JP2010531976A - 酸化還元メディエーター - Google Patents

Abstract

本発明は、化学式[Ｍ（Ａ）_ｗ（Ｂ）_ｘ（Ｃ）_ｙ]^ｍ（Ｘ^ｚ）_ｎからなるルテニウム及びオスミウムの複合体自体、並びに、電気化学バイオセンサにおける酸化還元メディエーターとしての前記化学式からなるルテニウム及びオスミウムの複合体の使用に関する。

Description

本発明は、新規のルテニウム・オスミウムの複合体、酸化還元メディエーターとしての、又は、バイオセンサにおけるルテニウム・オスミウムの複合体の使用に関する。特に、本発明は、酸化還元メディエーターとして、ルテニウム（ＩＩＩ）状態において３＋未満の全電荷をルテニウム含有種に対して有したルテニウム複合体の使用に関する。

バイオセンサは、生化学的認識成分又はセンシング要素を物理的トランスデューサと組み合わせた分析用ツールである。バイオセンサは、パーソナルヘルスモニタリング、環境スクリーニング及びモニタリング、バイオプロセスモニタリング等さまざまな分野において、並びに、食品飲料産業内で幅広い用途を有している。バイオセンサは、分布された測定の便利さ及び設備、すなわち、関心点、又は、ポイントオブケアに対してアッセイをするという潜在能力を提供する。適切に設計され製造されたバイオセンサは、好都合に大量生産することができる。

生物学的なセンシング要素は、酵素、抗体、ＤＮＡ配列、又は、（例えば）反応を選択的に触媒するか、若しくは、結合事象を促進するのに役立つ微生物であり得る。選択性は、複合の試料マトリックス（例えば体液）におけるバイオセンサの作動を可能にする。トランスデューサは、生化学事象を測定可能な信号に変え、その結果、その事象を検出する手段を提供する。測定可能な信号は、酵素反応の産物若しくは基質の産生若しくは消費により生じたスペクトルの変化又は生化学的複合体形成と付随する質量変化であり得る。トランスデューサは、光吸収、蛍光、又は、屈折率を測定するよう光学ベースであり得る。トランスデューサは、結合反応に付随して起こる質量の変化を測定するよう質量ベースであり得る。トランスデューサは、エンタルピー（熱）又はアンペロメトリーの変化を測定するよう熱ベースであり得る。トランスデューサは、分析物／バイオ認識層の相互作用に付随して起こる電気特性の変化を測定するようインピーダンスベースであり得る。

酵素ベースのバイオセンサが、臨床、環境、農業、及び、バイオ技術の分野における分析物の検出に広く使用されている。それらのバイオセンサは、特異性、感受性を提供し、穏やかな状況下で作動する。ヒトの体液における臨床アッセイにおいて測定することができる分析物は、（例えば）グルコース、ラクテート、コレステロール、ビリルビン、及び、アミノ酸を含む。（血液等の）生体液におけるこれらの分析物のレベルは、疾患の診断及びモニタリングにとって重要である。しかし、ファウラント及び干渉に対するトランスデューサの脆弱性を含むバイオセンサの使用に付随して欠点が存在する。

一般的に酵素ベースのシステムを利用するセンサは、ポイントオブケアの装置、又は、店頭販売される装置として提供される。全コレステロール、トリグリセリド、ＨＤＬ及びＬＤＬの濃度を（例えば）装置に試料を添加して１から５分以内に決定するために、それらのセンサを使用して、新鮮且つ未改変の全血指先穿刺試料を検査することができる。組み合わされたこれら４つのパラメータは、成人における心疾患のリスクに対して非常に優れた指標を与えるよう臨床的に証明してきた。高コレステロールが無症候性であることは周知で、成人はそれらのリスクを評価するよう検査するべきであるということが勧められる。それらのリスクが高いと判った場合、正しい食事管理のみによって、又は、治療薬の投与と組み合わせてそのリスクを有意に減らすことができる。

電気化学アッセイは、一般的に、少なくとも１つの測定電極若しくは作用電極及び１つの参照電極を含む２又は３個の電極を有した電池において行われる。３電極型において、第３の電極は対電極である。２電極型では、参照電極が対電極としても役に立つ。前記電極は、ポテンシオスタット等の回路を介して接続される。測定又は作用電極は、炭素又は金属の伝導体若しくは半導体である。

酵素ベースのバイオセンサの例において、分析物を検出するために電気化学アッセイが利用されている。その分析物と反応した酵素と相互作用するメディエーターの酸化状態における変化が使用される。メディエーターの酸化状態は、基質の追加後に酵素と相互作用するよう選ばれる。分析物は、酵素を介してメディエーターの化学量論濃度と反応する。これにより、メディエーターは（酵素反応に応じて）酸化又は還元され、この変化は、所与の電位で生じた電流を決定することによって、又は、所与の電流における電位を決定することによって測定することができる。

酵素ベースのバイオセンサのさらなる例において、作用電極まで通過した十分に大きな電圧により、酸化還元酵素は電気酸化又は電気還元される。酵素は、検出されることになる分析物、又は、分析物の産物に特異的である。酵素の代謝回転速度は、一般的に、検査液における分析物自体の濃度に、又は、その産物に（例えば直線的に）関連する。

酵素の電気酸化又は電気還元は、液体内又は電極上の酸化還元メディエーターの存在により促進されることが多い。酸化還元メディエーターは、一般的に、作用電極と酵素との電気通信に寄与する。酸化還元メディエーターは、電極と電解接触している分析されることになる流体に溶解することができる。有用な装置は、（例えば）酸化還元メディエーターを含むフィルム、及び、所望の分析物又はその産物に対して触媒的に特異的な酵素で電極を被覆することによって作製することができる。水に可溶性か又は不溶性であり得る拡散性の酸化還元メディエーターは、（例えば）酵素と電極との間で電子をシャトルすることによって機能する。酵素の基質が電気酸化された場合、酸化還元メディエーターは、基質により還元された酵素から電極まで電子を運ぶ。基質が電気還元された場合、酸化還元メディエーターは、電極から基質により酸化された酵素まで電子を運ぶ。

従来の酵素ベースの電気化学センサは、単量体のフェロセン、（例えばベンゾキノン等のキニーネ等）キノイド化合物、ニッケルシクラメート、及び、ルテニウムアミンを含む多くの酸化還元メディエーターを利用してきた。大部分に対して、これらの酸化還元メディエーターは、以下の：
検査液における酸化還元メディエーターの溶解性が低い、
酸化還元メディエーターの化学安定性、光安定性、熱安定性、又は、ｐＨ安定性が乏しい、
酸化還元メディエーターが、酵素若しくは電極、又は、その両方と十分な速度で電子を交換しない、
という制限のうち１又は複数の制限を有している。

さらに、これら酸化還元メディエーターのうち多くの酸化電位は非常に高いので、還元されたメディエーターが電極上で電気酸化される電位で、分析物以外の溶液の成分も電気酸化される。他の場合において、還元電位は非常に低いので、（例えば溶存酸素等の）溶液の成分も急速に電気還元される。結果として、前記メディエーターを利用するセンサは、十分に特異的ではない。

ルテニウムベースの複合体は、（例えば）コレステロール脱水素酵素を有する反応における酸化還元メディエーターとして以前から利用されてきた。例えば、[Ｒｕ^ＩＩ（ＮＨ_３）_６]^２＋の種は、適した電位で平衡を保った電極において[Ｒｕ^ＩＩＩ（ＮＨ_３）_６]^３＋に変わる。電流は、酵素反応を介して形成された[Ｒｕ^ＩＩ（ＮＨ_３）_６]^２＋の種の量に比例する。しかし、[Ｒｕ^ＩＩＩ（ＮＨ_３）_６]^３＋等の非常に荷電した種は、通常、酵素及び電極の表面上で負の電荷を持つグループとイオン対の形状にある複合体を（より多いかより少ない程度に）形成する。これは、分析工程に必要な反応の効果的且つ能率的発生を妨げる。

従って、測定された応答がより信頼できて安定しており、且つ、再生可能であるように、分析用混合物の成分を用いてより弱い複合体を形成するか、又は、何も形成しない酸化還元メディエーター、及び、電極を利用することが所望される。

本発明の第一の態様によると、以下の化学式１

の複合体の使用が提供されており、
Ｍは、ルテニウム又はオスミウムであり、０、１、２、３、又は４の酸化状態を有し；
ｗ、ｘ、及びｙのそれぞれは、整数１乃至４から独立して選択される整数であり；
ｍは、整数−５乃至＋４から選択される整数であり；
ｎは、整数１乃至５から選択される整数であり；
ｚは、整数−２乃至＋１から選択される整数であり；
Ａは、任意選択で１乃至８個の置換基によって置換される窒素原子を１、２、又は３個有する５−又は６−員芳香環の単座配位子であり、前記置換基のそれぞれが、置換型若しくは非置換型のアルキル、アルケニル、又はアリール基、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＯ_２、−ＣＮ、−ＣＯ_２Ｈ、−ＳＯ_３Ｈ、−ＮＨＮＨ_２、−ＳＨ、アリール、アルコキシカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、−ＯＨ、アルコキシ、−ＮＨ_２、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルカノイルアミノ、アリールカルボキシアミド、ヒドラジノ、アルキルヒドラジノ、ヒドロキシルアミノ、アルコキシアミノ、及び、アルキルチオからなる群から選択されるか、又は、ＡはＮＣＳであり；
Ｂは、化学式Ｒ^１ＲＮ（Ｃ_２Ｈ_４ＮＲ）_ＷＲ^１を有した直鎖状の、又は、化学式（ＲＮＣ_２Ｈ_４）_ｖ、（ＲＮＣ_２Ｈ_４）_ｐ（ＲＮＣ_３Ｈ_６）_ｑ、若しくは、[（ＲＮＣ_２Ｈ_４）（ＲＮＣ_３Ｈ_６）]_ｓを有した環状の二座、三座、四座、五座、又は六座の配位子であって、
ｗは、整数１乃至５から選択される整数であり、
ｖは、整数３乃至６から選択される整数であり、
ｐ及びｑのそれぞれは、整数１乃至３から独立して選択される整数であり、それによって、ｐとｑの和は４、５、又は６であり、
ｓは、２又は３のどちらかであり、さらに、
Ｒ及びＲ^１のそれぞれは、独立して水素又はアルキルであり；
Ｃは、Ｂ以外の配位子であり；かつ、
Ｘは、対イオンであり；
酸化還元メディエーターとしての［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ｐｙ）］（ＮＯ_３）_２を除いて、配位原子の数は６である。

本発明による使用の好ましい実施形態において、化学式１の複合体では：
Ａは、任意選択で１乃至８個の置換基によって置換される窒素原子を１、２、又は３個有する５−又は６−員芳香環の単座配位子であり、前記置換基のそれぞれが、置換型若しくは非置換型のアルキル、アルケニル、又はアリール基、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＯ_２、−ＣＮ、−ＣＯ_２Ｈ、−ＳＯ_３Ｈ、−ＮＨＮＨ_２、−ＳＨ、アリール、アルコキシカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、−ＯＨ、アルコキシ、−ＮＨ_２、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルカノイルアミノ、アリールカルボキシアミド、ヒドラジノ、アルキルヒドラジノ、ヒドロキシルアミノ、アルコキシアミノ、及び、アルキルチオからなる群から選択され；さらに、
Ｃは、Ａ又はＢ以外の配位子である。

化学式１の複合体における配位子Ａは、ＮＣＳ、イミダゾール、ピラゾール、チアゾール、オキサゾール、イソキノリン、置換ピリジル（例えば、３−及び／又は４−置換ピリジル）並びにそれらの異性体からなる群から選択することができる。

化学式１の複合体における配位子Ａは、イミダゾール、ピラゾール、チアゾール、オキサゾール、及びそれらの異性体からなる群から選択することができる。

化学式１の複合体における配位子Ａは、３個の窒素ヘテロ原子を有する５−又は６−員芳香環の配位子であるか、又は、該配位子を含む場合がある。化学式１の複合体における配位子Ａは、トリアジン又はトリアゾールであることが好ましい。

化学式１の複合体における配位子Ａは、グアニン又はアデニンであり得る。

化学式１の複合体における配位子Ａは、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_１−Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、ハロゲン、カルボキシ、アミノ、Ｃ_１−６アルキルアミノ、Ｃ_１−６ジアルキルアミノ、及び、ヒドロキシルからなる群から選択された１又は複数の置換基によって置換することができる。

化学式１の複合体における配位子Ａは、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_１−Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、及び、ハロゲンからなる群から選択された１又は複数の置換基によって置換することができる。好ましくは、化学式１の複合体における配位子Ａは、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル、メトキシ、エトキシ、エテニル、プロペニル、ブテニル、エチニル、及び、プロピニルからなる群から選択された１又は複数の置換基によって置換される。

化学式１の複合体における配位子Ｂは、化学式Ｒ^１ＲＮ（Ｃ_２Ｈ_４ＮＲ）_ｒＲ^１を有した直鎖状であり得るか、又は、化学式（ＲＮＣ_２Ｈ_４）_ｖ、（ＲＮＣ_２Ｈ_４）_ｐ（ＲＮＣ_３Ｈ_６）_ｑ、若しくは、[（ＲＮＣ_２Ｈ_４）（ＲＮＣ_３Ｈ_６）]_ｓを有した環状であり得る二座、三座、又は四座の配位子であって、ｒは整数１乃至３から選択される整数であり、ｖは３又は４であり、ｐ及びｑのそれぞれは、整数１乃至３から独立して選択される整数であり、それによって、ｐとｑの和は４であり、さらに、ｓは２又は３であり得る。

好ましくは、化学式１の複合体における配位子Ｂは、化学式（ＲＮＣ_２Ｈ_４）_ｖを有した環状の三座又は四座の配位子であって、ｖは３又は４である。

化学式１の複合体における配位子Ｂは、１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン、１，４，８，１１−テトラメチル−１，４，８，１１−テトラ−アザシクロテトラデカン、１，１，４，７，１０，１０−ヘキサメチルトリエチレンテトラミン、１，２−ジメチルエチレンジアミン、又は、１，１，２，２−テトラメチルエチレンジアミンであり得る。

化学式１の複合体における配位子Ｂは、１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン、１，１，４，７，１０，１０−ヘキサメチルトリエチレンテトラミン、１，２−ジメチルエチレンジアミン、又は、１，１，２，２−テトラメチルエチレンジアミンであり得る。

化学式１の複合体における好ましい配位子Ｂは、１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナンである。

化学式１の複合体における配位子Ｃは、アミン配位子（ＮＨ_３等）、ＣＯ、ＣＮ、ＮＣＳ、ハロゲン、アセチルアセトネート（ａｃａｃ）、３−ブロモ−アセチルアセトネート（Ｂｒａｃａｃ）、オキサレート、トロポロン、ピリジン、及び、５−クロロ−８−ヒドロキシキノリンからなる群から選択することができる。

化学式１の複合体における配位子Ｃは、アミン配位子（ＮＨ_３等）、ＣＯ、ＣＮ、ハロゲン、アセチルアセトネート（ａｃａｃ）、３−ブロモ−アセチルアセトネート（Ｂｒａｃａｃ）、オキサレート、ピリジン、及び、５−クロロ−８−ヒドロキシキノリンからなる群から選択することができる。

化学式１の複合体における好ましい配位子Ｃは、ａｃａｃである。

化学式１の複合体における配位子Ａ、Ｂ、及びＣは二座であり得る。化学式１の複合体の形状は、シス又はトランスであり得る。

化学式１の複合体における金属の酸化状態は、２＋、３＋、又は４＋であり得る。化学式１の複合体における金属の酸化状態は、好ましくは３＋である。

配位子Ａ、Ｂ、及びＣは、化学式１の複合体上の全電荷が＋３、＋２、＋１、０、−１、−２、及び−３からなる群から選択されるように選択することができる。

化学式１の複合体における対イオンＸは、Ｆ⁻、Ｃｌ⁻、Ｂｒ⁻、Ｉ⁻、ＮＯ_３ ⁻、ＮＨ_４ ^＋、ＮＲ_４ ^＋、ＰＦ_６ ⁻、ＣＦ_３ＳＯ_３ ⁻、ＳＯ_４ ^２−、ＣｌＯ_４ ⁻、Ｋ^＋、Ｎａ^＋、Ｌｉ^＋、又は、それらの組合せであり得る。

