JP2011516039A - 人工免疫系(ais)への疾患モデルの組込み - Google Patents
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Abstract
【選択図】なし
Description
in vitroでの3D疾患モデルのためのジェネリックな組織構築物。図2は、内皮層及び上皮層を作製するために、構築物の上部及び下部での細胞の添加を含む3D異種組織構築物を示している。このモデルは本発明者らが確立した3Dの内皮細胞のみの構築物での改善であり、これは経内皮移動及び単球の樹状細胞及びマクロファージへの分化に使用されている(ワクチン接種部位、VS)。
メラノーマ細胞を使用するAISにおける腫瘍モデル化。多くのin vitroモデル系を、一次細胞及び様々な細胞株の両方を使用して、成人癌及び小児癌における抗癌療法の効果及び腫瘍成長を検査するのに使用している(例えば、Houghton et al.(2002)Clin Cancer Res 8, 3646-57を参照されたい)。かかるモデルは腫瘍代謝状態、増殖の阻害及びバイオマス全体の低減を評価するのに有用であることが証明されている(例えば、Monks et al.,(1991)J Natl Cancer Inst 83, 757-66、Scherf et al.,(2000)Nat Genet 24, 236-44を参照されたい)。
内皮層及び上皮層を形成するための組織構築物の上部及び下部での細胞の添加による異種組織構築物。ジェネリックな疾患モデルの開発と、それを特定の疾患でどのように試験することができるかとを図3に概略的に示している。例としては、本発明者らは、3D ECMマトリクスを調製するのに、コラーゲン、合成若しくは天然材料(例えば、ヒドロゲル、PLA、PLGA、ゼラチン、ヒアルロン酸)、又はそれらの組合せのいずれかを含む、ポリカーボネート膜支持構造を使用した。本発明者らは、2つの細胞層を支持することが可能なECMを確立した。本発明者らは初めに、マトリクスの片側に上皮細胞(例えば、ヒトケラチン生成細胞)の層を成長させた。このモデルの利点は、呼吸器の上皮細胞、皮膚上皮細胞又は腸/口腔上皮細胞(概略的に図3に示されるような)等の他の上皮細胞を使用することができることである。上皮とマトリクスとの間の基底膜領域は、この態様の構築物及び添加の成功に重要であり、例えばIV型又はVII型コラーゲンが含まれ得る。メラノーマモデルに関して、基底膜のバリア機能は転移形式の病理を分析するのにも重要であり得る。これは、本発明の疾患モデルの一般的アーキテクチャの利点であり、このモデルを、様々な上皮細胞型を使用することにより多くの組織を模倣するのに使用することができる。メラニン形成細胞及びケラチン生成細胞の播種後、ケラチン生成細胞が確立され、成層が始まると、細胞を空気界面に曝し、連続した成層、堅固な細胞間結合の形成及び角質化を促す。
角質化細胞層が形成されると、内皮細胞(例えば、HUVEC、不死化内皮細胞株)の層をもう一方の側に適用することができるように、構築物を反転することができる。内皮細胞が確立されている場合、構築物を反転し(そのため構築物が再び直立になり)、ケラチン生成細胞に対して空気界面を元に戻す。内皮細胞がコンフルエント単層を形成すると、組織構築物が完成し、特性化できるようになる。
本発明の他の実施形態において、上皮層にメラニン形成細胞を有しない多機能疾患モデルでは、ウイルス又は細菌疾患モデルを調製することができる。これらの実施形態では、ウイルス又は細菌構成要素のいずれかを特殊な非角質化上皮表面に適用し、通常の生理学的事象を模倣する。ウイルス及び細菌浸潤/感染では、上皮の損傷(compromise)は細胞感染又は細菌毒素の放出のいずれかにより引き起こされ、これをモニタリングすることもできる。
