JP2014180253A - 細胞接着剤及び細胞凝集塊 - Google Patents
細胞接着剤及び細胞凝集塊 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2014180253A JP2014180253A JP2013057544A JP2013057544A JP2014180253A JP 2014180253 A JP2014180253 A JP 2014180253A JP 2013057544 A JP2013057544 A JP 2013057544A JP 2013057544 A JP2013057544 A JP 2013057544A JP 2014180253 A JP2014180253 A JP 2014180253A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- group
- cell
- carbon number
- carbon atoms
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 title claims abstract description 41
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 36
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 claims abstract description 33
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 claims abstract description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 165
- 230000004956 cell adhesive effect Effects 0.000 claims description 110
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 82
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 82
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims description 77
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims description 77
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims description 77
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims description 77
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims description 76
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 71
- -1 tridecanoyl group Chemical group 0.000 claims description 62
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 22
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 claims description 18
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 claims description 17
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol group Chemical group [C@@H]1(CC[C@H]2[C@@H]3CC=C4C[C@@H](O)CC[C@]4(C)[C@H]3CC[C@]12C)[C@H](C)CCCC(C)C HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims description 17
- 241000276707 Tilapia Species 0.000 claims description 12
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 claims description 9
- 241000276438 Gadus morhua Species 0.000 claims description 9
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 9
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 claims description 9
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 8
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 claims description 8
- IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Asp Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims description 6
- 150000001721 carbon Chemical class 0.000 claims description 6
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 claims description 6
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 claims description 6
- 210000002237 B-cell of pancreatic islet Anatomy 0.000 claims description 5
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims description 5
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims description 5
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims description 5
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 claims description 5
- 125000002811 oleoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])/C([H])=C([H])\C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 5
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims description 5
- XQQUSYWGKLRJRA-RABCQHRBSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s,3s)-2-amino-3-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]propanoyl]amino]-3-methylbutanoic acid Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O XQQUSYWGKLRJRA-RABCQHRBSA-N 0.000 claims description 4
- MWOGMBZGFFZBMK-LJZWMIMPSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[2-[[(2s,3s)-2-[[(2s)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoic acid Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 MWOGMBZGFFZBMK-LJZWMIMPSA-N 0.000 claims description 4
- 108010085895 Laminin Proteins 0.000 claims description 4
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 4
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims description 4
- 125000003074 decanoyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 4
- 125000000268 heptanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 4
- 125000003104 hexanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 4
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 claims description 4
