば、鼻スプレィ、吸入用エアロゾルといった粘膜ルートで、又は摂取可能な溶液、カプセル、又は錠剤による送達を含む。

化合物又は組合せの「治療的有効量」は、所定の疾病又は疾患及びその合併症を治癒する、緩和する、あるいは部分的に停止させるのに十分な量を意味する。特定の治療目的に有効な量は、疾病又は損傷の重症度、並びに、対象の重量及び全身状態による。適宜の投与量は、日常の実験を使用して、マトリックス値を構築し、このマトリックスの様々なポイントを試験することで、決定する。これらはすべて訓練を受けた医師又は臨床科学者の当業者レベルにある。

本明細書の「ＣＤＲｓ」は、Ｃｈｏｔｈｉａｅｔａｌ．又はＫａｂａｔｅｔａｌ．によって定義されている。ＣｈｏｔｈｉａＣ，ＬｅｓｋＡＭ．（１９８７）Ｃａｎｏｎｉｃａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓｆｏｒｔｈｅｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅｒｅｇｉｏｎｓｏｆｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ．ＪＭｏｌＢｉｏｌ．，１９６（４）：９０１−１７参照。これは、引用により全体が組み込まれている。ＫａｂａｔＥ．Ａ，ＷｕＴ．Ｔ．，ＰｅｒｒｙＨ．Ｍ．，ＧｏｔｔｅｓｍａｎＫ．Ｓ．ａｎｄＦｏｅｌｌｅｒＣ．（１９９１）．ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ．５ｔｈｅｄｉｔ．，ＮＩＨＰｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｎｏ．９１−３２４２，ＵＳＤｅｐｔ．ｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ参照。これは、引用により全体が組み込まれている。

「交差競合」は、標準競合結合アッセイにおけるＣＤ１９に対するその他の抗体又は結合剤の結合を防ぐ、抗体又はその他の結合剤の能力を意味する。この能力又は、抗体又はその他の結合剤が、別の抗体又は結合分子のＣＤ１９に対する結合を妨害できる範囲、したがって、本発明に係る交差競合といえるかどうかは、標準的な競合結合アッセイを用いて決定できる。適当なアッセイの一つでは、Ｂｉａｃｏｒｅ技術（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ３０００器具（Ｂｉａｃｏｒｅ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）による）を使用しており、表面プラズモン共鳴技術を使用した相互作用の範囲を測定することができる。交差競合を測定するもう一つのアッセイは、ＥＬＩＳＡベースの方法を使用している。交差競合に基づく「エピトープビニング」の高スループット工程が、ＷＯ２００３／４８７３１号に記載されている。

「エピトープ」は、抗体に特異的に結合できる、あるいは、分子と相互作用できる、あらゆるタンパク質決定因子を含む。エピトープの決定因子は、一般的に、アミノ酸、炭水化物、又は糖側鎖といった分子の化学的活性表面グループからなり、特定の三次元構造特性、並びに、特定の電荷特性を有する。エピトープは、リニアであっても、立体配座であってもよい。「リニアエピトープ」は、タンパク質と、その相互作用分子（抗体など）間のすべての作用ポイントが、そのタンパク質の一時アミノ酸配列に沿って線形に生じる（連続的）。「立体配座エピトープ」は、互いに三次元構造を成し絵いるアミノ酸が不連続的であるエピトープを意味する。立体配座エピトープでは、相互作用するポイントが、互いに離れているタンパク質上のアミノ酸残基の上で生じる。

「〜と同じエピトープに結合」とは、抗体又はその他の結合剤が、ＣＤ１９に結合して、例示した抗体と同じエピトープを有する能力を意味する。ＣＤ１９に対する例示した抗体又はその他の結合剤のエピトープは、標準的なエピトープマッピング技術を用いて決定できる。エピトープマッピング技術は、この分野では良く知られており、ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６（ＧｌｅｎｎＥ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．，１９９６）ＨｕｍａｎａＰｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮｅｗＪｅｒｓｅｙ中のエピトープマッピングプロトコルを含む。例えば、リニアエピトープは、例えば、多数のペプチドを個相支持体上で同時に合成するなどによって、決定できる。このペプチドは、タンパク質分子の一部に相当し、支持体に付いたままで抗体を有するペプチドと反応する。このような技術は、この分野では公知であり、例えば、米国特許第４，７０８，８７１号；Ｇｅｙｓｅｎｅｔａｌ．，（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８：３９９８−４００２；Ｇｅｙｓｅｎｅｔａｌ．，（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８２：７８−１８２；Ｇｅｙｓｅｎｅｔａｌ．，（１９８６）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：７０９−７１５などに記載されている。同様に、立体配座エピトープは、例えば、水素／デューテリウム交換、Ｘ線結晶学、及び二次元核磁気共鳴などによる、アミノ酸の空間構造を決定することによって、すでに同定されている。例えば、ＥｐｉｔｏｐｅＭａｐｐｉｎｇＰｒｏｔｏｃｏｌｓ，ｓｕｐｒａ．参照。タンパク質の抗原性領域も、例えば、ＯｘｆｏｒｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＧｒｏｕｐから入手可能なＯｍｉｇａｖｅｒｓｉｏｎ１．０ソフトウエアプログラムを用いて計算したものなど、標準的な抗原性及び水治療法プロットを用いて同定されている。このコンピュータプログラムは、抗原性プロファイルの決定にＨｏｐｐ／Ｗｏｏｄｓｍｅｔｈｏｄ，Ｈｏｐｐｅｔａｌ．，（１９８１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＳｃｉＵＳＡ７８：３８２４−３８２８を用いるとともに、水治療法プロットには、Ｋｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅｔｅｃｈｎｉｑｕｅ，Ｋｙｔｅｅｌａｌ．，（１９８２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７：１０５−１３２を用いている。