3Dのジェネリックな疾患組織構築物の生存能力。ケラチン生成細胞の研究は、細胞が数週間、培養物中で生き抜くことを示している(Boelsma et al.,(2000)Acta Derm Venereol 80, 82-8)。本発明者らは、数週間、培養物中、3D構築物でHUVECが維持されることも経験している。構築物での細胞の生存能力を、例えば任意の形態変化を特定するような方法により、及び従来のLDH放出アッセイによりモニタリングすることができる。細胞が死滅すると、原形質膜は、培養培地へと放出されるLDHを漏洩するようになり、共役酵素アッセイで測定することができ、これによりレザズリンが蛍光レゾルフィン生成物へと変換される。生じた蛍光量は溶解細胞の数に比例する。細胞染色を組織構築物で行い、生存/死滅細胞集団を測定することもできる。細胞浸透エステラーゼ基質、例えばCellTracker Green CMFDAは、プローブの細胞内貯留に要求される細胞膜完全性と、プローブの蛍光を活性化するのに要求される酵素活性との両方を測定する生存能力プローブとして働く。細胞非浸透性の核酸染色、例えばエチジウムホモ二量体−1を、死滅細胞を検出するのに使用することができる。それから蛍光染色した細胞を共焦点顕微鏡により観察することができる。
上皮細胞が構築物で成層を形成する。皮膚同等物モデルの構築のために、ケラチン生成細胞層を空気界面に曝し、成層の形成を促す。成層の形成は、顕微鏡検査によりモニタリングすることができる。定期的に、細胞層を、免疫蛍光共焦点顕微鏡を使用することにより検査し、堅固な細胞間結合及び細胞の核を特定することができる。さらに、試料をパラフィンで包埋したパラホルムアルデヒド中に固定し、切片化し、光学顕微鏡検査のためにヘマトキシリン及びエオシンで染色することができる。
in vitro疾患モデルを作製するジェネリックな組織モジュールの構築。本発明の一実施形態では、3Dモデルを、様々な疾患(例えば腫瘍モデル)に対する免疫応答又は炎症媒介性応答を観察するのに調べる。例としては、メラノーマ細胞、HSV、インフルエンザウイルス、大腸菌及び黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)を使用する。
例としては、3D構築物内で垂直に展開するメラノーマ腫瘍細胞又は細菌若しくはウイルスに感染した線維芽細胞を添加するのに使用することができる方法論を図4で概略的に示している。腫瘍細胞を疾患モデルに添加するために、ECM材料を膜支持体に添加する前に、及びマトリクスで上皮細胞及び内皮細胞を成長させ始める前に、本発明者らはECM材料内でこれらの細胞を混合する。
ウイルスモデルの調製に関して、幾つかの関連方法が存在する。例としては、生ウイルスでは、本発明者らは上皮層を感染させる。別の例では、ウイルスに感染した照射線維芽細胞を、コラーゲンマトリクスに組み込むことができる。HLA適合、同系又は自己線維芽細胞を使用することができ、それらを増殖させると共に、適切な感染多重度(multiplicity of infection)(MOI)(例えば約10)でウイルスに感染させることができる。感染を適切な感染後時間(time post-infection)まで進め、この時点で感染性ウイルスをUV不活性化する。
in vitro感染/疾患モデルは、付着、侵入及び脱殻を含むウイルスのライフサイクルの解析に、並びにウイルス粒子と宿主標的細胞との相互作用を明らかにするのに重要である。本発明者らは、AISで作製されたワクチン誘導性の免疫産物の有効性を調べるのにも、in vitro疾患/感染モデルを使用することができる。ウイルス疾患モデルの好適な例としては、単純ヘルペスウイルス(HSV)及びインフルエンザウイルスが挙げられる。ヒト及び/又はマウスモデル系を使用することができる。
