JP2011205952A - Deactivator for virus and bacterium, and feed for fowl comprising the same - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は枯草菌の発酵成分を含む生菌製剤とプロポリスとクエン酸を配合してなり、ウイルス及び細菌を不活化する不活化剤、及び該不活化剤からなる鳥用飼料に関する。 The present invention relates to a viable preparation containing a fermentation component of Bacillus subtilis, propolis and citric acid, an inactivating agent which inactivates viruses and bacteria, and a bird feed comprising the inactivating agent.
鳥インフルエンザは鳥インフルエンザウイルスの感染による家禽類を含む鳥類の疾病であり、病勢から低病原性ウイルスと高病原性ウイルスとに大別される。高病原性ウイルスが発症すると全身症状を起こし、大量死する可能性がある。日本ではＨ５亜型、Ｈ７亜型のウイルスを高病原性鳥インフルエンザとしている。本来ウイルスの宿主域は限定され、哺乳類に感染するウイルスは哺乳類のみ、鳥類に感染するウイルスは鳥類のみというのが通常であるが、鳥インフルエンザウイルスは鳥類のみならず、哺乳類にも感染することができる広い宿主域をもつウイルスである。さらに鳥インフルエンザウイルスは変異することで将来、ヒトからヒトへの感染が起こることが危惧されており、国際的にも監視が強まっている。 Avian influenza is a disease of birds, including poultry, caused by infection with avian influenza virus, and is roughly classified into low pathogenic virus and highly pathogenic virus according to its disease state. When a highly pathogenic virus develops, it can cause systemic symptoms and death. In Japan, H5 and H7 subtype viruses are considered highly pathogenic avian influenza. Originally, the host range of viruses is limited, and the only virus that infects mammals is usually mammals, and the only virus that infects birds is birds. However, avian influenza viruses can infect not only birds but also mammals. A virus with a wide host range. Furthermore, there are concerns that human-to-human infection will occur in the future due to mutations in the avian influenza virus, and surveillance is increasing internationally.
鳥インフルエンザウイルスは適切な加熱によって死滅するとされており、ＷＨＯ（世界保健機関）は食品の中心温度を７０度に達するよう加熱することを推奨している。
また、鳥インフルエンザの感染拡大を防止する対策としては、養鶏場における野鳥の侵入防止、スクリーニングの実施などによるウイルス侵入の早期発見、不活化ワクチンの使用、鳥インフルエンザウイルスの浄化を目的とした消毒などがある。
The bird flu virus is supposed to be killed by appropriate heating, and the WHO (World Health Organization) recommends heating the food to a core temperature of 70 degrees.
In addition, measures to prevent the spread of avian influenza infection include prevention of invasion of wild birds at poultry farms, early detection of virus intrusion by conducting screening, use of inactivated vaccines, disinfection for the purpose of purifying avian influenza viruses, etc. There is.
特許文献１には、ヨウ素とシクロデキストリンとを含有する溶液が鳥インフルエンザウイルスの不活化に効果があることが記載されている。しかしながらこの溶液は消毒剤であるため、鳥インフルエンザウイルスが付着し得る場所すべてに該溶液を噴霧等しなければならず費用がかかり効率が悪いものであった。 Patent Document 1 describes that a solution containing iodine and cyclodextrin is effective in inactivating avian influenza virus. However, since this solution is a disinfectant, the solution must be sprayed on all the places where the avian influenza virus can adhere, which is expensive and inefficient.
本発明は上記問題に鑑みてなされたものであり、枯草菌の発酵成分を含む生菌製剤とプロポリスとクエン酸が配合されたウイルス及び細菌の不活化剤で、且つ免疫賦活効果及び抗酸化効果を有する不活化剤からなる飼料を鳥に与えることにより、不活化剤自体が有する抗ウイルス効果、抗菌効果によりウイルス及び細菌を不活化するとともに、該不活化剤によって鳥自身の免疫を賦活化することにより、鳥のウイルス及び細菌に対する抵抗性を高めて、ウイルス感染及び細菌感染を簡便に防止することを課題とする。 The present invention has been made in view of the above problems, and is a virus- and bacteria-inactivating agent in which a probiotic preparation containing a fermentation component of Bacillus subtilis, propolis and citric acid is mixed, and an immunostimulatory effect and an antioxidant effect By giving a bird a feed comprising an inactivating agent, the virus and bacteria are inactivated by the antiviral effect and antibacterial effect of the inactivating agent itself, and the bird's own immunity is activated by the inactivating agent. Therefore, it is an object of the present invention to increase the resistance of birds to viruses and bacteria to easily prevent virus infection and bacterial infection.