本発明による酸化還元メディエーターとして使用される化学式１の複合体は、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（Ｎ−メチルイミダゾール）］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（４−メチルピリジン）］Ｃｌ_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（３−クロロピリジン）］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（イソニコチンアミド）］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）ピラジン］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（4−メトキシピリジン）］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（４−ジメチルアミノピリジン）］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（４−ｔ−ブチル−ピリジン）］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（イソキノリン）］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（トロポロン）（ピリジン）］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（トロポロン）（４−ｔ−ブチル−ピリジン）］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（３，４−ジメチルピリジン）］（ＣＦ_３ＳＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（３−ヒドロキシピリジン）］（ＮＯ_３）_２、又は、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，８，１１−テトラメチル−１，４，８，１１−テトラ−アザシクロテトラデカン）（ＮＣＳ）_２］（ＣｌＯ_４）であり得る。

本発明による酸化還元メディエーターとして使用される化学式１の複合体は、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（Ｎ−メチルイミダゾール）］（ＰＦ_６）_２、又は、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（Ｎ−メチルイミダゾール）］（ＮＯ_３）_２であり得る。

化学式１の複合体は、電気化学センサにおいて、本発明による酸化還元メディエーターとして使用することができる。前記電気化学センサは、微小帯電極を含むことができる。電気化学センサは、電気化学バイオセンサであり得る。電気化学センサを使用して、体液、環境試料、食物、飲料、獣医学試料、又は、薬における分析物を検出することができる。

化学式１の複合体は、６から１０というｐＨ、好ましくは７から９というｐＨで、本発明による酸化還元メディエーターとして使用することができる。

本発明の第２の態様によると、上記のバイオセンサにおいて規定された化学式１のルテニウム複合体の使用が提供される。

当該バイオセンサは、融和性のある生化学的分析物と共に使用することができる。該分析物は、生体液に存在し得る。分析物は、酵素、酵素基質、抗原、抗体、核酸配列、コレステロール、コレステロールエステル、リポ蛋白質、トリグリセリド、及び、微生物からなる群から選択することができる。

上記の化学式１の複合体を、（例えば）４個の試薬ウェルを有したストリップ及び共通の疑似参照からなるバイオセンサにおいて使用することができる。各ウェルは、管状の微小帯作用電極を有することができる。前記ストリップのセンシング成分を、少なくとも１つの酵素、及び、各ウェル内の検査試料における特異的な分析物と相互作用する能力を持つメディエーターを含む特別に調合された異なる試薬を乾燥させることによって提供することができる。異なる試薬を各ウェルに添加して乾燥させることができるため、１つの検査試料を使用して、多数の分析物の検査を完了することが可能である。ウェルの数は変更可能なため、特有の検査の数も変更可能である。例えば、１から６個のウェルを有するセンサを使用することができる。

上記の化学式１の複合体を、（例えば）一般的に作用微小電極を有した従来の微小電極及び参照電極からなるバイオセンサにおいて使用することができる。作用電極は、パラジウム、白金、金、又は炭素から作製することができる。対電極は、一般的に、炭素、Ａｇ／ＡｇＣｌ、Ａｇ／Ａｇ_２ＳＯ_４、パラジウム、金、白金、Ｃｕ／ＣｕＳＯ_４、Ｈｇ／ＨｇＯ、Ｈｇ／ＨｇＣｌ_２、Ｈｇ／ＨｇＳＯ_４、又は、Ｚｎ／ＺｎＳＯ_４であり得る。好ましくは、前記作用電極は、微小電極を形成するレセプタクルの壁内にある。本発明において使用することができる微小電極の例は、国際公開ＷＯＡ０３／０９７８６０号に開示されている。

本発明の第３の態様によると、分析物を測定する検出システムが提供され、当該システムは、
（ａ）前記分析物を含有する試料を、上記の化学式１による酸化還元メディエーターを含有する溶液と接触させるステップ；
（ｂ）酵素を前記分析物に対して作用させる状況下で、前記接触させた試料をインキュベートするステップ；
（ｃ）ステップ（ｂ）のインキュベートした試料を、測定可能な信号において変化をもたらす状況にさらすステップ；及び
（ｄ）前記測定可能な信号を測定するステップ；
を含む。

前記測定可能な信号は、電気化学、比色定量、熱、インピーダンス、容量性、又は、分光器の信号であり得る。測定可能な信号は、微小帯電極で測定された電気化学信号であり得る。電気化学信号は、電流測定の検出方法において微小帯電極を使用して検出することができる。

本発明の第４の態様によると、以下の化学式２

による複合体が提供され、
Ｍは、ルテニウム又はオスミウムであり、０、１、２、３、又は４の酸化状態を有し；
ｗ、ｘ、及びｙのそれぞれは、整数１乃至４から独立して選択される整数であり；
ｍは、整数−５乃至＋４から選択される整数であり；
ｎは、整数１乃至５から選択される整数であり；
ｚは、整数−２乃至＋１から選択される整数であり；
Ａは、任意選択で１乃至８個の置換基によって置換される窒素原子を１、２、又は３個有する５−又は６−員芳香環の単座配位子であり、前記置換基のそれぞれが、置換型若しくは非置換型のアルキル、アルケニル、又はアリール基、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＯ_２、−ＣＮ、−ＣＯ_２Ｈ、−ＳＯ_３Ｈ、−ＮＨＮＨ_２、−ＳＨ、アリール、アルコキシカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、−ＯＨ、アルコキシ、−ＮＨ_２、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルカノイルアミノ、アリールカルボキシアミド、ヒドラジノ、アルキルヒドラジノ、ヒドロキシルアミノ、アルコキシアミノ、及び、アルキルチオからなる群から選択され；
Ｂは、化学式Ｒ^１ＲＮ（Ｃ_２Ｈ_４ＮＲ）_ＷＲ^１を有した直鎖状の、又は、化学式（ＲＮＣ_２Ｈ_４）_ｖ、（ＲＮＣ_２Ｈ_４）_ｐ（ＲＮＣ_３Ｈ_６）_ｑ、若しくは、[（ＲＮＣ_２Ｈ_４）（ＲＮＣ_３Ｈ_６）]_ｓを有した環状の二座、三座、四座、五座、又は六座の配位子であって、
ｗは、整数１乃至５から選択される整数であり、
ｖは、整数３乃至６から選択される整数であり、
ｐ及びｑのそれぞれは、整数１乃至３から独立して選択される整数であり、それによって、ｐとｑの和は４、５、又は６であり、
ｓは、２又は３のどちらかであり、さらに、
Ｒ及びＲ^１のそれぞれは、独立して水素又はアルキルであり；
Ｃは、Ａ又はＢ以外の配位子であり；かつ、
Ｘは、対イオンであり；
［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ｐｙ）］（ＮＯ_３）_２を除いて、配位原子の数は６である。

前記配位子Ａは、ＮＣＳ、イミダゾール、ピラゾール、チアゾール、オキサゾール、イソキノリン、置換ピリジル（例えば、３−及び／又は４−置換ピリジル）並びにそれらの異性体からなる群から選択することができる。

前記配位子Ａは、イミダゾール、ピラゾール、チアゾール、オキサゾール、及びそれらの異性体からなる群から選択することができる。

前記配位子Ａは、３個の窒素ヘテロ原子を有する５−又は６−員芳香環の配位子であるか、又は、該配位子を含む場合がある。前記配位子Ａは、トリアジン又はトリアゾールであることが好ましい。

前記配位子Ａは、グアニン又はアデニンであり得る。

前記配位子Ａは、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_１−Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、ハロゲン、カルボキシ、アミノ、Ｃ_１−６アルキルアミノ、Ｃ_１−６ジアルキルアミノ、及び、ヒドロキシルからなる群から選択された１又は複数の置換基によって置換することができる。

前記配位子Ａは、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_１−Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、及び、ハロゲンからなる群から選択された１又は複数の置換基によって置換することができる。好ましくは、前記配位子Ａは、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル、メトキシ、エトキシ、エテニル、プロペニル、ブテニル、エチニル、及び、プロピニルからなる群から選択された１又は複数の置換基によって置換される。

前記配位子Ｂは、化学式Ｒ^１ＲＮ（Ｃ_２Ｈ_４ＮＲ）_ｒＲ^１を有した直鎖状であり得るか、又は、化学式（ＲＮＣ_２Ｈ_４）_ｖ、（ＲＮＣ_２Ｈ_４）_ｐ（ＲＮＣ_３Ｈ_６）_ｑ、若しくは、[（ＲＮＣ_２Ｈ_４）（ＲＮＣ_３Ｈ_６）]_ｓを有した環状であり得る二座、三座、又は四座の配位子であって、ｒは整数１乃至３から選択される整数であり、ｖは３又は４であり、ｐ及びｑのそれぞれは、整数１乃至３から独立して選択される整数であり、それによって、ｐとｑの和は４であり、さらに、ｓは２又は３であり得る。

前記配位子Ｂは、化学式（ＲＮＣ_２Ｈ_４）_ｖを有した環状の三座又は四座の配位子であって、ｖは３又は４であることが好ましい。

前記配位子Ｂは、１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン、１，４，８，１１−テトラメチル−１，４，８，１１−テトラ−アザシクロテトラデカン、１，１，４，７，１０，１０−ヘキサメチルトリエチレンテトラミン、１，２−ジメチルエチレンジアミン、又は、１，１，２，２−テトラメチルエチレンジアミンであり得る。

前記配位子Ｂは、１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン、１，１，４，７，１０，１０−ヘキサメチルトリエチレンテトラミン、１，２−ジメチルエチレンジアミン、又は、１，１，２，２−テトラメチルエチレンジアミンであり得る。

好ましい配位子Ｂは、１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナンである。

前記配位子Ｃは、アミン配位子（ＮＨ_３又はＮＭｅ_３等）、ＣＯ、ＣＮ、ハロゲン、アセチルアセトネート（ａｃａｃ）、３−ブロモ−アセチルアセトネート（Ｂｒａｃａｃ）、オキサレート、トロポロン、１，４，７−トリエチレンクラウンエーテル、及び、５−クロロ−８−ヒドロキシキノリンからなる群から選択することができる。

好ましい配位子Ｃは、ａｃａｃである。

配位子Ａ、Ｂ、及びＣのそれぞれが二座である場合に、化学式２の複合体の形状は、シス又はトランスであり得る。

化学式２の複合体における金属の酸化状態は、２＋又は３＋であり得る。化学式２の複合体における金属の酸化状態は、好ましくは３＋である。

前記配位子Ａ及びＢは、化学式２の複合体上の全電荷が＋３、＋２、＋１、０、−１、−２、及び−３からなる群から選択されるように選択することができる。

前記対イオンＸは、Ｆ⁻、Ｃｌ⁻、Ｂｒ⁻、Ｉ⁻、ＮＯ_３ ⁻、ＮＨ_４ ^＋、ＮＲ_４ ^＋、ＰＦ_６ ⁻、ＣＦ_３ＳＯ_３ ⁻、ＳＯ_４ ^２−、ＣｌＯ_４ ⁻、Ｋ^＋、Ｎａ^＋、Ｌｉ^＋、又は、それらの組合せであり得る。

本発明の第４の態様において、化学式２の複合体は、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（Ｎ−メチルイミダゾール）］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（４−メチルピリジン）］Ｃｌ_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（３−クロロピリジン）］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（イソニコチンアミド）］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）ピラジン］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（4−メトキシピリジン）］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（４−ジメチルアミノピリジン）］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（４−ｔ−ブチル−ピリジン）］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（イソキノリン）］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（トロポロン）（ピリジン）］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（トロポロン）（４−ｔ−ブチル−ピリジン）］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（３，４−ジメチルピリジン）］（ＣＦ_３ＳＯ_３）_２、又は、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（３−ヒドロキシピリジン）］（ＮＯ_３）_２であり得る。

本発明の第４の態様において、化学式２の複合体は、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（Ｎ−メチルイミダゾール）］（ＰＦ_６）_２、又は、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（Ｎ−メチルイミダゾール）］（ＮＯ_３）_２であり得る。

化学式２の複合体において、前記金属は、所望によりルテニウム又はオスミウムであるよう選択することができる。ＲｕをＯｓに置換することにより、約＋４００ｍＶから＋６００ｍＶだけ複合体の作用電位が変わるということ、及び、メディエーターがＡｇ／ＡｇＣｌに対して−３００ｍＶから＋３００ｍＶという作用電気に達するまで金属の中心付近の前記配位子を変えることによって、前記作用電位をさらに（必要であれば逆方向に）微調整することができるということを当業者は正しく理解するであろう。

