JP2011504473A

JP2011504473A - ブラジキニン拮抗薬およびヒアルロン酸を含む医薬組成物、およびその使用

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Publication number: JP2011504473A
Application number: JP2010534395A
Authority: JP
Inventors: カルロアルベルトマッジ、; サンドロジュリアーニ、; ラウラクワルターラ、
Original assignee: Istituto Luso Farmaco dItalia SpA
Current assignee: Istituto Luso Farmaco dItalia SpA
Priority date: 2007-11-23
Filing date: 2008-11-10
Publication date: 2011-02-10
Anticipated expiration: 2028-11-10
Also published as: ZA201003586B; NI201000087A; WO2009065507A2; HN2010001037A; GEP20125602B; EP2222275A2; CR11457A; US9101627B2; EP2222275B1; CN101868225B; ITMI20072225A1; CY1112134T1; SI2222275T1; BRPI0820402A2; AP2628A; PA8804801A1; EA017626B1; PT2222275E; AU2008328311A1; CO6270301A2

Abstract

有効成分として、ヒアルロン酸ポリマーとブラジキニンＢ２受容体拮抗薬との混合物を含む医薬組成物が開示される。前記組成物は、関節内注射を用いる、骨関節炎のような変形性関節疾患の治療に特に効果的であるとわかった。

Description

本発明は、有効成分として、ヒアルロン酸ポリマーとブラジキニンＢ２受容体拮抗薬との混合物を含む医薬組成物に関する。前記組成物は、関節内注射を用いる骨関節炎のような変形性関節疾患の治療において、特に効果的であると分かった。

変形性関節疾患としても知られている骨関節炎（ＯＡ）は、関節の有痛性で進行性で変形性の疾患である。ＯＡの主な病態生理学的特徴は、関節軟骨の破壊および損失、肥大、滑膜の炎症、および結果としての関節の腫れである。これらの効果は、疼痛、こわばりおよび機能損失のような兆候を生み出す。平均寿命の上昇に伴う、高齢人口におけるＯＡの高い罹患率は、この疾患を患っている患者の数が近い将来にかなり増加しそうであることを示唆している。ＯＡの患者は、疼痛の軽減が、かれらの生活の質に、非常に重要であると考えている。

この疾患の進行を止める薬剤は、これまで得られていない。現存する治療は、主に、疼痛兆候を低下させ、関節機能を回復するように設計されている。骨関節炎における疼痛の治療のために、パラセタモールおよび非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）が広く記載されている。しかしながら、前記薬剤の長期使用には、大きな副作用、特に胃腸水準（潰瘍）において血小板凝集が伴い得る。コルチコステロイドの関節内注射は、関連する炎症および疼痛を減少させるが、その効果が短命であるのでほとんど使われていない。結果として、骨関節炎に伴う疼痛および炎症を減少させる新規治療剤が明らかに必要とされている。

ブラジキニン（ＢＫ）は、ペプチダーゼ活性を有する酵素（カリクレイン）による攻撃に続いて高分子量の前駆体（キニノゲン）から誘導される小さなペプチド（８〜１１アミノ酸）のファミリーであるキニンの一員である。キニン形成は、炎症性、虚血性および免疫性作用または細菌およびウイルス感染を含む種々の環境において活性化される。

２つのキニン受容体が薬理学的に特徴付けられている：すなわち、正常状態では最低限の発現であるがその発現が前述の刺激により誘発されるＢ１受容体、および多くの細胞型により連続的に発現されているＢ２受容体である。ブラジキニンは、Ｂ２受容体の刺激を介するもので、炎症および疼痛の最も重要なメディエーターの一つであり、炎症誘発および痛覚過敏メディエーターの放出に含まれるものである。

ブラジキニン（ＢＫ）は、種々の水準のＯＡの病態生理学に関与することが示された。

キニンが、ＯＡ患者の滑液中に放出されることが昔から知られている。さらに、これらの患者において、滑液腔の内側を覆っている細胞、線維芽細胞、および血管の内皮細胞においてＢ２受容体が見つかった。

種々の前臨床モデルを用いた多くの研究が、ＢＫが、関節内経路により投与された場合、サブスタンスＰ、ヒスタミンおよびカルシトニン遺伝子関連ペプチドのような他の炎症性メディエーターよりも効果的に、ラットの滑膜における好中球の沈積および血漿の浸出を誘発することを示している。さらに、ＢＫは、関節軟骨におけるプロテオグリカン含量を減少させ、ネズミＯＡモデルにおけるプロスタグランジンの放出を生じさせる。