請求項１に係る発明は、枯草菌の発酵成分を含む生菌製剤、プロポリス、クエン酸が配合された不活化剤であり、ウイルス及び細菌を不活化することを特徴とする不活化剤に関する。
請求項２に係る発明は、前記不活化剤が免疫賦活化効果を有することを特徴とする請求項１に記載の不活化剤に関する。
請求項３に係る発明は、前記不活化剤が抗酸化効果を有することを特徴とする請求項１又は２に記載の不活化剤に関する。
請求項４に係る発明は、前記ウイルスがＨ５Ｎ１型鳥インフルエンザウイルスであることを特徴とする請求項１乃至３いずれかに記載の不活化剤に関する。
請求項５に係る発明は、前記細菌がウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）であることを特徴とする請求項１乃至３いずれかに記載の不活化剤に関する。
請求項６に係る発明は、請求項１乃至５いずれかに記載の不活化剤からなることを特徴とする鳥用飼料に関する。
The invention according to claim 1 relates to an inactivating agent that is a viable preparation containing a fermentation component of Bacillus subtilis, propolis, and citric acid, and inactivates viruses and bacteria.
The invention according to
The invention according to claim 3 relates to the inactivating agent according to
The invention according to
The invention according to
The invention according to
請求項１に係る発明によれば、枯草菌の発酵成分を含む生菌製剤とプロポリスとクエン酸が配合されたウイルス及び細菌の不活化剤であるため、人体及び鳥類において安全にウイルス及び細菌を不活化することができる。 According to the invention according to claim 1, since it is a virus and bacteria inactivator containing a viable bacterial preparation containing fermentation components of Bacillus subtilis, propolis and citric acid, the virus and bacteria can be safely removed in the human body and birds. Can be inactivated.
請求項２及び３に係る発明によれば、枯草菌の発酵成分を含む生菌製剤とプロポリスとクエン酸が配合されたウイルス及び細菌の不活化剤であり、プロポリス及びクエン酸の配合量が少なくても、ウイルス及び細菌を直接的に不活化することができるとともに、該不活化剤の鳥類の免疫を賦活化する効果及び抗酸化効果により鳥類のウイルスや細菌に対する抵抗性を高めることができるので、体内に侵入したウイルス及び細菌の増殖を抑制し、感染を防ぐことができる。
According to the inventions according to
請求項４に係る発明によれば、高病原性であるＨ５Ｎ１型の鳥インフルエンザを不活化することができるので、家禽類を含む鳥類の高病原性鳥インフルエンザ感染による大量死を防ぐことができる。
According to the invention which concerns on
請求項５に係る発明によれば、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）を不活化して、増殖を抑制することができるので、ウェルシュ菌によって引き起こされるガス壊疽、出血性腸炎、エンテロトキセミア、食中毒等の症状を抑制することができる。
According to the invention according to
請求項６に係る発明によれば、枯草菌の発酵成分を含む生菌製剤とプロポリスとクエン酸を配合したウイルス及び細菌の不活化剤であり且つ免疫賦活効果及び抗酸化効果を有する不活化剤からなる鳥用飼料であることから、該飼料を鳥類に毎日摂取させるという簡便な方法により、ウイルス及び細菌を直接不活化するとともに免疫賦活効果及び抗酸化効果により体内に侵入したウイルスや菌に対する抵抗性を向上させてウイルスや細菌に感染し難くすることができる。
According to the invention which concerns on
本発明は枯草菌の発酵成分を含む生菌製剤とプロポリスとクエン酸が配合されてなるウイルス及び細菌の不活化剤及び該不活化剤からなる鳥用飼料であり、ウイルス及び細菌を直接的に不活化することができるとともに、該不活化剤を鳥類が飼料として摂取することで免疫を賦活化するとともに抗酸化効果も有しているため家禽類を含む鳥類のウイルスや細菌に対する抵抗性を高めることができる。
つまり、本発明に係るウイルス及び細菌の不活化剤は、毎日摂取させるという簡便な方法でウイルス及び細菌を直接的に不活化し、また、鳥類の免疫を賦活化して体内に侵入したウイルス及び細菌の増殖を抑制するため、家禽類を含む鳥類がウイルスまたは細菌に感染することを防ぐことができる。
The present invention is a virus and bacteria inactivator comprising a viable preparation containing a Bacillus subtilis fermentation component, propolis and citric acid, and a bird feed comprising the inactivator. It can inactivate and enhances resistance to viruses and bacteria of birds, including poultry, because it activates immunity and has an antioxidant effect when birds ingest the feed as a feed be able to.
