JP2014001237A - Percutaneous delivery system of peptide and related compound thereof - Google Patents
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Description
本発明は、ペプチドを正に荷電した水溶性プロドラッグに移行させることによるペプチド及び関連化合物の経皮送達システム、及び人又は動物において、ペプチド及び関連化合物により治療可能な状態を治療する際のその医薬用途に関する。より具体的に言うと、本発明は、ペプチド及び関連化合物の速い浸透を可能にし、それらを経皮投与可能にするためにある。 The present invention relates to a transdermal delivery system for peptides and related compounds by transferring the peptides to positively charged water-soluble prodrugs, and in treating conditions treatable by the peptides and related compounds in humans or animals. It relates to medical use. More specifically, the present invention is to allow fast penetration of peptides and related compounds and allow them to be administered transdermally.
全てのペプチドはポリマーであり、結合してポリマーを作るモノマーはアミノ酸である。２〜５０アミノ酸残基を含有する鎖は、集合的にペプチドと称される。もし鎖が５０アミノ酸残基より多いならば、それらはタンパク質と呼ばれる。ペプチドは、全ての生物において莫大な種類の役割を果たしている。ペプチドホルモンは、ホルモンのうちの最も大きなグループである。特定され、合成されるペプチドホルモンの数は増え続けている。それらは、生命をコントロールするプロセスにおいて興味深い役割を有している。１ナノグラムの甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン(hyrotropin-releasing hormone)をマウスに注入すると、血液から甲状腺へのヨウ化物の取り込みを増大させる (R.L. Kisliuk, Principles of Medicinal Chemistry, 4th Ed., W.O. Foyeなど、Eds., Williams & Wilkins, 4th Ed. 1995, p.606)。タフトシン (Thr-Lys-Pro-Arg) は、食作用を刺激し、抗体依存性の細胞傷害性を促進し (V .A. Najjar, Mol. Cell. Biochem. 41. 1, 1981)、脳及び小腸から単離されたMet-エンケファリン (Tyr-Gly-Gly-Phe-Met) は、同じ受容体と結合し、鎮痛作用を有するという点で、モルヒネが作用するように作用する (J.R.Jaffe及びW.R. Martin, in Pharmacological Basis of Therapeutics, A.G. Gilmanなど、Eds., New York, Pergamon Press, 1990, p.481)。オキシトシン (Pierceなど、J. Biol. Chem. 199, 929, 1952)、バソプレシン (Kammなど、J. Am. Chem. Soc. 50, 573, 1928), アンジオテンシン (J.C. Garrison及びM.J. Peach, in Pharmacological Basis of Therapeutics, A.G. Gilmanなど、Eds., New York, Pergamon Press, 1990, p.749)、ガストリン (P.C. Emson及びB.E.B. Sandberg, Annu, Rep. Med. Chem., 18, 31, 1983)、ソマトスタチン (A.V. Schallyなど、Annu. Rev. Biochem., 47, 89, 1978), ダイノルフィン (M.G. Weisskopfなど、Nature, 362, 423, 1993)、エンドセリン (A.M. Doherty, J. Med. Chem., 35, 1493, 1992)、セクレチン (E. Jorper, Gastroenterology, 55, 157, 1968)、カルシトニン (M.V.L. Rayなど、Biotechnology, 11, 64, 1993)、インスリン (F. Sanger, Br. Med. Bull., 16. 183, 1960)、及びその他多くは、構造が推定されたペプチドであり、それらは多くの病気の治療のために使用される。 All peptides are polymers, and the monomers that combine to make polymers are amino acids. Chains containing 2-50 amino acid residues are collectively referred to as peptides. If the chain has more than 50 amino acid residues, they are called proteins. Peptides play a vast variety of roles in all living organisms. Peptide hormones are the largest group of hormones. The number of peptide hormones identified and synthesized continues to increase. They have an interesting role in the process of controlling life. When one nanogram of thyrotropin releasing hormone (hyrotropin-releasing hormone) is injected into mice, increase the uptake of iodide into the thyroid from the blood (RL Kisliuk, Principles of Medicinal Chemistry , 4 th Ed., Etc. WO Foye, Eds., Williams & Wilkins, 4 th Ed. 1995, p.606). Tuftsin (Thr-Lys-Pro-Arg) stimulates phagocytosis and promotes antibody-dependent cytotoxicity (V.A.Najjar, Mol. Cell. Biochem. 41. 1, 1981) Met-enkephalin (Tyr-Gly-Gly-Phe-Met) isolated from the small intestine acts like morphine in that it binds to the same receptor and has analgesic effects (JRJaffe and WR Martin , in Pharmacological Basis of Therapeutics, AG Gilman et al., Eds., New York, Pergamon Press, 1990, p. 481). Oxytocin (Pierce et al., J. Biol. Chem. 199, 929, 1952), Vasopressin (Kamm et al., J. Am. Chem. Soc. 50, 573, 1928), Angiotensin (JC Garrison and MJ Peach, in Pharmacological Basis of Therapeutics, AG Gilman et al., Eds., New York, Pergamon Press, 1990, p. 749), gastrin (PC Emson and BEB Sandberg, Annu, Rep. Med. Chem., 18, 31, 1983), somatostatin (AV Schally Annu. Rev. Biochem., 47, 89, 1978), dynorphin (MG Weisskopf et al., Nature, 362, 423, 1993), endothelin (AM Doherty, J. Med. Chem., 35, 1493, 1992) , Secretin (E. Jorper, Gastroenterology, 55, 157, 1968), calcitonin (MVL Ray et al., Biotechnology, 11, 64, 1993), insulin (F. Sanger, Br. Med. Bull., 16. 183, 1960) , And many others are structure-presumed peptides, which are used for the treatment of many diseases.
残念ながら、ペプチド及び関連化合物は、タンパク質分解酵素により急速にタンパク質分解される。ペプチドを経口的に服用すると、それらは数分で破壊される。注射の場合、ペプチドの投与は痛みを伴い、多くの場合、慢性症状を治療するために頻繁で金のかかる来院が必要とされる。 Unfortunately, peptides and related compounds are rapidly proteolyzed by proteolytic enzymes. When peptides are taken orally, they are destroyed in minutes. In the case of injections, the administration of peptides is painful and often requires frequent and expensive visits to treat chronic symptoms.
薬物投与の一代替方法は、局所送達である。局所薬物送達は、いくつかの利点を有する。この方法は、肝臓及び消化管での初回通過代謝により引き起こされる薬物の不活性化を回避するのに役立つ。それは、全身に曝露されることなく、意図した作用部位に、適切な濃度の薬物の局所的な送達を供給し得る。Fishman（Fishman; Robert, 米国特許第7,052,715号明細書）は、経口薬物治療と関連した追加的な課題を指摘した。それは、疼痛又は炎症のある末端部を効果的に治療するためには、血流中で達成されなければならない濃度レベルが、有意でなければならないということである。これらのレベルはしばしば、疼痛又は損傷のある特定部位を正確に標的とすることが可能である場合に必要となるレベルよりもずっと高い。Yeagerは、男性の勃起不全の治療を目的にＰＧＥ1を送達するため、浸透エンハンサーを使用することを試みた（Yeager, James L. 米国特許第6,693,135号明細書）。Susan Milosovichらは、テストステロニル−４−ジメチルアミノブチラート塩酸塩(testosteronyl-4-dimethylaminobutyrate.HCl)（TSBH）を設計し、調製した。これは、親油性部分及び生理学的ｐＨにおいてプロトン化された形態で存在する第３級アミン基を有する。彼らは、プロドラッグ（TSBH）は、薬物（TS）それ自体よりも〜６０倍速く人の皮膚を通して拡散することを見出した［Susan Milosovichなど、J. Pharm. Sci., 82,227(1993)］。 An alternative method of drug administration is local delivery. Local drug delivery has several advantages. This method helps to avoid drug inactivation caused by first pass metabolism in the liver and gastrointestinal tract. It can provide local delivery of the appropriate concentration of drug to the intended site of action without being systemically exposed. Fishman (Fishman; Robert, US Pat. No. 7,052,715) pointed out additional challenges associated with oral drug therapy. That is, the concentration level that must be achieved in the bloodstream must be significant in order to effectively treat painful or inflamed ends. These levels are often much higher than required when it is possible to accurately target specific sites with pain or injury. Yeager attempted to use a penetration enhancer to deliver PGE 1 for the treatment of male erectile dysfunction (Yeager, James L. US Pat. No. 6,693,135). Susan Milosovich et al. Designed and prepared testosteronyl-4-dimethylaminobutyrate.HCl (TSBH). It has a lipophilic moiety and a tertiary amine group that exists in protonated form at physiological pH. They found that prodrug (TSBH) diffuses through human skin ~ 60 times faster than drug (TS) itself [Susan Milosovich et al., J. Pharm. Sci., 82, 227 (1993)].
ペプチドは、全ての生物において莫大な種類の役割を果たしており、それらは多くの病気の治療のために使用される。
残念ながら、ペプチド及び関連化合物は、タンパク質分解酵素により急速にタンパク質分解される。ペプチドを経口的に服用すると、それらは数分で破壊される。注射の場合、ペプチドの投与は痛みを伴い、多くの場合、慢性症状を治療するために頻繁で金のかかる来院が必要とされる。
Peptides play a huge variety of roles in all living organisms and they are used for the treatment of many diseases.
Unfortunately, peptides and related compounds are rapidly proteolyzed by proteolytic enzymes. When peptides are taken orally, they are destroyed in minutes. In the case of injections, the administration of peptides is painful and often requires frequent and expensive visits to treat chronic symptoms.
本発明は、ペプチド及び関連化合物の新規な正荷電プロドラッグの調製、並びにそれらの医薬用途に関する。ペプチド及び関連化合物のプロドラッグは、次式の構造１を有する。
式中、ＸはＯ、Ｓ、又はＮＨを表し、Ｘ1又はＸnはＣＯ、ＳＯ、ＳＯ2、ＰＯ（ＯＲ）、ＮＯ、又は何もないことを表し、Ｚn又はＺn1はＨ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5、Ｃ3Ｈ7、ＣＦ3、Ｃ2Ｆ5、又はＣ3Ｆ7を表し、Ｒnはアミノ酸の脂肪族側鎖、アミノ酸のヒドロキシル−若しくは硫黄含有側鎖、アミノ酸の芳香族側鎖、アミノ酸のアミノ、イミダゾリル、若しくはクアニジノ(quanidino)基含有側鎖、又はアミノ酸のカルボキシル若しくはカルボキサミド基含有側鎖のいずれか一つ、Ｈ、１〜１２炭素原子を有するアルキル、アルキルオキシ、アルケニル若しくはアルキニル残基のいずれか一つ、アリール又はヘテロアリール残基、又は何もないことを表し、Ｙx1、Ｙx2、又はＹnはＨ、１〜１２炭素原子を有するアルキル、アルキルオキシ、アルケニル若しくはアルキニル残基のいずれか一つ、アリール又はヘテロアリール残基、又は以下の基、
ペプチド又は関連化合物のこれらのプロドラッグをデザインするための原則は、以下の通りである。１．プロドラッグは、親油性部分及び生理学的ｐＨにおいてプロトン化された形態で存在する第１級、第２級若しくは第３級アミン基、クアニジノ基、又は１つが保護された(monoprotected)クアニジノ基（親水性部分）を有していなければならない。２．ペプチドの全てのプロドラッグは１つ又は２つだけ（好ましくは１つ）の、生理学的ｐＨにおいてプロトン化された形態で存在する第１級、第２級若しくは第３級アミン基、クアニジノ基、又は１つが保護されたクアニジノ基（親水性部分）を有するべきである。３．第１級、第２級若しくは第３級アミン基、クアニジノ基、又は１つが保護されたクアニジノ基は、Ｎ末端、Ｃ末端、又はペプチドの側鎖であり得る。Ｎ末端又はＣ末端部分が好ましい。４．ペプチドを親油性にするために、カルボキシル基、アミノ基、グアニジン基又は他の親水性基は、アルキル、アリール、若しくはヘテロアリールエステル又はアミド基で保護され得る。 The principles for designing these prodrugs of peptides or related compounds are as follows. 1. Prodrugs are lipophilic moieties and primary, secondary or tertiary amine groups, guanidino groups, or monoprotected guanidino groups (hydrophilic) that exist in protonated form at physiological pH. Sex part). 2. All prodrugs of the peptide are only one or two (preferably one) primary, secondary or tertiary amine groups, guanidino groups present in protonated form at physiological pH, Or one should have a protected guanidino group (hydrophilic moiety). 3. The primary, secondary or tertiary amine group, guanidino group, or one protected guanidino group can be N-terminal, C-terminal, or side chain of the peptide. N-terminal or C-terminal moieties are preferred. 4). To make the peptide lipophilic, the carboxyl group, amino group, guanidine group or other hydrophilic group can be protected with an alkyl, aryl, or heteroaryl ester or amide group.
