JP2013532703A - Ｐａｒｐ−１阻害剤および抗新生物剤を含む治療用組合せ - Google Patents

Abstract

本発明は、（ａ）明細書において記載されている式（Ｉ）の化合物、ならびに（ｂ）アルキル化剤またはアルキル化様剤、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、有糸分裂阻害剤および放射線からなる群から選択される１種または複数の抗新生物剤を含み、活性成分が各場合に遊離形態または医薬として許容されるそれらの塩もしくは任意の水和物の形態で存在する、治療用組合せを提供する。

Description

本発明は一般に、がん治療の分野に関し、より詳細には、選択される群のＰＡＲＰ−１阻害剤ならびにアルキル化剤またはアルキル化様剤、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、有糸分裂阻害剤および放射線からなる群から選択される１種または複数の抗新生物剤を含む抗腫瘍組成物を提供する。

ポリ（ＡＤＰリボース）ポリメラーゼは、ＤＮＡまたは複製、転写、分化、遺伝子制御、タンパク質分解および紡錘体維持といった多様な細胞プロセスに影響を及ぼす種々のアクセプタータンパク質へのＡＤＰリボース単位の付加を触媒する１８メンバーのファミリーに属している。ＰＡＲＰの中でＰＡＲＰ−１およびＰＡＲＰ−２のみが、ＤＮＡ損傷によって活性化され、ＤＮＡ修復に関与する酵素である。

ＰＡＲＰ−１は、３つのドメイン：２つのジンクフィンガーを含有するＮ末端ＤＮＡ結合ドメイン、自己修飾ドメインおよびＣ末端触媒ドメインからなる核タンパク質である。ＰＡＲＰ−１は、ジンクフィンガードメインを介してＤＮＡ一本鎖開裂（ＳＳＢ）に結合し、ＮＡＤ＋を切断し、複数のＡＤＰリボース単位を標的タンパク質、例えば、ヒストンおよび様々なＤＮＡ修復酵素などに結びつける。これにより、高度にマイナスに荷電した標的が生じ、これが次に、塩基除去修復経路を介する損傷したＤＮＡの巻き戻しおよび修復をもたらす。ノックアウトマウスモデルにおいて、ＰＡＲＰ−１の欠失によりＤＮＡ修復が損なわれるが、胚にとって致死的ではない。ダブルノックアウトＰＡＲＰ−１およびＰＡＲＰ−２マウスはその代わり、初期の胚発生の間に死亡し、２つの酵素が完全にはオーバーラップしていない機能を示すことを示唆している。増強されたＰＡＲＰ−１発現および／または活性は、悪性リンパ腫、肝細胞癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、白血病を含む異なる腫瘍細胞系において示されている。これにより、腫瘍細胞が遺伝毒性ストレスに耐えること、およびＤＮＡ損傷剤に対するそれらの耐性を増加させることが可能になり得る。結果として、小分子を介するＰＡＲＰ−１の阻害は、細胞毒性療法（例えばテモゾロミド、白金、トポイソメラーゼ阻害剤および放射線）に対して腫瘍細胞を感受性にすることが示されている。治療上の利益を強化するＰＡＲＰ阻害剤の能力と望ましくない副作用との間には、大きな治療濃度域が存在するようである。ＤＮＡ損傷剤と組み合わせたＰＡＲＰ阻害剤の治療上の使用は新規性を有さないが、相同組換えＤＮＡ修復が欠損している特定の腫瘍遺伝背景における、単剤療法としてのこれらの作用剤の使用は、新しい手法である。ＢＲＣＡ−１またはＢＲＣＡ−２相同組換え修復遺伝子のいずれかにおいてヘテロ生殖系列突然変異を有する個体は、乳がんおよび別のがんを発症する高い生涯リスクを示す。突然変異保因者において生じる腫瘍は、一般に、野生型対立遺伝子を失っており、機能的ＢＲＣＡ−１およびＢＲＣＡ−２タンパク質を発現しない。

したがって、これらの２つのタンパク質の喪失は、相同組換えによる二本鎖開裂の修復において腫瘍特異的機能障害をもたらす。ＰＡＲＰ−１が阻害されると、塩基除去修復は低減し、正常な細胞周期の間に生じる一本鎖開裂は存続することが知られている。未修復の開裂に遭遇する複製フォークは、相同組換えによって通常修復される二本鎖開裂を形成することができることもまた確認されている。したがって、相同組換え修復が欠損している腫瘍細胞、例えば、ＢＲＣＡ−１およびＢＲＣＡ−２突然変異体などは、野生型細胞と比較してＰＡＲＰ阻害に対して高度に感受性である。このことは、２つの経路の欠如は単独では無害であるが、合わせると致死的となるという合成致死性の概念と一致しており、ＰＡＲＰ阻害剤は、特定のＤＮＡ修復欠如を有する腫瘍患者において、正常なヘテロ組織に影響を及ぼすことなく、より有効である可能性がある。推定の患者集団は、遺伝性の乳がんおよび卵巣がんの大部分に相当するＢＲＣＡ突然変異体の他に、「ＢＲＣＡｎｅｓｓ」と呼ばれる現象である相同組換え修復の欠如を有する散発性がんのかなりの部分もまた含む。例えば、ＢＲＣＡ−１またはＦＡＮＣＦ遺伝子のプロモーターのメチル化およびＢＲＣＡ−２相互作用タンパク質をコードしているＥＭＳＹ遺伝子の増幅など。ＰＡＲＰおよびＢＲＣＡ−１およびＢＲＣＡ−２の合成致死性の原理を拡張することによって、二本鎖開裂修復における冗長でない任意の遺伝子の欠損は、ＰＡＲＰ阻害に感受性である可能性が高い。例えば、Ｔ細胞前リンパ球性白血病およびＢ細胞慢性リンパ球性（ｌｙｍｐｈｏｃｉｔｉｃ）白血病および乳がんを有する患者において見出されるＡＴＭ欠乏、ならびに肉腫、乳がん、卵巣がんおよび脳腫瘍において同定されているＣＨＫ２生殖系列突然変異はまた、ＰＡＲＰ欠乏ならびに他の知られているＨＲ経路タンパク質（ＲＡＤ５１、ＤＳＳ１、ＲＡＤ５４、ＲＰＡ１、ＮＢＳ１、ＡＴＲ、ＣＨＫ１、ＣＨＫ２、ＦＡＮＣＤ２、ＦＡＮＣＡおよびＦＡＮＣＣを含む）の欠損と組み合わせて合成的に致死性であることが示されている。ＰＴＥＮ突然変異はまた、ＰＡＲＰ阻害に合成的に感受性である遺伝子バックグラウンドと考えられている。ＢＲＣＡ突然変異がんがＰＡＲＰ阻害剤単剤療法に感受性である可能性があるという最初の臨床的エビデンスは、経口小分子ＰＡＲＰ阻害剤、ＡＺＤ２２８１の第Ｉ相試験についての予備データから来ている。ＢＲＣＡ突然変異保因者を増やした第Ｉ相集団において、部分的な応答が、ＢＲＣＡ−１突然変異が確認された卵巣がん患者１０例のうちの４例において見られた。別のＰＡＲＰ阻害剤、例えば、ＡＧ０１４６９９、ＢＳＩ−２０１などは、ＢＲＣＡ欠損腫瘍において、ＤＮＡ損傷剤と組み合わせておよび単一の作用剤としての両方で、第ＩＩ相および第ＩＩＩ相臨床試験中であることが現在知られている。初期の指摘は、これらの療法が低毒性を示すというものである。ともかく、ＰＡＲＰ−１に対して高い選択性を有する化合物は、長期治療スケジュールを考慮すると、さらに低い毒性を示すと予期される。

