JP2014171443A - 酵母・細菌共通培養方法およびこれに用いる酵母・細菌共通培養培地 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】細菌培養用培地を用い、細菌の増殖を抑制し、かつ酵母の増殖を向上させる条件下で細菌および酵母を含有する可能性のある検体を培養する酵母・細菌共通培養方法並びに当該方法による培養物中から、細菌および酵母をそれぞれ検出する検体中の細菌および酵母の検出方法。
【選択図】なし
Description
(1)細菌用培養培地のpHを、5〜6.5程度、好ましくは、5〜6に調整し、温度を20〜30℃程度、好ましくは20〜25℃として培養する。
(2)細菌用培養培地に、追加糖成分として1〜8g/Lの、グルコース、マルトース、ガラクトース、フルクトース、スクロースおよびデキストリンから選ばれる糖成分を添加した培地を使用し、pHを、5〜6.8程度、好ましくは、5〜6.5、温度を20〜30℃程度、好ましくは20〜25℃として培養する。
以下に示す試験培地を使用し、種々の条件で、細菌・酵母複合菌試料を培養して、細菌と酵母がそれぞれ検出可能な程度まで増殖するかどうかを確認した。増殖は、細菌および酵母について、試験培地と同じ培地を用い、pH6.8、温度32.5℃で培養(標準培養)した場合と比較し、下記増殖スコアを求め、このスコアを総合した増殖性判定基準により評価した。また、増殖時間は、酵母(カンジダ・アルビカンス)が、初期菌数(1〜9CFU/mL)から103CFU/mLにまでかかった時間により下記増殖時間判定基準で評価した。この結果を表1に示す。
ペプトン 20g/L
リン酸一水素二カリウム 2.5g/L
グルコース 2.5g/L
塩化ナトリウム 5g/L
レシチン 1g/L
ポリソルベート80 7g/L
脱イオン水 1000 mL
緑膿菌として、シュードモナス・エルギノーザ(Psudomonas aeruginosa)IFO 13275株、黄色ブドウ球菌として、スタフィロコッカス・アウレウス(Stapyloccus aureus)IFO 13276株、大腸菌として、エシェリヒア・コリ(Escherichia coli)IFO 3972株、酵母として、カンジダ・アルビカンス(Candida albicans)IFO1594株を使用した。これらを、試験培地中に、それぞれ、1〜9CFU/mL、1〜9CFU/mL、1〜9CFU/mL、1〜9CFU/mLとなるように添加し、混合して細菌・酵母複合菌試料とした。
酵母(カンジダ・アルビカンス)
評 点 : 内 容
3 : 標準培養に比べ、培養菌数が2桁(100倍)以上多い。
2 : 標準培養に比べ、培養菌数が1桁(10倍)以上、2桁(100倍)
未満である。
1 : 標準培養に比べ、培養菌数がほぼ1桁(5〜10倍)多い。
0 : 標準培養とほぼ同じ培養菌数(0.7〜5倍)である。
−1 : 標準培養に比べ、培養菌数がほぼ1桁(0.7倍)少ない。
−2 : 培養菌が検出されない。
注)上記酵母の菌数は、クロモアガーカンジダ寒天培地(CHROMagar社製)を用い、混釈培養後、検出した緑青色コロニーをカンジダ・アルビカンスとして計測した。
評 点 : 内 容
3 : 細菌数が106CFU/mL以上である。
2 : 細菌数が105CFU/mL以上である。
1 : 細菌数が104CFU/mL以上である。
0 : 細菌数が103CFU/mL以上である。
−1 : 細菌数が102CFU/mL以上である。
−2 : 細菌数が102CFU/mL以下である。
注)上記細菌についての数は、緑膿菌はNAC寒天培地(栄研化学株式会社製)、黄色ブドウ球菌はMS寒天培地(栄研化学株式会社製)、大腸菌はEMB寒天培地(栄研化学株式会社製)をそれぞれ選択培地として用い、混釈培養後、NAC寒天培地では緑色〜青色、MS寒天培地では黄色、EMB寒天培地では黒色のコロニーを、各々の対象細菌数として計測した。緑膿菌、黄色ブドウ球菌、大腸菌の菌数のうち、最も菌数が少ない菌種の評点を、その培養条件における評点とした。