実施例
本開示の一態様は、非ホジキンリンパ球種、慢性リンパ球性白血病、及び／又は急性リンパ芽球性白血病の治療に用いるＣＤ１９に特異的な抗体とナイトロゲンマスタードの組合せを含む。実施例において、この組合せは相乗的である。

ここで、例示した抗ＣＤ１９抗体とベンダムスチンの組合せは、ＮＨＬ及びＣＬＬにかかっているインビトロ及びインビボモデルにおいて、相乗的に作用する。ＮＨＬもＣＬＬも、Ｂ−細胞関連の疾患であり、ＣＤ１９がＢ細胞に多く発現しているため、例示した組合せは、同じ作用機序を持ち、例えば、ＡＬＬなどのその他のＢ細胞関連の疾患の治療において相乗的に作用する。したがって、例示したＣＤ１９に特異的な抗体とベンダムスチンの組合せは、非ホジキンリンパ球種、慢性リンパ球性白血病、急性リンパ芽球性白血病のヒトの治療に有効である。

ベンダムスチンとその他のナイトロゲンマスタードの作用機序が同じであるので、これらがＤＮＡ塩基間の鎖間架橋（ＩＣＬｓ）を形成する薬剤をアルキル化して、複製や転写といった基本的工程をブロックするため、非ホジキンリンパ球種、慢性リンパ球性白血病、急性リンパ芽球性白血病にかかっているヒトを、例示した抗ＣＤ１９と、例えば、シクロホスファミド、クロラムブチル、ウラムスチン、イホスファミド、メルファランなど、ベンダムスチン以外のナイトロゲンマスタードとの組合せを用いて治療する際に相乗性がみられると考えられている。

例示した抗ＣＤ１９抗体とその他の抗ＣＤ１９抗体は、ＣＤ１９に結合するので、非ホジキンリンパ球種、慢性リンパ球性白血病、及び／又は、急性リンパ芽球性白血病を、抗ＣＤ１９抗体とナイトロゲンマスタードの組合せで治療する際に、相乗性がみられると考えられており、この場合、抗ＣＤ１９抗体は、例えば、米国特許出願第１２／７７，２５１号（Ｘｅｎｃｏｒ）；ＷＯ２００５０１２４９３号、ＷＯ２０１００５３７１６号（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）；ＷＯ２００７００２２２３ (Ｍｅｄａｒｅｘ）；ＷＯ２００８０２２１５２号(Ｘｅｎｃｏｒ)；ＷＯ２００８０３１０５６号(Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ)；ＷＯ２００７０７６９５０号（ＭｅｒｃｋＰａｔｅｎｔＧｍｂＨ）；ＷＯ２００９／０５２４３１号（ＳｅａｔｔｌｅＧｅｎｅｔｉｃｓ）；及びＷＯ２０１００９５０３１号（ＧｌｅｎｍａｒｋＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）に記載されている。これらは、すべて、引用により全体が組み込まれている。

実施例では、ＣＤ１９に特異的な抗体が、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号：１）のＨＣＤＲ１領域と、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号：２）のＨＣＤＲ２領域と、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号：３）のＨＣＤＲ３領域と、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号：４）のＬＣＤＲ１領域と、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域と、配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ(配列番号：６)のＬＣＤＲ３領域とを有する抗体と、交差競合する抗体を含む。

実施例では、ＣＤ１９に特異的な抗体が、配列ＳＹＶＭＨ(配列番号：１)のＨＣＤＲ１領域と、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号：２)のＨＣＤＲ２領域と、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号：３）のＨＣＤＲ３領域と、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号：４)のＬＣＤＲ１領域と、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域と、配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域とを有する抗体と同じエピトープに結合する抗体を含む。

