JP2014027925A - 菌体外多糖産生乳酸菌用培地、菌体外多糖産生菌の製造方法、菌体外多糖、菌体外多糖の製造方法、及びヨーグルトの製造方法 - Google Patents
菌体外多糖産生乳酸菌用培地、菌体外多糖産生菌の製造方法、菌体外多糖、菌体外多糖の製造方法、及びヨーグルトの製造方法 Download PDFInfo
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Abstract
【解決手段】 脱脂乳及び/又は還元脱脂乳にギ酸及び/又はギ酸塩を添加し、並びに/若しくは、脱脂乳及び/又は還元脱脂乳を加熱処理し、ギ酸及び/又はギ酸塩の合計の濃度を0.4〜10mMとした菌体外多糖産生乳酸菌用培地を得る。この菌体外多糖産生乳酸菌用培地で、菌体外多糖産生乳酸菌を培養する。
【選択図】 なし
Description
[1]脱脂乳及び/又は還元脱脂乳にギ酸及び/又はギ酸塩が添加されて、並びに/若しくは、脱脂乳及び/又は還元脱脂乳が加熱処理されて、ギ酸及び/又はギ酸塩の合計の濃度が0.4〜10mMとされたことを特徴とする菌体外多糖産生乳酸菌用培地。
[2]菌体外多糖産生乳酸菌が、ラクトバチルス・デルブルエッキー・サブスピーシス・ブルガリクス(Lactobacillus delbrueckii subsp. Bulgaricus)であることを特徴とする前記[1]に記載の菌体外多糖産生乳酸菌用培地。
[3]菌体外多糖産生乳酸菌が、Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus OLL1073R-1株(受託番号FERM BP-10741)であることを特徴とする前記[1]又は[2]に記載の菌体外多糖産生乳酸菌用培地。
[4]前記[1]〜[3]に記載の菌体外多糖産生乳酸菌用培地で菌体外多糖産生乳酸菌を培養することを特徴とする菌体外多糖産生乳酸菌の製造方法。
[5]前記[4]に記載の菌体外多糖産生乳酸菌の製造方法によって得られた菌体外多糖産生乳酸菌により産生されたことを特徴とする菌体外多糖。
[6]脱脂乳及び/又は還元脱脂乳にギ酸及び/又はギ酸塩が添加されて、並びに/若しくは、脱脂乳及び/又は還元脱脂乳が加熱処理されて、ギ酸及び/又はギ酸塩の合計の濃度が0.4〜10mMとされた培地で、菌体外多糖産生乳酸菌を培養し、菌体外多糖産生乳酸菌に菌体外多糖を産生させることを特徴とする菌体外多糖の製造方法。
[7]脱脂乳及び/又は還元脱脂乳にギ酸及び/又はギ酸塩が添加されて、並びに/若しくは、脱脂乳及び/又は還元脱脂乳が加熱処理されて、ギ酸及び/又はギ酸塩の合計の濃度が0.4〜10mMとされた原料乳を、菌体外多糖産生乳酸菌で発酵させ、菌体外多糖産生乳酸菌に菌体外多糖を産生させて、菌体外多糖を高含有するヨーグルトを得ることを特徴とするヨーグルトの製造方法。
[8]脱脂乳及び/又は還元脱脂乳にギ酸ナトリウムが添加された菌体外多糖産生乳酸菌用培地を用いて、菌体外多糖産生乳酸菌を培養することを特徴とする菌体外多糖産生乳酸菌の製造方法。
[9]脂乳及び/又は還元脱脂乳にギ酸ナトリウムが添加された菌体外多糖産生乳酸菌用培地を用いて、菌体外多糖産生乳酸菌を培養し、前記菌体外多糖産生乳酸菌に菌体外多糖を産生させることを特徴とする菌体外多糖の製造方法。
2.最終濃度が5〜10 %程度になるようにトリクロロ酢酸を添加してタンパク沈殿し、遠心分離する。
3.エタノール沈殿によって高分子量の多糖類や、タンパク質を沈殿として回収する。
4.タンパク質と核酸を除去する。
a) DNase、RNaseで核酸を分解処理する。
b) プロティナーゼでタンパクを分解する。
c) タンパク質を熱変性させた後、遠心分離と透析を行う。