That is, the inactivating agent for viruses and bacteria according to the present invention directly inactivates viruses and bacteria by a simple method of daily ingestion, and activates bird immunity to invade the body. Therefore, it is possible to prevent birds including poultry from being infected with viruses or bacteria.
本発明に係る枯草菌の発酵成分を含む生菌製剤について説明する。
本発明に係る枯草菌の発酵成分を含む生菌製剤の原料比を表１に示す。
製造方法は表１中の１の成分を発酵機に投入し、発酵させた後、２の成分を追加することによって製造することができる。
The viable cell preparation containing the fermentation component of Bacillus subtilis according to the present invention will be described.
Table 1 shows the raw material ratio of the viable bacterial preparation containing the fermentation component of Bacillus subtilis according to the present invention.
The production method can be carried out by adding 1 component in Table 1 to a fermenter and fermenting it, and then adding 2 components.
本発明に係る枯草菌の発酵成分を含む生菌製剤として、ＴＯＰ ＢＩＯ（商品名 株式会社トーワ社製）を用いることもできる。 TOP BIO (trade name, manufactured by Towa Co., Ltd.) can also be used as a viable preparation containing the fermentation component of Bacillus subtilis according to the present invention.
本発明に係るプロポリスとは、セイヨウミツバチの巣の巣壁を構成する樹脂状ないしは蝋状の物質であって、ミツバチが周辺の植物から採取してきた樹脂や植物体とミツバチの分泌物の混合物である。
プロポリス中の有機成分としてはフラボノイドに含まれるフラボン（アピゲニン、クリシン、アカセチン）、フラボノール（ケムフェロール、ケルセチン、クェルシトリン）、フラバン（イソサクラネチン、ピノストロビン）、フェノール酸類に含まれるカフェ酸、桂皮酸、p−クマル酸、クマリン類に属するスコポレチン、エスケクレチン、芳香性アルデヒド類に含まれるバニリン、イソバニリン、酵素類に含まれるパロチン、抗腫瘍性物質に含まれるアルテピリンC、テルペノイドを挙げることができる。
The propolis according to the present invention is a resinous or waxy substance that constitutes the nest wall of a honeybee nest, and is a resin or a mixture of a plant body and a honeybee secretion collected by a honeybee. is there.
Organic components in propolis include flavones (apigenin, chrysin, acecetin) contained in flavonoids, flavonols (chemferol, quercetin, quercitrin), flavans (isosakuranetin, pinostrobin), caffeic acid contained in phenolic acids, cinnamic acid, p- Examples include coumaric acid, scopoletin belonging to coumarins, eskeletin, vanillin contained in aromatic aldehydes, isovanillin, parothin contained in enzymes, artepilin C contained in antitumor substances, and terpenoids.
本発明において使用されるプロポリスの産地は特に限定されないが、ブラジル産、中国産、日本産、オーストラリア産等のプロポリスが好適に用いられる。また、産地の異なるプロポリスを混合して用いることもできる。 Although the production area of the propolis used in the present invention is not particularly limited, propolis produced in Brazil, China, Japan, Australia, etc. is preferably used. In addition, propolis having different production areas can be used in combination.
本発明において枯草菌の発酵成分を含む生菌製剤とプロポリスとクエン酸の配合率は適宜変更することができるが、枯草菌の発酵成分を含む生菌製剤：プロポリス：クエン酸＝９８．９：１：０．１の割合で配合することが好ましい。
枯草菌の発酵成分を含む生菌製剤を配合することによりプロポリスとクエン酸の量を少量にしてもウイルス及び細菌の感染を防ぐことができる。
In the present invention, the ratio of viable preparation containing Bacillus subtilis fermentation component, propolis and citric acid can be changed as appropriate, but the viable preparation containing Bacillus subtilis fermentation component: propolis: citric acid = 98.9: It is preferable to mix | blend in the ratio of 1: 0.1.
By incorporating a viable preparation containing Bacillus subtilis fermentation components, virus and bacterial infection can be prevented even if the amount of propolis and citric acid is reduced.
本発明に係るクエン酸とはＣ６Ｈ８Ｏ７の化合物であり分子量は１９２である。化学式を以下に示す。 Citric acid according to the present invention is a compound of C 6 H 8 O 7 and has a molecular weight of 192. The chemical formula is shown below.