ＰＡＲＰ−１はまた、血管新生にも関係している。特に、ＰＡＲＰ−１阻害は、低酸素への腫瘍細胞の適応の重要な制御因子である転写低酸素誘導因子１αの蓄積減少をもたらすようである。

炎症誘発性刺激は、ペルオキシナイトレートおよびヒドロキシルラジカルの生成を誘導する炎症誘発性メディエーターの放出を誘発し、これは次に、ＤＮＡ一本鎖切断とともに、結果として起こるＰＡＲＰ−１の活性化を生じさせる。ＰＡＲＰ−１の過剰活性化は、ＮＡＤ＋およびエネルギー貯蔵の枯渇をもたらし、細胞機能障害および壊死に至る。この細胞の自殺機序は、脳卒中、心筋虚血、糖尿病、糖尿病関連心血管機能障害、ショック、外傷性中枢神経系傷害、関節炎、結腸炎、アレルギー性脳脊髄炎および炎症の様々な他の形態の病理機序に関与している。炎症性サイトカイン、ケモカインおよび炎症性メディエーターの発現において中心的役割を果たす核因子ｋＢに媒介される転写のＰＡＲＰ−１による増強は特に興味深い。本発明の出願人の名義における同時係属中の特許出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０５９６０７は、ＰＡＲＰ−１阻害活性を有するある特定の３−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−カルボキサミドを記載している。

ＤＮＡ複製伸長を標的化する薬物は、化学療法において広く使用されており、例えば、ゲムシタビン、５−フルオロウラシルおよびヒドロキシ尿素の活性代謝産物、トポイソメラーゼ阻害剤またはＤＮＡインターカレート剤などである。複製フォークの妨害は、しばしば、ＤＮＡ分子の切断および、損傷を感知し薬物治療に対する細胞応答を媒介するＡＴＲ／ＡＴＭ依存的Ｓ期チェックポイント経路の活性化をもたらす。

欧州特許出願公開第２０１０／０５９６０７号明細書

治療的処置を最適化するために、抗がん剤が継続して必要である。抗がん研究は典型的に、腫瘍細胞に対するより高い選択性およびホストに対するより少ない毒性を有する新しい作用剤に主眼を置く。特に、単独で使用される場合の対応する作用剤の抗腫瘍活性を相乗的に増強することができ、したがって細胞毒性化合物の量の大幅な低減を可能にする、新しい抗がん剤の組合せが必要である。加えて、ホストに対する毒性の対応する増加を引き起こすことなく、長期の抗腫瘍活性を示すことができる、新しい抗腫瘍組成物が必要である。

本発明は、選択される群のＰＡＲＰ−１阻害剤の、特定のクラスの抗新生物剤との新しい組合せを提供することによってこれらの必要性を満たし、これらの組合せは、腫瘍の治療に特に適していることが見出された。本発明の組合せは、抗腫瘍剤として療法において非常に有用であり、毒性および副作用の両方に関して、現在利用可能な抗腫瘍薬に伴う欠点を欠く。したがって、該組合せは、対応する毒性増加を伴わずに、顕著な相乗効果ならびに長期の腫瘍退縮活性を提供する。

本発明は、第１の態様において、
（ａ）選択される群のＰＡＲＰ−１阻害剤に属する化合物および
（ｂ）１種または複数の選択される抗新生物剤
を含む治療用組合せを提供する。

化合物（ａ）は、以下の構造式（Ｉ）

（式中、Ｒは、水素原子またはハロゲン原子であり、Ｒ_１およびＲ_２は両方とも塩素原子、フッ素原子である、または一緒になって、オキソ基（＝Ｏ）を形成する）
によって定義されるもの、および医薬として許容されるそれらの塩または水和物である。

第１の好ましい実施形態において、式（Ｉ）において、Ｒが水素原子であれば、Ｒ_１およびＲ_２は両方ともフッ素原子であり、Ｒがフッ素原子であれば、Ｒ_１およびＲ_２は両方とも塩素原子、フッ素原子である、または一緒になって、オキソ基（＝Ｏ）を形成する。

