JP2012526272A - 血栓形成傾向の診断方法 - Google Patents
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Abstract
Description
a)APC補因子活性を有する遊離プロテインSを検出するための手段、および
b)総プロテインSを検出するための手段
を含むキットに関する。
b)総プロテインSを検出するための手段
を含むキットに関する。
a)APC補因子活性を有する遊離プロテインSと選択的に相互作用する結合パートナー、および
b)総プロテインSを検出することが可能な結合パートナー
を含む。
要約
原因不明の結節性再生性過形成を有する13人の継続HIV陽性患者と、結節性再生性過形成を有さない16人の継続HIV陽性患者と、確認された原因からの結節性再生性過形成を有する8人のHIV陰性患者と、10人の匿名の健康供血者とを比較した。
試験デザイン
肝臓の生検で確認された結節性再生性過形成を有する16人のHIV感染患者を、Cochin University Hospital(Paris、France)の肝臓部門に紹介した。
全ての患者を、ループス抗凝固因子、IgGおよびIgMアイソタイプの抗リン酸脂質抗体、アンチトロンビンおよびプロテインC機能的欠乏症、プロテインS機能的欠乏症、ならびにG1691A第V因子およびG202110A第II因子変異についてスクリーニングした。
指示されるように市販のLiatest(登録商標)C4b結合タンパク質色素産生アッセイを用いて(Diagnostica Stago(France))、患者および対照者からの血漿中のC4b結合タンパク質のレベルを評価した。
1ミリリットル当たり2マイクログラムのリン酸緩衝食塩水(PBS)中の組換えヒトプロテインSをELISAプレートに被覆し、摂氏4度で終夜静置した(Morboeufら、Thromb Res2000、100:81〜88)。それらのプレートを0.2パーセントのTween20を含有するPBSで洗浄し、1パーセントのウシ血清アルブミンを有するPBSでブロックし、次いで室温で1時間静置した。患者および健康供血者を含む対照者からの血漿試料を、室温で2時間、系列希釈物中でインキュベートした。ウェルの広範囲にわたる洗浄の後、ペルオキシダーゼに結合させたポリクローナルヤギ抗ヒトIgG抗体(Clone JDC−10、Southern biotechnology)およびその基質を用いて結合IgGを認めた。Genyos(TECAN)を用いて492ナノメートルで色素産生産物を読みとった。
タンパク質G−セファロース(Amersham Pharmacia Biotech、Buckinghamshire、England)上でアフィニティークロマトグラフィーによって患者および健康供血者の血漿からIgGを精製した。血漿を、0.01パーセントのアジドを有するPBS(PBS/アジド)中のタンパク質G−セファロースと共にインキュベートし、摂氏4度で終夜静置した。PBS/アジドによる広範囲にわたる洗浄の後、IgGを、0.2mol/リットルのグリシン−HCl(pH2.8)を用いて溶出し、3モルのトリスを用いて中和した。IgGを、摂氏4度で4時間PBSに対して透析し、280ナノメートルの分光測定によって定量した。
組換えヒトプロテインS(1ミリリットル当たり20マイクログラム)を、Owren−Koller緩衝液中で単独で、または精製IgG(1ミリリットル当たり0.5、1および2ミリグラム)と共に、摂氏37度で2時間インキュベートした(Morboeufら、Thromb Res2000、100:81〜88)。次いで、プロテインSが欠失したヒト血漿、ヒト活性化プロテインCおよびウシ活性化第V因子の混合物に試料を加えた。塩酸カルシウム(1リットル当たり0.025mol)で凝固を開始させ、凝固にかかった時間を、凝固計KC10 micro(Amelung、Lemgo、Germany)を用いて測定し、組換えプロテインSの系列希釈物(1ミリリットル当たり30から0.33マイクログラム)で得た標準曲線と比較した。50パーセントのプロテインS阻害を生じさせるIgG濃度の逆数を表すミリグラム当たりの単位で表現されるIgGの特異的阻害活性を計算した。
連続変数は、中央値および四分位範囲または平均値および平均値の標準誤差として示される。カテゴリー変数は、計数および百分率として示される。群間の差を、マン−ホイットニーU検定およびクラスカル−ウォリスH検定で評価した。全てのP値は両側であり、第1種の誤りを5パーセントに設定した。SPSSソフトウェア(バージョン16)(SPSS Inc、Chicago、IL、USA)を用いて全ての統計分析を実施した。