以下のものはこれらのプロドラッグの例である。
式中、ＲはＨ、分枝鎖若しくは直鎖、-(CH2)n-であってｎ＝０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０……、アリール又はヘテロアリール残基を表し、Ｘ4、Ｘ5、Ｘ6、Ｘ7、Ｘ8、又はＸ9はＣＯ、ＳＯ2、ＰＯ（ＯＲ）、ＮＯ、又は何もないことを表し、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、又はＲ9はＨ、Ｏ、１〜１２炭素原子を有するアルキル、アルキルオキシ、アルケニル若しくはアルキニル残基のいずれか一つ、アリール又はヘテロアリール残基を表し、Ａ-はＣｌ-、Ｂｒ-、Ｆ-、Ｉ-、ＡｃＯ-、シトラート、又はいずれの陰イオンを表し、ｎ＝０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０であり、Ａｒはフェニル、２’−ナフチル、４−ヨードフェニル、又は他のアリール若しくはヘテロアリール残基を表し、全てのＲ、-(CH2)n-又は-(CH2)m-基は分枝鎖若しくは直鎖であり、Ｃ、Ｈ、Ｏ、Ｓ、又はＮ原子を含んでもよく、単結合、二重結合、及び三重結合を有してもよく、いずれのＣＨ2基はＯ、Ｓ又はＮＨと置換されてもよい。 In which R is H, branched or linear, — (CH 2 ) n —, where n = 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10,. Represents an aryl or heteroaryl residue, wherein X 4 , X 5 , X 6 , X 7 , X 8 , or X 9 represents CO, SO 2 , PO (OR), NO, or nothing, R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , or R 9 are H, O, any of alkyl, alkyloxy, alkenyl, or alkynyl residues having 1 to 12 carbon atoms. 1 represents an aryl or heteroaryl residue, A − represents Cl − , Br − , F − , I − , AcO − , citrate, or any anion, and n = 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 and Ar is phenyl, 2'-naphthyl, 4-iodophenyl, or other aryl or heteroaryl All R, — (CH 2 ) n — or — (CH 2 ) m — groups are branched or straight chain and may contain C, H, O, S, or N atoms. It may have a single bond, a double bond, and a triple bond, and any CH 2 group may be substituted with O, S or NH.
薬物吸収は、胃腸管からであろうと他の部位からであろうと、薬物が分子形で障壁膜を横断して通過することを必要とする。薬物は初めに溶解しなければならず、もし薬物が望ましい生物薬剤的性質を有しているならば、高濃度の領域から低濃度の領域へと膜を横断して通過し、血液循環又は体循環に入るだろう。全ての生物学的膜は、主要な構成成分として脂質を含有している。膜形成について主要な役割を果たしている分子は、全てホスファート含有高極性頭基(head group)を有し、たいていの場合、２つの高疎水性炭化水素尾部(tail)を有している。膜は２分子膜であり、その２つの親水性頭基は、両側にある水性領域へと外側を向いている。非常に親水性な薬物（ほとんどのペプチド）は膜の疎水性層を通過することができず、非常に疎水性な薬物はそれらの類似性のため膜の一部として疎水性層に留まり、それ故に内側にある細胞質ゾルに能率的に入ることができないだろう。 Drug absorption requires the drug to pass across the barrier membrane in molecular form, whether from the gastrointestinal tract or from other sites. The drug must first dissolve, and if the drug has the desired biopharmaceutical properties, it passes across the membrane from a high concentration region to a low concentration region, and blood circulation or body It will go into circulation. All biological membranes contain lipids as a major component. The molecules that play a major role in film formation all have a phosphate-containing high polarity head group, and in most cases have two highly hydrophobic hydrocarbon tails. The membrane is a bimolecular membrane, with its two hydrophilic head groups pointing outwards to the aqueous regions on both sides. Very hydrophilic drugs (most peptides) cannot pass through the hydrophobic layer of the membrane, and very hydrophobic drugs remain in the hydrophobic layer as part of the membrane due to their similarity Therefore, it will not be possible to efficiently enter the inner cytosol.
本発明の目的は、膜及び皮膚障壁を通してのそれらの浸透率を増大させることによって、ペプチド及び関連化合物を経皮投与（局所適用）可能にすることである。ペプチド及び関連化合物のこれらの新規なプロドラッグは、共通して２つの構造的特徴を有している。すなわち、これらは、（親油性のアルコールを使用してカルボキシル基を保護し、親油性の酸を使用してアミノ、ヒドロキシル、若しくはグアニジン基、又はペプチドの他の親水性基を保護することにより形成され得る）親油性部分、及び生理学的ｐＨにおいてプロトン化された形態で存在する第１級、第２級又は第３級アミン基、クアニジノ基、又は１つが保護されたクアニジノ基（親水性部分）を有している。膜障壁を通して能率的に通過するためには、このような親水性親油性バランスが必要とされる［Susan Milosovichなど、J. Pharm. Sci., 82,227(1993)］。正に荷電されたアミノ基は薬物の溶解性を大きく増大させ、親油性部分は、プロドラッグが親油性の膜及び皮膚障壁に入るのに役立つだろう。これらの新規なプロドラッグは、溶液、スプレー、ローション、軟膏、エマルジョン又はゲルのような投与形態で経皮投与されると、皮膚表面の水分中に直ちに溶解するだろう。これらのプロドラッグのアミノ基上にある正電荷は、膜のホスファート頭基上にある負電荷と結合するだろう。従って、膜の外側の局所的な濃度が非常に高くなり、高濃度の領域から低濃度の領域へのこれらのプロドラッグの通過を促進するだろう。これらのプロドラッグが膜に入るとき、親水性部分は、半液体状濃縮水溶液又は懸濁液である細胞質ゾルの中にプロドラッグを押し込むだろう。 The object of the present invention is to enable transdermal administration (topical application) of peptides and related compounds by increasing their permeability through membranes and skin barriers. These novel prodrugs of peptides and related compounds have two structural features in common. That is, they are formed by protecting the carboxyl group (using a lipophilic alcohol and protecting the amino, hydroxyl, or guanidine groups, or other hydrophilic groups of the peptide using a lipophilic acid. Lipophilic moiety, and primary, secondary or tertiary amine groups, guanidino groups, or one protected guanidino group (hydrophilic moiety) present in protonated form at physiological pH have. Such a hydrophilic / lipophilic balance is required for efficient passage through the membrane barrier [Susan Milosovich et al., J. Pharm. Sci., 82, 227 (1993)]. The positively charged amino group greatly increases the solubility of the drug and the lipophilic moiety will help the prodrug enter the lipophilic membrane and skin barrier. These new prodrugs will dissolve immediately in the skin surface moisture when administered transdermally in dosage forms such as solutions, sprays, lotions, ointments, emulsions or gels. A positive charge on the amino group of these prodrugs will combine with a negative charge on the phosphate head group of the membrane. Thus, the local concentration outside the membrane will be very high, facilitating the passage of these prodrugs from the high concentration region to the low concentration region. As these prodrugs enter the membrane, the hydrophilic portion will push the prodrug into the cytosol, which is a semi-liquid concentrated aqueous solution or suspension.
いくつかのプロドラッグの人の皮膚を通しての浸透率を、修正フランツ(Franz)細胞を使用することにより試験管内で測定した。修正フランツ細胞は前大腿部及び後大腿部のヒト皮膚組織（厚さ３６０〜４００μｍ）から単離した。受容液(receiving fluid)は生理食塩水中２％ウシ血清アルブミン２ｍｌからなり、６００ｒｐｍで撹拌した。時間に対する、皮膚に浸透するこれらのプロドラッグ及びそれらの親薬物の累積量を特異的な高速液体クロマトグラフィー法により測定した。ｐＨ７．４ホスファート緩衝液（０．２Ｍ）２ｍＬ中、いつくかのプロドラッグ及びペプチドの１０％溶液からなるドナーを使用して得た結果を図１に示す。人の皮膚を通して拡散する、Ac-Tyr(Ac)-Gly-Gly-Phe-Met-OCH2CH2N(CH2CH3)2.HC1、HC1.(CH3)2NCH2CH2CH2CO-Tyr(Ac)-Gly-Gly-Phe-Met-OCH2CH2CH2CH3、シクロ(1,6)-Ac-Nle-Asp-His-Phe-Arg(diAc)-Trp-Lys-OCH2CH2N(CH2CH3)2.HCl、シクロ(1,6)-Ac-Nle-Asp-His-D-Phe(4-I)-Arg(Ac)-Trp-Lys-NH2.HCl、シクロ(1,6)-Ac-Nle-Asp-His-D-Ala(2-ナフチル)-Arg-Trp-Lys-NH2.HCl、Ac-Val-Pro-Gly-Pro-Arg(diAc)-OCH2CH2N(CH2CH3)2.HCl、Ac-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-OH、シクロ(1,6)-Ac-Nle-Asp-His-Phe-Arg-Trp-Lys-OH、シクロ(1,6)-Ac-Nle-Asp-His-D-Phe(4-I)-Arg-Trp-Lys-NH2、及びH-Val-Pro-Gly-Pro-Arg-OHに対して、0.52 mg、0.55 mg、0.46 mg、0.34 mg、0.50 mg、0.60 mg、0.001 mg、0.001 mg、0.001 mg、及び0.001 mg/cm2/hという明白な流速値を計算した。本結果は、プロドラッグは、ペプチド及び関連化合物よりも３４０〜６００倍速く人の皮膚を通して拡散するということを示す。本結果は、ジアルキルアミノエチル基上の正電荷は、薬物が膜又は皮膚障壁を横断して通過することにおいて非常に重要な役割を有していることを示す。
The penetrance of several prodrugs through human skin was measured in vitro by using modified Franz cells. Modified Franz cells were isolated from human skin tissue (thickness 360-400 μm) in the front and back thighs. The receiving fluid consisted of 2
良いプロドラッグは、血漿中ですぐに変化して薬物それ自体に戻るべきである。本発明におけるペプチドのプロドラッグは、ヒト血漿中、良い収率で非常に速く変化して親ペプチドに戻り得る。全血１ｍｌ中、Ac-Tyr(Ac)-Gly-Gly-Phe-Met-OCH2CH2N(CH2CH3)2.HC1２０ｍｇを３７℃で３０分間インキュベートした。混合物をＨＰＬＣにより解析した。３％のAc-Tyr(Ac)-Gly-Gly-Phe-Met-OCH2CH2N(CH2CH3)2.HC1、２％のAc-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-OCH2CH2N(CH2CH3)2.HC1、８％のAc-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-OH、６０％のH-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-OH、２７％の他の副生成物（アミノ酸、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド）を観測した。HC1.(CH3)2NCH2CH2CH2CO-Tyr(Ac)-Gly-Gly-Phe-Met-OCH2CH2CH2CH3に対して、５％のHC1.(CH3)2NCH2CH2CH2CO-Tyr(Ac)-Gly-Gly-Phe-Met-OCH2CH2CH2CH3、６％の(CH3)2NCH2CH2CH2CO-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-OCH2CH2CH2CH3、１０％の(CH3)2NCH2CH2CH2CO-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-OH、５５％のH-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-OH、及び２４％の他の副生成物を観測した。シクロ(1,6)-Ac-Nle-Asp-His-Phe-Arg(diAc)-Trp-Lys-OCH2CH2N(CH2CH3)2.HClに対して、４％のシクロ(1,6)-Ac-Nle-Asp-His-Phe-Arg(diAc)-Trp-Lys-OCH2CH2N(CH2CH3)2.HCl、８％のシクロ(1,6)-Ac-Nle-Asp-His-Phe-Arg(Ac)-Trp-Lys-OH、１０％のシクロ(1,6)-Nle-Asp-His-Phe-Arg-Trp-Lys-OH、４５％のシクロ(1,6)-Ac-Nle-Asp-His-Phe-Arg-Trp-Lys-OH、３３％の他の副生成物を観測した。本結果は、ペプチドのプロドラッグのほとんどが変化して親ペプチドに戻り、従って、ペプチドの経皮送達システムは成功であるということを示す。
A good prodrug should change quickly in plasma and return to the drug itself. The prodrugs of peptides in the present invention can change very rapidly in good yield in human plasma back to the parent peptide. In 1 ml of whole blood, 120 mg of Ac-Tyr (Ac) -Gly-Gly-Phe-Met-OCH 2 CH 2 N (CH 2 CH 3 ) 2 .HC was incubated at 37 ° C. for 30 minutes. The mixture was analyzed by HPLC. 3% Ac-Tyr (Ac) -Gly- Gly-Phe-Met-
エンテロスタチン［Val-Pro-Asp-Pro-Arg(VPDPR)、Val-Pro-Gly-Pro-Arg(VPGPR)及びAla-Pro-Gly-Pro-Arg(APGPR)］は、トリプシン開裂(tryptic cleavage)後のプロコリパーゼのＮＨ2末端に由来するペンタペプチドであり、腸−脳(gut-brain)ペプチドのファミリーに属する。それらは脂肪摂取を調整し、肥満治療のために使用されてもよい (Erlanson-Albertsson C, York D, Obes. Rev. 1997 Jul; 5(4): 360-72及びSorhede M, Mei J, Erlanson-Albertsson C. , J Physiol. 87:273-275,1993)。H-Val-Pro-Asp-Pro-Arg-OHを一晩中飢えさせたOsborne-Mendelラットに腹腔内投与した場合、食物摂取の用量依存的な減少をもたらした。この摂食抑制は、ラットが高脂肪食を与えられた場合に観察されたが、高炭水化物、低脂肪食を与えられたラットにおいては観察されなかった (Okada S.など、Physiol Behav., 1991 Jun; 49(6): 1185-9)。暗いときに始まる(dark-onset)給餌時間の初めにおいて、ラットの背中に適用される水０．５ｍｌ中、５ｍｇ／ｋｇのAc-Val-Pro-Asp(OEt)-Pro-Arg(diAc)-OCH2CH2N(CH2CH3)2.HClを、ラット(n=5)に経皮投与した (n=5 それぞれ、食物を提示されて一晩中絶食したラットと随時食物を与えられたラットの両方)。脂肪摂取のこの選択的な抑制が観察された。 Enterostatin [Val-Pro-Asp-Pro-Arg (VPDPR), Val-Pro-Gly-Pro-Arg (VPGPR) and Ala-Pro-Gly-Pro-Arg (APGPR)] is a tryptic cleavage. It is a pentapeptide derived from the NH 2 terminus of later procolipase and belongs to the family of gut-brain peptides. They regulate fat intake and may be used for the treatment of obesity (Erlanson-Albertsson C, York D, Obes. Rev. 1997 Jul; 5 (4): 360-72 and Sorhede M, Mei J, Erlanson -Albertsson C., J Physiol. 87: 273-275,1993). Intraperitoneal administration of H-Val-Pro-Asp-Pro-Arg-OH to overnight starved Osborne-Mendel rats resulted in a dose-dependent decrease in food intake. This suppression of feeding was observed when rats were fed a high fat diet, but not in rats fed a high carbohydrate, low fat diet (Okada S. et al., Physiol Behav., 1991 Jun; 49 (6): 1185-9). At the beginning of the dark-onset feeding time, 5 mg / kg Ac-Val-Pro-Asp (OEt) -Pro-Arg (diAc)-in 0.5 ml water applied to the rat's back OCH 2 CH 2 N (CH 2 CH 3 ) 2 .HCl was administered transdermally to rats (n = 5) (n = 5 each, with food presented and fasted overnight and with food as needed. Both rats). This selective suppression of fat intake was observed.