5.陰イオン交換樹脂で酸性多糖体類を吸着した後、溶出して回収する。
1.培地にトリクロロ酢酸を最終濃度10 %で加え、タンパク質を変性させる。
2.遠心分離により培養物からタンパク質と菌体を除去する。
3.エタノール沈殿によって高分子量の多糖体を沈殿させこれを回収する。
4.陰イオン交換樹脂により酸性多糖体類を吸着させ、残りの溶出液より中性多糖体を回収する。
5.DNase、RNase処理により核酸を分解する。
6.プロティナーゼ処理によりタンパク質を分解する。
7.90 ℃、10分間加熱して酵素を失活させる。
8.エタノール沈殿、透析により中性多糖体を精製する。
タンパク質としては、例えば全脂粉乳、脱脂粉乳、部分脱脂粉乳、カゼイン、ホエイ粉、ホエイタンパク質、ホエイタンパク質濃縮物、ホエイタンパク質分離物、α−カゼイン、β−カゼイン、κ−カゼイン、β−ラクトグロブリン、α−ラクトアルブミン、ラクトフェリン、大豆タンパク質、鶏卵タンパク質、肉タンパク質等の動植物性タンパク質、これら加水分解物(例えば、バター、乳清ミネラル、クリーム、ホエイ、非タンパク態窒素、シアル酸、リン脂質、乳糖等の各種乳由来成分)などが挙げられる。糖類、加工澱粉(デキストリンのほか、可溶性澱粉、ブリティッシュスターチ、酸化澱粉、澱粉エステル、澱粉エーテル等)、食物繊維などが挙げられる。脂質としては、例えば、ラード、魚油等、これらの分別油、水素添加油、エステル交換油等の動物性油脂や、例えば、パーム油、サフラワー油、コーン油、ナタネ油、ヤシ油、これらの分別油、水素添加油、エステル交換油等の植物性油脂などが挙げられる。ビタミン類としては、例えば、ビタミンA、カロチン類、ビタミンB群、ビタミンC、ビタミンD群、ビタミンE、ビタミンK群、ビタミンP、ビタミンQ、ナイアシン、ニコチン酸、パントテン酸、ビオチン、イノシトール、コリン、葉酸などが挙げられ、ミネラル類としては、例えば、カルシウム、カリウム、マグネシウム、ナトリウム、銅、鉄、マンガン、亜鉛、セレン、乳清ミネラルなどが挙げられる。有機酸としては、例えば、リンゴ酸、クエン酸、乳酸、酒石酸などが挙げられる。
これらの成分は、2種以上を組み合わせて使用することができ、合成品及び/又はこれらを多く含む食品を用いてもよい。
低温殺菌(63 ℃、30分間)した還元脱脂乳(10重量%)の培地と、低温殺菌(63 ℃、30分間)した還元脱脂乳(10重量%)にギ酸塩(ギ酸ナトリウム)を100 mg/L(1.47 mM)の濃度になるように添加した培地に各々、OLL1073R-1株を播種し、37 ℃で培養しながら、培養液のpH、生菌数及び総菌数を経時的に測定した。そして、OLL1073R-1株の培養24時間後に、培養液に産生されたEPSを限外濾過(ultra-filtration kit USY-1、MW : 10,000 cut off、ADVANTEC社製)で回収した。
還元脱脂乳(10重量%)にギ酸塩を添加しなかった培地と、還元脱脂乳(10重量%)にギ酸塩(ギ酸ナトリウム)を添加した培地の各々による、OLL1073R-1株の細胞伸長や細胞壁の違いについて検討した。細胞伸長は、栄養が不足しているような状態の時に起こる現象であり、菌が弱っている状態を示す。また、細胞壁の損傷は、細胞表面の損傷として観察されるが、これも菌が弱っている状態を示す。OLL1073R-1株の培地の調製、OLL1073R-1株の培養条件(培養温度、培養時間)は、上述の試験例1と同等とした。OLL1073R-1株の培養24時間後に、培養液から菌体を回収し、走査電子顕微鏡(SEM)による菌体の観察を行った。