クエン酸は未熟のダイダイ、レモンに特に多く（６〜７％）、またスグリ、サトウダイコン、多くの花や植物の種子、果汁中に遊離の状態で含まれる物質である。 Citric acid is a particularly abundant (6-7%) in immature daidai and lemon, and is a free substance contained in currants, sugar beets, many flower and plant seeds, and fruit juice.
本発明が不活化するウイルスはＤＮＡウイルス、ＲＮＡウイルス等限定されないが、特にＲＮＡウイルスに属する鳥インフルエンザウイルスに好適に用いることができる。 Viruses inactivated by the present invention are not limited to DNA viruses, RNA viruses, and the like, but can be suitably used particularly for avian influenza viruses belonging to RNA viruses.
本発明が有効な鳥インフルエンザウイルスとしては限定がないが、ＨＡ（ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）の抗原サブタイプ１〜１５のいずれか１種と、ＮＡ（ｎｅｕｒａｍｉｎｄｉａｓｅ）の抗原サブタイプ１〜９のいずれか１種とを有するものを例示することができる。特に高病原性鳥インフルエンザウイルスであるＨ５Ｎ１型に好適に用いることができる。 Although there is no limitation as an avian influenza virus in which the present invention is effective, any one of antigen subtypes 1 to 15 of HA (hemagglutinin) and any one of antigen subtypes 1 to 9 of NA (neuramindiase) The thing which has can be illustrated. Particularly, it can be suitably used for H5N1 type which is a highly pathogenic avian influenza virus.
本発明が不活化することができる菌はグラム陽性菌、グラム陰性菌、好気性菌、嫌気性菌など、限定されないが、特にウェルシュ菌及び大腸菌に好適に用いられる。 Bacteria that can be inactivated by the present invention include, but are not limited to, Gram positive bacteria, Gram negative bacteria, aerobic bacteria, and anaerobic bacteria, but are particularly preferably used for Clostridium perfringens and Escherichia coli.
本発明に係る飼料は通常の飼料と同様の方法にて鳥類に与えることができる。 The feed according to the present invention can be given to birds in the same manner as normal feed.
以下実施例に基づき本発明を詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
本実施例では枯草菌の発酵成分を含む生菌製剤としてＴＯＰ ＢＩＯ（商品名 株式会社トーワ社製）を用いた。
EXAMPLES Hereinafter, although this invention is demonstrated in detail based on an Example, this invention is not limited to a following example.
In this example, TOP BIO (trade name, manufactured by Towa Co., Ltd.) was used as a viable bacterial preparation containing Bacillus subtilis fermentation components.
（実施例１：本発明に係る不活化剤のウイルス及び菌の不活化効果について）
（鳥インフルエンザウイルス不活化効果について）
コントロール群、プロポリス群、クエン酸群、ＴＯＰ ＢＩＯ＋プロポリス＋クエン酸配合群の４つのグループに分け、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて鳥インフルエンザウイルス（Ｈ５Ｎ１）の消失率を測定した。
(Example 1: Inactivation effect of virus and fungus of inactivation agent according to the present invention)
(About inactivation effect of avian influenza virus)
The group was divided into four groups: a control group, a propolis group, a citric acid group, and a TOP BIO + propolis + citric acid combination group, and the disappearance rate of avian influenza virus (H5N1) was measured in vitro.
鳥インフルエンザウィルス（Ｈ５Ｎ１）はDepartment of Biological Science, Sungkyunkwan University, Koreaから入手した。
鳥インフルエンザウイルス（Ｈ５Ｎ１）の消失率は電子顕微鏡により細胞カウンターを用いて計測した。
Avian influenza virus (H5N1) was obtained from Department of Biological Science, Sungkyunkwan University, Korea.
The disappearance rate of the avian influenza virus (H5N1) was measured with an electron microscope using a cell counter.
結果を表２に示す。
表２より、コントロールでは鳥インフルエンザウイルス（Ｈ５Ｎ１）の消失率が０パーセントであったのに対して、ＴＯＰ ＢＩＯ＋プロポリス＋クエン酸配合群（ｍｉｘと称する）では、８８．５７％と高い抗ウイルス作用を示すことが確認された。
The results are shown in Table 2.
