JP2011511634A5 - - Google Patents
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Description
本発明の別の実施形態では、miRNAまたはそれらの標的が、例えば、そのようなmiRNAの発現を増大させるか、またはガン幹細胞中でのそれらのタンパク質標的の発現を低下させる化合物をスクリーニングする方法において、使用され得る。これには、化合物を、miRNAの発現が低い細胞集団での発現と組み合わせる工程、その後、その化合物によって生じた何らかの調節効果を決定する工程が含まれる。これには、特定のタンパク質標的の活性または検出、生存性、毒性、代謝の変化、あるいは細胞機能に対する影響についての細胞の試験が含まれ得る。本明細書中で開示されるmiRNAの機能と関係があるガン幹細胞を標的化する治療薬の投与のための方法もまた提供される。
本発明の好ましい実施形態では、例えば以下が提供される:
(項目1)
ガン幹細胞を同定するための方法であって:
試料を、
から選択される少なくとも1つのmiRNAに特異的な試薬と接触させる工程
を含み、
ここでは、ガン幹細胞は、非腫瘍形成性の細胞と比較して、変化したレベルの該少なくとも1つのmiRNAを発現する、方法。
(項目2)
miRNAの発現の定量が、インサイチュハイブリダイゼーションによって行われる、項目1に記載の方法。
(項目3)
定量が、リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応によって行われる、項目1に記載の方法。
(項目4)
前記患者がヒトである、項目1に記載の方法。
(項目5)
前記ヒトがガンの処置を受けている、項目4に記載の方法。
(項目6)
試料を、前記miRNAによって調節されるタンパク質に特異的な試薬と接触させる工程をさらに含み、
ここでは、ガン幹細胞は、非腫瘍形成性の細胞と比較して、変化したレベルの該タンパク質を発現する、項目1に記載の方法。
(項目7)
CSCに対する有効性について候補の化学療法剤をスクリーニングする方法であって:
該候補の化学療法剤を該CSCと接触させる工程、および
から選択される少なくとも1つのmiRNAの細胞内レベルを変化させることにおける該候補の化学療法剤の有効性を決定する工程
を含む、方法。
(項目8)
ガン幹細胞中で腫瘍形成性を変化させる方法であって:
該細胞中で発現される、
から選択されるマイクロRNAの活性を変化させる工程
を含む、方法。
(項目9)
前記マイクロRNAが、miR−200c、miR−141、miR−200b、miR−200a、miR−429、miR−182、miR−96、およびmiR−183から選択され、該方法が、活性をアップレギュレートさせる工程を含む、項目8に記載の方法。
(項目10)
前記薬剤が、miR−200c、miR−141、miR−200b、miR−200a、miR−429、miR−182、miR−96、およびmiR−183から選択され、前記細胞中で活性なプロモーターに対して作動可能であるように連結されたmiRNA遺伝子配列を含む、項目9に記載の方法。
(項目11)
前記変化させる工程がインビトロで行われる、項目10に記載の方法。
(項目12)
前記変化させる工程がインビボで行われる、項目10に記載の方法。
(項目13)
前記ガン幹細胞が乳ガン幹細胞である、項目10に記載の方法。
(項目14)
前記乳ガン幹細胞がCD44 + CD24 −/low lineage − である、項目13に記載の方法。
(項目15)
前記変化させる工程が、前記細胞中での前記miRNAのレベルを低下させる薬剤を該細胞に投与することを含む、項目8に記載の方法。
(項目16)
前記薬剤がアンチセンスオリゴヌクレオチドである、項目15に記載の方法。
本発明の好ましい実施形態では、例えば以下が提供される:
(項目1)
ガン幹細胞を同定するための方法であって:
試料を、
から選択される少なくとも1つのmiRNAに特異的な試薬と接触させる工程
を含み、
ここでは、ガン幹細胞は、非腫瘍形成性の細胞と比較して、変化したレベルの該少なくとも1つのmiRNAを発現する、方法。
(項目2)
miRNAの発現の定量が、インサイチュハイブリダイゼーションによって行われる、項目1に記載の方法。
(項目3)
定量が、リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応によって行われる、項目1に記載の方法。
(項目4)
前記患者がヒトである、項目1に記載の方法。
(項目5)
前記ヒトがガンの処置を受けている、項目4に記載の方法。
(項目6)