- 108010088381 isoleucyl-lysyl-valyl-alanyl-valine Proteins 0.000 claims description 4
- 125000001972 isopentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 4
- 125000000400 lauroyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 4
- 125000005644 linolenyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000000628 margaroyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 4
- 125000001419 myristoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 4
- 125000001402 nonanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 4
- 125000002801 octanoyl group Chemical group C(CCCCCCC)(=O)* 0.000 claims description 4
- 125000001312 palmitoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 4
- 125000001147 pentyl group Chemical group C(CCCC)* 0.000 claims description 4
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 4
- 125000003696 stearoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 4
- 108010052768 tyrosyl-isoleucyl-glycyl-seryl-arginine Proteins 0.000 claims description 4
- 125000000297 undecanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 4
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 claims description 4
- 108010022355 Fibroins Proteins 0.000 claims description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 abstract description 8
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 abstract description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract 2
- 230000002546 agglutinic effect Effects 0.000 abstract 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 23
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 22
- VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)-N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C(=O)NCCC(N1CC2=C(CC1)NN=N2)=O VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 15
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 13
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 11
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 9
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 8
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 7
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- NIPNSKYNPDTRPC-UHFFFAOYSA-N N-[2-oxo-2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 NIPNSKYNPDTRPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CCNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 5
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 4
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 4
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 4
- 102000007547 Laminin Human genes 0.000 description 3
- 230000004931 aggregating effect Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000002861 polymer material Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003106 tissue adhesive Substances 0.000 description 3
- YLZOPXRUQYQQID-UHFFFAOYSA-N 3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-1-[4-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]propan-1-one Chemical compound N1N=NC=2CN(CCC=21)CCC(=O)N1CCN(CC1)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F YLZOPXRUQYQQID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004873 anchoring Methods 0.000 description 2
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 2
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004692 intercellular junction Anatomy 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 150000004671 saturated fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 238000005054 agglomeration Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 230000008568 cell cell communication Effects 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 210000001608 connective tissue cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012854 evaluation process Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 210000004263 induced pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 1
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 210000004153 islets of langerhan Anatomy 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000012567 medical material Substances 0.000 description 1