シミュレートした同位体パターンを有した、［Ｒｕ^ＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＰＦ_６）アセトンのＥＳＩ質量スペクトル（ポジティブモード）を示す図である。 １００ｍＶｓ^−１の走査速度で記録された、１０ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ_３）_２、０．１ＭのＫＣｌ、及び、０．１ＭのＴｒｉｓ緩衝剤（ｐＨ９．０）からなる溶液におけるスタンダードなＯｘｆｏｒｄ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップに対するサイクリックボルタンモグラムを示す図である。 ０．０３３ｍｇｍｌ^−１ＰｄＲの非存在下（黒）及び存在下（灰色）での、１ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ_３）_２及び１ｍＭのＮＡＤＨからなる溶液のＵＶ吸収分光学を示す図である。 ２．５ｍｇｍｌ^−１ＰｄＲを含有する１０ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ_３）_２溶液に対する酸化電流対ＮＡＤＨ濃度の較正プロットを示す図である。Ｇｅｎｅｒａｌ Ｐｕｒｐｏｓｅ Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍソフトウェア（Ｅｃｏ Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）によって制御される、マルチプレクサー（ＭＸ４５２ Ｓｔｅｒｎｈａｇｅｎ ｄｅｓｉｇｎ）に接続されたＡｕｔｏｌａｂ ＰＧＳＴＡＴ１２ポテンシオスタット／ガルバノスタット（Ｅｃｏ Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して、スタンダードなＯｘｆｏｒｄ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップ上の作用電極に対して＋０．１５Ｖ（ｖｓＡｇ／ＡｇＣｌ参照）という酸化電位が印加された後に電流を記録した。 ８０ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ_３）_２を含有する総コレステロールアッセイに対して記録された、血漿総コレステロール（ＴＣ）濃度対酸化電流を示す図である。 ８０ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ_３）_２を含有するトリグリセリドアッセイに対して記録された、血漿トリグリセリド（ＴＲＧ）濃度対酸化電流を示す図である。 ４０ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ_３）_２、６ｍｇｍｌ^−１のＴＮＡＤ、４ｍｇｍｌ^−１のＰｄＲ、２２ｍｇｍｌ^−１のコレステロール脱水素酵素、２３ｍｇｍｌ^−１のリパーゼ、２％ｗｔ／ｖのＢＳＡ、０．１Ｍのスクロースモノカプレート、及び、０．１Ｍのネオマイシンを含有するＨＤＬアッセイに対して記録された、血漿高密度リポ蛋白質（ＨＤＬ）濃度対酸化電流を示す図である。 ＣＨ_３ＣＮにおける［Ｒｕ^ＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ｐｙ）］ＰＦ_６のＥＳＩ質量スペクトル（ポジティブモード）を示す図である。 ［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ｐｙ）］（ＮＯ_３）_２メタノールのＥＳＩ質量スペクトル（ポジティブモード）を示す図である。 ミリＱ水にＮａＨ_２ＰＯ_４（０．００５Ｍ）／Ｎａ_２ＨＰＯ_４（０．０９４Ｍ）を含有する緩衝剤（ｐＨ＝８．０５）における［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ_３）_２のサイクリックボルタンモグラムを示す図である。作用電極としてガラス状炭素、対電極として白金線、参照電極としてＳＣＥを使用した。＋０．１８ＶｖｓＳＣＥで、Ｋ_３[Ｆｅ（ＣＮ）_６]を内標準として使用した。 １００ｍＶｓ^−１の走査速度で記録された、１０ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ｐｙ）］（ＮＯ_３）_２、０．１ＭのＫＣｌ、及び、０．１ＭのＴｒｉｓ緩衝剤（ｐＨ９．０）からなる溶液におけるスタンダードなＯｘｆｏｒｄ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップに対するサイクリックボルタンモグラムを示す図である。 ０．０３３ｍｇｍｌ^−１ＰｄＲの非存在下（黒）及び存在下（灰色）での、２ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ｐｙ）］（ＮＯ_３）_２及び５ｍＭのＮＡＤＨからなる溶液のＵＶ吸収分光学を示す図である。 １ｍｇｍｌ^−１ＰｄＲを含有する１０ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ｐｙ）］（ＮＯ_３）_２溶液に対する酸化電流対ＮＡＤＨ濃度の較正プロットを示す図である。Ｇｅｎｅｒａｌ Ｐｕｒｐｏｓｅ Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍソフトウェア（Ｅｃｏ Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）によって制御される、マルチプレクサー（ＭＸ４５２ Ｓｔｅｒｎｈａｇｅｎ ｄｅｓｉｇｎ）に接続されたＡｕｔｏｌａｂ ＰＧＳＴＡＴ１２ポテンシオスタット／ガルバノスタット（Ｅｃｏ Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して、スタンダードなＯｘｆｏｒｄ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップ上の作用電極に対して＋０．１５Ｖ（ｖｓＡｇ／ＡｇＣｌ参照）という酸化電位が印加された後に電流を記録した。 ５０ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ｐｙ）］（ＮＯ_３）_２、及び、ＴＲＩＳ ｐＨ９において３％ Ａｎａｍｅｇ−７、ＮＡＤ（９．６ｍｇ／ｍｌ）、ＰｄＲ（４．３ｍｇ／ｍｌ）、ＣｈＥ（３．３ｍｇ／ｍｌ）、ＣｈＤｈ（４２ｍｇ／ｍｌ）、Ａｎａｍｅｇ−７（３％）、ミオイノシトール（１５ｍｇ／ｍｌ）、エクトイン（１５ｍｇ／ｍｌ）を含有する総コレステロールセンサに対する酸化電流の血漿総コレステロール較正プロットを示す図である。Ｇｅｎｅｒａｌ Ｐｕｒｐｏｓｅ Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍソフトウェア（Ｅｃｏ Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）によって制御される、マルチプレクサー（ＭＸ４５２ Ｓｔｅｒｎｈａｇｅｎ ｄｅｓｉｇｎ）に接続されたＡｕｔｏｌａｂ ＰＧＳＴＡＴ１２ポテンシオスタット／ガルバノスタット（Ｅｃｏ Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して、スタンダードなＯｘｆｏｒｄ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップ上の作用電極に対して＋０．１５Ｖ（ｖｓＡｇ／ＡｇＣｌ参照）という酸化電位が印加された後に電流を記録した。 １００ｍＶｓ^−１の走査速度で記録された、１０ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（４−ＭｅＰｙ）］Ｃｌ_２、０．１ＭのＫＣｌ、及び、０．１ＭのＴｒｉｓ緩衝剤（ｐＨ９．０）からなる溶液におけるスタンダードなＯｘｆｏｒｄ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップに対するサイクリックボルタンモグラムを示す図である。 ０．０３３ｍｇｍｌ^−１ＰｄＲの非存在下（黒）及び存在下（灰色）での、１．２５ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（４−ＭｅＰｙ）］Ｃｌ_２及び１．２５ｍＭのＮＡＤＨからなる溶液のＵＶ吸収分光学を示す図である。 異なる凍結乾燥した血清試料に対する酸化電流対総コレステロール（ＴＣ）濃度の較正プロットを示す図である。Ｇｅｎｅｒａｌ Ｐｕｒｐｏｓｅ Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍソフトウェア（Ｅｃｏ Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）によって制御される、マルチプレクサー（ＭＸ４５２ Ｓｔｅｒｎｈａｇｅｎ ｄｅｓｉｇｎ）に接続されたＡｕｔｏｌａｂ ＰＧＳＴＡＴ１２ポテンシオスタット／ガルバノスタット（Ｅｃｏ Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して、スタンダードなＯｘｆｏｒｄ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップ上の作用電極に対して＋０．１５Ｖ（ｖｓＡｇ／ＡｇＣｌ参照）という酸化電位が印加された後に電流を記録した。 ［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３−Ｃｌｐｙ）］（ＮＯ_３）_２メタノールのＥＳＩ質量スペクトル（ポジティブモード）を示す図である（挿入図は拡大した同位体パターンを示す）。（ａ）[Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３−Ｃｌｐｙ）]^２＋の算出された同位体パターン、及び、（ｂ）[Ｒｕ^ＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３−Ｃｌｐｙ）]^＋の算出された同位体パターンを示す図である。 ミリＱ水にＮａＨ_２ＰＯ_４（０．００５Ｍ）／Ｎａ_２ＨＰＯ_４（０．０９４Ｍ）を含有する緩衝剤（ｐＨ＝８．２０）における［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３−Ｃｌｐｙ）］（ＮＯ_３）_２のサイクリックボルタンモグラムを示す図である。作用電極としてガラス状炭素、対電極として白金線、参照電極としてＳＣＥを使用した。＋０．１８ＶｖｓＳＣＥで、Ｋ_３[Ｆｅ（ＣＮ）_６]を内標準として使用した。 ０．０３３ｍｇｍｌ^−１ＰｄＲの非存在下（黒）及び存在下（灰色）での、１ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３−Ｃｌｐｙ）］（ＮＯ_３）_２及び１ｍＭのＮＡＤＨからなる溶液のＵＶ吸収分光学を示す図である。 １００ｍＶｓ^−１の走査速度で記録された、１０ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３−Ｃｌｐｙ）］（ＮＯ_３）_２、０．１ＭのＫＣｌ、及び、０．１ＭのＴｒｉｓ緩衝剤（ｐＨ９．０）からなる溶液におけるスタンダードなＯｘｆｏｒｄ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップに対するサイクリックボルタンモグラムを示す図である。 １００ｍＶｓ^−１の走査速度で記録された、１０ｍＭの［Ｒｕ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ｉｓｎａ）］（ＮＯ_３）_２、０．１ＭのＫＣｌ、及び、０．１ＭのＴｒｉｓ緩衝剤（ｐＨ９．０）からなる溶液におけるスタンダードなＯｘｆｏｒｄ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップに対するサイクリックボルタンモグラムを示す図である。 ０．０６６ｍｇｍｌ^−１ＰｄＲの非存在下（黒）及び存在下（灰色）での、１ｍＭの［Ｒｕ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ｉｓｎａ）］（ＮＯ_３）_２及び１ｍＭのＮＡＤＨからなる溶液のＵＶ吸収分光学を示す図である。 １００ｍＶｓ^−１の走査速度で記録された、１０ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（ｐｚ）］（ＮＯ_３）_２、０．１ＭのＫＣｌ、及び、０．１ＭのＴｒｉｓ緩衝剤（ｐＨ９．０）からなる溶液におけるスタンダードなＯｘｆｏｒｄ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップに対するサイクリックボルタンモグラムを示す図である。 ［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（ｐｚ）］（ＮＯ_３）_２アセトンのＥＳＩ質量スペクトル（ポジティブモード）を示す図である（挿入図は実験の及びシミュレートされた同位体パターンを示す）。 ミリＱ水にＮａＨ_２ＰＯ_４（０．００５Ｍ）／Ｎａ_２ＨＰＯ_４（０．０９４Ｍ）を含有する緩衝剤（ｐＨ＝８．２０）における［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ｐｚ）］（ＮＯ_３）_２のサイクリックボルタンモグラムを示す図である。作用電極としてガラス状炭素、対電極として白金線、参照電極としてＳＣＥを使用した。＋０．１８ＶｖｓＳＣＥで、Ｋ_３[Ｆｅ（ＣＮ）_６]を内標準として使用した。 ０．０３３ｍｇｍｌ^−１ＰｄＲの非存在下（黒）及び存在下（灰色）での、１ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ｐｚ）］（ＮＯ_３）_２及び１ｍＭのＮＡＤＨからなる溶液のＵＶ吸収分光学を示す図である。 異なる凍結乾燥した血清試料に対する酸化電流対総コレステロール（ＴＣ）濃度の較正プロットを示す図である。Ｇｅｎｅｒａｌ Ｐｕｒｐｏｓｅ Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍソフトウェア（Ｅｃｏ Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）によって制御される、マルチプレクサー（ＭＸ４５２ Ｓｔｅｒｎｈａｇｅｎ ｄｅｓｉｇｎ）に接続されたＡｕｔｏｌａｂ ＰＧＳＴＡＴ１２ポテンシオスタット／ガルバノスタット（Ｅｃｏ Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して、スタンダードなＯｘｆｏｒｄ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップ上の作用電極に対して＋０．１５Ｖ（ｖｓＡｇ／ＡｇＣｌ参照）という酸化電位が印加された後に電流を記録した。 作用電極としてスタンダードなＯＢウェル電極及びオンチップＡｇ／ＡｇＣｌ対−参照電極を用いた、並びに、１００ｍＶｓ^−１の走査速度を用いた２電極構成を使用して記録された［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３−ＭｅＯ−ｐｙ）］（ＮＯ_３）_２のサイクリックボルタンメトリーを示す図である。黒い線は、０．１ＭのＫＣｌ及び１０ｍＭのＮＡＤＨを含有する０．１ＭのＴｒｉｓ ｐＨ９緩衝剤における１０ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３−ＭｅＯ−ｐｙ）］（ＮＯ_３）_２に対するものであり、灰色の線は、２．５ｍｇｍｌ^−１ＰｄＲを添加した後の同じ溶液である。 ［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−ＯＭｅ−ｐｙ）］（ＮＯ_３）_２メタノールのＥＳＩ質量スペクトル（ポジティブモード）を示す図である（挿入図は拡大した同位体パターンを示す）。 ＮａＨ_２ＰＯ_４（０．００５Ｍ）／Ｎａ_２ＨＰＯ_４（０．０９４Ｍ）の緩衝剤（ｐＨ＝８．２０）における［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−ＭｅＯ−ｐｙ）］（ＮＯ_３）_２のサイクリックボルタンモグラムを示す図である。作用電極としてガラス状炭素、対電極として白金線、参照電極としてＳＣＥを使用した。Ｋ_３[Ｆｅ（ＣＮ）_６]を内標準として使用した（＋０．１８ＶｖｓＳＣＥ）。 作用電極としてスタンダードなＯＢウェル電極及びオンチップＡｇ／ＡｇＣｌ対−参照電極を用いた、並びに、１００ｍＶｓ^−１の走査速度を用いた２電極構成を使用して記録された［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３−ＯＭｅ−ｐｙ）］（ＮＯ_３）_２のサイクリックボルタンメトリーを示す図である。黒い線は、０．１ＭのＫＣｌ及び１０ｍＭのＮＡＤＨを含有する０．１ＭのＴｒｉｓ ｐＨ９緩衝剤における１０ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−ＯＭｅ−ｐｙ）］（ＮＯ_３）_２に対するものであり、灰色の線は、２．５ｍｇｍｌ^−１ＰｄＲを添加した後の同じ溶液である。 ２．５ｍｇｍｌ^−１ＰｄＲを含有する１０ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−ＯＭｅ−ｐｙ）］（ＮＯ_３）_２溶液に対する酸化電流対ＮＡＤＨ濃度の較正プロットを示す図である。Ｇｅｎｅｒａｌ Ｐｕｒｐｏｓｅ Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍソフトウェア（Ｅｃｏ Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）によって制御される、マルチプレクサー（ＭＸ４５２ Ｓｔｅｒｎｈａｇｅｎ ｄｅｓｉｇｎ）に接続されたＡｕｔｏｌａｂ ＰＧＳＴＡＴ１２ポテンシオスタット／ガルバノスタット（Ｅｃｏ Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して、スタンダードなＯｘｆｏｒｄ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップ上の作用電極に対して＋０．１５Ｖ（ｖｓＡｇ／ＡｇＣｌ参照）という酸化電位が印加された後に電流を記録した。 ［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ_３）_２メタノールのＥＳＩ質量スペクトル（ポジティブモード）を示す図である。 １００ｍＶｓ^−１の走査速度で記録された、１０ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ_３）_２、０．１ＭのＫＣｌ、及び、０．１ＭのＴｒｉｓ緩衝剤（ｐＨ９．０）からなる溶液におけるスタンダードなＯｘｆｏｒｄ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップに対するサイクリックボルタンモグラムを示す図である。 ０．０３３ｍｇｍｌ^−１ＰｄＲの非存在下（黒）及び存在下（灰色）での、１ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ_３）_２及び１ｍＭのＮＡＤＨからなる溶液のＵＶ吸収分光学を示す図である。 ２．５ｍｇｍｌ^−１ＰｄＲを含有する１０ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ_３）_２溶液に対する酸化電流対ＮＡＤＨ濃度の較正プロットを示す図である。Ｇｅｎｅｒａｌ Ｐｕｒｐｏｓｅ Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍソフトウェア（Ｅｃｏ Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）によって制御される、マルチプレクサー（ＭＸ４５２ Ｓｔｅｒｎｈａｇｅｎ ｄｅｓｉｇｎ）に接続されたＡｕｔｏｌａｂ ＰＧＳＴＡＴ１２ポテンシオスタット／ガルバノスタット（Ｅｃｏ Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して、スタンダードなＯｘｆｏｒｄ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップ上の作用電極に対して＋０．１５Ｖ（ｖｓＡｇ／ＡｇＣｌ参照）という酸化電位が印加された後に電流を記録した。 ［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＣＦ_３ＳＯ_３）_２アセトンのＥＳＩ質量スペクトル（ポジティブモード）を示す図である。 Ｈ_２ＯにＮａＨ_２ＰＯ_４（０．００５Ｍ）／Ｎａ_２ＨＰＯ_４（０．０９４Ｍ）を含有する緩衝剤（ｐＨ＝８．０５）における［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＣＦ_３ＳＯ_３）_２のサイクリックボルタンモグラムを示す図である。作用電極としてガラス状炭素、対電極として白金線、参照電極としてＳＣＥを使用した。＋０．１８ＶｖｓＳＣＥで、Ｋ_３[Ｆｅ（ＣＮ）_６]を内標準として使用した。 １００ｍＶｓ^−１の走査速度で記録された、１０ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＣＦ_３ＳＯ_３）_２、０．１ＭのＫＣｌ、１％ＣＨＡＰＳ、及び、０．１ＭのＴｒｉｓ緩衝剤（ｐＨ９．０）からなる溶液におけるスタンダードなＯｘｆｏｒｄ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップに対するサイクリックボルタンモグラムを示す図である。 ０．０３０ｍｇｍｌ^−１ＰｄＲの非存在下（黒）及び存在下（灰色）での、１ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＣＦ_３ＳＯ_３）_２、０．