JP2012510069A - 無染色生物試料の多色画像の生成 - Google Patents
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Abstract
Description
関心物質の各々に対して、画像の領域ごとに該物質の量を示す物質画像を生成するステップと、
物質画像に基づいて多色画像を生成するステップとを有する。従って各物質画像は試料中の各物質の分布のマップである。物質画像は任意の適切な方法によって得られることができる。特に、試料による多波長の光の吸光度を測定し、この測定データをRGB画像データに変換することが提案されている。このRGB画像データは、試料が例えば一般的な染色法ヘマトキシリン・エオシン(H&E)法で染色され、従来の顕微鏡で観察された場合の試料のRGB画像の近い近似となり得る。従って染色が完全に回避されることができる。本発明は組織病理学の全分野に適用可能であり得る。染色はほぼ全ての組織/細胞に基づく診断にとって慣習となっている(1年当たり病院当たりほぼ300.000+標本程度)。染色手順を回避することはスループット時間を劇的に増加し、コンピュータによる診断の(部分的)自動化を促進する。
関心物質の各々に仮想色を割り当てるステップと、
物質画像の各々を、割り当てられた色を持つ単色画像に変換するステップと、
単色画像を重ね合わせるステップとを有し得る。
例えば吸光度変動を介して、無染色試料に存在する成分の量を測定することを可能にする画像/検出モダリティを用いて第1の画像を取得し、
成分の少なくとも1つの量を推定し、
推定された量を用いることによって、まるで試料が所定の染色化学物質(例えばH&E)で染色されたかのように着色される第2の画像を作り出すことが提案される。従って最終画像は、試料が染色されていないにもかかわらず、病理学者が精通している表現を示す。ここで、白黒(B&W)又はグレースケール画像を作り得る任意の画像技術に対するデジタル病理学界における強い偏見があることが留意され得る。病理学者は、コンピュータが何をするとしても、最終診断に至るための重要なステップは、彼らが理解し彼らが慣れているやり方で病理学者に見えるようにされなければならないことが、彼らにとって重要であることを強調してきた。特に病理学者は、例えば2つの隣接核の単色画像に各核内の核酸の量を示す数を重ね合わせたものには満足しそうにない。彼はむしろ多色画像に数を重ね合わせたものを受け入れるだろう。核の色は、H&E染色がしたであろうと同様に、核酸の量が多い核に対して濃い染色を示すだろう。
物質の量を色の強度に関連付けるルックアップテーブルを調べるステップ、及び/又は、
物質の量を色の強度に関連付ける指数関数を評価するステップを有し得る。
関心物質の各々に可視周波数領域における仮想吸収スペクトルを割り当てるステップと、
物質画像と仮想吸収スペクトルに基づいて透過光画像を計算するステップとを有し得、透過光画像は、これらの物質の各々が仮想吸収スペクトルを持つと仮定して、白色光によって照射された場合に関心物質によって透過され得る光のスペクトルを画像の領域ごとに示す。従って透過光画像は関心物質による光の透過をシミュレートすることによって生成され、これらの物質の真の吸収スペクトルの代わりに仮想吸収スペクトルが使用される。これは、得られる多色画像が染色法によって得られる画像を特にうまく模倣することを確実にし得る。シミュレーションにおいて関心物質によって透過されるべき光は特に白色光であり得る。
試料を選択周波数の紫外光に暴露すること、
試料の様々な領域に対して透過紫外光の強度を測定すること、
暴露及び測定のステップを異なる周波数に対して実行し、それによって各周波数に対して紫外画像を生成すること、
紫外画像から物質画像を導き出すことによって決定され得る。従って物質画像は多重スペクトル解析を用いて取得される。無染色試料は可視光を吸収しないので、UV波長が特に有利であり得る。周知の通り、細胞及び組織は高周波数(UV/深UV)の光を吸収する。Zeskind et al(B.J.Zeskind et al,"Nucleic acid and protein mass mapping by live‐cell deep‐ultraviolet microscopy".Nature Methods,Vol.4,No.7,July 2007,pp.567‐569)は、多重スペクトル画像から得られるスペクトル情報が細胞中の特定構造(例えば核酸又はタンパク質)の量を推定することを可能にすることを示した。組織/細胞の多重スペクトル画像を用いて、画像を比較することによって画像画素当たりの組織/細胞の特定構造の量が推定されることができる。この知識はこれらの構造を同定するために通常使用される染色化学物質の'理想'スペクトルの知識と組み合されることができる。この組み合わせから、まるで染色されたかのように組織/細胞をあらわすRGB色画像が人工的に、すなわちコンピュータを用いて作られることができる。この手順は染色の欠点を欠くにもかかわらず、同様の出力を生じる。'理想'とは応用に依存する。ほとんどの病理学者は特定の染色の質について個人的な定義を持つ。自動化の目的のため、最適コントラストが望まれ得る。しかしながら、ユーザは最も好むいかなるスペクトルも自由に使用することができる。