実施例では、ＣＤ１９に特異的な抗体が、配列ＳＹＶＭＨ(配列番号：１)のＨＣＤＲ１領域と、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号：２)のＨＣＤＲ２領域と、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号：３)のＨＣＤＲ３領域と、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号：４）のＬＣＤＲ１領域と、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域と、配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域を含む。

実施例では、ＣＤ１９に特異的な抗体が、配列

の可変重鎖と、配列

の可変軽鎖を含む。

実施例では、ＣＤ１９に特異的な抗体が、配列

の重鎖定常領域を含む。

実施例では、ＣＤ１９に特異的な抗体が、配列

の軽鎖定常領域を含む。

実施例では、ナイトロゲンマスタードがベンダムスチンである。

実施例では、前記組合せの成分である、ＣＤ１９に特異的な抗体とベンダムスチンを、別々に投与している。一実施例では、ベンダムスチンを、ＣＤ１９に特異的な抗体を投与する前に投与する。

実施例では、前記組合せが、医薬組成物である。いくつかの実施例では、この組成物が許容可能なキャリアを含む。いくつかの実施例では、この組合せを有効投与量で投与する。

別の態様では、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号：１)のＨＣＤＲ１領域と、配列ＮＰＹＮＤＧ(配列番号：２)のＨＣＤＲ２領域と、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ(配列番号：３)のＨＣＤＲ３領域と、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ(配列番号：４)のＬＣＤＲ１領域と、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域と、配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域と、ベンダムスチンを含むＣＤ１９に特異的な抗体の相乗的組合せが、ベンダムスチン単独の場合より、単離したヒトＰＢＭＣｓの存在下におけるＡＤＣＣによるＭＥＣ−１細胞の死滅を少なくとも２倍、３倍、４倍、あるいは５倍効果的に仲介することができる。

本開示の態様は、非ホジキンリンパ球種、慢性リンパ球性白血病、及び／又は、急性リンパ芽球性白血病の治療に用いる、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号：１）のＨＣＤＲ１領域と、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号：２）のＨＣＤＲ２領域と、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号：３）のＨＣＤＲ３領域と、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号：４)のＬＣＤＲ１領域と、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域と、配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域とベンダムスチンを含むＣＤ１９に特異的な抗体の相乗的組合せを含む。実施例では、非ホジキンリンパ球種は、濾胞性リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、粘膜関連リンパ組織、辺縁帯、びまん性大細胞型ＢＢ細胞、バーキット細胞、外套細胞からなる群から選択される。

別の態様は、治療が必要な固体における非ホジキンリンパ球種、慢性リンパ球性白血病、及び／又は、急性リンパ芽球性白血病の治療方法であり、この方法は、ＣＤ１９に特異的な抗体とナイトロゲンマスタードを投与するステップを具える。この方法の実施例では、ＣＤ１９に特異的な抗体が、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号：１）のＨＣＤＲ１領域と、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号：２）のＨＣＤＲ２領域と、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号：３)のＨＣＤＲ３領域と、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号：４)のＬＣＤＲ１領域と、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域と、配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域を含む。この方法の実施例では、抗体が、例示したＣＤ１９に特異的な抗体を含む。この方法の実施例では、ナイトロゲンマスタードがベンダムスチンである。

実施例
実施例１：ＭＯＲ００２０８とベンダムスチンを単独で、及び組合せて使用したＭＥＣ−１細胞増殖の抑制

材料
ＭＥＣ−１細胞：慢性Ｂ細胞白血病細胞株ＤＳＭＺ＃ＡＣＣ４９７；細胞培地：Ｉｓｃｏｖｅ’ｓＭｏｄｉｆｉｅｄＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓＭｅｄｉｕｍ（ＩＭＤＭ）ｗｉｔｈＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ＣａｔＮｏ．：３１９８０−０４８，２０％ＦＣＳ；ＰＢＭＣｓ：１０％のＦＣＳを加えたＲＰＭＩ１６４０，ｗｉｔｈｓｔａｂｉｌｅＧｌｕｔａｍｉｎｅ，ＰＡＮＢｉｏｔｅｃｈＧｍｂＨ，ＣａｔＮｏ．：Ｐ０４−１３５００；ＢｉｏｃｈｒｏｍｅＡＧＣＡＴＮｏ．：Ｌ６１１５ＬＯＴＮｏ．：１０５０Ｔ；ベンダムスチン：ＭｕｎｄｉｐｈａｒｍａＬＯＴＮｏ．：８８０１８；ＦＣＳ：ＰＡＮＣＡＴＮｏ．：３３０２−Ｐ２８２４０３ＬＯＴＮｏ．：Ｐ２８２４０３；及び、ＭＯＲ００２０８として同じＦｃ領域を持つＲｅｆｍＡｂ３３（ａｎｔｉ−ＲＳＶ）。