１ＭのＫＣｌ、１％ＣＨＡＰＳ、０．１ＭのＴＲＩＳ緩衝剤（ｐＨ９．０）、及び１ｍＭのＮＡＤＨからなる溶液のＵＶ吸収分光学を示す図である。 ２．５ｍｇｍｌ^−１ＰｄＲを含有する１０ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＣＦ_３ＳＯ_３）_２溶液に対する酸化電流対ＮＡＤＨ濃度の較正プロットを示す図である。Ｇｅｎｅｒａｌ Ｐｕｒｐｏｓｅ Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍソフトウェア（Ｅｃｏ Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）によって制御される、マルチプレクサー（ＭＸ４５２ Ｓｔｅｒｎｈａｇｅｎ Ｄｅｓｉｇｎ）に接続されたＡｕｔｏｌａｂ ＰＧＳＴＡＴ１２ポテンシオスタット／ガルバノスタット（Ｅｃｏ Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して、スタンダードなＯｘｆｏｒｄ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップ上の作用電極に対して＋０．１５Ｖ（ｖｓＡｇ／ＡｇＣｌ参照）という酸化電位が印加された後に電流を記録した。 実験の及びシミュレートされた同位体パターンを有した、［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−Ｍｅ_２Ｎ−ｐｙ）］（ＮＯ_３）_２・Ｈ_２ＯメタノールのＥＳＩ質量スペクトル（ポジティブモード）を示す図である。 ミリＱ水にＮａＨ_２ＰＯ_４（０．００５Ｍ）／Ｎａ_２ＨＰＯ_４（０．０９４Ｍ）を含有する緩衝剤（ｐＨ＝８．２０）における［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−Ｍｅ_２Ｎ−ｐｙ）］（ＮＯ_３）_２・Ｈ_２Ｏのサイクリックボルタンモグラムを示す図である。作用電極としてガラス状炭素、対電極として白金線、参照電極としてＳＣＥを使用した。＋０．１８ＶｖｓＳＣＥで、Ｋ_３[Ｆｅ（ＣＮ）_６]を内標準として使用した。 １００ｍＶｓ^−１の走査速度で記録された、１０ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−Ｍｅ_２Ｎ−ｐｙ）］（ＮＯ_３）_２、０．１ＭのＫＣｌ、及び、０．１ＭのＴｒｉｓ緩衝剤（ｐＨ９．０）からなる溶液におけるスタンダードなＯｘｆｏｒｄ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップに対するサイクリックボルタンモグラムを示す図である。 ０．０３３ｍｇｍｌ^−１ＰｄＲの非存在下（黒）及び存在下（灰色）での、１ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−Ｍｅ_２Ｎ−ｐｙ）］（ＮＯ_３）_２及び１ｍＭのＮＡＤＨからなる溶液のＵＶ吸収分光学を示す図である。 実験の及びシミュレートされた同位体パターンを有した、［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−^ｔＢｕｐｙ）］（ＮＯ_３）_２・３Ｈ_２ＯメタノールのＥＳＩ質量スペクトル（ポジティブモード）を示す図である。 ミリＱ水にＮａＨ_２ＰＯ_４（０．００５Ｍ）／Ｎａ_２ＨＰＯ_４（０．０９４Ｍ）を含有する緩衝剤（ｐＨ＝８．２０）における［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−^ｔＢｕｐｙ）］（ＮＯ_３）_２・３Ｈ_２Ｏのサイクリックボルタンモグラムを示す図である。作用電極としてガラス状炭素、対電極として白金線、参照電極としてＳＣＥを使用した。＋０．１８ＶｖｓＳＣＥで、Ｋ_３[Ｆｅ（ＣＮ）_６]を内標準として使用した。 作用電極としてスタンダードなＯＢウェル電極及びオンチップＡｇ／ＡｇＣｌ対−参照電極を用いた、並びに、１００ｍＶｓ^−１の走査速度を用いた２電極構成を使用して記録された、０．１ＭのＴｒｉｓｐＨ９緩衝剤における１０ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−^ｔＢｕｐｙ）］（ＮＯ_３）_２のサイクリックボルタンメトリーを示す図である。 ０．０３３ｍｇｍｌ^−１ＰｄＲの非存在下（黒）及び存在下（灰色）での、１ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−^ｔＢｕｐｙ）］（ＮＯ_３）_２及び１ｍＭのＮＡＤＨからなる溶液のＵＶ吸収分光学を示す図である。 ２．５ｍｇｍｌ^−１ＰｄＲを含有する１０ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−^ｔＢｕｐｙ）］（ＮＯ_３）_２溶液に対する酸化電流対ＮＡＤＨ濃度の較正プロットを示す図である。Ｇｅｎｅｒａｌ Ｐｕｒｐｏｓｅ Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍソフトウェア（Ｅｃｏ Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）によって制御される、マルチプレクサー（ＭＸ４５２ Ｓｔｅｒｎｈａｇｅｎ ｄｅｓｉｇｎ）に接続されたＡｕｔｏｌａｂ ＰＧＳＴＡＴ１２ポテンシオスタット／ガルバノスタット（Ｅｃｏ Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して、スタンダードなＯｘｆｏｒｄ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップ上の作用電極に対して＋０．１５Ｖ（ｖｓＡｇ／ＡｇＣｌ参照）という酸化電位が印加された後に電流を記録した。 ０．０３３ｍｇｍｌ^−１ＰｄＲの非存在下（黒）及び存在下（灰色）での、１ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（イソキノリン）］（ＮＯ_３）_２及び１ｍＭのＮＡＤＨからなる溶液のＵＶ吸収分光学を示す図である。 作用電極としてスタンダードなＯＢウェル電極及びオンチップＡｇ／ＡｇＣｌ対−参照電極を用いた、並びに、１００ｍＶｓ^−１の走査速度を用いた２電極構成を使用して記録された、０．１ＭのＴｒｉｓｐＨ９緩衝剤における１０ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（イソキノリン）］（ＮＯ_３）_２のサイクリックボルタンメトリーを示す図である。 実験の及びシミュレートされた同位体パターンを有した、［Ｒｕ^ＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（トロポロン）（ピリジン）］ＰＦ_６アセトンのＥＳＩ質量スペクトル（ポジティブモード）を示す図である。 実験の及びシミュレートされた同位体パターンを有した、［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（トロポロン）（ピリジン）］（ＮＯ_３）_２メタノールのＥＳＩ質量スペクトル（ポジティブモード）を示す図である。 ミリＱ水にＮａＨ_２ＰＯ_４（０．００５Ｍ）／Ｎａ_２ＨＰＯ_４（０．０９４Ｍ）を含有する緩衝剤（ｐＨ＝８．２０）における［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（トロポロン）（ｐｙ）］（ＮＯ_３）_２のサイクリックボルタンモグラムを示す図である。作用電極としてガラス状炭素、対電極として白金線、参照電極としてＳＣＥを使用した。＋０．１８ＶｖｓＳＣＥで、Ｋ_３[Ｆｅ（ＣＮ）_６]を内標準として使用した。 ２．５ｍｇｍｌ^−１ＰｄＲを含有する１０ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（トロポロン）（ｐｙ）］（ＮＯ_３）_２溶液に対する酸化電流対ＮＡＤＨ濃度の較正プロットを示す図である。Ｇｅｎｅｒａｌ Ｐｕｒｐｏｓｅ Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍソフトウェア（Ｅｃｏ Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）によって制御される、マルチプレクサー（ＭＸ４５２ Ｓｔｅｒｎｈａｇｅｎ ｄｅｓｉｇｎ）に接続されたＡｕｔｏｌａｂ ＰＧＳＴＡＴ１２ポテンシオスタット／ガルバノスタット（Ｅｃｏ Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して、スタンダードなＯｘｆｏｒｄ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップ上の作用電極に対して＋０．１５Ｖ（ｖｓＡｇ／ＡｇＣｌ参照）という酸化電位が印加された後に電流を記録した。 ０．０３３ｍｇｍｌ^−１ＰｄＲの非存在下（黒）及び存在下（灰色）での、１ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（トロポロン）（ｐｙ）］（ＮＯ_３）_２及び１ｍＭのＮＡＤＨからなる溶液のＵＶ吸収分光学を示す図である。 作用電極としてスタンダードなＯＢウェル電極及びオンチップＡｇ／ＡｇＣｌ対−参照電極を用いた、並びに、１００ｍＶｓ^−１の走査速度を用いた２電極構成を使用して記録された、０．１ＭのＴｒｉｓｐＨ９緩衝剤における１０ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（トロポロン）（ｐｙ）］（ＮＯ_３）_２のサイクリックボルタンメトリーを示す図である。 実験の及びシミュレートされた同位体パターンを有した、［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（トロポロン）（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ｐｙ）］（ＮＯ_３）_２メタノールのＥＳＩ質量スペクトル（ポジティブモード）を示す図である。 ミリＱ水にＮａＨ_２ＰＯ_４（０．００５Ｍ）／Ｎａ_２ＨＰＯ_４（０．０９４Ｍ）を含有する緩衝剤（ｐＨ＝８．２０）における［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（トロポロン）（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ｐｙ）］（ＮＯ_３）_２のサイクリックボルタンモグラムを示す図である。作用電極としてガラス状炭素、対電極として白金線、参照電極としてＳＣＥを使用した。＋０．１８ＶｖｓＳＣＥで、Ｋ_３[Ｆｅ（ＣＮ）_６]を内標準として使用した。 作用電極としてスタンダードなＯＢウェル電極及びオンチップＡｇ／ＡｇＣｌ対−参照電極を用いた、並びに、１００ｍＶｓ^−１の走査速度を用いた２電極構成を使用して記録された、０．１ＭのＴｒｉｓｐＨ９緩衝剤における１０ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（トロポロン）（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ｐｙ）］（ＮＯ_３）_２のサイクリックボルタンメトリーを示す図である。 １ｍｇｍｌ^−１ＰｄＲを含有する１０ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（トロポロン）（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ｐｙ）］（ＮＯ_３）_２溶液に対する酸化電流対ＮＡＤＨ濃度の較正プロットを示す図である。Ｇｅｎｅｒａｌ Ｐｕｒｐｏｓｅ Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍソフトウェア（Ｅｃｏ Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）によって制御される、マルチプレクサー（ＭＸ４５２ Ｓｔｅｒｎｈａｇｅｎ ｄｅｓｉｇｎ）に接続されたＡｕｔｏｌａｂ ＰＧＳＴＡＴ１２ポテンシオスタット／ガルバノスタット（Ｅｃｏ Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して、スタンダードなＯｘｆｏｒｄ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップ上の作用電極に対して＋０．１５Ｖ（ｖｓＡｇ／ＡｇＣｌ参照）という酸化電位が印加された後に電流を記録した。 ０．０３３ｍｇｍｌ^−１ＰｄＲの非存在下（黒）及び存在下（灰色）での、１ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（トロポロン）（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ｐｙ）］（ＮＯ_３）_２及び１ｍＭのＮＡＤＨからなる溶液のＵＶ吸収分光学を示す図である。 ［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３，４−Ｍｅ_２−ｐｙ）］（ＣＦ_３ＳＯ_３）アセトンのＥＳＩ質量スペクトル（ポジティブモード）を示す図である。 Ｈ_２ＯにＮａＨ_２ＰＯ_４（０．００５Ｍ）／Ｎａ_２ＨＰＯ_４（０．０９４Ｍ）を含有する緩衝剤（ｐＨ＝８．０５）における［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３，４−Ｍｅ_２ｐｙ）］（ＣＦ_３ＳＯ_３）_２のサイクリックボルタンモグラムを示す図である。作用電極としてガラス状炭素、対電極として白金線、参照電極としてＳＣＥを使用した。＋０．１８ＶｖｓＳＣＥで、Ｋ_３[Ｆｅ（ＣＮ）_６]を内標準として使用した。 １００ｍＶｓ^−１の走査速度で記録された、１０ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（３，４−Ｍｅ_２ｐｙ）］（ＣＦ_３ＳＯ_３）_２、０．１ＭのＫＣｌ、１％ＣＨＡＰＳ、及び、０．１ＭのＴｒｉｓ緩衝剤（ｐＨ９．０）からなる溶液におけるスタンダードなＯｘｆｏｒｄ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップに対するサイクリックボルタンモグラムを示す図である。 ０．０３０ｍｇｍｌ^−１ＰｄＲの非存在下（黒）及び存在下（灰色）での、１ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（３，４−Ｍｅ_２ｐｙ）］（ＣＦ_３ＳＯ_３）_２、０．１ＭのＫＣｌ、１％ＣＨＡＰＳ、０．１ＭのＴＲＩＳ緩衝剤（ｐＨ９．０）、及び１ｍＭのＮＡＤＨからなる溶液のＵＶ吸収分光学を示す図である。 ２．５ｍｇｍｌ^−１ＰｄＲを含有する１０ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（３，４−Ｍｅ_２ｐｙ）］（ＣＦ_３ＳＯ_３）_２溶液に対する酸化電流対ＮＡＤＨ濃度の較正プロットを示す図である。Ｇｅｎｅｒａｌ Ｐｕｒｐｏｓｅ Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍソフトウェア（Ｅｃｏ Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）によって制御される、マルチプレクサー（ＭＸ４５２ Ｓｔｅｒｎｈａｇｅｎ Ｄｅｓｉｇｎ）に接続されたＡｕｔｏｌａｂ ＰＧＳＴＡＴ１２ポテンシオスタット／ガルバノスタット（Ｅｃｏ Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して、スタンダードなＯｘｆｏｒｄ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップ上の作用電極に対して＋０．１５Ｖ（ｖｓＡｇ／ＡｇＣｌ参照）という酸化電位が印加された後に電流を記録した。 ［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３−ＯＨｐｙ）］（ＮＯ_３）_２メタノールのＥＳＩ−ＭＳ（ポジティブモード）を示す図である（挿入図は実験（上）及びシミュレートした（下）同位体パターンを示す）。 Ｈ_２ＯにＮａＨ_２ＰＯ_４（０．００５Ｍ）／Ｎａ_２ＨＰＯ_４（０．０９４Ｍ）を含有する緩衝剤（ｐＨ＝８．０５）における［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３−ＯＨｐｙ）］（ＮＯ_３）_２のサイクリックボルタンモグラムを示す図である。作用電極としてガラス状炭素、対電極として白金線、参照電極としてＳＣＥを使用した。Ｋ_３[Ｆｅ（ＣＮ）_６]を内標準として使用した（＋０．１８ＶｖｓＳＣＥ）。 １００ｍＶｓ^−１の走査速度で記録された、１０ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（３−ＯＨｐｙ）］（ＮＯ_３）_２、０．１ＭのＫＣｌ、１％ＣＨＡＰＳ、及び、０．１ＭのＴｒｉｓ緩衝剤（ｐＨ９．０）からなる溶液におけるスタンダードなＯｘｆｏｒｄ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップに対するサイクリックボルタンモグラムを示す図である。 ０．０３０ｍｇｍｌ^−１ＰｄＲの非存在下（黒）及び存在下（灰色）での、１ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（３−ＯＨｐｙ）］（ＮＯ_３）_２、０．１ＭのＫＣｌ、１％ＣＨＡＰＳ、０．１ＭのＴＲＩＳ緩衝剤（ｐＨ９．０）、及び１ｍＭのＮＡＤＨからなる溶液のＵＶ吸収分光学を示す図である。 ２．５ｍｇｍｌ^−１ＰｄＲを含有する１０ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（３−ＯＨｐｙ）］（ＮＯ_３）_２溶液に対する酸化電流対ＮＡＤＨ濃度の較正プロットを示す図である。Ｇｅｎｅｒａｌ Ｐｕｒｐｏｓｅ Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍソフトウェア（Ｅｃｏ Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）によって制御される、マルチプレクサー（ＭＸ４５２ Ｓｔｅｒｎｈａｇｅｎ Ｄｅｓｉｇｎ）に接続されたＡｕｔｏｌａｂ ＰＧＳＴＡＴ１２ポテンシオスタット／ガルバノスタット（Ｅｃｏ Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して、スタンダードなＯｘｆｏｒｄ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップ上の作用電極に対して＋０．１５Ｖ（ｖｓＡｇ／ＡｇＣｌ参照）という酸化電位が印加された後に電流を記録した。 同位体パターンを有した、［Ｒｕ^ＩＩＩ（ｔｍｃ）（ＮＣＳ）_２］（ＣｌＯ_４）メタノールのＥＳＩ質量スペクトルを示す図である。 ０．１ＭのＴＦＡにおける［Ｒｕ^ＩＩＩ（ｔｍｃ）（ＮＣＳ）_２］（ＣｌＯ_４）のサイクリックボルタンモグラムを示す図である。作用電極としてガラス状炭素、対電極として白金線、参照電極としてＳＣＥを使用した。＋０．１８ＶｖｓＳＣＥで、Ｋ_３[Ｆｅ（ＣＮ）_６]を内標準として使用した。 １００ｍＶｓ^−１の走査速度で記録された、０．３２ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（ＴＭＣ）（ＮＣＳ）_２］（ＣｌＯ_４）、０．１ＭのＫＣｌ、１％ＣＨＡＰＳ、及び、０．１ＭのＴＲＩＳ緩衝剤（ｐＨ９．０）からなる溶液におけるスタンダードなＯｘｆｏｒｄ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップに対するサイクリックボルタンモグラムを示す図である。 ０．０３０ｍｇｍｌ^−１ＰｄＲの非存在下（黒）及び存在下（灰色）での、０．０１ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（ＴＭＣ）（ＮＣＳ）_２］（ＣｌＯ_４）、０．１ＭのＫＣｌ、１％ＣＨＡＰＳ、０．１ＭのＴＲＩＳ緩衝剤（ｐＨ９．０）、及び１ｍＭのＮＡＤＨからなる溶液のＵＶ吸収分光学を示す図である。 ２．５ｍｇｍｌ^−１ＰｄＲを含有する０．３２ｍＭの［Ｒｕ^ＩＩＩ（ＴＭＣ）（ＮＣＳ）_２］（ＣｌＯ_４）溶液に対する酸化電流対ＮＡＤＨ濃度の較正プロットを示す図である。Ｇｅｎｅｒａｌ Ｐｕｒｐｏｓｅ Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍソフトウェア（Ｅｃｏ Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）によって制御される、マルチプレクサー（ＭＸ４５２ Ｓｔｅｒｎｈａｇｅｎ Ｄｅｓｉｇｎ）に接続されたＡｕｔｏｌａｂ ＰＧＳＴＡＴ１２ポテンシオスタット／ガルバノスタット（Ｅｃｏ Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して、スタンダードなＯｘｆｏｒｄ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップ上の作用電極に対して＋０．１５Ｖ（ｖｓＡｇ／ＡｇＣｌ参照）という酸化電位が印加された後に電流を記録した。 各ＣＫに関して、時間に対してプロットされたセンサの応答を示す図である（実施例１７を参照）。 クレアチニン濃度に対してプロットされたセンサの応答を示す図である（実施例１８を参照）。 グルコース濃度に対してプロットされたセンサの応答を示す図である（実施例１９を参照）。 スタンダードなグルコースの添加で唾液を検査した［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ_３）_２グルコース混合体を示す図である。