一部のブラジキニンＢ２受容体拮抗薬は、種々の動物滑膜炎モデルにおいて炎症性事象および痛覚過敏を防止するのに効果的であるとわかった。

その放出後、ＢＫは、関節包に神経を分布する知覚神経線維を刺激および感作する。

膝の症候性ＯＡを有する５８人の患者について行われた第ＩＩ相試験において、ＢＫの臨床的有意性が示され、そこで、Ｂ２受容体拮抗薬イカチバント（ｉｃａｔｉｂａｎｔ）（９０μｇ／１ｍｌ）の関節内単回投与が、プラセボ（患者５５人）よりもかなりの程度に膝における疼痛の強さを低下させた。サノフィー・アベンティスは、膝のＯＡの患者において、イカチバントの関節内浸入（５００μｇを１週間開けて３回投与）が、投与後に３か月まで続く強力な鎮痛反応を誘発し、このかなりの鎮痛効果が、副作用が無視できる程度でまたは副作用無く得られることを、最近報告した。

多くのブラジキニンＢ２受容体拮抗薬が文献に記載されてきた。

ＥＰ３７０４５３は、ブラジキニン拮抗薬として作用するペプチド構造を有する幾つかの化合物を記載しており、この化合物としては、イカチバントとして定義される化合物が挙げられる。イカチバントは、ＥＰ１５９４５２０の特許の対象も形成し、骨関節炎の予防および治療におけるその使用が開示されている。

ＷＯ０３１０３６７１（引用文献１）は、一群の非常に強力な非ペプチド性ブラジキニン拮抗薬を記載している。化合物ＭＥＮ１６１３２を含む特に有効な拮抗薬の選択がＷＯ２００６０４０００４に報告されており；これらの拮抗薬も、骨関節炎の予防および治療において、特に膝の関節内治療において高度に有効であると分かった。

ヒアルロナン（ヒアルロン酸またはヒアルロネートとしても知られている）は、内皮、結合、上皮および神経組織に広く分布している非硫酸化グリコースアミノグリカンである。これは、細胞外マトリクスの主要成分の一つであり、細胞の増殖および移動に著しく貢献する。平均して、７０ｋｇの人は体内にヒアルロナン１５ｇを含み、その三分の一が毎日交換される（破壊され合成される）。

ヒアルロナンは滑液の主要成分の一つであり、その粘度を上昇させるものである。ルブリシンと共に、それは、滑液成分の主な滑剤の一つである。ヒアルロナンは、関節軟骨の重要な成分でもあり、各細胞（軟骨細胞）の内張りとして見られる。

ヒアルロナンは、膝のＯＡの治療に昔から用いられている（ＰｕｈｌＷ；ＳｃｈａｒｆＰ（１９９７）．ＡｎｎＲｈｅｕｍＤｉｓ５６（７）：６３７−４０）（非特許文献１）。ビスコサプリメンテーションとして知られている前記治療は、膝関節に含まれる流体の粘度を増すように設計されている膝関節への一続きの注射からなり、関節を滑らかにすると共に支持し、結果として鎮痛効果を発生させるものである。ヒアルロナンは、軟骨細胞への好ましい生化学的効果を有するとも仮定されてきた。発売されるべきこの種の最初の生成物は、ＨｙｌａｎＧ−Ｆ２０（Ｓｙｎｖｉｓｃ（登録商標））であり、１９９８年からＧｅｎｚｙｍｅにより販売されてきた。ＥｕｒｏｐｅａｎＭｅｄｉｃｉｎｅｓＡｇｅｎｃｙ（ＥＭＥＡ）は、ＯＡ疼痛用治療としてのＨｙｌａｎＧＦ−２０の認可を、２００２年には腰まで、および２００７年には足首および肩まで延ばした。販売されている他の生成物としては、Ｏｓｔｅｎｉｌ（登録商標）（ＴＲＢＣＨＥＭＥＤＩＣＡ）、Ｓｕｐｌａｓｙｎ（登録商標）（ＭＥＲＣＫＬＥＲＥＣＯＲＤＡＴＩ）およびＧＯ−ＯＮ（登録商標）（ＲＯＴＴＡＰＨＡＲＭ）がある。

１８回のランダム化臨床試験のメタ分析は、ＨｙｌａｎＧ−Ｆ２０およびこのクラスのビスコサプリメントの臨床的利益を確認しており、ビスコサプリメントがプラセボよりも優れていること、およびそれらの多くのものが、膝のＯＡに係わる疼痛の治療において、ステロイドよりも効果的であることを結論付けている（ＣｏｃｈｒａｎｅＣｏｌｌａｂｏｒａｔｉｏｎＳｏｕｒｃｅ，ＰｒｅｓｓＲｅｌｅａｓｅ２００５，Ｍａｙ０５，ＧｅｎｚｙｍｅＣｏｒｐにより公開されているＰｏｓｉｔｉｖｅＳｙｎｖｉｓｃＤａｔａ）。

