JP2010530357A - ＩＬ−１７ＡおよびＩｌ−１７Ｆの両方に結合する抗体ならびにそれを使用する方法 - Google Patents

ＩＬ−１７ＡおよびＩｌ−１７Ｆの両方に結合する抗体ならびにそれを使用する方法 Download PDF

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Abstract

本発明は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの活性の阻止、阻害、低減、拮抗または中和に関する。ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆは炎症プロセスおよびヒト疾患に関与するサイトカインである。本発明は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに結合する抗体、該抗体を産生するハイブリドーマならびに炎症において同抗体を使用する方法に関する。一実施形態において、上記抗体は、配列番号２のアミノ酸配列もしくはその断片または配列番号４のアミノ酸配列もしくはその断片を含み、かつａ）クローン指定番号３３９．１５．５．３のハイブリドーマと、ｂ）クローン指定番号３３９．１５．３．６のハイブリドーマと、ｃ）クローン指定番号３３９．１５．６．１６のハイブリドーマとから選択されるハイブリドーマによって産生される抗体に結合することができるポリペプチドに結合する。

Description

本発明は、概して、ＩＬ−１７ＡおよびＩｌ−１７Ｆに結合する抗体の同定および単離ならびに同抗体の使用方法に関する。
ＩＬ−１７ファミリーの６つのメンバーが、元々はＩＬ−１７として同定され、かつ現在はＩＬ−１７Ａと命名されている該ファミリーの原型的メンバーとの類似性に基づいて同定されている。例えば、非特許文献１を参照されたい。該ファミリーの他のメンバーは、ＩＬ−１７Ｂ，ＩＬ−１７Ｃ，ＩＬ−１７Ｄ，ＩＬ−１７Ｅ（ＩＬ−２５としても公知）およびＩＬ−１７Ｆである。例えば、非特許文献２；非特許文献３ならびに非特許文献４を参照されたい。該ファミリーのメンバー中、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆは５５％の同一性を共有し、群を抜いて最も類似している（非特許文献３）。それらの配列類似性に加え、これらのサイトカインは共に類似の細胞型、特に活性化されたメモリーＣＤ４＋ Ｔ細胞によって産生されるように思われる。例えば、非特許文献５を参照されたい。また、非特許文献６；および非特許文献７も参照されたい。
さらに、両方とも同様に、ヒトおよびヒト疾患のマウスモデルにおける種々の炎症性および自己免疫疾患の進行および病態に対する寄与因子として意味づけられている。特に、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆは、炎症反応を誘導し、これにより、多発性硬化症、関節リウマチおよび炎症性腸疾患を含む複数の自己炎症性疾患の原因となる主要エフェクターサイトカインとして意味づけられている。
Ｓｐｒｉｇｇｓ，Ｍ．Ｋ．"Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１７ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｅｃｅｐｔｏｒ"Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９７）１７：３６６−３６９ Ｋａｗａｇｕｃｈｉら"ＩＬ−１７ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｆａｍｉｌｙ"，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００４）１１４：１２６５−１２７３ ＫｏｌｌｓおよびＬｉｎｄｅｎ，"Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１７ ｆａｍｉｌｙ ｍｅｍｂｅｒｓ ａｎｄ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ"，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２００４）２１：４６７−４７６ Ｍｏｓｅｌｅｙら、"Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１７ ｆａｍｉｌｙ ａｎｄ ＩＬ−１７ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ"，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖ（２００３）１４：１５５−１７４ Ａｇａｒｗａｌら、"Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２３ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ａ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ＣＤ４ Ｔ ｃｅｌｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｓｔａｔｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１７"Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（２００３）２７８：１９１０−１９１ Ｌａｎｇｒｉｓｈら"ＩＬ−２３ ｄｒｉｖｅｓ ａ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ Ｔ ｃｅｌｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｔｈａｔ ｉｎｄｕｃｅｓ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ"Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．（２００５）２０１：２３３−２４０ Ｓｔａｒｎｅｓら"Ｃｕｔｔｉｎｇ ｅｄｇｅ：ＩＬ−１７Ｆ，ａ ｎｏｖｅｌ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｔ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ，ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ"Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００１）１６７：４１３７−４１４０
ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆのインビボにて示される活性は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆアンタゴニストの臨床的もしくは治療的可能性および必要性を示す。特に、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの免疫学的活性を阻害する、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに結合する抗体（アンタゴニスト抗体）は、そのような新規の治療的性質を有しうる。したがって、当該技術分野においてＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに対するアンタゴニストの必要性が依然としてある。
炎症性サイトカインＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆは、高度の配列類似性を有し、多くの生物学的特性を共有し、共に活性化Ｔ細胞によって産生される。それらは関節リウマチおよび喘息を含む種々の自己免疫・炎症性疾患の進行の原因となる因子として意味づけられている。実際に、ＩＬ−１７Ａ機能を無効にする試薬は、複数のヒト疾患マウスモデルにおいて疾患の発症率および重症度を有意に改善する。ＩＬ−１７Ａはその同族受容体ＩＬ−１７受容体（ＩＬ−１７ＲＡ）およびＩＬ−１７ＦではＩＬ−１７ＲＡとの相互作用を通じてその作用を媒介する。したがって、本発明では、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに対するアンタゴニストとして、したがって、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆを阻止するため、交差反応性抗体が有用でありうると判断した。したがって、本発明は、ＩＬ−１７Ａ（ポリヌクレオチド配列が配列番号１として示され、コードされるポリペプチドが配列番号２として示される）およびＩＬ−１７Ｆ（ポリヌクレオチド配列が配列番号３として示され、コードされるポリペプチドが配列番号４として示される）の活性を阻止、阻害、低減、拮抗または中和しうる治療用分子（例えば、抗体）を提供することにより、この必要性に対処する。したがって、本発明は、本明細書で述べる抗体のようなＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆアンタゴニストに関する。本発明は、炎症性疾患におけるその使用法ならびに関連する組成物および方法を更に提供する。
Ｐｒｉｚｍソフトウェアプログラムによって作成される典型的な結合曲線を示すグラフ図である。
（Ａ）概要）
免疫関連・炎症性疾患は、正常な生理において傷害または外傷に応答し、傷害または外傷からの修復を開始し、外来生物に対する先天的および後天的防御を開始するのに不可欠な相当に複雑な、多くの場合、多数の相互接続した生物学的経路の発現または結果である。これらの正常な生理的経路が、その応答の強度に直接関連して、異常な調節もしくは過剰な刺激の結果として、自己に対する反応として、またはこれらの組合せとして更なる傷害または外傷を引き起こす場合、疾患または病態が生じる。
これらの疾患の発生は、多段階経路および、多くの場合、多数の異なる生物学的システム／経路を含む場合が多いが、１つ以上のこれらの経路における臨界ポイントでの介入は改善または治療効果を有しうる。治療的介入は有害なプロセス／経路の拮抗または有益なプロセス／経路の刺激により生じうる。
多くの免疫関連疾患が公知であり、広範に研究されている。そのような疾患は、免疫介在性炎症性疾患（例えば、関節リウマチ、免疫介在性腎疾患、肝胆道疾患、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、乾癬および喘息）、非免疫介在性炎症性疾患、感染症、免疫不全症、異常増殖などを含む。
Ｔリンパ球（Ｔ細胞）は哺乳動物免疫応答の重要な構成要素である。Ｔ細胞は主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）内の遺伝子にコードされる自己分子と関連する抗原を認識する。抗原は、抗原提示細胞、ウイルス感染細胞、癌細胞、移植片などの表面上にＭＨＣ分子と共に提示されうる。Ｔ細胞系は宿主哺乳動物に健康被害をもたらす、これらの変性細胞を排除する。Ｔ細胞はヘルパーＴ細胞および細胞傷害性Ｔ細胞を含む。ヘルパーＴ細胞は抗原提示細胞上の抗原−ＭＨＣ複合体の認識後に広範に増殖する。ヘルパーＴ細胞は、Ｂ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞および免疫応答に関与する他の種々の細胞の活性化に中心的な役割を果たす種々のサイトカイン、すなわち、リンホカインも分泌する。
液性および細胞性免疫応答における中心的事象は、ヘルパーＴ細胞の活性化およびクローン増殖である。ヘルパーＴ細胞の活性化は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）−ＣＤ３複合体と抗原提示細胞上の抗原−ＭＨＣとの相互作用によって開始される。この相互作用は、休止ヘルパーＴ細胞が細胞周期（Ｇ０からＧ１への移行）に入ることを誘導する一連の生化学的事象を媒介し、ＩＬ−２、時にはＩＬ−４に対する高親和性受容体の発現をもたらす。活性化Ｔ細胞は周期を通じて進行し、増殖してメモリー細胞またはエフェクター細胞に分化する。
ＴＣＲを通じて媒介されるシグナルに加え、Ｔ細胞の活性化は、抗原提示細胞によって放出されるサイトカインにより、あるいは抗原提示細胞およびＴ細胞上の膜結合分子による相互作用によって誘導される更なる共刺激を含む。サイトカインＩＬ−１およびＩＬ−６は共刺激シグナルを付与することが示されている。さらに、抗原提示細胞の表面上に発現するＢ７分子とＴ細胞表面上に発現するＣＤ−２８およびＣＴＬＡ−４分子との相互作用はＴ細胞の活性化をもたらす。活性化Ｔ細胞は、増加した数の細胞接着分子、例えば、ＩＣＡＭ−１、インテグリン、ＶＬＡ−４、ＬＦＡ−１、ＣＤ５６などを発現する。
混合リンパ球培養または混合リンパ球培養反応（ＭＬＲ）におけるＴ細胞増殖は、化合物の免疫系を刺激する能力の確立された指標である。多くの免疫応答において、炎症細胞は損傷または感染部位に浸潤する。移動細胞は、患部組織の組織学的検査によって判定されうるように、好中球、好酸球、単球またはリンパ球でありうる（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ（編）、１９９４，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．）。
免疫関連疾患は免疫応答を抑制することによって処置されうる。免疫刺激活性を有する分子を阻害する可溶性受容体および／または中和抗体の使用は、免疫介在性および炎症性疾患の処置において有益でありうる。免疫応答を抑制し、したがって、免疫関連疾患を改善するため、免疫応答を抑制する分子を用いることができる（蛋白質を直接に、または抗体アゴニストの使用により）。
インターロイキン−１７（ＩＬ−１７Ａ）は、Ｔリンパ球向性ヘルペスウイルスサイミリ（ＨＳＶ）にコードされる蛋白質の細胞オルソログとして同定されている［Ｒｏｕｖｉｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５０（１２）：５４４５−５４５６（１９９９３）；Ｙａｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２２（１２）：５４８３−５４８６（１９９５）およびＹａｏら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，３（６）：８１１−８２１（１９９５）を参照されたい］。続いての特徴づけでは、この蛋白質が多種多様の末梢組織において炎症促進反応を誘導するように作用する強力なサイトカインであることが示されている。ＩＬ−１７Ａは、ＣＤ４＋活性化メモリーＴ細胞によってのみ合成・分泌される、約３２ｋＤａのジスルフィド結合ホモ二量体サイトカインである（Ｆｏｓｓｉｅｚら、Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６：５４１−５５１［１９９８］に概説されている）。具体的には、ＩＬ−１７は、１９〜２３残基のＮ末端シグナル配列を有する１５５アミノ酸の前駆体ポリペプチドとして合成され、ジスルフィド結合ホモ二量体糖蛋白質として分泌される。Ｉｌ−１７Ａは、ＷＯ９５１８８２６（１９９５）、ＷＯ９７１５３２０（１９９７）およびＷＯ９７０４０９７（１９９７）ならびに米国特許第６，０６３，３７２号に開示されている。
その限定された組織分布にかかわらず、ＩＬ−１７Ａは様々なタイプの細胞において多面的な生物学的活性を示す。ＩＬ−１７Ａは多くのサイトカインの産生を刺激することが見出されている。それは、線維芽細胞、角化細胞、上皮および内皮細胞のような接着細胞によるＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、白血病抑制因子（ＬＩＦ）、プロスタグランジンＥ２、ＭＣＰ−１およびＧ−ＣＳＦの分泌を誘導する。ＩＬ−１７Ａは、ＩＣＡＭ−１表面発現、Ｔ細胞の増殖ならびにＣＤ３４＋ヒト前駆体の成長および好中球への分化を誘導する能力も有する。ＩＬ−１７Ａは、骨代謝にも関与しており、活性化Ｔ細胞の存在およびＴＮＦ−α産生を特徴とする病理的状態、例えば、関節リウマチおよび骨インプラントの緩みに重要な役割を果たすことが示唆されている（Ｖａｎ Ｂｅｚｏｏｉｊｅｎら、Ｊ．Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒ．Ｒｅｓ．１４：１５１３−１５２１［１９９９］）。関節リウマチ患者由来の滑膜組織の活性化Ｔ細胞は、正常患者または骨関節炎患者由来のものより多い量のＩＬ−１７Ａを分泌することが見出された（Ｃｈａｂａｕｄら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．４２：９６３−９７０［１９９９］）。この炎症促進性サイトカインが関節リウマチにおける滑膜炎症に活発に寄与することが示唆された。その炎症促進性役割は別として、ＩＬ−１７Ａは更に別のメカニズムによって関節リウマチの病理の原因となるように思われる。例えば、ＩＬ−１７Ａは骨芽細胞における破骨細胞分化因子（ＯＤＦ）ｍＲＮＡの発現を誘導することが示されている（Ｋｏｔａｋｅら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１０３：１３４５−１３５２［１９９９］）。ＯＤＦは骨吸収に関与する細胞である破骨細胞への前駆細胞の分化を刺激する。
ＩＬ−１７Ａの濃度が関節リウマチ患者の滑液において有意に上昇しているため、ＩＬ−１７Ａ誘導性破骨細胞形成が関節リウマチにおける骨吸収に重要な役割を果たすと思われる。ＩＬ−１７Ａは多発性硬化症のような他の特定の自己免疫障害に重要な役割を果たすとも考えられている（Ｍａｔｕｓｅｖｉｃｉｕｓら、Ｍｕｌｔ．Ｓｃｌｅｒ．，５：１０１−１０４［１９９９］）。さらに、ＩＬ−１７Ａは細胞間シグナル伝達により、ヒトマクロファージにおいてＣａ２＋流入および［ｃＡＭＰ］の減少を刺激することが示されている（Ｊｏｖａｎｏｖｉｃら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６０：３５１３［１９９８］）。ＩＬ−１７Ａで処理された線維芽細胞はＮＦ−κＢの活性化を誘導するが［Ｙａｏら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，３：８１１（１９９５）、上記Ｊｏｖａｎｏｖｉｃら］、それで処理されたマクロファージはＮＦ−κＢおよびマイトジェン活性化プロテインキナーゼを活性化する（Ｓｈａｌｏｍ−Ｂａｒｅｋら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７３：２７４６７［１９９８］）。
さらにまた、ＩＬ−１７Ａは骨・軟骨成長に関与する哺乳動物サイトカイン様因子７と配列類似性を共有する。ＩＬ−１７Ａポリペプチドが配列類似性を共有する他の蛋白質は、ヒト胚由来インターロイキン関連因子（ＥＤＩＲＥ）およびインターロイキン−２０である。
ＩＬ−１７Ａの広範な作用と一致して、ＩＬ−１７Ａの細胞表面受容体は多くの組織および細胞型に広範に発現することが見出されている（Ｙａｏら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，９：７９４［１９９７］）。ヒトＩＬ−１７Ａ受容体（ＩＬ−１７ＲＡ）のアミノ酸配列（８６６アミノ酸）は、単一膜貫通ドメインおよび長い５２５アミノ酸細胞内ドメインを有する蛋白質を予測させるが、その受容体配列は独特であり、サイトカイン／成長因子受容体ファミリー由来の受容体のいずれの配列とも類似していない。これは、ＩＬ−１７Ａ自体の他の既知の蛋白質との類似性の欠如と相まって、ＩＬ−１７Ａおよびその受容体がシグナル伝達蛋白質および受容体の新たなファミリーの一部でありうることを示す。ＩＬ−１７Ａ活性がその独特な細胞表面受容体への結合を通して媒介されることが示されており、従前の研究では、Ｔ細胞を可溶型のＩＬ−１７Ａ受容体ポリペプチドに接触させると、ＰＨＡ、コンカナバリンＡおよび抗ＴＣＲモノクローナル抗体によって誘導されるＴ細胞増殖およびＩＬ−２産生を阻害したことを示している（Ｙａｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５５：５４８３−５４８６［１９９５］）。そのようなものとして、既知のサイトカイン受容体、特にＩＬ−１７Ａ受容体との相同性を有する新規ポリペプチドを同定し、特徴づける大きな関心がある。
ＩＬ−１７Ｆの発現パターンは、活性化ＣＤ４＋ Ｔ細胞および単球のみを含むように、ＩＬ−１７Ａの発現パターンに類似しているように思われる（Ｓｔａｒｎｅｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：４１３７−４１４０［２００１］）。ＩＬ−１７Ｆは、線維芽細胞においてＧ−ＣＳＦ，ＩＬ−６およびＩＬ−８（Ｈｙｍｏｗｉｔｚら、ＥＭＢＯ Ｊ．２０：５３２２−５３４１［２００１］）、また、内皮細胞においてＴＧＦ−ｂ（Ｓｔａｒｎｅｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：４１３７−４１４０［２００１］）を誘導することが示されている。樹状細胞によって産生されるサイトカインであるＩＬ−２３が、主にメモリーＴ細胞においてＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの産生を媒介しうることが最近になって報告されている（Ａｇｇａｒｗａｌら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：１９１０−１９１４［２００３］）。
さらに、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの過剰発現またはアップレギュレーションが、関節炎および喘息患者において示されている（Ｍｏｓｅｌｅｙら、ＣｙｔｏｋｉｎｅＧｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖ １４：１５５−１７４［２００３］に概説されている）。関節炎に関して、これらのサイトカインは関節リウマチおよび骨関節炎と関連する軟骨・関節破壊に特徴的な様態にて作用する。例えば、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆは、軟骨プロテオグリカン・グリコサミノグリカンおよびコラーゲン断片の放出により、関節軟骨外植片における基質分解を亢進すると同時に、新たなプロテオグリカンおよびコラーゲンの合成を阻害することが示されている（Ｃａｉら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ １６：１０−２１［２００１］；Ａｔｔｕｒら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ ４４：２０７８−２０８３［２００１］）。
ＩＬ−１７Ａと同様に、マウスにおけるＩＬ−１７Ｆの過剰発現も肺における好中球動員を増加させ、ＩＬ−６，ＩＦＮ−γ，ＩＰ−１０およびＭＩＧを含む肺内Ｔｈ１関連サイトカインの発現増加を生じさせることが示されている（Ｓｔａｒｎｅｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：４１３７−４１４０［２００１］）。さらに、ＩＬ−１７Ｆはアレルゲン投与喘息患者由来のＴ細胞においてアップレギュレートされ（Ｋａｗａｇｕｃｈｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １６７：４４３０−４４３５［２００１］）、ＮＨＢＥにおいてＩＬ−６およびＩＬ−８産生を誘導することが見出された。ＩＬ−１７Ａと対照的に、ＩＬ−１７Ｆはインビトロにて血管新生を阻害するように思われる（Ｓｔａｒｎｅｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：４１３７−４１４０［２００１］）。
ＩＬ−１７Ｆ ｍＲＮＡは種々のヒト組織においてノーザンブロット法により検出されなかったが、ＣＤ４＋ Ｔ細胞および単球の活性化と同時に劇的に誘導された（同上）。マウスにおいて、Ｔｈ２細胞および肥満細胞は活性化と同時にＩＬ−１７Ｆを発現することが見出された。Ｄｕｍｏｎｔ，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ１３（３）（２００３）を参照されたい。ＩＬ−１７Ａと同様に、ＩＬ−１７Ｆの発現もマウスにおいてＩＬ−２３によってアップレギュレートされることが見出された。