From Table 2, the disappearance rate of the avian influenza virus (H5N1) was 0% in the control, whereas in the TOP BIO + propolis + citric acid combination group (referred to as mix), the antiviral action was as high as 88.57%. It was confirmed that
（鳥インフルエンザウイルス感染に対する予防効果について）
隔離された養鶏場にて、ニワトリをコントロール群、プロポリス群、クエン酸群、Ｔｏｐ Ｂｉｏ＋プロポリス＋クエン酸配合群の４つのグループに分け、２ヶ月以上それぞれの飼料を摂取させた後、鳥インフルエンザウィルス（Ｈ５Ｎ１）を感染させ、その後感染率を調べた。結果を表３に示す。この結果よりコントロール群に比べてＴＯＰ ＢＩＯ＋プロポリス＋クエン酸配合群の飼料を摂取したニワトリの感染率は有意に低い値であることが確認された。
(About preventive effect against avian influenza virus infection)
In an isolated chicken farm, chickens were divided into four groups: control group, propolis group, citric acid group, Top Bio + propolis + citric acid combination group, and after feeding each feed for more than 2 months, avian influenza virus (H5N1) was infected, and then the infection rate was examined. The results are shown in Table 3. From this result, it was confirmed that the infection rate of chickens ingesting the feed of the TOP BIO + propolis + citric acid combination group was significantly lower than that in the control group.
（細菌類の不活化効果について）
＜寒天平板反転法による細菌成育抑制作用の測定＞
ウェルシュ菌の遊走能抑制のため寒天濃度を３％に調整し、コントロール、プロポリスのみ、クエン酸のみ、ＴＯＰ ＢＩＯ＋プロポリス＋クエン酸を夫々配合したＭｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎ寒天培地（日本ベクトン・ディッキンソン社）を作製した。ウェルシュ菌、グラム陽性菌及び大腸菌を夫々の寒天培地に白金耳で画線塗抹して、好気的条件下で３５℃、２４時間培養した。その後、寒天を、スパーテルを用いて無菌的に裏返し、ウェルシュ菌、グラム陽性菌及び大腸菌を画線塗抹して、さらに３５℃で２４時間〜４８時間培養し、ウェルシュ菌、グラム陽性菌及び大腸菌の発育阻止直径を測定した。ここでは便宜的に、夫々の菌との交点付近において菌が寸断なく発育したもの、および菌の発育が1コロニーも認められない部分が１０ｍｍ未満のものを発育抑制作用（−）とし、発育阻止直径が１０ｍｍ以上のものを発育抑制作用（＋）の菌株とした。また、２４時間、４８時間培養での比較も行った。
菌の消失率はバイオ専用顕微鏡を用いて計測した。
(About inactivation effect of bacteria)
<Measurement of bacterial growth inhibition by agar plate inversion method>
Adjust the agar concentration to 3% to suppress the ability of C. perfringens to prepare Mueller-Hinton agar medium (Nippon Becton Dickinson) containing control, propolis only, citric acid only, TOP BIO + propolis + citric acid. did. C. perfringens, Gram-positive bacteria and E. coli were streaked on each agar medium with a platinum loop and cultured at 35 ° C. for 24 hours under aerobic conditions. Thereafter, the agar is aseptically turned over using a spatula, smeared with C. perfringens, Gram-positive bacteria and E. coli, and further cultured at 35 ° C. for 24 to 48 hours. Growth inhibition diameter was measured. Here, for convenience, a growth inhibitory effect (-) is defined as one in which the fungus has grown without breakage near the intersection with each fungus and the portion in which no fungal growth is observed is less than 10 mm. A strain having a diameter of 10 mm or more was defined as a growth inhibitory (+) strain. In addition, comparisons were also made with 24-hour and 48-hour cultures.
The disappearance rate of the bacteria was measured using a bio-dedicated microscope.
結果を表４に示す。この結果よりコントロールに対してＴＯＰ ＢＩＯ＋プロポリス＋クエン酸を配合した培地に、ウェルシュ菌、グラム陽性菌、大腸菌の全てにおいて抗菌活性があることが示された。 The results are shown in Table 4. From this result, it was shown that the culture medium containing TOP BIO + propolis + citric acid has antibacterial activity in all of C. perfringens, Gram-positive bacteria, and E. coli.