- 230000005486 microgravity Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 125000001117 oleyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])/C([H])=C([H])\C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- VSIVTUIKYVGDCX-UHFFFAOYSA-M sodium;4-[2-(2-methoxy-4-nitrophenyl)-3-(4-nitrophenyl)tetrazol-2-ium-5-yl]benzene-1,3-disulfonate Chemical compound [Na+].COC1=CC([N+]([O-])=O)=CC=C1[N+]1=NC(C=2C(=CC(=CC=2)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)=NN1C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 VSIVTUIKYVGDCX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Abstract
【課題】本発明は、添加濃度を増加させても細胞が死滅させることがなく、接着強度が高く、短時間で接着可能で、凝集能の高い細胞接着剤、及び、細胞が固く連結・凝集され、凝集性が高く、細胞生存期間が長く、細胞移植に応用可能な細胞凝集塊を提供することを課題とする。
【解決手段】細胞接着ペプチド配列４３を有する高分子４１からなる主鎖と、疎水基４２を有する側鎖とからなる細胞接着剤２２を用いることによって前記課題を解決できる。
【選択図】図１
【解決手段】細胞接着ペプチド配列４３を有する高分子４１からなる主鎖と、疎水基４２を有する側鎖とからなる細胞接着剤２２を用いることによって前記課題を解決できる。
【選択図】図１
Description
本発明は、細胞接着剤及び細胞凝集塊に関するものである。
細胞凝集塊（スフェロイド）は、同一又は相異する複数の細胞を凝集させて塊状としたものである。細胞凝集塊中の細胞は、細胞−細胞間が接着タンパク質を介して接合することにより、細胞間コミュニケーションが行われ、細胞分化等の生理的機能が向上することが知られている。そのため、近年、細胞凝集塊の再生医療への応用が期待され、細胞凝集塊を形成するための技術や材料が盛んに研究されている（特許文献１〜４）。
現在検討されている細胞凝集塊の形成技術には、疑似微小重力環境での培養法や、細胞の接着・非接着を制御した表面加工材料上での培養法などが知られている。しかし、細胞移植をターゲットとした材料についてはほとんど研究されていない。
本発明者は、これまで、細胞移植へ応用可能な細胞凝集塊の調製の研究開発を行ってきた。例えば、親水性ユニット（ポリエチレングリコール）の両末端に疎水性ユニット（コレステリル基、オレオイル基）を導入した組織接着剤を合成した。この組織接着剤を細胞に添加することにより、細胞凝集塊が形成できた（非特許文献１〜３）。
しかし、この組織接着剤の添加濃度を増加させて、細胞凝集塊を形成した場合には、細胞凝集塊中の細胞の多くが早期に死滅した。これにより、この方法で調製した細胞凝集塊を細胞移植へ応用できないという課題を生じた。
Ｍｉｃｈｉｋｏ Ｉｔｏ、Ｔｅｔｓｕｓｈｉ Ｔａｇｕｃｈｉ、Ａｃｔａ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｉａ ５（２００９）２９４５−２９５２
Ｔｅｔｓｕｓｈｉ Ｔａｇｕｃｈｉ、Ｚｈｉ Ｒａｏ、Ｍｉｃｈｉｋｏ Ｉｔｏ、Ｍｉｙｕｋｉ Ｍａｔｓｕｄａ、Ｊ．Ｍａｔｅｒ．Ｍｅｄ．（２０１１）２２：２３５７−２３６３
Ｚｈｉ Ｒａｏ、Ｍａｋｏｔｏ Ｓａｓａｋｉ、Ｔｅｔｓｕｓｈｉ Ｔａｇｕｃｈｉ、Ｃｏｌｌｉｄｓ ａｎｄ Ｓｕｒｆａｃｅｓ Ｂ：Ｂｉｏｉｎｔｅｒｆａｃｅｓ １０１（２０１３）２２３−２２７
本発明は、添加濃度を増加させても細胞を死滅させることがなく、接着強度が高く、短時間で接着可能で、凝集能の高い細胞接着剤、及び、細胞が固く連結・凝集され、凝集性が高く、細胞生存期間が長く、細胞移植に応用可能な細胞凝集塊を提供することを課題とする。
上記事情を鑑み、実験を繰り返すことにより、本発明者は、細胞接着剤を構成する高分子材料が有する界面活性効果により、細胞が死滅するのではないか、そのため、用いる高分子材料を、所定の細胞接着ペプチド配列を有する高分子材料とすることにより、細胞の死滅を低減できるのではないかと考えた。その推測を元に、細胞接着ペプチド配列を有する高分子に疎水基を導入して、新たな細胞間架橋用高分子、すなわち、細胞接着剤を合成した。更に、得られた細胞接着剤を用いて細胞凝集塊を形成した。この細胞凝集塊を培養して、細胞数を調べた。その結果、培養１日後（Ｄａｙ １）には、細胞接着剤の添加濃度を１０％として形成した細胞凝集塊の細胞数に比較して、細胞接着剤の添加濃度を１０％として形成した細胞凝集塊の細胞数が４倍以上となることを見出し、本発明を完成した。
本発明は、以下の構成を有する。
本発明は、以下の構成を有する。
（１）細胞接着ペプチド配列を有する高分子からなる主鎖と、疎水基を有する側鎖とからなることを特徴とする細胞接着剤。
（２）前記細胞接着ペプチド配列が、ＲＧＤ、ＹＩＧＳＲ、ＩＫＶＡＶ又はＲＥＤＶのいずれか１種又は２種以上の組み合わせであることを特徴とする（１）に記載の細胞接着剤。
（３）前記細胞接着ペプチド配列を有する高分子が生体高分子であることを特徴とする（２）に記載の細胞接着剤。
（２）前記細胞接着ペプチド配列が、ＲＧＤ、ＹＩＧＳＲ、ＩＫＶＡＶ又はＲＥＤＶのいずれか１種又は２種以上の組み合わせであることを特徴とする（１）に記載の細胞接着剤。
（３）前記細胞接着ペプチド配列を有する高分子が生体高分子であることを特徴とする（２）に記載の細胞接着剤。
（４）前記生体高分子がゼラチン、コラーゲン、ラミニン又はフィブロインの群から選択されるいずれか１種又は２種以上の組み合わせであることを特徴とする（３）に記載の細胞接着剤。
（５）前記ゼラチンが、ウシ由来ゼラチン、ブタ由来ゼラチン、ティラピア由来ゼラチン、サケ由来ゼラチン、タラ由来ゼラチン、ヒト由来ゼラチン若しくはウシ、ブタ、ティラピア、サケ、タラ若しくはヒトのアミノ酸配列を有する遺伝子組み換えゼラチンのいずれか１種又は２種以上の組み合わせであることを特徴とする（４）に記載の細胞接着剤。
（６）前記疎水基が飽和脂肪酸であるエチル基（炭素数２）、プロピル（炭素数３）、ブチル基（炭素数４）、ペンチル基（炭素数５）、ヘキサノイル基（炭素数６）、ヘプタノイル基（炭素数７）、オクタノイル基（炭素数８）、ノナノイル基（炭素数９）、デカノイル基（炭素数１０）、ウンデカノイル基（炭素数１１）、ドデカノイル基（炭素数１２）、トリデカノイル基（炭素数１３）、テトラデカノイル基（炭素数１４）、ペンタデカノイル基（炭素数１５）、ヘキサデカノイル基（炭素数１６）、ヘプタデカノイル基（炭素数１７）、ステアロイル基（炭素数１８）、分岐型飽和脂肪酸であるイソプロピル（炭素数３）、イソブチル基（炭素数４）、イソペンチル基（炭素数５）、イソヘキサノイル基（炭素数６）、イソヘプタノイル基（炭素数７）、イソオクタノイル基（炭素数８）、イソノナノイル基（炭素数９）、イソデカノイル基（炭素数１０）、イソウンデカノイル基（炭素数１１）、イソドデカノイル基（炭素数１２）、イソトリデカノイル基（炭素数１３）、イソテトラデカノイル基（炭素数１４）、イソペンタデカノイル基（炭素数１５）、イソヘキサデカノイル基（炭素数１６）、イソパルミチル基（炭素数１６）、イソヘプタデカノイル基（炭素数１７）、イソステアロイル基（炭素数１８）、不飽和脂肪酸であるオレイル基（炭素数１８、不飽和炭素１個）、リノレニル基（炭素数１８、不飽和炭素２個）、α−リノレニル基（炭素数１８、不飽和炭素３個）、細胞膜成分であるコレステリル基、オレオイル基の群から選択される１種または２種以上の組み合わせであることを特徴とする（１）〜（５）のいずれか１項に記載の細胞接着剤。
（５）前記ゼラチンが、ウシ由来ゼラチン、ブタ由来ゼラチン、ティラピア由来ゼラチン、サケ由来ゼラチン、タラ由来ゼラチン、ヒト由来ゼラチン若しくはウシ、ブタ、ティラピア、サケ、タラ若しくはヒトのアミノ酸配列を有する遺伝子組み換えゼラチンのいずれか１種又は２種以上の組み合わせであることを特徴とする（４）に記載の細胞接着剤。
（６）前記疎水基が飽和脂肪酸であるエチル基（炭素数２）、プロピル（炭素数３）、ブチル基（炭素数４）、ペンチル基（炭素数５）、ヘキサノイル基（炭素数６）、ヘプタノイル基（炭素数７）、オクタノイル基（炭素数８）、ノナノイル基（炭素数９）、デカノイル基（炭素数１０）、ウンデカノイル基（炭素数１１）、ドデカノイル基（炭素数１２）、トリデカノイル基（炭素数１３）、テトラデカノイル基（炭素数１４）、ペンタデカノイル基（炭素数１５）、ヘキサデカノイル基（炭素数１６）、ヘプタデカノイル基（炭素数１７）、ステアロイル基（炭素数１８）、分岐型飽和脂肪酸であるイソプロピル（炭素数３）、イソブチル基（炭素数４）、イソペンチル基（炭素数５）、イソヘキサノイル基（炭素数６）、イソヘプタノイル基（炭素数７）、イソオクタノイル基（炭素数８）、イソノナノイル基（炭素数９）、イソデカノイル基（炭素数１０）、イソウンデカノイル基（炭素数１１）、イソドデカノイル基（炭素数１２）、イソトリデカノイル基（炭素数１３）、イソテトラデカノイル基（炭素数１４）、イソペンタデカノイル基（炭素数１５）、イソヘキサデカノイル基（炭素数１６）、イソパルミチル基（炭素数１６）、イソヘプタデカノイル基（炭素数１７）、イソステアロイル基（炭素数１８）、不飽和脂肪酸であるオレイル基（炭素数１８、不飽和炭素１個）、リノレニル基（炭素数１８、不飽和炭素２個）、α−リノレニル基（炭素数１８、不飽和炭素３個）、細胞膜成分であるコレステリル基、オレオイル基の群から選択される１種または２種以上の組み合わせであることを特徴とする（１）〜（５）のいずれか１項に記載の細胞接着剤。
（７）細胞接着ペプチド配列を有する高分子からなる主鎖と、疎水基を有する側鎖とからなる細胞接着剤によって、２以上の細胞が連結・凝集されて、塊状とされたことを特徴とする細胞凝集塊。
（８）前記細胞が、ｉＰＳ細胞、幹細胞、肝細胞、膵臓β細胞、線維芽細胞、血管内皮細胞の群から選択されるいずれか１種又は２種以上の組み合わせであることを特徴とする（７）に記載の細胞凝集塊。
