JP2014513537A - グルコース代謝拮抗物質及びセレンを含む組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
本明細書で使用するとき、「the」、「a」及び「an」を含む冠詞は、特許請求の範囲又は明細書において使用される場合、特許請求されるか又は記載されるものの1以上を意味するものとして理解される。
本発明の各実施形態は、セレンと、2−デオキシ−D−グルコース、5−チオ−D−グルコース、3−O−メチルグルコース、1,5−アンヒドロ−D−グルシトール、2,5−アンヒドロ−D−グルシトール、2,5−アンヒドロ−D−マンニトール、マンノヘプツロース、並びにこれらの混合物及び組み合わせからなる群から選択されるグルコース代謝拮抗成分とを含む組成物に関する。理論によって限定されることは意図するところではないが、これらの成分は、グルコース代謝拮抗物質として受け入れられているものである。別の実施形態では、各成分は、アボカド等の植物体、又はアルファルファ、イチジク、サクラソウ等のマンノヘプツロースの他の豊富な供給源の一成分として、記載される組成物中に存在し得る。
本明細書において開示されるグルコース代謝拮抗成分としては、2−デオキシ−D−グルコース、5−チオ−D−グルコース、3−O−メチルグルコース、1,5−アンヒドロ−D−グルシトール、2,5−アンヒドロ−D−グルシトール、及び2,5−アンヒドロ−D−マンニトール等のアンヒドロ糖類、マンノヘプツロース、並びにこれらの混合物及び組み合わせが含まれる。マンノヘプツロースは、具体的なグルコース代謝拮抗物質の1つである。1つの実施形態では、マンノヘプツロースは、アボカド、アボカド抽出物、アボカド粉末、アボカド濃縮物、又は他のマンノヘプツロースの豊富な供給源等の植物体の1成分として、記載される組成物中に存在し得る。マンノヘプツロースの豊富な供給源の非限定的な例としては、アルファルファ、イチジク、又はサクラソウが挙げられる。植物体には、果実、種子(若しくは核)、枝、葉、若しくは関連する植物の他の任意の部分、又はそれらの組み合わせが含まれ得る。
上記の通り、本発明の実施形態の組成物は、セレンを含み得る。1つの実施形態では、セレンは、添加セレンであっても内因性セレンであってもよい。1つの実施形態では、組成物は、添加セレン及び内因性セレンの両方を含み得る。
したがって、本発明の実施形態は、本明細書に記載の通り、コンパニオンアニマルによって摂取されることを意図し、かつグルコース代謝拮抗物質及びセレンを含む組成物を目的とする。組成物は、必要な食餌要求成分を供給することを目的とした食品ばかりでなく、ペットスナック(例えばビスケット)又は他の補助食品も含む。必要に応じて、本明細書の組成物は、乾燥組成物(例えばキブル)、半湿潤組成物、湿潤組成物、又はこれらの任意の混合物であってよい。これに代えるか又はこれに加えて、組成物は、グレービー、飲み水、ヨーグルト、粉末、懸濁液、チュー、ペットスナック(例えばビスケット)又は他の任意の投与形態等の補助食品である。
新鮮なアボカド(ルラ(Lula)種)を、フレッシュキング社(Fresh King Incorporated)(フロリダ州、ホームステッド)より入手した。アボカドを手で割って、種を取り出して捨てた。残った皮及び果肉を、Hobart業務用食品加工装置(製品番号11−10410235)で12と1/4篩を使用してすりつぶした。次いで、すりつぶしたアボカドをEdwards凍結乾燥機(Super Modulyoモデル、英国、サセックス州、クローリー)に移した。凍結乾燥機は、最初の24時間は−20℃に、次の24時間は−5℃に、最後の72時間は5℃に設定した。この粉末を凍結乾燥機から取り出し、Straubグラインディングミル(モデル4E、ペンシルベニア州、フィラデルフィア)を使用して粉末にすりつぶした。このアボカド粉末を分析したところ、粉末の約10.35重量%のマンノヘプツロースを含有していた。アボカド中のマンノヘプツロースの量は、特定の品種及び熟度の状態によって異なる点は注意を要する。