臨床的特徴
HIV関連結節性再生性過形成を有する患者の年齢の中央値は、41歳であった。9人の男性および4人の女性がいた。全員が、各種感染ルートによる持続性HIV感染症(知られたHIV陽性の長さの中央値は12年)を有した。全員が、1マイクロリットル当たり265個の細胞の診断時のCD4T細胞数の中央値およびCD4細胞の正常割合により、高活性抗レトロウイルス療法によって適切に免疫が回復したと判断された。全員を、(各種抗レトロウイルス治療の中で)ジダノシンに曝露させたか、または曝露させていた。
最後の移植患者の外植体を入手することは、放射線学的レベルおよび病理学的レベルの両方でHIV関連結節性再生性過形成の機序を垣間見ることを提供した。肝臓全体のCT−門脈造影は、遠位肝内門脈枝のびまん性閉塞を伴う閉塞性門脈静脈障害の像を明らかにした。外植体の病理検査は、結節性再生性過形成、類洞拡張および肝実質中の肝門脈硬化症の像によって、閉塞性門脈静脈障害の典型的な態様を開示した。重大な線維症は認められなかった。
閉塞性門脈静脈障害は、プロトロンビン障害としばしば関連付けられる。したがって、HIV関連結節性再生性過形成を有する全患者を、プロトロンビン止血障害についてスクリーニングした。HIV関連結節性再生性過形成を有する全ての患者は、プロテインS活性のレベルが低下した(表1)。
遊離プロテインSの減少をC4b結合タンパク質と複合体を形成した形態へのシフトに帰すことができるかどうかを決定するため、患者の血漿中のC4b結合タンパク質のレベルを、対照者の血漿中のそのレベルと比較した。結節性再生性過形成を有するHIV感染患者とそれを有さないHIV感染患者は、血漿中のC4b結合タンパク質レベルが同じであることを示した(P=0.530)。予想外に、結節性再生性過形成を有するHIV陰性患者からの血漿は、血漿中C4b結合タンパク質レベルが3.6から5.4倍高いが(表1)、このことは、これらの患者における総プロテインSの有意な増加を説明することが可能である。
HIV感染患者におけるプロテインSレベルの低下が、後天性抗プロテインS体液性免疫応答に起因するのかどうかを検討した。興味深いことに、プロテインS特異的IgGが、健康供与者の血漿中で検出された。結節性再生性過形成を有さないHIV感染患者は、健康な個体と同様の抗プロテインS IgGレベルを示した。対照的に、結節性再生性過形成を有するHIV陰性およびHIV陽性患者は、健康供与者および結節性再生性過形成を有さないHIV感染症を有する患者よりも抗プロテインS IgGレベルが高かった(図2A)。結節性再生性過形成を有するHIV陽性患者の場合、血漿中IgGによる上昇したプロテインS認識は、結節性再生性過形成を有さないHIV陽性患者および健康供血者と比較して、より高い量の循環IgGと関連付けられた(表1)。注目すべきことは、最も高いレベルの抗プロテインS IgGを有する患者は、基礎疾患としてループスを有したことである。
次いで、結節性再生性過形成を有する患者における抗プロテインS IgGがプロテインS機能を中和することができるかどうかを検討した。健康供与者および結節性再生性過形成を有さないHIV感染患者からのIgGによるプロテインS活性の基礎阻害が、おそらく我々の阻害アッセイの限定により認められた。プロテインS活性の阻害は、IgGの濃度に依存した。結節性再生性過形成を有するHIV陽性患者由来のIgGは、健康供与者由来のIgGおよび結節性再生性過形成を有さないHIV陽性患者由来のIgGよりも、プロテインSに対して一貫してかつ有意に高い阻害活性を示した。結節性再生性過形成を有するHIV陰性患者由来のIgGは、プロテインS阻害に関して不均一であり、健康供与者および結節性再生性過形成を有さないHIV感染患者由来のIgGのそれによって認められる阻害と有意に異なるものではなかった(それぞれ、P=0.329およびP=0.126)(表1、図2B)。結節性再生性過形成を有する5人のHIV陽性患者の血漿から精製したIgGによるプロテインS活性の阻害と遊離対総プロテインSの比との間に有意な相関があった(図3)。
ここで、唯一の確認された病因因子がHIV感染症である結節性再生性過形成を有する13人の患者の症例シリーズを示す。症状の様式は、非常にステレオタイプであり、持続性HIV感染症、抗レトロウイルス薬、とりわけジダノシンに対する曝露、適切な免疫の回復および原因不明の肝機能検査異常または門脈圧亢進症であった。門脈圧亢進症に関連した合併症が、その内の約半分において出現し、4人が肝臓移植を必要とした。HIV関連結節性再生性過形成の機序は、現在まで不明であるが、大部分の患者が適切に免疫を回復したことから、HIV感染症および後天性免疫抑制自体に関連があるとは思われない。