本発明は感染/免疫誘導の二次元及び三次元(2D、3D)モデルの両方を含む。例示的な2Dモデルでは、静的な培養系を用いることができる。例示的な3Dモデルでは、ワクチン接種部位(VS)及びリンパ系組織同等物(LTE)を使用することができる。
ウイルス抗原導入方法の幾つかが本発明を実施するのに好適である。例としては、適切な感染多重度(MOI)でのウイルスによる培養上皮の直接感染を使用することができる。別の例としては、HLA適合又は同系線維芽細胞を使用することができ、それらを増殖させると共に、適切なMOI(例えば約10)でウイルスに感染させることができる。感染を適切な感染後時間まで進め、この時点で感染性ウイルスをUV不活性化する。ウイルス感染及び不活性化の反応速度はそれぞれ、例えば免疫蛍光及びプラークアッセイにより確認することができる。
本発明の別の例として、本発明者らは、再発性HSVを有する血清陽性個体(S+R+)と、再発性疾患ではない血清陽性個体(S+R−)と、血清陰性ヒト被験体(S−R−)とを伴う「性質の実験」を実施することができる。これらの被験体由来の細胞をウイルス抗原で感作することができる。その後の免疫読み出しは、S+R+被験体とS+R−被験体とを比較する場合の保護免疫機構の一次及び再現免疫事象並びに免疫プロファイリングの識別を可能にする。
メラノーマ腫瘍モデルにおいて、上皮層を介する放射状のメラニン形成細胞の展開及び上皮下マトリクスへの浸透(垂直の腫瘍増殖)を調べることができる。幾つかのメラノーマ細胞株が放射状の増殖のみ(可能性としては基底膜構造の障害又は様々なコラーゲンの生化学的構成の結果)又は垂直増殖のみを示すので、マトリクス内の免疫細胞集団を標的化することが可能である。アジュバントを添加して又は添加せずにメラノーマ抗原の存在により、捕捉抗原を有するDCが成熟する。
野兎病モデル。本発明の実施形態において、野兎病のin vitroモデルを調製する。生きている弱毒化株は、BSL−2実験室で安全に使用することができる。一連のヒト血液ドナー由来のPBMCを調製し、コラーゲン3Dマトリクスで様々な比の野兎病菌と混合する。それから例えばBioplex 22−サイトカインキットを使用して、野兎病菌に対する免疫応答を評価する。例えば、IL−18、IL−1β、IFN−γ、IL−12、IL−4及びIL−5のレベルを求める。IgM及びIgG抗体のELISAを培養上清で実施し、体液性応答を調べる。コラーゲン構築物をコラーゲナーゼを用いて消化し、細胞を放出して、アリコートを段階希釈し、チョコレート寒天プレートに平板培養する。コロニーを約3日後に計測し、宿主細胞における病原体の繁殖を求める。感染に応じたT細胞、B細胞及びマクロファージの活性化状態を、例えばFACS解析により求める。実験のフローシートを図5に示す。
フィロウイルスモデル。単球及びマクロファージを有するコンフルエント内皮を含む、本発明の人工免疫系のワクチン接種部位(VS)モジュールを病因モデル系として使用することができる。特に言及されない限り、疾患モジュールに関しては、VSと感染部位(IS)モジュールとを区別なく使用することができる。フィロウイルス疾患モデルを調製するために、例として細胞内ウイルス病原体であるISモジュールを調製し、感染標的として働かせる。ISモジュールの調製は、コラーゲンマトリクス上で内皮細胞の単層を成長させることを含む。PBMCを内皮細胞層の上部に添加する。単球は、内皮を通って幾つかのT細胞及びB細胞(5%〜10%)と共にコラーゲンマトリクスに選択的に浸出する。PBMCにおける単球は、内皮を横断するにつれて、広範な表現型のAPCに分化する。単球によっては、成熟及び未成熟の樹状細胞(DC)に分化した後、コラーゲンから内皮を通って逆移動するものもあれば、他の単球はマクロファージに分化し、これらの内皮下細胞がコラーゲンマトリクスに残る。このシステムが、in vivo分化プロセスをモデル化し、それによりワクチン接種部位に侵入するAPC(例えば単球)が内皮を横断して組織に入るにつれて、分化シグナルが得られる。この方法は、PBMCからDC及びマクロファージを生成する、広範に使用されるサイトカイン誘導性(例えばGM−CSF、IL−4、MCSF)方法よりも優れている。