方法
ＭＯＲ００２０８とベンダムスチン単独で、及び組合せて細胞毒性をＭＥＣ−１細胞中で試験した。ＢＥＮは、アルキル化剤であり、したがって、ＭＥＣ−１細胞中の直接細胞毒性を介して機能する。ＭＯＲ００２０８は、ＣＤ１９をターゲットとしており、追加的に、ＭＥＣ−１を死滅させる際にＡＤＣＣを介して機能する。以下の群について、ＭＥＣ−１細胞死滅を測定した：１００μｇ／ｍｌのＢＥＮ；６．６ｐｍのＭＯＲ００２０８及び６．６ｐｍのＭＯＲ００２０８と１００μｇ／ｍｌのＢＥＮの組合せ。以下を、対照として使用した：ＲｅｆｍＡｂ３３又はＰＢＭＣｓ単独で。ＢＥＮグループとＭＯＲ００２０８＋ＢＥＮ組合せグループの両方において、ＡＤＣＣアッセイ測定に先立ってＢＥＮで４８時間、ＭＥＣ−１細胞をインキュベートした。ＭＥＣ−１細胞を、１ｍｇ／ｍｌのカルセインＡＭで染色し、次いで計数して、２×１０^５／ｍｌに調整した。ＰＢＭＣｓを計数して、６×１０^６／ｍｌに調整した。細胞死滅アッセイを以下の通り行った：９６ウエルプレートを使用して、ＭＥＣ−１細胞の１００μｌ細胞懸濁液をウエルに加え、各ウエルにＰＢＭＣｓの１００μｌ細胞懸濁液を加えて、Ｅ：Ｔ比非を３０：１とした。培地中で、抗体を１μｇ／ｍｌに希釈した。細胞を遠心分離して再懸濁させた。ターゲット：エフェクタ細胞ペレットに、１００μｌの抗体溶液又は対照溶液を加えた。混合物を３７℃のＣＯ_２インキュベータ中で４時間インキュベートした。細胞死滅測定を以下の通り行った：インキュベートした細胞溶液（〜１００μｌ）をＦＡＣＳ管に移して、各管に２００μｌのＦＡＣＳバッファ（ＤＰＢＳ＋３％ＦＣＳ）と０．５μｌのＰｌストック溶液を加えた。ＦＡＣＳ−Ｃａｌｉｂｕｒを用いた。死滅したＭＥＣ−１細胞を、ヨウ化物で染色した。表１と図１は、生のデータを示す。

これらの値は、死滅細胞のパーセンテージを示す。各実験は、異なるドナーからのＰＢＭＣを表す。各実験で使用した対象は、ＲｅｆＭａｂ３３である。

表２は、特定の死滅用に正規化した表１の生データと、相乗性の決定に使用したＣｈｏｕ計算結果を示す。

表２に示す値は、以下の通り計算する：１）表１に示す生データ（死滅細胞％）から、バックグラウンド（対照）を差し引いて、各治療グループについての特定の死滅の値を、ＭＯＲ００２０８＋ＢＥＮの組合せを１に設定して、正規化する。表２の平均値を図５に示す。ＭＯＲ００２０８＋ＢＥＮの組合せのＣｈｏｕファクタ計算に用いる、例示的ＡＤＣＣ投与応答曲線を、図２に示す。

Ｃｈｏｕインデックス（ＣＩ）計算を行って、ＭＯＲ００２０８とＢＥＮ単独の場合と、例示した抗ＣＤ１９抗体とベンダムスチンの組合せの相乗性を決定した。このような計算は、全体が引用により組み込まれているＴｉｎｇ−ＣｈａｏＣｈｏｕ，ＴｈｅｏｒｅｔｉｃａｌＢａｓｉｓ，ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＤｅｓｉｇｎ，ａｎｄＣｏｍｐｕｔｅｒｉｚｅｄＳｉｍｕｌａｔｉｏｎｏｆＳｙｎｅｒｇｉｓｍａｎｄＡｎｔａｇｏｎｉｓｍｉｎＤｒｕｇＣｏｍｂｉｎａｔｉｏｎＳｔｕｄｉｅｓ，ＰｈａｒｍａｃｏｌＲｅｖ．５８：６２１−６８１（２００６）と、全体が引用により組み込まれているＣｈｏｕＴＣ，ＴａｌａｌａｙＰ，Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｄｏｓｅ−ｅｆｆｅｃｔｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ：ｔｈｅｃｏｍｂｉｎｅｄｅｆｆｅｃｔｓｏｆｍｕｌｔｉｐｌｅｄｒｕｇｓｏｒｅｎｚｙｍｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．ＡｄｖＥｎｚｙｍｅＲｅｇｕｌ２２：２７−５５に記載されている。Ｃｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙの方法は、ＣＩ−ｉｓｏｂｏｌ法を用いておこなわれる。