高濃度のマンノヘプツロースを含むアボカド抽出物を、必要に応じて行われる以下のプロセスに従って調製し、本発明の実施形態の組成物において使用する。
表1は、下記の成分を概ね示される量で有し、押出成形を含む当該技術分野では標準的なプロセスによって調製し得る、イヌ及び/又はネコに毎日の食餌として与えられ得る2種類のキブル組成物を示す。
**ビタミン類及びミネラル類としては以下が含まれ得る。すなわち、ビタミンE、β−カロチン、ビタミンA、アスコルビン酸、パントテン酸カルシウム、ビオチン、ビタミンB12、ビタミンB1、ナイアシン、ビタミンB2、ビタミンB6、ビタミンD3、ビタミンD2、葉酸、塩化コリン、イノシトール、炭酸カルシウム、リン酸二カルシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウム、酸化亜鉛、硫酸マンガン、硫酸銅、酸化マンガン、硫酸第一鉄、ヨウ化カリウム、炭酸コバルト。
***微量成分としては以下が含まれ得る。すなわち、魚油、亜麻仁、亜麻粉、セルロース、香味料、酸化防止剤、タウリン、酵母、カルニチン、コンドロイチン硫酸、グルコサミン、ルテイン、ローズマリーエキス。
80頭(n=80)のラブラドルレトリーバーを年齢、性別、及び同腹子についてランダム化することができ、下記に述べるように、Eukanuba Senior Large Breedに似た完全かつ栄養的にバランスのとれたコントロール食餌、又はマンノヘプツロース及びセレンを含む以外はコントロール食餌と同じである実験食餌を与えた。イヌは、2つの試験群に分けることができる。
マンノヘプツロース等のグルコース代謝拮抗物質は、以下の通り、ペットフード又は補助食品中で測定することができる。
約0.1g(食餌)/成分を15mLのプラスチックの遠心管に量りとる。
10mLの水を管に添加し、5分間振盪させる。
管を最高速度(2440g)で5分間遠心分離する。
上清の一部を0.2μmのナイロンの遠心フィルタに分注し、最高速度(14000g)で5分間回転させる。これで、サンプルを注入する準備が整う。
10mgの各炭水化物を1Lの水に溶解させることによって、10μg/mLの炭水化物標準を調製する。
100μLの10μg/mL溶液を900μLの水に溶解させることによって、1μg/mLの炭水化物標準を調製する。
10μLの10μg/mL溶液を990μLの水に溶解させることによって、0.1μg/mLの炭水化物標準を調製する。
IC条件:溶離剤洗浄:Ionpac ATC−3(Dionex P/N 059661)、Boratetrap(Dionex P/N 047078)。カラム:CarboPac PA20(Dionex P/N 060142)、2mm Aminotrap precolumn(Dionex P/N 046122)。カラム温度:30℃
注入体積:10μLフルループ
1.Shaw,P.E.;Wilson,C.W.;Knight,R.J.J.Agric.Food Chem.1980,28,379〜382。
2.Dionex CarboPac20文書番号031844−01。
A.食餌のセレン含量は、以下の通りAOAC Official Method 996.16(G):Selenium in Feeds and Premixes:Fluorometry method 2000によって測定することができる。
a.蛍光光度計−励起375nm及び発光525nm可能な場合、蛍光光度計を1スケールユニット=1ngに調整する。
b.ドラフト−HClO2の取り扱いに好適。
c.消化系−30×30cmのホットプレート上にセットされた80個の穴(直径22mm)のある21×26×7.4cmのアルミニウムブロック(試験及び標準溶液を同時に加熱することができる場合、任意の市販品)。あるいは、30mLのフラスコ又は直壁管を保持することができるマイクロKjeldahl消化系を用いてもよい。