試料を選択周波数の紫外光に暴露するため、及び、試料の様々領域に対して透過紫外光の強度を測定するため、及び、暴露及び測定のステップを異なる紫外周波数に対して繰り返し、それによって各周波数に対して紫外画像を生成するための、光学系と、
紫外画像に基づいて物質画像を生成するため、及び、物質画像に基づいて多色画像を生成するための、コンピュータとを有する。
σ1(ν)とσ2(ν)はそれぞれ第1の物質と第2の物質の吸収断面積(例えば平方メートル)であり、N1(z)とN2(z)はそれぞれ第1の物質と第2の物質の位置0及びzの間の軸上の単位面積当たりの粒子の数である。より正確には、N1(z)とN2(z)は、単位面積で割られる、その単位面積上のz方向に沿った射影を持つ粒子の数である。位置0は上面14上に選ばれる。z値は下面16に対応するように選ばれ、今後は削除される。その代わりx及びyへの、つまりx‐y平面2,4における位置への依存度を導入する。
Claims (15)
- 無染色生物試料の多色画像を生成する方法であって、前記試料は少なくとも2つの化学的に異なる関心物質を有し、前記方法は、
前記関心物質の各々に対して、画像の領域ごとに前記物質の量を示す物質画像を生成するステップと、
前記物質画像に基づいて前記多色画像を生成するステップとを有する、方法。 - 前記試料が可視光に対して実質的に透過性である、請求項1に記載の方法。
- 前記物質画像に基づいて前記多色画像を生成するステップが、
前記関心物質の各々に仮想色を割り当てるステップと、
前記物質画像の各々を前記割り当てられた色を持つ単色画像に変換するステップと、
前記単色画像を重ね合わせるステップとを有する、請求項1又は2に記載の方法。 - 前記関心物質の少なくとも1つが、その物質に結合することができる染料の色と一致する色を割り当てられる、請求項3に記載の方法。
- 前記試料が第1の関心物質としてタンパク質を、第2の関心物質として核酸を有し、前記タンパク質が赤又はピンク色を割り当てられ、前記核酸が青、バイオレット、又は紫色を割り当てられる、請求項3又は4に記載の方法。
- 前記多色画像が減法混色モデルに従って前記重ね合わされた単色画像から得られる、請求項3乃至5のいずれか一項に記載の方法。
- 前記変換するステップと重ね合わせるステップがコンピュータ上で実行される、請求項3乃至6のいずれか一項に記載の方法。
- 各物質画像を単色画像に変換するステップが、
物質の量を色強度に関連付けるルックアップテーブルを調べるステップ、及び/又は、
物質の量を色強度に関連付ける指数関数を評価するステップを有する、請求項3乃至7のいずれか一項に記載の方法。 - 前記物質画像に基づいて前記多色画像を生成するステップが、
前記関心物質の各々に可視周波数領域における仮想吸収スペクトルを割り当てるステップと、
前記物質画像と前記仮想吸収スペクトルに基づいて透過光画像を計算するステップとを有し、前記透過光画像は、これらの物質の各々が前記仮想吸収スペクトルを持つと仮定して、白色光によって照射された場合に前記関心物質によって透過され得る光のスペクトルを前記画像の領域ごとに示す、請求項1又は2に記載の方法。 - 前記透過光画像が、前記物質画像と前記仮想吸収スペクトルを入力データとしてランベルト・ベールの法則を用いて計算される、請求項9に記載の方法。
- 前記物質画像が、
前記試料を選択周波数の紫外光に暴露するステップと、
前記試料の様々な領域に対して透過紫外光の強度を測定するステップと、
前記暴露するステップと測定するステップを異なる周波数に対して実行し、それによって各周波数に対して紫外画像を生成するステップと、
前記紫外画像から前記物質画像を導き出すステップとによって決定される、請求項1乃至10のいずれか一項に記載の方法。 - 前記物質画像がランベルト・ベールの法則を用いて前記紫外画像から導き出される、請求項11に記載の方法。
- 請求項1乃至12のいずれか一項に記載の方法をコンピュータに制御又は実行するよう指示するための命令を担持するデータキャリア。
- 無染色試料の多色画像を生成するためのシステムであって、前記試料は少なくとも2つの化学的に異なる関心物質を有し、前記システムは、
前記試料を選択周波数の紫外光に暴露するため、及び、前記試料の様々な領域に対して透過紫外光の強度を測定するため、及び、前記暴露するステップと測定するステップを異なる紫外周波数に対して繰り返し、それによって各周波数に対して紫外画像を生成するための、光学系と、
前記紫外画像に基づいて物質画像を生成するため、及び、前記物質画像に基づいて前記多色画像を生成するための、コンピュータとを有する、システム。 - 前記光学系が顕微鏡を有する、請求項14に記載のシステム。
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