JP2014097054A

JP2014097054A - 細胞取扱容器

Info

Publication number: JP2014097054A
Application number: JP2013211564A
Authority: JP
Inventors: Shuhei Kan; 修平菅; Aya Otani; 彩大谷; Yasuhiko Suzuki; 保彦鈴木
Original assignee: Menicon Co Ltd
Current assignee: Menicon Co Ltd
Priority date: 2012-10-17
Filing date: 2013-10-09
Publication date: 2014-05-29

Abstract

【課題】可視光（特に、青色光）にセンシティブな細胞の取扱に十分に対応可能な細胞取扱容器を提供すること。
【解決手段】本発明の細胞取扱容器は、その少なくとも一部が、５００ｎｍ以下の波長領域の光を遮蔽する光遮蔽部とされている。また、この光遮蔽部において、容器内部への波長３６０ｎｍ以上５００ｎｍ以下の波長領域における積算透過率が９０％以下である。
【選択図】なし

Description

本発明は、細胞取扱容器に関する。

細胞にとって、紫外光（ＵＶ光）は有害であることが知られており、例えば、形成材料に紫外線吸収剤を含有させた培養容器や、一部が紫外光を遮断するフィルムで構成された培養容器が提案されている（特許文献１，２）。しかし、このような容器では、一部の細胞には十分に対応できないという問題がある。具体例としては、青色光暴露により胚の発育の遅れや胚の割球のアポトーシスが増加することが報告されており、このような容器では、胚などの青色光にセンシティブな細胞の取扱に十分に対応できないという問題がある。

国際公開第２００６／１２３５７０号パンフレット国際公開第９５／２６３９６号パンフレット

本発明は、上記課題を解決するためになされたものであり、その主たる目的は、可視光（特に、青色光）にセンシティブな細胞の取扱に十分に対応可能な細胞取扱容器を提供することにある。

本発明の細胞取扱容器は、その少なくとも一部が、５００ｎｍ以下の波長領域の光を遮蔽する光遮蔽部とされている。また、この光遮蔽部において、容器内部への波長３６０ｎｍ以上５００ｎｍ以下の波長領域における積算透過率が９０％以下である。このような容器を用いることより、可視光（特に、青色光）にセンシティブな細胞の取扱性が格段に向上する。具体的には、このような容器に細胞を収容することにより、例えば、細胞観察時に光源に赤色セロハンをかざして観察するというような手法を用いる必要がなく、さらには、観察以外の場面で遭遇する可視光暴露に対するリスクも回避することができる。

好ましい実施形態においては、本発明の細胞取扱容器は光遮蔽材料を含む。光遮蔽材料を用いることにより、汎用の容器形成材料を用いて簡単に本発明の細胞取扱容器を製造することができる。

好ましい実施形態においては、上記光遮蔽材料が容器の厚み方向外側に偏在している。このような構成によれば、容器内部に収容される細胞が光遮蔽材料と接するのを防止して、光遮蔽材料による細胞への影響を抑制することができる。

好ましい実施形態においては、上記光遮蔽材料が光吸収剤である。このような形態によれば、例えば、観察時に容器外方に光が反射・散乱されて容器内部の視認性が低下する等の不具合を抑制して、優れた視認性を達成することができる。

好ましい実施形態においては、本発明の細胞取扱容器は、胚、受精卵、生殖細胞系列および生殖細胞に分化し得る細胞からなる群より選択される少なくとも１種の細胞用として用いられる。

好ましい実施形態においては、本発明の細胞取扱容器は、後述する式（Ｉ）で定義される青色光障害係数（Ｉ_ＢＬＨ）が、０〜８０．３７である。このような容器を用いることより、容器内部に収容される細胞、特に青色光に対してセンシティブな胚、受精卵等の観察や培養において青色光による悪影響を回避することができる。このような効果は、ＬＥＤ照明下において特に好適に発揮され得る。

本発明によれば、５００ｎｍ以下の波長領域の光を遮蔽し、容器内部への波長３６０ｎｍ以上５００ｎｍ以下の波長領域における積算透過率が９０％以下である光遮蔽部を形成することにより、容器内部に収容された細胞が可視光（特に、青色光）から影響を受けることなく、良好に細胞の観察、保存、培養等を行うことができる。