メラノコルチンIIは環状ラクタムペプチド、シクロ(1,6)-Ac-Nle-Asp-His-Phe-Arg-Trp-Lys-OHである。それは、男性及び女性の性機能障害を治療するための、Palatinの（AMEX:PTN）新規な薬剤候補である。まず第一に、メラノコルチンアゴニストと呼ばれる治療の新規な分類において、メラノコルチンIIは、現在利用できるＥＤ薬において見られる心臓血管系への作用なしに、勃起不全（ＥＤ）及び女性の性機能障害を治療するのに有効である見込みを示した。メラノコルチンIIは、直接的に血管系に関係するよりむしろ、中枢神経系に関係するメカニズムを通して作用する。結果として、それは、現在利用できる製品を超える顕著な安全性及び有効性という利点を提供し得る。本発明の新規なプロドラッグは、非常に高い割合（〜０．３〜０．５ｍｇ／ｈ／ｃｍ2）で人の皮膚を通して拡散し得、ほとんど副作用のない、勃起不全を治療する又は女性の性的刺激を増強する方法を提供し得る。ｐＨ７．０ホスファート緩衝液（０．１Ｍ）０．２ｍｌ中、２ｍｇ／ｋｇのシクロ(1,6)-Ac-Nle-Asp-His-Phe-Arg(diAc)-Trp-Lys-OCH2CH2N(CH2CH3)2.HCl（ペプチドＡ）及びシクロ(1,6)-Ac-Nle-Asp-His-Phe-Arg(NO2)-Trp-Lys-OCH2CH2N(CH2CH3)2.HCl（ペプチドＢ）を、１日に１回、５日間、雄ラット（３０匹）の背中に適用した。結果、ペプチドＡ又はペプチドＢが与えられたラットでは、それが与えられなかったラットに比べて、勧誘(solicitation)において、ペプチドＡでは５倍の増加、ペプチドＢでは６倍の増加を示し、交尾において、ペプチドＡとペプチドＢの両方とも３倍の増加を示した。ｐＨ７．０ホスファート緩衝液（０．１Ｍ）０．２ｍｌ中、同量のシクロ(1,6)-Ac-Nle-Asp-His-Phe-Arg(diAc)-Trp-Lys-OCH2CH2N(CH2CH3)2.HCl（ペプチドＡ）及びシクロ(1,6)-Ac-Nle-Asp-His-Phe-Arg(NO2)-Trp-Lys-OCH2CH2N(CH2CH3)2.HCl（ペプチドＢ）を、１日に１回、５日間、雄ラット（３０匹）と雌ラット（３０匹）の両方の背中に適用した場合、その結果、ペプチドＡ又はペプチドＢが与えられたラットでは、それが与えられなかったラットに比べて、勧誘において６倍の増加を示し、交尾において５倍の増加を示した。 Melanocortin II is a cyclic lactam peptide, cyclo (1,6) -Ac-Nle-Asp-His-Phe-Arg-Trp-Lys-OH. It is a novel drug candidate for Palatin (AMEX: PTN) to treat male and female sexual dysfunction. First of all, in a new class of treatments called melanocortin agonists, melanocortin II treats erectile dysfunction (ED) and female sexual dysfunction without the cardiovascular effects seen in currently available ED drugs. Promising to be effective to do. Melanocortin II acts through mechanisms related to the central nervous system rather than directly related to the vasculature. As a result, it can provide significant safety and effectiveness advantages over currently available products. The novel prodrugs of the present invention can diffuse through human skin at very high rates (˜0.3-0.5 mg / h / cm 2 ) to treat erectile dysfunction with few side effects or in women A method of enhancing sexual stimulation can be provided. 2 mg / kg of cyclo (1,6) -Ac-Nle-Asp-His-Phe-Arg (diAc) -Trp-Lys-OCH 2 CH 2 in 0.2 ml of pH 7.0 phosphate buffer (0.1 M) N (CH 2 CH 3 ) 2 .HCl (peptide A) and cyclo (1,6) -Ac-Nle-Asp-His-Phe-Arg (NO 2 ) -Trp-Lys-OCH 2 CH 2 N (CH 2 CH 3 ) 2 .HCl (peptide B) was applied once a day for 5 days to the back of male rats (30 animals). As a result, rats given peptide A or peptide B showed a 5 fold increase in peptide A and a 6 fold increase in peptide B in solicitation compared to rats not given it. , Both peptide A and peptide B showed a 3-fold increase. The same amount of cyclo (1,6) -Ac-Nle-Asp-His-Phe-Arg (diAc) -Trp-Lys-OCH 2 CH 2 N in 0.2 ml of pH 7.0 phosphate buffer (0.1 M) (CH 2 CH 3 ) 2 .HCl (peptide A) and cyclo (1,6) -Ac-Nle-Asp-His-Phe-Arg (NO 2 ) -Trp-Lys-OCH 2 CH 2 N (CH 2 CH 3 ) 2. When HCl (peptide B) was applied once a day for 5 days to the back of both male rats (30) and female rats (30), the result was peptide A or peptide B The rats that were given a 6-fold increase in recruitment and a 5-fold increase in mating compared to rats that did not.
オピオイドペプチド、例えば、Met-エンケファリン（H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-OH）、Leu-エンケファリン（H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-OH）、H-Tyr-D-Ala-Gly-N-Me-Phe-Met(O)-OL、H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-OHなどは、モルヒネ様鎮痛作用を発揮する。酢酸溶液をマウスの腹腔内に投与したときに起こるライジング(writhing)数を数え、対照群に基づく抑制率を計算した。HCl.H-Tyr(Ac)-D-Ala-Gly-Phe-Leu-OCH2(CH2)4CH3（１０ｍｇ／ｋｇ、Ｂ）、Ac-Tyr(Ac)-D-Ala-Gly-Phe-Leu-OCH2CH2N(CH2CH3).HCl（１０ｍｇ／ｋｇ、Ｃ）、及びHCl.H-Tyr(Ac)-D-Ala-Gly-Phe-Met(O)-OL（１０ｍｇ／ｋｇ、Ｄ）を、酢酸溶液を投与する３０分前にマウスの頸部に経皮投与した。グループＡは対照群である。結果を表１に示す。
表１．エンケファリン及び関連化合物のプロドラッグによるライジング抑制率
Table 1. Rising inhibition rate by prodrugs of enkephalin and related compounds
ペプチド及び関連化合物は非常に親水性であり、皮膚膜障壁に浸透することができない。ペプチドを経口的に服用すると、ペプチド及び関連化合物は、消化管内で、数分でタンパク質分解酵素により急速にタンパク質分解される。注射の場合、ペプチドの投与は痛みを伴い、多くの場合、慢性症状を治療するために頻繁で金のかかる来院が必要とされる。ペプチドのプロドラッグが皮膚に局所適用されると、それらは皮膚の水分中に直ちに溶解するだろう。これらのプロドラッグのアミノ基上にある正電荷は、皮膚膜のホスファート頭基上にある負電荷と結合するだろう。従って、膜の外側の局所的な濃度が非常に高くなり、高濃度の領域から低濃度の領域へのこれらのプロドラッグの通過を促進するだろう。これらのプロドラッグが膜に入るとき、親水性部分は細胞質ゾルの中にプロドラッグを押し込むだろう。 Peptides and related compounds are very hydrophilic and cannot penetrate the skin membrane barrier. When peptides are taken orally, peptides and related compounds are rapidly proteolyzed by proteolytic enzymes in the digestive tract in minutes. In the case of injections, the administration of peptides is painful and often requires frequent and expensive visits to treat chronic symptoms. When peptide prodrugs are applied topically to the skin, they will immediately dissolve in the moisture of the skin. The positive charge on the amino group of these prodrugs will combine with the negative charge on the phosphate head group of the skin membrane. Thus, the local concentration outside the membrane will be very high, facilitating the passage of these prodrugs from the high concentration region to the low concentration region. As these prodrugs enter the membrane, the hydrophilic moiety will push the prodrug into the cytosol.
構造１で表される化合物は、標準的なペプチド合成プロトコルにより調製され得る。構造４−Ｃで表されるシクロペプチド及び関連化合物の調製では、標準的なペプチド合成プロトコルによりペプチド鎖は合成され得、リシンの側鎖は２−、又は４−Pyoc保護基により保護され、ペプチドの環化は樹脂上で行われた。
Compounds represented by
本発明におけるこれらのペプチド及び関連化合物のプロドラッグは、親油性部分及び親水性部分（生理学的ｐＨにおいてプロトン化された形態で存在するアミン基）を有する。これらのプロドラッグの正に荷電したアミノ基は２つの優れた利点を有する。第一に、プロドラッグを水中に溶解させる。すなわち、これらの新規なプロドラッグが、液体、スプレー、ローション、軟膏、エマルジョン又はゲルのような投与形態で経皮投与されるとき、これらは直ちに、皮膚、眼、生殖器部、口、鼻、又は身体の他の部分における水分と混合するだろう。第二に、これらのプロドラッグのアミノ基上にある正電荷は、膜のホスファート頭基上にある負電荷と結合するだろう。従って、膜の外側の局所的な濃度が非常に高くなり、高濃度の領域から低濃度の領域へのこれらのプロドラッグの通過を促進するだろう。プロドラッグの（親油性アルキル基で極性基を修飾することによる）親油性部分は、薬物が皮膚膜に入るのに役立つだろう。これらのプロドラッグが膜に入るとき、親水性部分は、半液体状濃縮水溶液又は懸濁液である細胞質ゾルの中にプロドラッグを押し込むだろう。皮膚、眼、生殖器部、口、鼻、又は身体の他の部分での短い残留のため、プロドラッグは、皮膚、眼、生殖器部、口、鼻、又は身体の他の部分に痒み、ヒリヒリ感又は痛みを引き起こさないだろう。実験結果は、４０％を超えるプロドラッグが、数分で変化して親ペプチドに戻ったということを示す。プロドラッグは、容易に血液脳関門に浸透しさえし得る。ペプチド及び関連化合物の経皮送達システムは、ペプチドホルモンを医薬的に使用できるようにし得る。これらのプロドラッグを経皮投与することのもう一つの大きな利点は、特に子供への、薬物投与がいっそう容易になるだろうということである。 The prodrugs of these peptides and related compounds in the present invention have a lipophilic moiety and a hydrophilic moiety (an amine group that exists in protonated form at physiological pH). The positively charged amino group of these prodrugs has two excellent advantages. First, the prodrug is dissolved in water. That is, when these novel prodrugs are administered transdermally in dosage forms such as liquids, sprays, lotions, ointments, emulsions or gels, they are immediately skin, eye, genital area, mouth, nose, or Will mix with moisture in other parts of the body. Second, the positive charge on the amino group of these prodrugs will combine with the negative charge on the phosphate head group of the membrane. Thus, the local concentration outside the membrane will be very high, facilitating the passage of these prodrugs from the high concentration region to the low concentration region. The lipophilic portion of the prodrug (by modifying the polar group with a lipophilic alkyl group) will help the drug enter the skin membrane. As these prodrugs enter the membrane, the hydrophilic portion will push the prodrug into the cytosol, which is a semi-liquid concentrated aqueous solution or suspension. Due to the short residue on the skin, eyes, genital area, mouth, nose, or other parts of the body, the prodrug itches the skin, eyes, genital area, mouth, nose, or other parts of the body Or it will not cause pain. Experimental results show that over 40% of the prodrug changed back to the parent peptide in minutes. Prodrugs can even penetrate the blood brain barrier easily. Transdermal delivery systems for peptides and related compounds may allow peptide hormones to be used pharmaceutically. Another major advantage of administering these prodrugs transdermally is that drug administration will be easier, especially to children.