構造的に、ヒアルロナンは、Ｎ−アセチルグルコースアミンの繰り返し二糖単位と、グルクロン酸ナトリウムからなるポリマーである。ＯＡの治療に用いられるものは、通常、ケイトウ（ｃｏｘｃｏｍｂｓ）から抽出され、０．５〜１０ミリオンダルトンの範囲の種々の平均分子量のフラクションを単離することができる。ビスコサプリメンテーション効果は、分子量および密度に依存して変化する（Ｇｏｍｉｓら著，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ，２００４，５０：３１４−３２６）。

骨関節炎の治療のために、ＢＫ拮抗薬またはヒアルロン酸の使用を含む多くの方法が提案されてきた。

ＷＯ０３０６３７９９は、マトリクスメタルプロテイナーゼ（ＭＭＰ）阻害剤（ブラジキニンはＭＭＰ生成を阻害する）を含む複数の軟骨保護剤を含む医薬組成物の使用も提案しているが、ヒアルロン酸の使用は記載されていない。

しかしながら、骨関節炎のような変形性関節疾患の効果的治療のための満たされていない要望がある。

国際公開第０３／０３６７１号パンフレット

ＰｕｈｌＷ；ＳｃｈａｒｆＰ（１９９７）．ＡｎｎＲｈｅｕｍＤｉｓ５６（７）：６３７−４０

有効成分として
ａ）ヒアルロン酸
ｂ）ブラジキニンＢ２受容体拮抗薬
を含む医薬組成物が、限定はされないが骨関節炎のような変形性関節疾患の治療において驚くべき効果を示すことが、意外にも発見された。

本発明は、ブラジキニンＢ２受容体拮抗薬を含む医薬組成物であって、そのブラジキニン拮抗薬が好ましくは以下のものである医薬組成物に関する：
・Ｈ−Ｄ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ−Ｉｇｌ−Ｓｅｒ−Ｄ−Ｆ５Ｆ−Ｉｇｌ−Ａｒｇ−ＯＨ（Ｂ１００５６）
・Ｈ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ−Ｉｇｌ−Ｓｅｒ−Ｄ−Ｉｇｌ−Ｏｉｃ−Ａｒｇ−ＯＨ（Ｂ９４３０）
・Ｈ−Ｄ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ−Ｔｈｉ−Ｓｅｒ−Ｄ−Ｔｉｃ−Ｏｉｃ−Ａｒｇ−ＯＨ（イカチバント（Ｉｃａｔｉｂａｎｔ））
・４−［２−［（［［３−（３−ブロム−２−メチル−イミダゾ［１．２−ａ］ピリジン−８−イルオキシメチル）−２，４−ジクロロ−フェニル］−メチル−カルバモイル］−メチル）−カルバモイル］−ビニル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ベンズアミド（ＦＲ１６７３４４）
・３−（６−アセチルアミノ−ピリジン−３−イル）−Ｎ−（［［２，４−ジクロロ−３−（２−メチル−キノリン−８−イルオキシメチル）−フェニル］−メチル−カルバモイル］−メチル）−アクリルアミド（ＦＲ１７３６５７またはＦＫ３６５７）
・１−［２，４−ジクロロ−３−（２，４−ジメチル−キノリン−８−イルオキシメチル）−ベンゼンスルホニル］−ピロリジン−２−カルボン酸［３−（４−カルバミドイル−ベンゾイルアミノ）−プロピル］−アミド（ＬＦ１６０６８７、アナチバント（Ａｎａｔｉｂａｎｔ））
・４−（４−［１−［２，４−ジクロロ−３−（２，４−ジメチル−キノリン−８−イルオキシメチル）−ベンゼンスルホニル］−ピロリジン−２−カルボニル］−ピペラジン−１−カルボニル）−ベンズアミジン（ＬＦ１６０３３５）
・２−［５−（４−シアノ−ベンゾイル）−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−イル］−Ｎ−［２，４−ジクロロ−３−（２−メチル−キノリン−８−イルオキシメチル）−フェニル］−Ｎ−メチル−アセトアミド。