エルシニア属モデル。本発明の一実施形態はペスト菌感染の疾患モデルを含む。感染モジュール(例えばIS)では、マクロファージが病原体に感染する。疾患モジュールは感染マクロファージが病原体を局所リンパ節に輸送させるプロセスをモデル化する。この疾患モジュールでは、リンパ球を活性化/プライム化すると共に、病原体を繁殖させる。このリンパ節同等物(LTE)モジュールは疾患モジュールとして働く。in vivoでは、他の器官に移動する前に細菌をリンパ節で複製させる。本発明の人工免疫系は様々なモジュールがプラグ・アンド・プレイ(plug-and-play)免疫学構築物として設計されるという点で柔軟である。この特徴は本明細書中でエルシニア属の感染性疾患モデルの感染及び疾患モジュールと共に用いられる。
バークホルデリア属モデル。本発明の一実施形態は、ヒト白血球の多次元調査(interrogation)に基づく、人工免疫系を使用した鼻疽菌のin vitro疾患モデルを含む。人工免疫系は、ヒト集団サブグループ(遺伝的多様性、HLAハプロタイプ、年齢、性別)に対する免疫療法の効果に関する情報を迅速に与えることができる。
HIVモデル。HIV(ヒト免疫不全ウイルス)はAIDS(後天性免疫不全症候群)を引き起こすウイルスである。in vivoでは、HIV−1をDCに感染させ、該DCをリンパ節へと移動し、そこでウイルスがCD4+T細胞に感染する。そのため、リンパ節はウイルス産生の主要部位となる。本発明の実施形態では、このプロセスの段階を人工免疫系のモジュールによりモデル化する。
Claims (66)
- 動物被験体に投与せずに作用因子(agent)の評価を可能にする人工免疫系であって、
リンパ系組織を含む二次元又は三次元マトリクスと、
PBMC、単球、マクロファージ、樹状細胞、リンパ球及び抗原提示細胞から成る群から選択される免疫系細胞である、疾患細胞と、
を含む細胞培養物を含む、人工免疫系。 - 前記疾患細胞がウイルスに感染した細胞、細菌に感染した細胞、腫瘍細胞及び自己免疫疾患罹患細胞から成る群から選択される、請求項1に記載の人工免疫系。
- 前記疾患細胞がウイルスに感染した細胞である、請求項1に記載の人工免疫系。
- 前記疾患細胞が細菌に感染した細胞である、請求項1に記載の人工免疫系。
- 前記疾患細胞がウイルスに感染した血液ドナーに由来するPBMCを含む、請求項1に記載の人工免疫系。
- 前記疾患細胞が、後にin vitroでウイルスに感染させる、非感染の血液ドナーに由来するPBMCを含む、請求項1に記載の人工免疫系。
- 前記疾患細胞が細菌に感染した血液ドナーに由来するPBMCを含む、請求項1に記載の人工免疫系。
- 前記疾患細胞が自己免疫疾患に罹患した血液ドナーに由来するPBMCを含む、請求項1に記載の人工免疫系。
- 前記疾患細胞が、後にin vitroで細菌に感染させる、非感染の血液ドナーに由来するPBMCを含む、請求項1に記載の人工免疫系。
- 前記作用因子がワクチン、アジュバント、免疫療法候補薬剤、化粧品、薬物、生物学物質(biologics)及び化合物から成る群から選択される、請求項1に記載の人工免疫系。
- 前記作用因子がワクチンである、請求項1に記載の人工免疫系。
- 動物被験体に投与せずに作用因子の評価を可能にする人工免疫系であって、
リンパ系組織を含む二次元又は三次元マトリクスと、
上皮細胞及び/又は内皮細胞を含む三次元マトリクスと、