（８）前記細胞が、ｉＰＳ細胞、幹細胞、肝細胞、膵臓β細胞、線維芽細胞、血管内皮細胞の群から選択されるいずれか１種又は２種以上の組み合わせであることを特徴とする（７）に記載の細胞凝集塊。
本発明の細胞接着剤は、細胞接着ペプチド配列を有する高分子からなる主鎖と、疎水基を有する側鎖とからなるので、細胞接着剤の一の疎水基を細胞の脂質２分子膜に突き刺して固定するとともに、別の疎水基を別の細胞の脂質２分子膜に突き刺して固定することができる。また、細胞接着剤の主鎖が有する細胞接着ペプチド配列も、細胞の表面に接着することができる。これらにより、２以上の細胞を容易に、かつ、短時間に連結・凝集できる。また、凝集形態を塊状とすることにより、細胞凝集塊を形成することができる。これらの凝集体は、細胞接着剤の主鎖が有する細胞接着ペプチド配列が細胞間を接着する構成なので、細胞接着剤の添加濃度を増加させても細胞を死滅させることがない。
本発明の細胞凝集塊は、細胞接着ペプチド配列を有する高分子からなる主鎖と、疎水基を有する側鎖とからなる細胞接着剤によって、２以上の細胞が連結・凝集されて、塊状とされた構成なので、細胞接着剤の添加濃度を増加させて、固く連結・凝集された塊としても、細胞を死滅させることがない。これにより、細胞凝集塊の調製を容易にすることができるとともに、様々な実験に用いることができ、汎用性を高めることができる。
（本発明の実施形態）
以下、添付図面を参照しながら、本発明の実施形態である細胞接着剤及び細胞凝集塊について説明する。
以下、添付図面を参照しながら、本発明の実施形態である細胞接着剤及び細胞凝集塊について説明する。
＜細胞凝集塊＞
まず、本発明の実施形態である細胞凝集塊について説明する。
図１は、本発明の実施形態である細胞凝集塊の一例を示す概略図である。
図１に示すように、本発明の実施形態である細胞凝集塊１１は、細胞接着ペプチド配列４３を有する高分子４１からなる主鎖と、疎水基４２を有する側鎖とからなる細胞接着剤２２によって、２以上の細胞（Ｃｅｌｌ）２１が連結・凝集されて、塊状とされて、概略構成されている。
図１では、９つの細胞２１が連結・凝集されているが、細胞２１の数はこれに限られるものではない。
細胞接着剤２２の数も特に限られるものではなく、１本で２以上の細胞を連結・凝集させてもよく、２本以上で２以上の細胞を連結・凝集させてもよい。
まず、本発明の実施形態である細胞凝集塊について説明する。
図１は、本発明の実施形態である細胞凝集塊の一例を示す概略図である。
図１に示すように、本発明の実施形態である細胞凝集塊１１は、細胞接着ペプチド配列４３を有する高分子４１からなる主鎖と、疎水基４２を有する側鎖とからなる細胞接着剤２２によって、２以上の細胞（Ｃｅｌｌ）２１が連結・凝集されて、塊状とされて、概略構成されている。
図１では、９つの細胞２１が連結・凝集されているが、細胞２１の数はこれに限られるものではない。
細胞接着剤２２の数も特に限られるものではなく、１本で２以上の細胞を連結・凝集させてもよく、２本以上で２以上の細胞を連結・凝集させてもよい。
図２は、細胞の一例を示す図であって、平面図（ａ）、（ａ）におけるＡ−Ａ’線における断面図（ｂ）、（ｂ）のＢ部の拡大模式図（ｃ）である。
図２（ａ）に示すように、細胞２１の表面は、リン脂質の親水性部３１ａで覆われている。
また、図２（ｂ）に示すように、細胞２１の表面は、脂質２分子膜３３で形成されており、内部に核３４を有している。
また、図２（ｃ）に示すように、脂質２分子膜３３は、表面側からリン脂質の親水性部３１ａ、リン脂質の疎水性部３２ａ、リン脂質の疎水性部３２ｂ、リン脂質の親水性部３１ｂと配置されて構成されている。
図２（ａ）に示すように、細胞２１の表面は、リン脂質の親水性部３１ａで覆われている。
また、図２（ｂ）に示すように、細胞２１の表面は、脂質２分子膜３３で形成されており、内部に核３４を有している。
また、図２（ｃ）に示すように、脂質２分子膜３３は、表面側からリン脂質の親水性部３１ａ、リン脂質の疎水性部３２ａ、リン脂質の疎水性部３２ｂ、リン脂質の親水性部３１ｂと配置されて構成されている。
細胞２１が、ｉＰＳ細胞、幹細胞、肝細胞、膵臓β細胞、線維芽細胞、血管内皮細胞の群から選択されるいずれか１種又は２種以上の組み合わせであることが好ましい。
ｉＰＳ細胞（人工多能性幹細胞：ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ）は、体細胞へ数種類の遺伝子を導入し、ＥＳ細胞（胚性幹細胞）のように非常に多くの細胞に分化できる分化万能性（ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｃｙ）と、分裂増殖を経ても自己複製能を持たせた細胞である。幹細胞（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ）は、分裂して様々な細胞に分化できる細胞である。肝細胞（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ）は、肝臓の７０−８０％を構成する約２０μｍの細胞である。膵臓β細胞（ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｂｅｔａ ｃｅｌｌ）は、膵臓のランゲルハンス島に存在し、インスリンを血中に分泌する細胞である。線維芽細胞（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ）は、コラーゲン蛋白を合成、分泌する結合組織細胞である。血管内皮細胞（ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ）は、血管の内表面を構成する扁平で薄い細胞である。
特に、血管内皮細胞を上記他の細胞と組み合わせて細胞凝集塊を形成することにより、塊の内部に配置された上記他の細胞にも酸素や栄養分を十分供給することができ、細胞の死滅を回避することができる。これにより、様々な実験における細胞凝集塊の取り扱い性能を向上させることができる。
ｉＰＳ細胞（人工多能性幹細胞：ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ）は、体細胞へ数種類の遺伝子を導入し、ＥＳ細胞（胚性幹細胞）のように非常に多くの細胞に分化できる分化万能性（ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｃｙ）と、分裂増殖を経ても自己複製能を持たせた細胞である。幹細胞（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ）は、分裂して様々な細胞に分化できる細胞である。肝細胞（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ）は、肝臓の７０−８０％を構成する約２０μｍの細胞である。膵臓β細胞（ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｂｅｔａ ｃｅｌｌ）は、膵臓のランゲルハンス島に存在し、インスリンを血中に分泌する細胞である。線維芽細胞（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ）は、コラーゲン蛋白を合成、分泌する結合組織細胞である。血管内皮細胞（ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ）は、血管の内表面を構成する扁平で薄い細胞である。
特に、血管内皮細胞を上記他の細胞と組み合わせて細胞凝集塊を形成することにより、塊の内部に配置された上記他の細胞にも酸素や栄養分を十分供給することができ、細胞の死滅を回避することができる。これにより、様々な実験における細胞凝集塊の取り扱い性能を向上させることができる。
図３は、細胞接着剤の一例を示す模式図である。
図３に示すように、細胞接着剤２２は、細胞接着ペプチド配列４３を有する高分子４１からなる主鎖と、疎水基４２を有する側鎖とからなる。図３では、疎水基４２の数は５つとされているが、これに限られるものではない。
図３に示すように、細胞接着剤２２は、細胞接着ペプチド配列４３を有する高分子４１からなる主鎖と、疎水基４２を有する側鎖とからなる。図３では、疎水基４２の数は５つとされているが、これに限られるものではない。
細胞接着ペプチド配列４３が、ＲＧＤ（アルギニン−グリシン−アスパラギン酸）、ＹＩＧＳＲ、ＩＫＶＡＶ又はＲＥＤＶのいずれか１種又は２種以上の組み合わせであることが好ましい。細胞接着剤２２は、この細胞接着ペプチド配列で隣接する細胞と効率よく接着できる。図３では、細胞接着ペプチド配列４３の数は３つとされているが、これに限られるものではない。
細胞接着ペプチド配列４３を有する高分子４１として、生体高分子を挙げることができる。
前記生体高分子がゼラチン、コラーゲン、ラミニン又はフィブロネクチンの群から選択されるいずれか１種又は２種以上の組み合わせであることが好ましい。これにより、細胞を効率よく接着できる。また、細胞接着剤２２の濃度を高めて、細胞凝集塊を形成しても、細胞を死滅させることがない。
前記生体高分子がゼラチン、コラーゲン、ラミニン又はフィブロネクチンの群から選択されるいずれか１種又は２種以上の組み合わせであることが好ましい。これにより、細胞を効率よく接着できる。また、細胞接着剤２２の濃度を高めて、細胞凝集塊を形成しても、細胞を死滅させることがない。
また、前記ゼラチンが、ウシ由来ゼラチン、ブタ由来ゼラチン、ティラピア由来ゼラチン、サケ由来ゼラチン、タラ由来ゼラチン、ヒト由来ゼラチン若しくはウシ、ブタ、ティラピア、サケ、タラ若しくはヒトのアミノ酸配列を有する遺伝子組み換えゼラチンのいずれか１種又は２種以上の組み合わせであることが好ましい。これらのゼラチンを用いることにより、細胞を効率よく接着できる。