または一般式（Ｉ）で示されるＷＯ２００６／０４００４に記載の化合物の一つ；

（式中、
Ｒは水素またはメチル、
Ｗは単結合または酸素原子を表し、
ｎ＝３または４
Ｘは水素または−ＮＲ１Ｒ２アミノ基（ここで、Ｒ１およびＲ２は、互いに独立して、水素または、メチル、エチル、ｎ−プロピルおよびイソプロピルから選択される基であり得る）であり、
Ｙは四級アンモニウム（−ＮＲ３Ｒ４Ｒ５）⁺Ａ^-（ここで、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、互いに独立して、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチルまたはｎ−ペンチルであり、Ａ^-は医薬的に許容される酸のアニオンである）である）；
それらの薬理的に許容される塩、エナンチオマーおよびエナンチオマー混合物。

本発明の目的において、医薬的に許容される酸は、塩酸、臭化水素酸、リン酸、炭酸、酢酸、硫酸、トリフルオロ酢酸、メタン硫酸、コハク酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、クエン酸およびエデト酸から選択される酸であり、ここで、アニオンは、２個以上の陰性電荷を有し、Ａ^-は少数値である。

一般式（Ｉ）で示される化合物のうち、以下の化合物が特に好ましい：塩酸、酢酸、硫酸、トリフルオロ酢酸、メタンスルホン酸、コハク酸およびエデト酸から選択される酸から形式的に誘導されるイオンで塩化された状態の（４−（Ｓ）−アミノ−５−（４−｛４−［２，４−ジクロロ−３−（２，４−ジメチル−キノリン−８−イルオキシメチル）−ベンゼンスルホニルアミノ］−テトラヒドロ−ピラン−４−カルボニル｝−ピペラジン−１−ｙｌ）−５−オキソ−ペンチル］−トリメチルアンモニウム；塩化物二塩酸塩はＭＥＮ１６１３２（ＭＷ８７１．５）に定義されている化合物である。

使用されるヒアルロン酸は、平均分子量が０．５〜１０ミリオンダルトン、好ましくは４〜９ミリオンダルトンであり、特に好ましいのは、平均分子量が５〜８ミリオンダルトンであるヒアルロン酸のそのもの、またはそのナトリウムもしくはカリウム塩である。

本発明の組成物は、ブラジキニン拮抗薬の量が一回分当たり５．７×１０^-5〜２．３×１０^-2ミリモルの範囲（ＭＥＮ１６１３２の場合、約０．０５〜２０ｍｇの量に相当）であり、好ましくは１．１×１０^-4〜１．１×１０^-2ミリモルの範囲（ＭＥＮ１６１３２の場合、約０．１〜１０ｍｇの量に相当）であり、さらにより好ましくは２．９×１０^-4〜５．７×１０^-3ミリモルの範囲（ＭＥＮ１６１３２の場合、約０．２５〜５ｍｇの量に相当）である。

前記組成物は、一回分当たり１〜１００ｍｇ、好ましくは５〜２０ｍｇのヒアルロン酸も含む。

本発明の医薬組成物は、一種または複数種の医薬的に許容されるキャリア／賦形剤も含み得る。

溶液、クリーム、ゲルまたは経皮パッチのような局所投与に適した液体または半固体剤型が好ましく、特に、溶液のような関節内または滑液包内注射に適した型、および、クリームまたはゲルおよび経皮パッチのような半固体型のような経皮用途のものが好ましい。剤型は、成分の一部または全てが乾燥状態、場合により凍結乾燥状態であり、使用前に水溶液または他の適当なビヒクルを用いて再構成される型でもあり得る。

前記組成物は、バインダー、崩壊剤、充填剤、安定化剤、希釈剤および着色剤のような既知の賦形剤を用いて、当業者に良く知られた方法により製造することができる。これらは、医薬技術において知られている適当なポリマーを用いて作られる遅延または徐放型も含み得る。

溶媒のような医薬的に許容されるキャリア／賦形剤、酸化防止剤のような防腐剤および／またはキレート剤、および抗菌剤、等張性調整剤、および緩衝剤系が、注射用途に適した液体型の調製に好ましい。

水が溶媒として好ましく、エチレングリコールのようなグリコールまたはポリアルコールのような共溶媒を場合により用いる。

防腐剤またはキレート剤も用いて良く、エデト酸ナトリウムおよびメタ重亜硫酸ナトリウムが好ましく、抗菌剤、ベンジルアルコールが好ましい。

塩化ナトリウムまたはマンニトールが、等張性調整剤として特に好ましい。

好ましい緩衝剤系は、リン酸およびクエン酸緩衝剤用の塩の複合体であり得、好ましくはナトリウムまたはカリウム塩の状態のものである。

本発明において、特にペプチド構造を有する化合物の記載において、一部の非天然アミノ酸について以下の略号を用いた：
Ｎａｌ＝ナフチルアラニン
ＮＭｅＰｈｅ＝Ｎ−メチル−フェニルアラニン
Ｏｉｃ＝オクタヒドロインドール−２−カルボン酸、
ＨｙＰ＝ヒドロキシプロリン
Ｉｇｌ＝アミノインダンカルボン酸
Ｃｐｇ＝１−アミノシクロペンタンカルボン酸
Ｔｉｃ＝１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸
Ｆ５Ｆ＝ペンタフルオロフェニルアラニン。