＜寒天平板重層法による細菌類の生育抑制作用の測定＞
直径１５０ｍｍのＭｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎ寒天培地（日本ベクトン・ディッキンソン社）の表面にウェルシュ菌をＮＣＣＬ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ、米国臨床検査標準委員会)に準じた菌量（１０８ｃｆｕ／ｍｌ）を塗抹し２４時間３５℃で培養後、直径８５ｍｍの５％ヒツジ脱繊維素血液添加Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎ寒天培地を乗せ、その表面にウェルシュ菌をＮＣＣＬＳに準じた菌量を塗抹し、コントロール群、プロポリス群、クエン酸群、ＴＯＰ ＢＩＯ＋プロポリス＋クエン酸配合群の感受性ディスクを置いて２４時間３５℃で培養し、阻止円直径を測定した。
コントロールとして、菌類を塗抹していないＭｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎ寒天培地の上に５％ヒツジ脱繊維素血液添加Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎ 寒天培地を乗せ、ウェルシュ菌をＮＣＣＬＳに準じた菌量を塗抹し、感受性ディスクを置いて阻止円直径を測定した。
ウェルシュ菌と同様の方法により、グラム陽性菌、大腸菌についても阻止円直径を測定した。
阻止円直径の統計学的有意差の検定は、Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定を用いた。
菌の消失率はバイオ専用顕微鏡を用いて計測した。
<Measurement of bacterial growth inhibition by agar plate overlay method>
Welsh bacteria on the surface of Mueller-Hinton agar medium (Nippon Becton Dickinson) with a diameter of 150 mm was applied to the amount of bacteria (10 8 cfu / ml) according to NCCL (National Committee for Clinical Laboratory Standards, US Clinical Laboratory Standards Committee). After smearing and culturing at 35 ° C. for 24 hours, put Mueller-Hinton agar medium with 5% sheep defibrinated blood with a diameter of 85 mm, smear the amount of C. perfringens according to NCCLS on the surface, control group, propolis group The sensitive disc of the citric acid group, TOP BIO + propolis + citric acid combination group was placed and cultured at 35 ° C. for 24 hours, and the inhibition circle diameter was measured.
As a control, a Mueller-Hinton agar medium supplemented with 5% sheep defibrinated blood is placed on a Mueller-Hinton agar medium that is not smeared with fungi, and the amount of B. perfringens is smeared according to NCCLS, and a sensitive disk is placed. The inhibition circle diameter was measured.
The inhibition circle diameter was also measured for Gram-positive bacteria and E. coli by the same method as for C. perfringens.
The Wilcoxon test was used to test the statistical significance of the diameter of the inhibition circle.
The disappearance rate of the bacteria was measured using a bio-dedicated microscope.
結果を表５に示す。この結果よりコントロールに対してＴＯＰ ＢＩＯ＋プロポリス＋クエン酸を配合した感受性ディスクにウェルシュ菌、グラム陽性菌、大腸菌の全てにおいて抗菌活性があることが示された。 The results are shown in Table 5. From this result, it was shown that the sensitive disk containing TOP BIO + propolis + citric acid has antibacterial activity in all of C. perfringens, Gram-positive bacteria, and E. coli.
（実施例２：本発明に係る飼料の免疫賦活作用について）
本発明に係るＴＯＰ ＢＩＯにプロポリスとクエン酸を配合した飼料のｉｎ ｖｉｖｏでの免疫効果について検討した。
免疫効果を考える上で、指標となるものの一つに血球細胞がある。造血組織や末梢血球細胞のリンパ球は放射線感受性が高くまた、白血球や骨髄細胞の減少によって引き起こされる免疫力の低下は顕著である。従って免疫低下が血球細胞に及ぼす影響を正確に把握することが重要となる。
このことから本研究では、ＴＯＰ ＢＩＯにプロポリスとクエン酸を配合した飼料の抗酸化作用、免疫賦活作用に着目し、末梢血液中の血球数への影響を調べると共にＴリンパ球のサブセットおよび抗酸化作用の測定を行い、免疫増強のメカニズムを検討した。
(Example 2: About the immunostimulatory effect of the feed according to the present invention)
The immune effect in vivo of the feed which mix | blended propolis and a citric acid with TOP BIO which concerns on this invention was examined.
One of the indicators for considering the immune effect is blood cells. Hematopoietic tissue and lymphocytes of peripheral blood cells are highly radiosensitive, and the decrease in immunity caused by the decrease in white blood cells and bone marrow cells is significant. Therefore, it is important to accurately grasp the effect of decreased immunity on blood cells.
Therefore, in this study, we focused on the antioxidant and immunostimulatory effects of feed containing propolis and citric acid in TOP BIO, and examined the effect on blood count in peripheral blood, as well as subsets of T lymphocytes and antioxidants. We measured the effect and examined the mechanism of immune enhancement.