還元脱脂乳(10重量%)にギ酸塩を添加しなかった培地と、還元脱脂乳(10重量%)にギ酸塩(ギ酸ナトリウム)を添加した培地の各々による、OLL1073R-1株の抗生物質に対する感受性の違いについて検討した。抗生物質には、バンコマイシンとバシトラシンを使用した。バンコマイシン塩酸塩(1,050 IU/mg)とバシトラシン(40 IU/mg)を各々5.12 mg/mlの濃度に調製した後、精製水で段階的に希釈した(バンコマイシン:32、64、128 μg/mL、バシトラシン:32、64、128、256 μg/mL)。還元脱脂乳(10重量%)にギ酸塩を添加しなかった培地と、還元脱脂乳(10重量%)にギ酸塩を添加した培地の各々を、生理食塩水で段階的に希釈した。BCP加プレート寒天培地に100倍で希釈した培養液を100 μL添加した。この培地に直径6 mmの穴を設け、先に調製した抗生物質の溶液を20 μL添加した。その後、37 ℃、24時間で培養し、培養後の阻止円の直径を測定した。阻止円の直径が小さいほど抗生物質に対して抵抗をもつと評価される。
[1]脱脂乳及び/又は還元脱脂乳にギ酸及び/又はギ酸塩が添加されて、並びに/若しくは、脱脂乳及び/又は還元脱脂乳が加熱処理されて、ギ酸及び/又はギ酸塩の合計の濃度が0.4〜10mMとされたことを特徴とする菌体外多糖産生乳酸菌用培地。
[2]菌体外多糖産生乳酸菌が、ラクトバチルス・デルブルエッキー・サブスピーシス・ブルガリクス(Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus)であることを特徴とする前記[1]に記載の菌体外多糖産生乳酸菌用培地。
[3]菌体外多糖産生乳酸菌が、Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus OLL1073R-1株(受託番号FERM BP-10741)であることを特徴とする前記[1]又は[2]に記載の菌体外多糖産生乳酸菌用培地。
[4]前記[1]〜[3]に記載の菌体外多糖産生乳酸菌用培地で菌体外多糖産生乳酸菌を培養することを特徴とする菌体外多糖産生乳酸菌の製造方法。
[5]前記[4]に記載の菌体外多糖産生乳酸菌の製造方法によって得られた菌体外多糖産生乳酸菌により産生されたことを特徴とする菌体外多糖。
[6]脱脂乳及び/又は還元脱脂乳にギ酸及び/又はギ酸塩が添加されて、並びに/若しくは、脱脂乳及び/又は還元脱脂乳が加熱処理されて、ギ酸及び/又はギ酸塩の合計の濃度が0.4〜10mMとされた培地で、菌体外多糖産生乳酸菌を培養し、菌体外多糖産生乳酸菌に菌体外多糖を産生させることを特徴とする菌体外多糖の製造方法。
[7]脱脂乳及び/又は還元脱脂乳にギ酸及び/又はギ酸塩が添加されて、並びに/若しくは、脱脂乳及び/又は還元脱脂乳が加熱処理されて、ギ酸及び/又はギ酸塩の合計の濃度が0.4〜10mMとされた原料乳を、菌体外多糖産生乳酸菌で発酵させ、菌体外多糖産生乳酸菌に菌体外多糖を産生させて、菌体外多糖を高含有するヨーグルトを得ることを特徴とするヨーグルトの製造方法。
[8]脱脂乳及び/又は還元脱脂乳にギ酸ナトリウムが添加された菌体外多糖産生乳酸菌用培地を用いて、菌体外多糖産生乳酸菌を培養することを特徴とする菌体外多糖産生乳酸菌の製造方法。
[9]脂乳及び/又は還元脱脂乳にギ酸ナトリウムが添加された菌体外多糖産生乳酸菌用培地を用いて、菌体外多糖産生乳酸菌を培養し、前記菌体外多糖産生乳酸菌に菌体外多糖を産生させることを特徴とする菌体外多糖の製造方法。
2.最終濃度が5〜10重量%程度になるようにトリクロロ酢酸を添加してタンパク沈殿し、遠心分離する。
3.エタノール沈殿によって高分子量の多糖類や、タンパク質を沈殿として回収する。
4.タンパク質と核酸を除去する。