試料を、前記miRNAによって調節されるタンパク質に特異的な試薬と接触させる工程をさらに含み、
ここでは、ガン幹細胞は、非腫瘍形成性の細胞と比較して、変化したレベルの該タンパク質を発現する、項目1に記載の方法。
(項目7)
CSCに対する有効性について候補の化学療法剤をスクリーニングする方法であって:
該候補の化学療法剤を該CSCと接触させる工程、および
から選択される少なくとも1つのmiRNAの細胞内レベルを変化させることにおける該候補の化学療法剤の有効性を決定する工程
を含む、方法。
(項目8)
ガン幹細胞中で腫瘍形成性を変化させる方法であって:
該細胞中で発現される、
から選択されるマイクロRNAの活性を変化させる工程
を含む、方法。
(項目9)
前記マイクロRNAが、miR−200c、miR−141、miR−200b、miR−200a、miR−429、miR−182、miR−96、およびmiR−183から選択され、該方法が、活性をアップレギュレートさせる工程を含む、項目8に記載の方法。
(項目10)
前記薬剤が、miR−200c、miR−141、miR−200b、miR−200a、miR−429、miR−182、miR−96、およびmiR−183から選択され、前記細胞中で活性なプロモーターに対して作動可能であるように連結されたmiRNA遺伝子配列を含む、項目9に記載の方法。
(項目11)
前記変化させる工程がインビトロで行われる、項目10に記載の方法。
(項目12)
前記変化させる工程がインビボで行われる、項目10に記載の方法。
(項目13)
前記ガン幹細胞が乳ガン幹細胞である、項目10に記載の方法。
(項目14)
前記乳ガン幹細胞がCD44 + CD24 −/low lineage − である、項目13に記載の方法。
(項目15)
前記変化させる工程が、前記細胞中での前記miRNAのレベルを低下させる薬剤を該細胞に投与することを含む、項目8に記載の方法。
(項目16)
前記薬剤がアンチセンスオリゴヌクレオチドである、項目15に記載の方法。
Claims (9)
- ガン幹細胞(CSC)に対する有効性について候補の化学療法剤をスクリーニングする方法であって:
該候補の化学療法剤をインビトロで、または非ヒト動物においてインビボで、該CSCと接触させる工程、および
miR-214;miR-127;miR-142-3p;miR-199a;miR-199a*;miR-409-3p;miR-125b;miR-146b;miR-199b;miR-222;miR-299-5p;miR-132;miR-221;miR-31;miR-432;miR-495;miR-150;miR-155;miR-338;miR-34b;miR-212;miR-146a;miR-126*;miR-223;miR-130b;miR-196b;miR-521;miR-429;miR-193b;miR-183;miR-96;miR-200a*;miR-200c;miR-141;miR-182;miR-200a;およびmiR-200b
から選択される少なくとも1つのmiRNAの細胞内レベルを変化させることにおける該候補の化学療法剤の有効性を決定する工程
を含む、方法。 - 前記マイクロRNAが、miR−200c、miR−141、miR−200b、miR−200a、miR−429、miR−182、miR−96、およびmiR−183から選択され、細胞内レベルを変化させることが、活性をアップレギュレートさせることまたはダウンレギュレートさせることを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記候補の化学療法剤が、miR−200c、miR−141、miR−200b、miR−200a、miR−429、miR−182、miR−96、およびmiR−183から選択され、前記細胞中で活性なプロモーターに対して作動可能であるように連結されたmiRNA遺伝子配列を含む、請求項2に記載の方法。
- 前記変化させることがインビトロで行われる、請求項3に記載の方法。
- 前記変化させることがインビボで行われる、請求項3に記載の方法。
- 前記ガン幹細胞が乳ガン幹細胞である、請求項3に記載の方法。
- 前記乳ガン幹細胞がCD44+CD24−/lowlineage−である、請求項6に記載の方法。
- 前記変化させることが、前記細胞中での前記miRNAのレベルを低下させる薬剤を該細胞に投与することを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記薬剤がアンチセンスオリゴヌクレオチドである、請求項8に記載の方法。
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