ＩＬ−１７サイトカイン／受容体ファミリーは、免疫および炎症反応の操作への画期的な取り組みを提供する、サイトカインネットワーク内の独特なシグナル伝達系を表すように思われる。したがって、本発明は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに結合する抗体に関する。
本発明は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに結合する抗体（ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体）ならびにＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を使用する方法を提供する。該抗体はアンタゴニストまたはアゴニストとして作用し、特に、哺乳動物細胞のインビトロ、インサイツまたはインビボでの診断または処置あるいはＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆの存在（または非存在）と関連する病理的状態に有用性を見出しうる。
本発明の好ましい実施形態は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ（本明細書では「交差反応性抗体」、「Ａ／Ｆ抗体」、「二重特異性抗体」、「ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体」などと互換的に称される）に結合する抗体およびその任意の断片もしくは置換を含む。特に、そのような抗体は、ヒトＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに特異的に結合することができ、かつ／あるいはＩＬ−１７ＡとＩＬ−１７Ｆの一方もしくは両方および／またはそれらの受容体ＩＬ−１７ＲＡ，ＩＬ−１７ＲＣと関連する生物学的活性を調節することができ、したがって、免疫関連疾患のような種々の疾患および病理的状態の処置に有用である。より具体的な実施形態では、ＩＬ−１７Ａ（配列番号２）およびＩＬ−１７Ｆ（配列番号４）に特異的に結合する抗体が提供される。任意に、該抗体はモノクローナル抗体である。
例えば、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ上のエピトープに結合し、前記エピトープは、ヒトＩＬ−１７Ｆの以下の配列の残基Ｉｌｅ（２３）、Ｌｙｓ（２５）、Ｇｌｙ（２７）、Ｔｈｒ（２９）およびＰｒｏ（３４）ならびに以下に示されるヒトＩＬ−１７Ａに見出される等価配列を含む。残基２３，２５，２７，２９および３４は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの表面上にあると予測され、したがって、本発明の抗体または等価な蛋白質結合アンタゴニストの結合にアクセス可能である。
ｈＩＬ １７Ｆ（配列番号４のＩｌｅ２３−Ｐｒｏ３４） ＩＰＫＶＧＨＴＦＦＱＫＰ
ｈＩＬ １７Ａ（配列番号２のＩｌｅ２０−Ｐｒｏ３１） ＩＶＫＡＧＩＴＩＰＲＮＰ
任意に、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ上の別のエピトープに結合し、前記エピトープは、ヒトＩＬ−１７Ｆの以下の配列の残基Ａｒｇ（６７）、Ｓｅｒ（６８）、Ｔｈｒ（６９）、Ｓｅｒ（７０）、Ｐｒｏ（７１）、Ｔｒｐ（７２）、Ａｓｎ（７３）ならびに以下に示されるヒトＩＬ−１７Ａに見出される等価配列を含む。残基６９，７１および７３は、生理活性サイトカインの表面上にあると予測され、したがって、本発明の抗体または等価な蛋白質結合アンタゴニストの結合にアクセス可能である。
ｈＩＬ １７Ｆ（配列番号４のＡｒｇ６７−Ａｓｎ７３） ＲＳＴＳＰＷＮ
ｈＩＬ １７Ａ（配列番号２のＡｒｇ６９−Ａｓｎ７５） ＲＳＴＳＰＷＮ
任意に、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ上の別のエピトープに結合し、前記エピトープは、ヒトＩＬ−１７Ｆの以下の配列の残基Ａｓｐ（７９）、Ｐｒｏ（８０）、Ａｓｎ（８１）、Ａｒｇ（８２）、Ｔｙｒ（８３）、Ｐｒｏ（８４）およびＳｅｒ（８５）ならびに以下に示されるヒトＩＬ−１７Ａに見出される等価配列を含む。このエピトープのすべての残基は、生理活性サイトカインの表面上にあると予測され、したがって、本発明の抗体または等価な蛋白質結合アンタゴニストの結合にアクセス可能である。
ｈＩＬ−１７Ｆ（配列番号４のＡｓｐ７９−Ｓｅｒ８５） ＤＰＮＲＹＰＳ
ｈＩＬ−１７Ａ（配列番号２のＡｓｐ８１−Ｓｅｒ８７） ＤＰＥＲＹＰＳ
任意に、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ上の別のエピトープに結合し、前記エピトープは、ヒトＩＬ−１７Ｆの以下の配列の残基Ｔｈｒ（１４６）、Ｐｒｏ（１４７）、Ｖａｌ（１４８）、Ｉｌｅ（１４９）、Ｈｉｓ（１５０）、Ｈｉｓ（１５１）、Ｖａｌ（１５２）ならびに以下に示されるヒトＩＬ−１７Ａに見出される対応する配列を含む。これらの残基は、生理活性サイトカインの表面上にあると予測され、したがって、本発明の抗体または等価な蛋白質結合アンタゴニストの結合にアクセス可能であると予測される。
ｈＩＬ−１７Ｆ（配列番号４のＴｈｒ１４６−Ｖａｌｌ５２） ＴＰＶＩＨＨＶ
ｈＩＬ−１７Ａ（配列番号２のＴｈｒ１４８−Ｖａｌ １５４） ＴＰＩＶＨＨＶ
任意に、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ上の別のエピトープに結合し、前記エピトープは、以下に示されるヒトＩＬ−１７Ｆの別個のペプチド鎖由来の残基；または以下に示されるヒトＩＬ−１７Ａに見出される等価配列を含む不連続エピトープである。具体的には、ｈＩＬ−１７Ｆの残基１０５〜１０９，１４７〜１５２およびｈＩＬ−１７Ａの１０７〜１１１，１４８〜１５４は、生理活性サイトカインの表面上にあると予測され、したがって、本発明の抗体または等価な蛋白質結合アンタゴニストの結合にアクセス可能である。
ｈＩＬ−１７Ｆ配列（配列番号４のＡｓｐ１０５−Ａｓｎ１０９［ＤＩＳＭＮ］およびＰｒｏ１４７−Ｖａｌ１５２［ＰＶＩＨＨＶ］）
ｈＩＬ−１７Ａ配列（配列番号２のＡｓｐ１０７−Ａｓｎ１１１［ＤＹＨＭＮ］およびＰｒｏ１４９−Ｖａｌ１５４［ＰＩＶＨＨＶ］）
任意に、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ上の別のエピトープに結合し、前記エピトープは、以下に示されるヒトＩＬ−１７Ｆの２または３つの別個のペプチド鎖の残基；またはヒトＩＬ−１７Ａに見出される等価配列を含む不連続エピトープである。具体的には、ｈＩＬ−１７Ｆの残基８１，８２，１２１，１３２，１３４およびｈＩＬ−１７Ａの８３，８４，１２３，１３４，１３６は、生理活性サイトカインの表面上にあると予測され、したがって、本発明の抗体または等価な蛋白質結合アンタゴニストの結合にアクセス可能である。
ｈＩＬ−１７Ｆ配列（配列番号４のＡｓｐ７９−Ｓｅｒ８５［ＤＰＮＲＹＰＳ］およびＶａｌ１１９−Ａｒｇ１２２［ＶＶＲＲ］およびＳｅｒ１３０−Ｇｌｕ１３４［ＳＦＱＬＥ］）
ｈＩＬ−１７Ａ配列（配列番号２のＡｓｐ８１−Ｓｅｒ８７［ＤＰＥＲＹＰＳ］およびＶａｌ１２１−Ａｒｇ１２４［ＶＬＲＲ］およびＳｅｒ１３２−Ｇｌｕ１３６［ＳＦＲＬＥ］）
特定の実施形態では、本発明は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに結合する二重特異性抗体を提供する。二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）は、抗体が２つの異なる抗原に特異的に結合するように、２つの異なる抗原結合部位を有する抗体である。より高い結合価（すなわち、２つを超える抗原に結合する能力）を有する抗体も調製されうる。それらは多特異性抗体と称される。
二重特異性抗体はモノクローナル抗体（ＭＡｂ）であることが好ましい。特定の実施形態では、該抗体はキメラまたはヒト化または完全ヒトである。完全ヒト抗体はトランスジェニックマウスの免疫化を含む手順によって作製され得、下述のように、ヒト免疫グロブリン遺伝子がマウスに導入されている。ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに結合する本発明の二重特異性抗体は、本明細書で二重特異性ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体または二重特異性Ａ／Ｆ ＭＡｂと称される。
更に他の特定の実施形態では、本発明のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞系が提供される。別の実施形態では、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体は、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールおよびポリオキシアルキレンからなる群より選択される１つ以上の非蛋白性重合体または細胞傷害性薬物もしくは酵素または放射性同位元素、蛍光化合物もしくは化学発光化合物に結合される。
本発明の典型的な方法は、ＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆの発現および／または活性の増大または亢進と関連し、あるいはこれから生じる哺乳動物における病理的状態または疾患を処置する方法を含む。該処置方法において、好ましくは、それぞれの受容体結合またはそれらの受容体（単数・複数）に対する活性化を阻止または低減するＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体が投与されうる。任意に、該方法において用いられるＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの活性を阻止または中和することができ、例えば、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの活性を阻止または中和する二重アゴニスト（すなわち、本明細書で述べる交差反応性ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体）である。該方法では、単一の交差反応性抗体または２つ以上の抗体の組合せの使用を企図する。
本発明は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を含む組成物も提供する。任意に、本発明の組成物は医薬的に許容可能な担体または希釈剤を含む。好ましくは、該組成物は、病理的状態または疾患を処置するのに治療的に有効な量にて１つ以上のＩｌ−１７Ａ／Ｆ抗体を含む。
そのようなものとして、本発明は、ヒトを含む哺乳動物における免疫関連疾患の診断および処置に有用な組成物および方法に関する。本発明は、哺乳動物における免疫応答を刺激または阻害する、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに結合する抗体（アゴニストおよびアンタゴニスト抗体を含む）の同定に基づく。免疫関連疾患は免疫応答を抑制または亢進することによって処置されうる。免疫応答を亢進する抗体は抗原に対する免疫応答を刺激または増強する。免疫応答を刺激する抗体は、免疫応答の亢進が有益でありうる場合に治療的に用いられうる。あるいは、免疫応答を抑制し、抗原に対する免疫応答を減弱または低減する抗体（例えば、中和抗体）は、免疫応答の減弱が有益でありうる場合（例えば、炎症）に治療的に用いられうる。
したがって、本発明のＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに結合する抗体（本明細書でＩＬ−１７Ａ／Ｆ、Ａ／Ｆおよび／または交差反応性ＩＬ−１７Ａ，ＩＬ−１７Ｆ抗体とも称される）は、例えば、全身性エリテマトーデス、関節炎、乾癬性関節炎、関節リウマチ、骨関節炎、若年性慢性関節炎、脊椎関節症、全身性硬化症、特発性炎症性筋疾患、シェーグレン症候群、全身性血管炎、サルコイドーシス、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少症、甲状腺炎、真性糖尿病、免疫介在性腎疾患、中枢・末梢神経系の脱髄性疾患、例えば、多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパシーまたはギラン・バレー症候群および慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー、肝胆道疾患、例えば、感染性自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎および硬化性胆管炎、炎症性腸疾患、大腸炎、クローン病 グルテン過敏性腸症および内毒血症、水疱性皮膚症、多形性紅斑およびアトピー性・接触性皮膚炎、乾癬、好中球性皮膚病を含む自己免疫もしくは免疫介在性皮膚疾患、嚢胞性線維症、アレルギー疾患、例えば、喘息、アレルギー性鼻炎、食物アレルギーおよび蕁麻疹、嚢胞性線維症、肺の免疫疾患、例えば、好酸球性肺炎、特発性肺線維症、成人呼吸器疾患（ＡＲＤ）、急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）および炎症性肺損傷、例えば、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気道過敏性、慢性気管支炎、アレルギー性喘息および過敏性肺炎、移植片・臓器拒絶および移植片対宿主病を含む移植関連疾患、敗血症ショック、多臓器不全、癌ならびに血管新生を含む免疫関連および炎症性疾患の処置のための薬剤・薬物を調製するためにも有用である。
具体的な態様では、そのような薬剤・薬物は医薬的に許容可能な担体と共に治療有効量のＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を含む。その混合物は無菌であることが好ましい。
一態様では、本発明は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに結合する単離抗体に関する。別の態様では、抗体はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの活性を模倣し（アゴニスト抗体）、あるいは逆に、抗体はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの活性を阻害または中和する（アンタゴニスト抗体）。別の態様では、抗体は、好ましくは、非ヒト相補性決定領域（ＣＤＲ）残基およびヒトフレームワーク領域（ＦＲ）残基を有するモノクローナル抗体である。
更なる実施形態では、本発明は、Ｉｌ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆのアゴニストまたはアンタゴニスト抗体を同定する方法に関し、前記方法は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆを候補分子に接触させるステップと、ＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆに媒介される生物学的活性をモニタリングするステップとを含む。別の実施形態では、本発明は、担体または賦形剤との混合物にて、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに結合するＩＬ−１７Ａ／Ｆアゴニストまたはアンタゴニスト抗体を含む物質組成物に関する。一態様では、該組成物は治療有効量のＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を含む。別の態様では、該組成物がそのようなアゴニストＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を含む場合、該組成物は、（ａ）それを必要とする哺乳動物の組織内への炎症細胞の浸潤を亢進し、（ｂ）それを必要とする哺乳動物における免疫応答を刺激または亢進し、（ｃ）抗原に応答して、それを必要とする哺乳動物におけるＴリンパ球の増殖を増加させ、（ｄ）Ｔリンパ球の活性を刺激し、または（ｅ）血管透過性を増大させるのに有用である。更なる態様では、該組成物がそのようなアンタゴニストＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を含む場合、該組成物は、（ａ）それを必要とする哺乳動物の組織内への炎症細胞の浸潤を減少させ、（ｂ）それを必要とする哺乳動物における免疫応答を阻害または低減し、（ｃ）Ｔリンパ球の活性を低下させ、または（ｄ）抗原に応答して、それを必要とする哺乳動物におけるＴリンパ球の増殖を減少させるのに有用である。別の態様では、該組成物は、例えば、更なる抗体または細胞傷害性薬物もしくは化学療法剤でよい更なる活性成分を含む。該組成物は無菌であることが好ましい。
別の実施形態では、本発明は、それを必要とする哺乳動物における免疫関連障害を処置する方法に関し、該方法は、治療有効量のアゴニストまたはアンタゴニストＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を哺乳動物に投与するステップを含む。
好ましい態様では、免疫関連障害は、全身性エリテマトーデス、関節炎、乾癬性関節炎、関節リウマチ、骨関節炎、若年性慢性関節炎、脊椎関節症、全身性硬化症、特発性炎症性筋疾患、シェーグレン症候群、全身性血管炎、サルコイドーシス、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少症、甲状腺炎、真性糖尿病、免疫介在性腎疾患、中枢・末梢神経系の脱髄性疾患、例えば、多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパシーまたはギラン・バレー症候群および慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー、肝胆道疾患、例えば、感染性自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎および硬化性胆管炎、炎症性腸疾患、大腸炎、クローン病 グルテン過敏性腸症および内毒血症、水疱性皮膚症、多形性紅斑およびアトピー性・接触性皮膚炎、乾癬、好中球性皮膚病を含む自己免疫もしくは免疫介在性皮膚疾患、嚢胞性線維症、アレルギー疾患、例えば、喘息、アレルギー性鼻炎、食物アレルギーおよび蕁麻疹、嚢胞性線維症、肺の免疫疾患、例えば、好酸球性肺炎、特発性肺線維症、成人呼吸器疾患（ＡＲＤ）、急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）および炎症性肺損傷、例えば、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気道過敏性、慢性気管支炎、アレルギー性喘息および過敏性肺炎、移植片・臓器拒絶および移植片対宿主病を含む移植関連疾患、敗血症ショック、多臓器不全、癌ならびに血管新生からなる群より選択される。
任意に、抗体は、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、抗体断片または単鎖抗体である。別の実施形態では、本発明は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに特異的に結合する抗体を提供する。抗体は標識され得、または固体支持体上に固定されうる。更なる態様では、抗体は、抗体断片、モノクローナル抗体、単鎖抗体または抗イディオタイプ抗体である。
更に別の実施形態では、本発明は、本発明のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドに関し、前記ポリペプチドはＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに結合することができる。
更に別の実施形態では、本発明は、本発明の単離ポリペプチドに関し、前記ポリペプチドはＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに結合することができる。
抗体を生成するプロセスも本明細書で述べられ、それらのプロセスは、前記抗体の発現に好適な条件下にて適切なコード化核酸分子を含むベクターを含む宿主細胞を培養するステップと、前記抗体を細胞培養物から採取するステップとを含む。
更に別の実施形態では、本発明は、医薬的に許容可能な担体との混合物にて抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を含む組成物を提供する。一態様では、該組成物は治療有効量の抗体を含む。該組成物は無菌であることが好ましい。該組成物は、長期間の保存安定性を得るように保存されうる液体医薬製剤の剤形にて投与されうる。あるいは、抗体は、モノクローナル抗体、抗体断片、ヒト化抗体または単鎖抗体である。
更なる実施形態では、本発明は、（ａ）ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体あるいはＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに特異的に結合する抗体を含む物質組成物；（ｂ）前記組成物を含む容器；ならびに（ｃ）免疫関連疾患の処置における前記ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体の使用に関する前記容器に添付されたラベルまたは前記容器に含まれる添付文書を含む製造品に関する。該組成物は治療有効量のＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を含みうる。
更に別の実施形態では、本発明は、哺乳動物における免疫関連疾患を診断する方法に関し、該方法は、（ａ）哺乳動物から得られた組織細胞の被験試料中および（ｂ）同じ細胞型の既知の正常組織細胞の対照試料中の、ＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆの一方または両方をコードする遺伝子の発現レベルを検出するステップを含み、対照試料と比べて被験試料における高く、または低い発現レベルが、被験試料が得られた哺乳動物における免疫関連疾患の存在を示す。
別の実施形態では、本発明は、哺乳動物における免疫疾患を診断する方法に関し、該方法は、（ａ）ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を哺乳動物から得られた組織細胞の被験試料に接触させるステップと、（ｂ）被験試料中の該抗体とＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの一方または両方との複合体の形成を検出するステップとを含み、前記複合体の形成が前記疾患の存在または非存在を示す。その検出は定性的または定量的でよく、同じ細胞型の既知の正常組織細胞の対照試料中の複合体形成のモニタリングと比較して行われうる。被験試料中に形成される大量の複合体は、被験組織細胞が得られた哺乳動物における免疫疾患の存在または非存在を示す。抗体は検出可能な標識を保有することが好ましい。複合体形成は、例えば、光学顕微鏡法、フローサイトメトリー、蛍光定量法または当該技術分野において公知の他の手法によってモニタリングされうる。通常、被験試料は免疫系の欠損または異常を有する疑いのある患者から得られる。
別の実施形態では、本発明は、哺乳動物における免疫関連疾患を診断する方法に関し、該方法は、前記哺乳動物から得られた組織細胞の被験試料中のＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの存在または非存在を検出するステップを含み、前記被験試料中のＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの存在または非存在が、前記哺乳動物における免疫関連疾患の存在を示す。
