JP2013501518A - How to produce viable tetraploid oysters - Google Patents

How to produce viable tetraploid oysters Download PDF

Info

Publication number
JP2013501518A
JP2013501518A JP2012524635A JP2012524635A JP2013501518A JP 2013501518 A JP2013501518 A JP 2013501518A JP 2012524635 A JP2012524635 A JP 2012524635A JP 2012524635 A JP2012524635 A JP 2012524635A JP 2013501518 A JP2013501518 A JP 2013501518A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
fertilized egg
oysters
dmap
contact
oyster
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP2012524635A
Other languages
Japanese (ja)
Other versions
JP5613240B2 (en
Inventor
スンフン ジョン
Original Assignee
シーエバー カンパニーリミテッド
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from KR1020090075404A external-priority patent/KR100989384B1/en
Priority claimed from KR1020100075514A external-priority patent/KR20120013512A/en
Application filed by シーエバー カンパニーリミテッド filed Critical シーエバー カンパニーリミテッド
Publication of JP2013501518A publication Critical patent/JP2013501518A/en
Application granted granted Critical
Publication of JP5613240B2 publication Critical patent/JP5613240B2/en
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New breeds of animals
    • A01K67/033—Rearing or breeding invertebrates; New breeds of invertebrates
    • A01K67/0333—Genetically modified invertebrates, e.g. transgenic, polyploid
    • A01K67/0334—Genetically modified Molluscs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K61/00—Culture of aquatic animals
    • A01K61/50—Culture of aquatic animals of shellfish
    • A01K61/54—Culture of aquatic animals of shellfish of bivalves, e.g. oysters or mussels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/03—Animals modified by random mutagenesis, e.g. using ENU, chemicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2227/00—Animals characterised by species
    • A01K2227/70—Invertebrates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2267/00—Animals characterised by purpose
    • A01K2267/02—Animal zootechnically ameliorated
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/80—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in fisheries management
    • Y02A40/81—Aquaculture, e.g. of fish

Abstract

本発明は、三倍体メス牡蠣の卵を二倍体オス牡蠣の精子と受精させる段階と;前記受精された卵から第一極体の放出を阻止する段階と;及び前記受精された卵を培養して生育可能な四倍体牡蠣を生産する段階と;を含み、第一極体の放出阻止は、サイトカラシンＢ（ＣＢ）と６−ジメチルアミノプリン（ＤＭＡＰ）に、前記受精された卵を接触させる段階を含むことである生育可能な四倍体牡蠣を生産する方法を提供する。本発明によると、三倍体牡蠣及び二倍体牡蠣から四倍体牡蠣を効率的に生産することができる。  The invention comprises fertilizing a triploid female oyster egg with a diploid male oyster sperm; blocking the release of a first polar body from the fertilized egg; and the fertilized egg Culturing and producing a tetraploid oyster capable of growing; and inhibiting the release of the first polar body, wherein said fertilized egg is transformed into cytochalasin B (CB) and 6-dimethylaminopurine (DMAP) A method is provided for producing viable tetraploid oysters, the method comprising the steps of: According to the present invention, tetraploid oysters can be efficiently produced from triploid oysters and diploid oysters.

Description

本発明は生育可能な四倍体牡蠣を効率的に生産する方法に関する。   The present invention relates to a method for efficiently producing viable tetraploid oysters.

ほとんどの有性生殖動物は、二セットの染色体を有してあり、二倍体と呼ばれる。減数分裂は、世代ごとに染色体の数が二倍になることを防ぐために染色体の数を半分に減らす過程である。これは、二段階の過程であって、こういった過程を通じて一つの二倍体細胞が各々一つの染色体セットを有する四つの半数体（ｈａｐｌｏｉｄ）細胞になる。このような半数体細胞の一つ、または、四つ全ては、配偶子と知られた機能的な卵子、または、精子と成熟されることができる。   Most sexually reproductive animals have two sets of chromosomes, called diploids. Meiosis is the process of reducing the number of chromosomes in half to prevent the number of chromosomes from doubling with each generation. This is a two-stage process, through which one diploid cell becomes four haploid cells each having one chromosome set. One or all four of these haploid cells can be matured into functional eggs or sperm known as gametes.

四倍体牡蠣は、三倍体、交雑及び他の育種プログラムを含めた様々な目的のために重要である。三倍体牡蠣は、二倍体の正常的な生殖期間の間に正常的な二倍体牡蠣に比べてより良い味と向上した成長率などの特定の商業的利点を有すると知られている。   Tetraploid oysters are important for a variety of purposes, including triploids, crosses and other breeding programs. Triploid oysters are known to have certain commercial advantages such as better taste and improved growth rate than normal diploid oysters during the normal reproductive period of diploids .

現在には、そういった三倍体牡蠣は、特定染色体セット操作技術を用いて正常的な二倍体牡蠣から生産されるが、そういった技術によって卵母細胞での減数分裂は、卵母細胞が第二減数分裂の間に第二極体を放出する代わりに卵母細胞内に保有するように操作される   At present, such triploid oysters are produced from normal diploid oysters using a specific chromosome set manipulation technique. Manipulated to hold in the oocyte instead of releasing the second polar body during meiosis

一方、サイトカラシンＢ（ＣＢ）と６−ジメチルアミノプリン（ＤＭＡＰ）は、受精された卵において減数分裂の途中に第一極体（ＰＢ１）の細胞外への放出を阻止する化合物として各々知られている。   On the other hand, cytochalasin B (CB) and 6-dimethylaminopurine (DMAP) are each known as a compound that inhibits the release of the first polar body (PB1) to the outside during meiosis in fertilized eggs. ing.