d.消化容器−消化系用ねじ蓋付(テフロンで裏貼りされた)20×150mmの試験管;マイクロKjeldahlフラスコ、30mL、又は直壁管が許容可能である。
e.抽出器機械化回転ユニット−60〜70rpm/分で維持。管のラック(10本の管が4列)の混合物を収容することができる手持ち式が好適である。
f.ピペッター−5mL(+/−1%)を送達。
g.H2O浴−1)60°+/−2°を維持及び2)H2Oを沸騰。
h.ボルテックスミキサー。
i.容積測定用フラスコ−100及び1000mL。
j.三角フラスコ−250〜1000mL及び2L。
k.濾紙−定性的紙、11μm保持。
全ての試薬は、少なくとも分析等級でなければならない。溶液及び希釈液の調製のためにガラスの脱イオン水蒸留器を用いる。
a.シクロヘキサン。
b.塩酸溶液−0.1M。8.3mLの濃HClを1Lの容積測定用フラスコにピペットで入れ、水で容積を希釈する。任意の便利な容積にするのに適切な量を用いてよい。
c.硝酸−70%。
d.過塩素酸−70%。
e.2,3−ジアミノナフタレン(DAN)試薬−1.0gのDAN粉末(純度97%)を量りとり、2Lの三角フラスコに移す。0.1MのHCl 500mを添加し、水浴で15分間かけて60℃に加温する。撹拌して、粉末の溶解を補助する。0.1MのHClで1Lに希釈する。溶液を3〜5分間40〜50mLのシクロヘキサンで抽出し、シクロヘキサン層を廃棄する。抽出を3回繰り返す。DNA試薬を、予め0.1MのHClで濡らしておいた濾紙で濾過する。DAN試薬は、冷蔵庫で光から保護した場合、少なくとも2週間安定である。
f.(エチレンジニトリロ)四酢酸(EDTA)標準溶液。(1)EDTA標準原液−0.1M。37.2gの(エチレンジニトリロ)四酢酸、二ナトリウム塩を、1Lの容積測定用フラスコに入れ、水で容積を希釈する。(2)EDTA希釈標準溶液−0.01M。分析する管の数に応じて、15mL/管になるように十分な容積のEDTA標準原液(1+9)を水で希釈する。
g.亜セレン酸塩標準溶液。(1)亜セレン酸塩標準原液−0.4μg Se/mL。100mLの亜セレン酸塩標準溶液(1% HNO3中1000μg Se/mL;市販の原子吸光標準溶液が好適である)を1Lの容積測定用フラスコにピペットで入れ、0.1MのHClで容積を希釈する。この溶液から、40mLを100mLの容積測定用フラスコにピペットで入れ、0.1MのHClで容積を希釈する。(注記:あるいは、1Lの容積測定用フラスコ内にて0.400gのSeをHNO3に溶解させ、0.1MのHClで容積を希釈し;この溶液10.0mLを容積測定用フラスコ内にて0.1MのHClで1Lに希釈する。最後に、この溶液10mLを、容積測定用フラスコ内にて0.1MのHClで100mLに希釈し、直接用いる)。(2)亜セレン酸塩較正標準溶液。0.00(試薬ブランク)、0.200、0.500、1.00、及び1.50mLの亜セレン酸塩標準原液を別々の消化容器にピペットで入れ、0.00、0.08、0.200、0.400、及び0.600μg Se/容器を得る。
h.亜セレン酸ナトリウム標準溶液−0.4μg Se/mL。0.1915gの無水Na2SeO4を1Lの容積測定用フラスコに移し、水で容積を希釈する。よくかき混ぜる。この溶液から、5.00mLを1Lの容積測定用フラスコにピペットで入れ、水で容積を希釈する。
試験溶液の各セットを用いて消化を開始し、2つの試薬ブランク、及び少なくとも4つの亜セレン酸塩標準溶液、C(g)(2)、(例えば、0.080、0.200、0.400、及び0.600μg Se/容器);並びに0.500mLのセレン酸ナトリウム溶液を含有する1本の管、C(h)、(0.2μg Se/容器)の試験を実施して、還元工程の妥当性をチェックする、これは、セレン酸塩がDANとは反応しないためである。95〜105%の回収率が予測される。その他、全セットを再分析する。