a) DNase、RNaseで核酸を分解処理する。
b) プロティナーゼでタンパクを分解する。
c) タンパク質を熱変性させた後、遠心分離と透析を行う。
5.陰イオン交換樹脂で酸性多糖体類を吸着した後、溶出して回収する。
1.培地にトリクロロ酢酸を最終濃度10重量%で加え、タンパク質を変性させる。
2.遠心分離により培養物から変性タンパク質と菌体を除去する。
3.エタノール沈殿によって高分子量の多糖体を沈殿させこれを回収する。
4.陰イオン交換樹脂により酸性多糖体類を吸着させ、残りの溶出液より中性多糖体を回収する。
5.DNase、RNase処理により核酸を分解する。
6.プロティナーゼ処理によりタンパク質を分解する。
7.90 ℃、10分間加熱して酵素を失活させる。
8.エタノール沈殿、透析により中性多糖体を精製する。
タンパク質としては、例えば全脂粉乳、脱脂粉乳、部分脱脂粉乳、カゼイン、ホエイ粉、ホエイタンパク質、ホエイタンパク質濃縮物、ホエイタンパク質分離物、α−カゼイン、β−カゼイン、κ−カゼイン、β−ラクトグロブリン、α−ラクトアルブミン、ラクトフェリン、大豆タンパク質、鶏卵タンパク質、肉タンパク質等の動植物性タンパク質、これら加水分解物(例えば、バター、乳清ミネラル、クリーム、ホエイ、非タンパク態窒素、シアル酸、リン脂質、乳糖等の各種乳由来成分)などが挙げられる。糖類、加工澱粉(デキストリンのほか、可溶性澱粉、ブリティッシュスターチ、酸化澱粉、澱粉エステル、澱粉エーテル等)、食物繊維などが挙げられる。脂質としては、例えば、ラード、魚油等、これらの分別油、水素添加油、エステル交換油等の動物性油脂や、例えば、パーム油、サフラワー油、コーン油、ナタネ油、ヤシ油、これらの分別油、水素添加油、エステル交換油等の植物性油脂などが挙げられる。ビタミン類としては、例えば、ビタミンA、カロチン類、ビタミンB群、ビタミンC、ビタミンD群、ビタミンE、ビタミンK群、ビタミンP、ビタミンQ、ナイアシン、ニコチン酸、パントテン酸、ビオチン、イノシトール、コリン、葉酸などが挙げられ、ミネラル類としては、例えば、カルシウム、カリウム、マグネシウム、ナトリウム、銅、鉄、マンガン、亜鉛、セレン、乳清ミネラルなどが挙げられる。有機酸としては、例えば、リンゴ酸、クエン酸、乳酸、酒石酸などが挙げられる。
これらの成分は、2種以上を組み合わせて使用することができ、合成品及び/又はこれらを多く含む食品を用いてもよい。
低温殺菌(63 ℃、30分間)した還元脱脂乳(10重量%)の培地と、低温殺菌(63 ℃、30分間)した還元脱脂乳(10重量%)にギ酸塩(ギ酸ナトリウム)を100 mg/L(1.47 mM)の濃度になるように添加した培地に各々、OLL1073R-1株を播種し、37 ℃で培養しながら、培養液のpH、生菌数及び総菌数を経時的に測定した。そして、OLL1073R-1株の培養24時間後に、培養液に産生されたEPSを限外濾過(ultra-filtration kit USY-1、MW : 10,000 cut off、ADVANTEC社製)で回収した。
還元脱脂乳(10重量%)にギ酸塩を添加しなかった培地と、還元脱脂乳(10重量%)にギ酸塩(ギ酸ナトリウム)を添加した培地の各々による、OLL1073R-1株の細胞伸長や細胞壁の違いについて検討した。細胞伸長は、栄養が不足しているような状態の時に起こる現象であり、菌が弱っている状態を示す。また、細胞壁の損傷は、細胞表面の損傷として観察されるが、これも菌が弱っている状態を示す。OLL1073R-1株の培地の調製、OLL1073R-1株の培養条件(培養温度、培養時間)は、上述の試験例1と同等とした。OLL1073R-1株の培養24時間後に、培養液から菌体を回収し、走査電子顕微鏡(SEM)による菌体の観察を行った。