（実験材料）
実験動物には、ＩＣＲマウス雄５週齢（日本クレア株式会社、東京）を用いた。１１日の予備飼育後、実験を開始した。その後、コントロール群、Ｘ線２Ｇｙ照射群、ＴＯＰ ＢＩＯ＋プロポリス＋クエン酸配合群投与群(以下ｍｉｘ群と称する)、ＴＯＰ ＢＩＯ＋プロポリス+クエン酸配合群投与＋Ｘ線２Ｇｙ照射群(以下ｍｉｘ+２Ｇｙ照射群と称する)の計４群に分類した。
(Experimental material)
As the experimental animal,
（投与方法）
ＴＯＰ ＢＩＯ＋プロポリス+クエン酸の混合比が、９８．９：１：０．１の混合物を濃度５００ｍｇ/ｋｇで、ｍｉｘ群、ｍｉｘ＋２Ｇｙ照射群に毎日胃ゾンデ法により強制経口投与した。
コントロール群、２Ｇｙ単独照射群には同量の蒸留水をｍｉｘ群、ｍｉｘ＋２Ｇｙ照射群と同様に投与を行った。
投与量は体重変化により、変化するので３日おきに体重測定を行い、体重に適した量のＴＯＰ ＢＩＯにプロポリスとクエン酸を混合した混合物または蒸留水を投与した。
(Method of administration)
A mixture of TOP BIO + propolis + citric acid with a mixing ratio of 98.9: 1: 0.1 was orally administered by gavage to the mix group and the mix + 2Gy irradiation group every day by the stomach tube method at a concentration of 500 mg / kg.
The same amount of distilled water was administered to the control group and the 2Gy single irradiation group in the same manner as the mix group and the mix + 2Gy irradiation group.
Since the dose varied with changes in body weight, body weight was measured every 3 days, and a mixture of propolis and citric acid or distilled water was administered to TOP BIO in an amount suitable for body weight.
（照射方法）
投与開始２週間後、照射群に、フィリップスＸ線照射装置(２２５ｋＶ)を用いて、２Ｇｙ線量率(０．３５Ｇｙ/ｍｉｎ)で、全身照射を行った。
(Irradiation method)
Two weeks after the start of administration, whole body irradiation was performed on the irradiation group at a 2 Gy dose rate (0.35 Gy / min) using a Philips X-ray irradiation apparatus (225 kV).
（血球数測定）
尾静脈採血については、スピッツメスを用いて固定したマウスの尾静脈を切開して１０μｌ Ｃａｌｉｂｒａｔｅｄ Ｐｉｐｅｔｓ （Ｄｏｒａｍｏｎｄ製)にて採血を行い、自動血球測定器（Ｃｅｌｌｔａｃ−α ＭＥＫ−６３１８、日本光電社製）を用い、血球数の測定を行った。測定は、経時的変化を観測するために、非照射群については、投与前、投与開始２，４，６，８週後に行い、照射群については照射前日、照射３，１２，２４時間後、３，７，１４，３０日後に行った。
(Blood cell count)
For tail vein blood collection, the tail vein of a mouse fixed with a Spitz knife was dissected and blood was collected with 10 μl Calibrated Pipes (manufactured by Dorammond), and an automatic hemocytometer (Celltac-α MEK-6318, manufactured by Nihon Kohden) ) Was used to measure the blood cell count. In order to observe changes with time, the non-irradiated group was measured before administration, 2, 4, 6, and 8 weeks after the start of administration. This was done after 3, 7, 14, 30 days.
（結果）
＜白血球数の変化＞
白血球数の変化を図１に示した。この結果より、コントロール群と比べてｍｉｘ群は４週目に白血球が有意な差をもって増加することが確認された。
(result)
<Change in white blood cell count>
The change in white blood cell count is shown in FIG. From this result, it was confirmed that leukocytes increased with a significant difference in the 4th week in the mix group compared to the control group.
＜リンパ球数の変化＞
リンパ球数の変化を図２に示した。この結果より、コントロール群と比べてｍｉｘ群は４週目にリンパ球が有意な差を持って増加することが確認された。
<Changes in lymphocyte count>
The change in lymphocyte count is shown in FIG. From this result, it was confirmed that lymphocytes increased with a significant difference at 4 weeks in the mix group compared to the control group.
＜単球数の変化＞
単球数の変化を図３に示した。この結果よりコントロール群と比べて、ｍｉｘ群は６週目に単球数が上昇することが確認された。
<Changes in the number of monocytes>
The change in the number of monocytes is shown in FIG. From this result, it was confirmed that the number of monocytes increased in the 6th week compared to the control group.