また、例えば特許文献１には、貝類を垂下式にて養殖する方法において、セメントを主成分とし、アルカリ土類金属の炭酸塩を１０〜５０質量％含有する水硬性組成物のスラリーからなる接着材により、稚貝を垂下連へ固定することを特徴とする貝類の養殖方法が記載されている。   Further, for example, in Patent Document 1, in a method of cultivating shellfish in a hanging manner, an adhesive composed of a slurry of a hydraulic composition containing cement as a main component and 10 to 50% by mass of an alkaline earth metal carbonate. A method for cultivating shellfish, characterized in that the juvenile shellfish is fixed to the pendulum by a material, is described.

しかし、前記の従来技術によってもサイトカラシンＢ（ＣＢ）と６−ジメチルアミノプリン（ＤＭＡＰ）との調合を用いて四倍体牡蠣を効率的に生産する方法は知られていない。   However, there is no known method for efficiently producing tetraploid oysters using a formulation of cytochalasin B (CB) and 6-dimethylaminopurine (DMAP) even by the above-described conventional technology.

特開２００８−２３７０３６号公報JP 2008-237036 A

本発明は、生育可能な四倍体牡蠣を効率的に生産する方法を提供する。   The present invention provides a method for efficiently producing viable tetraploid oysters.

本発明は、三倍体メス牡蠣の卵を二倍体オス牡蠣の精子と受精させる段階と;前記受精された卵から第一極体の放出を阻止する段階と;及び前記受精された卵を培養して生育可能な四倍体牡蠣を生産する段階と;を含み、第一極体の放出阻止はサイトカラシンＢ（ＣＢ）と６−ジメチルアミノプリン（ＤＭＡＰ）に前記受精された卵を接触させる段階を含むことである、生育可能な四倍体牡蠣を生産する方法を提供する。   The invention comprises fertilizing a triploid female oyster egg with a diploid male oyster sperm; blocking the release of a first polar body from the fertilized egg; and the fertilized egg Culturing and producing a tetraploid oyster capable of growing; and inhibiting the release of the first polar body by contacting the fertilized egg with cytochalasin B (CB) and 6-dimethylaminopurine (DMAP) A method is provided for producing viable tetraploid oysters, the method comprising the step of:

前記方法は、三倍体メス牡蠣の卵を二倍体オス牡蠣の精子と受精させる段階を含む。三倍体牡蠣は、商業的に購入できる（Ａｌｌｅｎ，Ｊｒ．、Ｓ.Ｋ.（１９８８）；Ｏｃｅａｎｕｓ ３１、５８−６３）。三倍体牡蠣は、染色体セット操作技術を用いて、卵母細胞（ｏｏｃｙｔｅ）で減数分裂が操作されて、第二減数分裂の間、第二極体を放出する代わりに卵母細胞内に第二極体を保有するようにすることによって、二倍体牡蠣（ｄｉｐｌｏｉｄ ｏｙｓｔｅｒ）から生産されることができる。   The method includes fertilizing a triploid female oyster egg with a diploid male oyster sperm. Triploid oysters can be purchased commercially (Allen, Jr., SK (1988); Oceanus 31, 58-63). Triploid oysters are chromosomally manipulated in oocytes using chromosome set manipulation techniques, and during the second meiosis, the second polar body is released instead of releasing the second polar body. By having a bipolar body, it can be produced from a diploid oyster.

三倍体牡蠣は、産卵（ｓｐａｗｎｉｎｇ）前にフローサイトメトリーによって調査され、その倍数性（ｐｌｏｉｄｙ）を確認することができる。   Triploid oysters can be examined by flow cytometry before spawning to confirm their ploidy.

三倍体牡蠣の卵は、三倍体メス牡蠣を切開することによって（ｓｔｒｉｐ ｓｐａｗｎｉｎｇ）収集することができる。卵は、濾過した海水で洗浄し、２５μｍスクリーンのような適切なスクリーン上に保有されることができる。本発明の一具体例に用いられる前記三倍体牡蠣は、高温及び豊富な餌を有する環境に置くことによって条件化されたものである場合がある。前記条件化は、冬眠（ｗｉｎｔｅｒ ｄｏｒｍａｎｃｙ）の直後に配偶子形成（ｇａｍｅｔｏｇｅｎｅｓｉｓ）の初期段階で始めることが好ましい。   Triploid oyster eggs can be collected by stripping a triploid female oyster. The eggs can be washed with filtered seawater and held on a suitable screen, such as a 25 μm screen. The triploid oysters used in one embodiment of the present invention may be conditioned by placing them in an environment with high temperature and abundant food. The conditioning is preferably initiated at an early stage of gametogenesis immediately after winter dormanty.

次に、前記卵は、正常的二倍体オスから得られた精子で受精される。受精に用いられる精子の量は、卵一つ当たりに約十個以上の精子細胞であることがあり得る。前記受精は、知られた方法によってなることができる。例えば、前記卵と精子とを海水の中で接触させることによってなることができる。   The eggs are then fertilized with sperm obtained from normal diploid males. The amount of sperm used for fertilization can be about 10 or more sperm cells per egg. The fertilization can be performed by a known method. For example, the egg and sperm can be brought into contact with each other in seawater.

前記方法は、また、前記受精された卵から第一極体の放出を阻止する段階を含む。第一極体の放出阻止は、サイトカラシンＢ（ＣＢ）と６−ジメチルアミノプリン（ＤＭＡＰ）に前記受精された卵を接触させる段階を含むことがあり得る。   The method also includes preventing the release of a first polar body from the fertilized egg. Inhibiting the release of the first polar body can include contacting the fertilized egg with cytochalasin B (CB) and 6-dimethylaminopurine (DMAP).

前記接触は、前記受精された卵が第一極体を放出する時間の３０％ないし９０％の時間範囲でなることがあり得る。前記接触は、例えば、受精された後５分ないし１５分でなることがあり得る。   The contact may be in the time range of 30% to 90% of the time that the fertilized egg releases the first polar body. The contact can be, for example, 5 to 15 minutes after being fertilized.