（最良の形態）
Ac-Val-Pro-Asp(OEt)-Pro-Arg(diAc)-OCH2CH2N(CH2CH3)2.HClの調製
１．H-Arg(diAc)-OCH2CH2N(CH2CH3)2の調製
Z-Arg-OH３０．８ｇをアセトン５００ｍｌ中に溶解した。２０％ＮａＯＨ２００ｍｌを反応混合物に加えた。無水酢酸４０ｇを反応混合物に一滴ずつ加えた。混合物を室温で２時間撹拌した。溶媒を蒸発させた。残留物を酢酸エチル５００ｍｌで抽出した。酢酸エチル溶液を水（３×１００ｍｌ）で洗浄した。酢酸エチル層を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。酢酸エチル溶液を蒸発させて乾燥した。残留物（Z-Arg(diAc)-OH、３０ｇ）をアセトニトリル３００ｍｌ中に溶解した。混合物を氷水浴で０℃にまで冷却した。Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノエタノール１２ｇ、４−ジメチルアミノピリジン２ｇ、及び１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド２２ｇを反応混合物に加えた。反応混合物を０℃で１時間、及び室温で一晩中撹拌する。固形物を濾過により除去し、溶液を蒸発させて乾燥した。残留物を酢酸エチル（２×２５０ｍｌ）で抽出した。酢酸エチル溶液を５％重炭酸ナトリウム（１×５００ｍｌ）及び水（３×１００ｍｌ）で洗浄した。酢酸エチル溶液を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶液を蒸発させて乾燥する。残留物［Z-Arg(diAc)-OCH2CH2N(CH2CH3)2、２８ｇ］をメタノール３００ｍｌ中に溶解した。１０％Ｐｄ／Ｃ２ｇを溶液に加えた。混合物を水素下、室温で１０時間撹拌した。Ｐｄ／Ｃを濾過により除去した。溶液を蒸発させて乾燥した。H-Arg(diAc)-OCH2CH2N(CH2CH3)2２２ｇを得た。
(Best form)
Preparation of Ac-Val-Pro-Asp (OEt) -Pro-Arg (diAc) -OCH 2 CH 2 N (CH 2 CH 3 ) 2 .HCl Preparation of H-Arg (diAc) -OCH 2 CH 2 N (CH 2 CH 3 ) 2
30.8 g of Z-Arg-OH was dissolved in 500 ml of acetone. 200 ml of 20% NaOH was added to the reaction mixture. 40 g of acetic anhydride was added dropwise to the reaction mixture. The mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The solvent was evaporated. The residue was extracted with 500 ml of ethyl acetate. The ethyl acetate solution was washed with water (3 × 100 ml). The ethyl acetate layer was dried over sodium sulfate. The ethyl acetate solution was evaporated to dryness. The residue (Z-Arg (diAc) -OH, 30 g) was dissolved in 300 ml of acetonitrile. The mixture was cooled to 0 ° C. with an ice-water bath. 12 g N, N-diethylaminoethanol, 2 g 4-dimethylaminopyridine, and 22
２．Boc-Asp(OEt)-Pro-OSuの調製
L-プロリン１５ｇを１０％重炭酸ナトリウム３００ｍｌ中に溶解した。アセトン１５０ｍｌ及びBoc-Asp(OEt)-OSu３６ｇを反応混合物に加えた。混合物を室温で５時間撹拌した。混合物をエーテル（１×３００ｍｌ）で洗浄した。酢酸エチル５００ｍｌを水層に加えた。混合物のｐＨを氷冷した３ＮＨＣｌで２．４〜２．５に調整した。酢酸エチル層を集め、水（３×３００ｍｌ）で洗浄した。有機溶液を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶液を蒸発させて乾燥した。残留物（Boc-Asp(OEt)-Pro-OH）２５ｇ及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド１１ｇをジクロロメチレン(dichloromethlene)３００ｍｌ中に溶解した。混合物を０℃に冷却した。１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド１６ｇを反応混合物に加えた。混合物を０℃で１時間撹拌した。固形物を濾過により除去した。ジクロロメチレン溶液を５％重炭酸ナトリウム（１×２００ｍｌ）及び水（３×２００ｍｌ）で洗浄した。有機溶液を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶液を蒸発させて乾燥した。Boc-Asp(OEt)-Pro-OSu２８ｇを得た。
2. Preparation of Boc-Asp (OEt) -Pro-OSu
15 g of L-proline was dissolved in 300 ml of 10% sodium bicarbonate. 150 ml of acetone and 36 g of Boc-Asp (OEt) -OSu were added to the reaction mixture. The mixture was stirred at room temperature for 5 hours. The mixture was washed with ether (1 × 300 ml). 500 ml of ethyl acetate was added to the aqueous layer. The pH of the mixture was adjusted to 2.4-2.5 with ice-cold 3N HCl. The ethyl acetate layer was collected and washed with water (3 × 300 ml). The organic solution was dried over sodium sulfate. The solution was evaporated to dryness. 25 g of the residue (Boc-Asp (OEt) -Pro-OH) and 11 g of N-hydroxysuccinimide were dissolved in 300 ml of dichloromethlene. The mixture was cooled to 0 ° C. 16 g of 1,3-dicyclohexylcarbodiimide was added to the reaction mixture. The mixture was stirred at 0 ° C. for 1 hour. The solid was removed by filtration. The dichloromethylene solution was washed with 5% sodium bicarbonate (1 × 200 ml) and water (3 × 200 ml). The organic solution was dried over sodium sulfate. The solution was evaporated to dryness. 28 g of Boc-Asp (OEt) -Pro-OSu was obtained.
３．H-Asp(OEt)-Pro-Arg(diAc)-OCH2CH2N(CH2CH3)2.2TFAの調製
H-Arg(diAc)-OCH2CH2N(CH2CH3)2２２ｇを５％ＮａＨＣＯ3３００ｍｌ中に溶解した。アセトン１５０ｍｌ中のBoc-Asp(OEt)-Pro-OSu２４ｇを反応混合物に加えた。混合物を室温で５時間撹拌した。酢酸エチル５００ｍｌを混合物に加えた。酢酸エチル溶液を水（３×１００ｍｌ）で洗浄した。有機溶液を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶液を蒸発させて乾燥した。残留物をジクロロメチレン２５０ｍｌ中に溶解した。トリフルオロ酢酸２５０ｍｌを混合物に加え、混合物を３０分間撹拌した。混合物を蒸発させて乾燥した。H-Asp(OEt)-Pro-Arg(diAc)-OCH2CH2N(CH2CH3)2.2TFA３２ｇを得た。
3. Preparation of H-Asp (OEt) -Pro-Arg (diAc) -OCH 2 CH 2 N (CH 2 CH 3 ) 2 .2TFA
22 g of H-Arg (diAc) -OCH 2 CH 2 N (CH 2 CH 3 ) 2 was dissolved in 300 ml of 5% NaHCO 3 . 24 g of Boc-Asp (OEt) -Pro-OSu in 150 ml of acetone was added to the reaction mixture. The mixture was stirred at room temperature for 5 hours. 500 ml of ethyl acetate was added to the mixture. The ethyl acetate solution was washed with water (3 × 100 ml). The organic solution was dried over sodium sulfate. The solution was evaporated to dryness. The residue was dissolved in 250 ml of dichloromethylene. 250 ml of trifluoroacetic acid was added to the mixture and the mixture was stirred for 30 minutes. The mixture was evaporated to dryness. It was obtained H-Asp (OEt) -Pro- Arg (diAc) -
４．Ac-Val-Pro-OSuの調製
L-プロリン１５ｇを１０％重炭酸ナトリウム３００ｍｌ中に溶解した。アセトン１５０ｍｌ及びAc-VaI-OSu２６ｇを反応混合物に加えた。混合物を室温で５時間撹拌した。混合物をエーテル（１×３００ｍｌ）で洗浄した。酢酸エチル５００ｍｌを水層に加えた。混合物のｐＨを氷冷した３ＮＨＣｌで２．４〜２．５に調整した。酢酸エチル層を集め、水（３×３００ｍｌ）で洗浄した。有機溶液を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶液を蒸発させて乾燥した。残留物（Ac-Val-Pro-OH）２０ｇ及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド１１ｇをジクロロメチレン３００ｍｌ中に溶解した。混合物を０℃に冷却した。１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド１６ｇを反応混合物に加えた。混合物を０℃で１時間、及び室温で１時間撹拌した。固形物を濾過により除去した。ジクロロメチレン溶液を５％重炭酸ナトリウム（１×２００ｍｌ）及び水（３×２００ｍｌ）で洗浄した。有機溶液を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶液を蒸発させて乾燥した。Ac-Val-Pro-OSu２０ｇを得た。
4). Preparation of Ac-Val-Pro-OSu
15 g of L-proline was dissolved in 300 ml of 10% sodium bicarbonate. 150 ml of acetone and 26 g of Ac-VaI-OSu were added to the reaction mixture. The mixture was stirred at room temperature for 5 hours. The mixture was washed with ether (1 × 300 ml). 500 ml of ethyl acetate was added to the aqueous layer. The pH of the mixture was adjusted to 2.4-2.5 with ice-cold 3N HCl. The ethyl acetate layer was collected and washed with water (3 × 300 ml). The organic solution was dried over sodium sulfate. The solution was evaporated to dryness. 20 g of the residue (Ac-Val-Pro-OH) and 11 g of N-hydroxysuccinimide were dissolved in 300 ml of dichloromethylene. The mixture was cooled to 0 ° C. 16 g of 1,3-dicyclohexylcarbodiimide was added to the reaction mixture. The mixture was stirred at 0 ° C. for 1 hour and at room temperature for 1 hour. The solid was removed by filtration. The dichloromethylene solution was washed with 5% sodium bicarbonate (1 × 200 ml) and water (3 × 200 ml). The organic solution was dried over sodium sulfate. The solution was evaporated to dryness. Ac-Val-Pro-OSu 20g was obtained.
５．Ac-Val-Pro-Asp(OEt)-Pro-Arg(diAc)-OCH2CH2N(CH2CH3)2.HClの調製
H-Asp(OEt)-Pro-Arg(diAc)-OCH2CH2N(CH2CH3)2.2TFA３１ｇを１０％重炭酸ナトリウム３００ｍｌ中に溶解した。アセトン１５０ｍｌ及びAc-Val-Pro-OSu１５ｇを反応混合物に加えた。混合物を室温で５時間撹拌した。酢酸エチル５００ｍｌを混合物に加えた。有機層を水（３×１００ｍｌ）で洗浄する。酢酸エチル層を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。硫酸ナトリウムを濾過により除去する。ジオキサン（５０ｍｌ）中ＨＣｌガス３．５ｇを溶液に加える。固形物を集め、エーテル（３×５０ｍｌ）で洗浄する。乾燥後、所望の吸湿性生成物２０ｇを得た。水中での溶解性：150mg/ml、元素分析：Ｃ39Ｈ66ＣｌＮ9Ｏ11、分子量：872.45、計算％ C: 53.69; H: 7.62; Cl: 4.06; N: 14.45; O: 20.17、実測％ C: 53.61; H: 7.67; Cl: 4.10; N: 14.40, O: 20.22、MS: m/e: 836.4; m/e+1: 836.4。
5. Preparation of Ac-Val-Pro-Asp (OEt) -Pro-Arg (diAc) -OCH 2 CH 2 N (CH 2 CH 3 ) 2 .HCl
31 g of H-Asp (OEt) -Pro-Arg (diAc) -OCH 2 CH 2 N (CH 2 CH 3 ) 2 .2 TFA was dissolved in 300 ml of 10% sodium bicarbonate. 150 ml of acetone and 15 g of Ac-Val-Pro-OSu were added to the reaction mixture. The mixture was stirred at room temperature for 5 hours. 500 ml of ethyl acetate was added to the mixture. The organic layer is washed with water (3 × 100 ml). The ethyl acetate layer was dried over sodium sulfate. Sodium sulfate is removed by filtration. Add 3.5 g of HCl gas in dioxane (50 ml) to the solution. Collect the solid and wash with ether (3 × 50 ml). After drying, 20 g of the desired hygroscopic product was obtained. Solubility in water: 150 mg / ml, elemental analysis: C 39 H 66 ClN 9 O 11 , molecular weight: 872.45, calculated% C: 53.69; H: 7.62; Cl: 4.06; N: 14.45; O: 20.17, measured% C: 53.61; H: 7.67; Cl: 4.10; N: 14.40, O: 20.22, MS: m / e: 836.4; m / e + 1: 836.4.