一層更なる実施形態では、本発明は、炎症細胞の脈管構造から哺乳動物の組織内への浸潤を亢進する方法を提供し、該方法は、前記哺乳動物に（ａ）ＩＬ−１７Ａ／Ｆアゴニスト抗体を投与するステップを含み、哺乳動物における脈管構造からの炎症細胞の浸潤が亢進される。一層更なる実施形態では、本発明は、炎症細胞の脈管構造から哺乳動物の組織内への浸潤を低減する方法を提供し、該方法は、前記哺乳動物にアンタゴニストＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を投与するステップを含み、哺乳動物における脈管構造からの炎症細胞の浸潤が低減される。
一層更なる実施形態では、本発明は、哺乳動物におけるＴリンパ球の活性を高める方法を提供し、該方法は、前記哺乳動物にＩＬ−１７Ａ／Ｆアゴニスト抗体を投与するステップを含み、哺乳動物におけるＴリンパ球の活性が増大される。
一層更なる実施形態では、本発明は、哺乳動物におけるＴリンパ球の活性を低下させる方法を提供し、該方法は、前記哺乳動物にＩＬ−１７Ａ／Ｆアンタゴニスト抗体を投与するステップを含み、哺乳動物におけるＴリンパ球の活性が低下される。
一層更なる実施形態では、本発明は、哺乳動物におけるＴリンパ球の増殖を増大させる方法を提供し、該方法は、前記哺乳動物にＩＬ−１７Ａ／Ｆアゴニスト抗体を投与するステップを含み、哺乳動物におけるＴリンパ球の増殖が増大される。
一層更なる実施形態では、本発明は、哺乳動物におけるＴリンパ球の増殖を低減する方法を提供し、該方法は、前記哺乳動物に（ａ）ＩＬ−１７Ａ／Ｆアンタゴニスト抗体を投与するステップを含み、哺乳動物におけるＴリンパ球の増殖が低減される。
本発明は、１つ以上のＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を含む製造品およびキットも提供する。
本発明は、ポリペプチドに結合する単離抗体または抗体断片を提供し、該ポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列もしくはその断片または配列番号４のアミノ酸配列もしくはその断片を含み、該ポリペプチドは、ａ）クローン指定番号３３９．１５．５．３（ＡＴＣＣ特許寄託物名称ＰＴＡ−７９８７）のハイブリドーマ；ｂ）クローン指定番号３３９．１５．３．６（ＡＴＣＣ特許寄託物名称ＰＴＡ−７９８８）のハイブリドーマ；およびｃ）クローン指定番号３３９．１５．６．１６（ＡＴＣＣ特許寄託物名称ＰＴＡ−７９８９）のハイブリドーマから選択されるハイブリドーマによって産生される抗体に結合することができる。一実施形態の範囲内にて、抗体は配列番号４のアミノ酸残基２３，２５，２７，２９および３４を含むエピトープに結合する。別の実施形態の範囲内にて、抗体は配列番号２のアミノ酸残基２０，２２，２４，２６および３１を含むエピトープに結合する。別の実施形態の範囲内にて、抗体は、配列番号４のアミノ酸残基２３，２５，２７，２９および３４あるいは配列番号２のアミノ酸残基２０，２２，２４，２６および３１を含むエピトープに結合する。別の実施形態の範囲内にて、抗体は配列番号４のアミノ酸残基２３〜３４を含むエピトープに結合する。別の実施形態の範囲内にて、抗体は配列番号２のアミノ酸残基２０〜３１を含むエピトープに結合する。別の実施形態の範囲内にて、抗体は配列番号４のアミノ酸残基６７〜７３を含むエピトープに結合する。別の実施形態の範囲内にて、抗体は配列番号２のアミノ酸残基６９〜７５を含むエピトープに結合する。別の実施形態の範囲内にて、抗体は、配列番号４のアミノ酸残基８７〜９３または配列番号２のアミノ酸残基６９〜７５を含むエピトープに結合する。別の実施形態の範囲内にて、抗体は配列番号４のアミノ酸残基７９〜８５を含むエピトープに結合する。別の実施形態の範囲内にて、抗体は配列番号２のアミノ酸残基８１〜８７を含むエピトープに結合する。別の実施形態の範囲内にて、抗体は、配列番号４のアミノ酸残基７９〜８５または配列番号２のアミノ酸残基８１〜８７を含むエピトープに結合する。別の実施形態の範囲内にて、抗体は配列番号４のアミノ酸残基１４７〜１５２を含むエピトープに結合する。別の実施形態の範囲内にて、抗体は配列番号２のアミノ酸残基１４９〜１５４を含むエピトープに結合する。別の実施形態の範囲内にて、抗体は、配列番号４のアミノ酸残基１４７〜１５２または配列番号２のアミノ酸残基１４９〜１５４を含むエピトープに結合する。別の実施形態の範囲内にて、抗体は、配列番号４のアミノ酸残基１０５〜１０９および１４７〜１５２を含む不連続エピトープに結合する。別の実施形態の範囲内にて、抗体は、配列番号２のアミノ酸残基１０７〜１１１および１４８〜１５４を含む不連続エピトープに結合する。別の実施形態の範囲内にて、抗体は、配列番号４のアミノ酸残基１０５〜１０９および１４７〜１５２を含む不連続エピトープあるいは配列番号２のアミノ酸残基１０７〜１１１および１４８〜１５４を含む不連続エピトープに結合する。別の実施形態の範囲内にて、抗体は、配列番号４のアミノ酸残基７９〜８５，１１９〜１２２および１３０〜１３４を含む不連続エピトープに結合する。別の実施形態の範囲内にて、抗体は、配列番号２のアミノ酸残基８１〜８７，１２１〜１２４および１３２〜１３６を含む不連続エピトープに結合する。別の実施形態の範囲内にて、抗体は、配列番号４のアミノ酸残基７９〜８５，１１９〜１２２および１３０〜１３４を含む不連続エピトープあるいは配列番号２のアミノ酸残基８１〜８７，１２１〜１２４および１３２〜１３６を含む不連続エピトープに結合する。別の実施形態の範囲内にて、抗体は、ヒトまたは動物における非経口、経口、腹腔内、鼻腔内、皮下、エアロゾル化または静脈内投与に好適である。別の実施形態の範囲内にて、抗体はモノクローナル抗体である。別の実施形態の範囲内にて、モノクローナル抗体は、マウスモノクローナル抗体、キメラモノクローナル抗体、ヒト化モノクローナル抗体およびヒトモノクローナル抗体からなる群より選択される。別の実施形態の範囲内にて、抗体はｓｃＦｖである。別の実施形態の範囲内にて、抗体は二重特異性抗体または二価抗体である。別の実施形態の範囲内にて、抗体は、配列番号２のアミノ酸配列もしくはその断片を含むポリペプチドに結合するか、または配列番号４のアミノ酸配列もしくはその断片を含むポリペプチドに結合する交差反応性モノクローナル抗体である。
本発明は、ポリペプチドに結合する抗体または抗体断片を含む単離抗血清を提供し、該ポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列もしくはその断片または配列番号４のアミノ酸配列もしくはその断片を含み、該ポリペプチドは、ａ）クローン指定番号３３９．１５．５．３（ＡＴＣＣ特許寄託物名称ＰＴＡ−７９８７）のハイブリドーマ；ｂ）クローン指定番号３３９．１５．３．６（ＡＴＣＣ特許寄託物名称ＰＴＡ−７９８８）のハイブリドーマ；およびｃ）クローン指定番号３３９．１５．６．１６（ＡＴＣＣ特許寄託物名称ＰＴＡ−７９８９）のハイブリドーマから選択されるハイブリドーマによって産生される抗体に結合することができる。
本発明は、ＡＴＣＣ特許寄託物名称ＰＴＡ−７９８７，ＡＴＣＣ特許寄託物名称ＰＴＡ−７９８８またはＡＴＣＣ特許寄託物名称ＰＴＡ−７９８９から選択されるハイブリドーマによって産生される単離抗体を提供し、該抗体は、配列番号２のアミノ酸配列もしくはその断片を含むポリペプチドおよび配列番号４のアミノ酸配列もしくはその断片を含むポリペプチドの炎症促進活性を低下させる。一実施形態の範囲内にて、該ポリペプチドはＡＴＣＣ特許寄託物名称ＰＴＡ−７９８７のハイブリドーマによって産生される抗体に結合することができる。一実施形態の範囲内にて、該ポリペプチドはＡＴＣＣ特許寄託物名称ＰＴＡ−７９８８のハイブリドーマによって産生される抗体に結合することができる。一実施形態の範囲内にて、該ポリペプチドはＡＴＣＣ特許寄託物名称ＰＴＡ−７９８９のハイブリドーマによって産生される抗体に結合することができる。
本発明は、ＡＴＣＣ特許寄託物名称ＰＴＡ−７９８７のハイブリドーマおよび該ハイブリドーマによって産生される抗体を提供する。本発明は、ＡＴＣＣ特許寄託物名称ＰＴＡ−７９８８のハイブリドーマおよび該ハイブリドーマによって産生される抗体を提供する。本発明は、ＡＴＣＣ特許寄託物名称ＰＴＡ−７９８９のハイブリドーマおよび該ハイブリドーマによって産生される抗体を提供する。
（Ｂ）定義）
以下の記述では、多くの用語が広範に用いられる。以下の定義は本発明の理解を容易にするために提供される。
抗体」（Ａｂｓ）および「免疫グロブリン」（Ｉｇｓ）は同じ構造特徴を有する糖蛋白質である。抗体は特定の抗原に対する結合特異性を示すが、免疫グロブリンは抗体および抗原特異性を欠く他の抗体様分子を含む。後者の種類のポリペプチドは、例えば、リンパ系によって低レベルにて、骨髄腫によって高レベルにて産生される。したがって、本明細書で用いるように、「抗体」または「抗体ペプチド（単数・複数）」という用語は、無傷抗体または特異的結合のために無傷抗体と競合するその断片を指し、キメラ、ヒト化、完全ヒトおよび二重特異性抗体を含む。一部の実施形態では、結合断片は組換えＤＮＡ技術によって生成される。更なる実施形態では、結合断片は無傷抗体の酵素的または化学的切断によって生成される。結合断片は、Ｆａｂ，Ｆａｂ’，Ｆ（ａｂ’）．ｓｕｂ．２，Ｆｖおよび単鎖抗体を含むが、これに限定されない。通常、「天然抗体および免疫グロブリン」は二本の同一軽（Ｌ）鎖および二本の同一重（Ｈ）鎖からなる、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖蛋白質である。各軽鎖は１つのジスルフィド共有結合により重鎖に結合しているが、ジスルフィド結合数は異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間にて異なる。各重鎖および軽鎖は規則的間隔の鎖内ジスルフィド架橋も有する。各重鎖は一端に可変ドメイン（ＶＨ）を、次に、複数の定常ドメインを有する。各軽鎖は一端に可変ドメイン（ＶＬ）を、その他端に定常ドメインを有する。軽鎖の定常ドメインは重鎖の第一の定常ドメインとアラインメントし、軽鎖可変ドメインは重鎖の可変ドメインとアラインメントしている。特定のアミノ酸残基が軽鎖・重鎖可変ドメイン間の境界面を形成すると考えられている（Ｃｌｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１８６：６５１（１９８５）；ＮｏｖｏｔｎｙおよびＨａｂｅｒ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８２：４５９２（１９８５））。
本明細書で用いる「単離抗体」という用語は、同定され、その天然環境から分離および／または採取された抗体を指す。その天然環境の夾雑成分は、抗体の診断的または治療的使用を妨げうる物質であり、酵素、ホルモンおよび他の蛋白性もしくは非蛋白性溶質を含みうる。好ましい実施形態では、抗体は、（１）Ｌｏｗｒｙ法により求められる抗体の９５重量％超、最も好ましくは９９重量％超まで、（２）スピニングカップシークエネーター（ｓｐｉｎｎｉｎｇ ｃｕｐ ｓｅｑｕｅｎａｔｏｒ）を用いて少なくとも１５残基のＮ末端もしくは内部アミノ酸配列を得るのに十分な程度まで、または（３）クーマシーブルーもしくは、好ましくは銀染色を用いた、還元もしくは非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥによる均一性に至るまで精製される。抗体の天然環境の少なくとも１つの成分が存在しないため、単離抗体は組換え細胞内原位置での抗体を含む。しかし、通常、単離抗体は少なくとも１つの精製ステップにより調製される。
「変異体」抗ＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆおよび／またはＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体とは、本明細書では、親抗体配列における１つ以上のアミノ酸残基の付加、欠失および／または置換により、「親」抗ＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆおよび／またはＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体アミノ酸配列とアミノ酸配列の点で異なる分子を指す。好ましい実施形態では、変異体は親抗体の１つ以上の超可変領域における１つ以上のアミノ酸置換を含む。例えば、変異体は親抗体の１つ以上の超可変領域における少なくとも１個、例えば、約１から約１０個、好ましくは約２から約５個の置換を含みうる。通常、変異体は親抗体重鎖または軽鎖可変ドメイン配列との少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。この配列に関する同一性または相同性は、必要な場合、最大パーセント配列同一性を得るため、配列をアラインメントさせてギャップを導入した後、親抗体残基と同一である候補配列におけるアミノ酸残基のパーセントと本明細書で定義される。抗体配列に対するＮ末端、Ｃ末端または内部の伸長、欠失もしくは挿入はいずれも、配列同一性または相同性に影響を与えるものと解釈されるべきではない。変異体はヒトＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆに結合する能力を保持し、好ましくは親抗体より優れた特性を有する。例えば、変異体はより強い結合親和性、ＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆ誘導性炎症を阻害する向上した能力を有しうる。そのような特性を分析するため、抗ＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆおよび／またはＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体の構成が、本明細書で開示される生物活性アッセイにおいてその活性に影響を及ぼすため、例えば、変異体のＦａｂ形態を親抗体のＦａｂ形態と、または変異体の完全長形態を親抗体の完全長形態と比較すべきである。本明細書で特に興味深い変異抗体は、親抗体と比べた場合、少なくとも約１０倍、好ましくは少なくとも約２０倍、最も好ましくは少なくとも約５０倍の生物学的活性の向上を示す変異抗体である。
本明細書で用いる「親抗体」という用語は、変異体の調製に用いられるアミノ酸配列にコードされる抗体を指す。好ましくは、親抗体はヒトフレームワーク領域を有し、存在する場合、ヒト抗体定常領域（単数・複数）を有する。例えば、親抗体はヒト化またはヒト抗体でありうる。
「アゴニスト」という用語は、別の分子の活性、活性化または機能を増大させる、蛋白質、ポリペプチド、ペプチド、抗体、抗体断片、大分子または小分子（１０ｋＤ未満）を含む任意の化合物を指す。
「アンタゴニスト」という用語は、別の分子の活性、活性化または機能を低下させる、蛋白質、ポリペプチド、ペプチド、抗体、抗体断片、大分子または小分子（１０ｋＤ未満）を含む任意の化合物を指す。
「本発明のポリペプチドのリガンドへの結合」という用語は、本発明のリガンドポリペプチドの受容体への結合；本発明の受容体ポリペプチドのリガンドへの結合；本発明の抗体の抗原またはエピトープへの結合；本発明の抗原またはエピトープの抗体への結合；本発明の抗体の抗イディオタイプ抗体への結合；本発明の抗イディオタイプ抗体のリガンドへの結合；本発明の抗イディオタイプ抗体の受容体への結合；本発明の抗・抗イディオタイプ抗体のリガンド、受容体または抗体などへの結合を含むが、これに限定されない。
一部の実施形態における「多特異性」または「多機能性」抗体以外の「二価抗体」は、同一の抗原特異性を有する結合部位を含むと理解される。
「二重特異性」または「二機能性」抗体は、２つの異なる重鎖／軽鎖対および２つの異なる結合部位を有するハイブリッド抗体である。二重特異性抗体は、限定されないが、ハイブリドーマの融合またはＦａｂ’断片の結合を含む種々の方法により生成されうる。例えば、ＳｏｎｇｓｉｖｉｌａｉおよびＬａｃｈｍａｎｎ（１９９０）、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５−３２１；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら（１９９２）、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７−１５５３を参照されたい。
「キメラ抗体（単数）」または「キメラ抗体（複数）」という用語は、その軽鎖・重鎖遺伝子が、異なる種に属する免疫グロブリン可変・定常領域遺伝子から、通常、遺伝子操作によって構築された抗体を指す。例えば、マウスモノクローナル抗体由来の遺伝子の可変セグメントは、γ１およびγ３のようなヒト定常セグメントに結合されうる。したがって、典型的な治療用キメラ抗体は、マウス抗体由来の可変もしくは抗原結合ドメインおよびヒト抗体由来の定常ドメインからなるハイブリッド蛋白質であるが、他の哺乳動物種を用いてもよい。具体的には、キメラ抗体は、ヒンジのすべてもしくは一部および免疫グロブリン軽鎖、重鎖もしくは両方の定常領域が、別の動物の免疫グロブリン軽鎖または重鎖由来の対応する領域の代わりに置換された組換えＤＮＡ技術によって生成される。このようにして、親モノクローナル抗体の抗原結合部は別の種の抗体の骨格に接合される。Ｗｉｎｔｅｒらの欧州特許第０２３９４００号に述べられている一手法では、１つの種の相補性決定領域（ＣＤＲ）の、別の種の相補性決定領域に代わる置換、例えば、ヒト重鎖・軽鎖免疫グロブリン可変領域ドメイン由来のＣＤＲの、マウス可変領域ドメイン由来のＣＤＲとの置換について述べている。これらの変性抗体は、次に、ヒト免疫グロブリン定常領域と結合され、抗原に特異的な置換マウスＣＤＲを除いてヒトである抗体を形成しうる。抗体のＣＤＲ領域を接合する方法は、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３−３２７およびＶｅｒｈｏｅｙｅｎら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２３９：１５３４−１５３６に見出されうる。
本明細書で用いる「有効中和力価」という用語は、臨床的に有効であり（ヒトにおいて）または、例えば、コットンラットにおいて９９％ウイルスを減少させることが示された、動物（ヒトまたはコットンラット）の血清に存在する量に対応する抗体の量を指す。９９％の減少は、例えば、ＲＳＶ（ラウス肉腫ウイルス）の１０３ｐｆｕ，１０４ｐｆｕ，１０５ｐｆｕ，１０６ｐｆｕ，１０７ｐｆｕ，１０８ｐｆｕまたは１０９ｐｆｕ）の特定の抗原投与により定義される。
本明細書で用いるように、「エピトープ」という用語は、モノクローナル抗体が特異的に結合する抗原の一部分を指す。したがって、「エピトープ」という用語は、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体への特異的結合が可能な任意の蛋白質決定基を含む。通常、エピトープ決定基は、アミノ酸または糖側鎖のような分子の化学的に活性な表面集団からなり、通常、特定の三次元構造特徴および特定の電荷特性を有する。より具体的には、本明細書で用いる「ＩＬ−１７Ａエピトープ」、「ＩＬ−１７Ｆエピトープ」および／または「ＩＬ−１７Ａ／Ｆエピトープ」という用語は、動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはマウスまたはヒトにおいて抗原活性または免疫原活性を有する、対応するポリペプチドの一部分を指す。免疫原活性を有するエピトープは、動物において抗体応答を誘導するＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆポリペプチドの一部分である。抗原活性を有するエピトープは、当該技術分野において周知の任意の方法、例えば、イムノアッセイにより定量されるように、抗体が免疫特異的に結合するＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆポリペプチドの一部分である。抗原性エピトープは必ずしも免疫原性である必要はない。そのようなエピトープは本質的に直鎖状であり得、または不連続エピトープでありうる。したがって、本明細書で用いるように、「立体構造エピトープ」という用語は、一連の切れ目のないアミノ酸以外の抗原のアミノ酸間の空間関係により形成される不連続エピトープを指す。より具体的には、エピトープという用語は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに適用されるため、本明細書で定義されるエピトープを包含する。
本明細書で用いる場合、「エピトープタグを付けた」という用語は、「エピトープタグ」に融合した抗ＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆおよび／またはＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を指す。エピトープタグポリペプチドは、それに対する抗体が作製されうるエピトープを付与するのに十分な残基を有するが、本発明の抗体の活性を妨げないほどに短い。好ましくは、エピトープタグはそれに対する抗体が他のエピトープと実質的に交差反応しないように十分に独特である。一般的に、好適なタグポリペプチドは少なくとも６個のアミノ酸残基を、通常、約８〜５０アミノ酸残基（好ましくは約９〜３０アミノ酸残基）を有する。その例には、ｆｌｕ ＨＡタグポリペプチドとその抗体１２ＣＡ５（Ｆｉｅｌｄら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．８：２１５９−２１６５（１９８８））；ｃ−ｍｙｃタグとそれに対する８Ｆ９，３Ｃ７，６Ｅ１０，Ｇ４，Ｂ７および９Ｅ１０抗体（Ｅｖａｎら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５（１２）：３６１０−３６１６（１９８５））；ならびに単純ヘルペスウイルス糖蛋白質Ｄ（ｇＤ）タグとその抗体（Ｐａｂｏｒｓｋｙら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ３（６）：５４７−５５３（１９９０））が含まれる。一部の実施形態では、エピトープタグは「サルベージ受容体結合エピトープ」である。本明細書で用いるように、「サルベージ受容体結合エピトープ」という用語は、ＩｇＧ分子のインビボ血清中半減期の増加に関与する、ＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ１，ＩｇＧ２，ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープを指す。
本明細書で用いる「断片」という用語は、Ｉｌ−１７ＡもしくはＩＬ−１７ＦポリペプチドまたはＩｌ−１７ＡもしくはＩＬ−１７Ｆもしくは両ＩＬ−１７Ａ，ＩＬ−１７Ｆポリペプチドに免疫特異的に結合する抗体のアミノ酸配列の少なくとも５個の隣接アミノ酸残基、少なくとも１０個の隣接アミノ酸残基、少なくとも１５個の隣接アミノ酸残基、少なくとも２０個の隣接アミノ酸残基、少なくとも２５個の隣接アミノ酸残基、少なくとも４０個の隣接アミノ酸残基、少なくとも５０個の隣接アミノ酸残基、少なくとも６０個の隣接アミノ酸残基、少なくとも７０個の隣接アミノ酸残基、少なくとも８０個の隣接アミノ酸残基、少なくとも９０個の隣接アミノ酸残基、少なくとも１００個の隣接アミノ酸残基、少なくとも１２５個の隣接アミノ酸残基、少なくとも１５０個の隣接アミノ酸残基、少なくとも１７５個の隣接アミノ酸残基、少なくとも２００個の隣接アミノ酸残基もしくは少なくとも２５０個の隣接アミノ酸残基のアミノ酸配列を含むペプチドまたはポリペプチドを指す。
本明細書で用いるように、「免疫グロブリン」という用語は、免疫グロブリン遺伝子に実質的にコードされる１つ以上のポリペプチドからなる蛋白質を指す。免疫グロブリンの一形態は抗体の基本構造単位を構成する。この形態は四量体であり、２つの同一の免疫グロブリン鎖対からなり、各対が１本の軽鎖および１本の重鎖を有する。各対において、軽鎖・重鎖可変領域は共に抗原への結合に関与し、定常領域は抗体エフェクター機能に関与する。
完全長免疫グロブリン「軽鎖」（約２５Ｋｄまたは２１４アミノ酸）は、ＮＨ２末端にて可変領域遺伝子（約１１０アミノ酸）に、ＣＯＯＨ末端にてカッパまたはラムダ定常領域遺伝子にコードされる。完全長免疫グロブリン「重鎖」（約５０Ｋｄまたは４４６アミノ酸）は、同様に可変領域遺伝子（約１１６アミノ酸）および前述の定常領域遺伝子のうちの１つ（約３３０アミノ酸）にコードされる。重鎖は、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタまたはエプシロンに分類され、抗体のアイソタイプをそれぞれＩｇＧ，ＩｇＭ，ＩｇＡ，ＩｇＤおよびＩｇＥと定義する。軽鎖・重鎖内にて可変・定常領域は約１２またはそれ以上のアミノ酸の“Ｊ”領域によって結合され、重鎖は約１０以上のアミノ酸の“Ｄ”領域も含む（Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｐａｕｌ，Ｗ．（編）、第二版、Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ社、Ｎ．Ｙ．，１９８９）、第七章を全体的に参照されたい（あらゆる目的のためにその全体を参照して組み込まれる）。