第２の好ましい実施形態において、式（Ｉ）において、Ｒは、水素原子またはフッ素原子であり、Ｒ_１およびＲ_２は両方ともフッ素原子である。

第３のより好ましい実施形態において、式（Ｉ）において、Ｒ、Ｒ_１およびＲ_２はすべてフッ素原子である。

特定の式（Ｉ）の化合物は、以下のものである：
化合物１：
２−［１−（４，４−ジフルオロシクロヘキシル）ピペリジン−４−イル］−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−カルボキサミド；
化合物２：
２−［１−（４，４−ジフルオロシクロヘキシル）ピペリジン−４−イル］−６−フルオロ−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−カルボキサミド；
化合物３：
６−フルオロ−３−オキソ−２−［１−（４−オキソシクロヘキシル）ピペリジン−４−イル］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−カルボキサミドおよび
化合物４：
２−［１−（４，４−ジクロロシクロヘキシル）ピペリジン−４−イル］−６−フルオロ−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４カルボキサミド、
ならびにそれらの水和物または医薬として許容される塩。

これらの化合物およびそれらの調製方法は、本発明の出願人の名義において同時係属中の出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０５９６０７において記載されている。

式（Ｉ）の化合物の医薬として許容される塩は、無機または有機酸、例えば、硝酸、塩酸、臭化水素酸、硫酸、過塩素酸、リン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、乳酸、シュウ酸、マロン酸、リンゴ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、イセチオン酸およびサリチル酸などとの酸付加塩を含む。

式（Ｉ）の化合物と組み合わせて使用しようとする抗新生物剤は、アルキル化剤またはアルキル化様剤、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、有糸分裂阻害剤および放射線からなる群から選択されるものである。

本発明はまた、療法において使用するための、上記の化合物（ａ）および作用剤（ｂ）の組合せにも関する。

本発明はさらに、腫瘍を治療するまたはその進行を遅らせるための、上記の化合物（ａ）および作用剤（ｂ）の組合せに関する。本発明はまた、腫瘍を治療するまたはその進行を遅らせるための医薬の調製における、上記の化合物（ａ）および作用剤（ｂ）の組合せの使用を含む。

さらなる態様において本発明は、それを必要とする患者への、上記の化合物（ａ）および作用剤（ｂ）の組合せの投与を含む、腫瘍を治療するまたはその進行を遅らせる方法に関する。

上記の組合せ、使用および方法はすべて、化合物（ａ）および作用剤（ｂ）の同時の、別々のまたは逐次的な投与によって区別なく実施することができ、前記組合せ、使用および方法は、化合物それ自体または医薬組成物（ここで、化合物（ａ）および作用剤（ｂ）は、一緒に製剤化することができるまたは別々にすることができる。）として、化合物（ａ）および作用剤（ｂ）を投与することによって実施することができる。投与が同時でない場合、化合物および作用剤は、任意の順序で投与することができる。

治療しようとする、またはその進行を遅らせる腫瘍は、本発明によると、
−癌腫、例えば、乳癌（トリプルネガティブおよびＢＲＣＡ突然変異を含む）、卵巣癌（ＢＲＣＡ突然変異を含む）、胃癌、結腸直腸癌、腎癌、腎臓癌、肝臓癌、小細胞および非小細胞肺がんを含む肺癌、食道癌、胆嚢癌、膀胱癌、膵臓癌、子宮頸癌、子宮癌、ファロピーオ管癌、腹膜癌、子宮内膜癌、甲状腺癌、前立腺癌（ＰＴＥＮ陰性を含む）、扁平上皮癌を含む皮膚癌など；
−白血病、急性リンパ球性白血病、急性リンパ性白血病、慢性リンパ球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、毛様細胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫およびバーキットリンパ腫を含むリンパ系の造血器腫瘍；急性および慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群ならびに前骨髄球性白血病を含む骨髄系の造血器腫瘍；
−ユーイング肉腫、線維肉腫および横紋筋肉腫を含む間葉起源の腫瘍；
−星細胞腫、神経芽細胞腫、髄芽腫、グリオーマ、多形性膠芽腫および神経鞘腫を含む中枢神経系および末梢神経系の腫瘍；
−副腎皮質がん（ａｄｅｎｏｃｏｒｔｉｃａｌ ｃａｎｃｅｒ）、メラノーマ、精上皮腫、奇形癌、骨肉腫、中皮腫、色素性乾皮症、ケラトキサントーマ（ｋｅｒａｔｏｘａｎｔｈｏｍａ）およびカポジ肉腫を含む他の腫瘍
を含むがこれらに限定されない。

なおさらなる態様において本発明は、医薬として許容される担体、賦形剤または添加剤と混合された、上記の化合物（ａ）および作用剤（ｂ）の組合せを含む医薬組成物を提供する。

本発明の好ましい実施形態によれば、アルキル化剤またはアルキル化様剤は、ナイトロジェンマスタード（メクロレタミン、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファランおよびクロラムブシル）、アジリジン（チオテパ）、ニトロソ尿素（カルムスチン、ロムスチン、セムスチン）、トリアゼン（ダカルバジンおよびテモゾロミド）および白金誘導体（シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチンおよびサトラプラチン）からなる群から選択される。シスプラチンは、例えば、例えばＣＤＤＰ（登録商標）という商標で市場に出ている形態で、投与することができる。テモゾロミドは、例えば、例えばＴＥＭＯＤＡＲ（登録商標）という商標で市場に出ている形態で、投与することができる。