評 価 : 内 容
◎ : 細菌の増殖スコアが0〜3で、酵母の増殖スコアが2〜3
○ : 細菌の増殖スコアが0〜3で、酵母の増殖スコアが1
△ : 細菌の増殖スコアが0〜3で、酵母の増殖スコアが0
× : 細菌の増殖スコアおよび酵母の増殖スコアの少なくとも一方が、−2〜
−1
評 価 : 内 容
◎ : 24時間以内
○ : 24〜48時間
△ : 48〜96時間
× : 96時間以上
注)上記評価の「×」には、一旦増殖したが、その後96時間以内に減少が見
られた場合も含む。
表2に示す、所定量のグルコースを更に加えた試験培地を用い、同表に示す条件下で、実施例1で使用した細菌・酵母複合菌試料を培養し、細菌と酵母がそれぞれ検出可能な程度まで増殖するかどうかを確認した。増殖に関する確認は、実施例1に記載の方法で行った。この結果も表2に示す。
表3に示す種類および量の各種糖類を実施例1の試験培地に加え、これを用いて、同表に示す条件下で、実施例1で使用した細菌・酵母複合菌試料を培養し、細菌と酵母がそれぞれ検出可能な程度まで増殖するかどうかを確認した。増殖に関する確認は、実施例1に記載の方法で行った。この結果も表3に示す。
Claims (11)
- 細菌培養用培地を用い、細菌の増殖を抑制し、かつ酵母の増殖を向上させる条件下で、細菌および酵母を含有する可能性のある検体を培養することを特徴とする酵母・細菌共通培養方法。
- 細菌の増殖を抑制し、かつ酵母の増殖を向上させる条件での培養が、細菌用培養培地のpHを、5〜6.5、培養温度を20〜30℃とする培養である請求項1記載の酵母・細菌共通培養方法。
- 細菌の増殖を抑制し、かつ酵母の増殖を向上させる条件での培養が、細菌用培養培地に1〜8g/Lとなる量の、グルコース、マルトース、ガラクトース、フルクトース、スクロースおよびデキストリンから選ばれる糖成分を追加で添加した培地を使用し、pHを、5〜6.8、培養温度を20〜30℃とする培養である請求項1記載の酵母・細菌共通培養方法。
- 細胞培養用培地が、レシチンおよび非イオン性界面活性剤が加えられたトリプトンソイ培地である請求項1ないし3の何れかの項記載の酵母・細菌共通培養方法。
- 細菌培養用培地を用い、細菌の増殖を抑制し、かつ酵母の増殖を向上させる条件下で細菌および酵母を含有する可能性のある検体を培養した後、当該培養物中の細菌および酵母をそれぞれ検出することを特徴とする検体中の細菌および酵母の検出方法。
- 細菌の増殖を抑制し、かつ酵母の増殖を向上させる条件での培養が、細菌用培養培地のpHを、5〜6.5、培養温度を20〜30℃とする培養である請求項5記載の検体中の細菌および酵母の検出方法。
- 細菌の増殖を抑制し、かつ酵母の増殖を向上させる条件での培養が、細菌用培養培地に1〜8g/Lの、グルコース、マルトース、ガラクトース、フルクトース、スクロースおよびデキストリンから選ばれる糖成分を追加で添加した培地を使用し、pHを、5〜6.8、培養温度を20〜30℃とする培養である請求項5記載の検体中の細菌および酵母の検出方法。
- 細胞培養用培地が、レシチンおよび非イオン性界面活性剤が加えられたトリプトンソイ培地である請求項5ないし7の何れかの項記載の検体中の細菌および酵母の検出方法。
- 検体が、防腐剤あるいは抗菌剤を含むものである請求項5ないし8の何れかの項記載の検体中の細菌および酵母の検出方法。
- レシチンおよび非イオン性界面活性剤が加えられたとリプトンソイ培地に、更に酸性剤または緩衝剤を加え、そのpHを5ないし6.5としてなることを特徴とする酵母・細菌共通培養培地。
- 請求項10記載の酵母・細菌共通培養培地に、追加糖成分として、1ないし8g/Lとなる量の、グルコース、マルトース、ガラクトース、フルクトース、スクロースおよびデキストリンよりなる群から選ばれる糖成分を添加してなる、酵母・細菌共通培養培地。
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