インヒビタ（薬剤など）の効果についての半数効果方程式モデルは、Ｆ_ａ／Ｆ_ｕ＝（Ｄ／Ｄ５０）＾ｍ、ここでＤが当量、Ｆ_ａ及びＦ_ｕは、当量Ｄ（Ｆ_ａ＋Ｆ_ｕ＝１）によって影響されたまた影響されていないシステムの一部であり；Ｄ５０は、半数効果（例えば、ＩＣ５０、ＥＤ５０、ＬＤ５０）を生み出す当量である。直線回帰計算にＥｘｃｅｌＦｉｔのソフトウエアを用いて、パラメータｍ及びＤ５０を推定した。

ＭＥＣ−１細胞へのこの組合せの効果は、上述した通り細胞死滅のパーセンテージで測定される。処理を行った細胞株の細胞死滅パーセンテージの、対象に露出させた細胞株の細胞死滅パーセンテージに対する比率である画分Ｆ_ｕを決定する

Ｆ_ｕ＝細胞死パーセンテージ（処理細胞株）／細胞死パーセンテージ（非処理細胞株）

細胞株の細胞死パーセンテージは、半数効果方程式の定数Ｄ５０であり、これは上述の直線回帰により推測できる。

ＣＩ−ｉｓｏｂｏｌ法
ＣＩ−ｉｓｏｂｏｌ法は、薬剤間の相乗性の定量評価を行う。組合せインデックス（ＣＩ）は、単一又は組合せた薬剤治療の染料効果データから推測する。１より小さいＣＩの値は、相乗性を表しており、ＣＩ＝１は、相加効果を表しており、ＣＩ＞１は、拮抗を表している。薬剤の相互作用（相乗性又は拮抗性）が大きいほど、ＣＩの値は１から遠くなる。

形式的には、組合せ薬剤治療の組合せインデックス（ＣＩ）は、
ＣＩ＝Ｄ_１／Ｄ_Ｘ１＋Ｄ_２／Ｄ_Ｘ２
と規定されている。

ここで、Ｄ_１及びＤ_２は、それぞれ組合せの薬剤１と薬剤２の当量であり；Ｄ_Ｘ１とＤ_Ｘ２は、組合せの効果と同じ効果を与えるであろう薬剤１と薬剤２のみでの処置の当量である。この当量Ｄ_Ｘ１とＤ_Ｘ２は、単一の薬剤処置の染料効果データから推測する必要がある。本質的に、半量効果方程式は、各薬剤のデータに合致している。ある薬剤の半量効果方程式から、効果（すなわち、Ｆａ、Ｆｕ）を生み出すのに必要な当量（すなわち、Ｄ）を推測することができる。加法線からポイントが遠くなるにつれて、１とＣＩとの差が大きくなり、（相乗又は拮抗）効果が強くなる。

結果
表２に示すように、Ｃｈｏｕインデックス値は、ＭＯＲ００２０８及びベンダムスチン単独の場合に比べて、ＭＥＣ−１細胞の特定の死滅に関するＭＯＲ００２０８とベンダムスチンの組合せの明白な相乗性を示している。この結論は、３つの実験の各々のＣｈｏｕ計算値である０．２、０．７及び０．７５に基づいており、この値は、平均０．６である。ここで、ＣＩ＜１は、相乗性を示している。したがって、ＭＯＲ００２０８とベンダムスチンの組合せが、ヒトの非ホジキンリンパ球種（ＮＨＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、及び／又は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）の治療において相乗的に挙動する。上記Ｃｈｏｕ計算の結果を確認するために、表２の正規化したデータの統計的優位性を、ボンフェローニ多重比較法を用いて評価した。Ｊａｍｅｓ，ｅｔａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｍｅｄｉｃａｔｅｄＢ−ｃｅｌｌｄｅｐｌｅｔｉｏｎｂｅｆｏｒｅａｄｏｐｔｉｖｅｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙｗｉｔｈＴｃｅｌｌｓｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇＣＤ２０−ｓｐｅｃｉｆｉｃｃｈｉｍｅｒｉｃＴ−ｃｅｌｌｒｅｃｅｐｔｏｒｓｆａｃｉｌｉｔａｔｅｓｅｒａｄｉｃａｔｉｏｎｏｆｌｅｕｋｅｍｉａｉｎｉｍｍｕｎｏｃｏｍｐｅｔｅｎｔｍｉｃｅ，Ｂｌｏｏｄ，１１４（２７）：５４５４−６３（Ｅｐｕｂ２００９Ｏｃｔ３０）参照。これは、引用により全体が組み込まれている。結果を表３に示す。