本発明のより好ましい実施形態によれば、アルキル化剤またはアルキル化様剤は、カルボプラチン、シスプラチン、テモゾロミド、ダカルバジンの中の１種または複数である。

代謝拮抗剤は、５−フルオロウラシル、カペシタビン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、メトトレキセートおよびエダトレキサートを含むがこれらに限定されない。カペシタビンは、例えば、例えばＸＥＬＯＤＡ（登録商標）という商標で市場に出ている形態で、投与することができる。ゲムシタビンは、例えば、例えばＧＥＭＺＡＲ（登録商標）という商標で市場に出ている形態で、投与することができる。ペメトレキセドは、例えば、例えばＡＬＩＭＴＡ（登録商標）という商標で市場に出ている形態で、投与することができる。

本発明のより好ましい実施形態によれば、代謝拮抗物質は、ゲムシタビンである。

トポイソメラーゼＩ阻害剤は、トポテカン、イリノテカン（ＣＰＴ−１１）、ＳＮ−３８および９−ニトロカンプトテシンを含むがこれらに限定されない。イリノテカンは、例えば、例えばＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標）という商標で市場に出ている形態で、投与することができる。トポテカンは、例えば、例えばＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標）という商標で市場に出ている形態で、投与することができる。

本発明のより好ましい実施形態によれば、トポイソメラーゼＩ阻害剤は、イリノテカンおよびトポテカンの中の１種または複数である。

トポイソメラーゼＩＩ阻害剤は、アントラサイクリン（ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ネモルビシンおよびイダルビシン）、ポドフィロトキシン（エトポシドおよびテニポシド）、アントラキノン（ミトキサントロンおよびロソザントロン（ｌｏｓｏｚａｎｔｈｒｏｎｅ））およびアクリジン（アクチノマイシンＤ、ブレオマイシンおよびマイトマイシン）を含むがこれらに限定されない。エトポシドは、例えば、例えばＥＰＯＳＩＮ（登録商標）という商標で市場に出ている形態で、投与することができる。

本発明のより好ましい実施形態によれば、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤は、ネモルビシンである。

有糸分裂阻害剤は、タキサン（パクリタキセルおよびドセタキセル）を含むがこれらに限定されない。パクリタキセルは、例えば、例えばＴＡＸＯＬ（登録商標）という商標で市場に出ている形態で、投与することができる。

本発明のより好ましい実施形態によれば、有糸分裂阻害剤は、パクリタキセルおよびドセタキセルの中の１種または複数である。

本明細書において使用される「放射線」という用語は、すべての利用可能な技術に従って実施される、電離放射線によるすべての抗腫瘍治療を含み、それらの非限定的なリストは、全身照射、分割放射線療法、加速照射、強度変調放射線療法、画像誘導放射線療法、外部ビーム放射線療法、密封線源放射線療法または小線源療法、非密封線源放射線療法、全身の放射性同位体療法、３次元原体放射線療法、プロトン療法などを含む。放射線療法を受けている患者は、物理的化合物を投与される（放射性同位体の場合）、またはされない。後者の場合には、本明細書において使用される「組合せ」という用語は、放射線および式（Ｉ）の化合物によってもたらされる作用の相乗的な混合物と広く理解される。

本発明において、組合せの活性成分のそれぞれは、相乗的抗新生物作用をもたらすのに有効な量である。

本発明はまた、それを必要とするヒトを含む哺乳動物において、抗新生物剤を用いる抗新生物療法によって引き起こされる副作用を低下させるための、上記に定義されている式（Ｉ）の化合物ならびにアルキル化剤またはアルキル化様剤、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、有糸分裂阻害剤および放射線からなる群から選択される１種または複数の抗新生物剤を含む組み合わせた調合剤を前記哺乳動物に投与して、相乗的抗新生物作用をもたらすステップを含む方法も提供する。

本明細書において使用される「相乗的抗新生物作用」という用語は、上記に定義されている式（Ｉ）の化合物ならびにアルキル化剤またはアルキル化様剤、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、有糸分裂阻害剤および放射線の有効量の組合せを、ヒトを含む哺乳動物に投与することによる、成長腫瘍の阻害またはその進行を遅らせることを意味する。

本明細書において使用される「組み合わせた調合剤」という用語はまた、上記に定義されている組合せパートナー（ａ）および（ｂ）が、独立してまたは区別された量の組合せパートナー（ａ）および（ｂ）を含む異なる固定された組合せを使用することによって、すなわち、同時にまたは異なる時点で投薬することができる、「キットオブパーツ（ｋｉｔ ｏｆ ｐａｒｔｓ）」の形態の調合剤を含む。次いで、キットオブパーツの構成要素は、例えば、同時にまたは時間をずらして、換言すれば、キットオブパーツの任意の構成要素について異なる時点で等しいまたは異なる時間間隔で、投与することができる。非常に好ましくは、時間間隔は、構成要素の組み合わせた使用における、治療されている疾患に対する作用が、組合せパートナー（ａ）および（ｂ）のいずれか１つのみの使用によって得られる作用より大きくなるように選ばれる。組み合わせた調合剤における、投与しようとする組合せパートナー（ｂ）に対する組合せパートナー（ａ）の総量の比は、例えば、治療しようとする患者部分集団の必要性または異なる必要性が患者の特定の疾患、年齢、性別、体重などに起因し得る単一の患者の必要性に対処するために、様々とすることができる。少なくとも１つの有益な作用があり、例えば、組合せパートナー（ａ）および（ｂ）の作用の相互増強、特に相乗作用、例えば、相加的作用を超える作用、追加の有利な作用、少ない副作用、有効ではない投薬量の組合せパートナー（ａ）および（ｂ）の一方または両方での組み合わせた治療効果、非常に好ましくは組合せパートナー（ａ）および（ｂ）の強い相乗作用がある。

本発明の組合せの作用は、平行した毒性増加を伴わずに、顕著に増加する。言い換えると、本発明の併用療法は、本発明の組合せのパートナー（ａ）および／またはパートナー（ｂ）の抗腫瘍作用を増強し、したがって、腫瘍の最も有効で毒性の少ない治療をもたらす。そのうえ、パートナー（ａ）および（ｂ）の組合せは、投与後のより長い腫瘍退縮活性という追加の利点を提供し、これは、対応する生物への毒性増加に反映されない。本明細書において使用される「投与された（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｄ）」または「投与すること（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ）」という用語は、非経口および／または経口投与を意味する。「非経口」は、静脈内、皮下および筋肉内投与を意味する。