免疫グロブリン軽鎖または重鎖可変領域は、３つの超可変領域に割り込まれた「フレームワーク」領域からなる。したがって、「超可変領域」という用語は、抗原結合に関与する抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は「相補性決定領域」または“ＣＤＲ”由来のアミノ酸残基（すなわち、軽鎖可変ドメインにおける残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）および８９〜９７（Ｌ３）ならびに重鎖可変ドメインにおける３１〜３５（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）および９５〜１０２（Ｈ３）（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第五版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））および／または「超可変ループ」由来の残基（すなわち、軽鎖可変ドメインにおける残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）および９１〜９６（Ｌ３）ならびに重鎖可変ドメインにおける２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）および９６〜１０１（Ｈ３）；ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７）を含む（共に参照して本明細書に組み込まれる）。「フレームワーク領域」または「ＦＲ」残基は、本明細書で定義される超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。異なる軽鎖または重鎖のフレームワーク領域の配列は種内に比較的保存されている。したがって、「ヒトフレームワーク領域」は、天然ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域と実質的に同一（約８５％またはそれ以上、通常、９０〜９５％またはそれ以上）であるフレームワーク領域である。構成軽鎖・重鎖の複合フレームワーク領域である抗体のフレームワーク領域は、ＣＤＲを位置決めし、アラインメントさせる役割を果たす。ＣＤＲは、主に、抗原のエピトープへの結合に関与する。
したがって、「ヒト化」免疫グロブリンという用語は、ヒトフレームワーク領域および非ヒト（通常、マウスまたはラット）免疫グロブリン由来の１つ以上のＣＤＲを含む免疫グロブリンを指す。ＣＤＲを付与する非ヒト免疫グロブリンは「ドナー」と称され、フレームワークを付与するヒト免疫グロブリンは「アクセプター」と称される。定常領域は存在する必要はないが、存在する場合、ヒト免疫グロブリン定常領域と実質的に同一、すなわち、少なくとも約８５〜９０％、好ましくは約９５％またはそれ以上同一であらねばならない。したがって、ヒト化免疫グロブリンのすべての部分は、おそらくＣＤＲを除き、天然ヒト免疫グロブリン配列の対応する部分と実質的に同一である。「ヒト化抗体」はヒト化軽鎖およびヒト化重鎖免疫グロブリンを含む抗体である。例えば、ヒト化抗体は上記に定義された典型的なキメラ抗体を包含しないであろうが、それは、例えば、キメラ抗体の可変領域全体が非ヒトであるためである。
本明細書で用いるように、「ヒト抗体」という用語は、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体を含み、ヒト免疫グロブリンライブラリーから、または、例えば、米国特許第５，９３９，５９８号でのＫｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉらによって説明されているように、内因性免疫グロブリンを発現しない、１つ以上のヒト免疫グロブリンのトランスジェニック動物から単離された抗体を含む。
「遺伝子改変抗体」という用語は、アミノ酸配列が天然抗体のアミノ酸配列と異なっている抗体をいう。抗体の作製における組換えＤＮＡ技術の関連のため、天然抗体に見出されるアミノ酸の配列に限定される必要はなく、抗体は所望の特性を得るために再設計されうる。可能な変異は多く、わずか１個または数個のアミノ酸の変更から、例えば、可変または定常領域の完全な再設計までに及ぶ。概して、定常領域の変更は、補体結合、膜との相互作用および他のエフェクター機能のような特性を改善または改変するために行われる。可変領域の変更は抗原結合特性を向上させるために行われる。
抗体に加え、免疫グロブリンは、例えば、単鎖またはＦｖ，Ｆａｂおよび（Ｆａｂ’）２ならびに二重特異性抗体、直鎖状抗体、多価または多特異性ハイブリッド抗体（上記のように、また、Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７，１０５（１９８７）に詳細に）を含む種々の他の形態にて、また、単鎖（例えば、Ｈｕｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８５，５８７９−５８８３（１９８８）およびＢｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４２，４２３−４２６（１９８８）。これらは参照して本明細書に組み込まれる）にて存在しうる（Ｈｏｏｄら、“Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”，Ｂｅｎｊａｍｉｎ，Ｎ．Ｙ．、第二版（１９８４）ならびにＨｕｎｋａｐｉｌｌｅｒおよびＨｏｏｄ，Ｎａｔｕｒｅ，３２３，１５−１６（１９８６）を全体的に参照されたい。これらは参照して本明細書に組み込まれる）。
本明細書で用いるように、「単鎖Ｆｖ」、「単鎖抗体」、“Ｆｖ”または“ｓｃＦｖ”という用語は、重鎖および軽鎖由来の可変領域を含むが、わずか単一ポリペプチド鎖内にて定常領域を欠く抗体断片を指す。一般的に、単鎖抗体は、抗原結合を可能にしうる所望の構造を形成することを可能にするＶＨ，ＶＬドメイン間のポリペプチドリンカーを更に含む。単鎖抗体は、Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、第１１３巻、ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ（編）、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ社、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、２６９〜３１５頁（１９９４）でのＰｌｕｃｋｔｈｕｎによって詳細に考察されている。単鎖抗体を作製する種々の方法が既知であり、米国特許第４，６９４，７７８号および第５，２６０，２０３号；国際特許出願公開第ＷＯ８８／０１６４９号；Ｂｉｒｄ（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２：４２３−４４２；Ｈｕｓｔｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：５８７９−５８８３；Ｗａｒｄら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ３３４：５４４５４；Ｓｋｅｒｒａら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２：１０３８−１０４１に述べられている方法が含まれ、それらの開示内容は目的に応じて参照して組み込まれる。具体的な実施形態では、単鎖抗体は二重特異性および／またはヒト化でもよい。
「Ｆａｂ断片」は１本の軽鎖ならびに１本の重鎖のＣＨ１および可変領域からなる。Ｆａｂ分子の重鎖は別の重鎖分子とジスルフィド結合を形成できない。
「Ｆａｂ’断片」は１本の軽鎖と、鎖間ジスルフィド結合が２本の重鎖間に形成され、Ｆ（ａｂ’）２分子を形成できるように、ＣＨ１，ＣＨ２ドメイン間により多くの定常領域を含む１本の重鎖とを含む。
「Ｆ（ａｂ’）２断片」は２本の軽鎖と、鎖間ジスルフィド結合が２本の重鎖間に形成されるように、ＣＨ１，ＣＨ２ドメイン間に定常領域の一部分を含む２本の重鎖とを含む。
「二重特異性抗体」という用語は、２つの抗原結合部位を有する小抗体断片を指し、その断片は同じポリペプチド鎖において軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に結合した重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む（ＶＨ−ＶＬ）。同じ鎖上の２つのドメイン間の対形成を可能にするには短すぎるリンカーを用いることにより、ドメインは別の鎖の相補的ドメインと対形成せざるを得なく、２つの抗原結合部位を生成する。二重特異性抗体は、例えば、欧州特許第４０４，０９７号；ＷＯ９３／１１１６１；およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：６４４４−６４４８（１９９３）により十分に述べられている。
「直鎖状抗体」という用語は、Ｚａｐａｔａら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７−１０６２（１９９５）に述べられている抗体を指す。簡潔には、これらの抗体は一対の抗原結合領域を形成する一対のタンデムＦｄセグメント（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）を含む。直鎖状抗体は二重特異性または単一特異性でよい。
本明細書で用いる「免疫学的に機能的な免疫グロブリン断片」という用語は、免疫グロブリン重鎖および軽鎖の少なくとも可変ドメインを含むポリペプチド断片を指す。本発明の免疫学的に機能的な免疫グロブリン断片は、リガンドに結合し、リガンドのその受容体への結合を阻止し、受容体へのリガンド結合から生じる生物学的応答を妨害し、またはその任意の組合せを行うことが可能である。好ましくは、本発明の免疫学的に機能的な免疫グロブリン断片はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに特異的に結合する。
本明細書で用いる「モノクローナル抗体」という用語は、ハイブリドーマ技術を通じて生成される抗体に限定されない。「モノクローナル抗体」という用語は、任意の真核生物、原核生物またはファージクローンを含む単一クローン由来の抗体を指し、それが生成される方法をいうのではない。
本明細書で用いるように、「核酸」または「核酸分子」は、ポリヌクレオチド、例えば、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）またはリボ核酸（ＲＮＡ）、オリゴヌクレオチド、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって生成される断片ならびにライゲーション、切断、エンドヌクレアーゼ作用およびエキソヌクレアーゼ作用のいずれかによって生成される断片を指す。核酸分子は、天然ヌクレオチド（例えば、ＤＮＡおよびＲＮＡ）である単量体または天然ヌクレオチド（例えば、α−エナンチオマー形態の天然ヌクレオチド）の類似体または両方の組合せからなりうる。修飾ヌクレオチドは糖部分および／またはピリミジンもしくはプリン塩基部分の変化を有しうる。糖修飾は、例えば、１つ以上のヒドロキシル基のハロゲン、アルキル基、アミンおよびアジド基への置換を含み、あるいは糖はエーテルまたはエステルとして官能化されうる。さらに、糖部分全体は、立体的かつ電子的に類似の構造、例えば、アザ糖および炭素環状糖類似体に置換されうる。塩基部分における修飾例は、アルキル化プリンおよびピリミジン、アシル化プリンまたはピリミジンあるいは他の周知の複素環置換を含む。核酸単量体はホスホジエステル結合またはそのような結合の類似体によって結合されうる。ホスホジエステル結合の類似体は、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレノエート、ホスホロジセレノエート、ホスホロアニロチオエート、ホスホルアニリデート、ホスホルアミデートなどを含む。「核酸分子」という用語は、ポリアミド骨格に結合した天然または修飾核酸塩基を含む、いわゆる「ペプチド核酸」も含む。核酸は一本鎖または二本鎖でよい。
「核酸分子の補体」という用語は、基準ヌクレオチド配列と比べて相補的ヌクレオチド配列および逆方向性を有する核酸分子を指す。例えば、配列５’ＡＴＧＣＡＣＧＧＧ３’は５’ＣＣＣＧＴＧＣＡＴ３’に相補的である。
「縮重ヌクレオチド配列」という用語は、ポリペプチドをコードする基準核酸分子と比べて１つ以上の縮重コドンを含むヌクレオチドの配列を示す。縮重コドンは異なるヌクレオチドのトリプレットを含むが、同じアミノ酸残基をコードする（すなわち、ＧＡＵおよびＧＡＣトリプレットは各々Ａｓｐをコードする）。
「構造遺伝子」という用語は、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）に転写され、次に、特定のポリペプチドの特徴を示すアミノ酸の配列に翻訳される核酸分子を指す。
「単離核酸分子」は生物のゲノムＤＮＡに組み込まれていない核酸分子である。例えば、成長因子をコードし、細胞のゲノムＤＮＡから分離されたＤＮＡ分子は単離ＤＮＡ分子である。単離核酸分子の別例は生物のゲノムに組み込まれていない化学合成核酸分子である。特定の種から単離された核酸分子は、その種由来の染色体の完全ＤＮＡ分子より小さい。
「核酸分子構築物」は、天然には存在しない配置にて結合・並置された核酸のセグメントを含むように、ヒトの介入によって修飾された一本鎖または二本鎖核酸分子である。
「直鎖ＤＮＡ」は５’および３’自由端を有する非環状ＤＮＡ分子を示す。直鎖ＤＮＡは酵素消化または物理的破壊によってプラスミドのような閉環状ＤＮＡ分子から調製されうる。
「相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）」は逆転写酵素によってｍＲＮＡ鋳型から形成される一本鎖ＤＮＡ分子である。通常、逆転写の開始にはｍＲＮＡの部分に相補的なプライマーが用いられる。当業者は、そのような一本鎖ＤＮＡ分子とその相補ＤＮＡ鎖からなる二本鎖ＤＮＡ分子を指すのにも“ｃＤＮＡ”という用語を用いる。“ｃＤＮＡ”という用語はＲＮＡ鋳型から合成されるｃＤＮＡ分子のクローンも指す。
「プロモーター」は構造遺伝子の転写を指示するヌクレオチド配列である。通常、プロモーターは構造遺伝子の転写開始部位の近位、遺伝子の５’非コード領域に位置する。転写の開始において機能するプロモーター内の配列エレメントは、コンセンサスヌクレオチド配列を特徴とする場合が多い。これらのプロモーターエレメントは、ＲＮＡポリメラーゼ結合部位、ＴＡＴＡ配列、ＣＡＡＴ配列、分化特異的エレメント（ＤＳＥ；ＭｃＧｅｈｅｅら、Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．７：５５１（１９９３））、環状ＡＭＰ応答エレメント（ＣＲＥ）、血清応答エレメント（ＳＲＥ；Ｔｒｅｉｓｍａｎ、Ｓｅｍｉｎａｒｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌ．１：４７（１９９０））、グルココルチコイド応答エレメント（ＧＲＥ）ならびにＣＲＥ／ＡＴＦ（Ｏ’Ｒｅｉｌｌｙら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：１９９３８（１９９２））、ＡＰ２（Ｙｅら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：２５７２８（１９９４））、ＳＰ１、ｃＡＭＰ応答エレメント結合蛋白質（ＣＲＥＢ；Ｌｏｅｋｅｎ、Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒ．３：２５３（１９９３））および八量体因子（Ｗａｔｓｏｎら（編）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅ、第四版（Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｃ．１９８７）ならびにＬｅｍａｉｇｒｅおよびＲｏｕｓｓｅａｕ、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３０３：１（１９９４）を全体的に参照されたい）のような他の転写因子の結合部位を含む。プロモーターが誘導性プロモーターである場合、転写速度は誘導物質に応答して増加する。対照的に、プロモーターが構成的プロモーターである場合、転写速度は誘導物質によって調節されない。抑制性プロモーターも既知である。
「コアプロモーター」は、ＴＡＴＡボックスおよび転写開始を含む、プロモーター機能に不可欠なヌクレオチド配列を含む。この定義により、コアプロモーターは、活性を亢進させ、または組織特異的活性を付与しうる特定の配列の非存在下、検出可能な活性を有し得、または有し得ない。
「調節エレメント」は、コアプロモーターの活性を調節するヌクレオチド配列である。例えば、調節エレメントは、特定の細胞、組織またはオルガネラにおいて排他的または選択的に転写を可能にする細胞因子に結合するヌクレオチド配列を含みうる。通常、これらのタイプの調節エレメントは、「細胞特異的」、「組織特異的」または「オルガネラ特異的」態様にて発現する遺伝子と関連する。
「エンハンサー」は、転写開始部位に対するエンハンサーの距離または方向性にかかわらず、転写の効率を高めることができるタイプの調節エレメントである。
「異種ＤＮＡ」は所与の宿主細胞内に天然に存在しないＤＮＡ分子またはＤＮＡ分子集団を指す。特定の宿主細胞に対して異種であるＤＮＡ分子は、その宿主ＤＮＡが非宿主ＤＮＡ（すなわち、外因性ＤＮＡ）と組み合わせられる限り、その宿主細胞種に由来するＤＮＡ（すなわち、内因性ＤＮＡ）を含みうる。例えば、転写プロモーターを含む宿主ＤＮＡセグメントに機能的に結合したポリペプチドをコードする非宿主ＤＮＡセグメントを含むＤＮＡ分子は、異種ＤＮＡ分子であるとみなされる。逆に、異種ＤＮＡ分子は外因性プロモーターに機能的に結合した内因性遺伝子を含みうる。もう一つの例として、野生型細胞に由来する遺伝子を含むＤＮＡ分子は、そのＤＮＡ分子がその野生型遺伝子を欠損する変異細胞に導入される場合、異種ＤＮＡであるとみなされる。
「ポリペプチド」は、天然または合成的に生成されようが、ペプチド結合によって結合されるアミノ酸残基の多量体である。約１０未満のアミノ酸残基のポリペプチドは、一般的に「ペプチド」と称される。
「蛋白質」は１つ以上のポリペプチド鎖を含む高分子である。蛋白質は炭水化物基のような非ペプチド成分も含みうる。炭水化物および他の非ペプチド置換基は、蛋白質が産生される細胞によってその蛋白質に付加され得、また、細胞のタイプにより異なる。蛋白質は本明細書でそのアミノ酸骨格構造の点から定義される。概して、炭水化物基のような置換基は明示されないが、それでもなお存在しうる。
非宿主ＤＮＡ分子にコードされるペプチドまたはポリペプチドは、「異種」ペプチドまたはポリペプチドである。
「クローニングベクター」は、宿主細胞において自己複製する能力を有するプラスミド、コスミドまたはバクテリオファージのような核酸分子である。通常、クローニングベクターは、ベクターの不可欠な生物学的機能を喪失することなく、核酸分子の挿入を確定的に可能にする１つまたは少数の制限エンドヌクレアーゼ認識部位ならびにクローニングベクターで形質転換された細胞の同定および選択に用いるのに好適なマーカー遺伝子をコードするヌクレオチド配列を含む。通常、マーカー遺伝子はテトラサイクリン抵抗性またはアンピシリン抵抗性を付与する遺伝子を含む。
「発現ベクター」は宿主細胞において発現する遺伝子をコードする核酸分子である。典型的には、発現ベクターは、転写プロモーター、遺伝子、および転写ターミネーターを含む。通常、遺伝子発現はプロモーターの制御下に置かれ、そのような遺伝子はプロモーターに「機能的に結合」していると言われる。同様に、調節エレメントがコアプロモーターの活性を調節する場合、調節エレメントおよびコアプロモーターは機能的に結合している。
「組換え宿主」はクローニングベクターまたは発現ベクターのような異種核酸分子を含む細胞である。本発明の場合、組換え宿主の一例は発現ベクターからＩＬ−１７ＲＡを産生する細胞である。対照的に、ＩＬ−１７ＲＡはＩＬ−１７ＲＡの「天然源」であり、かつ発現ベクターを欠く細胞によって産生されうる。
「組込み形質転換体」は異種ＤＮＡが細胞のゲノムＤＮＡに組み込まれた組換え宿主細胞である。
「融合蛋白質」は、少なくとも２個の遺伝子のヌクレオチド配列を含む核酸分子によって発現されるハイブリッド蛋白質である。例えば、融合蛋白質は、アフィニティーマトリックスに結合するポリペプチドと融合したＩＬ−１７ＲＡポリペプチドの少なくとも一部を含みうる。そのような融合蛋白質は、アフィニティークロマトグラフィーを用いて大量のＩＬ−１７ＲＡを単離する手段を提供する。
「受容体」という用語は、「リガンド」と呼称される生物活性分子に結合する細胞結合型蛋白質を指す。この相互作用は細胞に対するリガンドの作用を媒介する。受容体は、細胞質膜または核膜結合；単量体（例えば、甲状腺刺激ホルモン受容体、βアドレナリン受容体）または多量体（例えば、ＰＤＧＦ受容体、成長ホルモン受容体、ＩＬ−３受容体、ＧＭ−ＣＳＦ受容体、Ｇ−ＣＳＦ受容体、エリスロポエチン受容体およびＩＬ−６受容体）でありうる。膜結合受容体は、細胞外リガンド結合ドメインと、シグナル伝達に典型的に関与する細胞内エフェクタードメインとを含む多ドメイン構造を特徴とする。一部の膜結合受容体では、細胞外リガンド結合ドメインと細胞内エフェクタードメインとは、完全な機能的受容体を含む別個のポリペプチドに位置する。
一般的に、リガンドの受容体への結合は、細胞内でのエフェクタードメインと他の分子との相互作用を生じさせる受容体の立体構造変化をもたらし、次に、これは細胞の代謝の変化を引き起こす。受容体−リガンド相互作用に関連することが多い代謝事象は、遺伝子転写、リン酸化、脱リン酸化、環状ＡＭＰ産生の増加、細胞内カルシウム動員、膜脂質動員、細胞接着、イノシトール脂質の加水分解およびリン脂質の加水分解を含む。
「分泌シグナル配列」という用語は、より大きいポリペプチドの成分として、より大きいポリペプチドを、それが合成される細胞の分泌経路を通って移動させるペプチド（「分泌ペプチド」）をコードするＤＮＡ配列を示す。より大きいポリペプチドは分泌経路を通って移動する際、一般的に切断されて分泌ペプチドを除去する。
「単離ポリペプチド」は、本来ポリペプチドと関連する炭水化物、脂質または他の蛋白性不純物のような夾雑細胞成分を本質的に含まないポリペプチドである。通常、単離ポリペプチドの調製物は、高度に精製された形態、すなわち、少なくとも約８０％純度、少なくとも約９０％純度、少なくとも約９５％純度、９５％超の純度、例えば、９６％、９７％もしくは９８％またはそれ以上の純度あるいは９９％超の純度のポリペプチドを含む。特定の蛋白質調製物が単離ポリペプチドを含むことを示す一つの方法は、蛋白質調製物のドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）−ポリアクリルアミドゲル電気泳動およびゲルのクーマシーブリリアントブルー染色後の単一バンドの出現によるものである。しかし、「単離された」という用語は、二量体またはグリコシル化もしくは誘導体化形態のような別の物理的形態の同じポリペプチドの存在を排除しない。
「アミノ末端」および「カルボキシル末端」という用語は、本明細書でポリペプチド内の位置を指すために用いられる。文脈上許容される場合、これらの用語は近接または相対的位置を示すため、ポリペプチドの特定の配列または部分に関連して用いられる。例えば、ポリペプチド内にて基準配列のカルボキシル末端側に位置する特定の配列は、基準配列のカルボキシル末端の近位に位置するが、必ずしも完全ポリペプチドのカルボキシル末端にあるわけではない。
「発現」という用語は遺伝子産物の生合成を指す。例えば、構造遺伝子の場合、発現は構造遺伝子のｍＲＮＡへの転写およびｍＲＮＡの１つ以上のポリペプチドへの翻訳を含む。