「アルキル」という用語は、本明細書において使用される場合、直鎖又は分岐状の飽和脂肪族炭化水素を含む。アルキル基の例には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、及び、シクロペンチルが挙げられる。他に明記しない限り、「アルキル」という用語は、アルキル基及びシクロアルキル基を含む。

「アルコキシ」という用語は、本明細書において使用される場合、アルキル基が酸素原子に結合した構造体を表している。アルコキシ基の例として、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、及び、シクロペントキシが挙げられる。他に明記しない限り、「アルコキシ」という用語は、アルコキシ基及びシクロアルコキシ基を含む。

「アルケニル」という用語は、本明細書において使用される場合、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有した不飽和の直鎖又は分岐状の脂肪族炭化水素を表している。アルケニル基の例として、エテニル、１−プロペニル、２−プロペニル、１−ブテニル、２−メチル−１−プロペニル、及び、シクロペンテニルが挙げられる。他に明記しない限り、「アルケニル」という用語は、アルケニル基及びシクロアルケニル基を含む。

「ａｃａｃ」という用語は、２，４−ペンタンジオンの共役塩基であるアセチルアセトネートアニオンを意味している。

「置換型の」官能基（例えば、置換型のアルキル、アルケニル、又はアルコキシ基）は、以下の：ハロゲン、アルコキシ、メルカプト、アリール、アルコキシカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、−ＯＨ、−ＮＨ_２、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、トリアルキルアンモニウム、アルカノイルアミノ、ジアルカノイルアミノ、アリールカルボキサミド、ヒドラジノ、アルキルチオ、アルケニル、及び、反応性の基から選択される少なくとも１つの置換基を含む。

「反応性基」は分子の官能基であり、別の化合物と反応して、その別の化合物の少なくとも一部をその分子に結合させる能力を持つ官能基である。反応性基は、カルボキシ、活性エステル、スルホニルハライド、スルホン酸エステル、イソシアネート、イソチオシアネート、エポキシド、アジリジン、ハライド、アルデヒド、ケトン、アミノ、アクリルアミド、チオール、アシルアジド、アシルハライド、ヒドラジン、ヒドロキシルアミン、アルキルハライド、イミダゾール、ピリジン、フェノール、アルキル、スルホネート、ハロトリアジン、イミドエステル、マレイミド、ヒドラジド、ヒドロキシ、及び、光反応アジドアリールの基を含む。当技術分野において理解されているように、活性エステルは、一般的に、スルホ、ニトロ、シアノ、又は、ハロ等の電子求引性基によって置換されたスクシンイミド、ベンゾトリアゾール、又は、アリールのエステルを含む。

「生体液」は、（例えば、血液、間質液、血漿、皮膚液（ｄｅｒｍａｌ ｆｌｕｉｄ）、汗、唾液、及び涙等の）分析物を測定することができる体液又は体液誘導体である。

「電気化学センサ」は、電気化学的な酸化又は還元反応を介して試料内の分析物の存在を検出する又はその濃度若しくは量を測定するよう形成された装置である。一般的に、分析物の量又は濃度に関連づけることができる電気信号にこれらの反応を変換することができる。

「酸化還元メディエーター」は、分析物、又は、分析物により還元されたか若しくは分析物により酸化された酵素と電極との間で、直接若しくは１又は複数のさらなる電子伝達剤を介して電子を運ぶ電子伝達剤である。

電気化学電池は、２電極、３電極、４電極、又は多電極型であり得る。２電極型は、作用電極及び疑似参照電極を含む。３電極型は、作用電極、理想又は疑似参照電極、及び、別の対電極を含む。本明細書において使用される場合、疑似参照電極は、実質的に安定した参照電位を提供する能力を持つ電極である。２電極型では、疑似参照電極は対電極としても作用し、この場合、電流は、実質的に参照電位を乱すことなく通過する。本明細書において使用される場合、理想参照電極は、電流が通過しない理想非分極性電極である。

「測定可能な信号」という用語は、（電極電位、蛍光、スペクトル吸収、ルミネセンス、光散乱、ＮＭＲ、ＩＲ、質量分析、熱変化、又は、圧電変化等）容易に測定することができる信号を意味している。

「生化学的分析物」という用語は、（酵素、抗体、ＤＮＡ配列、又は微生物等）生体液内に存在し得るいかなる測定可能な化学的又は生化学的な物質も含む。

本発明によると、単座及び二座は、当技術分野においてその一般に受入れられている意味を有しており、すなわち、単座配位子は、１つの可能な配位原子を有する化学的部分又は基である。多座配位子は、２個以上の可能な配位原子を有する化学的部分又は基である。可能な配位原子の数は、（例えば二又は三等の）接頭辞により示される。

次に、本発明の実施形態が、以下の実施例によって、及び、付随の図を参考にしてのみ、非限定的な観念で記述される。

以下に続く実施例を通して、Ｌは、配位子１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナンを示している。物質［Ｒｕ^ＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（ＯＨ）］ＰＦ_６は、Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ ｅｔ ａｌ：Ｉｎｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９３，３２，４９２５に従い調製される。実施例の全てが、０．１ＭのＫＣｌ及び１％のＣＨＡＰＳを使用する。

（図１から７を参照）

[方法１]
［Ｒｕ^ＩＩ（Ｍｅ_３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］ＰＦ_６の調製
Ｎ−メチルイミダゾール（０．５ｇ、６．０ｍｍｏｌ）を［Ｒｕ^ＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（ＯＨ）］ＰＦ_６（１００ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）無水エタノール（５ｍＬ）に添加した。その溶液を、数個のＺｎアマルガム断片が存在する中アルゴン下で２４時間環流させた。室温への冷却の後、アセトン（１５ｍＬ）を添加し、次に、その溶液を濾過した。オレンジ色の固体を得るよう濾液を乾燥状態まで蒸発させ、その固体を濾過し、ジエチルエーテルで洗浄した。収量（１００ｍｇ）。アセトンにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝４５４．４、[Ｍ]^＋。

［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ_３）_２の調製
ＡｇＣＦ_３ＳＯ_３（４５ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）アセトン（２ｍＬ）の溶液を、［Ｒｕ^ＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］ＰＦ_６（１００ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）アセトン（３ｍＬ）に徐々に添加した。３分後、紫色の溶液を濾過して銀を取り除いた。次に、 [^ｎＢｕ_４Ｎ]ＮＯ_３（１５００ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を添加して紫色の沈殿物を生じ、その沈殿物を濾過してアセトンで洗浄した。収量（５０ｍｇ）。メタノールにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝２７７．５、[Ｍ]^２＋、Ｒｕ^{ＩＩＩ／ＩＩ}のＥ_１／２＝＋０．０９Ｖ ｖｓ緩衝液（ｐＨ８．２０）におけるＮＨＥ。

（図８〜１４を参照）

［Ｒｕ^ＩＩ（ＤＭＳＯ）_４Ｃｌ_２］の調製
三塩化ルテニウム三水和物（１．０ｇ）を、ジメチルスルホキシド（５ｍＬ）において５分間環流させた。容積をｉｎ ｖａｃｕｏにおいて半分まで減らし、アセトン（２０ｍＬ）の添加により、黄色の沈殿物を生じた。単離した黄色の複合体を濾過し、アセトン及びエーテルで洗浄して真空乾燥させた。

［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｌ）Ｃｌ_３］の調製
Ｒｕ^ＩＩ（ＤＭＳＯ）_４Ｃｌ_２（１．０ｇ、２．１ｍｍｏｌ）無水エタノール（２５ｍＬ）の混合物に、撹拌しながらＬ（０．８０ｇ、４．７ｍｍｏｌ）を添加した。懸濁液を１時間かけて６０°Ｃまで加熱し、透明な深い赤褐色の溶液を得た後、その溶液を２時間環流させた。回転による蒸発乾燥によって前記溶液を減圧下で取り除いた。赤オレンジ色の残留物を濃縮したＨＣｌで処理し、空気の存在下で環流しながら３０分間加熱した。オレンジ色の微結晶性の固体を濾過によって回収し、Ｈ_２Ｏ、エタノール、及びジエチルエーテルで洗浄して空気乾燥させた。

［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（ＯＨ）］ＰＦ_６・Ｈ_２Ｏの調製
固体のＲｕ^ＩＩＩ（Ｌ）Ｃｌ_３（２．０ｇ；５．０ｍｍｏｌ）を、外気温にて撹拌しながらナトリウム２，４−ペンタンジオネート（ａｃａｃ）（３．０ｇ；〜２４ｍｍｏｌ）水（６０ｍＬ）溶液に少量添加した。その混合物を、透明な赤色の溶液を得るまで３．５時間撹拌した。ＮａＰＦ_６（２．０ｇ）Ｈ_２Ｏ（５ｍＬ）溶液の添加、及び、０°Ｃまでの冷却によって、オレンジ色の微結晶の沈殿を開始し、濾過によってその微結晶を回収し、ジエチルエーテルで洗浄して空気乾燥させた。

［Ｒｕ^ＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（ｐｙ）］ＰＦ_６の調製
無水エタノール／ピリジン（５ｍＬ）に［Ｒｕ^ＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（ＯＨ）］ＰＦ_６（１０５ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を含有する溶液（４：１、ｖ／ｖ）を、１０個のＺｎアマルガム断片が存在する中アルゴン雰囲気下で４時間環流させるよう加熱した。外気温への冷却後、赤色の微結晶質の沈殿物を濾過によって回収し、ジエチルエーテルで洗浄して空気乾燥させた。生成物をアセトン／ジエチルエーテルから再結晶させた。収量：（９４ｍｇ、７９％）。ＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝４５１、[Ｍ]^２＋、Ｒｕ^{ＩＩＩ／ＩＩ}のＥ_１／２＝−０．１８Ｖ ｖｓＣＨ_３ＣＮにおける０．１ＭのＴＢＡＨのＦｃ^＋／０。

［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（ｐｙ）］（ＮＯ_３）_２の調製
ＡｇＣＦ_３ＳＯ_３（４２ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）アセトン（１ｍＬ）の溶液を、［Ｒｕ^ＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ｐｙ）］ＰＦ_６（９０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を含有するオレンジ色のアセトン溶液（３ｍＬ）に徐々に添加した。５分間の撹拌の後、固体の[^ｎＢｕ_４Ｎ]ＮＯ_３（３０４ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を添加し、紫色の沈殿物を濾過して、アセトンに続きジエチルエーテルで洗浄した。その生成物をメタノール／ジエチルエーテルから再結晶させた。収量：（６４ｍｇ、８７％）。ＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝４５１．０、[Ｍ]^＋；２２５．４、[Ｍ]^２＋、Ｒｕ^{ＩＩＩ／ＩＩ}のＥ_１／２＝０．２Ｖ ｖｓ緩衝液（ｐＨ８．０５）におけるＮＨＥ。

（図１５〜１７を参照）

［Ｒｕ^ＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−Ｍｅｐｙ）］ＰＦ_６の調製
４−ピコリン（０．４ｇ、４ｍｍｏｌ）を［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ＯＨ）］ＰＦ_６（２００ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）無水エタノール（１５ｍＬ）に添加した。その溶液を、２０個のＺｎアマルガム断片が存在する中アルゴン下で２４時間環流させた。室温への冷却後、その溶液を濾過し、次に、茶色の固体を得るよう濾液を乾燥状態まで蒸発させて、その固体を濾過した後にジエチルエーテルで洗浄した。収量（２９０ｍｇ）。アセトンにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝４６５．２、[Ｍ]^＋。Ａｎａｌ．ｃａｌｃｄ．ｆｏｒＣ_２０Ｈ_３５Ｎ_４Ｏ_２ＰＦ_５Ｒｕ：Ｃ，３９．４１；Ｈ，５．７９；Ｎ，９．１１。Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，３９．５３；Ｈ，５．８２；Ｎ，８．９８。

［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−Ｍｅｐｙ）］（ＰＦ_６）_２の調製
（ＮＨ_４）_２[Ｃｅ（ＮＯ_３）_６]（１３４ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）アセトン（１０ｍＬ）の溶液を、［Ｒｕ^ＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−Ｍｅｐｙ）］ＰＦ_６（１２０ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を含有するオレンジ色のアセトン（５ｍＬ）溶液に徐々に添加した。３分後、紫色の固体を濾過し、アセトンで洗浄した。その紫色の固体を、次に、脱イオン水（１０ｍＬ）において溶解し、その溶液を濾過し、ＮＨ_４ＰＦ_６（１３３ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）を添加して紫色の沈殿物を生じ、その沈殿物を濾過して脱イオン水で洗浄した。収量（１０５ｍｇ）。アセトンにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝２３２．８、[Ｍ]^２＋。Ａｎａｌ．ｃａｌｃｄ．ｆｏｒＣ_２０Ｈ_３５Ｎ_４Ｏ_２Ｐ_２Ｆ_１２Ｒｕ：Ｃ，３１．８４；Ｈ，４．６８；Ｎ，７．４３。Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，３１．９０；Ｈ，４．６５；Ｎ，７．３２。