主題発明の方法において、式（Ｉ）の化合物の投与について、一般に用いられる療法のコースは、以下である。

遊離塩基として１ｍｇ／ｍ^２から１ｇ／ｍ^２までの範囲。より好ましくは、用いられるコース療法は、遊離塩基として約５０ｍｇ／ｍ^２／日から約５００ｍｇ／ｍ^２／日まで。典型的なレジメンは、以下の投与スケジュールを含む：２１日間まで連続して毎日；７日間連続して毎日、その後１週間の休止期間で合計して１４日サイクル（２週間サイクル）；１４日間毎日、その後１週間の休止期間（３週間サイクル）；４週間サイクルの１日目から７日目および１５日目から２１日目に毎日；疾患進行まで連続的。

式（Ｉ）の化合物は、様々な剤形で、例えば、錠剤、カプセル剤、糖衣錠またはフィルムコート錠、液体の液剤または懸濁剤の形態で経口的に；坐剤の形態で直腸に；非経口的に、例えば、筋肉内に、または静脈内および／もしくは、くも膜下および／もしくは髄腔内注射または注入を介して、投与することができる。主題発明の方法において、アルキル化剤、例えばテモゾロミドの投与について、一般に用いられる療法のコースは、１日に１５ｍｇ／ｍ^２から３００ｍｇ／ｍ^２までである。より好ましくは、一般に用いられる療法のコースは、４２日間まで連続して１日に約５０ｍｇ／ｍ^２から１５０ｍｇ／ｍ^２までである。

白金誘導体、例えばシスプラチンの投与について、一般に用いられる療法のコースは、２−４週間ごとに１０ｍｇ／ｍ^２／日から１００ｍｇ／ｍ^２／日までである。より好ましくは、一般に用いられる療法のコースは、３−４週間ごとに１回、１日目に約５０ｍｇ／ｍ^２から１００ｍｇ／ｍ^２までである。

カルボプラチンの投与について、一般に用いられる療法のコースは、全身曝露量（ＡＵＣ値と表される）、患者の腎機能および投与のスケジュールに依存する。２から４週スケジュールにわたって４ｍｇ／ｍＬ／ｍｉｎから６ｍｇ／ｍＬ／ｍｉｎまでのＡＵＣを標的化するレジメンが通常採用される。より好ましくは、４週スケジュールにわたって５ｍｇ／ｍＬ／ｍｉｎのＡＵＣを標的化するレジメンが使用される。

代謝拮抗剤、例えばゲムシタビンまたはペメトレキセドの投与について、一般に用いられる療法のコースは、週に１回投与として２００ｍｇ／ｍ^２から２０００ｍｇ／ｍ^２までである。より好ましくは、一般に用いられる療法のコースは、２１日間サイクルの１日目および８日目もしくは２８日サイクルの１、８、１５日目（ゲムシタビン）または２１日サイクルの１日目（ペメトレキセド）に約５００ｍｇ／ｍ^２から１２５０ｍｇ／ｍ^２までである。

トポイソメラーゼＩ阻害剤、例えばイリノテカンの投与について、一般に用いられる療法のコースは、４２日サイクルの１、８、１５、２２日目または４２日サイクルの１、１５、２９日目または２１日サイクルの１日目に３５ｍｇ／ｍ^２から３５０ｍｇ／ｍ^２までである。より好ましくは、一般に用いられる療法のコースは、４２日サイクルの１、８、１５、２２および２９日目に１２５ｍｇ／ｍ^２である。

トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、例えばエトポシドの投与について、一般に用いられる療法のコースは、２１もしくは２８日サイクルの３から５日間または２１もしくは２８日サイクルの１、３、５日目に、１日に１０ｍｇ／ｍ^２から２００ｍｇ／ｍ^２まで、好ましくは１日に３５から１００ｍｇ／ｍ^２である。これらの投薬量はｉ．ｖ．投与用であり、経口投与の場合には用量は２倍になる。

有糸分裂阻害剤、例えばパクリタキセルの投与について、一般に用いられる療法のコースは、１４もしくは２１日サイクルの１日目に５０ｍｇ／ｍ^２から１７５ｍｇ／ｍ^２までまたは週に１回３０ｍｇ／ｍ^２からである。より好ましくは、一般に用いられる療法のコースは、２１日サイクルの１日目に１７５ｍｇ／ｍ^２である。

本発明は、適した容器手段中に、同時の、別々のまたは逐次的なそれらの使用のための使用説明書と一緒に、（ａ）上記に定義されている式（Ｉ）の化合物および（ｂ）上述した１種または複数の抗新生物剤を含み、活性成分が各場合に遊離形態でまたは医薬として許容されるそれらの塩または任意の水和物の形態で存在する、商業用パッケージ（キットオブパーツ）をさらに提供する。本発明によるパッケージにおいて、パートナー（ａ）および（ｂ）のそれぞれは、単一の容器手段内にまたは別個の容器手段内に存在する。