本明細書で用いるように、「免疫調節物質」という用語は、サイトカイン、幹細胞増殖因子、リンホトキシン、共刺激分子、造血因子等およびこれらの分子の合成類似体を含む。
「相補体／抗相補体対」という用語は、適切な条件下にて非共有結合した安定な対を形成する非同一部分を示す。例えば、ビオチンおよびアビジン（またはストレプトアビジン）は相補体／抗相補体対の原型メンバーである。他の例示的な相補体／抗相補体対は、受容体／リガンド対、抗体／抗原（またはハプテンもしくはエピトープ）対、センス／アンチセンスポリヌクレオチド対などを含む。相補体／抗相補体対のその後の解離が望ましい場合、好ましくは、相補体／抗相補体対は１０９Ｍ−１未満の結合親和性を有する。
本明細書で用いるように、「治療剤」は、治療に有用なコンジュゲートを生成するために抗体部分にコンジュゲートされる分子または原子である。治療剤の例には、薬剤、毒素、免疫調節物質、キレート剤、ホウ素化合物、光活性剤または色素ならびに放射性同位元素が含まれる。
「検出可能な標識」は、診断に有用な分子を生成するために抗体部分にコンジュゲートされうる分子または原子である。検出可能な標識の例には、キレート剤、光活性剤、放射性同位元素、蛍光剤、常磁性イオンまたは他のマーカー部分が含まれる。
「アフィニティータグ」という用語は、本明細書では、第二のポリペプチドの精製または検出に備えるため、または第二のポリペプチドの基質に対する結合部位を付与するため、第二のポリペプチドに結合されうるポリペプチドセグメントを示すために用いられる。原則的に、抗体または他の特異的結合物質が利用可能な任意のペプチドまたは蛋白質がアフィニティータグとして用いられうる。アフィニティータグは、ポリヒスチジントラクト、プロテインＡ（Ｎｉｌｓｓｏｎら、ＥＭＢＯ Ｊ．４：１０７５（１９８５）；Ｎｉｌｓｓｏｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１９８：３（１９９１））、グルタチオンＳトランスフェラーゼ（ＳｍｉｔｈおよびＪｏｈｎｓｏｎ、Ｇｅｎｅ ６７：３１（１９８８））、Ｇｌｕ−Ｇｌｕアフィニティータグ（Ｇｒｕｓｓｅｎｍｅｙｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：７９５２（１９８５））、サブスタンスＰ、ＦＬＡＧペプチド（Ｈｏｐｐら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ６：１２０４（１９８８））、ストレプトアビジン結合ペプチドまたは他の抗原性エピトープもしくは結合ドメインを含む。Ｆｏｒｄら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ２：９５（１９９１）を全体的に参照されたい。アフィニティータグをコードするＤＮＡ分子は市販業者から入手可能である（例えば、Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ社、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）。
「標的ポリペプチド」または「標的ペプチド」は、少なくとも１つのエピトープを含み、腫瘍細胞または感染病原体抗原を保有する細胞のような標的細胞上に発現するアミノ酸配列である。Ｔ細胞は、標的ポリペプチドまたは標的ペプチドに対して主要組織適合遺伝子複合体分子によって提示されるペプチドエピトープを認識し、通常、標的細胞を溶解し、または標的細胞部位に他の免疫細胞を動員し、これにより、標的細胞を死滅させる。
真核生物では、ＲＮＡポリメラーゼＩＩが構造遺伝子の転写を触媒してｍＲＮＡを生成する。核酸分子はＲＮＡポリメラーゼＩＩ鋳型を含むように設計され得、そこでＲＮＡ転写物は特定のｍＲＮＡの配列と相補的な配列を有する。ＲＮＡ転写物は「アンチセンスＲＮＡ」と呼称され、アンチセンスＲＮＡをコードする核酸分子は「アンチセンス遺伝子」と呼称される。アンチセンスＲＮＡ分子はｍＲＮＡ分子に結合することができ、ｍＲＮＡ翻訳の阻害をもたらす。
「ＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆに特異的なアンチセンスオリゴヌクレオチド」は、（ａ）ＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆ遺伝子の一部分と安定な三重鎖を形成することができ、あるいは（ｂ）ＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆ遺伝子のｍＲＮＡ転写物の一部分と安定な二重鎖を形成することができる配列を有するオリゴヌクレオチドである。
「リボザイム」は触媒中心を含む核酸分子である。その用語は、ＲＮＡ酵素、自己スプライシングＲＮＡ、自己切断ＲＮＡおよびこれらの触媒機能を行う核酸分子を含む。リボザイムをコードする核酸分子は「リボザイム遺伝子」と呼称される。
「外部ガイド配列」は、内因性リボザイムであるＲＮアーゼＰを細胞内ｍＲＮＡの特定の種に方向づけ、ＲＮアーゼＰによるｍＲＮＡの切断をもたらす核酸分子である。外部ガイド配列をコードする核酸分子は「外部ガイド配列遺伝子」と呼称される。
「アレル変異体」という用語は、本明細書では、同じ染色体座を占める遺伝子の任意の２つ以上の別の形態を示すために用いられる。アレル変異は突然変異によって自然に生じ、集団内の表現型多型を生じさせうる。遺伝子突然変異はサイレントであり得（コードされるポリペプチドの変化なし）、または変化したアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードしうる。アレル変異体という用語は、本明細書で遺伝子のアレル変異体にコードされる蛋白質を示すためにも用いられる。
「オルソログ」という用語は、異種由来のポリペプチドまたは蛋白質の機能的対応物である、１つの種から得られるポリペプチドまたは蛋白質を示す。オルソログ間の配列差異は種分化の結果である。
「パラログ」は、生物によって作製される、明らかに異なるが構造的に関連する蛋白質である。パラログは遺伝子重複によって生じると考えられる。例えば、α−グロビン、β−グロビンおよびミオグロビンは互いのパラログである。
標準的分析法の不正確さにより、高分子の分子量および分子長は近似値であると理解される。そのような数値が「約」Ｘまたは「およそ」Ｘと表される場合、Ｘの表示数値は±１０％の正確度であると理解される。
（Ｃ）ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに結合する抗体）
本発明の抗体はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ １７Ｆに特異的に結合する。一部の実施形態では、本発明の抗体は単量体型のＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに特異的に結合する。一部の実施形態では、本発明の抗体はホモ二量体型のＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆに結合する。更に他の実施形態では、本発明の抗体は多量体型のＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに特異的に結合する（例えば、ヘテロ二量体型）。本発明の好ましい抗体はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの生物学的活性を阻止する。
好ましい抗体および本発明の方法に用いるのに好適な抗体は、例えば、完全ヒト抗体、ヒト抗体相同体、ヒト化抗体相同体、キメラ抗体相同体、Ｆａｂ，Ｆａｂ’，Ｆ（ａｂ’）２およびＦ（ｖ）抗体断片、単鎖抗体ならびに抗体重鎖または軽鎖またはその混合物の単量体または二量体を含む。好ましくは、本発明の抗体はモノクローナル抗体である。
本発明の抗体は、ＩｇＡ，ＩｇＧ，ＩｇＥ，ＩｇＤ，ＩｇＭタイプ（およびそれらのサブタイプ）を含む任意のアイソタイプの無傷免疫グロブリンを含みうる。抗体は、好ましくは無傷ＩｇＧ、より好ましくはＩｇＧ１を含む。免疫グロブリンの軽鎖はカッパまたはラムダでよい。好ましくは、軽鎖はカッパである。
本発明の抗体は、抗原結合特異性を保持する無傷抗体の部分、例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆ（ｖ）断片、重鎖単量体または二量体、軽鎖単量体または二量体、１本の重鎖および１本の軽鎖からなる二量体などを含む。したがって、上述の抗体由来の抗原結合断片および完全長二量体もしくは三量体ポリペプチドはそれら自体有用である。
齧歯動物モノクローナル抗体（ＭＡｂ）のヒト治療剤としての直接使用は、ヒト抗齧歯動物抗体（「ＨＡＲＡ」）（例えば、ヒト抗マウス抗体（「ＨＡＭＡ」））応答をもたらし、それは、齧歯動物由来抗体で処置された患者の有意数の患者において生じた（Ｋｈａｚａｅｌｉら（１９９４）Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．１５：４２−５２）。より少ないマウスアミノ酸配列を含むキメラ抗体は、ヒトにおいて免疫応答を誘導する問題を回避すると考えられる。
ＨＡＲＡ応答の問題を回避するための抗体の改良は「ヒト化抗体」の開発に至った。ヒト化抗体は組換えＤＮＡ技術によって生成され、そこでは、抗原結合に必要ではないヒト免疫グロブリン軽鎖または重鎖の少なくとも１個のアミノ酸が、非ヒト哺乳動物免疫グロブリン軽鎖または重鎖由来の対応するアミノ酸の代わりに置換されている。例えば、免疫グロブリンがマウスモノクローナル抗体である場合、抗原結合に必要ではない少なくとも１個のアミノ酸が、その位置において対応するヒト抗体に存在するアミノ酸を用いて置換される。特定の操作理論に制約されることを所望せずに、モノクローナル抗体の「ヒト化」は異質免疫グロブリン分子に対するヒト免疫学的反応性を抑制すると考えられる。
非限定例として、相補性決定領域（ＣＤＲ）移植を行う方法は、標的抗原（例えば、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ）に結合する対象抗体のマウス重鎖・軽鎖を配列決定し、ＣＤＲ ＤＮＡ配列を遺伝子操作し、部位特異的突然変異誘発により、これらのアミノ酸配列を対応するヒトＶ領域に付与することによって行われうる。所望のアイソタイプのヒト定常領域遺伝子セグメントが付加され、「ヒト化」重鎖・軽鎖遺伝子が哺乳動物細胞に同時発現して可溶性ヒト化抗体を産生する。典型的な発現細胞はチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。キメラ抗体を作製する好適な方法は、例えば、Ｊｏｎｅｓら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２−５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３−３２７；Ｑｕｅｅｎら（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９；およびＯｒｌａｎｄｉら（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：３８３３に見出されうる。
Ｑｕｅｅｎら（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９−１００３３およびＷＯ９０／０７８６１では、ヒト化抗体の調製について述べている。最適な蛋白質配列相同性のためにヒトおよびマウス可変フレームワーク領域が選択された。マウス可変領域の三次構造がコンピュータモデル化され、相同ヒトフレームワークに重ねられてアミノ酸残基のマウスＣＤＲとの最適相互作用を示した。これにより、抗原に対する向上した結合親和性（通常、それはＣＤＲ移植キメラ抗体を作製すると同時に低下する）を有する抗体の開発に至った。ヒト化抗体を作製する別の手法が当該技術分野において公知であり、例えば、Ｔｅｍｐｅｓｔ（１９９１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：２６６−２７１に述べられている。
本発明の抗体は、単独で、または細胞傷害性薬物との免疫複合体として用いられうる。一部の実施形態では、該薬物は化学療法剤である。一部の実施形態では、該薬物は、鉛−２１２、ビスマス−２１２、アスタチン−２１１、ヨード−１３１、スカンジウム−４７、レニウム−１８６、レニウム−１８８、イットリウム−９０、ヨード−１２３、ヨード−１２５、臭素−７７、インジウム−１１１およびホウ素−１０もしくはアクチニドのような核分裂性核種を含むがこれに限定されない放射性同位元素である。他の実施形態では、該薬物は、リシン、改変ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓエンテロトキシンＡ、カリチアマイシン、アドリアマイシン、５−フルオロウラシルなどを含むがこれに限定されない毒素または細胞傷害性薬物である。抗体および抗体断片のそのような薬物へのコンジュゲーションの方法は文献において既知である。
本発明の抗体は、例えば、共有結合が、抗体がそのエピトープに結合することを阻止しないように、任意のタイプの分子の抗体への共有結合によって修飾される誘導体を含む。好適な誘導体の例には、フコシル化抗体および断片、グリコシル化抗体および断片、アセチル化抗体および断片、ペグ化抗体および断片、リン酸化抗体および断片ならびにアミド化抗体および断片が含まれるが、これに限定されない。本発明の抗体およびその誘導体自体が、既知の保護／ブロッキング基、蛋白質切断、細胞リガンドまたは他の蛋白質への結合などによって誘導体化されうる。本発明の一部の実施形態では、抗体の少なくとも１本の重鎖がフコシル化される。一部の実施形態では、フコシル化はＮ結合型である。一部の好ましい実施形態では、抗体の少なくとも１本の重鎖はフコシル化Ｎ結合型糖鎖を含む。
本発明の抗体は、本発明の抗体の生物学的特性（例えば、ＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆのそれぞれの受容体への結合を阻止、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの生物学的活性を阻止、結合親和性）を保持する、単一もしくは多重アミノ酸置換、欠失、付加または代替を有する変異体を含む。当業者は、単一もしくは多重アミノ酸置換、欠失、付加または代替を有する変異体を生成することができる。これらの変異体は、特に、（ａ）１個以上のアミノ酸残基が保存もしくは非保存アミノ酸に置換された変異体、（ｂ）１個以上のアミノ酸がポリペプチドに付加され、もしくはこれから欠失された変異体、（ｃ）１個以上のアミノ酸が置換基を含む変異体および（ｄ）ポリペプチドが、例えば、抗体に対するエピトープ、ポリヒスチジン配列、ビオチン部分などのような、ポリペプチドに有用な特性を付与しうる融合パートナー、蛋白質標識もしくは他の化学的部分のような別のペプチドもしくはポリペプチドと融合した変異体を含みうる。本発明の抗体は、保存または非保存位置において１つの種由来のアミノ酸残基が別の種における対応する残基の代わりに置換される変異体を含みうる。別の実施形態では、非保存位置におけるアミノ酸残基が保存または非保存残基に置換される。遺伝子的（抑制、欠失、突然変異）、化学的および酵素的手法を含む、これらの変異体を得る手法は当業者には公知である。本発明の抗体は抗体断片も含む。「断片」とは、好ましくは少なくとも約４０、より好ましくは少なくとも約５０、より好ましくは少なくとも約６０、より好ましくは少なくとも約７０、より好ましくは少なくとも約８０、より好ましくは少なくとも約９０、より好ましくは少なくとも約１００アミノ酸長であって、完全長配列の何らかの生物学的活性または免疫学的活性、例えば、ＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆのそれぞれの受容体への結合を阻止し、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの生物学的活性を阻止する能力、結合親和性を保持するポリペプチド配列を指す。
本発明は、卵巣、乳房、腎臓、結腸直腸、肺、子宮内膜または脳癌患者の末梢血単核細胞由来のような完全ヒト抗体も包含する。そのような細胞は、例えば、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに対する完全ヒト抗体を産生するハイブリドーマ細胞を形成するため、骨髄腫細胞と融合されうる。
本発明は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに結合する二重特異性抗体も包含する。
本発明の抗体は、例えば、インビボ毒性試験にて示されるように非毒性であることが好ましい。
本発明の抗体およびその誘導体は、１×１０−２未満の解離定数（Ｋｄ）を含む結合親和性を有する。一部の実施形態では、Ｋｄは１×１０−３未満である。他の実施形態では、Ｋｄは１×１０−４未満である。一部の実施形態では、Ｋｄは１×１０−５未満である。更に他の実施形態では、Ｋｄは１×１０−６未満である。他の実施形態では、Ｋｄは１×１０−７未満である。他の実施形態では、Ｋｄは１×１０−８未満である。他の実施形態では、Ｋｄは１×１０−９未満である。他の実施形態では、Ｋｄは１×１０−１０未満である。更に他の実施形態では、Ｋｄは１×１０−１１未満である。一部の実施形態では、Ｋｄは１×１０−１２未満である。他の実施形態では、Ｋｄは１×１０−１３未満である。他の実施形態では、Ｋｄは１×１０−１４未満である。更に他の実施形態では、Ｋｄは１×１０−１５未満である。
（Ｄ）核酸）
本発明は、本発明の抗体の重鎖および／または軽鎖をコードする核酸も含む。本発明の核酸は、少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも約９０％、より好ましくは少なくとも約９５％、最も好ましくは少なくとも約９８％の本発明の核酸との相同性を有する核酸を含む。特定の配列に言及する場合、「類似性パーセント」、「同一性パーセント」および「相同性パーセント」という用語は、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ ＧＣＧソフトウェアプログラムにおいて示されるように用いられる。本発明の核酸は相補的核酸も含む。一部の例では、アラインメントされると、配列は完全に相補的（ミスマッチなし）である。他の例では、配列において最大約２０％のミスマッチがありうる。本発明の一部の実施形態では、本発明の抗体の重鎖および軽鎖をコードする核酸が提供される。
本発明の核酸は、プラスミド、コスミド、バクミド、ファージ、人工染色体（ＢＡＣ，ＹＡＣ）またはウイルスのようなベクターにクローニングすることができ、結合配列またはエレメントの複製を引き起こすように、その中に別の遺伝子配列またはエレメント（ＤＮＡまたはＲＮＡ）が挿入されうる。一部の実施形態では、発現ベクターは、構成的に活性なプロモーターセグメント（例えば、限定されないが、ＣＭＶ、ＳＶ４０、伸長因子またはＬＴＲ配列）またはステロイド誘導性ｐＩＮＤベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）のような誘導性プロモーター配列を含み、核酸の発現が調節されうる。本発明の発現ベクターは、制御配列、例えば、内部リボソーム侵入部位を更に含みうる。発現ベクターは、例えば、トランスフェクションによって細胞内に導入されうる。
（Ｅ）ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに対する抗体を生成する方法）
本発明は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに特異的に結合するモノクローナル抗体を生成する方法も提供する。本発明の抗体はインビボまたはインビトロにて生成されうる。ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに対する抗体を生成する１つの方策は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆで動物を免疫化することを含む。一部の実施形態では、動物は単量体または多量体型のＦＲ ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆで免疫化される。そのように免疫化された動物は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに対する抗体ならびにＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに対する交差反応性抗体を産生する。ハイブリドーマ法（ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５−４９７を参照されたい）；トリオーマ法；ヒトＢ細胞ハイブリドーマ法（Ｋｏｚｂｏｒら（１９８３）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ ４：７２を参照されたい）およびヒトモノクローナル抗体を生成するためのＥＢＶハイブリドーマ法（Ｃｏｌｅら、ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ ＡＮＤ ＣＡＮＣＥＲ ＴＨＥＲＡＰＹ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，１９８５、７７〜９６頁を参照されたい）を含むがこれに限定されないモノクローナル抗体を生成するための標準法が公知である。
ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆは、蛋白質を単離・精製するための種々の周知の手法を用いて細胞または組換え系から精製されうる。例えば、限定するためではないが、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆは、蛋白質をＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上に流し、蛋白質を膜にブロットすることにより、蛋白質の見かけ上の分子量に基づいて単離されうる。その後、いずれかの蛋白質に対応する適切なサイズのバンドが、直接に、または、まず、膜から蛋白質を抽出もしくは溶出することにより、膜から切断され、動物における免疫原として用いられうる。代替例として、蛋白質は、サイズ排除クロマトグラフィー単独により、または他の単離・精製手段を併用して単離されうる。
本発明は、ホモ二量体、ヘテロ二量体および／または多量体型のＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに特異的に結合するモノクローナル抗体を生成する方法も提供する。これらの異なる形態は、蛋白質を単離・精製するための種々の周知の手法を用いて細胞または組換え系から精製されうる。例えば、限定するためではないが、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆは、蛋白質をＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上に流し、蛋白質を膜にブロットすることにより、蛋白質の見かけ上の分子量に基づいて単離されうる。その後、各々に対応する適切なサイズのバンドが、直接に、または、まず、膜から蛋白質を抽出もしくは溶出することにより、膜から切断され、動物における免疫原として用いられうる。代替例として、蛋白質は、サイズ排除クロマトグラフィー単独により、または他の単離・精製手段を併用して単離されうる。
他の精製手段は、Ｚｏｌａ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｕｓｅ Ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ（Ｂａｓｉｃｓ：Ｆｒｏｍ Ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ Ｔｏ Ｂｅｎｃｈ）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ Ｌｔｄ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２０００；Ｂａｓｉｃ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ、第１１章、“Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ”，ＨｏｗａｒｄおよびＢｅｔｈｅｌｌ（編）、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ社、２０００；Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｌａｂ Ｍａｎｕａｌ．）、ＫｏｎｔｅｒｍａｎｎおよびＤｕｂｅｌ（編）、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ社、２００１のような標準参考テキストにて得られる。