前記ゼラチンの分子量は、５００００以上１０００００未満であることが好ましい。分子量を５００００以上とすることにより、接着強度を向上させることができる。
また、前記ゼラチンは、アルカリ処理して用いることが好ましい。これにより、ウイルス等が死滅するため生体に対する安全性が向上する。
また、前記ゼラチンは、アルカリ処理して用いることが好ましい。これにより、ウイルス等が死滅するため生体に対する安全性が向上する。
前記ティラピア、サケ、タラゼラチンは、常温で水への溶解性が高く、分子量を５００００以上としても、ゲル化せず、水溶液中に均一に溶解させることができ、液体状の細胞接着剤を形成することができる。
前記疎水基が飽和脂肪酸であるエチル基（炭素数２）、プロピル（炭素数３）、ブチル基（炭素数４）、ペンチル基（炭素数５）、ヘキサノイル基（炭素数６）、ヘプタノイル基（炭素数７）、オクタノイル基（炭素数８）、ノナノイル基（炭素数９）、デカノイル基（炭素数１０）、ウンデカノイル基（炭素数１１）、ドデカノイル基（炭素数１２）、トリデカノイル基（炭素数１３）、テトラデカノイル基（炭素数１４）、ペンタデカノイル基（炭素数１５）、ヘキサデカノイル基（炭素数１６）、ヘプタデカノイル基（炭素数１７）、ステアロイル基（炭素数１８）、分岐型飽和脂肪酸であるイソプロピル（炭素数３）、イソブチル基（炭素数４）、イソペンチル基（炭素数５）、イソヘキサノイル基（炭素数６）、イソヘプタノイル基（炭素数７）、イソオクタノイル基（炭素数８）、イソノナノイル基（炭素数９）、イソデカノイル基（炭素数１０）、イソウンデカノイル基（炭素数１１）、イソドデカノイル基（炭素数１２）、イソトリデカノイル基（炭素数１３）、イソテトラデカノイル基（炭素数１４）、イソペンタデカノイル基（炭素数１５）、イソヘキサデカノイル基（炭素数１６）、イソパルミチル基（炭素数１６）、イソヘプタデカノイル基（炭素数１７）、イソステアロイル基（炭素数１８）、不飽和脂肪酸であるオレイル基（炭素数１８、不飽和炭素１個）、リノレニル基（炭素数１８、不飽和炭素２個）、α−リノレニル基（炭素数１８、不飽和炭素３個）、細胞膜成分であるコレステリル基、オレオイル基の群から選択される１種または２種以上の組み合わせであることが好ましい。これにより、疎水基からなる先端を脂質２分子膜に効率よく突き刺すことができ、細胞接着剤２２を細胞２１に強固に固定することができる。
細胞接着剤２２の具体的態様としては、アミノ基の一部をコレステリル基で置換したゼラチンを挙げることができる。
また、アミノ基の置換の割合がｘ％の場合、ゼラチンｘＣｈｏｌと呼称する場合がある。
また、アミノ基の置換の割合がｘ％の場合、ゼラチンｘＣｈｏｌと呼称する場合がある。
ゼラチン中に含まれるアミノ基の疎水基への置換割合ｘ％は、１％以上９０％以下とすることが好ましく、０％以上７０％以下とすることがより好ましい。疎水基への置換割合ｘ％は、例えば、ゼラチンのアミノ基のコレステリル基への置換割合である。これにより、接着力を高めた細胞接着剤とすることができ、凝集性の高い細胞凝集塊を形成できる。
図４は、細胞の脂質２分子膜３３Ａに、細胞接着剤２２の疎水基４２が突き刺さった様子と、細胞接着剤２２の細胞接着ペプチド配列４３が、細胞の脂質２分子膜３３Ｂと接着した様子の一例を示す概念図である。
細胞接着剤２２の疎水基４２は、脂質２分子膜３３Ａを貫いて、突き刺さっている。これにより、脂質２分子膜３３Ａから疎水基４２は容易に抜けることはない。
また、細胞接着剤２２の細胞接着ペプチド配列４３は、細胞の脂質２分子膜３３Ｂ上に含有されている膜タンパク質であるインテグリンとの相互作用により強固に接着する。また、この細胞接着ペプチド配列４３は、生体由来のものであるため、接する細胞が増殖するための足場として作用する。
細胞接着剤２２の疎水基４２は、脂質２分子膜３３Ａを貫いて、突き刺さっている。これにより、脂質２分子膜３３Ａから疎水基４２は容易に抜けることはない。
また、細胞接着剤２２の細胞接着ペプチド配列４３は、細胞の脂質２分子膜３３Ｂ上に含有されている膜タンパク質であるインテグリンとの相互作用により強固に接着する。また、この細胞接着ペプチド配列４３は、生体由来のものであるため、接する細胞が増殖するための足場として作用する。
＜細胞接着剤＞
本発明の実施形態である細胞接着剤２２は、細胞接着ペプチド配列４３を有する高分子４１からなる主鎖と、疎水基４２を有する側鎖とからなる。
細胞接着剤２２を緩衝液に溶解させてなる構成としてもよい。緩衝液としては、リン酸緩衝液（ＰＢＳ）を用いることができる。
本発明の実施形態である細胞接着剤２２は、細胞接着ペプチド配列４３を有する高分子４１からなる主鎖と、疎水基４２を有する側鎖とからなる。
細胞接着剤２２を緩衝液に溶解させてなる構成としてもよい。緩衝液としては、リン酸緩衝液（ＰＢＳ）を用いることができる。
前記濃度は０．０１％以上５０％以下とすることが好ましく、０．０５％以上３０％以下とすることがより好ましい。これにより、細胞と細胞接着剤の割合が適当な細胞凝集塊を形成できる。前記濃度が０．０１％未満の場合には、接合が弱く、取り扱い途中で、崩壊するおそれが発生する。逆に、５０％超の場合には、細胞量の少ない細胞凝集塊となり、評価に用いることができない場合が発生する。
＜細胞凝集塊の作成方法＞
次に、細胞凝集塊の作成方法の一例について説明する。細胞凝集塊の作成方法は、細胞接着剤の合成工程Ｓ１と、細胞接着剤溶液の調製工程Ｓ２と、細胞凝集塊の作成工程Ｓ３と、を有する。
（細胞接着剤の合成工程Ｓ１）
まず、細胞接着ペプチド配列を有する高分子を用意する。
次に、この高分子の側鎖に疎水基を導入して、細胞接着剤を合成する。
例えば、細胞接着ペプチド配列を有する高分子として、アルカリ処理したテラピアゼラチン（分子量７万）からなるゼラチンを用意してから、この高分子の側鎖のアミノ酸のｘ％となるようにコレステリル基で置換して、細胞接着剤（ゼラチンｘＣｈｏｌ）を合成する。
次に、細胞凝集塊の作成方法の一例について説明する。細胞凝集塊の作成方法は、細胞接着剤の合成工程Ｓ１と、細胞接着剤溶液の調製工程Ｓ２と、細胞凝集塊の作成工程Ｓ３と、を有する。
（細胞接着剤の合成工程Ｓ１）
まず、細胞接着ペプチド配列を有する高分子を用意する。
次に、この高分子の側鎖に疎水基を導入して、細胞接着剤を合成する。
例えば、細胞接着ペプチド配列を有する高分子として、アルカリ処理したテラピアゼラチン（分子量７万）からなるゼラチンを用意してから、この高分子の側鎖のアミノ酸のｘ％となるようにコレステリル基で置換して、細胞接着剤（ゼラチンｘＣｈｏｌ）を合成する。
（細胞接着剤溶液の調製工程Ｓ２）
次に、細胞接着剤を所定の濃度でリン酸緩衝液（ＰＢＳ）に溶解させて、細胞接着剤を調製する。
例えば、細胞接着剤（ゼラチンｘＣｈｏｌ）を濃度ｙ％でリン酸緩衝液（ＰＢＳ）に溶解させて、細胞接着剤溶液（ｘＣｈｏｌ―ｙ％）を調製する。
次に、細胞接着剤を所定の濃度でリン酸緩衝液（ＰＢＳ）に溶解させて、細胞接着剤を調製する。
例えば、細胞接着剤（ゼラチンｘＣｈｏｌ）を濃度ｙ％でリン酸緩衝液（ＰＢＳ）に溶解させて、細胞接着剤溶液（ｘＣｈｏｌ―ｙ％）を調製する。
（細胞凝集塊の作成工程Ｓ３）
次に、細胞を、血清を含有していない培養液に溶解させて、所定の濃度の細胞懸濁液を調製する。前記濃度は、例えば、培養容器の構成に合わせて、１×１０６ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとする。
次に、細胞接着剤溶液と細胞懸濁液を所定の比で混合して、混合溶液を調製する。
次に、前記混合溶液を攪拌する。例えば、ボルテックッスで２分間攪拌する。
以上の工程により、２以上の細胞が連結・凝集されて、塊状とされてなる細胞凝集塊を作成することができる。
次に、細胞を、血清を含有していない培養液に溶解させて、所定の濃度の細胞懸濁液を調製する。前記濃度は、例えば、培養容器の構成に合わせて、１×１０６ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとする。
次に、細胞接着剤溶液と細胞懸濁液を所定の比で混合して、混合溶液を調製する。
次に、前記混合溶液を攪拌する。例えば、ボルテックッスで２分間攪拌する。
以上の工程により、２以上の細胞が連結・凝集されて、塊状とされてなる細胞凝集塊を作成することができる。
本発明の実施形態である細胞接着剤２２は、細胞接着ペプチド配列４３を有する高分子４１からなる主鎖と、疎水基４２を有する側鎖とからなる構成なので、細胞接着剤の一の疎水基を細胞の脂質２分子膜に突き刺して固定するとともに、別の疎水基を別の細胞の脂質２分子膜に突き刺して固定することができる。また、細胞接着剤の主鎖が有する細胞接着ペプチド配列も、細胞の表面に接着することができる。これらにより、２以上の細胞を容易に、かつ、短時間に連結・凝集できる。また、凝集形態を塊状とすることにより、細胞凝集塊を形成することができる。これらの凝集体は、細胞接着剤の主鎖が有する細胞接着ペプチド配列が細胞間を接着する構成なので、細胞接着剤の添加濃度を増加させても細胞を死滅させることがない。
本発明の実施形態である細胞接着剤２２は、細胞接着ペプチド配列４３が、ＲＧＤ、ＹＩＧＳＲ、ＩＫＶＡＶ又はＲＥＤＶのいずれか１種又は２種以上の組み合わせである構成なので、２以上の細胞を容易に、かつ、短時間に連結・凝集できる。また、細胞接着剤の添加濃度を増加させても細胞を死滅させることがない。
本発明の実施形態である細胞接着剤２２は、細胞接着ペプチド配列４３を有する高分子４１が生体高分子である構成なので、細胞接着剤の添加濃度を増加させても細胞を死滅させることがない。
本発明の実施形態である細胞接着剤２２は、前記生体高分子がゼラチン、コラーゲン、ラミニン又はフィブロインの群から選択されるいずれか１種又は２種以上の組み合わせである構成なので、細胞接着剤の添加濃度を増加させても細胞を死滅させることがない。