本発明の別の実施形態は、上述した医薬組成物または製品を含む商業用パッケージである。

本発明の組合せの活性は、例えば以下の、本発明を例示するが限定しないことを意図しているインビトロおよびインビボ試験によって示される。

インビトロでの相乗作用の評価
材料および方法。指数関数的に増殖しているヒトがん細胞系（ＭＤＡ−ＭＢ−４３６、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８、Ａ−３７５、ＨＣＴ−１１６、ＫＭ−１２）を播種し、３７℃で加湿した５％ＣＯ２雰囲気中でインキュベートした。薬物を実験培養物に添加し、３７℃で６日間、暗所でインキュベーションを行った。連続希釈曲線を、リキッドハンドラーＭｕｌｔｉｐｒｏｂｅ ＩＩ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用することによって培地において調製した。スカラー用量の式（Ｉ）の化合物および抗新生物剤を、播種の２４時間後に培地に添加した。薬物溶液を、使用の直前に調製した。処理の終了時に、細胞増殖を、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）リーダーを使用して細胞内アデノシン三リン酸モニタリングシステム（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ−Ｐｒｏｍｅｇａ）によって決定した。Ａｓｓａｙ Ｅｘｐｌｏｒｅｒ（ＭＤＬ）プログラムを使用して処理対対照データを比較して阻害活性を評価した。細胞成長の５０％を阻害する用量を、Ｓ字型補間曲線を使用して計算した。

実施例６および７において、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞を播種し、２４時間後、ＰＡＲＰ阻害剤および細胞毒性薬物で処理した。化合物の添加後、プレートをインキュベーターに４８時間戻し、次いで、生細胞核染色Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２（吸収最大３４６ｎｍ 蛍光発光最大４６０ｎｍ）（４’，６−ジアミジニ（ｄｉａｍｉｄｉｎｉ）−２−フェニインドール（ｐｈｅｎｙｉｎｄｏｌｅ）、ジラクテート）（Ｓｉｇｍａ ｃａｔ．Ｎ°Ｄ９５６４）高感度色素を用いて染色して核酸を検出した。

濃縮・断片化された核を有する細胞のパーセントを、Ａｒｒａｙ Ｓｃａｎ ｖＴｉ（商標）（Ｃｅｌｌｏｍｉｃｓ ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）自動顕微鏡リーダーを使用することによって計算した。Ｚｅｉｓｓ５×０．５Ｎ．Ａ．対物レンズを用いたＡｒｒａｙＳｃａｎ ｖＴｉ機器、ＸＦ１００フィルターを用いたＣｙｔｏｔｏｘｉｔｙ．Ｖ３アルゴリズム（Ｃｅｌｌｏｍｉｃｓ／Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を適用。少なくとも９００細胞を、各ウェルについて読み取った。自家製のＥｘｃｅｌマクロを使用して、未処理の試料と比較して、濃縮・断片化された核を有する細胞のパーセントを計算した。

組合せ指数（Ｃ．Ｉ．）を、１未満のＣ．Ｉ．は相加的作用を超える作用：３を超えるＣ．Ｉ．は強い拮抗作用；１．３−３は拮抗作用；１．２−０．８は相加性；０．８−０．３は相乗作用；０．３未満は強い相乗作用を示す、相互排他的ではない薬物についてのＣｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙ（Ａｄｖ Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｇｕｌ １９８４；２２：２７−５５）の方程式に基づいて、複数の薬物作用解析のための、独占権を持つコンピュータプログラムを使用して計算した。

［実施例１］
テモゾロミドと組み合わせた式（Ｉ）の化合物２のインビトロでの細胞毒性活性。
ＭＤＡ−ＭＢ−４３６ヒト乳がんＢＲＣＡ−１突然変異細胞系について、組み合わせた薬物を用いて得られた結果を、表１に示している。

結果は、ヒト腫瘍細胞において式（Ｉ）の化合物２はアルキル化剤テモゾロミドと効率的に組み合わせることができ、強い相乗効果をもたらすことを示している。

［実施例２］
テモゾロミドと組み合わせた式（Ｉ）の化合物２のインビトロでの細胞毒性活性。
Ａ−３７５ヒトメラノーマ細胞系について、組み合わせた薬物を用いて得られた結果を、表２に示している。

結果は、ヒト腫瘍細胞において式（Ｉ）の化合物２はアルキル化剤テモゾロミドと効率的に組み合わせることができ、メラノーマ細胞において強い相乗効果をもたらすことを示している。

［実施例３］
シスプラチンと組み合わせた式（Ｉ）の化合物２のインビトロでの細胞毒性活性。
ＭＤＡ−ＭＢ−４６８ヒト乳がんＰＴＥＮ陰性細胞系について、組み合わせた薬物を用いて得られた結果を、表３に示している。

結果は、ヒト腫瘍細胞において式（Ｉ）の化合物２はアルキル化剤シスプラチンと効率的に組み合わせることができ、乳がん細胞において相乗効果をもたらすことを示している。

［実施例４］
ＳＮ−３８（イリノテカンの活性代謝産物）と組み合わせた式（Ｉ）の化合物２のインビトロでの細胞毒性活性。
ＨＣＴ−１１６ヒト結腸がん細胞系について、組み合わせた薬物を用いて得られた結果を、表４に示している。

結果は、ヒト腫瘍細胞において式（Ｉ）の化合物２はトポイソメラーゼＩ阻害剤と効率的に組み合わせることができ、この結腸がん細胞において強い相乗効果をもたらすことを示している。

［実施例５］
ＳＮ−３８（イリノテカンの活性代謝産物）と組み合わせた式（Ｉ）の化合物２のインビトロでの細胞毒性活性。
ＫＭ−１２ヒト結腸がん細胞系について、組み合わせた薬物を用いて得られた結果を、表５に示している。

結果は、ヒト腫瘍細胞において式（Ｉ）の化合物２はトポイソメラーゼＩ阻害剤と効率的に組み合わせることができ、このＰＴＥＮ突然変異結腸がん細胞系においてもまた相乗効果をもたらすことを示している。

［実施例６］
パクリタキセルと組み合わせた式（Ｉ）の化合物２のインビトロでの細胞毒性活性。
ＭＤＡ−ＭＢ−４６８ヒト乳がん細胞系について、組み合わせた薬物を用いて得られた結果を、表６に示している。

結果は、ヒト腫瘍細胞において式（Ｉ）の化合物２はパクリタキセルと効率的に組み合わせることができ、このＰＴＥＮ突然変異乳がん細胞系において相乗効果をもたらすことを示している。