インビボ抗体生成では、一般的に、動物はＩＬ−１７ＡもしくはＩＬ−１７Ｆまたはいずれかの免疫原性部分（例えば、上述の共有エピトープ）で免疫化される。一般的に、抗原は免疫原性を促進するアジュバントと組み合わせられる。アジュバントは免疫化に用いられる種に従って異なる。アジュバント例には、Ｆｒｅｕｎｄの完全アジュバント（“ＦＣＡ”）、Ｆｒｅｕｎｄの不完全アジュバント（“ＦＩＡ”）、ミネラルゲル（例えば、水酸化アルミニウム）、界面活性物質（例えば、リゾレシチン、プルロニックポリオール、ポリアニオン）、ペプチド、油乳剤、キーホールリンペットヘモシアニン（“ＫＬＨ”）、ジニトロフェノール（“ＤＮＰ”）ならびに潜在的に有用なヒト用アジュバント、例えば、Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ桿菌（“ＢＣＧ”）およびコリネバクテリウムパルブムが含まれるが、これに限定されない。そのようなアジュバントは当該技術分野においても公知である。免疫化は周知の手順を用いて達成される。用量および免疫化レジメンは、免疫化される哺乳動物種、その免疫状態、体重および／または算出表面積などに依存する。通常、血清が免疫化動物からサンプリングされ、例えば、下述のような適切なスクリーニングアッセイを用いて抗ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ抗体についてアッセイされる。
ヒト化抗体を生成する一般的な方法は、ＭＡｂ（齧歯動物宿主を免疫化することによって生成）由来のＣＤＲ配列をヒトＩｇ骨格に移植し、そのキメラ遺伝子をチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞にトランスフェクションし、次に、これはＣＨＯ細胞によって分泌される機能的Ａｂを産生する（Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ら（１９９５）Ａｎｔｉ−ＩｇＥ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｈａｔ ｉｎｈｉｂｉｔ ａｌｌｅｒｇｅｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｈｉｓｔａｍｉｎｅ ｒｅｌｅａｓｅ．Ｉｎｔ Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０７：４１２−４１３）。本出願内で述べる方法は、Ｉｇ遺伝子または、齧歯動物細胞系、植物、酵母および原核生物のような宿主細胞内にトランスフェクションされたキメラＩｇ内に遺伝子変化を生じさせることにも有用である（Ｆｒｉｇｅｒｉｏ Ｌら（２０００）Ａｓｓｅｍｂｌｙ，ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ，ａｎｄ ｖａｃｕｏｌａｒ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ａ ｈｙｂｒｉｄ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｉｎ ｐｌａｎｔｓ．Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ．１２３：１４８３−１４９４）。
免疫化動物由来の脾細胞は、脾細胞（抗体産生Ｂ細胞を含む）を骨髄腫系のような不死細胞系と融合させることによって不死化されうる。通常、骨髄腫細胞系は脾細胞ドナーと同じ種に由来する。一実施形態では、不死細胞系は、ヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジンを含む培地（「ＨＡＴ培地」）に対して感受性を示す。一部の実施形態では、骨髄腫細胞はＥｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウイルス（ＥＶＢ）感染に対して陰性である。好ましい実施形態では、骨髄腫細胞は、ＨＡＴ感受性、ＥＶＢ陰性およびＩｇ発現陰性である。任意好適な骨髄腫が用いられうる。マウスハイブリドーマはマウス骨髄腫細胞系を用いて作製されうる（例えば、Ｐ３−ＮＳ１／１−Ａｇ４−１，Ｐ３−ｘ６３−Ａｇ８．６５３またはＳｐ２／Ｏ−Ａｇ１４骨髄腫系）。これらの骨髄腫系はＡＴＣＣから入手可能である。これらの骨髄腫細胞は、ドナー脾細胞ポリエチレングリコール（“ＰＥＧ”）、好ましくは１５００分子量ポリエチレングリコール（“ＰＥＧ１５００”）に融合される。その融合から生じるハイブリドーマ細胞は、未融合および非生産的融合骨髄腫細胞を死滅させるＨＡＴ培地において選択される。未融合脾細胞は培養物中にて短期間のうちに死滅する。一部の実施形態では、骨髄腫細胞は免疫グロブリン遺伝子を発現しない。
下述のようなスクリーニングアッセイによって検出される、所望の抗体を産生するハイブリドーマは、培養物中または動物において抗体を産生するために用いられうる。例えば、ハイブリドーマ細胞は、ハイブリドーマ細胞がモノクローナル抗体を培地中に分泌することを可能にするのに十分な条件下および時間、栄養培地において培養されうる。これらの手法および培地は当業者には周知である。あるいは、ハイブリドーマ細胞は未免疫動物の腹膜に注入されうる。該細胞は腹腔にて増殖し、腹水として蓄積する抗体を分泌する。腹水はモノクローナル抗体の豊富な供給源としてシリンジを用いて腹腔から引き抜かれうる。
ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに対するモノクローナル抗体を発現するハイブリドーマは、上述と同様の方法を用いて生成され、Ｂｕｄａｐｅｓｔ条約の下でＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ；Ｍａｎａｓｓａｓ ＶＡ）特許寄託機関に原寄託として寄託され、次のＡＴＣＣアクセッション番号を付与された：クローン３３９．１５．５．３（ＡＴＣＣ特許寄託物名称ＰＴＡ−７９８７，２００６年１１月７日に寄託）；クローン３３９．１５．３．６（ＡＴＣＣ特許寄託物名称ＰＴＡ−７９８８，２００６年１１月７日に寄託）；およびクローン３３９．１５．６．１６（ＡＴＣＣ特許寄託物名称ＰＴＡ−７９８９，２００６年１１月７日に寄託。
ヒト抗体を生成する別の非限定的方法が米国特許第５，７８９，６５０号に述べられており、これは、それ自体の内因性免疫グロブリン遺伝子が不活化された、別の種（例えば、ヒト）の抗体を産生するトランスジェニック哺乳動物について述べている。異種抗体の遺伝子はヒト免疫グロブリン遺伝子にコードされる。非再構成免疫グロブリンコード領域を含む導入遺伝子が非ヒト動物に導入される。その結果生じるトランスジェニック動物は、トランスジェニック免疫グロブリン配列を機能的に再構成し、かつヒト免疫グロブリン遺伝子にコードされる種々のアイソタイプの抗体レパートリーを産生することができる。トランスジェニック動物由来のＢ細胞は、その後、不死化細胞系（例えば、骨髄腫細胞）との融合を含む任意の種々の方法によって不死化される。
本発明の抗体は、当該技術分野において公知の様々な手法を用いてインビトロにて調製してもよい。例えば、限定することを目的としないが、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに対する完全ヒトモノクローナル抗体が、インビトロにて予め刺激されたヒト脾細胞を用いて調製されうる（Ｂｏｅｒｎｅｒら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：８６−９５）。
あるいは、例えば、本発明の抗体は、「レパートリークローニング」によって調製されうる（Ｐｅｒｓｓｏｎら（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：２４３２−２４３６；ならびにＨｕａｎｇおよびＳｔｏｌｌａｒ（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １４１：２２７−２３６）。さらに、米国特許第５，７９８，２３０号では、Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウイルス核抗原２（ＥＢＮＡ２）を発現するＥｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウイルスによる感染によって不死化されるヒトＢ抗体産生Ｂ細胞由来のヒトモノクローナル抗体の調製について述べている。次に、不死化に必要なＥＢＮＡ２は不活化され、抗体価の上昇をもたらす。
別の実施形態では、本発明の抗体は、末梢血単核細胞（“ＰＢＭＣ”）のインビトロ免疫化によって形成される。これは、当該技術分野において公知の任意の手段、例えば、文献に述べられている方法を用いて達成されうる（Ｚａｆｉｒｏｐｏｕｌｏｓら（１９９７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２００：１８１−１９０）。
具体的な実施形態では、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに結合する二重特異性および単鎖抗体が作製される。本発明の一つの方法は二重特異性Ａ／Ｆ抗体を生成する方法である。該方法は、ＩＬ−１７Ａに結合するモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマ細胞を、ＩＬ−１７Ｆに結合するモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマ細胞と融合させ、これにより、二重特異性Ａ／Ｆモノクローナル抗体を分泌するハイブリッドハイブリドーマを調製するステップを含む。一実施形態では、該方法は、アンタゴニスト（またはアゴニスト）ＩＬ−１７Ａ ＭＡｂを分泌するハイブリドーマ細胞を、アンタゴニスト（またはアゴニスト）ＩＬ−１７Ｆ ＭＡｂを分泌するハイブリドーマ細胞と融合させるステップを含む。そのような融合を行い、所望のハイブリッドハイブリドーマを単離するための従来の手法には、本明細書の別の箇所で述べる手法および以下の実施例において例示される手法が含まれる。
米国特許第６，０６０，２８５号は、第一の特異性を有する抗体の少なくとも軽鎖および重鎖可変部の遺伝子が、第二の特異性を有する抗体を分泌するハイブリドーマ細胞にトランスフェクションされる、二重特異性抗体の生成のためのプロセスを開示している。トランスフェクションされたハイブリドーマ細胞が培養されると、二重特異性抗体が産生され、当該技術分野において公知の種々の手段によって単離されうる。
他の研究者らは、２つの異なる抗原に対する特異性を有する抗原結合分子を調製するため、抗体断片の化学的結合を用いている（Ｂｒｅｎｎａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：８１ １９８５；Ｇｌｅｎｎｉｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：２３６７，１９８７）。米国特許第６，０１０，９０２号においても、例えば、ＧＭＢＳ（マレイミドブトリルオキシ・スクシンイミド（ｍａｌｅｉｍｉｄｏｂｕｔｒｙｌｏｘｙ ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ））またはＳＰＤＰ（Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート）のようなヘテロ二機能性架橋試薬の使用により、二重特異性抗体を調製することができる当該技術分野において公知の手法について述べている（例えば、Ｈａｒｄｙ，“Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｃｏｕｐｌｉｎｇ Ｏｆ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ Ｆｏｒ Ｕｓｅ Ｉｎ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ”，Ｈａｎｄｂｏｏｋ Ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第四版、第一巻、Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｗｅｉｒら（編）、３１．４〜３１．１２頁、１９８６を参照されたい）。
組換えＤＮＡ技術によって抗体を生成する能力は、二重特異性抗体の生成を容易にしている。Ｋｏｓｔｅｌｎｙらは細胞表面分子ＣＤ３およびインターロイキン−２受容体に結合することができる二重特異性抗体を生成するため、ｆｏｓおよびｊｕｎ蛋白質（選択的にヘテロ二量体を形成する）由来のロイシンジッパー部分を用いた（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７；１９９２）。
単鎖抗体は、アミノ酸架橋（短いペプチドリンカー）を介して重鎖および軽鎖可変領域（Ｆｖ領域）断片を結合することによって形成され得、単一ポリペプチド鎖を生じさせる。そのような単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）は、２つの可変領域ポリペプチド（ＶＬおよびＶＨ）をコードするＤＮＡ間にペプチドリンカーをコードするＤＮＡを融合させることによって調製されている。その結果生じる抗体断片は、２つの可変ドメイン間の可動性リンカーの長さのような因子に依存し、二量体またはそれ以上のオリゴマーを形成することができる（Ｋｏｒｔｔら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ １０：４２３，１９９７）。特定の実施形態では、２つ以上のｓｃＦｖが化学架橋剤の使用によって結合される。
単鎖抗体の生成のために開発された技法は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに結合する本発明の単鎖抗体を生成するように適合されうる。そのような技法には、米国特許第４，９４６，７７８号；Ｂｉｒｄ（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３，１９８８）；Ｈｕｓｔｏｎら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９，１９８８）；およびＷａｒｄら（Ｎａｔｕｒｅ ３３４：５４４，１９８９）に述べられているものが含まれる。所望の単鎖抗体が特定されると（例えば、ファージ提示ライブラリーから）、当業者は単鎖抗体をコードするＤＮＡを更に操作し、Ｆｃ領域を有する二重特異性抗体を含む二重特異性抗体を生成することができる。
ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに対する単鎖抗体は、いずれかの順序で鎖状体化されうる（すなわち、抗ＩＬ−１７Ａ−抗ＩＬ−１７Ｆまたは抗ＩＬ−１７Ｆ−抗ＩＬ−１７Ａ）。特定の実施形態では、二重特異性Ａ／Ｆ抗体を調製するための出発物質は、ＩＬ−１７Ａに対するアンタゴニスト（もしくはアゴニスト）単鎖抗体およびＩＬ−１７Ｆに対するアンタゴニスト（もしくはアゴニスト）単鎖抗体を含む。
米国特許第５，５８２，９９６号は、二重特異性抗体の生成においてヘテロ二量体形成を容易にするため、相補的双方向性ドメイン（例えば、ロイシンジッパー部分または他の鍵・鍵穴双方向性ドメイン構造）の使用を開示している。相補的双方向性ドメインは、Ｆａｂ断片と重鎖の別の部分（すなわち、重鎖のＣＨ１またはＣＨ２領域）との間に挿入されうる。選択的にヘテロ二量体化する２つの異なるＦａｂ断片および相補的双方向性ドメインの使用は、二重特異性抗体分子を生じさせる。相補的双方向性ドメイン間のジスルフィド結合を可能にし、その結果生じる二重特異性抗体を安定化するため、相補的双方向性ドメインにシステイン残基が導入されうる。
米国特許第５，９５９，０８３号に述べられているように、四価二重特異性分子は、抗体のＦ（ａｂ’）２断片の重鎖をコードするＤＮＡの、第二のＦ（ａｂ’）２分子（ＣＨ１ドメインはＣＨ３ドメインに置換されている）の重鎖をコードするＤＮＡまたは抗体の単鎖Ｆｖ断片をコードするＤＮＡとの融合によって調製することができる。対応する軽鎖の遺伝子と共に、哺乳動物細胞における、結果として得られる融合遺伝子の発現は、選択抗原に対する特異性を有する四価二重特異性分子を生じさせる。
二重特異性抗体は米国特許第５，８０７，７０６号（参照して本明細書に組み込まれる）に記載されているように生成することもできる。概して、その方法は、第一のポリペプチドにおける突起部および第二のポリペプチドにおける対応する空洞部、すなわち、ポリペプチド界面を導入するステップを含む。突起部および空洞部はヘテロ多量体形成を促進し、かつホモ多量体形成を妨害するように配置される。突起部は、小側鎖を有するアミノ酸をより大きい側鎖を有するアミノ酸に置換することによって生成される。空洞部は逆の手法、すなわち、比較的大きい側鎖を有するアミノ酸をより小さい側鎖を有するアミノ酸に置換することによって生成される。
突起部および空洞部は、ポリペプチドにおいてアミノ酸置換を行う従来の方法によって生成することができる。例えば、ポリペプチドをコードする核酸は従来のインビトロ突然変異誘発法によって改変されうる。あるいは、所望のアミノ酸置換を組み込むポリペプチドはペプチド合成によって調製されうる。置換に選択されるアミノ酸は第一および第二のポリペプチド間の界面に位置する。
（Ｆ）抗体特異性のスクリーニング）
ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに特異的に結合する抗体のスクリーニングは、マイクロタイタープレートがＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆで被覆された酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）を用いて達成されうる。一部の実施形態では、陽性反応を示すクローン由来のＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに結合する抗体は、他の形態のＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆあるいは他のＩＬ−１７ファミリーメンバーで被覆されたマイクロタイタープレートを用いたＥＬＩＳＡベースのアッセイにて、反応性に関して更にスクリーニングされうる。別の形態またはファミリーメンバーに反応を示す抗体を産生するクローンは除去され、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに反応を示す抗体を産生するクローンは、更なる増殖および発現のために選択されうる。ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに対する抗体の反応性の確認は、例えば、卵巣、乳房、腎臓、結腸直腸、肺、子宮内膜もしくは脳癌細胞由来の蛋白質ならびに精製ＦＲ−αおよび他の葉酸受容体アイソフォームが、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上に流され、次に、膜上にブロットされるウエスタンブロットアッセイを用いて達成されうる。次に、膜は推定抗ＦＲ−α抗体でプロービングされうる。別のファミリーメンバーではなく、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆとの反応性は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに対する反応性の特異性を裏付ける。
一部の実施形態では、本発明の抗体の結合親和性が定量される。本発明の抗体は、好ましくは少なくとも約１×１０−７Ｍ、より好ましくは少なくとも約１×１０−８Ｍ、より好ましくは少なくとも約１×１０−９Ｍ、最も好ましくは少なくとも約１×１０−１０ＭのＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの結合親和性を有する。本発明の好ましい抗体産生細胞は、少なくとも約１×１０−７Ｍ、より好ましくは少なくとも約１×１０−８Ｍ、より好ましくは少なくとも約１×１０−９Ｍ、最も好ましくは少なくとも約１×１０−１０ＭのＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの結合親和性を有する抗体のみを実質的に産生する。本発明の好ましい組成物は、少なくとも約１×１０−７Ｍ、より好ましくは少なくとも約１×１０−８Ｍ、より好ましくは少なくとも約１×１０−９Ｍ、最も好ましくは少なくとも約１×１０−１０ＭのＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの結合親和性を有する抗体のみを実質的に含む。
好ましくは、本発明の抗体は、ＩＬ−１７ＲＡおよびＩＬ−１７ＲＣ保有細胞において抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導する。ＡＤＣＣアッセイは当該技術分野において公知である。
（Ｇ）抗ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ抗体産生細胞）
本発明の抗体産生細胞は、任意の既知の昆虫発現細胞系、例えば、ヨトウガ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞を含む。発現細胞系は、酵母細胞系、例えば、出芽酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）および分裂酵母（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ）細胞でもよい。発現細胞は、哺乳動物細胞、例えば、ハイブリドーマ細胞（例えば、ＮＳ０細胞）、チャイニーズハムスター卵巣細胞、ベビーハムスター腎細胞、ヒト胎児由来腎系２９３、正常イヌ腎細胞系、正常ネコ腎細胞系、サル腎細胞、アフリカミドリザル腎細胞、ＣＯＳ細胞ならびに非腫瘍原性マウス筋芽Ｇ８細胞、線維芽細胞系、骨髄腫細胞系、マウスＮＩＨ／３Ｔ３細胞、ＬＭＴＫ３１細胞、マウスセルトリ細胞、ヒト子宮頸癌細胞、バッファーローラット肝細胞、ヒト肺細胞、ヒト肝細胞、マウス乳癌細胞、ＴＲＩ細胞、ＭＲＣ５細胞およびＦＳ４細胞でもよい。
一部の好ましい実施形態では、本発明の抗体産生細胞はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに特異的に結合する抗体を産生する。好ましくは、該細胞はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ結合競合物を実質的に含まない。好ましい実施形態では、抗体産生細胞は、約１０重量％未満、好ましくは約５重量％未満、より好ましくは約１重量％未満、より好ましくは約０．５重量％未満、より好ましくは約０．１重量％未満、最も好ましくは０重量％のＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ結合競合物を含む。一部の好ましい実施形態では、抗体産生細胞によって産生される抗体は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ競合物を実質的に含まない。好ましい実施形態では、抗体産生細胞によって産生される抗体は、約１０重量％未満、好ましくは約５重量％未満、より好ましくは約１重量％未満、より好ましくは約０．５重量％未満、より好ましくは約０．１重量％未満、最も好ましくは０重量％のＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ結合競合物を含む。本発明の好ましい抗体産生細胞は、少なくとも約１×１０−７Ｍ、より好ましくは少なくとも約１×１０−８Ｍ、より好ましくは少なくとも約１×１０−９Ｍ、最も好ましくは少なくとも約１×１０−１０ＭのＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの結合親和性を有する抗体のみを実質的に産生する。