本発明の細胞取扱容器の一実施例を示す分解斜視図である。図１の細胞取扱容器の断面図である。各実施例の透過率曲線を示すグラフである。

以下、本発明の具体的実施例を図面に基づいて詳細に説明する。

図１および図２は、本発明の細胞取扱容器の一実施例を示す概略図であり、図１は分解斜視図であり、図２は図１の断面図である。

本実施例の細胞取扱容器１は、容器本体２と、この容器本体２に嵌合する蓋体３とを備える。容器本体２は、底板４と側壁５とを有する円筒状容器である。蓋体３は、円板部６の外周面に短円筒部７が一体形成されてなり、短円筒部７は円板部６の板面に対し一方へのみ突出する。蓋体３は、容器本体２の上部開口を覆うようになされる。

本実施例では、容器本体２および蓋体３は、その全体が、５００ｎｍ以下の波長領域の光を遮蔽する光遮蔽部とされている。この光遮蔽部において、容器１内部への波長３６０ｎｍ以上５００ｎｍ以下の波長領域における積算透過率は、好ましくは９０％以下、より好ましくは５０％以下である。

細胞取扱容器１（光遮蔽部）は、代表的には、光遮蔽材料を含む。光遮蔽材料は、容器の厚み方向全体に均一に存在させてもよいし、偏在させてもよい。本実施例では、図２に示すように、光遮蔽材料８は、容器の厚み方向外側に偏在している。このような構成によれば、容器内部に収容される細胞が光遮蔽材料と接するのを防止して、光遮蔽材料による細胞への影響を抑制することができる。

上記光遮蔽材料としては、５００ｎｍ以下の波長領域の光を遮蔽（例えば、吸収、反射、散乱）し、上記透過率を達成し得る材料が好ましく用いられる。光遮蔽材料としては、代表的には、有機系の光吸収剤、有機系の顔料、無機系微粒子等が用いられる。有機系の光吸収剤としては、例えば、２，４−ジヒドロキシ−５−（４−（２−（Ｎ−（２−メタクリロイルオキシエチル）カルバモイルオキシ）エチル）フェニルアゾ）ベンゾフェノン（ＢＭＡＣ）等のベンゾフェノン系吸収剤；２−［２’−ヒドロキシ−５’−（２”−メタクリロイルオキシエトキシ）−３’−ターシャリブチルフェニル］−５−メチル−２Ｈ−ベンゾトリアゾール等のベンゾトリアゾール系吸収剤等が挙げられる。有機系の顔料としては、例えば、イソインドリノンイエロー、イソインドリノンオレンジ等が挙げられる。無機系微粒子としては、例えば、ニッケルチタンイエロー、クロムチタンイエロー、プラセオジムイエロー等が挙げられる。これらは、単独でまたは２種以上組み合わせて用いることができる。これらの中でも、好ましくは、光吸収剤が用いられる。光吸収剤を用いることにより、例えば、観察時に容器外方に光が反射・散乱されて容器内部の視認性が低下する等の不具合を抑制して、優れた視認性を達成することができる。

なお、上記光遮断材料として、上記に加え、紫外線（ＵＶ）を遮蔽する材料を組み合わせて用いてもよい。ＵＶ遮蔽材料としては、例えば、ＵＶ吸収剤、無機系微粒子等が挙げられる。ＵＶ吸収剤としては、例えば、２，４−ジヒドロキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシ−ベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−ｎ−オクトキシベンゾフェノン等のベンゾフェノン系ＵＶ吸収剤；２−（２’−ヒドロキシ−５’−メチルフェニル）ベンゾトリアゾール、２−（２’−ヒドロキシ−５’−ｔ−オクチルフェニル）−ベンゾトリアゾール、２−（３’−ｔ−ブチル−２’−ヒドロキシ−５’−メチルフェニル）−５−クロロベンゾトリアゾール、２−（２’−ヒドロキシ−３’，５’−ジｔｅｒｔ−アミルフェニル）ベンゾトリアゾール、２−（２’−ヒドロキシ−３’，５ジ−ｔ−ブチルフェニル）−５−クロロ−ベンゾトリアゾール、２−［２’−ヒドロキシ−３，５−ジ（１，１−ジメチルベンジル）フェニル］−２Ｈ−ベンゾトリアゾール等のベンゾトリアゾール系ＵＶ吸収剤；パラジメチルアミノ安息香酸オクチル等のパラアミノ安息香酸系のＵＶ吸収剤；サリチル酸オクチル等のサリチル酸誘導体系ＵＶ吸収剤；メトキシケイ皮酸オクチル等のメトキシ桂皮酸誘導体系ＵＶ吸収剤等が挙げられる。無機系微粒子としては、例えば、酸化チタン、酸化亜鉛、酸化セリウム等が挙げられる。これらは、単独でまたは２種以上組み合わせて用いることができる。