［実施例７］
ネモルビシンと組み合わせた式（Ｉ）の化合物２のインビトロでの細胞毒性活性。
ＭＤＡ−ＭＢ−４６８ヒト乳がん細胞系について、組み合わせた薬物を用いて得られた結果を、表７に示している。

結果は、ヒト腫瘍細胞において式（Ｉ）の化合物２はネモルビシンと効率的に組み合わせることができ、このＰＴＥＮ突然変異乳がん細胞系において相乗効果をもたらすことを示している。

腫瘍成長阻害および毒性の評価
材料および方法。
Ｈａｒｌａｎ（イタリア）のＢａｌｂ、Ｎｕ／Ｎｕ雄マウス、またはＣＲＩのＣＤ１ Ｎｕ／Ｎｕ雌マウスを、欧州共同体理事会指令（ＥｕｒｏｐｅａｎＣｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓＣｏｕｎｃｉｌＤｉｒｅｃｔｉｖｅ）第８６／６０９／ＥＥＣ号に従って、ペーパーフィルターカバー、滅菌した食物および床敷ならびに酸性化水を備えたケージ中に維持した。Ｃａｐａｎ−１ヒト膵臓がん腫瘍、ＭＸ−１ヒト乳がん腫瘍およびＨＣＴ−１１６ヒト結腸癌の断片を皮下に移植した。ＫＭ−１２細胞をインビトロで成長させ、０．２ｍｌ中の３×１０６を皮下に移植した。腫瘍が触診可能であるときに、処理を開始した。

式（Ｉ）の化合物を、経口経路によって１０ｍｌ／ｋｇの体積で、１日目から１２日目まで示されている用量で投与した。テモゾロミドを、５日間６２．５ｍｇ／ｋｇの用量で経口投与した。組み合わせた場合、式（Ｉ）の化合物を１日目から１２日目まで、テモゾロミドを３日目から７日目まで投与した。イリノテカンを、４日間ごとに２または３回４５ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内に投与した。組み合わせた場合、式（Ｉ）の化合物を１日目から８日目までまたは１２日目まで、イリノテカンを３日目および７日目にまたはならびに１、５および９日目に投与した。ドセタキセルを、１週間に１回、３回にわたって５ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内に投与した。組み合わせた場合、式（Ｉ）の化合物を１日目から１２日目まで、ドセタキセルを１、８および１５日目に投与した。

腫瘍成長および体重を３日ごとに測定した。腫瘍成長は、カリパスによって評価した。２つの直径を記録し、腫瘍重量は、以下の式：長さ（ｍｍ）×幅^２／２に従って計算した。抗腫瘍治療の作用を、腫瘍の指数関数的な成長の開始の遅れとして評価した（参考文献について、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ｄｒｕｇｓ ７：４３７−６０、１９９６を参照されたい）。この遅れ（Ｔ−Ｃ値）は、処理群（Ｔ）および対照群（Ｃ）腫瘍が所定の大きさ（１ｇ）に達するのに必要とした時間（日数）の差異と定義した。毒性は、実験の間の死亡動物の数に基づいて評価した。結果を、表６、７、８および９において報告している。

［実施例８］
テモゾロミドと組み合わせた式（Ｉ）の化合物１のインビボでの抗腫瘍活性。
Ｃａｐａｎ−１ＢＲＣＡ−２突然変異ヒト膵臓異種移植片モデルについて、単一の作用剤としてのおよび組み合わせた薬物を用いて得られた結果を、表８に示している。

結果：式（Ｉ）の化合物１をテモゾロミドと組み合わせた場合に観察されるＴ−Ｃは、単一の処理によって得られるＴ−Ｃの単純な相加によって予期されるよりも高く、強い相乗作用を示した。処理群のいずれにおいても毒性は観察されなかった。

［実施例９］
テモゾロミドと組み合わせた式（Ｉ）の化合物２のインビボでの抗腫瘍活性
Ｃａｐａｎ−１ヒト膵臓異種移植モデルについて、単一の作用剤としてのおよび組み合わせた薬物を用いて得られた結果を、表９に示している。

結果：式（Ｉ）の化合物２をテモゾロミドと組み合わせた場合に観察されるＴ−Ｃは、単一の処理によって得られるＴ−Ｃの単純な相加によって予期されるよりも高く、強い相乗作用を示した。処理群のいずれにおいても毒性は観察されなかった。

［実施例１０］
イリノテカンと組み合わせた式（Ｉ）の化合物２のインビボでの抗腫瘍活性。
ＫＭ−１２ヒト結腸直腸のがん異種移植片モデルＰＴＥＮ突然変異について、単一の作用剤としてのおよび組み合わせた薬物を用いて得られた結果を、表１０に示している。

結果：式（Ｉ）の化合物２をイリノテカンと組み合わせた場合に観察されるＴ−Ｃは、単一の処理によって得られるＴ−Ｃの単純な相加によって予期されるよりも高く、強い相乗作用を示した。処理群のいずれにおいても毒性は観察されなかった。

［実施例１１］
イリノテカンと組み合わせた式（Ｉ）の化合物２のインビボでの抗腫瘍活性。
ＨＣＴ−１１６ヒト結腸直腸のがん異種移植片モデルについて、単一の作用剤としてのおよび組み合わせた薬物を用いて得られた結果を、表１１に示している。

結果：式（Ｉ）の化合物２をイリノテカンと組み合わせた場合に観察されるＴ−Ｃは、単一の処理によって得られるＴ−Ｃの単純な相加によって予期されるよりも高く、この結腸直腸がんモデルにおいてもわずかな相乗作用を示した。より高い用量レベルで投与されたイリノテカンおよび化合物２の組合せは、９１％の最大腫瘍成長阻害を示した。処理群のいずれにおいても毒性は観察されなかった。