一部の実施形態では、抗体産生細胞は、Ｂｕｄａｐｅｓｔ条約の下でＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ；Ｍａｎａｓｓａｓ ＶＡ）特許寄託機関に原寄託として寄託され、次のＡＴＣＣアクセッション番号：クローン３３９．１５．５．３（ＡＴＣＣ特許寄託物名称ＰＴＡ−７９８７，２００６年１１月７日に寄託）；クローン３３９．１５．３．６（ＡＴＣＣ特許寄託物名称ＰＴＡ−７９８８，２００６年１１月７日に寄託）；およびクローン３３９．１５．６．１６（ＡＴＣＣ特許寄託物名称ＰＴＡ−７９８９，２００６年１１月７日に寄託）を付与された、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに対するモノクローナル抗体を発現するハイブリドーマである。
（Ｈ）抗体精製）
抗体精製法は当該技術分野において公知である。本発明の一部の実施形態では、抗体精製法は、濾過、アフィニティーカラムクロマトグラフィー、カチオン交換クロマトグラフィー、アニオン交換クロマトグラフィーおよび濃縮を含む。好ましくは、濾過ステップは、限外濾過、より好ましくは限外濾過およびダイアフィルトレーションを含む。濾過は、好ましくは少なくとも約５〜５０回、より好ましくは１０〜３０回、最も好ましくは１４〜２７回行われる。アフィニティーカラムクロマトグラフィーは、例えば、ＰＲＯＳＥＰアフィニティークロマトグラフィー（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，Ｍａｓｓ．）を用いて行われうる。好ましい実施形態では、アフィニティークロマトグラフィーステップはＰＲＯＳＥＰ−ＶＡカラムクロマトグラフィーを含む。溶出物は洗浄溶剤にて洗浄されうる。カチオン交換クロマトグラフィーは、例えば、ＳＰ−セファロースカチオン交換クロマトグラフィーを含みうる。アニオン交換クロマトグラフィーは、例えば、限定されないが、Ｑ−セファロース高速アニオン交換を含みうる。アニオン交換ステップは好ましくは非結合性であり、これにより、ＤＮＡおよびＢＳＡを含む夾雑物の除去を可能にする。好ましくは、抗体産物は、例えば、Ｐａｌｌ ＤＶ ２０ナノフィルターを用いてナノ濾過される。抗体産物は、例えば、限外濾過およびダイアフィルトレーションを用いて濃縮されうる。該方法は凝集物を除去するためのサイズ排除クロマトグラフィーのステップを更に含みうる。
（Ｉ）交差反応性ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ抗体の治療用途）
ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに対して交差反応性の抗体は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに結合し（単独または共に）、したがって、ＩＬ−１７ＡのＩＬ−１７ＲＡもしくはＩＬ−１７ＲＣとの結合およびＩＬ−１７ＦのＩＬ−１７ＲＣとの結合あるいはそれらが結合しうる他の任意の受容体、特にＩＬ−１７ファミリーメンバーとの結合を阻止することによって免疫系を調節するために用いられうる。本発明の抗体も、ＩＬ−１７Ａの内因性ＩＬ−１７ＲＡおよび／またはＩＬ−１７ＲＣ受容体との結合ならびにＩＬ−１７Ｆの内因性ＩＬ−１７ＲＣ受容体との結合を阻害することによって免疫系を調節するために用いられうる。本発明の抗体は、過剰なＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆを産生する患者を処置するためにも用いられうる。好適な患者はヒトのような哺乳動物を含む。例えば、本発明の抗体は、炎症および炎症性疾患、例えば、乾癬、乾癬性関節炎、関節リウマチ、内毒血症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、ＩＢＳ、大腸炎、喘息、同種移植片拒絶、免疫介在性腎疾患、肝胆道疾患、多発性硬化症、アテローム性動脈硬化症、腫瘍増殖の促進または変性関節疾患ならびに本明細書で開示される他の炎症状態の処置において、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ（単独または共に）の結合、阻止、阻害、低減、拮抗または中和に有用である。
好ましい実施形態の範囲内にて、本発明の抗体は、インビボにてＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ（個々または共に）に結合し、これを阻止、阻害、低減、拮抗、または中和する。
したがって、本発明の特定の実施形態は、炎症性・免疫疾患または症状、例えば、乾癬、乾癬性関節炎、アトピー性皮膚炎、炎症性皮膚症状、関節リウマチ、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、憩室症、喘息、膵炎、Ｉ型糖尿病（ＩＤＤＭ）、膵癌、膵炎、グレーブス病、結腸・腸癌、自己免疫疾患、敗血症、臓器もしくは骨髄移植；内毒血症、外傷、手術もしくは感染に起因する炎症；アミロイドーシス；脾腫；移植片対宿主病；および炎症の抑制、免疫抑制、造血、免疫、炎症もしくはリンパ系細胞、マクロファージ、Ｔ細胞（Ｔｈ１およびＴｈ２を含む）の増殖の低減、病原体もしくは抗原に対する免疫応答の抑制の場合またはＩＬ−１７Ｆ，ＩＬ−１７Ａサイトカインの阻害が所望される他の場合における本発明の抗体のアンタゴニストとしての使用に関する。
さらに、本発明の抗体は以下のことを行うのに有用である。
（１）急性炎症、外傷、組織損傷、手術、敗血症もしくは感染の結果としての炎症および慢性炎症性疾患、例えば、喘息、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、ＩＢＳ、慢性大腸炎、脾腫、関節リウマチ、再発性急性炎症性エピソード（例えば、結核）の処置ならびにアミロイドーシスおよびアテローム性動脈硬化症、キャッスルマン病、喘息および急性期応答の誘導と関連する他の疾患の処置において、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆを介するシグナル伝達を阻止、阻害、低減、拮抗または中和する。
（２）受容体（例えば、ＩＬ−１７ＲＡおよびＩＬ−１７ＲＣ）を介する免疫細胞（例えば、リンパ球、単球、白血球）におけるシグナル伝達を阻止または阻害するため、ＩＤＤＭ、多発性硬化症（ＭＳ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、重症筋無力症、関節リウマチ、ＩＢＳおよびＩＢＤのような自己免疫疾患の処置において、ＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆを介するシグナル伝達を阻止、阻害、低減、拮抗または中和する。本発明の抗体を用いてＩＬ−１７ＲＡおよびＩＬ−１７ＲＣを介するシグナル伝達を阻止、阻害、低減または拮抗することは、膵臓、腎臓、下垂体および神経細胞の疾患にも役立ちうる。ＩＤＤＭ、ＮＩＤＤＭ、膵炎および膵癌は恩恵を受けうる。糸球体硬化症、膜性ニューロパシー、アミロイドーシス（これは他の組織の中でも腎臓にも影響を及ぼす）、腎動脈硬化症、様々な原因の糸球体腎炎、腎臓の線維増殖性疾患のような腎症ならびにＳＬＥ、ＩＤＤＭ、ＩＩ型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）、腎腫瘍および他の疾患と関連する腎機能障害を処置するのに、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに対するＭａｂも有用でありうる。
（３）ＩＤＤＭ、ＭＳ、ＳＬＥ、重症筋無力症、関節リウマチ、ＩＢＳおよびＩＢＤのような自己免疫疾患の処置において、ＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆ受容体を介するシグナル伝達を刺激、増強、増大または開始する。抗ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ中和・モノクローナル抗体は、リンパ球または他の免疫細胞に分化し、増殖を変更し、または自己免疫を改善するサイトカインもしくは表面蛋白質の産生を変更するようにシグナルを送りうる。特に、別のパターンのサイトカイン分泌に対するＴヘルパー細胞応答の調節は、自己免疫を逸脱させて疾患を改善しうる（Ｓｍｉｔｈ ＪＡら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：４８４１−４８４９，１９９８）。同様に、喘息、アレルギーおよびアトピー性疾患に関与する免疫細胞にシグナルを送り、これを激減・逸脱させるためにアゴニスト抗体が用いられうる。ＩＬ−１７ＲＡおよびＩＬ−１７ＲＣを介するシグナル伝達は、膵臓、腎臓、下垂体および神経細胞の疾患にも役立ちうる。ＩＤＤＭ、ＮＩＤＤＭ、膵炎および膵癌は恩恵を受けうる。
本明細書で述べる抗体は、上述のように、自己免疫疾患、アトピー性疾患、ＮＩＤＤＭ、膵炎および腎機能障害の処置において、単独または共にＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７Ａ活性を束縛、阻止、阻害、低減、拮抗または中和するために用いられうる。本発明の抗体は、ＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆサイトカインのアンタゴニストとして有用である。そのような拮抗作用はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの直接中和または結合によってなされうる。
炎症は侵入病原体を回避するための生物による防御反応である。炎症は多くの細胞性お液性メディエーターを伴うカスケード事象である。一方では、炎症反応の抑制は宿主を免疫無防備状態にさせうる。しかし、野放し状態にされた場合、炎症は、慢性炎症性疾患（例えば、乾癬、関節炎、関節リウマチ、多発性硬化症、炎症性腸疾患など）、敗血症ショックおよび多臓器不全を含む重篤な合併症を引き起こしうる。重要なことに、これらの多様な病態は共通の炎症性メディエーターを共有する。炎症を特徴とする疾患の集合は、ヒトの罹患率および死亡率に対する大きな影響を有する。したがって、本発明の抗体が、喘息およびアレルギーから自己免疫および敗血症ショックに至る多数のヒトおよび動物疾患に対する重要な治療可能性を有しうることは明瞭である。
（１．関節炎）
骨関節炎、関節リウマチ、損傷の結果としての関節炎関節などを含む関節炎は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆを拮抗・中和または阻止する抗体の治療的使用からから恩恵を受けうる一般的な炎症状態である。例えば、関節リウマチ（ＲＡ）は、全身に影響を及ぼす全身性疾患であり、最も一般的な形態の関節炎である。それは、疼痛、凝り、熱感、発赤および腫脹を引き起こす、関節を覆う膜の炎症を特徴とする。炎症細胞は骨および軟骨を消化しうる酵素を放出する。関節リウマチの結果として、炎症を起こした関節内層である滑膜は骨および軟骨に浸潤してこれを損傷させ得、他の生理的作用の中でも関節の変質および激痛をもたらす。罹患関節はその形状およびアラインメントを喪失し得、疼痛および動きの喪失をもたらす。
関節リウマチ（ＲＡ）は、特に、炎症とこれに続く組織損傷を特徴とする免疫介在性疾患であり、重度の障害および死亡率上昇をもたらす。リウマチ性関節において種々のサイトカインが局所的に産生される。２つの原型的炎症性サイトカインであるＩＬ−１およびＴＮＦ−αが、滑膜炎症および進行性関節破壊に関与するメカニズムに重要な役割を果たすことを多くの研究が示している。実際に、ＲＡ患者におけるＴＮＦ−αおよびＩＬ−１インヒビターの投与は、炎症の臨床および生物学的徴候の劇的な改善ならびに骨侵食および軟骨破壊の放射線学的徴候の低減をもたらしている。しかし、これらの有望な結果にかかわらず、有意な割合の患者はこれらの薬剤に反応せず、関節炎の病態生理に他のメディエーターも関与していることを示唆する（Ｇａｂａｙ，Ｅｘｐｅｒｔ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．２（２）：１３５−１４９，２００２）。それらのメディエーターの１つがＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆである可能性があり、そのようなものとして、ＩＬ−１７ＦまたはＩＬ−１７Ａに結合するか、またはその活性を阻害する分子、例えば、可溶性ＩＬ−１７ＲＡ，ＩＬ−１７ＲＡポリペプチドまたは抗ＩＬ−１７ＲＡ抗体もしくは結合パートナーが、関節リウマチおよび他の疾患における炎症を低減する価値ある治療法として役立ちうる。
当該技術分野において公知の関節リウマチの複数の動物モデルがある。例えば、コラーゲン誘導性関節炎（ＣＩＡ）モデルでは、マウスはヒト関節リウマチに酷似する慢性炎症性関節炎を発症する。ＣＩＡがＲＡと同様の免疫学的・病理的特徴を共有するため、これにより、それは潜在的ヒト抗炎症性化合物をスクリーニングするための理想的なモデルとなる。ＣＩＡモデルは、生じるために免疫応答および炎症反応に依存する、マウスでの周知のモデルである。免疫応答は、抗原として付与されるコラーゲンに応答するＢ細胞とＣＤ４＋ Ｔ細胞との相互作用を含み、抗コラーゲン抗体の産生をもたらす。炎症期は、マウスの天然コラーゲンと交差反応し、かつ補体カスケードを活性化するこれらの一部の抗体の結果としての、炎症のメディエーターからの組織応答の結果である。ＣＩＡモデルを用いることにおける利点は、発病の基本メカニズムが既知であることである。ＩＩ型コラーゲン上の関連するＴ細胞およびＢ細胞エピトープが同定されており、免疫介在性関節炎に関連する種々の免疫（例えば、遅延型過敏および抗コラーゲン抗体）および炎症（例えば、サイトカイン、ケモカインおよび基質分解酵素）パラメータが決定されており、したがって、ＣＩＡモデルにおいて被験化合物の有効性を評価するために用いられうる（Ｗｏｏｌｅｙ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｒｈｅｕｍ．３：４０７−２０，１９９９；Ｗｉｌｌｉａｍｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．８９：９７８４−７８８，１９９２；Ｍｙｅｒｓら、Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．６１：１８６１−７８，１９９７；およびＷａｎｇら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．９２：８９５５−９５９，１９９５）。
１グループは、予防的に導入された際に、または関節炎症状が既にモデルにおいて存在した後、単一マウスＩＬ−１７特異的ラット抗血清の投与が動物における関節炎症状を低減したため、抗マウスＩＬ−１７抗体が対照マウスに対してマウスＣＩＡモデルにおける症状を低減することを示し、したがって、抗ＩＬ−１７Ａ抗体がヒト疾患を処置するのに有益でありうることを概念的に示した（Ｌｕｂｂｅｒｔｓら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．５０：６５０−９，２００４）。したがって、関節炎、乾癬、乾癬性関節炎、内毒血症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、ＩＢＳ、大腸炎および本明細書で開示される他の炎症状態などの特定のヒト疾患の処置においてＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆを中和するため、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆのそれぞれの受容体への結合を拮抗・中和または阻止する抗体が用いられうる。
本発明の抗体のこれらのＣＩＡモデルマウスへの投与は、そのような抗体のＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆのアンタゴニストとしての使用を評価するために用いられ、それは症状を改善し、疾患の経過を変更するために用いられうる。例として、限定されずに、１マウス当たり本発明の抗体１０〜２００ｕｇの注入（皮下、腹腔内または筋肉内投与経路により、週１〜７回、限定されないが最長４週間）は、疾患スコア（足スコア、炎症の発生例または疾患）を有意に低下させることができる。抗体投与の開始に依存し（例えば、コラーゲン免疫前またはコラーゲン免疫時または疾患が既に進行している時点を含む、２回目のコラーゲン免疫後の任意の時点）、そのようなＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ抗体は関節リウマチを予防し、かつその進行を阻止するのに有効でありうる。
（２．内毒血症）
内毒血症は、細菌および他の感染症病原体のような感染病原体、敗血症、トキシックショック症候群から一般的に生じ、あるいは日和見感染に晒された免疫低下患者などにおける重度の疾患である。本発明の抗体のような治療上有用な抗炎症蛋白質は、ヒトおよび動物における内毒血症を予防・処置するのに役立ちうる。そのような抗体は、内毒血症における炎症および病理的作用を低減する価値ある治療法として役立ちうる。
リポ多糖（ＬＰＳ）誘導性内毒血症は、感染症において病理的作用を生じさせる多くの炎症促進性メディエーターを関与させ、齧歯動物におけるＬＰＳ誘導性内毒血症は、潜在的な炎症促進または免疫調節物質の薬理学的作用を研究するための、広範に用いられ、受容されているモデルである。グラム陰性菌において産生されるＬＰＳは敗血症ショックの病因の主要な原因物質である（Ｇｌａｕｓｎｅｒら、Ｌａｎｃｅｔ ３３８：７３２，１９９１）。実際、ショック様状態はＬＰＳの動物への単回注入によって実験的に誘導されうる。ＬＰＳに応答する細胞によって産生される分子は、病原体を直接的または間接的に標的とすることができる。これらの生物学的応答が侵入病原体から宿主を保護するが、それらは損傷も生じさせうる。したがって、重度のグラム陰性菌感染の結果として生じる自然免疫の大規模な刺激は、サイトカインおよび他の分子の過剰産生ならびに、発熱、低血圧、播種性血管内凝固および多臓器不全を特徴とする致死性症候群である敗血症ショック症候群の発症をもたらす（Ｄｕｍｉｔｒｕら、Ｃｅｌｌ １０３：１０７１−１０８３，２０００）。
ＬＰＳのこれらの毒性作用は、大部分が多数の炎症性メディエーターの放出を生じさせるマクロファージ活性に関連する。これらのメディエーターの中でもＴＮＦは重要な役割を果たすように思われ、中和抗ＴＮＦ抗体の投与によるＬＰＳ毒性の予防によって示されている通りである（Ｂｅｕｔｌｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：８６９，１９８５）。Ｅ．ｃｏｌｉ ＬＰＳ １ｕｇのＣ５７Ｂ１／６マウスへの注入が、注入後約２時間にて循環ＩＬ−６，ＴＮＦ−α，ＩＬ−１および急性期蛋白質（例えば、ＳＡＡ）の有意な増加をもたらすことは十分に確立されている。これらのメディエーターに対する受動免疫が死亡率の低下をもたらしうるため、ＬＰＳの毒性はこれらのサイトカインに媒介されるように思われる（Ｂｅｕｔｌｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：８６９，１９８５）。敗血症ショックの予防および／または処置のための免疫介入方策の可能性は、抗ＴＮＦｍＡｂ、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、ＬＩＦ、ＩＬ−１０およびＧ−ＣＳＦを含む。
本発明の抗体のこれらのＬＰＳ誘導モデルへの投与は、症状を改善し、ＬＰＳ誘導性疾患の経過を変更するためのそのような抗体の使用を評価するために用いられうる。さらに、本発明の抗体によるＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの阻害を示す結果は、そのような抗体がＬＰＳ誘導モデルにおける症状を改善し、疾患の経過を変更するためにも用いられうるという概念立証を与える。該モデルは、ＬＰＳ注入によるＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの誘導およびそのような抗体による疾患の処置の可能性を示す。ＬＰＳが、おそらく内毒血症の病理の原因となる炎症促進因子の産生を誘導するため、本発明の抗体によるＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ活性または他の炎症促進因子の中和は、内毒素ショックに見られるような内毒血症の症状を低減するために用いられうる。
（３．炎症性腸疾患 ＩＢＤ）
米国では、約５００，０００人が結腸および直腸（潰瘍性大腸炎）の両方または一方、小腸および大腸（クローン病）を冒しうる炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を患っている。これらの疾患の病因は不明であるが、患部組織の慢性炎症を伴う。ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに結合する抗体は、ＩＢＤおよび関連疾患における炎症および病理的作用を低減する価値ある治療法として役立ちうる。
潰瘍性大腸炎（ＵＣ）は、一般的に結腸と称される大腸の炎症性疾患であり、結腸の粘膜および最内側層の炎症および潰瘍を特徴とする。この炎症は結腸が頻回に排出するようにさせ、下痢を引き起こす。その症状は便の緩みおよび関連する腹部疝痛、発熱ならびに体重減少を含む。ＵＣの正確な原因は不明であるが、最近の研究は、身体の自然防御が、身体が異物であると考える体内蛋白質に対して作用していることを示唆している（自己免疫反応）。おそらく、これらの蛋白質が腸内細菌蛋白質に類似するため、それらは結腸の内層を破壊し始める炎症プロセスを扇動または刺激しうる。結腸の内層が破壊されると、潰瘍が形成され、粘液、膿汁および血液を放出する。通常、該疾患は直腸領域にて開始し、最終的に大腸全体を通して伸展しうる。炎症の反復エピソードは瘢痕組織を伴う腸・直腸壁の肥厚を生じさせる。重症では結腸組織の死滅または敗血症が生じうる。潰瘍性大腸炎の症状は重症度において異なり、その発症は漸進的または突発的でありうる。呼吸器感染またはストレスを含む多くの因子によって発病が誘発されうる。
現在、利用可能なＵＣの治癒法はないが、処置は結腸内膜における異常炎症プロセスを抑制することに重点が置かれる。コルチコステロイド免疫抑制剤（例えば、アザチオプリン、メルカプトプリンおよびメトトレキサート）およびアミノサリチル酸を含む処置が、該疾患を処置するために利用可能である。しかし、コルチコステロイドおよびアザチオプリンのような免疫抑制剤の長期使用は、骨の薄化、白内障、感染および肝臓・骨髄作用を含む重篤な副作用をもたらしうる。現在の治療法が良好ではない患者では、手術が１つの選択肢である。手術は結腸・直腸全体の切除を含む。
慢性潰瘍性大腸炎を部分的に模倣しうる複数の動物モデルがある。最も広範に用いられている動物モデルは、２，４，６−トリニトロベンゼンスルホン酸／エタノール（ＴＮＢＳ）誘導性大腸炎モデルであり、それは、結腸において慢性炎症および潰瘍を誘発する。ＴＮＢＳが直腸内点滴注入により感受性マウスの結腸に導入されると、それは結腸粘膜においてＴ細胞媒介性免疫応答を誘導し、この場合、大腸壁全体にわたるＴ細胞およびマクロファージの高密度の浸潤を特徴とする広範囲の粘膜炎をもたらす。さらに、この病理組織像は、進行性の体重減少（消耗性）、血性下痢、直腸脱および大腸壁肥厚の臨床像を伴う（Ｎｅｕｒａｔｈら、Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９：５１−６２，２０００）。
別の大腸炎モデルでは、血性下痢、体重減少、結腸の短縮および好中球浸潤を伴う粘膜潰瘍に現れる急性大腸炎を誘導するデキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）を用いる。ＤＳＳ誘導性大腸炎は、リンパ過形成、局所的陰窩損傷および上皮性潰瘍を伴う、炎症細胞の固有層への浸潤を組織学的特徴とする。これらの変化は、ＤＳＳの上皮に対する作用により、かつ固有層細胞の貪食ならびにＴＮＦ−αおよびＩＦＮ−γの産生によって発現すると考えられている。その一般的な使用にかかわらず、ヒト疾患との関連性に関するＤＳＳのメカニズムに関するいくつかの問題は未解決のままである。ＤＳＳはＳＣＩＤマウスのようなＴ細胞欠損動物に認められるため、Ｔ細胞非依存性モデルとみなされる。
