JP2014506891A - 心血管疾患(CVD)患者の食事管理のためのω3脂肪酸診断アッセイ - Google Patents
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Abstract
Description
本願は、2011年2月16日に出願された米国特許仮出願第61/457,270号の優先日の恩典を請求する。この内容はその全体が本明細書に組み入れられる。
本発明は、心血管疾患(CVD)患者、または血中ω3脂肪酸、具体的には、エイコサペンタエン酸(EPA)、ドコサヘキサエン酸(DHA)、およびドコサペンタエン酸(DPA)レベルが不足していると見出されている任意の患者の食事管理に用いられる薬学的グレードの処方医療用食品製剤と、EPA、DPA、およびDHAの血中濃度を確かめるための診断アッセイを提供する。
U.S. 2005 Dietary Guidelines Advisory Committeeの知見によれば、米国人の70%はω3脂肪酸が不足している。さらなる研究から、CVD患者の84%超は、ω3脂肪酸、具体的には、エイコサペンタエン酸(EPA)、ドコサヘキサエン酸(DHA)、およびドコサペンタエン酸(DPA)が不足していることが分かっている。
米国特許第8,071,646号および同第7,652,068号と米国特許出願公開第2011/0303573号は全てFeuersteinに対するものであり、心血管疾患、うつ病、および炎症性障害を同時に治療するための、84重量%超のEPAおよびDHAを含有しなければならないω3脂肪酸製剤を開示する。いずれの特許も公開された出願も、本明細書において開示された発明において示されるような薬学的製剤を開示しない。
処方医療用食品製剤は、EPA:DHA重量比5.7〜6.3でエイコサペンタエン酸(EPA)およびドコサヘキサエン酸(DHA)の組み合わせを有し、最低約90重量%のω3脂肪酸を含有する製剤を含む長鎖脂肪酸組成物であって、EPA、DHA、およびDPAの総量が製剤全体の約82重量%でありかつ組成物のω3脂肪酸総含有量の約92%である、長鎖脂肪酸組成物を提供する。EPA+DHAは、製剤全体の約80%でありかつ組成物のω3脂肪酸総含有量の約89%である。本発明の脂肪酸は、生物学的に活性なグリセリドの形態(例えば、トリグリセリド)、生物学的に活性なエステルの形態(例えば、エチルエステルの形態)、および生物学的に活性なリン脂質の形態、その誘導体、結合体、前駆体、ならびにその薬学的に許容される塩および混合物を含むことが理解される。
6週間の非盲検試験をカナダにある一カ所の施設において実施した。対象は、臨床試験プロトコールに記載の全ての組み入れ基準および除外基準を満たせば試験の資格があった。試験登録前に、全ての資格のある対象からインフォームドコンセントが得られ、A群に登録した(図1)。63人の対象に、1日あたり4個のVASCAZEN(商標)カプセル(B群)、1日あたり経口用量2720mgのEPAおよび440mgのDHAを投与した。治療して2週間後に、全血ω3血中濃度を評価し、継続治療のために31人の対象をC群に登録した。経過観察Omega-Score(商標)評価のために4週目および6週目にC群対象から全血試料を得た。
各試験群のベースライン特徴を表1に概説した。全ての群にわたって、年齢デモグラフィックスは同等であり、試験参加者の大半は中年であった。主に男性(74.1%)からなるA群では、全群(N=143)の平均年齢は50.9歳であり、男性(52.1)と女性(46.9)とで類似の年齢分布が観察された。2週間治療群であるB群(N=63、74.2%が男性)の平均年齢は53.7歳であり、男性(55.8)および女性(47.9)の平均年齢は同等であった。最後に、C群(N=31、87%が男性)における試験対象の平均年齢は55.0歳であった(男性、54.0;女性、61.5)。ベースラインOmega-Score(商標)値を測定し、男性および女性を含む3群全てが、スコアが3.3%〜3.8%という同等のω3不足(Omega-Scoreが6.1%未満と定義される)(N Engl J Med, Vol.346, No.15, April 11, 2002, Pp.1113-1118)を有することが見出された。