［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−Ｍｅｐｙ）］（ＮＯ_３）_２・Ｈ_２Ｏの調製
[^ｎＢｕ_４Ｎ]ＮＯ_３（２３０ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）アセトン（５ｍＬ）の溶液を、［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−Ｍｅｐｙ）］（ＰＦ_６）_２（１４０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）アセトン（１０ｍＬ）の紫色の溶液に徐々に添加した。紫色の沈殿物を濾過し、アセトンで洗浄して真空乾燥させた。収量（４０ｍｇ）。メタノールにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝２３２．８、[Ｍ]^２＋。Ｒｕ^{ＩＩＩ／ＩＩ}のＥ_１／２＝＋０．１８Ｖ ｖｓ緩衝液（ｐＨ８．２０）におけるＮＨＥ。Ａｎａｌ．ｃａｌｃｄ．ｆｏｒＣ_２０Ｈ_３５Ｎ_６Ｏ_８Ｒｕ・Ｈ_２Ｏ：Ｃ，３９．６０；Ｈ，６．１５；Ｎ，１３．８５。Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，３９．７２；Ｈ，６．０１；Ｎ，１３．９０。

（図１８〜２１を参照）

［Ｒｕ^ＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（３−Ｃｌｐｙ）］ＰＦ_６の調製
［Ｒｕ^ＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（ＯＨ）］ＰＦ_６（１５０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）無水エタノール／３−クロロピリジン（５ｍＬ）（４：１、ｖ／ｖ）を含有する溶液を、１０個のＺｎアマルガムが存在する中アルゴン下で２４時間環流させた。室温への冷却の後、１５ｍＬのアセトンを添加し、次に、その溶液を濾過した。茶色の固体を得るよう濾液を乾燥状態まで蒸発させ、その固体を濾過した後、ジエチルエーテルで洗浄した。ＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝４８５．３、[Ｍ]^＋。収量：（１００ｍｇ）。

［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（３−Ｃｌｐｙ）］（ＮＯ_３）_２の調製
ＡｇＣＦ_３ＳＯ_３（４５ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）アセトン（２ｍＬ）の溶液を、［Ｒｕ^ＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３−Ｃｌｐｙ）］ＰＦ_６（１１０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を含有する茶色のアセトン溶液（３ｍＬ）に徐々に添加した。３分後、紫色の溶液を濾過して銀を取り除き、次に、[^ｎＢｕ_４Ｎ]ＮＯ_３（３００ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を添加して紫色の沈殿物を生じ、その沈殿物を濾過してアセトンで洗浄した。メタノールにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝４８５．３、[Ｍ]^＋；２４２．９、[Ｍ]^２＋、Ｒｕ^{ＩＩＩ／ＩＩ}のＥ_１／２＝＋０．２７Ｖ ｖｓ緩衝液（ｐＨ８．２０）におけるＮＨＥ。

（図２２〜２３を参照）

［Ｒｕ^ＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（ＩＳＮＡ）］ＰＦ_６の調製（ＩＳＮＡ＝イソニコチンアミド）
固体のイソニコチンアミド（１ｇ、８．２０ｍｍｏｌ）を、［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（ＯＨ）］ＰＦ_６（１００ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）無水エタノール（５ｍＬ）の懸濁液に添加した。その混合物を、数個のＺｎアマルガム断片が存在する中アルゴン下で２４時間環流させた。室温への冷却の後、１５ｍＬのアセトンを添加し、次に、その溶液を濾過した。茶色の固体を得るよう濾液を乾燥状態まで蒸発させ、その固体を濾過した後、ジエチルエーテルで洗浄した。収量：１００ｍｇ。未加工の生成物を、さらに精製することなく次の工程に使用した。

［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（ＩＳＮＡ）］（ＮＯ_３）_２の調製
ＡｇＣＦ_３ＳＯ_３（４５ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）アセトン（２ｍＬ）の溶液を、撹拌しながら［Ｒｕ^ＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（ＩＳＮＡ）］ＰＦ_６（１００ｍｇ）アセトン（３ｍＬ）の茶色の溶液に徐々に添加した。５分後、紫色の溶液を濾過し、次に、ｃａ０．５ｍＬまで濃縮し、ジエチルエーテル（３０ｍＬ）の添加を続けた。結果として生じた紫色の固体を濾過し、アセトニトリル（５ｍＬ）に溶解した。[^ｎＢｕ_４Ｎ]ＮＯ_３（３００ｍｇ、１ｍｍｏｌ）アセトニトリル（２ｍＬ）の添加により、１日置いた後に黒紫色の水晶が生じた。メタノールにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝４９４．４、[Ｍ]^＋；２４７．３、[Ｍ]^２＋、Ｒｕ^{ＩＩＩ／ＩＩ}のＥ_１／２＝＋０．２８Ｖ ｖｓ緩衝液（ｐＨ８．２０）におけるＮＨＥ。

（図２４〜２８を参照）

［Ｒｕ^ＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（ｐｚ）］ＰＦ_６の調製
ピラゾール（０．５ｇ、７．３ｍｍｏｌ）を、［Ｒｕ^ＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（ＯＨ）］ＰＦ_６（１５０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）無水エタノール（５ｍＬ）に添加した。その溶液を、１０個のＺｎアマルガム断片が存在する中アルゴン下で２４時間環流させた。室温への冷却の後、アセトン（１５ｍＬ）を添加し、次に、その溶液を濾過した。オレンジ色の固体を得るよう濾液を乾燥状態まで蒸発させ、その固体を濾過した後、ジエチルエーテルで洗浄した。収量（１３０ｍｇ）。

［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（ｐｚ）］（ＮＯ_３）_２の調製
ＡｇＣＦ_３ＳＯ_３（６０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）アセトン（３ｍＬ）の溶液を、［Ｒｕ^ＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ｐｚ）］ＰＦ_６（１３０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を含有するオレンジ色のアセトン溶液（７ｍＬ）に徐々に添加した。３分後、紫色の溶液を濾過して銀を取り除いた。次に、[^ｎＢｕ_４Ｎ]ＮＯ_３（０．３ｇ、０．９８ｍｍｏｌ）を添加して紫色の沈殿物を生じ、その沈殿物を濾過してアセトンで洗浄した。収量（１００ｍｇ）。メタノールにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝４３９．５、[Ｍ−Ｈ]^＋。Ｒｕ^{ＩＩＩ／ＩＩ}のＥ_１／２＝＋０．１４Ｖ ｖｓ緩衝液（ｐＨ８．２０）におけるＮＨＥ。

（図２９〜３３を参照）

［Ｒｕ^ＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（４−ＭｅＯ−ｐｙ）］ＰＦ_６（１）の調製
４−メトキシピリジン（０．４ｇ、３．７ｍｍｏｌ）を、［Ｒｕ^ＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（ＯＨ）］ＰＦ_６（１２０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）無水エタノール（５ｍＬ）に添加した。その溶液を、１０個のＺｎアマルガム断片が存在する中アルゴン下で２４時間環流させた。室温への冷却の後、アセトン（１５ｍＬ）を添加し、次に、その溶液を濾過した。オレンジ色の固体を得るよう濾液を乾燥状態まで蒸発させ、その固体を濾過し、ジエチルエーテルで洗浄した。収量（１００ｍｇ）。

［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（４−ＭｅＯ−ｐｙ）］（ＮＯ_３）_２の調製
ＡｇＣＦ_３ＳＯ_３（４５ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）アセトン（５ｍＬ）の溶液を、ｌ（１００ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）アセトン（５ｍＬ）に徐々に添加した。３分後、紫色の溶液を濾過し、次に、ｃａ１ｍＬまで濃縮させた。Ｅｔ_２Ｏ（３０ｍＬ）の添加により、紫色の固体が生じ、その固体を濾過してＥｔ_２Ｏで洗浄した。その紫色の固体をアセトン（５ｍＬ）に溶解した。次に、[^ｎＢｕ_４Ｎ]ＮＯ_３（３００ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を徐々に添加した。結果として生じた紫色の沈殿物を濾過してアセトンで洗浄した。メタノールにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝２４０．８、 [Ｍ]^２＋。Ｒｕ^{ＩＩＩ／ＩＩ}のＥ_１／２＝＋０．１６Ｖ ｖｓ緩衝液（ｐＨ８．２０）におけるＮＨＥ。

（図３４〜３７を参照）

（方法２）
［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＰＦ_６）_２の調製
ＮＨ_４ＰＦ_６（２００ｍｇ、１．２７ｍｍｏｌ）及び１−メチルイミダゾール（２００ｍｇ、２．４４ｍｍｏｌ）を、［Ｒｕ^ＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（ＯＨ）］ＰＦ_６（１５０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を含有する無水エタノール（５ｍＬ）溶液に添加した。その混合物を１時間環流させた。室温への冷却後、黒紫色の固体を濾過し、エタノール（３×５ｍＬ）で洗浄して、次に、空気乾燥させた。収量（１６０ｍｇ）。アセトンにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝２２７．４、[Ｍ]^２＋。

［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ_３）_２の調製
[^ｎＢｕ_４Ｎ]ＮＯ_３（２００ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）アセトン（２ｍＬ）の溶液を、［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＰＦ_６）_２（１００ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）アセトン（８ｍＬ）に徐々に添加し、その混合物を３０分間そのままの状態で放置した。結果として生じた紫色の沈殿物を濾過し、アセトン（３×５ｍＬ）で洗浄した後、真空下で乾燥させた。収量（７０ｍｇ）。メタノールにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝２２７．３、[Ｍ]^２＋。Ｒｕ^{ＩＩＩ／ＩＩ}のＥ_１／２＝＋０．０７Ｖ ｖｓＮＨＥ。ＵＶ−Ｖｉｓ（Ｈ_２Ｏ）：λ_ｍａｘ［ｎｍ］（ε［ｍｏｌ^−１ｄｍ^３ｃｍ^−１］）２８９（５１７５）、３１４ｓｈ（３９２０）、５８３（８５５）。
(実施例８Ａ)

（図３８〜３９及び３９ａ〜ｃを参照）
［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＣＦ_３ＳＯ_３）_２
［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＣＦ_３ＳＯ_３）_２の調製
最小量のアセトンに溶解した［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＰＦ_６）_２（２００ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）に、激しく撹拌しながら正味のトリフリン酸（０．５ｍＬ）を添加した。次に、紫色の溶液を、ジエチルエーテル（４００ｍＬ）に液滴で添加した。紫色の沈殿物を濾過して真空下で乾燥させた。収量（１００ｍｇ）。メタノールにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝２７７．５、[Ｍ]^２＋。Ｒｕ^{ＩＩＩ／ＩＩ}のＥ_１／２＝＋０．０９Ｖ ｖｓ緩衝液（ｐＨ８．２０）におけるＮＨＥ。

（図４０〜４３を参照）

［Ｒｕ^ＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−Ｍｅ_２Ｎ−ｐｙ）］ＰＦ_６の調製
４−ジメチルアミノピリジン（０．３ｇ、２．４ｍｍｏｌ）を、［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ＯＨ）］ＰＦ_６（１５０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）無水エタノール（１０ｍＬ）に添加した。その溶液を、１０個のＺｎアマルガム断片が存在する中アルゴン下で２４時間環流させた。室温への冷却後、オレンジ色の固体を濾過し、アセトン／ジエチルエーテルから再結晶させた。収量（１２０ｍｇ）。アセトンにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝４９４．１、[Ｍ]^＋。Ａｎａｌ．ｃａｌｃｄ．ｆｏｒＣ_２１Ｈ_３８Ｎ_５Ｏ_２ＰＦ_６Ｒｕ：Ｃ，３９．５０；Ｈ，６．００；Ｎ，１０．９７。Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，３９．７３；Ｈ，６．０５；Ｎ，１０．８１。

［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−Ｍｅ_２Ｎ−ｐｙ）］（ＮＯ_３）_２・Ｈ_２Ｏの調製
ＡｇＣＦ_３ＳＯ_３（５０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）アセトン（２ｍＬ）の溶液を、［Ｒｕ^ＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−Ｍｅ_２Ｎ−ｐｙ）］ＰＦ_６（１２０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）アセトン（５ｍＬ）のオレンジ色の溶液に徐々に添加した。５分後、紫色の溶液を濾過して銀を取り除いた。次に、[^ｎＢｕ_４Ｎ]ＮＯ_３（１５０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を添加して紫色の沈殿物を生じ、その沈殿物を濾過し、アセトンで洗浄して真空乾燥させた。収量（８０ｍｇ）。メタノールにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝２４７．３、[Ｍ]^２＋。Ｒｕ^{ＩＩＩ／ＩＩ}のＥ_１／２＝＋０．０７Ｖ ｖｓ緩衝液（ｐＨ８．２０）におけるＮＨＥ。Ａｎａｌ．ｃａｌｃｄ．ｆｏｒＣ_２１Ｈ_３８Ｎ_７Ｏ_８Ｒｕ・１Ｈ_２Ｏ：Ｃ，３９．６８；Ｈ，６．３４；Ｎ，１５．４２。Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，３９．９５；Ｈ，６．４０；Ｎ，１５．６１。

（図４４〜４８を参照）

［Ｒｕ^ＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−^ｔＢｕｐｙ）］ＰＦ_６の調製
４−ｔｅｒｔ−ブチルピリジン（０．６ｇ、４．１ｍｍｏｌ）を［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ＯＨ）］ＰＦ_６（３００ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）無水エタノール（４５ｍＬ）に添加した。その溶液を、３０個のＺｎアマルガム断片が存在する中アルゴン下で２４時間環流させた。室温への冷却後、その溶液を濾過し、次に、乾燥状態まで蒸発させた。茶色の固体を濾過し、ジエチルエーテルで洗浄した。収量（２９０ｍｇ）。アセトンにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝５０７．３、[Ｍ]^＋。Ａｎａｌ．ｃａｌｃｄ．ｆｏｒＣ_２３Ｈ_４１Ｎ_４Ｏ_２ＰＦ_６Ｒｕ：Ｃ，４２．３９；Ｈ，６．３４；Ｎ，８．６０。Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，４２．５７；Ｈ，６．４０；Ｎ，８．６８。

［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−^ｔＢｕｐｙ）］（ＰＦ_６）_２の調製
（ＮＨ_４）_２[Ｃｅ（ＮＯ_３）_６]（２０２ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）アセトン（１０ｍＬ）の溶液を、［Ｒｕ^ＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−ｔｅｒｔ−ブチルピリジン）］ＰＦ_６（２００ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）を含有するオレンジ色のアセトン（５ｍＬ）溶液に徐々に添加した。３分後、紫色の固体を濾過し、アセトンで洗浄した。その紫色の固体を、次に、脱イオン水（１０ｍＬ）において溶解した。濾過した溶液に、ＮＨ_４ＰＦ_６（２００ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ）を添加して紫色の沈殿物を生じ、その沈殿物を濾過して脱イオン水で洗浄した。収量（１５０ｍｇ）。アセトンにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝２５３．７、[Ｍ]^２＋。Ａｎａｌ．ｃａｌｃｄ．ｆｏｒＣ_２３Ｈ_４１Ｎ_４Ｏ_２Ｐ_２Ｆ_１２Ｒｕ：Ｃ，３４．６８；Ｈ，５．１９；Ｎ，７．０３。Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，３４．９０；Ｈ，５．１４；Ｎ，７．０９。

［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−^ｔＢｕｐｙ）］（ＮＯ_３）_２・３Ｈ_２Ｏの調製
[^ｎＢｕ_４Ｎ]ＮＯ_３（１８３ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）アセトン（２ｍＬ）の溶液を、［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−^ｔＢｕｐｙ）］（ＰＦ_６）_２（１２０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）アセトン（５ｍＬ）の紫色の溶液に徐々に添加した。紫色の沈殿物を濾過し、アセトンで洗浄した後真空乾燥させた。収量（６５ｍｇ）。メタノールにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝２５３．７、[Ｍ]^２＋。Ｒｕ^{ＩＩＩ／ＩＩ}のＥ_１／２＝＋０．１８Ｖ ｖｓ緩衝液（ｐＨ８．２０）におけるＮＨＥ。Ａｎａｌ．ｃａｌｃｄ．ｆｏｒＣ_２３Ｈ_４１Ｎ_６Ｏ_８Ｒｕ・３Ｈ_２Ｏ：Ｃ，４０．３４；Ｈ，６．９２；Ｎ，１２．２７。Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，４０．４２；Ｈ，６．７２；Ｎ，１２．２９。