本発明の実施形態である細胞接着剤２２は、前記ゼラチンが、ウシ由来ゼラチン、ブタ由来ゼラチン、ティラピア由来ゼラチン、サケ由来ゼラチン、タラ由来ゼラチン、ヒト由来ゼラチン若しくはウシ、ブタ、ティラピア、サケ、タラ若しくはヒトのアミノ酸配列を有する遺伝子組み換えゼラチンのいずれか１種又は２種以上の組み合わせである構成なので、細胞接着剤の添加濃度を増加させても細胞を死滅させることがない。
本発明の実施形態である細胞接着剤２２は、疎水基４２が飽和脂肪酸であるエチル基（炭素数２）、プロピル（炭素数３）、ブチル基（炭素数４）、ペンチル基（炭素数５）、ヘキサノイル基（炭素数６）、ヘプタノイル基（炭素数７）、オクタノイル基（炭素数８）、ノナノイル基（炭素数９）、デカノイル基（炭素数１０）、ウンデカノイル基（炭素数１１）、ドデカノイル基（炭素数１２）、トリデカノイル基（炭素数１３）、テトラデカノイル基（炭素数１４）、ペンタデカノイル基（炭素数１５）、ヘキサデカノイル基（炭素数１６）、ヘプタデカノイル基（炭素数１７）、ステアロイル基（炭素数１８）、分岐型飽和脂肪酸であるイソプロピル（炭素数３）、イソブチル基（炭素数４）、イソペンチル基（炭素数５）、イソヘキサノイル基（炭素数６）、イソヘプタノイル基（炭素数７）、イソオクタノイル基（炭素数８）、イソノナノイル基（炭素数９）、イソデカノイル基（炭素数１０）、イソウンデカノイル基（炭素数１１）、イソドデカノイル基（炭素数１２）、イソトリデカノイル基（炭素数１３）、イソテトラデカノイル基（炭素数１４）、イソペンタデカノイル基（炭素数１５）、イソヘキサデカノイル基（炭素数１６）、イソパルミチル基（炭素数１６）、イソヘプタデカノイル基（炭素数１７）、イソステアロイル基（炭素数１８）、不飽和脂肪酸であるオレイル基（炭素数１８、不飽和炭素１個）、リノレニル基（炭素数１８、不飽和炭素２個）、α−リノレニル基（炭素数１８、不飽和炭素３個）、細胞膜成分であるコレステリル基、オレオイル基の群から選択される１種または２種以上の組み合わせである構成なので、細胞接着剤の一の疎水基を細胞の脂質２分子膜に突き刺して固定するとともに、別の疎水基を別の細胞の脂質２分子膜に突き刺して固定することができ、２以上の細胞を容易に、かつ、短時間に連結・凝集できる。
本発明の実施形態である細胞凝集塊１１は、細胞接着ペプチド配列４３を有する高分子４１からなる主鎖と、疎水基４２を有する側鎖とからなる細胞接着剤２２によって、２以上の細胞２１が連結・凝集されて、塊状とされた構成なので、細胞接着剤の添加濃度を増加させて、固く連結・凝集された塊としても、細胞を死滅させることがない。これにより、細胞凝集塊の取り扱いを容易にすることができ、ハンドリング性能が高く、様々な実験に用いることができ、汎用性を高めることができる。
本発明の実施形態である細胞凝集塊１１は、細胞２１が、ｉＰＳ細胞、幹細胞、肝細胞、膵臓β細胞、線維芽細胞、血管内皮細胞の群から選択されるいずれか１種又は２種以上の組み合わせである構成なので、様々なタイプの細胞凝集塊を形成することができる。これにより、様々な実験に用いることができ、汎用性を高めることができる。
本発明の実施形態である細胞接着剤及び細胞凝集塊は、上記実施形態に限定されるものではなく、本発明の技術的思想の範囲内で、種々変更して実施することができる。本実施形態の具体例を以下の実施例で示す。しかし、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
（実施例１−１）
（細胞接着剤の合成）
まず、ゼラチン（テラピアゼラチン、分子量７万、アルカリ処理）を用意した。
次に、上記ゼラチンのアミノ基の４４％をコレステリル基で修飾して、細胞接着剤を合成した。
（細胞接着剤溶液の調製）
次に、細胞接着剤（アミノ基の４４％をコレステリル基で修飾したゼラチン）の濃度を０．１％として、リン酸緩衝液（ＰＢＳ）に溶解させて、実施例１−１の細胞接着剤溶液（４４Ｃｈｏｌ―０．１％）を調製した。
（細胞接着剤の合成）
まず、ゼラチン（テラピアゼラチン、分子量７万、アルカリ処理）を用意した。
次に、上記ゼラチンのアミノ基の４４％をコレステリル基で修飾して、細胞接着剤を合成した。
（細胞接着剤溶液の調製）
次に、細胞接着剤（アミノ基の４４％をコレステリル基で修飾したゼラチン）の濃度を０．１％として、リン酸緩衝液（ＰＢＳ）に溶解させて、実施例１−１の細胞接着剤溶液（４４Ｃｈｏｌ―０．１％）を調製した。
（実施例１−２）
アミノ基の４４％をコレステリル基で修飾したゼラチンの濃度を１％とした他は実施例１−１と同様にして、実施例１−２の細胞接着剤溶液（４４Ｃｈｏｌ―１％）を調製した。
アミノ基の４４％をコレステリル基で修飾したゼラチンの濃度を１％とした他は実施例１−１と同様にして、実施例１−２の細胞接着剤溶液（４４Ｃｈｏｌ―１％）を調製した。
（実施例１−３）
アミノ基の４４％をコレステリル基で修飾したゼラチンの濃度を１０％とした他は実施例１−１と同様にして、実施例１−３の細胞接着剤溶液（４４Ｃｈｏｌ―１０％）を調製した。
アミノ基の４４％をコレステリル基で修飾したゼラチンの濃度を１０％とした他は実施例１−１と同様にして、実施例１−３の細胞接着剤溶液（４４Ｃｈｏｌ―１０％）を調製した。
（実施例２−１）
上記ゼラチンのアミノ基の６９％をコレステリル基で修飾した他は実施例１−１と同様にして、実施例２−１の細胞接着剤溶液（６９Ｃｈｏｌ―０．１％）を調製した。
上記ゼラチンのアミノ基の６９％をコレステリル基で修飾した他は実施例１−１と同様にして、実施例２−１の細胞接着剤溶液（６９Ｃｈｏｌ―０．１％）を調製した。
（実施例２−２）
アミノ基の６９％をコレステリル基で修飾したゼラチンの濃度を１％とした他は実施例２−１と同様にして、実施例２−２の細胞接着剤溶液（６９Ｃｈｏｌ―１％）を調製した。
アミノ基の６９％をコレステリル基で修飾したゼラチンの濃度を１％とした他は実施例２−１と同様にして、実施例２−２の細胞接着剤溶液（６９Ｃｈｏｌ―１％）を調製した。
（実施例２−３）
アミノ基の６９％をコレステリル基で修飾したゼラチンの濃度を１０％とした他は実施例２−１と同様にして、実施例２−３の細胞接着剤溶液（６９Ｃｈｏｌ―１０％）を調製した。
アミノ基の６９％をコレステリル基で修飾したゼラチンの濃度を１０％とした他は実施例２−１と同様にして、実施例２−３の細胞接着剤溶液（６９Ｃｈｏｌ―１０％）を調製した。
（比較例１−１）
次のようにして、比較例１−１の細胞接着剤を準備した。
まず、ゼラチン（テラピアゼラチン、分子量７万、アルカリ処理）を用意した。
次に、ゼラチンの濃度を０．１％として、比較例１−１の細胞接着剤溶液（０Ｃｈｏｌ―０．１％）を調製した。
次のようにして、比較例１−１の細胞接着剤を準備した。
まず、ゼラチン（テラピアゼラチン、分子量７万、アルカリ処理）を用意した。
次に、ゼラチンの濃度を０．１％として、比較例１−１の細胞接着剤溶液（０Ｃｈｏｌ―０．１％）を調製した。
（比較例１−２）
ゼラチンの濃度を１％とした他は比較例１−１と同様にして、比較例１−２の細胞接着剤溶液（０Ｃｈｏｌ―１％）を調製した。
ゼラチンの濃度を１％とした他は比較例１−１と同様にして、比較例１−２の細胞接着剤溶液（０Ｃｈｏｌ―１％）を調製した。
（比較例１−３）
ゼラチンの濃度を１％とした他は比較例１−１と同様にして、比較例１−２の細胞接着剤溶液（０Ｃｈｏｌ―１％）を調製した。
ゼラチンの濃度を１％とした他は比較例１−１と同様にして、比較例１−２の細胞接着剤溶液（０Ｃｈｏｌ―１％）を調製した。
（比較例２）
リン酸緩衝液ＰＢＳ（Ｃｏｎｔｒｏｌ）を用意した。
各実施例、比較例と、試料名、試料の構成、細胞接着剤濃度の関係を表１にまとめた。
リン酸緩衝液ＰＢＳ（Ｃｏｎｔｒｏｌ）を用意した。
各実施例、比較例と、試料名、試料の構成、細胞接着剤濃度の関係を表１にまとめた。
＜細胞凝集能評価＞
図５は、細胞凝集能評価の工程図である。細胞凝集能評価は、混合サンプル調製工程と、混合サンプル評価工程とからなる。この工程に従い、細胞凝集能評価を行った。
図５は、細胞凝集能評価の工程図である。細胞凝集能評価は、混合サンプル調製工程と、混合サンプル評価工程とからなる。この工程に従い、細胞凝集能評価を行った。
＜混合サンプル調製工程＞
まず、混合サンプル評価工程で用いる培養容器の構成に合わせて、１×１０６ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように細胞懸濁液を１００μＬ調製した。ＨｅｐＧ２（ヒト肝ガン由来細胞）細胞を用いた。
次に、実施例１−１〜実施例２−３、比較例１−１〜比較例２の細胞接着剤溶液を１００μＬ量り取った。
次に、２ｍＬチューブで、細胞懸濁液と細胞接着剤の混合液を調製した。
次に、この混合液を２ｍｉｎボルテックスにより撹拌した。
以上の工程により、細胞接着剤と細胞の混合サンプルを調製した。
まず、混合サンプル評価工程で用いる培養容器の構成に合わせて、１×１０６ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように細胞懸濁液を１００μＬ調製した。ＨｅｐＧ２（ヒト肝ガン由来細胞）細胞を用いた。
次に、実施例１−１〜実施例２−３、比較例１−１〜比較例２の細胞接着剤溶液を１００μＬ量り取った。
次に、２ｍＬチューブで、細胞懸濁液と細胞接着剤の混合液を調製した。
次に、この混合液を２ｍｉｎボルテックスにより撹拌した。
以上の工程により、細胞接着剤と細胞の混合サンプルを調製した。
＜混合サンプル評価工程＞
まず、混合サンプルを、播種細胞数が１×１０６ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように４８ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅ−１に移した。
培地として、ＤＭＥＭ（１回目 ウシ血清なし、２回目以降ウシ血清（＋））を用いた。また、培地交換は２日とした。