Omega-Score(商標)は、生データの正規分布から平均+/-SD(N=対象数)として計算した。C群(女性)には、正規分布曲線にフィットするのに十分な数が無かった。この群の生データの平均ベースラインスコアは2.98%であった。
ω3不足患者集団へのω3補給に関して前記で概説された利益に加えて、本発明の製剤は、6時間以上続く血管拡張作用として定義された、持続可能なeNOS血管拡張作用を提供することが示されている。この持続可能なeNOS血管拡張作用は、従来では、処方薬ω3サプリメントを用いてもOTCグレードのω3サプリメントを用いても達成できなかった。
略語リスト
略語 意味
[Ca2+]i 細胞内遊離カルシウム濃度
APA アパミン
CaM カルモジュリン
CaMK-2 カルモジュリンキナーゼ-2
cAMP サイクリックアデノシン3':5'一リン酸
cGMP サイクリックグアノシン3':5'一リン酸
EDHF 内皮由来過分極因子
eNOS 内皮NO合成酵素
ET-1 エンドセリン-1
H2O2 過酸化水素
IKCa カルシウム依存性中間コンダクタンスカリウムチャンネル
Indo インドメタシン
L-NA N-ω-ニトロ-L-アルギニン
MnTMPyP Mn(III)テトラキス(1-メチル-4-ピリジル)ポルフィリン
NO 一酸化窒素
O2°- スーパーオキシドアニオン
PEG-カタラーゼ ポリエチレングリコール-カタラーゼ
PGI2 プロスタサイクリンI2
PI3-K ホスホイノシチド-3キナーゼ
PKC プロテインキナーゼC
PP2 4-アミノ-5-(4-クロロフェニル)-7-(t-ブチル)ピラゾロ[3,4]
ピリミジン
ROS 活性酸素種
sGC 可溶性グアニリルシクラーゼ
SKCa Ca2+依存性小コンダクタンスカリウムチャンネル
SOD コンダクタンススーパーオキシドジスムターゼ
TRAM34 1-[(2-クロロフェニル)ジフェニルメチル]-1H-ピラゾール
TXA2 トロンボキサンA2
U46619 9,11-ジデオキシ-9-プロスタグランジンF2メタノエポキシ
NOは、内皮一酸化窒素合成酵素(eNOS)によってL-アルギニンから産生される。NOは正常な血管生物学および病理生理学において重要な役割を果たす。NOは、可溶性グアニリルシクラーゼを活性化してサイクリックグアノシン3'-5'一リン酸(cGMP)を形成することによって血管平滑筋の弛緩を誘導する。血管緊張の調節および血小板凝集の阻害に加えて、NOは、血管平滑筋細胞の増殖、単球接着(Dimmeler et al., 1997; Hermann et al., 1997; Tsao et al., 1996)、および細胞死を含む、アテローム発生に関与する多くの重要な工程も阻害する。受容体依存性アゴニストおよび受容体非依存性アゴニストによって、遊離Ca細胞内濃度([Ca2+]i)が上昇し、Ca2+/カルモジュリン(CaM)複合体とeNOSが結合してeNOSが活性化される結果として、eNOSを活性化することができる(Fleming et al., 2001)。実際に、Ca2+を細胞外空間から除去することによって、ならびにCaMアンタゴニストによって、アゴニスト誘導性のNO形成およびその後の血管弛緩はいずれも消失する。eNOSはまた、内皮細胞において翻訳後レベルでは、主に、タンパク質/タンパク質相互作用、ならびにSer116、Thr497、Ser635、およびSer1179での多部位リン酸化によって調節される(ウシ配列の残基番号は、ヒト配列のSer114、Thr495、Ser633、およびSer1177に相当する)(Bauer et al., 2003; Boo et al., 2002; Dimmeler et al., 1997)。実際に、eNOSは、正および負のタンパク質モジュレーター、例えば、カベオリン(Cav-1)および熱ショックタンパク質90との相互作用によって調節されることが示されてきた(Garcia-Cardena et al., 1998; Ju et al., 1997; Pritchard et al., 2001)。基礎状態では、eNOSの大半はカベオリン-1に結合しているようにみられ、その酵素活性は小胞中で抑制されている(Michel et al., 1997)。eNOSのこの緊張性阻害は、Ca2+動員アゴニストに応答してカベオリン-1をCa2+/CaMで置換することによって解放することができる(Ju et al., 1997)。