［実施例１２］
ドセタキセルと組み合わせた式（Ｉ）の化合物２のインビボでの抗腫瘍活性。
ＭＸ−１ヒト乳がん異種移植片モデルＢＲＣＡ−１突然変異について、単一の作用剤としてのおよび組み合わせた薬物を用いて得られた結果を、表１２に示している。

結果：式（Ｉ）の化合物２をドセタキセルと組み合わせた場合に観察されるＴ−Ｃは、単一の処理によって得られるＴ−Ｃの単純な相加によって予期されるよりも高く、このトリプルネガティブがんモデルにおいて強い相乗作用を示した。ドセタキセルおよび式（Ｉ）の化合物２の組合せは、７９％の最大腫瘍成長阻害を示し、１／７動物は腫瘍を有さなかった。処理群のいずれにおいても毒性は観察されなかった。

Claims (15)

1. （ａ）構造式（Ｉ）：
   

   

   （式中、Ｒは、水素原子またはハロゲン原子であり、Ｒ_１およびＲ_２は両方とも塩素原子、フッ素原子である、または一緒になって、オキソ基（＝Ｏ）を形成する）
   によって定義される化合物および医薬として許容されるそれらの塩または水和物、ならびに
   （ｂ）アルキル化剤またはアルキル化様剤、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼI阻害剤、トポイソメラーゼII阻害剤、有糸分裂阻害剤および放射線からなる群から選択される１種または複数の抗新生物剤
   を含む組合せ。
2. アルキル化剤またはアルキル化様剤が、カルボプラチン、シスプラチン、テモゾロミド、ダカルバジンからなる群から選択される、請求項１に記載の組合せ。
3. 代謝拮抗物質が、ゲムシタビンである、請求項１または２に記載の組合せ。
4. トポイソメラーゼＩ阻害剤が、イリノテカンおよびトポテカンからなる群から選択される、請求項１から３に記載の組合せ。
5. トポイソメラーゼＩＩ阻害剤が、ネモルビシンである、請求項１から４に記載の組合せ。
6. 有糸分裂阻害剤が、パクリタキセルおよびドセタキセルからなる群から選択される、請求項１から５に記載の組合せ。
7. 式（Ｉ）において、
   （ｉ）Ｒが水素原子であれば、Ｒ_１およびＲ_２が両方ともフッ素原子であり、Ｒがフッ素原子であれば、Ｒ_１およびＲ_２が両方とも塩素原子、フッ素原子である、もしくは一緒になって、オキソ基（＝０）を形成する、または
   （ｉｉ）Ｒが、水素原子またはフッ素原子であり、Ｒ_１およびＲ_２が両方ともフッ素原子である、または
   （ｉｉｉ）Ｒ、Ｒ_１およびＲ_２がすべてフッ素原子である、
   請求項１から６に記載の組合せ。
8. 式（Ｉ）の化合物が、
   ２−［１−（４，４−ジフルオロシクロヘキシル）ピペリジン−４−イル］−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−カルボキサミド；
   ２−［１−（４，４−ジフルオロシクロヘキシル）ピペリジン−４−イル］−６−フルオロ−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−カルボキサミド；
   ６−フルオロ−３−オキソ−２−［１−（４−オキソシクロヘキシル）ピペリジン−４−イル］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−カルボキサミド、および
   ２−［１−（４，４−ジクロロシクロヘキシル）ピペリジン−４−イル］−６−フルオロ−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−カルボキサミド
   からなる群から選択される、請求項１から７に記載の組合せ。
9. 同時の、別々のまたは逐次的な投与のための、請求項１から８に記載の組合せ。
10. 医薬組成物として製剤化されている、請求項１から９に記載の組合せ。
11. 前記作用剤（ａ）および（ｂ）を、同時の、別々のまたは逐次的なそれらの使用のための使用説明書と一緒に適した容器中に含む、キットオブパーツの形態の、請求項１から１０に記載の組合せ。
12. 療法において使用するための、請求項１から１１に記載の組合せ。
13. 腫瘍を治療するまたはその進行を遅らせるのに使用するための、請求項１から１２に記載の組合せ。
14. 前記腫瘍が、
    癌腫、例えば、乳癌（トリプルネガティブおよびＢＲＣＡ突然変異を含む）、卵巣癌（ＢＲＣＡ突然変異を含む）、胃癌、結腸直腸癌、腎癌、腎臓癌、肝臓癌、小細胞および非小細胞肺がんを含む肺癌、食道癌、胆嚢癌、膀胱癌、膵臓癌、子宮頸癌、子宮癌、ファロピーオ管癌、腹膜癌、子宮内膜癌、甲状腺癌、前立腺癌（ＰＴＥＮ陰性を含む）、扁平上皮癌を含む皮膚癌など；
    白血病、急性リンパ球性白血病、急性リンパ性白血病、慢性リンパ球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、毛様細胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫およびバーキットリンパ腫を含むリンパ系の造血器腫瘍；急性および慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群ならびに前骨髄球性白血病を含む骨髄系の造血器腫瘍；
    ユーイング肉腫、線維肉腫および横紋筋肉腫を含む間葉起源の腫瘍；
    星細胞腫、神経芽細胞腫、髄芽腫、グリオーマ、多形性膠芽腫および神経鞘腫を含む中枢神経系および末梢神経系の腫瘍；
    副腎皮質がん、メラノーマ、精上皮腫、奇形癌、骨肉腫、中皮腫、色素性乾皮症、ケラトキサントーマおよびカポジ肉腫を含む他の腫瘍
    からなる群から選択される、請求項１３に記載の組合せ。
15. アルキル化剤またはアルキル化様剤、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、有糸分裂阻害剤および放射線からなる群から選択される抗新生物剤によって引き起こされる副作用を低下させるのに使用するための請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物であって、副作用の前記低下が、前記抗新生物剤を前記式（Ｉ）の化合物と組み合わせて投与することによって得られる、前記化合物。