JP2013523150A - イオンチャネルのハイスループットスクリーニング - Google Patents
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Abstract
Description
明する。
Claims (20)
- 複数のウェルを備えるマルチウェルプレートであって、前記マルチウェルプレートの少なくとも1つのウェルが、
(a)ピペットチップを収容するサイズおよび形状の細胞キャビティと、
(b)感知電極を収容するサイズおよび形状の電極ポケットと
を備える底部を備え、前記細胞キャビティおよび前記電極ポケットが、前記ピペットチップおよび前記感知電極の同時収容を可能にするように配置されている、マルチウェルプレート。 - 前記細胞キャビティが前記細胞キャビティの底部表面に少なくとも1つの細胞シール開口を備える、請求項1に記載のマルチウェルプレート。
- 前記細胞キャビティが、前記ピペットチップから分注される液体のかなりの割合がピペットガイドから上方へ流出するのを防ぐために前記ピペットチップと嵌合するような形状およびサイズを有する前記ピペットガイドを備える、請求項1に記載のマルチウェルプレート。
- 前記細胞キャビティと前記電極ポケットとの間の液体接続部をさらに備え、それによって、前記ピペットチップから分注される液体が最初は前記細胞キャビティ内へ流入し、次いで前記電極ポケットを通ってから前記ウェルの上部領域へ出る、請求項3に記載のマルチウェルプレート。
- (a)複数の感知電極と、ピペッタヘッドから向けられたピペットチップを収容するサイズおよび位置の複数の関連するスルーホールとを備える電極板と、
(b)それぞれが前記電極板の1つの電極および1つのスルーホールと整列するように配置された複数のウェルを備えるマルチウェルプレートであり、前記マルチウェルプレートの少なくとも1つのウェルが前記ウェルのピペットチップを収容するサイズおよび形状の細胞キャビティを備える、前記マルチウェルプレートと
を備えるパッチクランプ装置。 - 前記電極板が、前記感知電極と関連する感知および記録する電子機器との間の電気接続を提供するための複数の接点を備える、請求項5に記載のパッチクランプ装置。
- 前記マルチウェルプレートの各ウェルが前記各ウェル内で膜のパッチをシールするための開口を備え、前記少なくとも1つのウェルが1つの感知電極を収容するサイズおよび形状の電極ポケットをさらに備え、前記細胞キャビティおよび前記電極ポケットが、前記ピペットチップおよび前記感知電極の同時収容を可能にするように配置されている、請求項5に記載のパッチクランプ装置。
- 前記細胞キャビティが、前記少なくとも1つのウェルへ向けられたピペットチップと嵌合する形状およびサイズを有するピペットガイドを備える、請求項5に記載のパッチクランプ装置。
- 少なくとも1つのウェルが、電極ポケットと、前記細胞キャビティと前記電極ポケットとの間の液体接続部とをさらに備え、それによって、前記ピペットチップから分注される液体が最初は前記細胞キャビティ内へ流入し、次いで前記電極ポケットを通ってから前記ウェルの上部領域へ出る、請求項5に記載のパッチクランプ装置。
- パッチ・クランプ・アッセイを実行する方法であって、
(a)ウェルの底部の開口にシールされた細胞を提供するステップと、
(b)前記細胞を第1の溶液に暴露するステップと、
(c)前記細胞が前記第1の溶液に暴露される間または暴露された後に、前記細胞からの第1の電気信号を測定するステップと、
(d)前記ウェルに挿入されたピペットから前記ウェルの前記底部へ新鮮な溶液を送達するステップと、
(e)前記ピペットを取り出さずに前記ウェル内で前記ピペットを引き上げ、前記ウェルの上部領域から前記ピペット内へ液体を吸い込むステップと、
(f)前記ウェルから前記ピペット内へ吸い込まれた前記液体を除去するステップと
を含む方法。 - 前記(f)で前記液体を除去した後で前記細胞を第2の溶液に暴露するステップと、前記細胞が前記第2の溶液に暴露される間または暴露された後に、前記細胞からの第2の電気信号を測定するステップとをさらに含み、前記第1の電気信号が対照測定を提供し、前記第2の電気信号が試験測定を提供する、請求項10に記載の方法。
- 前記(c)の第1の電気信号を測定する前記ステップが、前記ウェルへの前記第1の溶液の導入直後に行われる、請求項10に記載の方法。
- 前記第1の電気信号を測定する前記ステップが、前記ウェル内の感知電極からの電流を検出するステップを含む、請求項10に記載の方法。
- 前記ウェルが、ピペットチップおよび感知電極を同時に収容する開いた最上部と、ピペットチップを収容する細胞キャビティ、感知電極、および前記細胞キャビティとの液体接続部を有する電極ポケットを有する底部とを備え、それによって、前記(b)の間に前記第1の溶液が前記ピペットチップから分注され、最初は前記細胞キャビティ内へ流入し、次いで前記電極ポケットを通ってから前記ウェルの上部領域へ出る、請求項10に記載の方法。
- 前記細胞キャビティが、前記少なくとも1つのウェル内へ向けられたピペットチップと嵌合するための形状およびサイズを有し、前記ウェル上方に配置された電極板内の対応するスルーホールと実質的に同軸のピペットガイドを備える、請求項10に記載の方法。
- 前記(a)が、少なくとも1つのリガンド依存性イオンチャネルを含む前記細胞をシールするステップと、前記ウェルへリガンドを送達するステップとをさらに含み、
前記(b)が、前記リガンド依存性イオンチャネルを前記リガンドに暴露した結果として生じる前記第1の電気信号を測定するステップをさらに含む
請求項10に記載の方法。 - 前記(e)と前記(f)との間に、膜の前記パッチに刺激剤を適用するステップと、前記刺激剤の適用後に、前記ウェルへ前記リガンドを送達し、前記リガンド依存性イオンチャネルを前記リガンドに暴露した結果として生じる電気信号を測定するステップとをさらに含む、請求項10に記載の方法。
- 前記リガンド依存性イオンチャネルを再感作させるステップをさらに含む、請求項17に記載の方法。
- 前記刺激剤を適用する前記ステップが医薬活性化合物または生物材料を適用するステップを含む、請求項17に記載の方法。
- 前記ウェルへ前記リガンドを送達した直後に前記電気信号を測定するステップをさらに含む、請求項17に記載の方法。
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