本発明の組成物の典型的例としては、以下のものが挙げられる。

１．ヒアルロン酸ナトリウム塩、平均分子量０．５〜１０ミリオンダルトン、５〜２０ｍｇ、ＭＥＮ−１６１３２、０．２５〜５ｍｇ、食塩溶液中（０．９％ＮａＣｌ）、０．１ＮＨＣｌ、ｐＨ４．５にする適量、水、１ｍｌにする適量。

２．ヒアルロン酸ナトリウム塩、平均分子量０．５〜１０ミリオンダルトン、５〜２０ｍｇ、ＭＥＮ−１６１３２、０．２５〜５ｍｇ、食塩溶液中（０．９％ＮａＣｌ）、０．１ＮＨＣｌ、ｐＨ６にする適量、水、１ｍｌにする適量。

３．ヒアルロン酸ナトリウム塩、平均分子量０．５〜１０ミリオンダルトン、５〜２０ｍｇ、ＭＥＮ−１６１３２、０．２５〜５ｍｇ、食塩溶液中（０．９％ＮａＣｌ）、リン酸塩緩衝剤（ｐＨ６〜８）、水、１ｍｌにする適量。

４．ヒアルロン酸ナトリウム塩、平均分子量０．５〜１０ミリオンダルトン、５〜２０ｍｇ、ＭＥＮ−１６１３２、０．２５〜５ｍｇ、食塩溶液中（０．９％ＮａＣｌ）、クエン酸塩緩衝剤（ｐＨ６〜８）、水、１ｍｌにする適量。

５．ＭＥＮ−１６１３２（０．２５〜５ｍｇ、凍結乾燥状態）を、ヒアルロン酸ナトリウム塩（平均分子量０．５〜１０ミリオンダルトン、５〜２０ｍｇ）、食塩溶液（０．９％ＮａＣｌ）中のリン酸塩緩衝剤、１ｍｌにする適量の水、からなる溶液で溶解することにより得られる即席製剤。

６．ヒアルロン酸ナトリウム塩、平均分子量０．５〜１０ミリオンダルトン、５〜２０ｍｇ、イカチバント（ＭＷ１３０４．５）、０．３７〜６．５ｍｇ、食塩溶液中（０．９％ＮａＣｌ）、リン酸塩緩衝剤（ｐＨ６〜８）、水、１ｍｌにする適量。

本発明の医薬組成物は、炎症性、自己免疫性、外傷性および変形性関節疾患、例えば、骨関節炎および外傷後骨関節炎、変形性骨関節炎（膝関節炎、脊椎関節炎）、脊椎症、滑膜炎、腱滑膜炎、滑液包炎、打撲傷、捻挫、脱臼および亜脱臼、および、発生的変化により引き起こされる関節内疾患、例えば、骨軟骨炎および異形成の予防および治療に有用である。

投与量は、年齢および患者の全身状態、疾患または不全の性質および重症度、および投与の経路およびタイプにより変わり得る。成人ヒト患者における関節内使用の場合、本発明の医薬組成物の使用は、ブラジキニン拮抗薬２．９×１０^-4〜５．７ｘ１０^-3ミリモル（ＭＥＮ１６１３２の場合、約０．２５〜５ｍｇに相当）およびヒアルロン酸５〜２０ｍｇの毎週の投与（単回投与）を含む。

以下の実施例は、本発明をより詳しく説明するものである。

（実施例１）
ヒアルロン酸ナトリウム塩、平均分子量６ミリオンダルトン、１０ｍｇ、ＭＥＮ−１６１３２、０．５ｍｇ、食塩溶液中（０．９％ＮａＣｌ）、０．１ＮＨＣｌ、ｐＨ４．５にする適量、水、１ｍｌにする適量。溶液を、充填済み２．２５ｍｌ注射器に入れる。

（実施例２）
ヒアルロン酸ナトリウム塩、平均分子量６ミリオンダルトン、１０ｍｇ、ＭＥＮ−１６１３２、０．５ｍｇ、食塩溶液中（０．９％ＮａＣｌ）、リン酸塩緩衝剤（Ｎａ₂ＨＰＯ₄の０．１６ｍｇ、ＮａＨ₂ＰＯ₄の０．０４ｍｇ）含有、水、１ｍｌにする適量。溶液を、充填済み２．２５ｍｌ注射器に入れる。