結果
表３に示すように、ボンフェローニ多重比較法は、ＢＥＮ＋ＭＯＲ００２０８の併用処置が、ＢＥＮとＭＯＲ００２０８の単用処置より、ＭＥＣ−１を特異的死滅において、統計的により有効であることを示している。

実施例２：
皮下移植（ＳＣ）したヒトのＲａｍｏｓＢｕｒｋｉｔｔ’ｓＢ細胞リンパ腫腫瘍成長モデルにおけるＭＯＲ００２０８とＢＥＮ単用と併用

材料
ＲＡＭＯＳヒトＢｕｒｋｉｔｔ’ｓリンパ腫細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−１５９６、ｌｏｔ＃３９５３１３８）；ビークル対照：１５０ｍＭＮａＣｌ、２５ｍｇ／ｍＬマンニトール、ｐＨ５．５−６．０；（０．０１ＭＮａｏＨで調整）。Ｒｅｆ＿ｍＡｂ＿３３＿ＩｇＧ＿Ｘｅｎ（ＰＢＳ中１０ｍｇ／ｍＬ、Ｒｅｆ＿ｍＡｂ＿３３という）。６週齢、メス、Ｃ．Ｂ−１７ＳＣＩＤマウス（ＣＢ１７／ｌｃｒ−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ／ＩｃｒｌｃｏＣｒｌ）を、ＣｈａｒｌｅｓＲｉｖｅｒＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）から購入し、実験に先立って９日間、実験室で順応させた。

方法
ＳＣＩＤマウスに、ＲＡＭＯＳ細胞（〜５×１０^６細胞／マウス）を皮下移植した。マウスの腫瘍のサイズが約１５０ｍｍ^３になるか、稙菌後１４日以上たったときに、各グループが比較的同じサイズの大きさの腫瘍を持つように、マウスをグループ分けした。１５日目に処置を開始した。治療計画を表４に示す。研究期間は６０日であった。

技術的エラーのため、１８日目にはＭＯＲ００２０８を投与しなかった。

ＭＯＲ００２０８と、ベンダムスチンを、体重１０ｇあたり０．１ｍＬ投与した。ＭＯＲ００２０８とビークル対照／Ｒｅｆ＿ｍＡｂ＿３３は、濃度０．６／１．０ｍｇ／ｍＬ、ベンダムスチンは、濃度１．３ｍｇ／ｍＬ、及び１．６ｍｇ／ｍＬであった。

読み出しは、１）サイズが４０００ｍｇに到達するまでの平均日数、ここで、ログランク検定を用いて統計的分析を行った、２）３４日目の腫瘍サイズ、ここで、１要因分散分析と、ボンフェローニのポストホック試験を用いて統計的分析行った。（生データは示さず）。腫瘍の重量は、式（Ｉ×ｗ２）／２を用いて計算した。ここで、Ｉとｗは、より大きい及びより小さい寸法を意味する。各測定で回収した結果を図７乃至１０に示す。組合せ治療は、以下に示す同所生存モデルに示される明白な相乗性に比べて、この皮下モデルでは、それぞれの単独治療より有意に優れていなかった。これは、このモデルにおける無効なＭＯＲ００２０８投与計画に関連すると考えられる。しかしながら、以下に述べる同所生存モデルは、ヒトにおけるＣＬＬ、ＮＨＬ、及びＡＬＬの治療で、組合せ治療が以下に良好に作用するかについて、より予測できると考えられる。同所モデルは、上述のサブカット、固相腫瘍モデルに比べて、血管系の関与を含めて、多病巣疾患の性質により似ているためである。