a.予消化−約10gのプレミックスを量りとるか、又は250〜1000mLの三角フラスコに入れ、10mg単位で重量を記録する(Wa)。(発泡の問題を最小限に抑えることができる最も大きなフラスコを用いる)。75m:HNO3及び沸騰石(又は幾つかのガラスビーズ)をゆっくりと慎重に添加する。(注意:大量の石灰岩を含むマトリクス又は容易に酸化し得る材料は、HNO3を添加したときに発泡を引き起こす場合がある)。可能な限り多くの材料が溶液中に存在し、一酸化窒素ガスが正常レベルに戻るまで(通常、15分間が適切である)ホットプレート上で加熱する。溶液を冷却し、Se含量が0.04〜0.60μg/mLになるように水で定量的に希釈する。希釈した予消化溶液の最終容積をmL単位で記録する(V1)。
b.消化−以下の通り進める:
1.A.で得られた予消化溶液を十分に混合して、全ての未溶解材料を懸濁させる。1.00mLのアリコートを試験管(消化容器)にピペットで入れる。予消化溶液のSe含量が低い(<0.02μg/mL)場合、最高10mLのアリコートを用いてよい。0.01mL単位で容積を記録する(Va)。
2.ブランク、亜セレン酸較正標準溶液、及びNa2SeO4標準溶液を含む各試験管に、多孔質の沸騰石を添加する。ガラスビーズを用いる場合、2〜3個のビーズを添加する。
3.4mLのHNO3及び1mLのHClO4[又は5mLのHClO4−HNO3混合物(1+4、v/v)]を各試験管に添加する。
4.試験管をアルミニウム加熱ブロック内に置く。温度をゆっくり210℃まで上昇させる(約2時間)。消化完了時、試験管内でHClO4の白色のガスが見えるはずである。白色のガス状態に達した後、更に15分間加熱する。
5.加熱ブロックから試験管を取り出す。試験管を室温まで冷却し、ブロックを110〜150℃まで加熱する。
c.還元−0.5mLの濃HClをb5の試験管に添加する。試験管を再度加熱ブロックに入れ、30分間加熱する。全期間中、確実に温度を110〜150℃で維持する。
d.誘導体化及び定量化:
1.試験管を加熱ブロックから取り出し、冷却する。この工程で、試験管が室温であることが重要である。(注記−手順は、この工程まで及びこの工程を含む任意の時点で中断してよい)。
2.15mLのEDTA希釈標準溶液C(f)(2)及び2mLのDAN試薬C(e)を試験管に添加する。(注記−両溶液は同時に添加してもよいが、使用又は沈殿が形成される直前10分間を超えて一緒に混合してはならない)。各試験管をボルテックスミキサーでよく混合し、少なくとも2回試験管の底部をボルテックスする。
3.試験管のラックを60℃の水浴に入れ、30分間維持する。水のレベルが反応混合物のレベルよりも確実に上になるようにする。
4.ラックを水浴から取り出し、流れる水道水で5分間試験管を冷却する。
5.5mLのシクロヘキサンを各試験管に添加する。テフロンで裏貼りされた試験管に蓋をし、回転抽出ユニット(60〜70rpm/分)で約5〜10分間抽出する。(注記−抽出は、抽出が最大になる期間、試験管のラックを振盪(反転)させることによって用手的に実施することができる)。
6.シクロヘキサン層を蛍光光度計のキュベットに移す。確実に、溶液が光路においてキュベットの壁に付着し得る任意の懸濁水滴を含まないようにする。
7.375nmで蛍光光度計の波長を励起し、525nmで発光するように設定する。シクロヘキサンで蛍光光度計をゼロにし、ブランクを読み取って、DAN試薬の量を判断する。読み取り値が2〜3蛍光単位を超える場合、DAN試薬を再度シクロヘキサンで抽出しなければならない。ブランクに対して蛍光光度計をゼロにする。
8.亜セレン酸塩較正標準溶液の蛍光(F)を測定し、検量線の回帰式を計算する。試験溶液中のSe濃度の計算において勾配(k)を用いる。利用可能な設備に応じて、これは、ビルトイン較正手順によって自動で行ってもよい。(注記−蛍光応答は、C(g)(2)に記載した濃度の亜セレン酸塩較正標準溶液を用いたとき、線形である)。最高2μg Se/容器を含有する標準は、線形関係を維持し得る。)