（発明の形態）
Ac-Tyr(Ac)-Gly-Gly-Phe-Met-OCH2CH2N(CH2CH3)2.HClの調製
１．H-Met-OCH2CH2N(CH2CH3)2.TFAの調製
Boc-Met-OH２５ｇをジクロロメチレン３００ｍｌ中に溶解した。混合物を氷水浴で０℃にまで冷却した。Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノエタノール１２ｇ、４−ジメチルアミノピリジン２ｇ、及び１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド２２ｇを反応混合物に加えた。反応混合物を０℃で１時間、及び室温で一晩中撹拌する。固形物を濾過により除去し、ジクロロメチレン溶液を５％重炭酸ナトリウム（１×５００ｍｌ）及び水（３×１００ｍｌ）で洗浄した。酢酸エチル溶液を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶液を蒸発させて乾燥する。残留物［Boc-Met-OCH2CH2N(CH2CH3)2、３０ｇ］をジクロロメチレン２５０ｍｌ中に溶解した。トリフルオロ酢酸２５０ｍｌを混合物に加え、混合物を３０分間撹拌する。溶液を蒸発させて乾燥した。H-Met-OCH2CH2N(CH2CH3)2.TFA２６ｇを得た。
(Mode of Invention)
Preparation of Ac-Tyr (Ac) -Gly-Gly-Phe-Met-OCH 2 CH 2 N (CH 2 CH 3 ) 2 .HCl Preparation of H-Met-OCH 2 CH 2 N (CH 2 CH 3 ) 2 .TFA
25 g of Boc-Met-OH was dissolved in 300 ml of dichloromethylene. The mixture was cooled to 0 ° C. with an ice-water bath. 12 g N, N-diethylaminoethanol, 2 g 4-dimethylaminopyridine, and 22
２．Boc-Gly-Phe-OSuの調製
L-フェニルアラニン２０ｇを１０％重炭酸ナトリウム３００ｍｌ中に溶解した。アセトン１５０ｍｌ及びBoc-Gly-OSu２８ｇを反応混合物に加えた。混合物を室温で５時間撹拌した。混合物をエーテル（１×３００ｍｌ）で洗浄した。酢酸エチル５００ｍｌを水層に加えた。混合物のｐＨを氷冷した３ＮＨＣｌで２．４〜２．５に調整した。酢酸エチル層を集め、水（３×３００ｍｌ）で洗浄した。有機溶液を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶液を蒸発させて乾燥した。残留物（Boc-Gly-Phe-OH）２２ｇ及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド１０ｇをジクロロメチレン３００ｍｌ中に溶解した。混合物を０℃に冷却した。１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド１５ｇを反応混合物に加えた。混合物を０℃で１時間撹拌した。固形物を濾過により除去した。ジクロロメチレン溶液を５％重炭酸ナトリウム（１×２００ｍｌ）及び水（３×２００ｍｌ）で洗浄する。有機溶液を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶液を蒸発させて乾燥した。Boc-Gly-Phe-OSu２５ｇを得た。
2. Preparation of Boc-Gly-Phe-OSu
20 g of L-phenylalanine was dissolved in 300 ml of 10% sodium bicarbonate. 150 ml of acetone and 28 g of Boc-Gly-OSu were added to the reaction mixture. The mixture was stirred at room temperature for 5 hours. The mixture was washed with ether (1 × 300 ml). 500 ml of ethyl acetate was added to the aqueous layer. The pH of the mixture was adjusted to 2.4-2.5 with ice-cold 3N HCl. The ethyl acetate layer was collected and washed with water (3 × 300 ml). The organic solution was dried over sodium sulfate. The solution was evaporated to dryness. 22 g of residue (Boc-Gly-Phe-OH) and 10 g of N-hydroxysuccinimide were dissolved in 300 ml of dichloromethylene. The mixture was cooled to 0 ° C. 15 g of 1,3-dicyclohexylcarbodiimide was added to the reaction mixture. The mixture was stirred at 0 ° C. for 1 hour. The solid was removed by filtration. The dichloromethylene solution is washed with 5% sodium bicarbonate (1 × 200 ml) and water (3 × 200 ml). The organic solution was dried over sodium sulfate. The solution was evaporated to dryness. 25 g of Boc-Gly-Phe-OSu was obtained.
３．H-Gly-Phe-Met-OCH2CH2N(CH2CH3)2.TFAの調製
H-Met-OCH2CH2N(CH2CH3)2.TFA２５ｇを５％ＮａＨＣＯ3３００ｍｌ中に溶解した。アセトン１５０ｍｌ中のBoc-Gly-Phe-OSu２２ｇを反応混合物に加えた。混合物を室温で５時間撹拌した。酢酸エチル５００ｍｌを混合物に加えた。酢酸エチル溶液を水（３×１００ｍｌ）で洗浄した。有機溶液を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶液を蒸発させて乾燥した。残留物をジクロロメチレン２５０ｍｌ中に溶解した。トリフルオロ酢酸２００ｍｌを混合物に加え、混合物を３０分間撹拌した。混合物を蒸発させて乾燥した。H-Gly-Phe-Met-OCH2CH2N(CH2CH3)2.TFA２５ｇを得た。
3. Preparation of H-Gly-Phe-Met-OCH 2 CH 2 N (CH 2 CH 3 ) 2 .TFA
H-Met-OCH 2 CH 2 N (CH 2 CH 3 ) 2 .25 g TFA was dissolved in 300 ml 5% NaHCO 3 . 22 g of Boc-Gly-Phe-OSu in 150 ml of acetone was added to the reaction mixture. The mixture was stirred at room temperature for 5 hours. 500 ml of ethyl acetate was added to the mixture. The ethyl acetate solution was washed with water (3 × 100 ml). The organic solution was dried over sodium sulfate. The solution was evaporated to dryness. The residue was dissolved in 250 ml of dichloromethylene. 200 ml of trifluoroacetic acid was added to the mixture and the mixture was stirred for 30 minutes. The mixture was evaporated to dryness. H-Gly-Phe-Met-OCH 2 CH 2 N (CH 2 CH 3 ) 2 .25 g TFA was obtained.
４．Ac-Tyr(Ac)-Gly-OSuの調製
L-グリシン１１ｇを１０％重炭酸ナトリウム３００ｍｌ中に溶解した。アセトン１５０ｍｌ及びAc-Tyr(Ac)-OSu３６ｇを反応混合物に加えた。混合物を室温で５時間撹拌した。混合物をエーテル（１×３００ｍｌ）で洗浄した。酢酸エチル５００ｍｌを水層に加えた。混合物のｐＨを氷冷した３ＮＨＣｌで２．４〜２．５に調整した。酢酸エチル層を集め、水（３×３００ｍｌ）で洗浄した。有機溶液を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶液を蒸発させて乾燥した。残留物（Ac-Tyr(Ac)-Gly-OH）２８ｇ及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド１３ｇをジクロロメチレン３００ｍｌ中に溶解した。混合物を０℃に冷却した。１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド１８ｇを反応混合物に加えた。混合物を０℃で１時間撹拌した。固形物を濾過により除去した。ジクロロメチレン溶液を５％重炭酸ナトリウム（１×２００ｍｌ）及び水（３×２００ｍｌ）で洗浄する。有機溶液を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶液を蒸発させて乾燥した。Ac-Tyr(Ac)-Gly-OSu２０ｇを得た。
4). Preparation of Ac-Tyr (Ac) -Gly-OSu
11 g of L-glycine was dissolved in 300 ml of 10% sodium bicarbonate. 150 ml of acetone and 36 g of Ac-Tyr (Ac) -OSu were added to the reaction mixture. The mixture was stirred at room temperature for 5 hours. The mixture was washed with ether (1 × 300 ml). 500 ml of ethyl acetate was added to the aqueous layer. The pH of the mixture was adjusted to 2.4-2.5 with ice-cold 3N HCl. The ethyl acetate layer was collected and washed with water (3 × 300 ml). The organic solution was dried over sodium sulfate. The solution was evaporated to dryness. 28 g of the residue (Ac-Tyr (Ac) -Gly-OH) and 13 g of N-hydroxysuccinimide were dissolved in 300 ml of dichloromethylene. The mixture was cooled to 0 ° C. 18 g of 1,3-dicyclohexylcarbodiimide was added to the reaction mixture. The mixture was stirred at 0 ° C. for 1 hour. The solid was removed by filtration. The dichloromethylene solution is washed with 5% sodium bicarbonate (1 × 200 ml) and water (3 × 200 ml). The organic solution was dried over sodium sulfate. The solution was evaporated to dryness. 20 g of Ac-Tyr (Ac) -Gly-OSu was obtained.
５．Ac-Tyr(Ac)-Gly-Gly-Phe-Met-OCH2CH2N(CH2CH3)2.HClの調製
H-Gly-Phe-Met-OCH2CH2N(CH2CH3)2.TFA２４ｇを１０％重炭酸ナトリウム３００ｍｌ中に溶解した。アセトン１５０ｍｌ及びAc-Tyr(Ac)-Gly-OSu１５ｇを反応混合物に加えた。混合物を室温で５時間撹拌した。酢酸エチル５００ｍｌを混合物に加えた。有機層を水（３×１００ｍｌ）で洗浄する。酢酸エチル層を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。硫酸ナトリウムを濾過により除去する。ジオキサン（５０ｍｌ）中ＨＣｌガス３．５ｇを溶液に加える。固形物を集め、エーテル（３×５０ｍｌ）で洗浄する。乾燥後、所望の吸湿性生成物１８ｇを得た。水中での溶解性：200mg/ml、元素分析：Ｃ37Ｈ53ＣｌＮ6Ｏ9Ｓ、分子量：793.37、計算％ C: 56.01; H: 6.73; Cl: 4.47; N: 10.59; O: 18.15; S: 4.04、実測％ C: 55.96; H: 6.76; Cl: 4.52; N: 10.54, O: 18.19; S: 4.03、MS: m/e: 757.4; m/e+1: 758.4。
5. Preparation of Ac-Tyr (Ac) -Gly-Gly-Phe-Met-OCH 2 CH 2 N (CH 2 CH 3 ) 2 .HCl
H-Gly-Phe-Met-OCH 2 CH 2 N (CH 2 CH 3 ) 2 .24 g TFA was dissolved in 300 ml 10% sodium bicarbonate. 150 ml of acetone and 15 g of Ac-Tyr (Ac) -Gly-OSu were added to the reaction mixture. The mixture was stirred at room temperature for 5 hours. 500 ml of ethyl acetate was added to the mixture. The organic layer is washed with water (3 × 100 ml). The ethyl acetate layer was dried over sodium sulfate. Sodium sulfate is removed by filtration. Add 3.5 g of HCl gas in dioxane (50 ml) to the solution. Collect the solid and wash with ether (3 × 50 ml). After drying, 18 g of the desired hygroscopic product was obtained. Solubility in water: 200 mg / ml, elemental analysis: C 37 H 53 ClN 6 O 9 S, molecular weight: 793.37, calculated% C: 56.01; H: 6.73; Cl: 4.47; N: 10.59; O: 18.15; S : 4.04,% observed C: 55.96; H: 6.76; Cl: 4.52; N: 10.54, O: 18.19; S: 4.03, MS: m / e: 757.4; m / e + 1: 758.4.
Ac-Val-Pro-Gly-Pro-Arg(diAc)-OCH2CH2N(CH2CH3)2.HClの調製
１．Boc-Gly-Pro-OSuの調製
L-プロリン１５ｇを１０％重炭酸ナトリウム３００ｍｌ中に溶解した。アセトン１５０ｍｌ及びBoc-Gly-OSu２７．２ｇを反応混合物に加えた。混合物を室温で５時間撹拌した。混合物をエーテル（１×３００ｍｌ）で洗浄した。酢酸エチル５００ｍｌを水層に加えた。混合物のｐＨを氷冷した３ＮＨＣｌで２．４〜２．５に調整した。酢酸エチル層を集め、水（３×３００ｍｌ）で洗浄した。有機溶液を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶液を蒸発させて乾燥した。残留物（Boc-Gly-Pro-OH）２１ｇ及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド１１ｇをジクロロメチレン３００ｍｌ中に溶解した。混合物を０℃に冷却した。１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド１７ｇを反応混合物に加えた。混合物を０℃で１時間撹拌した。固形物を濾過により除去した。ジクロロメチレン溶液を５％重炭酸ナトリウム（１×２００ｍｌ）及び水（３×２００ｍｌ）で洗浄する。有機溶液を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶液を蒸発させて乾燥した。Boc-Gly-Pro-OSu２３ｇを得た。
Preparation of Ac-Val-Pro-Gly-Pro-Arg (diAc) -OCH 2 CH 2 N (CH 2 CH 3 ) 2 .HCl Preparation of Boc-Gly-Pro-OSu
15 g of L-proline was dissolved in 300 ml of 10% sodium bicarbonate. 150 ml of acetone and 27.2 g of Boc-Gly-OSu were added to the reaction mixture. The mixture was stirred at room temperature for 5 hours. The mixture was washed with ether (1 × 300 ml). 500 ml of ethyl acetate was added to the aqueous layer. The pH of the mixture was adjusted to 2.4-2.5 with ice-cold 3N HCl. The ethyl acetate layer was collected and washed with water (3 × 300 ml). The organic solution was dried over sodium sulfate. The solution was evaporated to dryness. 21 g of residue (Boc-Gly-Pro-OH) and 11 g of N-hydroxysuccinimide were dissolved in 300 ml of dichloromethylene. The mixture was cooled to 0 ° C. 17 g of 1,3-dicyclohexylcarbodiimide was added to the reaction mixture. The mixture was stirred at 0 ° C. for 1 hour. The solid was removed by filtration. The dichloromethylene solution is washed with 5% sodium bicarbonate (1 × 200 ml) and water (3 × 200 ml). The organic solution was dried over sodium sulfate. The solution was evaporated to dryness. 23 g of Boc-Gly-Pro-OSu was obtained.