（実施例３）
ヒアルロン酸ナトリウム塩、平均分子量６ミリオンダルトン、１０ｍｇ、ＭＥＮ−１６１３２、０．２ｍｇ、食塩溶液中（０．９％ＮａＣｌ）、０．１ＮＨＣｌ、ｐＨ４．５にする適量、水、１ｍｌにする適量。溶液を、充填済み２．２５ｍｌ注射器に入れる。

（実施例４）
ヒアルロン酸ナトリウム塩、平均分子量６ミリオンダルトン、１０ｍｇ、食塩溶液中（０．９％ＮａＣｌ）、リン酸塩緩衝剤（Ｎａ２ＨＰＯ４の０．１６ｍｇ、ＮａＨ₂ＰＯ₄の０．０４ｍｇ）含有、水、１ｍｌにする適量。凍結乾燥状態のＭＥＮ１６１３２を、前述の溶液を用いて溶解する。

（実施例５）
ヒアルロン酸ナトリウム塩、平均分子量６ミリオンダルトン、１０ｍｇ、イカチバント、０．５ｍｇ、食塩溶液中（０．９％ＮａＣｌ）、リン酸塩緩衝剤（Ｎａ₂ＨＰＯ₄の０．１６ｍｇ、ＮａＨ₂ＰＯ₄の０．０４ｍｇ）含有、水、１ｍｌにする適量。溶液を、充填済み２．２５ｍｌ注射器に入れる。

（生物学的活性）
軟骨細胞中での解糖を阻害するモノヨード酢酸ナトリウム（ＭＩＡ）の関節内注射により誘発され、それにより、ヒト骨関節炎と非常に似た状態で、細胞に損傷および死を引き起こし結果として関節表面を変形させた骨関節炎の実験モデルにおいて、ＭＥＮ１６１３２、イカチバントおよびヒアルロン酸の活性を測定した。

ＭＩＡ（１ｍｇ／２５μｌ）を、ラットの右膝の関節内空間に注射し、一方、内部対照として、食塩水２５μｌを左膝に投与した。

ＭＩＡの投与は、疼痛、歩行困難、および処理された膝に対応する足に体重をかけられないことを引き起こし、従って、体重は、知覚された痛みに正比例した程度に主に左足にかかる。この効果は、長い週間続く。無能力試験を用いて非侵襲的に評価された体重を支えている２本の足における体重の不均衡は、ＭＩＡにより誘発された関節損傷（骨関節炎）により生じる疼痛を評価するものである。

この試験の目的は、実験的骨関節炎に対するブラジキニンＢ２受容体拮抗薬の保護的効果を評価し、ヒアルロン酸を一緒に投与する効果を達成することである。

ＭＩＡで処理した７日後に、検討中の化合物を注射し、鎮痛効果およびその持続時間を測定するために種々の回数繰り返した。

投与量３μｇ／２５μｌで関節内投与したＭＥＮ１６１３２およびイカチバントは、骨関節炎により引き起こされた疼痛をそれぞれ５５％および４０％減少させ、化合物の投与の３日後に最大の抑制効果が観察された。投与量１０μｇ／２５μｌで関節内投与した場合、抑制効果のさらなる著しい増加は観察されなかった。抗侵害効果が、いずれの化合物を用いても、１週間を超えて続いた。

ヒアルロン酸の投与（分子量６ミリオンダルトン、５０μｇ／２５μｌ関節内投与）により、控えめな抗侵害効果が得られ、疼痛反応が１６％低下した。

ＭＥＮ１６１３２またはイカチバントをヒアルロン酸と共に投与すると、ＭＩＡで骨関節炎が誘発されたラットにおける抗侵害効果をかなり強めた。ＭＥＮ１６１３２またはイカチバント（３μｇ／２５μｌ関節内）およびヒアルロン酸（５０μｇ／２５μｌ）は、処理されていない足と処理された足との間の体重の不均衡として測定される疼痛を、それぞれ７２％および６５％低下させた。運動活性の直接観察に基づくと、ＭＥＮ１６１３２またはイカチバントおよびヒアルロン酸で処理したラットの運動挙動は、骨関節炎を患っていない対照の運動挙動と異ならなかった。ヒアルロン酸と組み合わせた単回投与後の２つのＢ２受容体拮抗薬の効果も長く続き、一部の場合には２週間を超えて続いた。