PBMC、単球、マクロファージ、樹状細胞、リンパ球及び抗原提示細胞から成る群から選択される免疫系細胞である、疾患細胞と、
を含む細胞培養物を含む、人工免疫系。 - 前記疾患細胞がウイルスに感染した細胞、細菌に感染した細胞、腫瘍細胞及び自己免疫疾患罹患細胞から成る群から選択される、請求項12に記載の人工免疫系。
- 前記疾患細胞がウイルスに感染した細胞である、請求項12に記載の人工免疫系。
- 前記疾患細胞が細菌に感染した細胞である、請求項12に記載の人工免疫系。
- 前記疾患細胞がウイルスに感染した血液ドナーに由来するPBMCを含む、請求項12に記載の人工免疫系。
- 前記疾患細胞が、後にin vitroでウイルスに感染させる、非感染の血液ドナーに由来するPBMCを含む、請求項12に記載の人工免疫系。
- 前記疾患細胞が細菌に感染した血液ドナーに由来するPBMCを含む、請求項12に記載の人工免疫系。
- 前記疾患細胞が自己免疫疾患に罹患した血液ドナーに由来するPBMCを含む、請求項12に記載の人工免疫系。
- 前記疾患細胞が、後にin vitroで細菌に感染させる、非感染の血液ドナーに由来するPBMCを含む、請求項12に記載の人工免疫系。
- 前記作用因子がワクチン、アジュバント、免疫療法候補薬剤、化粧品、薬物、生物学物質及び化合物から成る群から選択される、請求項12に記載の人工免疫系。
- 前記作用因子がワクチンである、請求項12に記載の人工免疫系。
- 作用因子に対する疾患動物の潜在的反応を評価する方法であって、
作用因子を請求項1又は12に記載の人工免疫系に投与すること、及び
疾患細胞に対する効果を評価すること、
を含む、方法。 - 作用因子に対する疾患動物の潜在的反応を評価する方法であって、
作用因子を請求項1又は12に記載の人工免疫系に投与すること、及び
リンパ系組織に対する効果を評価すること、
を含む、方法。 - 作用因子に対する疾患動物の潜在的反応を評価する方法であって、
作用因子を請求項1又は12に記載の人工免疫系に投与すること、及び
リンパ系組織の細胞に対する効果を評価すること、
を含む、方法。 - 作用因子に対する疾患動物の潜在的反応を評価する方法であって、
作用因子を上皮細胞及び/又は内皮細胞を含む三次元マトリクスに投与すること、
上皮細胞及び/又は内皮細胞を含む前記三次元マトリクスを、リンパ系組織を含む三次元マトリクスと同時培養すること、
疾患細胞を前記同時培養物に添加すること(該疾患細胞がPBMC、単球、マクロファージ、樹状細胞、リンパ球及び抗原提示細胞から成る群から選択される免疫系細胞である)、及び
前記疾患細胞に対する前記作用因子の効果を評価すること、
を含む、方法。 - 前記疾患細胞がウイルスに感染した細胞、細菌に感染した細胞、腫瘍細胞及び自己免疫疾患罹患細胞から成る群から選択される、請求項26に記載の方法。
- 前記作用因子がワクチン、アジュバント、免疫療法候補薬剤、化粧品、薬物、生物学物質及び化合物から成る群から選択される、請求項26に記載の方法。
- 前記作用因子がワクチンである、請求項26に記載の方法。
- 作用因子に対する疾患動物の潜在的反応を評価する方法であって、
作用因子を、上皮細胞及び/又は内皮細胞を含む三次元マトリクスに投与すること、
上皮細胞及び/又は内皮細胞を含む前記三次元マトリクスを、リンパ系組織を含む二次元マトリクス又は三次元マトリクスと同時培養すること、
疾患細胞を前記同時培養物に添加すること(該疾患細胞がPBMC、単球、マクロファージ、樹状細胞、リンパ球及び抗原提示細胞から成る群から選択される免疫系細胞である)、及び
前記同時培養物の細胞に対する効果を評価すること、
を含む、方法。 - 前記疾患細胞がウイルスに感染した細胞、細菌に感染した細胞、腫瘍細胞及び自己免疫疾患罹患細胞から成る群から選択される、請求項30に記載の方法。