２．H-Gly-Pro-Arg(diAc)-OCH2CH2N(CH2CH3)2.2TFAの調製
H-Arg(diAc)-OCH2CH2N(CH2CH3)2２２ｇを５％ＮａＨＣＯ3３００ｍｌ中に溶解した。アセトン１５０ｍｌ中のBoc-Gly-Pro-OSu２０ｇを反応混合物に加えた。混合物を室温で５時間撹拌した。酢酸エチル５００ｍｌを混合物に加えた。酢酸エチル溶液を水（３×１００ｍｌ）で洗浄した。有機溶液を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。硫酸ナトリウムを濾過により除去する。溶液を蒸発させて乾燥した。残留物をジクロロメチレン２５０ｍｌ中に溶解した。トリフルオロ酢酸２５０ｍｌを混合物に加え、混合物を３０分間撹拌した。混合物を蒸発させて乾燥した。H-Gly-Pro-Arg(diAc)-OCH2CH2N(CH2CH3)2.2TFA２８ｇを得た。
2. Preparation of H-Gly-Pro-Arg (diAc) -OCH 2 CH 2 N (CH 2 CH 3 ) 2 .2TFA
22 g of H-Arg (diAc) -OCH 2 CH 2 N (CH 2 CH 3 ) 2 was dissolved in 300 ml of 5% NaHCO 3 . 20 g of Boc-Gly-Pro-OSu in 150 ml of acetone was added to the reaction mixture. The mixture was stirred at room temperature for 5 hours. 500 ml of ethyl acetate was added to the mixture. The ethyl acetate solution was washed with water (3 × 100 ml). The organic solution was dried over sodium sulfate. Sodium sulfate is removed by filtration. The solution was evaporated to dryness. The residue was dissolved in 250 ml of dichloromethylene. 250 ml of trifluoroacetic acid was added to the mixture and the mixture was stirred for 30 minutes. The mixture was evaporated to dryness. 28 g of H-Gly-Pro-Arg (diAc) -OCH 2 CH 2 N (CH 2 CH 3 ) 2 .2 TFA was obtained.
３．Ac-Val-Pro-Gly-Pro-Arg(diAc)-OCH2CH2N(CH2CH3)2.HClの調製
H-Gly-Pro-Arg(diAc)-OCH2CH2N(CH2CH3)2.2TFA２６ｇを１０％重炭酸ナトリウム３００ｍｌ中に溶解した。アセトン１５０ｍｌ及びAc-Val-Pro-OSu１５ｇを反応混合物に加えた。混合物を室温で５時間撹拌した。酢酸エチル５００ｍｌを混合物に加えた。有機層を水（３×１００ｍｌ）で洗浄する。酢酸エチル層を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。硫酸ナトリウムを濾過により除去する。ジオキサン（５０ｍｌ）中ＨＣｌガス３．５ｇを溶液に加える。固形物を集め、エーテル（３×５０ｍｌ）で洗浄した。乾燥後、所望の吸湿性生成物１８ｇを得た。水中での溶解性：150mg/ml、元素分析：Ｃ35Ｈ60ＣｌＮ9Ｏ9、分子量：786.36、計算％ C: 53.46; H: 7.69; Cl: 4.51; N: 16.03; O: 18.31、実測％ C: 53.43; H: 7.73; Cl: 4.55; N: 16.01, O: 18.29、MS: m/e: 750.4; m/e+1: 751.4。
3. Preparation of Ac-Val-Pro-Gly-Pro-Arg (diAc) -OCH 2 CH 2 N (CH 2 CH 3 ) 2 .HCl
26 g of H-Gly-Pro-Arg (diAc) -OCH 2 CH 2 N (CH 2 CH 3 ) 2 .2 TFA was dissolved in 300 ml of 10% sodium bicarbonate. 150 ml of acetone and 15 g of Ac-Val-Pro-OSu were added to the reaction mixture. The mixture was stirred at room temperature for 5 hours. 500 ml of ethyl acetate was added to the mixture. The organic layer is washed with water (3 × 100 ml). The ethyl acetate layer was dried over sodium sulfate. Sodium sulfate is removed by filtration. Add 3.5 g of HCl gas in dioxane (50 ml) to the solution. The solid was collected and washed with ether (3 × 50 ml). After drying, 18 g of the desired hygroscopic product was obtained. Solubility in water: 150 mg / ml, elemental analysis: C 35 H 60 ClN 9 O 9 , molecular weight: 786.36, calculated% C: 53.46; H: 7.69; Cl: 4.51; N: 16.03; O: 18.31, measured% C: 53.43; H: 7.73; Cl: 4.55; N: 16.01, O: 18.29, MS: m / e: 750.4; m / e + 1: 751.4.
シクロ(1,6)-Ac-Nle-Asp-His-Phe-Arg(diAc)-Trp-Lys-OCH2CH2N(CH2CH3)2.HClの調製
１．Ac-Nle-Asp(OFm)-OHの調製
H-Asp(OFm)-OH.TFA４３ｇ及びAc-Nle-OSu２７ｇをアセトン３００ｍｌ中に懸濁した。５％ＮａＨＣＯ3３００ｍｌを反応混合物に加えた。混合物を室温で一晩中撹拌した。混合物をエーテル（１×３００ｍｌ）で洗浄した。酢酸エチル５００ｍｌを水層に加えた。混合物のｐＨを氷冷した３ＮＨＣｌで２．４〜２．５に調整した。酢酸エチル層を集め、水（３×３００ｍｌ）で洗浄した。有機溶液を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶液を蒸発させて乾燥した。Ac-Nle-Asp(OFm)-OH４２ｇを得た。
Cyclo (1,6) -Ac-Nle-Asp -His-Phe-Arg (diAc) -Trp-Lys-
43 g of H-Asp (OFm) -OH.TFA and 27 g of Ac-Nle-OSu were suspended in 300 ml of acetone. 300 ml of 5% NaHCO 3 was added to the reaction mixture. The mixture was stirred overnight at room temperature. The mixture was washed with ether (1 × 300 ml). 500 ml of ethyl acetate was added to the aqueous layer. The pH of the mixture was adjusted to 2.4-2.5 with ice-cold 3N HCl. The ethyl acetate layer was collected and washed with water (3 × 300 ml). The organic solution was dried over sodium sulfate. The solution was evaporated to dryness. 42 g of Ac-Nle-Asp (OFm) -OH was obtained.
２．Fmoc-Trp-Lys(4-Pyoc)-OHの調製
H-Lys(4-Pyoc)-OHを参考文献（H. Kunz及びS. Birnbach, Tetrahedron Lett., 25, 3567, 1984; H. Kunz及びR. Barthels, Angew. Chem., Int. Ed. Engl., 22, 783, 1983）に従って調製した。H-Lys(4-Pyoc)-OH３３ｇを５％ＮａＨＣＯ3３００ｍｌ中に懸濁した。アセトン３００ｍｌ及びFmoc-Trp-OSu５２ｇを反応混合物に加えた。混合物を室温で一晩中撹拌した。混合物をエーテル（１×５００ｍｌ）で洗浄した。酢酸エチル５００ｍｌを混合物に加え、混合物のｐＨを氷冷した３ＮＨＣｌで２．２〜２．３に調整する。酢酸エチル層を集め、水で洗浄した。有機溶液を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。有機溶液を蒸発させて乾燥した。Fmoc-Trp-Lys(4-Pyoc)-OH５５ｇを得た。
2. Preparation of Fmoc-Trp-Lys (4-Pyoc) -OH
H-Lys (4-Pyoc) -OH as a reference (H. Kunz and S. Birnbach, Tetrahedron Lett., 25, 3567, 1984; H. Kunz and R. Barthels, Angew. Chem., Int. Ed. Engl , 22, 783, 1983). 33 g of H-Lys (4-Pyoc) -OH was suspended in 300 ml of 5% NaHCO 3 . 300 ml of acetone and 52 g of Fmoc-Trp-OSu were added to the reaction mixture. The mixture was stirred overnight at room temperature. The mixture was washed with ether (1 × 500 ml). 500 ml of ethyl acetate is added to the mixture and the pH of the mixture is adjusted to 2.2-2.3 with ice-cold 3N HCl. The ethyl acetate layer was collected and washed with water. The organic solution was dried over sodium sulfate. The organic solution was evaporated to dryness. 55 g of Fmoc-Trp-Lys (4-Pyoc) -OH was obtained.
３．シクロ(1,6)-Ac-Nle-Asp-His-Phe-Arg(diAc)-Trp-Lys-OHの調製
Wang樹脂１００ｇをＤＭＦ７００ ｍｌ中に懸濁した。Fmoc-Trp-Lys(4-Pyoc)-OH５０ｇ、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール１３ｇ、４−ジメチルアミノピリジン２ｇ、及びＮ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド１２ｇ。混合物を室温で一晩中撹拌した。樹脂を濾過により集め、ＤＭＦ（３×４００ ｍｌ）、メタノール（３×４００ ｍｌ）、及びジクロロメチレン（３×４００ ｍｌ）で洗浄した。２０％ピペリジン７００ ｍｌを樹脂に加えた。混合物を３０分間撹拌した。樹脂を濾過により集め、ＤＭＦ（３×４００ ｍｌ）、メタノール（３×４００ ｍｌ）、及びジクロロメチレン（３×４００ ｍｌ）で洗浄した。ＤＭＦ７００ ｍｌ、Fmoc-Arg(diAc)-OH４８ｇ、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール１３ｇ、トリエチルアミン３５ ｍｌ、及びＯ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム３８ｇを樹脂に加えた。混合物を室温で２時間撹拌した。樹脂を濾過により集め、ＤＭＦ（３×４００ ｍｌ）、メタノール（３×４００ ｍｌ）、及びジクロロメチレン（３×４００ ｍｌ）で洗浄した。２０％ピペリジン７００ ｍｌを樹脂に加えた。混合物を３０分間撹拌した。樹脂を濾過により集め、ＤＭＦ（３×４００ ｍｌ）、メタノール（３×４００ ｍｌ）、及びジクロロメチレン（３×４００ ｍｌ）で洗浄した。ＤＭＦ７００ ｍｌ、Fmoc-Phe-OH３９ｇ、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール１３ｇ、トリエチルアミン３５ ｍｌ、及びＯ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム３８ｇを樹脂に加えた。混合物を室温で２時間撹拌した。樹脂を濾過により集め、ＤＭＦ（３×４００ ｍｌ）、メタノール（３×４００ ｍｌ）、及びジクロロメチレン（３×４００ ｍｌ）で洗浄した。２０％ピペリジン７００ ｍｌを樹脂に加えた。混合物を３０分間撹拌した。樹脂を濾過により集め、ＤＭＦ（３×４００ ｍｌ）、メタノール（３×４００ ｍｌ）、及びジクロロメチレン（３×４００ ｍｌ）で洗浄した。ＤＭＦ７００ ｍｌ、Fmoc-His(Fmoc)-OH６０ｇ、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール１３ｇ、トリエチルアミン３５ ｍｌ、及びＯ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム３８ｇを樹脂に加えた。混合物を室温で２時間撹拌した。樹脂を濾過により集め、ＤＭＦ（３×４００ ｍｌ）、メタノール（３×４００ ｍｌ）、及びジクロロメチレン（３×４００ ｍｌ）で洗浄した。２０％ピペリジン７００ ｍｌを樹脂に加えた。混合物を３０分間撹拌した。樹脂を濾過により集め、ＤＭＦ（３×４００ ｍｌ）、メタノール（３×４００ ｍｌ）、及びジクロロメチレン（３×４００ ｍｌ）で洗浄した。ＤＭＦ７００ ｍｌ、Ac-Nle-Asp(OFm)-OH６０ｇ、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール１３ｇ、トリエチルアミン３５ ｍｌ、及びＯ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム３８ｇを樹脂に加えた。混合物を室温で２時間撹拌した。樹脂を濾過により集め、ＤＭＦ（３×４００ ｍｌ）、メタノール（３×４００ ｍｌ）、及びジクロロメチレン（３×４００ ｍｌ）で洗浄した。ペプチドの(peptided)樹脂をＤＭＦ７００ ｍｌ中に懸濁した。MeI５０ｇを反応混合物に加えた。混合物を室温で１時間、及び５０℃で１時間撹拌した。樹脂を濾過により集め、ＤＭＦ（３×４００ ｍｌ）、メタノール（３×４００ ｍｌ）、及びジクロロメチレン（３×４００ ｍｌ）で洗浄した。３０％ピペリジン７００ ｍｌを樹脂に加えた。混合物を６０分間撹拌した。樹脂を濾過により集め、ＤＭＦ（３×４００ ｍｌ）、メタノール（３×４００ ｍｌ）、及びジクロロメチレン（３×４００ ｍｌ）で洗浄した。ＤＭＦ７００ ｍｌ、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール１３ｇ、トリエチルアミン３５ ｍｌ、及びＯ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム３８ｇを樹脂に加えた。混合物を室温で１０時間撹拌した。樹脂を濾過により集め、ＤＭＦ（３×４００ ｍｌ）、メタノール（３×４００ ｍｌ）、及びジクロロメチレン（３×４００ ｍｌ）で洗浄した。トリフルオロ酢酸５００ｍｌを樹脂に加え、混合物を室温で１時間撹拌した。樹脂を濾過により除去し、溶液を蒸発させて乾燥する。残留物をエーテル（３×１００ ｍｌ）で洗浄した。
3. Preparation of cyclo (1,6) -Ac-Nle-Asp-His-Phe-Arg (diAc) -Trp-Lys-OH