骨関節炎により引き起こされる兆候および損傷の低減における、ヒアルロン酸を組み合わせた驚くべき効果をさらに確認するために、形態学的および組織学的試験を行った。ＭＥＮ１６１３２またはイカチバントとヒアルロン酸との組み合わせによる処理の１４日後に、膝の関節表面上に存在する損傷の実質的減少（５０％超）が観察され、これは軟骨細胞の損失減少、グリコースアミノグリカンマトリクス、および関節下骨の露出により特徴付けられ、Ｂ２拮抗薬またはヒアルロン酸の単独投与よりも遥かに優れた結果である。

さらに、組み合わせは、適用の観点から特に興味深い、何故なら、キニンＢ２受容体拮抗薬は抗侵害効果をゆっくりとしかし長期間にわたり達成し、一方、高分子量（６ミリオンダルトン）のヒアルロン酸またはその塩は、投与の数時間内に最大効果を呈するからである。従って、本発明に開示されている組み合わせは、２種類の化合物の相補的および促進的効果によって、直ぐに効果を奏し長く続くものである。

Claims

有効成分として、
ａ）ヒアルロン酸または、ナトリウム塩およびカリウム塩から選択されるその塩と、
ｂ）ブラジキニンＢ２受容体拮抗薬と、
の混合物を、医薬的に許容されるキャリアおよび賦形剤と共に含んでなり、
該ヒアルロン酸は、平均分子量が０．５〜１０ミリオンダルトンであるポリマー状であり、該ブラジキニン拮抗薬が、以下のものから選択されることを特徴とする医薬組成物：
・Ｈ−Ｄ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ−Ｉｇｌ−Ｓｅｒ−Ｄ−Ｆ５Ｆ−Ｉｇｌ−Ａｒｇ−ＯＨ
・Ｈ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ−Ｉｇｌ−Ｓｅｒ−Ｄ−Ｉｇｌ−Ｏｉｃ−Ａｒｇ−ＯＨ
・Ｈ−Ｄ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ−Ｔｈｉ−Ｓｅｒ−Ｄ−Ｔｉｃ−Ｏｉｃ−Ａｒｇ−ＯＨ（イカチバント（Ｉｃａｔｉｂａｎｔ））
・４−［２−［（［［３−（３−ブロム−２−メチル−イミダゾ［１．２−ａ］ピリジン−８−イルオキシメチル）−２，４−ジクロロフェニル］−メチル−カルバモイル］−メチル）−カルバモイル］−ビニル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ベンズアミド
・３−（６−アセチルアミノ−ピリジン−３−イル）−Ｎ−（［［２，４−ジクロロ−３−（２−メチル−キノリン−８−イルオキシメチル）−フェニル］−メチル−カルバモイル］−メチル）−アクリルアミド
・１−［２，４−ジクロロ−３−（２，４−ジメチル−キノリン−８−イルオキシメチル）−ベンゼンスルホニル］−ピロリジン−２−カルボン酸［３−（４−カルバミドイル−ベンゾイルアミノ）−プロピル］−アミド（アナチバント（Ａｎａｔｉｂａｎｔ））
・４−（４−［１−［２，４−ジクロロ−３−（２，４−ジメチル−キノリン−８−イルオキシメチル）−ベンゼンスルホニル］−ピロリジン−２−カルボニル］−ピペラジン−１−カルボニル）−ベンズアミジン
・２−［５−（４−シアノ−ベンゾイル）−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−イル］−Ｎ−［２，４−ジクロロ−３−（２−メチル−キノリン−８−イルオキシメチル）−フェニル］−Ｎ−メチル−アセトアミド
からなる群より選択されるＢ２受容体拮抗薬；
一般式（Ｉ）で示されるＢ２受容体拮抗薬；