＜ＣＤ４、ＣＤ８、ＮＫ細胞（ＣＤ１６）数の変化＞
非照射群のＣＤ４、ＣＤ８、ＮＫ細胞（ＣＤ１６）数の投与４週間後の測定結果を表６に示した。この結果より、コントロール群に比べてｍｉｘ群のＣＤ４、ＣＤ８、ＮＫ細胞（ＣＤ１６）数の上昇が確認された。
<Changes in the number of CD4, CD8 and NK cells (CD16)>
Table 6 shows the measurement results of the number of CD4, CD8 and NK cells (CD16) in the
（実施例３：本発明に係る飼料の抗酸化作用について）
＜ＳＯＤ様活性測定＞
スーパーオキシドディスムターゼ（ＳＯＤ）は活性酸素を除去する酵素であり、本発明に係るＴＯＰ ＢＩＯにクエン酸とプロポリスを混合した混合物のＳＯＤ様活性を測定した。ＳＯＤ様活性測定には、ＳＯＤテストワコー（和光純薬工業株式会社製）を用いた。測定原理としては、キサンチン（ＸＡ）にキサンチンオキシダーゼ（ＸＯＤ）が作用するとＯ２ −ラジカルが生成する。生成したＯ２ −ラジカルは共存するＮＯ２−ＴＢとの反応に基づくジホルマザン形成の減少の程度を、阻害率として求めることにより、試料中のＳＯＤ活性値を求める。
(Example 3: Antioxidation effect of feed according to the present invention)
<SOD-like activity measurement>
Superoxide dismutase (SOD) is an enzyme that removes active oxygen, and SOD-like activity of a mixture of TOP BIO according to the present invention mixed with citric acid and propolis was measured. For the SOD-like activity measurement, SOD Test Wako (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) was used. The measurement principle, O 2 when xanthine (XA) to xanthine oxidase (XOD) acts - radicals are generated. The resulting O 2 - radicals the degree of reduction of diformazan formation based on the reaction of NO 2 -TB coexisting, by determining the percentage inhibition obtained SOD activity values in the sample.
マウスの眼底よりヘマトクリット毛細管を用いて採血した血液を、キャピタリー遠心分離機にかけて血清を分離した。得られた血清８μＬに発光試薬８０μＬと酵素液８０μＬを加え３７℃で２０分間加温した。その後、反応停止液１．６ｍＬを加えＭＵＬＴＩＳＫＡＮ ＪＸ（Ｔｈｅｒｍｏ社製）により吸光度を測定し、ＳＯＤ活性値（阻害率％）を求めた。 Serum was separated from blood collected from the fundus of the mouse using a hematocrit capillary tube through a capital centrifuge. To 8 μL of the obtained serum, 80 μL of a luminescent reagent and 80 μL of enzyme solution were added and heated at 37 ° C. for 20 minutes. Thereafter, 1.6 mL of the reaction stop solution was added, and the absorbance was measured by MULTISKAN JX (Thermo) to determine the SOD activity value (inhibition rate%).
結果を図４に示す。この結果よりコントロールに比べてｍｉｘ群の方がＳＯＤ様活性が高く、抗酸化作用があることが確認された。 The results are shown in FIG. From this result, it was confirmed that the mix group had higher SOD-like activity and antioxidative action than the control.
本発明は枯草菌の発酵成分を含む生菌製剤とクエン酸とプロポリスとが配合されたウイルス及び細菌の不活化剤からなる飼料を鳥に与えることにより、該飼料自体の抗ウイルス及び抗菌効果によりウイルス及び細菌を不活化するとともに、該飼料を与えた鳥の免疫力を賦活化することによって鳥のウイルス及び細菌に対する抵抗性を高めることにより、家禽類を含む鳥類のウイルス感染及び細菌感染を簡便に防止することができる。 The present invention provides a bird with a live bacteria preparation containing a fermentation component of Bacillus subtilis, a virus containing a citric acid and a propolis, and a bacteria inactivator, thereby providing an antiviral and antibacterial effect of the feed itself. In addition to inactivating viruses and bacteria, and increasing the resistance of birds and viruses by stimulating the immunity of birds fed with the feed, it can simplify virus and bacterial infections in birds, including poultry Can be prevented.
Claims (6)
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2010076260A JP2011205952A (en) | 2010-03-29 | 2010-03-29 | Deactivator for virus and bacterium, and feed for fowl comprising the same |
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| JP2010076260A JP2011205952A (en) | 2010-03-29 | 2010-03-29 | Deactivator for virus and bacterium, and feed for fowl comprising the same |
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| JP2011205952A true JP2011205952A (en) | 2011-10-20 |
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ID=44937791
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| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2011205952A (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102641473A (en) * | 2012-05-03 | 2012-08-22 | 青岛绿曼生物工程有限公司 | Compound propolis composition for curing chicken infectivity coryza and preparation method thereof |
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2010
- 2010-03-29 JP JP2010076260A patent/JP2011205952A/en active Pending
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