実施例３
ＳＣＩＤマウス、生存モデルにおけるヒト非ホジキンＲＡＭＯＳ腫瘍マウスでの、ＭＯＲ００２０８とベンダムスチン単独及び組合せ

材料
シクロホスファミド（Ｂａｘｔｅｒ，Ｌｏｔ．Ｎｏ．１Ａ５４８Ｃ）；ビークル対照：０．９％塩化ナトリウム、２５ｍｇ／ｍｌマンニトール、ｐＨ６．５−６．８（０．０１ＭＮａＯＨで調整）；ＳＣＩＤマウス（ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＡｄｅｌａｉｄｅ，ＷａｉｔｅＣａｍｐｕｓ，Ｕｒｒｂａｒａｉｅ，ＳＡ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ，ＳｔｒａｉｎＣ．Ｂ．−１７−ｌｇｈ−１^ｂ−Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄ）；ＲＡＭＯＳヒトバーキットリンパ腫細胞（ＡＴＣＣｎｕｍｂｅｒＣＲＬ−１５９６）；Ｒｅｆ＿ｍＡｂ＿３３＿ｌｇＧ＿Ｘｅｎ（ＰＢＳ中１０ｍｇ／ｍＬ、以下、Ｒｅｆ＿ｍＡｂ＿３３という)；ベンダムスチン（Ｍｕｎｄｉｐｈａｒｍａ，ＬｏｔＮｏ．８３８８９）。

方法
ＲＡＭＯＳ細胞に稙菌を行う前（２日前及び１日前）に、ＳＣＩＤマウスにシクロホスファミド（７５ｍｇ／ｋｇ、１日２回、腹腔内投与）で前処理を行った。稙菌を行う日に、マウスを１０匹ずつ７群に分け、尾静脈に静脈内注射によって、１×１０^６ＲＡＭＯＳ細胞を稙菌した。各群に対する投与計画を表５に示し、３日目に実行した。研究期間は６０日であった。

表６及び図６に生存データを示す。

表６に示す生データから、平均生存日数と、生存期間の平均増加を計算した。死亡に関連するすべての処置は、計算から除外した。結果を表７に示す。

ａは、ビークル対照／Ｒｅｆ＿ｍＡｂ＿３３（グループ１０）（ｐ＜０．００１）、ベンダムスチン１３ｍｇ／ｋｇ（グループ２）（ｐ＜０．００１）、ベンダムスチン／ＭＯＲ００２０８１６／３ｍｇ／ｋｇ（グループ６）（ｐ＜０．００１）に対する有意差
ｂは、ビークル対照／Ｒｅｆ＿ｍＡｂ＿３３（グループ１０）（ｐ＜０．０５）及びベンダムスチン／ＭＯＲ００２０８１３／３ｍｇ／ｋｇ（グループ５）（ｐ＜０．００１）に対する有意差
ｃは、ベンダムスチン／ＭＯＲ００２０８１６／３ｍｇ／ｋｇ（グループ６）（ｐ＜０．００１）に対する有意差
ｄは、ビークル対照／Ｒｅｆ＿ｍＡｂ＿３３（グループ１０）（ｐ＜０．００１）に対する有意差
§は、対ビークル対照／Ｒｅｆ＿ｍＡｂ＿３３
＊は、ＩＬＳＣｏｍｂ（５６．８６％）＞ＩＬＳＭＯＲ００２０８３ｍｇ／ｋｇ＋ＩＬＳＢｅｎｄａｍｕｓｔｉｎｅ１３ｍｇ／ｋｇ（２５．５％＋（−５．８８）％＝１９．６２％）のときの、単剤治療群に対する相乗性／相乗作用
＊＊は、ＩＬＳＣｏｍｂ（５６．８６％）＞ＩＬＳＭＯＲ００２０８３ｍｇ／ｋｇ＋ＩＬＳＢｅｎｄａｍｕｓｔｉｎｅ１６ｍｇ／ｋｇ（２５．５％＋（−５．８８）％＝１９．６２％）のときの、単剤治療群に対する相乗性／相乗作用

生存期間増加（ＩＬＳ）の中央値％を以下の通り計算した：
生存期間増加の中央値％＝（Ｓｕｒｖｉｖａｌ_{Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ}−ＭｅａｎＳｕｒｖｉｖａｌ _{Ｃｏｎｒｏｌ}）／ＭｅａｎＳｕｒｖｉｖａｌ _{Ｃｏｎｔｒｏｌ}＊１００
生存期間は、稙菌後の日数で測定した。

組合せ効果の分類
ＭＯＲ００２０８／ベンダムスチン組合せ治療（コンボ）効果の分類を、組合せのＩＬＳを、各単独治療の追加ＩＬＳと比較することによって評価した：
相乗性／相乗作用＊：ＩＬＳＣｏｍｂｏ＞ＩＬＳＭＯＲ００２０８３ｍｇ／ｋｇ＋ＩＬＳベンダムスチン
相乗効果は、単独治療の少なくとも一方が効果がない場合に増強効果として分類する。
相加性：ＩＬＳＣｏｍｂｏ＝ＩＬＳＭＯＲ００２０８３ｍｇ／ｋｇ＋ＩＬＳベンダムスチン
拮抗性：ＩＬＳＣｏｍｂｏ＜ＩＬＳＭＯＲ００２０８３ｍｇ／ｋｇ＋ＩＬＳベンダムスチン