- 前記作用因子がワクチン、アジュバント、免疫療法候補薬剤、化粧品、薬物、生物学物質及び化合物から成る群から選択される、請求項30に記載の方法。
- 前記作用因子がワクチンである、請求項30に記載の方法。
- 前記疾患細胞がウイルスに感染した細胞、細菌に感染した細胞、腫瘍細胞及び自己免疫疾患罹患細胞から成る群から選択される、請求項30に記載の方法。
- 前記作用因子がワクチン、アジュバント、免疫療法候補薬剤、化粧品、薬物、生物学物質及び化合物から成る群から選択される、請求項30に記載の方法。
- 前記作用因子がワクチンである、請求項30に記載の方法。
- 作用因子に対する疾患動物の潜在的反応を評価する方法であって、
作用因子を請求項1又は12に記載の人工免疫系に投与すること、
上皮細胞及び/又は内皮細胞を含む前記三次元マトリクスを、リンパ系組織を含む三次元マトリクスと同時培養すること、
前記同時培養物から得られた培養培地を疾患細胞に添加すること(該疾患細胞がPBMC、単球、マクロファージ、樹状細胞、リンパ球及び抗原提示細胞から成る群から選択される免疫系細胞である)、及び
前記疾患細胞に対する効果を評価すること、
を含む、方法。 - 前記作用因子がワクチン、アジュバント、免疫療法候補薬剤、化粧品、薬物、生物学物質及び化合物から成る群から選択される、請求項37に記載の方法。
- 前記作用因子がワクチンである、請求項37に記載の方法。
- 前記疾患細胞がウイルスに感染した細胞、細菌に感染した細胞、腫瘍細胞及び自己免疫疾患罹患細胞から成る群から選択される、請求項37に記載の方法。
- 作用因子に対する疾患動物の潜在的反応を評価する方法であって、
作用因子を、上皮細胞及び/又は内皮細胞を含む二次元マトリクス又は三次元マトリクスに投与すること、
上皮細胞及び/又は内皮細胞を含む前記三次元マトリクスを、リンパ系組織を含む二次元マトリクス又は三次元マトリクスと同時培養すること、
前記同時培養物から得られた培養培地を疾患細胞に添加すること(該疾患細胞がPBMC、単球、マクロファージ、樹状細胞、リンパ球及び抗原提示細胞から成る群から選択される免疫系細胞である)、及び
前記疾患細胞に対する効果を評価すること、
を含む、方法。 - 前記作用因子がワクチン、アジュバント、免疫療法候補薬剤、化粧品、薬物、生物学物質及び化合物から成る群から選択される、請求項41に記載の方法。
- 前記作用因子がワクチンである、請求項41に記載の方法。
- 前記疾患細胞がウイルスに感染した細胞、細菌に感染した細胞、腫瘍細胞及び自己免疫疾患罹患細胞から成る群から選択される、請求項41に記載の方法。
- 作用因子に対する動物の潜在的反応を評価する方法であって、
作用因子を請求項1又は12に記載の人工免疫系に投与すること、及び
前記疾患細胞に対する効果を評価すること、
を含む、方法。 - 作用因子に対する動物の潜在的反応を評価する方法であって、
作用因子を請求項1又は12に記載の人工免疫系に投与すること、及び
前記リンパ系組織に対する効果を評価すること、
を含む、方法。 - 作用因子に対する動物の潜在的反応を評価する方法であって、
作用因子を請求項1又は12に記載の人工免疫系に投与すること、及び
リンパ系組織の細胞に対する効果を評価すること、
を含む、方法。 - 作用因子に対する動物の潜在的反応を評価する方法であって、
作用因子を、上皮細胞及び/又は内皮細胞を含む三次元マトリクスに投与すること、
上皮細胞及び/又は内皮細胞を含む前記三次元マトリクスを、リンパ系組織を含む三次元マトリクスと同時培養すること、
疾患細胞を前記同時培養物に添加すること(該疾患細胞がPBMC、単球、マクロファージ、樹状細胞、リンパ球及び抗原提示細胞から成る群から選択される免疫系細胞である)、及び
前記疾患細胞に対する前記作用因子の効果を評価すること、