まず、混合サンプルを、播種細胞数が１×１０６ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように４８ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅ−１に移した。
培地として、ＤＭＥＭ（１回目 ウシ血清なし、２回目以降ウシ血清（＋））を用いた。また、培地交換は２日とした。
次に、細胞接着剤と細胞の混合サンプルを３７℃のインキュベーター内で培養した。
次に、培養開始から１日後（Ｄａｙ １）、３日後（Ｄａｙ ３）、７日後（Ｄａｙ ７）、位相差顕微鏡により、細胞凝集能及び生存状況の観察を行った。また、ＷＳＴ−８（ｃｅｌｌ ｃｏｕｎｔｉｎｇ ｋｉｔ）を用いて、細胞数（Ｃｅｌｌ ｎｕｍｂｅｒ）のカウントを行った。
次に、培養開始から１日後（Ｄａｙ １）、３日後（Ｄａｙ ３）、７日後（Ｄａｙ ７）、位相差顕微鏡により、細胞凝集能及び生存状況の観察を行った。また、ＷＳＴ−８（ｃｅｌｌ ｃｏｕｎｔｉｎｇ ｋｉｔ）を用いて、細胞数（Ｃｅｌｌ ｎｕｍｂｅｒ）のカウントを行った。
＜細胞凝集能評価結果＞
図６〜１０に示す細胞凝集能評価結果が得られた。
図６は、実施例１−１〜実施例２−３、比較例１−１〜比較例２の細胞接着剤溶液を用いた各培養環境における細胞数（Ｃｅｌｌ ｎｕｍｂｅｒ）示すグラフである。
図６に示すように、疎水化ゼラチン（４４Ｃｈｏｌ、６９Ｃｈｏｌ）では、添加濃度を増加させることにより、細胞の増殖が認められた（実施例１−２〜実施例２−３）。疎水化ゼラチン中に含まれる細胞接着ペプチド配列（アルギニン−グリシン−アスパラギン酸）により細胞増殖が促進したと思われる。
図６〜１０に示す細胞凝集能評価結果が得られた。
図６は、実施例１−１〜実施例２−３、比較例１−１〜比較例２の細胞接着剤溶液を用いた各培養環境における細胞数（Ｃｅｌｌ ｎｕｍｂｅｒ）示すグラフである。
図６に示すように、疎水化ゼラチン（４４Ｃｈｏｌ、６９Ｃｈｏｌ）では、添加濃度を増加させることにより、細胞の増殖が認められた（実施例１−２〜実施例２−３）。疎水化ゼラチン中に含まれる細胞接着ペプチド配列（アルギニン−グリシン−アスパラギン酸）により細胞増殖が促進したと思われる。
図７は、実施例１−１〜実施例１−３の細胞接着剤溶液を用いた培養環境（Ｄａｙ １）の位相差顕微鏡写真像である。疎水化ゼラチン（４４Ｃｈｏｌ）を細胞接着剤として用いたものである。
図７に示すように、疎水化ゼラチン（４４Ｃｈｏｌ）の添加濃度を０．１％から１０％へと増加させることにより、大幅に細胞数が増加した。細胞の凝集（細胞間の接着）が認められた。ゼラチンに導入したコレステリル基が細胞膜にアンカリングすることにより、細胞間接合を促進した。
図７に示すように、疎水化ゼラチン（４４Ｃｈｏｌ）の添加濃度を０．１％から１０％へと増加させることにより、大幅に細胞数が増加した。細胞の凝集（細胞間の接着）が認められた。ゼラチンに導入したコレステリル基が細胞膜にアンカリングすることにより、細胞間接合を促進した。
図８は、実施例２−１〜実施例２−３の細胞接着剤溶液を用いた培養環境（Ｄａｙ １）の位相差顕微鏡写真像である。疎水化ゼラチン（６９Ｃｈｏｌ）を細胞接着剤として用いたものである。
図８に示すように、疎水化ゼラチン（４４Ｃｈｏｌ）と同様に、疎水化ゼラチン（６９Ｃｈｏｌ）の添加濃度を０．１％から１０％へと増加させることにより、大幅に細胞数が増加した。細胞の凝集（細胞間の接着）が認められた。ゼラチンに導入したコレステリル基が細胞膜にアンカリングすることにより、細胞間接合を促進した。
図８に示すように、疎水化ゼラチン（４４Ｃｈｏｌ）と同様に、疎水化ゼラチン（６９Ｃｈｏｌ）の添加濃度を０．１％から１０％へと増加させることにより、大幅に細胞数が増加した。細胞の凝集（細胞間の接着）が認められた。ゼラチンに導入したコレステリル基が細胞膜にアンカリングすることにより、細胞間接合を促進した。
図９は、比較例１−１〜比較例１−３の細胞接着剤溶液を用いた培養環境（Ｄａｙ １）の位相差顕微鏡写真像である。ゼラチン（０Ｃｈｏｌ）を細胞接着剤として用いたものである。
図９に示すように、疎水化ゼラチン（４４Ｃｈｏｌ）及び疎水化ゼラチン（６９Ｃｈｏｌ）の場合とは異なり、ゼラチン（０Ｃｈｏｌ）の添加濃度を０．１％から１０％へと増加させることにより、細胞数はあまり変わらなかった。
図９に示すように、疎水化ゼラチン（４４Ｃｈｏｌ）及び疎水化ゼラチン（６９Ｃｈｏｌ）の場合とは異なり、ゼラチン（０Ｃｈｏｌ）の添加濃度を０．１％から１０％へと増加させることにより、細胞数はあまり変わらなかった。
図１０は、比較例２の培養環境（Ｄａｙ １）の位相差顕微鏡写真像である。細胞接着剤を用いない培養環境である。
図１０に示すように、細胞の凝集はほとんどなかった。
図１０に示すように、細胞の凝集はほとんどなかった。
本発明の細胞接着剤は、添加濃度を増加させても細胞が死滅させることがなく、接着強度が高く、短時間で接着可能で、凝集能の高いものであり、本発明の細胞凝集塊は、細胞が固く連結・凝集され、凝集性が高く、細胞生存期間が長く、細胞移植に応用可能なものであり、医療用デバイス・医療用材料・医療用機器産業において利用可能性がある。
１１…細胞凝集塊、２１…細胞、２２…細胞接着剤、３１ａ、３１ｂ…リン脂質の親水性部、３２ａ、３２ｂ…リン脂質の疎水性部、３３、３３Ａ、３３Ｂ…脂質２分子膜、３４…核、４１…高分子、４２…疎水基、４３…細胞接着ペプチド配列。
Claims (8)
- 細胞接着ペプチド配列を有する高分子からなる主鎖と、疎水基を有する側鎖とからなることを特徴とする細胞接着剤。
- 前記細胞接着ペプチド配列が、ＲＧＤ、ＹＩＧＳＲ、ＩＫＶＡＶ又はＲＥＤＶのいずれか１種又は２種以上の組み合わせであることを特徴とする請求項１に記載の細胞接着剤。
- 前記細胞接着ペプチド配列を有する高分子が生体高分子であることを特徴とする請求項２に記載の細胞接着剤。
- 前記生体高分子がゼラチン、コラーゲン、ラミニン又はフィブロインの群から選択されるいずれか１種又は２種以上の組み合わせであることを特徴とする請求項３に記載の細胞接着剤。
- 前記ゼラチンが、ウシ由来ゼラチン、ブタ由来ゼラチン、ティラピア由来ゼラチン、サケ由来ゼラチン、タラ由来ゼラチン、ヒト由来ゼラチン若しくはウシ、ブタ、ティラピア、サケ、タラ若しくはヒトのアミノ酸配列を有する遺伝子組み換えゼラチンのいずれか１種又は２種以上の組み合わせであることを特徴とする請求項４に記載の細胞接着剤。
- 前記疎水基が飽和脂肪酸であるエチル基（炭素数２）、プロピル（炭素数３）、ブチル基（炭素数４）、ペンチル基（炭素数５）、ヘキサノイル基（炭素数６）、ヘプタノイル基（炭素数７）、オクタノイル基（炭素数８）、ノナノイル基（炭素数９）、デカノイル基（炭素数１０）、ウンデカノイル基（炭素数１１）、ドデカノイル基（炭素数１２）、トリデカノイル基（炭素数１３）、テトラデカノイル基（炭素数１４）、ペンタデカノイル基（炭素数１５）、ヘキサデカノイル基（炭素数１６）、ヘプタデカノイル基（炭素数１７）、ステアロイル基（炭素数１８）、分岐型飽和脂肪酸であるイソプロピル（炭素数３）、イソブチル基（炭素数４）、イソペンチル基（炭素数５）、イソヘキサノイル基（炭素数６）、イソヘプタノイル基（炭素数７）、イソオクタノイル基（炭素数８）、イソノナノイル基（炭素数９）、イソデカノイル基（炭素数１０）、イソウンデカノイル基（炭素数１１）、イソドデカノイル基（炭素数１２）、イソトリデカノイル基（炭素数１３）、イソテトラデカノイル基（炭素数１４）、イソペンタデカノイル基（炭素数１５）、イソヘキサデカノイル基（炭素数１６）、イソパルミチル基（炭素数１６）、イソヘプタデカノイル基（炭素数１７）、イソステアロイル基（炭素数１８）、不飽和脂肪酸であるオレイル基（炭素数１８、不飽和炭素１個）、リノレニル基（炭素数１８、不飽和炭素２個）、α−リノレニル基（炭素数１８、不飽和炭素３個）、細胞膜成分であるコレステリル基、オレオイル基の群から選択される１種または２種以上の組み合わせであることを特徴とする請求項１〜５のいずれか１項に記載の細胞接着剤。
- 細胞接着ペプチド配列を有する高分子からなる主鎖と、疎水基を有する側鎖とからなる細胞接着剤によって、２以上の細胞が連結・凝集されて、塊状とされたことを特徴とする細胞凝集塊。
- 前記細胞が、ｉＰＳ細胞、幹細胞、肝細胞、膵臓β細胞、線維芽細胞、血管内皮細胞の群から選択されるいずれか１種又は２種以上の組み合わせであることを特徴とする請求項７に記載の細胞凝集塊。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2013057544A JP6112551B2 (ja) | 2013-03-21 | 2013-03-21 | 細胞凝集塊形成剤及び細胞凝集塊 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2013057544A JP6112551B2 (ja) | 2013-03-21 | 2013-03-21 | 細胞凝集塊形成剤及び細胞凝集塊 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2014180253A true JP2014180253A (ja) | 2014-09-29 |
| JP6112551B2 JP6112551B2 (ja) | 2017-04-12 |
Family
ID=51699566