相乗性を同定する目的のデータの分析に加えて、以下の統計的分析も行った。統計的分析は、中央値を用いて行った。予期せずに死亡した、又は被験物質治療群における研究１７日前に処分した動物は、生存率分析の計算から除いた。これらの動物の死亡／処分は、これらがビークル対照動物の最初の死亡の前に生じているため、疾患の進行というよりは、成分の毒性の結果であると考えられた。生存曲線は、ＫａｐｌａｎａｎｄＭｅｉｅｒの推定量を用いて作成し、ログランク（Ｍａｎｔｅｌ−Ｃｏｘ）検定を用いて比較した。有意な差異が見つかった場合は、全多重対比較（Ｈｏｌｍ−ＳｉｄａｋＴｅｓｔ）を行った。比較はすべてのグループ間で行った。更に、以下のグループの比較を、各被験物質について別の図でまとめた：ビークル対照／Ｒｅｆ＿ｍＡｂ（グループ１０）対ベンザムスチングループ（グループ２、３及び４）と、ビークル対照／Ｒｅｆ＿ｍＡｂ（グループ１０）対組合せグループ（グループ５及び６）、または、ＭＯＲ００２０８単独治療グループ（グループ１）。０．０５より小さいｐ値は、有意であると考えた。結果を表８−１０に示す。

結果
表７−１０及び図６に示すように、ＭＯＲ００２０８とベンダムスチンの組合せは相乗的に挙動し、ＭＯＲ００２０８とベンダムスチン単独の場合に比べて、非ホジキンＲＡＭＯＳ同所性腫瘍の生存モデルにおいて相互に有意であった。

明細書、特定の実施例、及びデータは、例示的実施例を表しているが、説明が行われており、本発明を制限するものではない、と理解するべきである。本発明の範囲内での様々な変更及び変形は、ここに含まれる議論、開示及びデータから当業者には明らかであり、したがって本発明の一部であると考えられる。

Claims

ＣＤ１９に特異的な抗体の相乗的組合せにおいて、非ホジキンリンパ球種、慢性リンパ球性白血病、及び／又は、急性リンパ芽球性白血病の治療に用いる、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号：１)のＨＣＤＲ１領域と、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号：２)のＨＣＤＲ２領域と、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号：３)のＨＣＤＲ３領域と、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号：４)のＬＣＤＲ１領域と、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号：５)のＬＣＤＲ２領域と、配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域と、ベンダムスチンを含む抗体と交差競合する抗体を含むことを特徴とする組合せ。
請求項１に記載の組合せにおいて、前記抗体が、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号：１）のＨＣＤＲ１領域と、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号：２）のＨＣＤＲ２領域と、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号：３）のＨＣＤＲ３領域と、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号：４)のＬＣＤＲ１領域と、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域と、配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域を含む抗体と同じエピトープに結合する抗体を含むことを特徴とする組合せ。
請求項１又は２に記載の組合せにおいて、前記抗体が、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号：１）のＨＣＤＲ１領域と、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号：２）のＨＣＤＲ２領域と、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号：３）のＨＣＤＲ３領域と、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号：４）のＬＣＤＲ１領域と、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域と、配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域を含むことを特徴とする組合せ。
請求項１乃至３のいずれか１項に記載の組合せにおいて、前記抗体が、配列

の可変重鎖と、
配列

の可変軽鎖を含むことを特徴とする組合せ。
請求項１乃至４のいずれか１項に記載の組合せにおいて、前記抗体が、配列

の重鎖定常領域を含むことを特徴とする組合せ。
請求項１乃至５のいずれか１項に記載の組合せにおいて、ＣＤ１９に特異的な前記抗体とベンダムスチンが別個に投与されることを特徴とする組合せ。
請求項１乃至６のいずれか１項に記載の組合せにおいて、前記ベンダムスチンが、前記ＣＤ１９に特異的な抗体の投与の前に投与されることを特徴とする組合せ。
請求項１乃至７のいずれか１項に記載の組合せにおいて、当該組合せが、単離したＰＢＭＣｓの存在下でＡＤＣＣによるＭＥＣ−１細胞の死滅を、ベンダムスチン単独の場合より少なくとも２倍の効率で死滅できることを特徴とする組合せ。
非ホジキンリンパ球種の治療に用いる請求項１乃至８のいずれか１項に記載の組合せにおいて、この非ホジキンリンパ球腫が、濾胞性リンパ腫、小リンパ球腫リンパ腫、粘膜関連リンパ組織、辺縁帯、びまん性大細胞型Ｂ細胞、バーキット、及び外套細胞からなる群から選択されることを特徴とする組合せ。