細胞取扱容器（容器本体２および蓋体３）は、任意の適切な材料から形成され得る。形成材料としては、例えば、ポリスチレン樹脂、ポリエステル樹脂、ポリエチレン樹脂、ポリプロピレン樹脂、ＡＢＳ樹脂、ナイロン、アクリル樹脂、フッ素樹脂、ポリカーボネート樹脂、ポリウレタン樹脂、メチルペンテン樹脂、フェノール樹脂、メラミン樹脂、エポキシ樹脂、塩化ビニル樹脂等の樹脂が用いられる。また、形成材料として、含水性ゲル（例えば、ＨＥＭＡ、ＨＥＡ、Ｎ−ＶＰ、Ｎ−ＭＭＰ、ＧＭＡなどからなる樹脂）も用いることができる。

本実施例のように、光遮蔽材料が容器の厚み方向外側に偏在した細胞取扱容器は、例えば、二色成形により製造される。また、例えば、容器外面に、上記光遮蔽材料を含むコーティング材を塗布して光遮蔽層を形成することにより製造される。

本発明の細胞取扱容器は、図示例とは異なり、５００ｎｍ以下の波長領域の光を遮蔽（吸収）する材料で形成されてもよい。このような材料の具体例としては、例えば、芳香族ポリイミドが挙げられる。

本発明の細胞取扱容器の青色光障害係数（Ｉ_ＢＬＨ）は、好ましくは０〜８０．３７、より好ましくは０〜４４．６５である。青色光障害係数は、４００ｎｍ〜４９０ｎｍの波長領域における１０ｎｍ刻みの光遮蔽部における光透過率（％）と無水晶体の光化学的障害荷重関数とその波長測定間隔（ｎｍ）との積の和として、下記の式（Ｉ）によって定義される値である。
式中、Ｔ_λは、光遮蔽部における細胞取扱容器の内部への波長λｎｍの光の透過率（Ｔｒａｎｓｍｉｔｔａｎｃｅ）（％）であり、Ａ_λは、無水晶体の光化学的障害荷重関数（ＡｐｈａｋｉｃＰｈｏｔｏｃｈｅｍｉｃａｌＨａｚａｒｄＷｅｉｇｈｔｉｎｇＦｕｎｃｔｉｏｎ）であり、Δλは、Ａ_λの波長間隔（Ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｄｅｖｉａｔｉｏｎ）（ｎｍ）である。なお、Ａ_λは、ＩＳＯ１５００４−２：２００７（Ｅ）ＴａｂｌｅＡ．１中のＡｐｈａｋｉｃＰｈｏｔｏｃｈｅｍｉｃａｌＨａｚａｒｄＷｅｉｇｈｔｉｎｇＦｕｎｃｔｉｏｎを参照して決定される。また、Δλ（Ａ_λの波長間隔）は、上記ＩＳＯ１５００４−２：２００７（Ｅ）ＴａｂｌｅＡ．１に記載された関数の波長間隔（すなわち、１０ｎｍ）である。

本発明の細胞取扱容器は、可視光（特に、青色光）にセンシティブな細胞の観察、保存、培養等を行う器具として好適に用いられ得る。このような細胞の具体例としては、胚、受精卵、生殖細胞系列（例えば、精子、卵子、始原生殖細胞、精原細胞、精母細胞、卵原細胞、卵母細胞）、生殖細胞に分化し得る細胞（例えば、ＥＳ細胞、ｉＰＳ細胞）等が挙げられる。