（図４９及び５０を参照）

［Ｒｕ^ＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（イソキノリン）］ＰＦ_６の調製
イソキノリン（０．４ｇ、３．８ｍｍｏｌ）を［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ＯＨ）］ＰＦ_６（２００ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）無水エタノール（３０ｍＬ）に添加した。その溶液を、２０個のＺｎアマルガム断片が存在する中アルゴン下で２４時間環流させた。結果として生じた茶色の溶液を冷却した後濾過した。濾液をｃａ１ｍＬまで濃縮させた。ジエチルエーテルを添加して茶色の沈殿物を濾過し、ジエチルエーテルで洗浄した後に空気乾燥させた。収量（１９０ｍｇ）。アセトンにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝５０１．３、[Ｍ]^＋。

［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（イソキノリン）］（ＰＦ_６）_２の調製
（ＮＨ_４）_２[Ｃｅ（ＮＯ_３）_６]（１９４ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）アセトン（１０ｍＬ）の溶液を、［Ｒｕ^ＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（イソキノリン）］ＰＦ_６（１９０ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）を含有するオレンジ色のアセトン（５ｍＬ）溶液に徐々に添加した。３分後、紫色の固体を濾過し、アセトンで洗浄した。その紫色の固体を、次に、１０ｍＬの脱イオン水において溶解し、その溶液を濾過した。ＮＨ_４ＰＦ_６（１９２ｍｇ、１．１８ｍｍｏｌ）を添加して紫色の沈殿物を生じ、その沈殿物を濾過して脱イオン水で洗浄した。収量（１２０ｍｇ）。アセトンにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝２５０．７、[Ｍ]^２＋。

［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（イソキノリン）］（ＮＯ_３）_２の調製
[^ｎＢｕ_４Ｎ]ＮＯ_３（２７４ｍｇ、０．９０ｍｍｏｌ）アセトン（３ｍＬ）の溶液を、［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（イソキノリン）］（ＰＦ_６）_２（２４０ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）アセトン（８ｍＬ）の紫色の溶液に徐々に添加した。紫色の沈殿物を濾過し、アセトンで洗浄して真空乾燥させた。収量（１２０ｍｇ）。メタノールにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝２５０．７、[Ｍ]^２＋。Ｒｕ^{ＩＩＩ／ＩＩ}のＥ_１／２＝＋０．２１Ｖ ｖｓ緩衝液（ｐＨ８．２０）におけるＮＨＥ。

（図５１〜５６参照）

[Ｒｕ^ＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（トロポロン）（ｐｙ）］（ＰＦ_６）の調製
５ｍＬのＨ_２Ｏにおける[Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）Ｃｌ_３]（１２０ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）とトロポロン（４７ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）との黄色の混合物を、空気中で２時間環流させた。結果として生じる深緑の溶液を濾過し、ＮＨ_４ＰＦ_６（３２３ｍｇ、１．９８ｍｍｏｌ）を添加して緑の沈殿物を生じ、その沈殿物を濾過して脱イオンしたＨ_２Ｏで洗浄した。緑色の固体を１０ｍＬのエタノールにおいて懸濁し、ピリジン（４００μＬ、４．９５ｍｍｏｌ）を添加した。次に、その混合物を、数個の亜鉛アマルガム断片が存在する中アルゴン下で一晩環流させた。結果として生じる茶色の溶液を冷却し、茶色の沈殿物を濾過し、エタノールで洗浄した後に空気乾燥させた。収量：２６％、５２ｍｇ。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝４７３．３、[Ｍ]^＋。

［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（トロポロン）（ｐｙ）］（ＮＯ_３）_２の調製
ＡｇＣＦ_３ＳＯ_３（３２ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）アセトン（３ｍＬ）の溶液を、［Ｒｕ^ＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（トロポロン）（ｐｙ）］ＰＦ_６（５２ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）の茶色のアセトン溶液（５ｍＬ）に徐々に添加した。茶色の溶液は直ちに緑色へと変化し、その混合物を暗闇の中３０分間撹拌した。溶液中の銀金属を遠心分離によって取り除き、次に、緑色の溶液をｃａ８０ｍＬのジエチルエーテルに徐々に添加した。濾過によって緑色の沈殿物を回収し、ジエチルエーテルで洗浄した。次に、その沈殿物を５ｍＬのアセトンにおいて溶解し、[^ｎＢｕ_４Ｎ]ＮＯ_３（７７ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）アセトン（２ｍＬ）の溶液を徐々に添加した。緑色の沈殿物を濾過し、アセトンで洗浄して真空乾燥させた。収量８６％、４１ｍｇ。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝２３６．８、[Ｍ]^２＋。Ｒｕ^{ＩＩＩ／ＩＩ}のＥ_１／２＝０．２５Ｖ ｖｓ緩衝液（ｐＨ８．２０）におけるＮＨＥ。

（図５７〜６１を参照）

[Ｒｕ^ＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（トロポロン）（４−ｔ−ブチル−ｐｙ）］（ＰＦ_６）の調製
５ｍＬのＨ_２Ｏにおける[Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）Ｃｌ_３]（１２０ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）とトロポロン（４７ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）との黄色の混合物を、空気中で２時間環流させた。結果として生じる深緑の溶液を濾過し、ＮＨ_４ＰＦ_６（３２３ｍｇ、１．９８ｍｍｏｌ）を添加して緑色の沈殿物を生じ、その沈殿物を濾過して脱イオンしたＨ_２Ｏで洗浄した。緑色の固体を１０ｍＬのエタノールにおいて懸濁し、４−ｔｅｒｔ−ブチルピリジン（４００μＬ、２．７３ｍｍｏｌ）を添加した。次に、その混合物を、数個の亜鉛アマルガム断片が存在する中アルゴン下で一晩環流させた。結果として生じる茶色の溶液を冷却し、茶色の沈殿物を濾過し、エタノールで洗浄した後に空気乾燥させた。収量：９３％、２００ｍｇ。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝５２９．３、[Ｍ]^＋。

［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（トロポロン）（４−ｔ−ブチル−ｐｙ）］（ＮＯ_３）_２の調製
ＡｇＣＦ_３ＳＯ_３（９２ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）アセトン（５ｍＬ）の溶液を、［Ｒｕ^ＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（トロポロン）（４−ｔ−ブチル−ｐｙ）］ＰＦ_６（２００ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）の茶色のアセトン溶液（１０ｍＬ）に徐々に添加した。茶色の溶液は直ちに緑色へと変化し、その混合物を暗闇の中３０分間撹拌した。溶液中の銀金属を遠心分離によって取り除き、次に、緑色の溶液をｃａ８０ｍＬのジエチルエーテルに徐々に添加した。濾過によって緑色の沈殿物を回収し、ジエチルエーテルで洗浄した。次に、その沈殿物を５ｍＬのアセトンにおいて溶解し、[^ｎＢｕ_４Ｎ]ＮＯ_３（２７１ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）アセトン（５ｍＬ）の溶液を徐々に添加した。緑色の沈殿物を濾過し、アセトンで洗浄して真空乾燥させた。収量：３３％、６５ｍｇ。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝２６４．８、[Ｍ^２＋]。Ｒｕ^{ＩＩＩ／ＩＩ}のＥ_１／２＝０．２３Ｖ ｖｓ緩衝液（ｐＨ８．２０）におけるＮＨＥ。

（図６２〜６３及び６３ａ〜ｃを参照）

［Ｒｕ^ＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３，４−Ｍｅ_２ｐｙ）］ＰＦ_６の調製
３，４−ルチジン（０．３ｇ、２．８ｍｍｏｌ）を、［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ＯＨ）］ＰＦ_６（３００ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）無水エタノール（１０ｍＬ）に添加した。その溶液を、Ｚｎアマルガム（１０個の断片）が存在する中アルゴン下で２４時間環流させた。室温への冷却後、オレンジ色の固体を濾過し、アセトン／ジエチルエーテルから再結晶させた。収量（３００ｍｇ）。

［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３，４−Ｍｅ_２ｐｙ）］（ＣＦ_３ＳＯ_３）_２の調製
ＡｇＣＦ_３ＳＯ_３（１３５ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）アセトン（２ｍＬ）の溶液を、［Ｒｕ^ＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３，４−Ｍｅ_２ｐｙ）］（ＰＦ_６）（３００ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）アセトン（１０ｍＬ）のオレンジ色の溶液に徐々に添加した。５分後、紫色の溶液を濾過し、ｃａ１ｍＬまで濃縮した。ジエチルエーテル（５０ｍＬ）の添加によって紫色の固体が生じ、その固体を回収してアセトン／ジエチルエーテルから再結晶した。収量（３００ｍｇ）。次に、紫色の固体（３００ｍｇ）を最小量のアセトンにおいて再溶解した後、激しく撹拌しながら正味のトリフリン酸（０．５ｍＬ）を添加した。次に、紫色の溶液を、ジエチルエーテル（５００ｍＬ）に徐々に添加した。紫色の沈殿物を濾過して真空下で乾燥させた。収量（１５０ｍｇ）。アセトンにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝２３９．７、[Ｍ]^２＋。Ｒｕ^{ＩＩＩ／ＩＩ}のＥ_１／２＝＋０．１７Ｖ ｖｓ緩衝液（ｐＨ８．２０）におけるＮＨＥ。

（図６４〜６５及び６５ａ〜ｃを参照）

［Ｒｕ^ＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３ＯＨｐｙ）］（ＰＦ_６）の調製
３−ヒドロキシピリジン（０．１ｇ、１．０５ｍｍｏｌ）を、［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ＯＨ）］ＰＦ_６（２００ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）無水エタノール（１０ｍＬ）に添加した。その溶液を、Ｚｎアマルガム（１０個の断片）が存在する中アルゴン下で１６時間環流させた。室温への冷却後、オレンジ色の溶液を濾過し、ｃａ１ｍＬまで濃縮した。ジエチルエーテル（５０ｍＬ）の添加によってオレンジ色の固体が生じ、その固体を濾過してアセトン／ジエチルエーテルから再結晶した。収量（１６０ｍｇ）。

［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３−ＯＨｐｙ）］（ＮＯ_３）_２の調製
ＡｇＣＦ_３ＳＯ_３（７０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）アセトン（２ｍＬ）の溶液を、［Ｒｕ^ＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３−ＯＨｐｙ）］（ＰＦ_６）（１６０ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）アセトン（８ｍＬ）のオレンジ色の溶液に徐々に添加した。５分後、紫色の溶液を濾過し、ｃａ１ｍＬまで濃縮した。ジエチルエーテル（５０ｍＬ）の添加によって紫色の固体が生じ、その固体を濾過してアセトン／ジエチルエーテルから再結晶した。収量（１５０ｍｇ）。次に、紫色の固体（１５０ｍｇ）をアセトン（８ｍＬ）において再溶解した後、[^ｎＢｕ_４Ｎ]ＮＯ_３（２００ｍｇ）アセトン（２ｍＬ）の溶液を徐々に添加した。紫色の沈殿物を濾過して真空下で乾燥させた。収量（１００ｍｇ）。メタノールにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝２３３．８、[Ｍ]^２＋。Ｒｕ^{ＩＩＩ／ＩＩ}のＥ_１／２＝＋０．１４Ｖ ｖｓ緩衝液（ｐＨ８．２０）におけるＮＨＥ。

（図６６〜６７及び６７ａ〜ｃを参照）

［Ｒｕ^ＩＩＩ（ＴＭＣ）（ＮＣＳ）_２］（ＣＩＯ_４）の調製
紫色の固体を、文献に記載の方法に従い調製した（Ｃｈｅ，Ｃ．Ｍ．；Ｋｗｏｎｇ，Ｓ．Ｓ．；Ｐｏｏｎ Ｃ．Ｋ．Ｉｎｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９８５，２４，１６０１−１６０２）。

この実験の目的は、［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ_３）_２を用いたウェットテストによるクレアチンキナーゼ活性の測定を実証することであった。

（酵素混合物）
酵素混合物を、以下の組成物：
０．１Ｍ イミダゾール（酢酸（３７°Ｃ、ｐＨ７．１）で平衡化）
４０ｍＭ ［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ_３）_２
２０ｍＭ ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド
５ｍｇ／ｍｌ ジアホラーゼ
５ｍｇ／ｍｌ グルコース６−リン酸脱水素酵素
２０ｍｇ／ｍｌ ヘキソキナーゼ
２０ｍＭ Ｄ−グルコース
６．２５ｍＭ アデノシン二リン酸（二ナトリウム塩）
３０ｍＭ 酢酸マグネシウム
５ｍＭ ＥＤＴＡ（四ナトリウム塩）
を用いて調製した。

（ＣＫ溶液）
凍結乾燥したヒト組換えＣＫ試料をＡｓａｈｉ Ｋａｓｅｉ社から入手した。緩衝剤中貯蔵ＣＫ液を６３．９ｋＵ／Ｌで作製し、緩衝剤で希釈して、異なるＣＫ活性を有した試料を得た。ＣＫ試料の活性を、Ｓｐａｃｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｓｃｈｉａｐｐａｎｅｌｌｉ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．社）を用いて決定した。

（ウェットテスト手順）
９．６μＬの酵素混合物をエッペンドルフに配置し、そこに１．２μＬのＣＫ試料及び１．２μＬのＮ−アセチルシステイン（２００ｍＭ）を添加した。そのエッペンドルフを３７°Ｃのヒートブロック上に３分間置き、Ｎ−アセチルシステインの存在下でＣＫをインキュベート、従って、ＣＫを活性化した。次に、その混合物を、３７°Ｃのクレアチンリン酸１．２μＬ（１０００ｍＭ）に添加した。

次に、１２μＬの酵素／ＣＫ混合物を電極の上に直ちに配置し、Ａｕｔｏｌａｂ（ＰＧＳＴＡＴ１２）に結合されたマルチプレクサー（ＭＸ４５２、Ｓｔｅｒｎｈａｇｅｎ ｄｅｓｉｇｎ）を使用してクロノアンペロメトリー検査を開始した。

酸化電流を、１５時点（０、１４、２８、４２、５６、７０、８４、９８、１１２、１２６、１４０、１５４、１６８、１８２、及び１９６秒）にて０．１５Ｖで測定し、還元電流を、最後の時点（２１０秒）にて−０．４５Ｖで測定した。過度電流を１秒間測定した。各試料を二度検査した。

（分析）
ＧＰＥＳソフトウェアからの出力値を、データをスプレッドシートに変換するＤａｔａＡｎａｌ２−１７プログラムを使用して分析した。次に、これらのデータをデータ分析のテンプレートに転送した。

（結果）
各ＣＫ試料に関して、センサの応答を時間に対してプロットした（図６８を参照）。応答の初速度（１４〜２８秒という時間に対する電流の変化）を各試料に対して決定し、速度（ｎＡ／ｍｉｎ）ｖｓＣＫ活性（ｋＵ／Ｌ）のプロットを作製した。参照方法によって決定されるＣＫ活性に対する応答速度の一次従属性が存在した。

この実験の目的は、［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ_３）_２を用いたウェットテストによるクレアチニンの測定を実証することであった。

（酵素混合物）
酵素混合物を、以下の組成物：
０．１Ｍ Ｔｒｉｓ（ＨＣｌ（室温、ｐＨ７．１）で平衡化）
２０ｍＭ ［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ_３）_２
１０ｍＭ ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド
５ｍｇ／ｍｌ ジアホラーゼ
８０ｍｇ／ｍｌ サルコシン脱水素酵素
１２ｍｇ／ｍｌ クレアチナーゼ
２４ｍｇ／ｍＬ クレアチニナーゼ
を用いて調製した。