前記接触は、前記受精された卵とサイトカラシンＢ（ＣＢ）と６−ジメチルアミノプリン（ＤＭＡＰ）とを同時に接触させることがあり得る。また、前記接触は、前記受精された卵とサイトカラシンＢ（ＣＢ）と６−ジメチルアミノプリン（ＤＭＡＰ）とを順次に接触させることがあり得る。   The contact may involve contacting the fertilized egg with cytochalasin B (CB) and 6-dimethylaminopurine (DMAP) simultaneously. The contact may sequentially contact the fertilized egg, cytochalasin B (CB) and 6-dimethylaminopurine (DMAP).

例えば、前記接触は、サイトカラシンＢ（ＣＢ）と前記受精された卵とを接触させた後、６−ジメチルアミノプリン（ＤＭＡＰ）と前記受精された卵とを接触させることがあり得る。前記接触は、例えば、サイトカラシンＢ（ＣＢ）と前記受精された卵とを、前記受精された卵が第一極体を放出する時間の３０％ないし９０％の時間範囲で接触させた後、６−ジメチルアミノプリン（ＤＭＡＰ）と前記受精された卵とを、前記受精された卵が第一極体を放出する時間の５０％ないし９０％の時間範囲で接触させることがあり得る。   For example, the contact may contact cytochalasin B (CB) with the fertilized egg, and then contact 6-dimethylaminopurine (DMAP) with the fertilized egg. The contacting may be performed, for example, after contacting cytochalasin B (CB) and the fertilized egg in a time range of 30% to 90% of the time during which the fertilized egg releases the first polar body, It is possible that 6-dimethylaminopurine (DMAP) and the fertilized egg are contacted for a time range of 50% to 90% of the time that the fertilized egg releases the first polar body.

前記接触の一具体例は、サイトカラシンＢ（ＣＢ）と前記受精された卵とを、受精された後５分ないし１５分で接触させた後、６−ジメチルアミノプリン（ＤＭＡＰ）と前記受精された卵とを、受精された後８．３分ないし１５分で接触させることがあり得る。   A specific example of the contact is that cytochalasin B (CB) and the fertilized egg are contacted 5 to 15 minutes after fertilization and then fertilized with 6-dimethylaminopurine (DMAP). Eggs may be contacted 8.3-15 minutes after being fertilized.

また、前記接触は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）の中の０．２５ないし１．０ｐｐｍ濃度のサイトカラシンＢ（ＣＢ）及びジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）の中の０．２５ないし１．０ｐｐｍ濃度の６−ジメチルアミノプリン（ＤＭＡＰ）に前記受精された卵を添加することがあり得る。   In addition, the contact may be performed at a concentration of 0.25 to 1.0 ppm cytochalasin B (CB) in dimethyl sulfoxide (DMSO) and 6-dimethyl at a concentration of 0.25 to 1.0 ppm in dimethyl sulfoxide (DMSO). It is possible to add the fertilized egg to aminopurine (DMAP).

例えば、前記接触は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）の中の０．２５ないし０．７５ｐｐｍ濃度のサイトカラシンＢ（ＣＢ）及びジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）の中の０．２５ないし０．７５ｐｐｍ濃度の６−ジメチルアミノプリン（ＤＭＡＰ）に前記受精された卵を添加することがあり得る。   For example, the contact may include a 0.25 to 0.75 ppm concentration of cytochalasin B (CB) in dimethyl sulfoxide (DMSO) and a 0.25 to 0.75 ppm concentration of 6-dimethyl in dimethyl sulfoxide (DMSO). It is possible to add the fertilized egg to aminopurine (DMAP).

前記方法は、また、前記受精された卵を培養して生育可能な四倍体牡蠣を生産する段階;を含む。   The method also includes culturing the fertilized egg to produce a viable tetraploid oyster.

前記培養は、当業界に知られた通常の受精された卵の培養方法によって培養されることができる。例えば、前記培養は、１８℃ないし３０℃、例えば、２３℃ないし２８℃でなることがあり得る。前記培養は、塩度１７ｐｐｔないし３３ｐｐｔ、例えば、約２０ｐｐｔないし２２ｐｐｔでなることがあり得る。   The culture can be performed by a conventional fertilized egg culture method known in the art. For example, the culture can be at 18 ° C. to 30 ° C., such as 23 ° C. to 28 ° C. The culture may consist of a salinity of 17 ppt to 33 ppt, for example about 20 ppt to 22 ppt.

前記方法において、牡蠣は、マガキ属（Ｃｒａｓｓｏｓｔｒｅａ属）であることがあり得る。マガキ属の牡蠣には、マガキ（真牡蠣：Ｃｒａｓｓｏｓｔｒｅａ ｇｉｇａｓ）、クラソストレア・シカマイ（Ｃｒａｓｓｏｓｔｒｅａ ｓｉｋａｍａｉ）、クラソストレア・リブラリス（Ｃｒａｓｓｏｓｔｒｅａ ｒｉｖｕｌａｒｉｓ）及びアメリカガキ（Ｃｒａｓｓｏｓｔｒｅａ ｖｉｒｇｉｎｉｃａ）からなる群から選択されることがあり得る。また、前記牡蠣は、アコヤガイ属（Ｐｉｎｃｔａｄａ属）の牡蠣であることがあり得る。例えば、前記牡蠣は、クロチョウガイ（Ｐｉｎｃｔａｄａ ｍａｒｇａｒｉｔｉｆｅｒａ）であることがあり得る。   In the above method, the oyster may be a genus Crassostrea. Oysters of the genus Oyster may be selected from the group consisting of oysters (Classo oysters: Crassostrea gigas), Crassostrea sikamai, Crassostrea rivularis, and a group of American oysters (Crasstorea viraria). In addition, the oyster may be an oyster of the genus Pinctada. For example, the oyster may be Pinctada margarififera.

本発明の方法によって、通常的な二倍体牡蠣が天然的に生育できる自然条件で成長及び成熟することのできる四倍体牡蠣が生成されることができ、前記四倍体牡蠣は、二倍体牡蠣と交配され、三倍体牡蠣を生成することができる。   By the method of the present invention, tetraploid oysters can be produced that can grow and mature in natural conditions that allow normal diploid oysters to grow naturally. It can be crossed with body oysters to produce triploid oysters.

本発明の一具体例によると、三倍体牡蠣及び二倍体牡蠣から四倍体牡蠣を効率的に生産することができる。   According to one embodiment of the present invention, tetraploid oysters can be efficiently produced from triploid oysters and diploid oysters.

以下、本発明を、実施例を通じてより詳しく説明する。しかし、これら実施例は、本発明を例示的に説明するためのものであって、本発明の範囲がこれら実施例に限定されることはない。   Hereinafter, the present invention will be described in more detail through examples. However, these examples are for illustrative purposes only, and the scope of the present invention is not limited to these examples.

本実施例に用いられた三倍体太平洋牡蠣（ｔｒｉｐｌｏｉｄ Ｐａｃｉｆｉｃ ｏｙｓｔｅｒ）は、２年目であって、第二極体（ＰＢ２）の放出を阻止することによって製造された。三倍体牡蠣は、産卵前にフローサイトメトリーを通じて個別的に確認した。配偶子は、剥奪産卵（ｓｔｒｉｐ ｓｐａｗｎｉｎｇ）によって収集した。   The triploid Pacific oyster used in this example was in the second year and was manufactured by blocking the release of the second polar body (PB2). Triploid oysters were individually confirmed through flow cytometry before egg laying. Gametes were collected by strip spawning.

卵は、８５μｍスクリーンを通過させ、大きな組織の破片を除去して２５μｍスクリーン上で洗浄した。全ての受精及び処理は、２μｍスクリーンに濾過した２５℃ないし２８℃の海水で行われた。本実施例に用いられた海水の塩度は、約２０ｐｐｔないし２２ｐｐｔであった。   The eggs were passed through an 85 μm screen to remove large tissue debris and washed on a 25 μm screen. All fertilizations and treatments were performed in 25 ° C. to 28 ° C. seawater filtered through a 2 μm screen. The salinity of the seawater used in this example was about 20ppt to 22ppt.

三倍体から由来した卵は、二倍体から由来した半数体精子（ｈａｐｌｏｉｄ ｓｐｅｒｍ）で受精された。卵を受精した後、受精された卵を次のように区分した:対照群、比較群、及び実験群。   Eggs derived from triploids were fertilized with haploid sperm derived from diploids. After fertilizing the eggs, the fertilized eggs were divided as follows: control group, comparison group, and experimental group.

対照群で受精された卵は、化学物質で処理することなく培養された。比較群１及び比較群２で、前記受精された卵は、第一極体の放出を阻止するためにサイトカラシンＢ（以下、「ＣＢ」とする。)で処理された。ＣＢは、ジメチルスルホキシド（以下、「ＤＭＳＯ」とする。）に溶解させて準備し、受精された卵に０．５％ＤＭＳＯ含有の０．２５ｍｇ／ｌ（比較群１）及び０．５％ＤＭＳＯ含有の０．５ｍｇ／ｌ（比較群２）の最終濃度で添加した。   Eggs fertilized in the control group were cultured without treatment with chemicals. In Comparative Group 1 and Comparative Group 2, the fertilized eggs were treated with cytochalasin B (hereinafter referred to as “CB”) to prevent the release of the first polar body. CB was prepared by dissolving in dimethyl sulfoxide (hereinafter referred to as “DMSO”) and fertilized eggs containing 0.25 mg / l (Comparative Group 1) containing 0.5% DMSO and 0.5% DMSO. Added at a final concentration of 0.5 mg / l (Comparative Group 2).

比較群３及び比較群４で、前記受精された卵は、第一極体の放出を阻止するために６−ジメチルアミノプリン（以下、「ＤＭＡＰ」とする。)で処理された。ＤＭＡＰは、ＤＭＳＯに溶解させて準備し、受精された卵に０．５％ＤＭＳＯ含有の０．２５ｍｇ／ｌ（比較群３）及び０．５％ＤＭＳＯ含有の０．５ｍｇ／ｌ（比較群４）の最終濃度で添加した。   In Comparative Group 3 and Comparative Group 4, the fertilized eggs were treated with 6-dimethylaminopurine (hereinafter referred to as “DMAP”) to prevent the release of the first polar body. DMAP was prepared by dissolving in DMSO and fertilized eggs containing 0.25 mg / l containing 0.5% DMSO (Comparative Group 3) and 0.5 mg / l containing 0.5% DMSO (Comparative Group 4). ) At the final concentration.

実験群１及び実験群２で、前記受精された卵は、第一極体の放出を阻止するためにＣＢ及びＤＭＡＰで処理された。ＣＢとＤＭＡＰは、ＤＭＳＯに溶解させて準備し、受精された卵に０．５％ＤＭＳＯ含有の０．２５ｍｇＣＢ／ｌ及び０．２５ｍｇＤＭＡＰ／ｌ（実験群１）及び０．５％ＤＭＳＯ含有の０．５ｍｇＣＢ／ｌ及び０．５ｍｇＤＭＡＰ／ｌ（実験群２）の最終濃度で添加した。   In experimental group 1 and experimental group 2, the fertilized eggs were treated with CB and DMAP to prevent the release of the first polar body. CB and DMAP were prepared by dissolving in DMSO, and fertilized eggs were prepared with 0.25 mg CB / l and 0.25 mg DMAP / l (experimental group 1) containing 0.5% DMSO and 0% containing 0.5% DMSO. Added at final concentrations of 5 mg CB / l and 0.5 mg DMAP / l (experimental group 2).

前記対照群、比較群及び実験群１及び２で、各処理は、受精後５分に始めて１５分の間に続いた。各処理後、受精された卵を１％ＤＭＳＯ−海水で洗浄し、６５卵／ｍｌの密度で培養した。   In the control group, comparative group and experimental groups 1 and 2, each treatment was started for 5 minutes after fertilization and continued for 15 minutes. After each treatment, fertilized eggs were washed with 1% DMSO-seawater and cultured at a density of 65 eggs / ml.

実験群３で、前記受精された卵は、第一極体の放出を阻止するために、ＣＢ及びＤＭＡＰで処理された。ＣＢとＤＭＡＰは、ＤＭＳＯに溶解させて準備し、受精された卵に０．５％ＤＭＳＯ含有の０．２５ｍｇＣＢ／ｌの最終濃度で受精した後５分に処理を始めて、受精後１０分に０．２５ｍｇＤＭＡＰ／ｌの最終濃度で添加し、受精後１５分まで続いた（実験群３）。   In experimental group 3, the fertilized eggs were treated with CB and DMAP to prevent the release of the first polar body. CB and DMAP were prepared by dissolving in DMSO, and the fertilized egg was fertilized at a final concentration of 0.25 mg CB / l containing 0.5% DMSO, and the treatment was started 5 minutes and 0 minutes after fertilization. Added at a final concentration of 25 mg DMAP / l and continued up to 15 minutes after fertilization (Experimental Group 3).

実験群４で、前記受精された卵は、第一極体の放出を阻止するためにＣＢ及びＤＭＡＰで処理された。ＣＢとＤＭＡＰは、ＤＭＳＯに溶解させて準備し、受精された卵に０．５％ＤＭＳＯ含有の０．５ｍｇＣＢ／ｌの最終濃度で受精後５分に処理を始めて、受精後１０分に０．５ｍｇＤＭＡＰ／ｌの最終濃度で添加し、受精後１５分まで続いた（実験群４）。実験群３及び４で、各処理後、受精された卵を１％ＤＭＳＯ−海水で洗浄して６５卵／ｍｌの密度で培養した。   In experimental group 4, the fertilized eggs were treated with CB and DMAP to prevent the release of the first polar body. CB and DMAP were prepared by dissolving in DMSO, and the fertilized egg was treated at a final concentration of 0.5 mg CB / l containing 0.5% DMSO at 5 minutes after fertilization, and at 0. Added at a final concentration of 5 mg DMAP / l and continued up to 15 minutes after fertilization (experimental group 4). In experimental groups 3 and 4, after each treatment, fertilized eggs were washed with 1% DMSO-seawater and cultured at a density of 65 eggs / ml.

Figure 2013501518
Figure 2013501518

表１の百分率分裂は、受精後９０分ないし１２０分で決定された。分割された胚芽の生存率は、受精後１日、７日及び３５日（ｓｐａｔ）に記録した。表１に示したように、実験群１ないし４は、対照群及び比較群に比べて分裂百分率及び受精後３５日生存率において、著しく高かった。即ち、受精された卵から第一極体の放出を阻止する段階において、ＣＢとＤＭＡＰとを調合して用いることによって、高い効率で幼生を生産することができた。   The percentage splits in Table 1 were determined from 90 to 120 minutes after fertilization. The viability of the divided embryos was recorded 1 day, 7 days and 35 days (spat) after fertilization. As shown in Table 1, the experimental groups 1 to 4 were significantly higher in the division percentage and the 35-day survival rate after fertilization than the control group and the comparative group. That is, in the stage of preventing the release of the first polar body from the fertilized egg, larvae could be produced with high efficiency by mixing and using CB and DMAP.

また、これら試料採取日に生存幼生の倍数組成（ｐｌｏｉｄｙ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）を、フローサイトメトリーを用いて決定した。受精後三ヶ月に、生存牡蠣を採取して体重及び染色体数を計数した。染色体分析のために、牡蠣を集中的摂食（ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ ｆｅｅｄｉｎｇ）と共に１２時間の間、コルヒチン（０．００５％）で処理した。牡蠣の内臓は、殻から分離し、重さを計った。   In addition, the ploidy composition of surviving larvae was determined using flow cytometry on the day of sampling. Three months after fertilization, live oysters were collected and counted for body weight and chromosome number. For chromosomal analysis, oysters were treated with colchicine (0.005%) for 12 hours with intensive feeding. Oyster internal organs were separated from the shell and weighed.

次に、全身体（ｗｈｏｌｅ ｂｏｄｙ）を切って酢酸／メタノール混合物（１：３）の中に固定した。適切な量の固定された試料をスライドに注いで空気乾燥した。スライドをリーシュマン染色（Ｌｅｉｓｈｍａｎ'ｓ ｓｔａｉｎ）した。染色体損失の信号を示さない最低１０個の中期細胞等（ｍｅｔａｐｈａｓｅ ｃｅｌｌｓ）が各牡蠣に対して計数された。染色体数が確実に決定された固体等のみを分析に用いた。２０、３０及び４０個の染色体を有した牡蠣を各々二倍体、三倍体及び四倍体と各々名づけた。   Next, the whole body was cut and fixed in an acetic acid / methanol mixture (1: 3). An appropriate amount of fixed sample was poured onto the slide and air dried. Slides were stained with Leishman's stain. A minimum of 10 metaphase cells that did not show a signal of chromosome loss were counted for each oyster. Only solids whose chromosome number was reliably determined were used for analysis. Oysters with 20, 30 and 40 chromosomes were named diploid, triploid and tetraploid, respectively.

表２は、受精後三ヶ月で、実験群由来５０個の牡蠣に対して体重及び染色数を測定した結果である。明らかに染色体が計数されたもののみをデータに含ませて、測定可能な中期細胞のない牡蠣は、分析から外した。   Table 2 shows the results of measuring the body weight and the number of staining for 50 oysters derived from the experimental group at 3 months after fertilization. Only those whose chromosomes were clearly counted were included in the data, and oysters without measurable metaphase cells were excluded from the analysis.

Figure 2013501518
Figure 2013501518

表２に示したように、受精後三ヶ月で長さ１ないし４ｃｍの牡蠣の中で、四倍体牡蠣は７８％ないし７９．６％の範囲で、高い比率を占めていた。   As shown in Table 2, the tetraploid oysters accounted for a high ratio in the range of 78% to 79.6% among the oysters 1 to 4 cm long three months after fertilization.

本実施例の結果から、受精された卵から第一極体の放出を阻止する段階において、ＣＢとＤＭＡＰとを調合して用いることによって、高い効率で四倍牡蠣を生産することができた。   From the results of this example, it was possible to produce quadruple oysters with high efficiency by mixing and using CB and DMAP in the stage of preventing the release of the first polar body from the fertilized egg.

生産された四倍体牡蠣は、天然二倍体牡蠣が生育する条件で生育することができた。また、前記四倍体牡蠣は、二倍体牡蠣と交配させることによって三倍体牡蠣を生産することができた。また、前記四倍体牡蠣は、四倍体牡蠣同士に交配させることによって、他の四倍体牡蠣を生産することができた。   The produced tetraploid oysters were able to grow under conditions that allowed natural diploid oysters to grow. In addition, the tetraploid oyster could be produced by mating with a diploid oyster. Further, the tetraploid oysters were able to produce other tetraploid oysters by mating with tetraploid oysters.

Claims (11)

三倍体メス牡蠣の卵を二倍体オス牡蠣の精子と受精させる段階と;
前記受精された卵から第一極体の放出を阻止する段階と;及び
前記受精された卵を培養して生育可能な四倍体牡蠣を生産する段階と;を含み、第一極体の放出阻止は、サイトカラシンＢ（ＣＢ）と６−ジメチルアミノプリン（ＤＭＡＰ）に、前記受精された卵を接触させる段階を含むことである
生育可能な四倍体牡蠣を生産する方法。 Fertilizing a triploid female oyster egg with a diploid male oyster sperm;
Releasing the first polar body from the fertilized egg; and culturing the fertilized egg to produce a viable tetraploid oyster. Inhibiting is including contacting the fertilized egg with cytochalasin B (CB) and 6-dimethylaminopurine (DMAP). A method of producing viable tetraploid oysters. 前記接触は、前記受精された卵とサイトカラシンＢ（ＣＢ）と６−ジメチルアミノプリン（ＤＭＡＰ）とを同時に接触させることである
請求項１に記載の生育可能な四倍体牡蠣を生産する方法。 The method for producing a viable tetraploid oyster according to claim 1, wherein the contact is bringing the fertilized egg into contact with cytochalasin B (CB) and 6-dimethylaminopurine (DMAP) simultaneously. . 前記接触は、前記受精された卵と、サイトカラシンＢ（ＣＢ）と６−ジメチルアミノプリン（ＤＭＡＰ）とを順次に接触させることである
請求項１に記載の生育可能な四倍体牡蠣を生産する方法。 2. The viable tetraploid oyster according to claim 1, wherein the contact is to sequentially contact the fertilized egg with cytochalasin B (CB) and 6-dimethylaminopurine (DMAP). how to. 前記接触は、サイトカラシンＢ（ＣＢ）と前記受精された卵を接触させた後、６−ジメチルアミノプリン（ＤＭＡＰ）と前記受精された卵とを接触させることである
請求項１に記載の生育可能な四倍体牡蠣を生産する方法。 The growth according to claim 1, wherein the contact is contact of 6-dimethylaminopurine (DMAP) and the fertilized egg after contacting cytochalasin B (CB) and the fertilized egg. How to produce possible tetraploid oysters. 前記接触は、サイトカラシンＢ（ＣＢ）と前記受精されたと卵を、前記受精された卵が第一極体を放出する時間の３０％ないし９０％の時間範囲で接触させた後、６−ジメチルアミノプリン（ＤＭＡＰ）と前記受精された卵とを、前記受精された卵が第一極体を放出する時間の５０％ないし９０％の時間範囲で接触させることである
請求項１に記載の生育可能な四倍体牡蠣を生産する方法。 The contacting comprises contacting cytochalasin B (CB) with the fertilized egg in a time range of 30% to 90% of the time that the fertilized egg releases the first polar body; The growth according to claim 1, wherein aminopurine (DMAP) and the fertilized egg are brought into contact in a time range of 50% to 90% of the time during which the fertilized egg releases the first polar body. How to produce possible tetraploid oysters. 前記接触は、サイトカラシンＢ（ＣＢ）と前記受精された卵とを、受精された後５分ないし１５分で接触させた後、６−ジメチルアミノプリン（ＤＭＡＰ）と前記受精された卵とを、受精された後８．３分ないし１５分で接触させることである
請求項１に記載の生育可能な四倍体牡蠣を生産する方法。 In the contact, cytochalasin B (CB) and the fertilized egg are contacted 5 to 15 minutes after fertilization, and then 6-dimethylaminopurine (DMAP) and the fertilized egg are contacted. The method for producing a viable tetraploid oyster according to claim 1, wherein the contact is made between 8.3 and 15 minutes after fertilization. 前記接触は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）の中の０．２５ないし１．０ｐｐｍ濃度のサイトカラシンＢ（ＣＢ）及びジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）の中の０．２５ないし１．０ｐｐｍ濃度の６−ジメチルアミノプリン（ＤＭＡＰ）に前記受精された卵を添加することである
請求項１に記載の生育可能な四倍体牡蠣を生産する方法。 The contact is performed at a concentration of 0.25 to 1.0 ppm cytochalasin B (CB) in dimethyl sulfoxide (DMSO) and 6-dimethylaminopurine at a concentration of 0.25 to 1.0 ppm in dimethyl sulfoxide (DMSO). The method for producing a viable tetraploid oyster according to claim 1, wherein the fertilized egg is added to (DMAP). 前記接触は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）の中の０．２５ないし０．７５ｐｐｍ濃度のサイトカラシンＢ（ＣＢ）及びジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）の中の０．２５ないし０．７５ｐｐｍ濃度の６−ジメチルアミノプリン（ＤＭＡＰ）に前記受精された卵を添加することである
請求項７に記載の生育可能な四倍体牡蠣を生産する方法。 The contact is performed at a concentration of 0.25 to 0.75 ppm cytochalasin B (CB) in dimethyl sulfoxide (DMSO) and 6-dimethylaminopurine at a concentration of 0.25 to 0.75 ppm in dimethyl sulfoxide (DMSO). The method for producing a viable tetraploid oyster according to claim 7, wherein the fertilized egg is added to (DMAP). 前記接触は、前記受精された卵が第一極体を放出する時間の３０％ないし９０％の時間範囲でなることである
請求項１に記載の生育可能な四倍体牡蠣を生産する方法。 The method of producing viable tetraploid oysters according to claim 1, wherein the contacting is for a time range of 30% to 90% of the time that the fertilized egg releases the first polar body. 前記接触は、受精された後５分ないし１５分でなることである
請求項１に記載の生育可能な四倍体牡蠣を生産する方法。 The method of producing a viable tetraploid oyster according to claim 1, wherein the contact is 5 to 15 minutes after fertilization. 前記培養は、１８℃ないし３０℃で塩度１７ｐｐｔないし３３ｐｐｔでなることである
請求項１に記載の生育可能な四倍体牡蠣を生産する方法。 The method for producing viable tetraploid oysters according to claim 1, wherein the culture is performed at 18 ° C to 30 ° C and a salinity of 17 ppt to 33 ppt.
JP2012524635A 2009-08-14 2010-08-06 How to produce viable tetraploid oysters Active JP5613240B2 (en)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020090075404A KR100989384B1 (en) 2009-08-14 2009-08-14 Method of producing a viable tetraploid oyster
KR10-2009-0075404 2009-08-14
KR10-2010-0075514 2010-08-05
KR1020100075514A KR20120013512A (en) 2010-08-05 2010-08-05 Method of producing a viable tetraploid oyster
PCT/KR2010/005169 WO2011019166A2 (en) 2009-08-14 2010-08-06 Method for producing viable tetraploid oysters

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2013501518A true JP2013501518A (en) 2013-01-17
JP5613240B2 JP5613240B2 (en) 2014-10-22

Family

ID=43586617

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2012524635A Active JP5613240B2 (en) 2009-08-14 2010-08-06 How to produce viable tetraploid oysters

Country Status (4)

Country Link
JP (1) JP5613240B2 (en)
CN (1) CN102573453B (en)
CO (1) CO6511223A2 (en)
WO (1) WO2011019166A2 (en)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2015156488A (en) * 2010-03-26 2015-08-27 クアルコム，インコーポレイテッド Damascene type magnetic tunnel junction structure with horizontal and perpendicular portions, and method of fabricating the same

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104255586B (en) * 2014-08-15 2016-01-20 中国科学院南海海洋研究所 A kind of time point quantitative Treatment method of producing Hong Kong oyster all-triploid
CN107494358B (en) * 2017-09-28 2019-11-01 中国科学院南海海洋研究所 A kind of preparation method of Hong Kong oyster tetraploid children shellfish
CN109730008B (en) * 2019-03-11 2021-01-01 中国海洋大学 Method for cultivating grapevine oyster tetraploid
CN112535128A (en) * 2020-07-14 2021-03-23 厦门世倍海洋科技有限公司 Method for producing allotetraploid by hybridizing diploid of Crassostrea ampelopsis Grossdentata and triploid of Crassostrea pacifica
CN112535127A (en) * 2020-07-14 2021-03-23 厦门世倍海洋科技有限公司 Method for producing allotetraploid by hybridizing diploid of Crassostrea ampelopsis Grossdentata and triploid of Crassostrea hongkongensis
CN113678764B (en) * 2020-12-31 2023-08-04 青岛前沿海洋种业有限公司 Method for producing tetraploid oyster and interspecific hybridization triploid oyster
CN113951194B (en) * 2021-10-20 2022-12-13 青岛前沿海洋种业有限公司 Method for producing triploid oysters by interspecific hybridization of Fujian oysters and sikauri oysters
CN114208735B (en) * 2021-12-22 2023-02-28 中国科学院南海海洋研究所 Method for cultivating rapid-growth new strain of hong Kong oyster triploid by backcross breeding technology
CN114600807A (en) * 2022-04-02 2022-06-10 厦门大学 Method for inducing Haliotis discus hannai tetraploid
CN116406649B (en) * 2023-02-22 2024-03-19 中国科学院南海海洋研究所 Method for improving genetic diversity of oyster tetraploid and constructing tetraploid stable group line

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3839842B2 (en) * 1994-01-21 2006-11-01 ラトガーズ， ザ ステイト ユニバーシティ オブ ニュー ジャージー Tetraploid shellfish
WO2008132350A2 (en) * 2007-03-23 2008-11-06 Institut Francais De La Recherche Pour L'exploitation De La Mer (Ifremer) Production of bivalve tetraploid molluscs from diploid parents

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050149997A1 (en) * 2003-11-04 2005-07-07 Wolozin Benjamin L. Sterilization of marine organisms by manipulation of DNA content
CN1545873A (en) * 2003-12-16 2004-11-17 中国海洋大学 Method for inducting oyster tetraploid using 6-dimethylin purine

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3839842B2 (en) * 1994-01-21 2006-11-01 ラトガーズ， ザ ステイト ユニバーシティ オブ ニュー ジャージー Tetraploid shellfish
WO2008132350A2 (en) * 2007-03-23 2008-11-06 Institut Francais De La Recherche Pour L'exploitation De La Mer (Ifremer) Production of bivalve tetraploid molluscs from diploid parents
JP2010521982A (en) * 2007-03-23 2010-07-01 アンスティテュ フランセ ド ルシェルシュ プール レクスプロワタション ド ラ メール（アイエフアールイーエムイーアール） Production of tetraploid bivalve molluscs from diploid parents

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JPN6013039499; Ｙ．Ｊ．Ｙｉ，　Ｃ．Ｓ．Ｐａｒｋ: '"Ｐａｒｔｈｅｎｏｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ｐｏｒｃｉｎｅ　ｏｏｃｙｔｅｓ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｂｙ　ｅｔｈａｎｏｌ，　ｃｙｃｌｏｈｅｘｉｍｉｄｅ，　ｃｙｔｏｃｈａｌａｓｉｎ　Ｂ　ａｎ' Ａｎｉｍａｌ　Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｖｏｌ．８６，　Ｉｓｓｕｅｓ３-４, 200504, ｐａｇｅｓ　２９７-３０４ *
JPN6013039501; Ｓｕｏ-Ｆｅｎｇ　Ｍａ，　ｅｔ．ａｌ．: '"Ｐａｒｔｈｅｎｏｇｅｎｅｒｉｃ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｏｕｓｅ　ｏｏｃｙｔｅｓ　ｂｙ　ｓｔｒｏｎｔｉｕｍ　ｃｈｌｏｒｉｄｅ：　Ａ　ｓｅａｒｃｈ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ' Ｔｈｅｒｉｏｇｅｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ．６４，　Ｉｓｓｕｅ５, 200509, ｐａｇｅｓ　１１４２-１１５７ *
JPN6013039505; Ｗｅｎｓｈａｎ　Ｌｉｕ，　Ｍｉｋｅ　Ｈｅａｓｍａｎ，　Ｒｏｄ　Ｓｉｍｐｓｏｎ: '"Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｒｉｐｌｏｉｄｙ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ　ｂｌａｃｋｌｉｐ　ａｂａｌｏｎｅ，　Ｈａｌｉｏｔｉｓ　ｒｕｂｒａ：　ａ　ｐｒｅｌｉｍｉ' Ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ Ｖｏｌ．２３３，　Ｉｓｓｕｅｓ１-４, 200404, ｐａｇｅｓ　７９-９２ *
JPN6013039507; Ｂｒｅｎｔ　Ｖａｄｏｐａｌａｓ，　Ｊｏｎａｔｈａｎ　Ｐ．Ｄａｖｉｓ: '"Ｏｐｔｉｍａｌ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｔｒｉｐｌｏｉｄ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｇｅｏｄｕｃｋ　ｃｌａｍｓ，　Ｐａｎｏｐｅａ　ａｂｒｕｐｔａ，　ｂｙ　６-ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｕｒｉｎｅ"' Ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ Ｖｏｌ．２３０，　Ｉｓｓｕｅｓ１-４, 200402, ｐａｇｅｓ　２９-４０ *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2015156488A (en) * 2010-03-26 2015-08-27 クアルコム，インコーポレイテッド Damascene type magnetic tunnel junction structure with horizontal and perpendicular portions, and method of fabricating the same

Also Published As

Publication number Publication date
WO2011019166A2 (en) 2011-02-17
JP5613240B2 (en) 2014-10-22
CN102573453B (en) 2014-05-07
WO2011019166A3 (en) 2011-07-14
CN102573453A (en) 2012-07-11
CO6511223A2 (en) 2012-08-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5613240B2 (en) How to produce viable tetraploid oysters
JP3839842B2 (en) Tetraploid shellfish
Huo et al. Effects of salinity on embryonic development, survival, and growth of Crassostrea hongkongensis
KR101517632B1 (en) Production of bivalve tetraploid molluscs from diploid parents
Vasil’Ev et al. How many times has polyploidization occurred during acipenserid evolution? New data on the karyotypes of sturgeons (Acipenseridae, Actinopterygii) from the Russian Far East
Happe et al. Early life history of triploid rainbow trout (Salmo gairdneri Richardson)
CN113016673A (en) Method for producing oyster of Fujian oyster of yellow shell/black shell triploid in large scale
Qin et al. Aquaculture performance comparison of reciprocal triploid C. gigas produced by mating tetraploids and diploids in China
KR100989384B1 (en) Method of producing a viable tetraploid oyster
CN114208734B (en) Method for improving production performance of portuguese oyster triploid by integrating multiple breeding technologies
CN113749059B (en) Cultivation method for rapidly growing triploid crassostrea gigas' Hayao No. 1
Qin et al. Tetraploid induction of Crassostrea hongkongensis and C. sikamea by inhibiting the polar body 1 release in diploid fertilized eggs
Yao et al. Interspecific hybridization between Crassostrea angulata and C. ariakensis
JPWO2016152215A1 (en) Method for maintaining ovary of marine fish, method for adjusting culture solution, and method for producing egg or fertilized egg of marine fish
Li et al. Feasibility of interspecific hybridization between Iwagaki oyster, Crassostrea nippona and Portuguese oyster, Crassostrea angulata
You et al. Study on embryonic development and early growth of triploid and gynogenetic diploid left-eyed flounder, Paralichthys olivaceus (T. et S.)
CN112931323A (en) Induction method of high heterozygosity tetraploid of novel variety Haoda No. 3 of crassostrea gigas
Liu et al. Induction and evaluation of triploidy in the Australian blacklip abalone, Haliotis rubra: a preliminary study
CN103798165A (en) Good nacre cultivating method for pinctada martensii
RU2548104C1 (en) Method of growing of heterotic larvas of giant oyster crassostrea gigas (th)
Wang et al. Improvement in production traits by mass spawning type crossbreeding in bay scallops
Qin et al. Comparison of growth, survival and fertility of the southern and northern populations of Crassostrea ariakensis and their hybrids in southern China
Grunina et al. Dispermic androgenesis in sturgeons with the use of cryopreserved sperm: production of androgenetic Siberian sturgeon and androgenetic hybrids between Siberian and Russian sturgeons
KR20110017823A (en) Method of producing a viable tetraploid oyster
KR20120013512A (en) Method of producing a viable tetraploid oyster

Legal Events

Date Code Title Description
A977 Report on retrieval

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007

Effective date: 20130708

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20130808

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20131106

A602 Written permission of extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602

Effective date: 20131113

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20131206

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20140807

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20140905

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 5613240

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250