9.試験溶液の蛍光を測定する。
用いる蛍光光度計のサポートソフトウェアに応じて、較正データ、希釈係数、及び試験部の重量をコンピューターに保存し、Seの最終含量[μg/g(ppm)]をプリントアウトしてよい。μg Se/gを有効数字3桁で報告する。
μg Se/g=(F/g)(V1/VA)(1/Wa)
Claims (13)
- グルコース代謝拮抗物質と添加セレンとを含む、ペットフード組成物。
- 前記添加セレンが、前記組成物中に約0.05〜約10.0μg/g(組成物)、又は約0.5〜約10.0μg/g(組成物)、又は約1.25〜約6.0μg/g(組成物)、又は約2.0〜約6.0μg/g(組成物)、又は約2.0〜約5.0μg/g(組成物)、又は約3.0〜約4.0μg/g(組成物)で存在する、請求項1に記載の組成物。
- 前記グルコース代謝拮抗物質が、前記組成物の約5重量%未満、又は前記組成物の約2重量%未満で前記組成物中に存在する、請求項1又は2に記載の組成物。
- 前記グルコース代謝拮抗物質が、前記組成物の約0.0001重量%〜約0.5重量%で前記組成物中に存在する、請求項1〜3のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記グルコース代謝拮抗物質が、前記組成物の約0.1重量%〜約10重量%、又は前記組成物の約0.1重量%〜約5重量%で前記組成物中に存在する、請求項1〜4のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記添加セレンが、無機供給源又は有機供給源を含む、請求項1〜5のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記添加セレンが、亜セレン酸ナトリウム、セレン酸ナトリウム、酸化セレン、セレン化物、セレノシステイン、セレノメチオニン、セレン化酵母、セレン化ニンニク、セレン化キャベツ、並びにこれらの組み合わせ及び混合物からなる群から選択されるセレン供給源を含む、請求項1〜6のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記グルコース代謝拮抗物質が、2−デオキシ−D−グルコース、5−チオ−D−グルコース、3−O−メチルグルコース、1,5−アンヒドロ−D−グルシトール、2,5−アンヒドロ−D−グルシトール、2,5−アンヒドロ−D−マンニトール、マンノヘプツロース、並びにこれらの混合物及び組み合わせからなる群から選択されるグルコース代謝拮抗物質成分を含む、請求項1〜7のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記グルコース代謝拮抗物質が、マンノヘプツロースを含む、請求項1〜8のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記組成物が、湿潤組成物、半湿潤組成物、乾燥組成物、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項1〜9のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記組成物が、栄養的にバランスのとれたペットフード組成物である、請求項1〜10のいずれか一項に記載の組成物。
- グルコース代謝拮抗物質とセレンとを含み、前記セレンが、内因性セレン及び添加セレンで構成される、ペットフード組成物。
- 前記内因性セレンが、約0.30〜約0.60μg/g(組成物)の量で存在し、前記添加セレンが、約3.0〜約6.0μg/g(組成物)の量で存在する、請求項12に記載のペットフード組成物。
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