これらのモジュレーターに加えて、eNOSにある重要な調節部位のリン酸化は、いくつかの生理学的刺激に応答した酵素活性の調節において重要な役割を果たす(Ju et al., 1997)。eNOS Ser1179のリン酸化は酵素活性の増大と関連することが示されている(Gallis et al., 1999; McCabe et al., 2000)。eNOS-Ser1179のリン酸化はPI3-キナーゼ依存性機構によって調節される(Gallis et al., 1999)。PI3-キナーゼの主要な調節標的の1つであるAktは、eNOS Ser1179を直接リン酸化し、血管内皮増殖因子(VEGF)、スフィンゴシン-1-ホスフェート、およびエストロゲンに応答して酵素を活性化することが示されている(Dimmeler et al., 1997; Fulton et al., 1999)。しかしながら、eNOS-Ser1179はまた、AMP活性化プロテインキナーゼ(Busse et al., 2002)、プロテインキナーゼA(PKA)、およびプロテインキナーゼG(PKG)によってもリン酸化することができる。インタクトな細胞において、正確にどのプロテインキナーゼがeNOS-Ser1179をリン酸化するかは、内皮細胞および刺激のタイプに依存するようにみえる。例えば、ずれ応力は、Aktが関与することなくPI3-キナーゼ依存的かつPKA依存的にeNOS Ser1179をリン酸化するのに対して、EGFは、PI3-キナーゼ依存的かつAkt依存的にeNOS Ser1179をリン酸化する(Boo et al., 2002)。さらに、虚血再灌流障害はPKA経路を活性化して、eNOS Ser1179およびSer635をリン酸化する(Li et al., 2010)。さらに、ずれ応力(Butt et al., 2000)、低酸素、低密度リポタンパク質(LDL)(Chen et al., 2008; Chen et al., 1999)、および酸化脂肪酸(Corson et al., 1996)を含む、いくつかの因子によって、eNOS発現レベルを調節することができる。
内皮依存性血管弛緩はまた、一部の血管においてNOおよびPGI2合成の阻害後に観察されており、内皮由来過分極因子(EDHF)に起因するとされている。EDHFは、血管平滑筋の過分極によって血管を弛緩する。この作用は電位作動型Ca2+チャンネルを閉じて、細胞内遊離Ca2+レベルを下げ、その後に、血管平滑筋を弛緩する。カリウム(K+)チャンネルが、EDHFによって誘導される過分極の基礎をなし、中間コンダクタンスCa2+活性化K+ (IKCa)チャンネルおよび小コンダクタンスCa2+活性化K+ (SKCaチャンネル)を伴う。心血管リスク因子の存在を含む、いくつかの疾患状態では、内皮は機能変化および構造変化を経て、保護的な役割を失い、アテローム硬化促進性(proatherosclerotic)(Vanhoutte,1989)になる。正常内皮機能の喪失は内皮機能不全と呼ばれ、eNOSによるNO発生の低下、および/または活性酸素種(ROS)、特に、スーパーオキシドアニオンによるNO破壊の増加の後のNOバイオアベイラビリティ不全を特徴とする(Vanhoutte, 1989)。
a.インドメタシン(10μM):血管作用性プロスタノイド(特に、プロスタサイクリン)の形成を阻止するシクロオキシゲナーゼ(COX)阻害剤、
b.Nω-ニトロ-L-アルギニン(L-NA,300μM):NO成分に打ち勝つ、NO合成酵素(NOS)競合阻害剤、ならびに
c.TRAM34(100nM)およびアパミン(100nM):それぞれ、EDHF成分に打ち勝つ、Ca2+活性化カリウムチャンネル(IKCaおよびSKCa)の阻害剤。
ω3脂肪酸調製物であるEPA:DHA 1:1は、内皮を含む冠状動脈環の弛緩を濃度依存的に誘導したのに対して、U46619を用いて収縮させた、内皮を含まない冠状動脈環はごくわずかにしか弛緩しなかった(図4)。EPA:DHA 1:1に対する弛緩は、0.01% v/vを超える量で観察され、0.4% v/vでは約75%に達した(図4)。さらに、ω3脂肪酸調製物であるEPA:DHA 6:1も内皮依存性弛緩を誘導した。これは、EPA:DHA 1:1によって誘導される内皮依存性弛緩よりも強力であった(図4)。EPA:DHA 6:1に対する弛緩は0.01% v/vで開始し、0.4% v/vでは約98%に達した(図4)。これらの知見から、ω3脂肪酸調製物であるEPA:DHA 6:1は、冠状動脈環の内皮依存性弛緩を誘導するのにEPA:DHA 1:1調製物より効果的であることが分かる。この後、ω3脂肪酸調製物であるEPA:DHA 6:1を用いて後の全ての実験を行った。