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2013057544A Expired - Fee Related JP6112551B2 (ja) | 2013-03-21 | 2013-03-21 | 細胞凝集塊形成剤及び細胞凝集塊 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP6112551B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2016117569A1 (ja) * | 2015-01-20 | 2016-07-28 | 国立研究開発法人物質・材料研究機構 | 外科用シーラント |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010027081A1 (ja) * | 2008-09-08 | 2010-03-11 | 学校法人東京理科大学 | スフェロイド複合体およびスフェロイド含有ハイドロゲルならびにその製造方法 |
| JP2010063375A (ja) * | 2008-09-08 | 2010-03-25 | Tokyo Univ Of Science | スフェロイド複合体およびその製造方法、ならびに多層型スフェロイド複合体 |
| WO2012046759A1 (ja) * | 2010-10-05 | 2012-04-12 | 独立行政法人物質・材料研究機構 | 組織接着膜及びその製造方法 |
| WO2012046717A1 (ja) * | 2010-10-05 | 2012-04-12 | 独立行政法人物質・材料研究機構 | 2成分系組織接着剤及びその製造方法 |
-
2013
- 2013-03-21 JP JP2013057544A patent/JP6112551B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010027081A1 (ja) * | 2008-09-08 | 2010-03-11 | 学校法人東京理科大学 | スフェロイド複合体およびスフェロイド含有ハイドロゲルならびにその製造方法 |
| JP2010063375A (ja) * | 2008-09-08 | 2010-03-25 | Tokyo Univ Of Science | スフェロイド複合体およびその製造方法、ならびに多層型スフェロイド複合体 |
| WO2012046759A1 (ja) * | 2010-10-05 | 2012-04-12 | 独立行政法人物質・材料研究機構 | 組織接着膜及びその製造方法 |
| WO2012046717A1 (ja) * | 2010-10-05 | 2012-04-12 | 独立行政法人物質・材料研究機構 | 2成分系組織接着剤及びその製造方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| COLLOIDS SURF. B: BIOINTERFACES, 2012, 91, P.48-56, JPN6016042725, ISSN: 0003508828 * |
| COLLOIDS SURF. B: BIOINTERFACES, 2013, 101, P.223-7, JPN6016042724, ISSN: 0003433531 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2016117569A1 (ja) * | 2015-01-20 | 2016-07-28 | 国立研究開発法人物質・材料研究機構 | 外科用シーラント |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP6112551B2 (ja) | 2017-04-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Andersen et al. | 3D cell culture in alginate hydrogels | |
| US10894895B2 (en) | Two-component bioink, 3D biomaterial comprising the same and method for preparing the same | |
| Correia et al. | Multilayered hierarchical capsules providing cell adhesion sites | |
| Chen et al. | Injectable self-crosslinking HA-SH/Col I blend hydrogels for in vitro construction of engineered cartilage | |
| US11135163B2 (en) | Peptide hydrogel properties and its applications | |
| US20200253192A1 (en) | Zwitterionic microgels, their assemblies and related formulations, and methods for their use | |
| CN104080905B (zh) | 细胞培养基和方法 | |
| Mahou et al. | Interpenetrating alginate-collagen polymer network microspheres for modular tissue engineering | |
| WO2014089472A1 (en) | Peptide-albumin hydrogel properties and its applications | |
| JP2011172925A (ja) | 医療用積層体 | |
| WO2001070022A1 (fr) | Materiaux de revetement pour tissus biologiques, tissus biologiques revetus et procede d'enduction de tissus biologiques | |
| TWI698528B (zh) | 血管平滑肌細胞的培養方法 | |
| JP5737860B2 (ja) | ゲル状細胞組成物およびその製造方法 | |
| Tian et al. | Preparation and characterization of galactosylated alginate–chitosan oligomer microcapsule for hepatocytes microencapsulation | |
| Anton-Sales et al. | Bacterial nanocellulose and titania hybrids: cytocompatible and cryopreservable cell carriers | |
| KR20200025502A (ko) | 탈세포 조직 기반 세포 봉입 및 배양용 비드, 및 이의 용도 | |
| Rim et al. | Characterization of gelatin/gellan gum/glycol chitosan ternary hydrogel for retinal pigment epithelial tissue reconstruction materials | |
| Liu et al. | Effects of the proportion of two different cross-linkers on the material and biological properties of enzymatically degradable PEG hydrogels | |
| CN107118552A (zh) | 一种基于明胶和氨基酸的复合膜及在膜上培养角膜缘干细胞的方法 | |
| Wu et al. | Preparation and characterization of chitosan porous microcarriers for hepatocyte culture | |
| Lee et al. | Dopamine-functionalized gellan gum hydrogel as a candidate biomaterial for a retinal pigment epithelium cell delivery system | |
| Rufaihah et al. | The effect of scaffold modulus on the morphology and remodeling of fetal mesenchymal stem cells | |
| JP6112551B2 (ja) | 細胞凝集塊形成剤及び細胞凝集塊 | |
| Higuchi et al. | Temperature‐induced cell detachment on immobilized pluronic surface | |
| Miyamoto | Cryopreservation of cell sheets for regenerative therapy: application of vitrified hydrogel membranes |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20160125 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20161115 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170112 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20170307 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20170308 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6112551 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |