JP2013165662A - 細胞培養デバイス - Google Patents
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Abstract
【解決手段】培養室3aの内壁側面は、ゲル19に濡れない素材であるPTFEシート11で形成された部分と、ゲル19に濡れる素材であるPDMSシート9で形成された部分とを備えている。ゲル19に濡れない素材であるPTFEシート11は、培養室3aの内壁側面において培養室3の底面から所定の間隔をもって、かつ上方から見て環状に配置されている。PTFEシート11と培養室3の底面との間の培養室3の内壁側面はゲル19に濡れる素材であるPDMSシート9によって形成されている。
【選択図】図1
Description
肝臓は生体内では肝実細胞の他に、類洞内皮細胞などが規則正しく配列され、細胞間のシグナル伝達や体液の循環が正常な機能を維持するために重要な役割を果たしていると考えられる。特に、肝実質細胞と類洞内皮細胞は並行して並んでおり、それらの細胞列間は直接接触していない。それらの間にはディッセ腔と呼ばれる細胞外マトリックスがある。
ここで、「ゲルに濡れない素材」とは固体状になる前の流動性をもつ状態のゲルとの接触角が90度以上の素材である。「ゲルに濡れる素材」とは固体状になる前の流動性をもつ状態のゲルとの接触角が90度未満の素材である。
貫通孔15a,15bが形成されておらず、凹部15cが形成されている流路形成用PDMSシート15に対して貫通孔15bが形成される。貫通孔15bが形成された流路形成用PDMSシート15と、貫通孔13aが形成されていない上層側PDMSシート13とが貼り合わせられる。その際、シート13,15の接合面にはプラズマ処理が施される。貼り合わせられたシート13,15の中央部に貫通孔13a,15aが形成される。
本体3及びカバー部材5をオートクレーブやアルコール等によって滅菌処理する。カバー部材5を外した状態で培養室3aの底面に細胞の足場材となるゲル19を塗布する。ゲル19としては、例えばEHS−gelを好適に用いることができる。EHS−gelは、EHSマウス肉腫細胞から単離した基底膜調製物であり、ラミニン、IV型コラーゲン及びプロテオグリカンを豊富に含んでいる。このEHS−gelは低温で液状化し、常温で固体状となる。
本体3がインキュベーターの中に移動される。培養室3aに収容されたゲル19は固体化する。
貫通孔5bに培地が供給される。供給された培地は貫通孔15b及び凹部15cを介して培養室3a内に導入される。培養室3aへの培地の導入に伴い、培養室3a内の培地の一部は、凹部5c及び貫通孔5aを介して細胞培養デバイス1の外部へ排出される。
本実施例(図6)では、培養室内に収容されたゲル19のメニスカスが小さいので、従来技術に比べてゲル19表面の平坦な部分が大きく、比較的均一な内皮細胞21のネットワークが形成されている。
3a 培養室
7 底板
9 下層側PDMSシート(ゲルに濡れる素材)
11 PTFEシート(ゲルに濡れない素材)
13 上層側PDMSシート
19 ゲル
Claims (5)
- 細胞の足場材となるゲルが収容される培養室を備えた細胞培養デバイスにおいて、
前記培養室の内壁側面はゲルに濡れない素材で形成された部分とゲルに濡れる素材で形成された部分とを備え、
前記ゲルに濡れない素材は、前記内壁側面において前記培養室の底面から所定の間隔をもって、かつ上方から見て環状に配置されており、
前記ゲルに濡れない素材と前記底面との間の前記内壁側面は前記ゲルに濡れる素材によって形成されていることを特徴とする細胞培養デバイス。 - 前記ゲルに濡れない素材はPTFE又はフッ素樹脂である請求項1に記載の細胞培養デバイス。
- 前記ゲルに濡れない素材は多孔質のものである請求項1又は2に記載の細胞培養デバイス。
- 前記ゲルに濡れる素材はPDMS又はシリコーンゴムである請求項1から3のいずれか一項に記載の細胞培養デバイス。
- 前記培養室は、少なくとも下層側PDMSシート、PTFEシート、上層側PDMSシートが下層側からその順に積層された積層体に対して積層方向に形成された貫通孔と、前記下層側PDMSシートの前記PTFEシートとは反対側の面に配置された底板によって形成された空間を備えており、
前記培養室内壁に露出した前記PTFEシートの部分によって前記ゲルに濡れない素材で形成された部分が構成され、
前記培養室内壁に露出した前記下層側PDMSシートの部分によって前記ゲルに濡れる素材で形成された部分が構成されている請求項1に記載の細胞培養デバイス。
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