Claims (18)
- 心血管疾患(CVD)のリスク因子の治療または予防、および心血管疾患患者における突然死の防止のためのキットであって、
エイコサペンタエン酸(EPA)、ドコサヘキサエン酸(DHA)、およびドコサペンタエン酸(DPA)を含むω3脂肪酸を含有する薬学的グレードの製剤であって、EPA:DHAの重量比が5.7:1〜6.3:1の範囲内であり、該製剤が約90重量%以上のω3脂肪酸を含有し、かつEPA、DHA、およびDPAが該製剤の内容物の約82重量%を構成する、薬学的グレードの製剤;
患者血液中のEPA、DHA、およびDPAのレベルを確かめるための診断アッセイ;ならびに
該製剤および該診断アッセイを使用するための説明書
を含む、キット。 - 約25mg/gのDPAを含む、請求項1記載の製剤。
- 約30mg/gのアラキドン酸(AA)を含む、請求項1記載の製剤。
- 約30mg/gの、18個の炭素原子を有する1種類または複数種類のω3脂肪酸を含む、請求項1記載の製剤。
- 前記18個の炭素原子を有する1種類または複数種類のω3脂肪酸が、α-リノレン酸(ALA)、ステアリドン酸(SDA)、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項5記載の製剤。
- ω3脂肪酸が、エチルエステルの形態およびその薬学的に許容される塩の形態である、請求項1記載の製剤。
- ω3脂肪酸が、トリグリセリドの形態およびその薬学的に許容される塩の形態である、請求項1記載の製剤。
- ω3脂肪酸が、リン脂質の形態およびその薬学的に許容される塩の形態である、請求項1記載の製剤。
- 約645〜約715mg/gmのEPA、約105〜約115mg/gmのDHA、および約22〜約28mg/gmのDPAを含む単位剤形である、請求項1記載の製剤。
- 少なくとも680mgのEPA、少なくとも110mgのDHA、および少なくとも25mgのDPAを含む単位剤形である、請求項1記載の製剤。
- 単位剤形が約30mgのAAをさらに含む、請求項9記載の製剤。
- 単位剤形が、約30mg/gの、18個の炭素原子を有するω3脂肪酸をさらに含む、請求項9記載の製剤。
- 前記18個の炭素原子を有する1種類または複数種類のω3脂肪酸が、α-リノレン酸(ALA)、ステアリドン酸(SDA)、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項11記載の製剤。
- 安定剤をさらに含む、請求項9記載の製剤。
- 安定剤が約0.2%の量のトコフェロールである、請求項14記載の製剤。
- 単位剤形が、錠剤、カプセル剤、丸剤、散剤、顆粒剤、および経口溶液または経口懸濁液を含んでもよい、請求項9記載の製剤。
- 単位剤形がゲル剤または液体カプセル剤である、請求項16記載の製剤。
- 心血管疾患(CVD)のリスク因子の治療または予防、および心血管疾患患者における突然死の防止のためのキットであって、
エイコサペンタエン酸(EPA)、ドコサヘキサエン酸(DHA)、およびドコサペンタエン酸(DPA)を含むω3脂肪酸を含有する薬学的グレードの製剤であって、EPA:DHAの重量比が5.7:1〜6.3:1の範囲内であり、該製剤が約90重量%以上のω3脂肪酸を含有し、EPA、DHA、およびDPAが該製剤の内容物の約82重量%を構成し、該製剤が約25mg/gのDPA、約30mg/gのアラキドン酸(AA)、および約30mg/gの、18個の炭素原子を有する1種類または複数種類のω3脂肪酸を含有し、該18個の炭素原子を有するω3脂肪酸が、α-リノレン酸(ALA)、ステアリドン酸(SDA)、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、薬学的グレードの製剤;
患者血液中のEPA、DHA、およびDPAのレベルを確かめるための診断アッセイ;ならびに
該製剤および該診断アッセイを使用するための説明書
を含む、キット。
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