100 g of Wang resin was suspended in 700 ml of DMF. 50 g of Fmoc-Trp-Lys (4-Pyoc) -OH, 13 g of 1-hydroxybenzotriazole, 2 g of 4-dimethylaminopyridine, and 12 g of N, N′-diisopropylcarbodiimide. The mixture was stirred overnight at room temperature. The resin was collected by filtration and washed with DMF (3 × 400 ml), methanol (3 × 400 ml), and dichloromethylene (3 × 400 ml). 700 ml of 20% piperidine was added to the resin. The mixture was stirred for 30 minutes. The resin was collected by filtration and washed with DMF (3 × 400 ml), methanol (3 × 400 ml), and dichloromethylene (3 × 400 ml). 700 ml DMF, 48 g Fmoc-Arg (diAc) -OH, 13 g 1-hydroxybenzotriazole, 35 ml triethylamine, and 38 g O- (benzotriazol-1-yl) -N, N, N ′, N′-tetramethyluronium Was added to the resin. The mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The resin was collected by filtration and washed with DMF (3 × 400 ml), methanol (3 × 400 ml), and dichloromethylene (3 × 400 ml). 700 ml of 20% piperidine was added to the resin. The mixture was stirred for 30 minutes. The resin was collected by filtration and washed with DMF (3 × 400 ml), methanol (3 × 400 ml), and dichloromethylene (3 × 400 ml). Resin with 700 ml of DMF, 39 g of Fmoc-Phe-OH, 13 g of 1-hydroxybenzotriazole, 35 ml of triethylamine, and 38 g of O- (benzotriazol-1-yl) -N, N, N ′, N′-tetramethyluronium added. The mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The resin was collected by filtration and washed with DMF (3 × 400 ml), methanol (3 × 400 ml), and dichloromethylene (3 × 400 ml). 700 ml of 20% piperidine was added to the resin. The mixture was stirred for 30 minutes. The resin was collected by filtration and washed with DMF (3 × 400 ml), methanol (3 × 400 ml), and dichloromethylene (3 × 400 ml). 700 ml of DMF, 60 g of Fmoc-His (Fmoc) -OH, 13 g of 1-hydroxybenzotriazole, 35 ml of triethylamine, and 38 g of O- (benzotriazol-1-yl) -N, N, N ′, N′-tetramethyluronium Was added to the resin. The mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The resin was collected by filtration and washed with DMF (3 × 400 ml), methanol (3 × 400 ml), and dichloromethylene (3 × 400 ml). 700 ml of 20% piperidine was added to the resin. The mixture was stirred for 30 minutes. The resin was collected by filtration and washed with DMF (3 × 400 ml), methanol (3 × 400 ml), and dichloromethylene (3 × 400 ml). 700 ml of DMF, 60 g of Ac-Nle-Asp (OFm) -OH, 13 g of 1-hydroxybenzotriazole, 35 ml of triethylamine, and O- (benzotriazol-1-yl) -N, N, N ′, N′-tetramethyluro 38 g of nitrogen was added to the resin. The mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The resin was collected by filtration and washed with DMF (3 × 400 ml), methanol (3 × 400 ml), and dichloromethylene (3 × 400 ml). The peptided peptide was suspended in 700 ml DMF. 50 g of MeI was added to the reaction mixture. The mixture was stirred at room temperature for 1 hour and at 50 ° C. for 1 hour. The resin was collected by filtration and washed with DMF (3 × 400 ml), methanol (3 × 400 ml), and dichloromethylene (3 × 400 ml). 700 ml of 30% piperidine was added to the resin. The mixture was stirred for 60 minutes. The resin was collected by filtration and washed with DMF (3 × 400 ml), methanol (3 × 400 ml), and dichloromethylene (3 × 400 ml). 700 ml DMF, 13 g 1-hydroxybenzotriazole, 35 ml triethylamine, and 38 g O- (benzotriazol-1-yl) -N, N, N ′, N′-tetramethyluronium were added to the resin. The mixture was stirred at room temperature for 10 hours. The resin was collected by filtration and washed with DMF (3 × 400 ml), methanol (3 × 400 ml), and dichloromethylene (3 × 400 ml). 500 ml of trifluoroacetic acid was added to the resin and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour. The resin is removed by filtration and the solution is evaporated to dryness. The residue was washed with ether (3 × 100 ml).
４．シクロ(1,6)-Ac-Nle-Asp-His-Phe-Arg(diAc)-Trp-Lys-OCH2CH2N(CH2CH3)2.HClの調製
シクロ(1,6)-Ac-Nle-Asp-His-Phe-Arg(diAc)-Trp-Lys-OH１０ｇをＤＭＦ３００ｍｌ中に溶解した。混合物を氷水浴で０℃にまで冷却した。Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノエタノール１２ｇ、４−ジメチルアミノピリジン２ｇ、及び１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド２２ｇを反応混合物に加えた。反応混合物を０℃で１時間、及び室温で一晩中撹拌する。固形物を濾過により除去し、ジクロロメチレン溶液を５％重炭酸ナトリウム（１×５００ｍｌ）及び水（３×１００ｍｌ）で洗浄した。酢酸エチル溶液を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。ジオキサン（２０ｍｌ）中２ｇのＨＣｌを溶液に加えた。固形物を集め、エーテル（３×３０ｍｌ）で洗浄した。生成物８ｇを得た。
4). Cyclo (1,6) -Ac-Nle-Asp-His-Phe-Arg (diAc) -Trp-Lys-OCH 2 CH 2 N (CH 2 CH 3 ) 2 Preparation of HCl Cyclo (1,6) -Ac 10 g of -Nle-Asp-His-Phe-Arg (diAc) -Trp-Lys-OH was dissolved in 300 ml of DMF. The mixture was cooled to 0 ° C. with an ice-water bath. 12 g N, N-diethylaminoethanol, 2 g 4-dimethylaminopyridine, and 22
構造１で表されるプロドラッグは、容易に皮膚膜に浸透し得る。ペプチド及び関連化合物の経皮送達システムは、人又は動物における多くの疾患、例えば、関節リウマチ及び変形性関節症に由来する疼痛、熱、男性の勃起不全、女性の性機能障害、全身血圧、降圧コントロール(hypotensive control)、血小板凝集の抑制、肺疾患、消化器疾患、炎症、ショック、生殖能(reproduction)、受精能(fertility)などの治療において、ペプチドホルモンを有用にし得る。
The prodrug represented by
本発明の態様として、例えば、以下のものがある。
１．次式の構造１で表される化合物であって、
２．構造１中、Ｒn、Ｒx1、Ｒx2、Ｒx3、Ｒx4、Ｒx5、又はＲxn基がＣ、Ｈ、Ｏ、Ｓ、又はＮ原子を含むか、又は単結合、二重結合、若しくは三重結合を有する、上記１に記載の化合物。
３．構造１中、ＣＨ2基がＯ、Ｓ若しくはＮＨと置換されている、上記１に記載の化合物。
４．構造１中、アミノ酸がＬ−型若しくはＤ−型である、上記１に記載の化合物。
５．構造１中、配列中の１種以上のアミノ酸残基が非天然アミノ酸、又はアルキル、アルキルオキシ、アルケニル、アルキニル、アリール又はヘテロアリール残基のいずれか一つにより置換されている、上記１に記載の化合物。
６．構造１中、ペプチド鎖上のアミノ酸のアミノ及びカルボキシル基がラクタムブリッジを形成しホモデティックな環状ペプチドを形成している、上記１に記載の化合物。
７．構造１中、アミノ酸のチオール基がジスルフィドブリッジを形成しヘテロデティックな環状ペプチドを形成している、上記１に記載の化合物。
８．前記陰イオンが、Ｃｌ-、Ｂｒ-、Ｆ-、Ｉ-、ＡｃＯ-、又はシトラートである、上記１に記載の化合物。
Examples of the present invention include the following.
1. A compound represented by
2. In
3. 2. A compound according to 1 above, wherein in
4). 2. The compound according to 1 above, wherein in
5. 2. In
6). 2. The compound according to 1 above, wherein in
7). 2. The compound according to 1 above, wherein in
8). 2. The compound according to 1 above, wherein the anion is Cl − , Br − , F − , I − , AcO − , or citrate.
９．ペプチドのプロドラッグの経皮送達組成物であって、前記プロドラッグは、親油性部分及び生理学的ｐＨにおいてプロトン化された形態で存在する第１級、第２級若しくは第３級アミン基、又はクアニジノ基若しくは１つが保護されたクアニジノ基（親水性部分）を有し、前記プロドラッグは、１つ又は２つだけの、生理学的ｐＨにおいてプロトン化された形態で存在する第１級、第２級若しくは第３級アミン基、又はクアニジノ基若しくは１つが保護されたクアニジノ基（親水性部分）を有することを特徴とする経皮送達組成物。
１０．第１級、第２級若しくは第３級アミン基、クアニジノ基、又は１つが保護されたクアニジノ基が、Ｎ末端、Ｃ末端、又はペプチドの側鎖である、上記９に記載の経皮送達組成物。
１１．ペプチドを親油性にするために、カルボキシル基、アミノ基、グアニジン基又は他の親水性基が、アルキル、アリール、若しくはヘテロアリールエステル、又はアミド基で保護されている、上記９に記載の経皮送達組成物。
9. A transdermal delivery composition of a prodrug of a peptide, said prodrug comprising a lipophilic moiety and a primary, secondary or tertiary amine group present in protonated form at physiological pH, or Quanidino groups or one protected guanidino group (hydrophilic moiety), the prodrug being a primary, second, which exists in protonated form at physiological pH, only one or two A transdermal delivery composition characterized in that it has a quasidino group (hydrophilic moiety) or a quadidino group or one protected quadidino group or a tertiary or tertiary amine group.
10. 10. The transdermal delivery composition according to 9 above, wherein the primary, secondary or tertiary amine group, guanidino group, or one protected guanidino group is the N-terminus, C-terminus, or side chain of the peptide. object.
11. Transdermal as described in 9 above, wherein the carboxyl group, amino group, guanidine group or other hydrophilic group is protected with an alkyl, aryl or heteroaryl ester or amide group in order to make the peptide lipophilic. Delivery composition.
１２．次式の構造２−Ｃで表される化合物。
１３．構造２−Ｃ中、アミノ酸がＬ−型若しくはＤ−型であるか、Ｒ、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、又はＲ5基がＣ、Ｈ、Ｏ、Ｓ、若しくはＮ原子を含むか、又は単結合、二重結合若しくは三重結合を有するか、又はＣＨ2基がＯ、Ｓ若しくはＮＨと置換されている、上記１２に記載の化合物。
１４．前記陰イオンが、Ｃｌ-、Ｂｒ-、Ｆ-、Ｉ-、ＡｃＯ-、又はシトラートである、上記１２に記載の化合物。
１５．歯痛、頭痛、炎症、熱、癌、月経困難症、又は急性片頭痛に由来する疼痛を治療するための薬剤の製造のための、上記１２に記載の化合物の使用。
12 A compound represented by the structure 2-C:
13. In structure 2-C, the amino acid is L-type or D-type, or the R, R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , or R 5 group contains a C, H, O, S, or N atom. 13. The compound according to 12 above, comprising or having a single bond, double bond or triple bond, or wherein the CH 2 group is substituted with O, S or NH.
14 13. The compound according to 12 above, wherein the anion is Cl − , Br − , F − , I − , AcO − , or citrate.
15. Use of a compound according to 12 above for the manufacture of a medicament for the treatment of pain from toothache, headache, inflammation, fever, cancer, dysmenorrhea or acute migraine.