本発明の細胞取扱容器は、上記実施例の構成に限らず適宜変更可能である。例えば、使用目的等に応じて、光遮蔽部の形状、配置等は適宜設定することができる。また、容器の形状や大きさも、適宜に変更可能である。

以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、本発明はこれら実施例によって限定されるものではない。なお、透過率の測定方法は以下のとおりである。
（透過率の測定方法）
紫外・可視分光光度計（株式会社島津製作所製、ＵＶ−３１５０）にて測定した。
測定モードは透過率モード、サンプリングピッチはオート、測定範囲は波長２２０ｎｍ−８００ｎｍにて測定した。
積算透過率については、０．５ｎｍピッチで生データから抽出し、３６０ｎｍ−５００ｎｍの透過率の平均値を算出した。

（実施例１）
ポリスチレンに、イソインドリノンイエローを０．０２重量％となるように添加し、分散させた。こうして得られた樹脂組成物を用いて厚み１ｍｍのプレートを作製した。
得られたプレートの波長３６０ｎｍ以上５００ｎｍ以下の波長領域における積算透過率は７４．６％であった。また、得られたプレートの透過率曲線は図３に示すとおりである。また、得られたプレートのＩ_ＢＬＨは、６５．７であった。

（実施例２）
イソインドリノンイエローの添加量を０．０１重量％としたこと以外は、実施例１と同様にしてプレートを作製した。
得られたプレートの波長３６０ｎｍ以上５００ｎｍ以下の波長領域における積算透過率は８６．４％であった。また、得られたプレートの透過率曲線は図３に示すとおりである。また、得られたプレートのＩ_ＢＬＨは、７６．６であった。

（実施例３）
イソインドリノンイエローの添加量を０．０６重量％としたこと以外は、実施例１と同様にしてプレートを作製した。
得られたプレートの波長３６０ｎｍ以上５００ｎｍ以下の波長領域における積算透過率は４１．６％であった。また、得られたプレートの透過率曲線は図３に示すとおりである。また、得られたプレートのＩ_ＢＬＨは、３５．７であった。

（実施例４）
イソインドリノンイエローの添加量を０．２０重量％としたこと以外は、実施例１と同様にしてプレートを作製した。
得られたプレートの波長３６０ｎｍ以上５００ｎｍ以下の波長領域における積算透過率は５．５％であった。また、得られたプレートの透過率曲線は図３に示すとおりである。また、得られたプレートのＩ_ＢＬＨは、４．３であった。

本発明の細胞取扱容器は、可視光（特に、青色光）にセンシティブな細胞の観察、保存、培養等を行う器具として好適に用いられ得る。

１細胞取扱容器
２容器本体
３蓋体
８光遮蔽材料

Claims

少なくとも一部が、５００ｎｍ以下の波長領域の光を遮蔽する光遮蔽部とされた細胞取扱容器であって、
該光遮蔽部において、容器内部への波長３６０ｎｍ以上５００ｎｍ以下の波長領域における積算透過率が９０％以下である、細胞取扱容器。
光遮蔽材料を含む、請求項１に記載の細胞取扱容器。
前記光遮蔽材料が容器の厚み方向外側に偏在している、請求項２に記載の細胞取扱容器。
前記光遮蔽材料が光吸収剤である、請求項２または３に記載の細胞取扱容器。
胚、受精卵、生殖細胞系列および生殖細胞に分化し得る細胞からなる群より選択される少なくとも１種の細胞用の請求項１から４のいずれかに記載の細胞取扱容器。
下記の式（Ｉ）で定義される青色光障害係数（Ｉ_ＢＬＨ）が、０〜８０．３７である、請求項１から５のいずれかに記載の細胞取扱容器。
（式中、Ｔ_λは、光遮蔽部における細胞取扱容器の内部への波長λｎｍの光の透過率（％）であり、Ａ_λは、無水晶体の光化学的障害荷重関数であり、Δλは、Ａ_λの波長間隔（ｎｍ）である。）