（式中、
Ｒは水素またはメチル、
Ｗは単結合または酸素原子を表し、
ｎ＝３または４
Ｘは水素または−ＮＲ１Ｒ２アミノ基（ここで、Ｒ１およびＲ２は、互いに独立して、水素または、メチル、エチル、ｎ−プロピルおよびイソプロピルから選択される基であり得る）であり、
Ｙは四級アンモニウム（−ＮＲ３Ｒ４Ｒ５）⁺Ａ^-（ここで、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、互いに独立して、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチルまたはｎ−ペンチルであり、Ａ^-は医薬的に許容される酸のアニオンである）である）；
それらの薬理的に許容される塩、エナンチオマーおよびエナンチオマー混合物。
該ブラジキニン拮抗薬が、イカチバントまたは一般式（Ｉ）で表わされる化合物から選択されるブラジキニンＢ２受容体拮抗薬である請求項１に記載の医薬組成物。
該ブラジキニン拮抗薬が、一般式（Ｉ）で表わされる化合物：塩酸、酢酸、硫酸、トリフルオロ酢酸、メタンスルホン酸、コハク酸およびエデト酸から選択される酸から形式的に誘導されるイオンで塩化された状態の（４−（Ｓ）−アミノ−５−（４−｛４−［２，４−ジクロロ−３−（２，４−ジメチル−キノリン−８−イルオキシメチル）−ベンゼンスルホニルアミノ］−テトラヒドロ−ピラン−４−カルボニル｝−ピペラジン−１−イル−５−オキソ−ペンチル］−トリメチルアンモニウム、である請求項１に記載の医薬組成物。
該化合物（４−（Ｓ）−アミノ−５−（４−｛４−［２，４−ジクロロ−３−（２，４−ジメチル−キノリン−８−イルオキシメチル）−ベンゼンスルホニルアミノ］−テトラヒドロ−ピラン−４−カルボニル｝−ピペラジン−１−イル−５−オキソ−ペンチル］−トリメチル−アンモニウムが、塩化物二塩酸塩の状態（ＭＥＮ１６１３２）である請求項３に記載の医薬組成物。
一回分当たりのヒアルロン酸の量が１〜１００ｍｇである、請求項１〜４のいずれかに記載の医薬組成物。
一回分当たりのヒアルロン酸の量が５〜２０ｍｇである、請求項５に記載の医薬組成物。
ヒアルロン酸の平均分子量が４〜９ミリオンダルトンの範囲である、請求項１〜６のいずれかに記載の医薬組成物。
ヒアルロン酸の平均分子量が５〜８ミリオンダルトンの範囲である、請求項７に記載の医薬組成物。
ブラジキニン受容体拮抗薬の量が一回分当たり５．７×１０^-5〜２．３×１０^-2ミリモルの範囲（ＭＥＮ１６１３２の場合、一回分当たり０．０５〜２０ｍｇの量に相当）である、請求項１〜４のいずれかに記載の医薬組成物。
ブラジキニン受容体拮抗薬の量が一回分当たり１．１×１０^-4〜１．１×１０^-2ミリモルの範囲（ＭＥＮ１６１３２の場合、一回分当たり０．１〜１０ｍｇの量に相当）である、請求項９に記載の医薬組成物。
ブラジキニン受容体拮抗薬の量が一回分当たり２．９×１０^-4〜５．７×１０^-3ミリモルの範囲（ＭＥＮ１６１３２の場合、一回分当たり０．２５〜５ｍｇの量に略相当）である、請求項１０に記載の医薬組成物。
関節内または滑液包内注射液の状態、またはクリーム、ゲルもしくはパッチから選択される経皮状態である、請求項１〜１１のいずれかに記載の医薬組成物。
ブラジキニン拮抗薬が、結晶、無定形または凍結乾燥から選択される固体状態にあり、使用前に、ヒアルロン酸を含む溶液に溶解されることにより関節内または滑液包内注射液を構成するものである請求項１２に記載の医薬組成物。
リン酸塩またはクエン酸塩から選択される緩衝剤も含む請求項１〜１３のいずれかに記載の医薬組成物。
等張性調整剤としての塩化ナトリウムも含む請求項１〜１４のいずれかに記載の医薬組成物。
防腐剤およびキレート剤としてのエデト酸ナトリウムも含む請求項１〜１５のいずれかに記載の医薬組成物。
炎症性、自己免疫性、外傷性および変形性関節疾患、例えば、骨関節炎および外傷後骨関節炎、変形性骨関節炎（膝関節炎、脊椎関節炎）、脊椎症、滑膜炎、腱滑膜炎、滑液包炎、打撲傷、捻挫、脱臼および不全脱臼、および、発生的変化により引き起こされる関節内疾患、例えば、骨軟骨炎および異形成の予防および治療のための請求項１に記載の医薬組成物の調製のための、ブラジキニンＢ２受容体拮抗薬と組み合わせたヒアルロン酸の使用。
炎症性、自己免疫性、外傷性および変形性関節疾患、例えば、骨関節炎および外傷後骨関節炎、変形性骨関節炎（膝関節炎、脊椎関節炎）、脊椎症、滑膜炎、腱滑膜炎、滑液包炎、打撲傷、捻挫、脱臼および不全脱臼、および、発生的変化により引き起こされる関節内疾患、例えば、骨軟骨炎および異形成の予防および治療のための医薬組成物の調製のための、ヒアルロン酸と組み合わせたブラジキニンＢ２拮抗薬ＭＥＮ１６１３２の請求項１７に記載の使用。
骨関節炎および外傷後骨関節炎の治療に適した医薬組成物を調製するための、ヒアルロン酸と組み合わせたブラジキニンＢ２拮抗薬ＭＥＮ１６１３２の請求項１８に記載の使用。