還元脱脂乳(10重量%)にギ酸塩を添加しなかった培地と、還元脱脂乳(10重量%)にギ酸塩(ギ酸ナトリウム)を添加した培地の各々による、OLL1073R-1株の抗生物質に対する感受性の違いについて検討した。抗生物質には、バンコマイシンとバシトラシンを使用した。バンコマイシン塩酸塩(1,050 IU/mg)とバシトラシン(40 IU/mg)を各々5.12 mg/mlの濃度に調整した後、精製水で段階的に希釈した(バンコマイシン:32、64、128 μg/mL、バシトラシン:32、64、128、256 μg/mL)。還元脱脂乳(10重量%)にギ酸塩を添加しなかった培地と、還元脱脂乳(10重量%)にギ酸塩を添加した培地の各々を、生理食塩水で段階的に希釈した。BCP加プレート寒天培地に100倍で希釈した培養液を100 μL添加した。この培地に直径6 mmの穴を設け、先に調製した抗生物質の溶液を20 μL添加した。その後、37 ℃、24時間で培養し、培養後の阻止円の直径を測定した。阻止円の直径が小さいほど抗生物質に対して抵抗をもつと評価される。
Claims (9)
- 脱脂乳及び/又は還元脱脂乳にギ酸及び/又はギ酸塩が添加されて、並びに/若しくは、脱脂乳及び/又は脱脂粉乳が加熱処理されて、ギ酸及び/又はギ酸塩の合計の濃度が0.4〜10mMとされたことを特徴とする菌体外多糖産生乳酸菌用培地。
- 前記菌体外多糖産生乳酸菌が、ラクトバチルス・デルブルエッキー・サブスピーシス・ブルガリクス(Lactobacillus delbrueckii subsp. Bulgaricus)であることを特徴とする請求項1に記載の菌体外多糖産生乳酸菌用培地。
- 前記菌体外多糖産生乳酸菌が、Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus OLL1073R-1(受託番号FERM BP-10741)であることを特徴とする請求項1又は2に記載の菌体外多糖産生乳酸菌用培地。
- 請求項1〜3に記載の菌体外多糖産生乳酸菌用培地を用いて、菌体外多糖産生乳酸菌を培養することを特徴とする菌体外多糖産生乳酸菌の製造方法。
- 請求項4に記載の菌体外多糖産生乳酸菌の製造方法によって得られた菌体外多糖産生乳酸菌により産生されたことを特徴とする菌体外多糖。
- 脱脂乳及び/又は還元脱脂乳にギ酸及び/又はギ酸塩が添加されて、並びに/若しくは、脱脂乳及び/又は脱脂粉乳が加熱処理されて、ギ酸及び/又はギ酸塩の合計の濃度が0.4〜10mMとされた培地で、菌体外多糖産生乳酸菌を培養し、前記菌体外多糖産生乳酸菌に菌体外多糖を産生させることを特徴とする菌体外多糖の製造方法。
- 脱脂乳及び/又は還元脱脂乳にギ酸及び/又はギ酸塩が添加されて、並びに/若しくは、脱脂乳及び/又は脱脂粉乳が加熱処理されて、ギ酸及び/又はギ酸塩の合計の濃度が0.4〜10mMとされた原料乳を、菌体外多糖産生乳酸菌で発酵させ、前記菌体外多糖産生乳酸菌に菌体外多糖を産生させて、前記菌体外多糖を高含有するヨーグルトを得ることを特徴とするヨーグルトの製造方法。
- 脱脂乳及び/又は還元脱脂乳にギ酸ナトリウムが添加された菌体外多糖産生乳酸菌用培地を用いて菌体外多糖産生乳酸菌を培養することを特徴とする菌体外多糖産生乳酸菌の製造方法。
- 脱脂乳及び/又は還元脱脂乳にギ酸ナトリウムが添加された菌体外多糖産生乳酸菌用培地を用いて菌体外多糖産生乳酸菌を培養し、前記菌体外多糖産生乳酸菌に菌体外多糖を産生させることを特徴とする菌体外多糖の製造方法。
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