（クレアチニン溶液）
緩衝剤中１０ｍＭのクレアチニンの貯蔵液を作製して緩衝剤で希釈し、異なる濃度のクレアチニンを有する試料を生じた。試料は、使用するまで氷上で保管した。

（ウェットテスト手順）
１２μＬの酵素混合物をエッペンドルフに配置し、そのエッペンドルフを次に３７°Ｃのヒートブロック上に３分間置いた。次に、その混合物を１．２μｌのクレアチニン試料に添加し、その試料も３７°Ｃのヒートブロック上でインキュベートした。次に、１２μＬの酵素／クレアチニン混合物を電極の上に直ちに配置し、Ａｕｔｏｌａｂ（ＰＧＳＴＡＴ１２）に結合されたマルチプレクサー（ＭＸ４５２、Ｓｔｅｒｎｈａｇｅｎ ｄｅｓｉｇｎ）を使用してクロノアンペロメトリー検査を開始した。

酸化電流を、１５時点（０、１４、２８、４２、５６、７０、８４、９８、１１２、１２６、１４０、１５４、１６８、１８２、及び１９６秒）にて０．１５Ｖで測定し、還元電流を、最後の時点（２１０秒）にて−０．４５Ｖで測定した。過度電流を１秒間測定した。各試料を二度検査した。

（分析）
ＧＰＥＳソフトウェアからの出力値を、ＤａｔａＡｎａｌ２−１７プログラムを使用して分析した。次に、これらのデータをデータ分析のテンプレートに転送した。

（結果）
センサの応答をクレアチニン濃度に対してプロットした。１９６秒という最後の時点でのクレアチニンに対する較正プロットに関して、スロープ及びインターセプトが図６９に与えられている。

この実験の目的は、［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ_３）_２を用いて調製した凍結乾燥したセンサを使用して、全血におけるグルコースの測定を実証することであった。

（酵素混合物）
酵素混合物を、以下の組成物：
０．１Ｍ Ｔｒｉｓ（ＨＣｌ（室温、ｐＨ９．０）で平衡化）
１０％ｗ／ｖＫＣｌ
４０ｍＭ ［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ_３）_２
１０ｍＭ ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド
４．２ｍｇ／ｍｌ ＰｄＲ
１０ｍｇ／ｍｌ グルコース脱水素酵素
を用いて調製した。

（生成分配及び凍結乾燥）
０．４μＬ／ウェルの酵素混合物を、生成ディスペンサーを使用してセンサのウェル２内に分配した。３つの他の溶液を、他のウェル内に分配した。これらの溶液を使用した他のメディエーター及びこれらのセンサの応答は、ここでは報告されない。次に、分配されたセンサのシートを、乾燥凍結するためにＬＳ４０凍結乾燥機（Ｓｅｖｅｒｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ）内に配置した。使用したプログラムは、Ｎｉｇｈｔ２であった。センサは、生産単位ＤＥＶ３４５を形成した。

（全血試料）
新鮮な全血試料（Ｌｉヘパリン抗凝血剤）を入手したままの状態で使用した。この試料の一定分量を２９００ＲＣＦ（Ｌａｂｎｅｔ １６１８）で５分間遠心分離し、Ｓｐａｃｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｓｃｈｉａｐｐａｎｅｌｌｉ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．社）を使用して血漿をグルコース濃度に対して検査した。そのグルコース濃度を、５．１ｍＭになるよう決定した。

さらに、最初の全血試料の一定分量に１Ｍのグルコース溶液を加えて、より高いグルコース濃度を得た。各加えられた一定分量を遠心分離して、グルコース濃度に対して血漿を検査した。一定分量の遠心分離、脱脂した血清（Ｓｃｉｐａｃ、Ｓ１３９）との一部の血漿の置き換え、及び、試料を再構築するための転化によって、より低いグルコース濃度を有した全血試料を得た。

（テスト手順）
２０μＬの全血試料を１つの電極あたり使用した。試料の添加後、Ｕｎｉｓｃａｎ ｍｕｌｔｉ−ｐｏｔｅｎｔｉｏｓｔａｔを使用してクロノアンペロメトリー検査を開始した。酸化電流を、１５時点（０、１４、２８、４２、５６、７０、８４、９８、１１２、１２６、１４０、１５４、１６８、１８２、及び１９６秒）にて０．１５Ｖで測定し、還元電流を、最後の時点（２１０秒）にて−０．４５Ｖで測定した。過度電流を１秒間測定した。各試料を二度検査した。

（分析）
ＧＰＥＳソフトウェアからの出力値を、ＤａｔａＡｎａｌ２−１７プログラムを使用して分析した。次に、これらのデータをデータ分析のテンプレートに転送した。

（結果）
センサの応答をグルコース濃度に対してプロットした（図７０を参照）。９８秒にて、電流と全血グルコース濃度との間に良い相関関係を得た（勾配＝６５．７１ｎＡ／秒、インターセプト＝２７４．１８ｎＡ）。

（グルコース）
この実施例では、実施例１９の全血を唾液と置き換えた。結果は、図７１に示されている。

Claims (18)

1. 以下の化学式１９
   

   

   の複合体の使用であって、
   Ｍは、ルテニウム又はオスミウムであり、０、１、２、３、又は４の酸化状態を有し；
   ｗ、ｘ、及びｙのそれぞれは、整数１乃至４から独立して選択される整数であり；
   ｍは、整数−５乃至＋４から選択される整数であり；
   ｎは、整数１乃至５から選択される整数であり；
   ｚは、整数−２乃至＋１から選択される整数であり；
   Ａは、任意選択で１乃至８個の置換基によって置換される窒素原子を１、２、又は３個有する５−又は６−員芳香環の単座配位子であり、前記置換基のそれぞれが、置換型若しくは非置換型のアルキル、アルケニル、又はアリール基、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＯ_２、−ＣＮ、−ＣＯ_２Ｈ、−ＳＯ_３Ｈ、−ＮＨＮＨ_２、−ＳＨ、アリール、アルコキシカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、−ＯＨ、アルコキシ、−ＮＨ_２、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルカノイルアミノ、アリールカルボキシアミド、ヒドラジノ、アルキルヒドラジノ、ヒドロキシルアミノ、アルコキシアミノ、及び、アルキルチオからなる群から選択されるか、又は、ＡはＮＣＳであり；
   Ｂは、化学式Ｒ^１ＲＮ（Ｃ_２Ｈ_４ＮＲ）_ＷＲ^１を有した直鎖状の、又は、化学式（ＲＮＣ_２Ｈ_４）_ｖ、（ＲＮＣ_２Ｈ_４）_ｐ（ＲＮＣ_３Ｈ_６）_ｑ、若しくは、[（ＲＮＣ_２Ｈ_４）（ＲＮＣ_３Ｈ_６）]_ｓを有した環状の二座、三座、四座、五座、又は六座の配位子であって、
   ｗは、整数１乃至５から選択される整数であり、
   ｖは、整数３乃至６から選択される整数であり、
   ｐ及びｑのそれぞれは、整数１乃至３から独立して選択される整数であり、それによって、ｐとｑの和は４、５、又は６であり、
   ｓは、２又は３のどちらかであり、さらに、
   Ｒ及びＲ^１のそれぞれは、独立して水素又はアルキルであり；
   Ｃは、Ｂ以外の配位子であり；かつ、
   Ｘは、対イオンであり；
   酸化還元メディエーターとしての［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ｐｙ）］（ＮＯ_３）_２を除いて、配位原子の数は６である、使用。
2. 化学式１９の複合体における配位子Ａが、ＮＣＳ、イミダゾール、ピラゾール、チアゾール、オキサゾール、イソキノリン、置換ピリジル、及びそれらの異性体からなる群から選択される、請求項１に記載の使用。
3. 化学式１９の複合体における配位子Ａが、イミダゾール、ピラゾール、チアゾール、オキサゾール、及びそれらの異性体からなる群から選択されるか、又は、３個の窒素ヘテロ原子を有する５−又は６−員芳香環の配位子であるか、若しくは、該配位子を含むか、又は、グアニン若しくはアデニンである、請求項１に記載の使用。
4. 化学式１９の複合体における配位子Ａが、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_１−Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、及び、ハロゲンからなる群から選択された１又は複数の置換基によって置換される、請求項１に記載の使用。
5. 化学式１９の複合体における配位子Ａが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル、メトキシ、エトキシ、エテニル、プロペニル、ブテニル、エチニル、及び、プロピニルからなる群から選択された１又は複数の置換基によって置換される、請求項４に記載の使用。
6. 化学式１９の複合体における配位子Ｂが、化学式Ｒ^１ＲＮ（Ｃ_２Ｈ_４ＮＲ）_ｗＲ^１を有した直鎖状であるか、又は、化学式（ＲＮＣ_２Ｈ_４）_ｖ、（ＲＮＣ_２Ｈ_４）_ｐ（ＲＮＣ_３Ｈ_６）_ｑ、若しくは、[（ＲＮＣ_２Ｈ_４）（ＲＮＣ_３Ｈ_６）]_ｓを有した環状である二座、三座、又は四座の配位子であって、ｗは整数１乃至３から選択される整数であり、ｖは３又は４であり、ｐ及びｑのそれぞれは、整数１乃至３から独立して選択される整数であり、それによって、ｐとｑの和は４であり、さらに、ｓは２又は３であり得る、請求項１乃至５のいずれか1項に記載の使用。
7. Ｂが、１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン、１，１，４，７，１０，１０−ヘキサメチルトリエチレンテトラミン、１，２−ジメチルエチレンジアミン、又は、１，１，２，２−テトラメチルエチレンジアミンである、請求項６に記載の使用。
8. 化学式１９の複合体における配位子Ｃが、アミン配位子、ＣＯ、ＣＮ、ハロゲン、アセチルアセトネート（ａｃａｃ）、３−ブロモ−アセチルアセトネート（Ｂｒａｃａｃ）、オキサレート、ピリジン、又は、５−クロロ−８−ヒドロキシキノリンからなる群から選択される、請求項１乃至７のいずれか1項に記載の使用。
9. 化学式１９の複合体が、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（Ｎ−メチルイミダゾール）］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（４−メチルピリジン）］Ｃｌ_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（３−クロロピリジン）］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（イソニコチンアミド）］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）ピラジン］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（4−メトキシピリジン）］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（４−ジメチルアミノピリジン）］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（４−ｔ−ブチル−ピリジン）］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（イソキノリン）］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（トロポロン）（ピリジン）］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（トロポロン）（４−ｔ−ブチル−ピリジン）］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（３，４−ジメチルピリジン）］（ＣＦ_３ＳＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（３−ヒドロキシピリジン）］（ＮＯ_３）_２、又は、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，８，１１−テトラメチル−１，４，８，１１−テトラ−アザシクロテトラデカン）（ＮＣＳ）_２］（ＣｌＯ_４）である、請求項１に記載の使用。
10. 化学式１９の複合体が、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（Ｎ−メチルイミダゾール）］（ＰＦ_６）_２、又は、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（Ｎ−メチルイミダゾール）］（ＮＯ_３）_２である、請求項１に記載の使用。
11. バイオセンサにおける、請求項１乃至１０のいずれか1項に記載の化学式１９の複合体の使用。
12. 分析物を測定する検出システムであって、
    （ａ）前記分析物を含有する試料を、酵素、及び、請求項１乃至１１のいずれか１項に記載の化学式１９の酸化還元メディエーターを含有する溶液と接触させるステップ；
    （ｂ）前記酵素を前記分析物に対して作用させる状況下で、前記接触させた試料をインキュベートするステップ；
    （ｃ）ステップ（ｂ）のインキュベートした試料を、測定可能な信号において変化をもたらす状況にさらすステップ；及び
    （ｄ）前記測定可能な信号を測定するステップ；
    を含む検出システム。
13. 以下の化学式２０による複合体であって、
    

    

    Ｍは、ルテニウム又はオスミウムであり、０、１、２、３、又は４の酸化状態を有し；
    ｗ、ｘ、及びｙのそれぞれは、整数１乃至４から独立して選択される整数であり；
    ｍは、整数−５乃至＋４から選択される整数であり；
    ｎは、整数１乃至５から選択される整数であり；
    ｚは、整数−２乃至＋１から選択される整数であり；
    Ａは、任意選択で１乃至８個の置換基によって置換される窒素原子を１、２、又は３個有する５−又は６−員芳香環の単座配位子であり、前記置換基のそれぞれが、置換型若しくは非置換型のアルキル、アルケニル、又はアリール基、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＯ_２、−ＣＮ、−ＣＯ_２Ｈ、−ＳＯ_３Ｈ、−ＮＨＮＨ_２、−ＳＨ、アリール、アルコキシカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、−ＯＨ、アルコキシ、−ＮＨ_２、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルカノイルアミノ、アリールカルボキシアミド、ヒドラジノ、アルキルヒドラジノ、ヒドロキシルアミノ、アルコキシアミノ、及び、アルキルチオからなる群から選択され；
    Ｂは、化学式Ｒ^１ＲＮ（Ｃ_２Ｈ_４ＮＲ）_ＷＲ^１を有した直鎖状の、又は、化学式（ＲＮＣ_２Ｈ_４）_ｖ、（ＲＮＣ_２Ｈ_４）_ｐ（ＲＮＣ_３Ｈ_６）_ｑ、若しくは、[（ＲＮＣ_２Ｈ_４）（ＲＮＣ_３Ｈ_６）]_ｓを有した環状の二座、三座、四座、五座、又は六座の配位子であって、
    ｗは、整数１乃至５から選択される整数であり、
    ｖは、整数３乃至６から選択される整数であり、
    ｐ及びｑのそれぞれは、整数１乃至３から独立して選択される整数であり、それによって、ｐとｑの和は４、５、又は６であり、
    ｓは、２又は３のどちらかであり、さらに、
    Ｒ及びＲ^１のそれぞれは、独立して水素又はアルキルであり；
    Ｃは、Ａ又はＢ以外の配位子であり；かつ、
    Ｘは、対イオンであり；
    ［Ｒｕ^ＩＩＩ（Ｍｅ_３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ｐｙ）］（ＮＯ_３）_２を除いて、配位原子の数は６である、複合体。
14. Ａが、請求項２乃至５のいずれか１項に記載のＡである、請求項１３に記載の複合体。
15. Ｂが、請求項６及び７のいずれか１項に記載のＢである、請求項１３又は１４に記載の複合体。
16. Ｃが、アミン配位子、ＣＯ、ＣＮ、ハロゲン、アセチルアセトネート（ａｃａｃ）、３−ブロモ−アセチルアセトネート（Ｂｒａｃａｃ）、オキサレート、ピリジン、及び、５−クロロ−８−ヒドロキシキノリンからなる群から選択される、請求項１３乃至１５のいずれか1項に記載の複合体。
17. ［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（Ｎ−メチルイミダゾール）］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（４−メチルピリジン）］Ｃｌ_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（３−クロロピリジン）］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（イソニコチンアミド）］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）ピラジン］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（4−メトキシピリジン）］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（４−ジメチルアミノピリジン）］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（４−ｔ−ブチル−ピリジン）］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（イソキノリン）］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（トロポロン）（ピリジン）］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（トロポロン）（４−ｔ−ブチル−ピリジン）］（ＮＯ_３）_２、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（３，４−ジメチルピリジン）］（ＣＦ_３ＳＯ_３）_２、又は、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（３−ヒドロキシピリジン）］（ＮＯ_３）_２である、請求項１３に記載の複合体。
18. ［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（Ｎ−メチルイミダゾール）］（ＰＦ_６）_２、又は、［Ｒｕ^ＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（Ｎ−メチルイミダゾール）］（ＮＯ_３）_２である、請求項１３に記載の複合体。

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