JP2014202680A - Maldi質量分析方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】IR−MALDI法でマトリクスとして一般に使用される尿素にフラーレンを添加したマトリクスを用いてサンプルを調製する。フラーレンを添加しない場合には300回程度のレーザ光照射の繰り返しでイオンが生成されなくなるのに対し、フラーレンを添加することにより、レーザ光照射回数を8000回程度まで延ばすことができる。また、フラーレン添加により、1回のレーザ光照射当たりのイオン生成量も増加するので、検出感度も向上する。
【選択図】図3
Description
測定対象物質、マトリクス、及び、フラーレンが混合したサンプルを調製し、該サンプルに対し前記MALDIイオン源においてレーザ光を照射し、前記測定対象物質をイオン化して質量分析することを特徴としている。
サンプルプレートに形成されたウェル上で、測定対象物質、マトリクス、及び、フラーレンが混合したサンプルを調製できさえすれば、その調製手法や手段は特に問わない。ここで「混合」とは、測定対象物質、マトリクス、及び、フラーレンが均一に混合した状態に限らず、サンプルウェル上の一部において、測定対象物質、マトリクス、及びフラーレンが混合した状態も含まれる。
まず、1乃至複数の測定対象物質を含む試料溶液とマトリクス溶液とを混合し、これをサンプルプレート上に形成されているウェルに滴下する(ステップS1)。測定対象物質は、ペプチド、タンパク質を含むポリペプチド、糖鎖や脂質などの化学修飾を受けたポリペプチドなど、広義のペプチド全般である。また、試料溶液及びマトリクス溶液の溶媒としては、一般に使用される溶媒を用いればよく、例えば、アセトニトリル−TFA(トリフルオロ酢酸)水溶液、アセトニトリル水溶液、TFA水溶液などを用いることができる。
フラーレンは試料溶液及びマトリクス溶液には難溶解であるものの、上記のような重層法を採ることによって、測定対象物質、マトリクス、及びフラーレンが適度に混合したサンプルを簡便に且つ効率良く調製することができる。
また、ここで、フラーレン飽和溶液の代わりにフラーレンの懸濁液を用いることもできる。この場合、溶媒はフラーレン難溶性であってもよく、ウェルへの滴下前にボルテックスミキサー等を用いて懸濁操作を行い、懸濁状態を保ったまま滴下を行うようにすればよい。
例えば、1乃至複数の測定対象物質を含む試料溶液とマトリクス溶液とを混合した溶液に、適量のフラーレンを添加する。そして、この測定対象物質、マトリクス、フラーレンを含む混合液に対し懸濁操作を行った後、フラーレンの懸濁状態を保ったままウェルへの滴下を行い、乾化させる。これにより、上記重層法と同様のサンプルを得ることができる。
また、重層法における上記ステップS1の作業の後、ウェルに滴下された混合液を乾化する前に、粉体噴霧器具を用いてフラーレンを測定対象物質/マトリクス混合液の液滴上に粉体のまま吹き掛ける。その後に、液滴を乾化させる。これによっても、上記重層法と同様のサンプルを得ることができる。
実験条件は以下のとおりである。
(1)試料(測定対象物質):
(A) Glu1-Fibrinopeptide[アミノ酸配列:EGVNDNEEGFFSAR]
(B) Angiotensin II[アミノ酸配列:DRVYIHPF]
(30%のアセトニトリル/0.07%トリフルオロ酢酸溶液で調製:なお、%は体積を基準とする。以下も同様である。)
(2)マトリクス:2M 尿素(50%(v/v)のアセトニトリル水溶液で調製)
(3)フラーレン:C60飽和溶液(100%トルエンで調製)
(4)サンプルプレート:ステンレス製2[mm]厚プレート
(5)測定装置:島津製作所製MALDIデジタルイオントラップ飛行時間型質量分析計
・MALDIイオン源のレーザ光源:中赤外波長可変固体レーザKISS-LASER 5.5-10(川重テクノロジー社製)を使用し波長は5.9[μm]に固定
・質量分析条件:リニアモード/正イオンモード
なお、以下の説明及び図面中では、AngiotensinIIを「Ang2」、Glu1-Fibrinopeptideを「Gulfib」と略す。
実験条件は以下のとおりである。
(1)試料(測定対象物質):Angiotensin II[アミノ酸配列:DRVYIHPF](30%のアセトニトリル/0.07%トリフルオロ酢酸溶液で調製)
(2)マトリクス:10[mg/mL] DHB(50%アセトニトリル/0.1%TFA溶液で調製)
(3)フラーレン:C60飽和溶液(100%トルエンで調製)
(4)サンプルプレート:ステンレス製2[mm]厚プレート
(5)測定装置:島津製作所製 AXIMA-Perfromacne MALDI飛行時間型質量分析計
・質量分析条件:リニアモード/正イオンモード
(6)サンプル上のラスタ測定(測定位置のスキャン)条件:
・ラスタ範囲:2500[μm]×2500[μm]
・ラスタ点数:121点
・ラスタ1点当たりのレーザ光照射回数:2000回
Claims (7)
- MALDIイオン源を有する質量分析装置を用いた質量分析方法であって、
測定対象物質、マトリクス、及び、フラーレンが混合したサンプルを調製し、該サンプルに対し前記MALDIイオン源においてレーザ光を照射し、前記測定対象物質をイオン化して質量分析することを特徴とするMALDI質量分析方法。 - 請求項1に記載のMALDI質量分析方法であって、
前記MALDIイオン源は赤外レーザ光を使用したものであり、フラーレンを添加したマトリクスを用いることにより、レーザ光照射の繰り返しに対する測定対象物質由来イオンの生成の持続性を向上させることを特徴とするMALDI質量分析方法。 - 請求項1に記載のMALDI質量分析方法であって、
前記MALDIイオン源は赤外レーザ光を使用したものであり、フラーレンを添加したマトリクスを用いることにより、測定対象物質由来イオンの検出感度を向上させることを特徴とするMALDI質量分析方法。 - 請求項2又は3に記載のMALDI質量分析方法であって、
前記マトリクスは尿素であることを特徴とするMALDI質量分析方法。 - 請求項1に記載のMALDI質量分析方法であって、
前記MALDIイオン源は紫外レーザ光を使用したものであり、フラーレンを添加したマトリクスを用いることにより、レーザ光照射の繰り返しに対する測定対象物質由来イオンの生成の持続性を向上させることを特徴とするMALDI質量分析方法。 - 請求項5に記載のMALDI質量分析方法であって、
前記マトリクスは2,5−ジヒドロキシ安息香酸であることを特徴とするMALDI質量分析方法。 - 請求項1〜5のいずれかに記載のMALDI質量分析方法であって、
測定対象物質と液体状である前記マトリクスとの混合物をサンプルプレート上に滴下し、その液滴の乾燥前に、飽和状態までフラーレンを溶解させた溶液を前記液滴に重層して乾燥させることによりサンプルを調製することを特徴とするMALDI質量分析方法。
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Non-Patent Citations (1)
Title |
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JPN6016016370; 齋藤 瞳: '「フラーレン(C60)をマトリックスとして用いるMALDI法に関する研究」' 平成24年度新潟薬科大学薬学部卒業研究II , 20130212, p. 1-17 * |
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