遊離/総プロテインS比の変化を、自己免疫障害を有する患者においても認めることができるかどうかを検討するために、Hopital Cochin(Paris、France)からの全身性エリテマトーデス(SLE)を有する39人の患者から血漿を回収した。対照として、8人の健康供血者からも血漿を回収した。上記のように(実施例1)、市販のELISA(Diagnostica Stago、FranceのASSERACHROM(登録商標)総プロテインSアッセイおよびASSERACHROM(登録商標)遊離プロテインSアッセイ)を用いて、総プロテインSおよび遊離プロテインSのレベルを血漿中で測定した。患者および対照者由来の血漿中のC4b結合タンパク質のレベルを、市販のLiatest(登録商標)C4b結合タンパク質色素産生アッセイ(Diagnostica Stago、France)を用いて評価した。
本出願の全体にわたって、各種の参照文献は、本発明が関係する現況技術を記載する。これらの参照文献の開示は、本発明の開示中に参照により本明細書に組み込まれる。
Claims (9)
- HIVまたは全身性自己免疫疾患に罹患している対象における血栓形成傾向の診断方法であって、前記対象から得られた血液試料において、活性化プロテインC(APC)補因子活性を有する遊離プロテインSのレベルと総プロテインSのレベルとを決定することを含む方法。
- 対象における自己免疫性プロテインS欠乏症の診断方法であって、前記対象から得られた血液試料において、活性化プロテインC(APC)補因子活性を有する遊離プロテインSのレベルと総プロテインSのレベルとを決定することを含む方法。
- APC補因子活性を有する遊離プロテインS/総プロテインSの比を計算するステップを含み、低い比が、遊離プロテインSの補因子活性を中和する抗プロテインS自己抗体の存在を示す、請求項1または2に記載の方法。
- 前記対象がHIVに罹患している、請求項1から3のいずれか一項に記載の方法。
- 前記対象が全身性自己免疫疾患に罹患している、請求項1から4のいずれか一項に記載の方法。
- 前記全身性自己免疫疾患が、全身性エリテマトーデス(SLE)、抗リン脂質抗体症候群、ベーチェット病、分類不能型免疫不全症(CVID)、ウイルス誘発性プロトロンビン状態、血栓性血小板減少性紫斑病である、請求項5に記載の方法。
- a)APC補因子活性を有する遊離プロテインSを検出するための手段、および
b)総プロテインSを検出するための手段
を含むキット。 - a)APC補因子活性を有する遊離プロテインSと選択的に相互作用する結合パートナー、および
b)総プロテインSを検出することが可能な結合パートナー
を含む、請求項7に記載のキット。 - 自己免疫性プロテインS欠乏症の指標としての、APC補因子活性を有する遊離プロテインSおよび総プロテインSの使用。
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---|---|---|---|---|
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Non-Patent Citations (3)
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JPN5012018203; K.L. Hassell et al.: '"Low Free Protein S Activity in HIV-Infected Men with Free Protein S Deficiency."' AIDS WEEKLY , 19930201, p. 17-18 * |
JPN6014017101; 杉浦 勇: '「先天性プロテインS欠乏症とその遺伝子診断」' 医学のあゆみ Vol. 160,No. 9, 19920229, p. 625-628, 医歯薬出版株式会社 * |
JPN6014017102; 阪田 敏幸ら: '「先天性プロテインCヘテロ欠乏症にプロテインS分子異常症の合併が疑われた一家系」' 日本血栓止血学会誌 Vol. 2,No. 6, 199112, p. 518-523 * |
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