を含む、方法。 - 前記疾患細胞がウイルスに感染した細胞、細菌に感染した細胞、腫瘍細胞及び自己免疫疾患罹患細胞から成る群から選択される、請求項48に記載の方法。
- 前記作用因子がワクチン、アジュバント、免疫療法候補薬剤、化粧品、薬物、生物学物質及び化合物から成る群から選択される、請求項48に記載の方法。
- 前記作用因子がワクチンである、請求項48に記載の方法。
- 作用因子に対する動物の潜在的反応を評価する方法であって、
作用因子を、上皮細胞及び/又は内皮細胞を含む三次元マトリクスに投与すること、
上皮細胞及び/又は内皮細胞を含む前記三次元マトリクスを、リンパ系組織を含む二次元マトリクス又は三次元マトリクスと同時培養すること、
疾患細胞を前記同時培養物に添加すること(該疾患細胞がPBMC、単球、マクロファージ、樹状細胞、リンパ球及び抗原提示細胞から成る群から選択される免疫系細胞である)、及び
前記同時培養物の細胞に対する効果を評価すること、
を含む、方法。 - 前記疾患細胞がウイルスに感染した細胞、細菌に感染した細胞、腫瘍細胞及び自己免疫疾患罹患細胞から成る群から選択される、請求項52に記載の方法。
- 前記作用因子がワクチン、アジュバント、免疫療法候補薬剤、化粧品、薬物、生物学物質及び化合物から成る群から選択される、請求項52に記載の方法。
- 前記作用因子がワクチンである、請求項52に記載の方法。
- 前記疾患細胞がウイルスに感染した細胞、細菌に感染した細胞、腫瘍細胞及び自己免疫疾患罹患細胞から成る群から選択される、請求項52に記載の方法。
- 前記作用因子がワクチン、アジュバント、免疫療法候補薬剤、化粧品、薬物、生物学物質及び化合物から成る群から選択される、請求項52に記載の方法。
- 前記作用因子がワクチンである、請求項52に記載の方法。
- 作用因子に対する動物の潜在反応を評価する方法であって、
作用因子を請求項1又は12に記載の人工免疫系に投与すること、
上皮細胞及び/又は内皮細胞を含む三次元マトリクスを、リンパ系組織を含む三次元マトリクスと同時培養すること、
前記同時培養物から得られた培養培地を疾患細胞に添加すること(該疾患細胞がPBMC、単球、マクロファージ、樹状細胞、リンパ球及び抗原提示細胞から成る群から選択される免疫系細胞である)、及び
前記疾患細胞に対する効果を評価すること、
を含む、方法。 - 前記作用因子がワクチン、アジュバント、免疫療法候補薬剤、化粧品、薬物、生物学物質及び化合物から成る群から選択される、請求項59に記載の方法。
- 前記作用因子がワクチンである、請求項59に記載の方法。
- 前記疾患細胞がウイルスに感染した細胞、細菌に感染した細胞、腫瘍細胞及び自己免疫疾患罹患細胞から成る群から選択される、請求項59に記載の方法。
- 作用因子に対する動物の潜在反応を評価する方法であって、
作用因子を、上皮細胞及び/又は内皮細胞を含む二次元マトリクス又は三次元マトリクスに投与すること、
上皮細胞及び/又は内皮細胞を含む前記三次元マトリクスを、リンパ系組織を含む二次元マトリクス又は三次元マトリクスと同時培養すること、
前記同時培養物から得られた培養培地を疾患細胞に添加すること(該疾患細胞がPBMC、単球、マクロファージ、樹状細胞、リンパ球及び抗原提示細胞から成る群から選択される免疫系細胞である)、及び
前記疾患細胞に対する効果を評価すること、
を含む、方法。 - 前記作用因子がワクチン、アジュバント、免疫療法候補薬剤、化粧品、薬物、生物学物質及び化合物から成る群から選択される、請求項63に記載の方法。
- 前記作用因子がワクチンである、請求項63に記載の方法。
- 前記疾患細胞がウイルスに感染した細胞、細菌に感染した細胞、腫瘍細胞及び自己免疫疾患罹患細胞から成る群から選択される、請求項63に記載の方法。
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