１６．次式の構造３−Ｃで表される化合物。
１７．構造３−Ｃ中、アミノ酸がＬ−型若しくはＤ−型であるか、Ｒ1、Ｒ2、又はＲ3基がＣ、Ｈ、Ｏ、Ｓ、若しくはＮ原子を含むか、又は単結合、二重結合若しくは三重結合を有するか、又はＣＨ2基がＯ、Ｓ若しくはＮＨと置換されている、上記１６に記載の化合物。
１８．前記陰イオンが、Ｃｌ-、Ｂｒ-、Ｆ-、Ｉ-、ＡｃＯ-、又はシトラートである、上記１６に記載の化合物。
１９．歯痛、頭痛、炎症、熱、癌、月経困難症、又は急性片頭痛に由来する疼痛を治療するための薬剤の製造のための、上記１６に記載の化合物の使用。
16. A compound represented by the structure 3-C:
17. In structure 3-C, the amino acid is L-type or D-type, the R 1 , R 2 , or R 3 group contains a C, H, O, S, or N atom, or a single bond, two 17. The compound according to 16 above, which has a heavy bond or a triple bond, or the CH 2 group is substituted with O, S or NH.
18. 17. The compound according to 16 above, wherein the anion is Cl − , Br − , F − , I − , AcO − , or citrate.
19. 17. Use of a compound according to 16 above for the manufacture of a medicament for treating pain from toothache, headache, inflammation, fever, cancer, dysmenorrhea or acute migraine.
２０．次式の構造４−Ｃで表される化合物。
２１．構造４−Ｃ中、アミノ酸がＬ−型若しくはＤ−型であるか、Ｒ、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、又はＲ9基がＣ、Ｈ、Ｏ、Ｓ、若しくはＮ原子を含むか、又は単結合、二重結合若しくは三重結合を有するか、又はＣＨ2基がＯ、Ｓ若しくはＮＨと置換されている、上記２０に記載の化合物。
２２．前記Ａｒ基が、フェニル、２’−ナフチル又は４−ヨードフェニルである、上記２０に記載の化合物。
２３．男性の勃起不全、女性の性機能障害、又は皮膚病を治療するための薬剤の製造のための、上記２０に記載の化合物の使用。
２４．前記皮膚病が、白皮症である、上記２３に記載の使用。
20. A compound represented by the structure 4-C:
21. In structure 4-C, the amino acid is L-type or D-type, or R, R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , or R 9 groups are 21. The above 20, comprising a C, H, O, S, or N atom, or having a single bond, double bond or triple bond, or a CH 2 group substituted with O, S or NH Compound.
22. 21. The compound according to 20 above, wherein the Ar group is phenyl, 2′-naphthyl or 4-iodophenyl.
23. 21. Use of a compound according to 20 above for the manufacture of a medicament for treating male erectile dysfunction, female sexual dysfunction, or skin disease.
24. The use according to 23 above, wherein the dermatosis is albinism.
２５．次式の構造５−Ｃで表される化合物。
２６．構造５−Ｃ中、Ｒ、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、又はＲ6基がＣ、Ｈ、Ｏ、Ｓ、若しくはＮ原子を含むか、又は単結合、二重結合若しくは三重結合を有するか、又はＣＨ2基がＯ、Ｓ若しくはＮＨと置換されている、上記２５に記載の化合物。
２７．前記陰イオンが、Ｃｌ-、Ｂｒ-、Ｆ-、Ｉ-、ＡｃＯ-、又はシトラートである、上記２５に記載の化合物。
２８．肥満を治療するための薬剤の製造のための、上記２５に記載の化合物の使用。
２９．上記２０に記載の構造４−Ｃで表されるシクロペプチドを調製する方法であって、ペプチド鎖が標準的なペプチド合成プロトコルにより合成され、リシンの側鎖が２−，又は４−Ｐｙｏｃ保護基により保護され、ペプチドの環化が樹脂上で行われる方法。
25. A compound represented by the structure 5-C:
26. In structure 5-C, R, R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , or R 6 groups contain C, H, O, S, or N atoms, or single bonds, double bonds Or the compound of claim 25, having a triple bond, or wherein the CH 2 group is substituted with O, S or NH.
27. 26. The compound according to 25 above, wherein the anion is Cl − , Br − , F − , I − , AcO − , or citrate.
28. 26. Use of a compound according to 25 above for the manufacture of a medicament for treating obesity.
29. A method for preparing a cyclopeptide represented by structure 4-C as described in 20 above, wherein the peptide chain is synthesized by a standard peptide synthesis protocol and the side chain of lysine is a 2-, or 4-Pyoc protecting group Wherein the peptide is cyclized on the resin.
３０．上記１に記載の構造１で表される化合物を活性成分として含む、人又は動物において、ペプチドにより治療可能な状態を治療するための医薬組成物。
３１．経口投与又は経皮投与される、上記３０に記載の医薬組成物。
３２．前記ペプチドにより治療可能な状態が、緑内障、高眼圧症、男性の勃起不全、女性の性機能障害、全身血圧、堕胎、降圧コントロール、血小板凝集の抑制、肺疾患、消化器疾患、炎症、ショック、生殖能、受精能、及び肥満からなる群から選択される、上記３０に記載の医薬組成物。
３３．身体の一部に溶液、スプレー、ローション、軟膏、エマルジョン又はゲルの形態で経皮投与される、上記３０に記載の医薬組成物。
３４．人又は動物において、ペプチド治療可能な状態を治療するための、上記１に記載の構造１で表される化合物を含むマトリックス層及び非透過性支持層からなることを特徴とする経皮治療応用システム。
３５．包帯又はパッチである、上記３４に記載の経皮治療応用システム。
３６．活性物質貯蔵庫であり、皮膚に面する透過性底面を有する、上記３４に記載の経皮治療応用システム。
30. A pharmaceutical composition for treating a condition treatable with a peptide in humans or animals, comprising as an active ingredient the compound represented by
31. 31. The pharmaceutical composition according to the above 30, which is orally or transdermally administered.
32. The conditions treatable by the peptide include glaucoma, ocular hypertension, male erectile dysfunction, female sexual dysfunction, systemic blood pressure, abortion, antihypertensive control, suppression of platelet aggregation, lung disease, digestive system disease, inflammation, shock, 31. The pharmaceutical composition according to 30 above, selected from the group consisting of fertility, fertility and obesity.
33. 31. The pharmaceutical composition according to 30 above, which is transdermally administered to a part of the body in the form of a solution, spray, lotion, ointment, emulsion or gel.
34. A transdermal therapeutic application system comprising a matrix layer containing a compound represented by the
35. 35. The transdermal therapeutic application system as described in 34 above, which is a bandage or patch.
36. 35. The transdermal therapeutic application system as described in 34 above, which is an active substance reservoir and has a permeable bottom surface facing the skin.
１−２．次式の構造１で表される化合物であって、
２−２．ペプチド及び関連化合物の経皮送達システムのデザインであって、ペプチド又は関連化合物のこれらのプロドラッグをデザインするための原則は、１．プロドラッグは、親油性部分及び生理学的ｐＨにおいてプロトン化された形態で存在する第１級、第２級若しくは第３級アミン基、クアニジノ基、又は１つが保護されたクアニジノ基（親水性部分）を有していなければならず、２．ペプチドの全てプロドラッグは１つ又は２つだけ（好ましくは１つ）の、生理学的ｐＨにおいてプロトン化された形態で存在する第１級、第２級若しくは第３級アミン基、クアニジノ基、又は１つが保護されたクアニジノ基（親水性部分）を有するべきである。３．第１級、第２級若しくは第３級アミン基、クアニジノ基、又は１つが保護されたクアニジノ基は、Ｎ末端、Ｃ末端、又はペプチドの側鎖であり得、Ｎ末端又はＣ末端部分が好ましく、４．ペプチドを親油性にするために、カルボキシル基、アミノ基、グアニジン基又は他の親水性基は、アルキル、アリール、若しくはヘテロアリールエステル又はアミド基で保護され得る。
1-2. A compound represented by
2-2. The design of transdermal delivery systems for peptides and related compounds, the principles for designing these prodrugs of peptides or related compounds are: Prodrugs are lipophilic moieties and primary, secondary or tertiary amine groups, guanidino groups, or one protected guanidino group (hydrophilic moiety) that exists in protonated form at physiological pH. 1. It must have All prodrugs of the peptide are only one or two (preferably one) primary, secondary or tertiary amine groups, guanidino groups present in protonated form at physiological pH, or One should have a protected guanidino group (hydrophilic moiety). 3. The primary, secondary or tertiary amine group, guanidino group, or one protected guanidino group can be N-terminal, C-terminal, or side chain of the peptide, preferably N-terminal or C-terminal part 4. To make the peptide lipophilic, the carboxyl group, amino group, guanidine group or other hydrophilic group can be protected with an alkyl, aryl, or heteroaryl ester or amide group.
３−２．次式の構造２−Ｃで表される化合物、及び歯痛、頭痛、関節炎、他の炎症性、熱、癌、月経困難症、及び急性片頭痛に由来する疼痛を治療するためのそれらの使用。
４−２．次式の構造３−Ｃで表される化合物、及び歯痛、頭痛、関節炎、他の炎症性、熱、癌、月経困難症、及び急性片頭痛に由来する疼痛を治療するためのそれらの使用。
4-2. Compounds of structure 3-C of the formula: and their use to treat pain from toothache, headache, arthritis, other inflammatory, fever, cancer, dysmenorrhea, and acute migraine.
５−２．次式の構造４−Ｃで表される化合物、及び男性の勃起不全、女性の性機能障害、白皮症、及び他の皮膚病を治療するためのそれらの使用。
６−２．次式の構造５−Ｃで表される化合物、及び肥満を治療するためのそれらの使用。
6-2. Compounds of structure 5-C of formula: and their use for treating obesity.
７−２．上記５−２に記載の構造４−Ｃで表されるシクロペプチド及び関連化合物を調製する方法であって、ペプチド鎖が標準的なペプチド合成プロトコルにより合成され得、リシンの側鎖が２−，又は４−Ｐｙｏｃ保護基により保護され、ペプチドの環化が樹脂上で行われる方法。
８−２．上記１−２に記載の、構造１で表される化合物、又は少なくとも構造１で表される化合物を活性成分として含む組成物であって、人又は動物において、ペプチド及び関連化合物により治療可能な状態を治療するために、経口投与又は経皮投与可能である化合物又は組成物であって、前記状態が、緑内障又は高眼圧症、男性の勃起不全及び女性の性機能障害、全身血圧、堕胎、降圧コントロール、血小板凝集の抑制、肺疾患、消化器疾患、炎症、ショック、生殖能、受精能、肥満などを含むが、これに限定されるものではない化合物又は組成物。
９−２．人又は動物において、ペプチド及び関連化合物治療可能な状態を治療する方法であって、身体の一部に（溶液、スプレー、ローション、軟膏、エマルジョン又はゲルの形態で）経皮投与することにより、上記１−２に記載の、構造１で表される化合物、又は少なくとも構造１で表される化合物を活性成分として含む組成物の治療有効血漿レベルを送達することを特徴とする方法。
１０−２．人又は動物において、ペプチド及び関連化合物治療可能な状態を治療するための、上記１−２に記載の、構造１で表される化合物、又は少なくとも構造１で表される化合物を活性成分として含む組成物の経皮治療応用システムであって、活性物質含有マトリックス層及び非透過性支持層からなる包帯又はパッチであり得、最も好ましくは、活性物質貯蔵庫であり、これが皮膚に面する透過性底面を有し、放出の割合を制御することによって、ペプチド及び関連化合物が絶えず最適治療血中レベルに達することを可能にし、効能を増大させ、ペプチド及び関連化合物の副作用を減少させることを可能にすることを特徴とするシステム。
7-2. A method for preparing a cyclopeptide represented by structure 4-C described in 5-2 above and a related compound, wherein the peptide chain can be synthesized by a standard peptide synthesis protocol, and the side chain of lysine is 2-, Or a method wherein the peptide is cyclized on the resin, protected by a 4-Pyoc protecting group.
8-2. A composition comprising the compound represented by
9-2. A method of treating a peptide and related compounds treatable condition in a human or animal, wherein the peptide and related compounds are treated by transdermal administration (in the form of a solution, spray, lotion, ointment, emulsion or gel) to a part of the body. A method of delivering a therapeutically effective plasma level of a compound represented by
10-2. A compound represented by
Claims (35)
式中、Ｒは分枝鎖若しくは直鎖、-(CH2)n-であってｎ＝０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０…、アリール又はヘテロアリール残基、又は何もないことを表し、Ｘ1はＨ又はＲ1ＯＣＯＣＨ2−を表し、Ｘ2はＨ又は（ＣＨ3）2ＣＨ−を表し、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、又はＲ6はＨ、１〜１２炭素原子を有するアルキル、アルキルオキシ、アルケニル若しくはアルキニル残基のいずれか一つ、アリール又はヘテロアリール残基を表し、Ａ-は陰イオンを表し、ｎ＝０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０…であり、全てのＲ、Ｒn、-(CH2)n-又は-(CH2)m-基は分枝鎖若しくは直鎖である。 A compound represented by the structure 5-C:
Wherein R is branched or straight chain, — (CH 2 ) n —, and n = 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10,..., Aryl or hetero An aryl residue, or nothing, X 1 represents H or R 1 OCOCH 2 —, X 2 represents H or (CH 3 ) 2 CH—, R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , or R 6 represents H, any one of an alkyl, alkyloxy, alkenyl, or alkynyl residue having 1 to 12 carbon atoms, an aryl or heteroaryl residue, and A − represents an anion. , N = 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10,..., And all R, R n , — (CH 2 ) n — or — (CH 2 ) m — The group is branched or straight chain.
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