これらのＴＮＢＳまたはＤＳＳモデルへの本発明の抗体の投与を用いて、症状を改善し、胃腸疾患の経過を変更するためのそのような抗体の使用を評価することができる。さらに、そのような抗体によるＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの阻害を示す結果は、本発明の抗体が大腸炎／ＩＢＤモデルにおける症状を改善し、疾患の経過を変更するためにも用いられうるという概念立証を与える。
（４．乾癬）
乾癬は７００万人以上のアメリカ人を冒す慢性皮膚疾患である。乾癬は新生皮膚細胞が異常に増殖する場合に生じ、古い皮膚が十分に速く脱落していない部位で炎症性、膨張性および鱗状の皮膚斑を生じさせる。最も一般的な形態である尋常性乾癬は、銀白色鱗屑で覆われた炎症性皮膚斑（「病変」）を特徴とする。乾癬は数個のプラークに限定され、または中程度から広範な皮膚領域を含み得、最も一般的には、頭皮、膝、肘および体幹に出現する。乾癬は非常に目立つが、伝染病ではない。該疾患の発症機序は患部組織の慢性炎症を含む。ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに結合する抗体は、乾癬、他の炎症性皮膚疾患、皮膚・粘膜アレルギーおよび関連疾患における炎症および病理的作用を低減する価値ある治療法として役立ちうる。
乾癬は、相当な不快感を引き起こしうる皮膚のＴ細胞媒介性炎症障害である。それは治癒法がなく、あらゆる年齢層を冒す疾患である。乾癬は欧州および北米の約２パーセントの人口を冒す。軽度の乾癬患者は局所薬でその疾患を制御することができる場合が多いが、世界中で百万人以上の患者が紫外線または全身免疫抑制療法を必要としている。残念なことに、紫外線放射の不便性およびリスクならびに多くの治療法の毒性がそれらの長期的利用を制約する。さらに、通常、患者は乾癬を再発し、場合により、免疫抑制療法中止後まもなく逆戻りする。
ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに結合する抗体は、診断システム内にてＩＬ−１７ＦまたはＩＬ−１７Ａの循環濃度の検出ならびに急性期炎症反応と関連するＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆの検出にも用いられうる。リガンドまたは受容体ポリペプチドの濃度上昇または低下は、炎症または癌を含む病理的状態を示しうる。ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆは関連する急性期炎症反応を誘導することが既知である。さらに、ＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆのような急性期蛋白質もしくは分子の検出は、一部の疾患状態（例えば、喘息、乾癬、関節リウマチ、大腸炎、ＩＢＤ）における慢性炎症状態を示しうる。そのような状態の検出は、疾患の診断に役立ち、かつ医師が適切な治療法を選択するのに役立つ働きをする。
本明細書で述べる他の疾患モデルに加え、ヒト乾癬病変に由来する炎症組織に対する本発明の抗体の活性は、重症複合免疫不全（ＳＣＩＤ）マウスモデルを用いてインビボにて測定することができる。ヒト細胞が免疫不全マウスに移植される複数のマウスモデルが開発されている（集合的に異種移植モデルと称される）。例えば、Ｃａｔｔａｎ ＡＲ，Ｄｏｕｇｌａｓ Ｅ，Ｌｅｕｋ．Ｒｅｓ．１８：５１３−２２，１９９４およびＦｌａｖｅｌｌ，ＤＪ，Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ｌ４：６７−８２，１９９６を参照されたい。乾癬のインビボ異種移植モデルとして、ヒト乾癬皮膚組織がＳＣＩＤマウスモデルに移植され、適切なアンタゴニストで誘導される。さらに、本発明の抗体を評価するため、ＡＧＲ１２９マウスモデルに移植されたヒト乾癬皮膚移植片のような当該技術分野における他の乾癬動物モデルが用いられ、適切なアンタゴニストで誘導される（例えば、参照して本明細書に組み込まれる、Ｂｏｙｍａｎ，Ｏ．ら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｏｎｌｉｎｅ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ＃２００３１４８２，２００４を参照されたい）。ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの活性を束縛、阻止、阻害、低減、拮抗または中和する抗ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ抗体が好ましいアンタゴニストである。同様に、本明細書で述べる本発明の抗体の抗炎症特性を評価するため、ヒト大腸炎、ＩＢＤ、関節炎または他の炎症病変由来の組織または細胞をＳＣＩＤモデルにおいて用いることができる。
本発明の抗体を用いて炎症を消失、遅延または減少させるように設計された治療法は、ヒト炎症組織（例えば、乾癬病変など）を有するＳＣＩＤマウスまたは本明細書で述べる他のモデルへのそのような抗体の投与によって試験することができる。処置の有効性は、当該技術分野において周知の方法を用いて経時的に測定され、処置集団内の抗炎症作用の増大として統計学的に評価される。一部の例示的な方法は、例えば、乾癬モデルにおいて上皮厚、真皮上層における炎症細胞数および不全角化のグレードを測定するステップを含むが、これに限定されない。そのような方法は当該技術分野において公知であり、本明細書で述べられる。例えば、Ｚｅｉｇｌｅｒ，Ｍ．ら、Ｌａｂ Ｉｎｖｅｓｔ ８１：１２５３，２００１；Ｚｏｌｌｎｅｒ，Ｔ．Ｍ．ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０９：６７１，２００２；Ｙａｍａｎａｋａ，Ｎ．ら、Ｍｉｃｒｏｂｉｏ．ｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．４５：５０７，２００１；Ｒａｙｃｈａｕｄｈｕｒｉ，Ｓ．Ｐ．ら、Ｂｒ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１４４：９３１，２００１；Ｂｏｅｈｎｃｋｅ，Ｗ．Ｈら、Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｒｅｓ．２９１：１０４，１９９９；Ｂｏｅｈｎｃｋｅ，Ｗ．Ｈら、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１１６：５９６，２００１；Ｎｉｃｋｏｌｏｆｆ，Ｂ．Ｊ．ら、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１４６：５８０，１９９５；Ｂｏｅｈｎｃｋｅ，Ｗ．Ｈら、Ｊ．Ｃｕｔａｎ．Ｐａｔｈｏｌ．２４：１，１９９７；Ｓｕｇａｉ，Ｊ．，Ｍ．ら、Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｓｃｉ．１７：８５，１９９８；およびＶｉｌｌａｄｓｅｎ Ｌ．Ｓ．ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１２：１５７１，２００３を参照されたい。試料中に存在する炎症もしくは病変細胞の数、ＩＢＤスコア（体重減少、下痢、直腸出血、結腸長）、足疾患スコアおよびＣＩＡ ＲＡモデルの炎症スコアを定量するため、フローサイトメトリー（またはＰＣＲ）のような周知の方法を用いて経時的に炎症をモニタリングしてもよい。
さらに、乾癬は、過形成表皮角化細胞ならびにＣＤ４＋メモリーＴ細胞、好中球およびマクロファージを含む浸潤単核細胞と関連する慢性炎症皮膚疾患である（Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒｓ，Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１０：１９９，１９９６）。現在、環境抗原が該疾患の病理の開始およびそれへの寄与に重要な役割を果たすと考えられている。しかし、乾癬の病理を媒介すると考えられているのは、自己抗原に対する忍容性の喪失である。樹状細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞は、病態に至る免疫応答を媒介する抗原提示および認識に重要な役割を果たすと考えられている。最近、本発明者らは、ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＢ移植モデルに基づく乾癬モデルを開発した（Ｄａｖｅｎｐｏｒｔら、Ｉｎｔｅｒｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２：６５３−６７２）。本発明の抗体はマウスに投与される。疾患スコア（皮膚病変、炎症性サイトカイン）の抑制は乾癬におけるそのような抗体の有効性を示す。
（５．アトピー性皮膚炎）
ＡＤは、ヘルパーＴ細胞サブセット２（Ｔｈ２）の活性化過剰サイトカインを特徴とする一般的な慢性炎症性疾患である。ＡＤの正確な病因は不明であるが、活動亢進Ｔｈ２免疫応答、自己免疫、感染、アレルゲンおよび遺伝的素因を含む多数の因子が関与している。該疾患の重要な特徴は、乾皮症（皮膚の乾燥）、掻痒（皮膚の痒み）、結膜炎、炎症性皮膚病変、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ感染、血中好酸球増加の上昇、血清ＩｇＥおよびＩｇＧ１の上昇ならびにＴ細胞、肥満細胞、マクロファージおよび好酸球浸潤を伴う慢性的皮膚炎を含む。Ｓ．ａｕｒｅｕｓによる定着または感染は、ＡＤを悪化させ、この皮膚疾患の慢性化を持続させると認識されている。
ＡＤは喘息およびアレルギー性鼻炎患者に見出される場合が多く、高頻度にアレルギー疾患の初期徴候である。西欧諸国の人口の約２０％がこれらのアレルギー性疾患を患っており、先進諸国におけるＡＤの発生率は理由がわからずに上昇している。通常、ＡＤは小児期に始まり、青年期から成人期まで持続しうる場合が多い。ＡＤの現在の処置には、局所コルチコステロイド、経口シクロスポリンＡ、タクロリムス（軟膏剤形でのＦＫ５０６）のような非コルチコステロイド免疫抑制剤およびインターフェロン−γが含まれる。ＡＤに対する多様な処置にかかわらず、多くの患者の症状は改善せず、または患者は薬物に対する有害反応を有し、他のより有効な治療剤の探索を必要としている。本発明の抗ヒトＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ中和抗体を含む本発明の抗体は、アトピー性皮膚炎、炎症性皮膚疾患および本明細書で開示される他の炎症性疾患のような特定のヒト疾患の処置において、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７を中和するために用いることができる。
（６．喘息）
ＩＬ−１７はアレルゲン誘導性Ｔ細胞活性化および好中球の気道流入に重要な役割を果たす。ＩＬ−１７に対する受容体は気道内で発現し（Ｙａｏら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３：８１１（１９９５））、アレルギー性喘息におけるＩＬ−１７媒介性好中球動員は、大部分がＩＬ−１７刺激性気管支上皮細胞（ＨＢＥＣ）およびヒト気管支線維芽細胞によって産生される化学誘引物質ＩＬ−８，ＧＲＯ−αおよびマクロファージ炎症性蛋白質−２（ＭＩＰ−２）に誘導される（Ｙａｏら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５５：５４８３（１９９５））；Ｍｏｌｅｔら、Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ １０８：４３０（２００１））。さらに、ＩＬ−１７はＨＢＥＣを刺激して好中球活性化因子であるＩＬ−６を放出し（Ｆｏｓｓｉｅｚら、Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １８３：２５９３（１９９６）およびＬｉｎｄｅｎら、Ｉｎｔ Ａｒｃｈ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ １２６：１７９（２００１））、ＴＮＦ−αと協同してインビトロにてヒト好中球の生存を延ばすことが示された（Ｌａａｎら、Ｅｕｒ Ｒｅｓｐｉｒ Ｊ ２１：３８７（２００３））。さらに、ＩＬ−１７は、気道再構築に関与するサイトカイン、例えば、線維化促進サイトカインであるＩＬ−６およびＩＬ−１１ならびに炎症性メディエーターである顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）の分泌を亢進するその能力により、喘息における炎症反応を増幅することができる（Ｍｏｌｅｔら、Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ １０８：４３０（２００１））。
臨床的エビデンスは、喘息の重度の急性増悪が気道における好中球の動員および活性化と関連することを示しており、したがって、ＩＬ−１７は喘息に重要な役割を果たすと思われる。軽症喘息患者は遊離可溶性ＩＬ−１７Ａ蛋白質の局所濃度の検出可能な上昇を示すが（Ｍｏｌｅｔら、Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ １０８：４３０（２００１））、豚舎に閉じ込められたことによって誘発された重度の気道炎症を有する健常ヒトボランティアは、気管支肺胞腔における遊離可溶性ＩＬ−１７Ａ蛋白質の濃度の著明な上昇を示す（Ｆｏｓｓｉｅｚら、Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １８３：２５９３（１９９６）およびＬｉｎｄｅｎら、Ｉｎｔ Ａｒｃｈ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ １２６：１７９（２００１））。さらに、ＩＬ−１７の喀痰中濃度は気道過敏性の上昇を有する患者と相関している（Ｂａｒｃｚｙｋら、Ｒｅｓｐｉｒ Ｍｅｄ ９７：７２６（２００３））。
気道過敏性の動物モデルにおいて、感作マウスによる卵白アルブミンの慢性吸入は、気管支好中球増多と共に、気管支好酸球性炎症および炎症性肺組織におけるＩＬ−１７ ｍＲＮＡ発現の早期誘導をもたらした（Ｈｅｌｌｉｎｇｓら、Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２８：４２（２００３））。抗ＩＬ−１７モノクローナル抗体は気管支好中球流入を強力に低減したが、気管支肺胞洗浄液および血清中の有意に上昇したＩＬ−５濃度ならびにアレルゲン誘導性気管支好酸球流入の悪化は、ＩＬ−１７Ａが抗原傷害後の好中球と好酸球との蓄積の均衡の決定に関与しうることを示唆する（同上）。
ＩＬ−１７ファミリーメンバーの中でもＩＬ−１７ＦはＩＬ−１７Ａと最も密接に関連する。ＩＬ−１７Ｆによって媒介される生物学的活性はＩＬ−１７Ａに類似し、ＩＬ−１７ＦはＩＬ−６，ＩＬ−８およびＧ−ＣＳＦの産生を刺激する（Ｈｕｒｓｔら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６９：４４３（２００２））。ＩＬ−１７Ｆは内皮細胞におけるＩＬ−２、形質転換増殖因子（ＴＧＦ）−αおよび単球走化性蛋白質（ＭＣＰ）の産生も誘導する（Ｓｔａｒｎｅｓら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６７：４１３７（２００１））。同様に、アレルゲン投与はアレルギー性喘息患者における局所ＩＬ−１７Ｆを増加させうる（Ｋａｗａｇｕｃｈｉら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６７：４４３０（２００１））。マウス肺におけるＩＬ−１７Ｆの遺伝子送達は気管支肺胞腔における好中球を増加させるが、ＩＬ−１７Ｆ遺伝子の粘膜送達はＡｇ誘導性肺性好中球増多レベルおよびメタコリンに対する気道反応性を高める（Ｏｄａら、Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ １７１：１２（２００５））。
喘息は別として、複数の慢性炎症性気道疾患が気道における好中球動員を特徴とし、ＩＬ−１７が、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、細菌性肺炎および嚢胞性線維症のような呼吸疾患の発病に重要な役割を果たすことが報告されている（Ｌｉｎｄｅｎら、Ｅｕｒ Ｒｅｓｐｉｒ Ｊ １５：９７３（２０００）、Ｙｅら、Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２５：３３５（２００１）、Ｒａｈｍａｎら、Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ １１５：２６８（２００５））。抗ＩＬ−１７Ａおよび抗ＩＬ−１７Ｆ抗体は、炎症のインビトロモデルにおいて慢性炎症性気道疾患に有効であることが示されうる。本発明の抗体のようなＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７Ａ活性に対するアンタゴニストの、培養ＨＢＥＣまたは気管支線維芽細胞から産生されるＩＬ−１７Ａまたは およびＩＬ−１７Ｆ誘導性のサイトカインおよびケモカインを阻害する能力は、ＩＬ−１７Ａおよび／またはＦ刺激から直接生じる炎症性メディエーターの産生阻止における、そのようなアンタゴニストの有効性の尺度として用いられうる。本発明の抗体のようなＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７Ａ活性に対するアンタゴニストを加えることにより、炎症性メディエーターの産生および発現が著しく低下すれば、それは慢性気道炎症と関連する炎症的側面において有効であることが期待されうる。
（７．過敏性腸症候群（「ＩＢＳ」））
過敏性腸症候群は、腹部疼痛もしくは不快感および不規則な排便習慣を特徴とする疾患を表す。ＩＢＳ患者は排便習慣に基づいて３つの主要群：主に軟便もしくは頻回の便通を有する患者、主に固形便もしくは低頻度の便通を有する患者および不定もしくは正常便を有する患者に特徴づけられうる（Ｔａｌｌｅｙら、２００２）。腸運動の変化、上皮機能の異常、糞便およびガスの異常な通過ならびにストレスが症状に寄与しうるが、大部分の患者では内臓過敏性が重要な特徴である。疼痛シグナル伝達および求心性シグナルの中枢処理の障害に影響を及ぼす遺伝因子が、特定の環境暴露後に患者をＩＢＳに罹患しやすくさせると想定される。結腸における炎症反応が平滑筋および腸神経の感受性増大に寄与し、したがって、腸における感覚・運動機能を乱しうることも諸研究は示している（Ｃｏｌｌｉｎｓら、２００１）。ＩＢＳとＩＢＤとの間には臨床的重複部分があり、ＩＢＤの診断前に患者においてＩＢＳ様症状が高頻度に報告され、確定ＩＢＤからの寛解期にある患者において予想以上のＩＢＳ症状が報告されている。したがって、ＩＢＳとＩＢＤとが同じスペクトルの両端にあって、これらの疾患は予想以上の頻度で共存し得、または連続的に存在しうる。しかし、大部分のＩＢＳ患者では、大腸生検標本は正常に見えることに留意すべきである。しかし、ＩＢＳは極めて多数の患者を有意に冒し（２０００年における米国の患者数は約千六百万人）、１７億ドルの総コスト負担となる（２０００年度）。したがって、最も蔓延し、コストのかかる胃腸疾患・障害の中でも、ＩＢＳは胃食道逆流症（ＧＥＲＤ）に次いで２番目である。しかし、ＧＥＲＤと異なり、ＩＢＳに対する処置は依然として不十分であり（Ｔａｌｌｅｙら、２００２；Ｆａｒｈａｄｉら、２１００１；Ｃｏｌｌｉｎｓら、２００１）、ＩＢＳが満たされない医学的ニーズを明確に表すことを示している。
正常なホメオスタシスの中枢性（心理社会的）または末梢性（組織刺激、炎症、感染）撹乱に対する中枢神経系（ＣＮＳ）または腸における神経、免疫または神経免疫回路の応答性向上を想定した収束疾患モデルが提案されている（Ｔａｌｌｅｙら、２００２）。この向上した応答性は、腸運動性、上皮機能（免疫、透過性）および内臓過敏性の調節不全をもたらし、次に、それはＩＢＳ症状を生じさせる。
ＩＢＳの発病に複数の異なる分子が果たす役割があり得、神経細胞を刺激する分子および炎症プロセスの開始に関与する分子の役割が含まれる。ＩＬ−１７Ｄ，ＩＬ−１７ＢおよびＩＬ−３１を含む複数の分子が、神経細胞における神経細胞によるその直接発現またはその受容体の発現により、神経細胞における可能な活性に関連していることが既知である。さらに、ＩＬ−１７Ａ，ＩＬ−１７Ｆ，ＩＬ−２３およびＩＬ−３１を含む複数のＩＬ−１７ファミリーメンバーおよび関連分子が腸内炎症と関連している。
これらの分子のインヒビター／アンタゴニストの有効性は、疾患の動物モデルにおいてインビボにて試験されうる。ＩＢＳの重要な特徴を模倣し、中枢標的刺激（ストレス）または末梢標的刺激（感染、炎症）を含む複数の動物モデルが提案されている。ＩＢＳの処置におけるインヒビターの有効性を判定するために用いることができるインビボ動物モデルの２例は、（ｉ）ＣＮＳを標的としたＩＢＳの主要な発症機序に重点を置いたモデル（ストレスモデル）および（ｉｉ）腸を標的としたストレス（すなわち、腸管炎症、感染または身体的ストレス）の誘導因子に重点を置いたモデルである。しかし、ＣＮＳ内または胃腸（ＧＩ）管内の事象が孤立して生じるのではなく、ＩＢＳの症状がＧＩにおけるＣＮＳからの（逆もまた同様）シグナル間の複雑な相互作用から生じる可能性が最も高いということに留意すべきである。
医薬用途のため、本発明の抗体は、従来の方法に従って非経口、特に静脈内または皮下送達用に製剤化される。静脈内投与は、例えば、ミニポンプまたは他の適切な技術を用いたボーラス注入、放出制御により、または１時間〜数時間の典型的な時間にわたる注入による。概して、医薬製剤は、医薬的に許容可能なビヒクル、例えば、生理食塩水、緩衝生理食塩水、５％ブドウ糖液などと組み合わせた造血蛋白質を含む。製剤は、１つ以上の賦形剤、防腐剤、可溶化剤、緩衝剤、バイアル面における蛋白質喪失を防止するためのアルブミンなどを更に含みうる。そのような併用療法を用いる場合、サイトカインは単一製剤にて組み合わせられ得、または別個の製剤にて投与されうる。製剤方法は当該技術分野において周知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｇｅｎｎａｒｏ（編）、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ ＰＡ，１９９０（参照して本明細書に組み込まれる）に開示されている。治療量は、一般的に、１日当たり患者の体重の０．１〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲内、好ましくは、１日当たり０．５〜２０ｍｇ／ｋｇであり、正確な用量は、処置対象疾患の性状および重症度、患者の体質などを考慮し、許容される基準に従って臨床医によって決定される。用量の決定は当業者のレベル範囲内にある。一般的に、蛋白質は、化学療法もしくは骨髄移植後に、または、２０，０００／ｍｍ３超、好ましくは５０，０００／ｍｍ３超の血小板数が得られるまで、最大２８日間にわたって投与される。より一般的には、蛋白質は、１週間以下にわたり、多くの場合、１〜３日間にわたって投与される。概して、本発明の抗体の治療有効量は、成熟細胞（例えば、血小板または好中球）の循環濃度の上昇として現れる、リンパ系または骨髄系前駆細胞の増殖および／または分化の臨床的に有意な増加を生じさせるのに十分な量である。したがって、血小板障害の処置は、少なくとも２０，０００／ｍｍ３、好ましくは５０，０００／ｍｍ３の血小板数に達するまで継続される。本発明の抗体は、他のサイトカイン、例えば、ＩＬ−３，−６および−１１；幹細胞因子；エリスロポエチン；Ｇ−ＣＳＦおよびＧＭ−ＣＳＦと併用して投与することもできる。併用療法のレジメン範囲内にて、概して、他のサイトカインの１日用量は、ＥＰＯ，１５０Ｕ／ｋｇ；ＧＭ−ＣＳＦ，５〜１５ｌｇ／ｋｇ；ＩＬ−３，１〜５ｌｇ／ｋｇ；およびＧ−ＣＳＦ，１〜２５ｌｇ／ｋｇである。ＥＰＯを用いた併用療法は、例えば、低ＥＰＯ濃度を有する貧血患者に適応とされる。
一般的に、投与抗体の用量は、患者の年齢、体重、身長、性別、全身状態および過去の病歴のような因子に依存して異なる。通常、約１ｐｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ（薬剤量／患者の体重）の範囲内の抗体投与量をレシピエントに与えることが望ましいが、状況に応じてより少なく、またはより多い用量を投与してもよい。
本発明の抗体の患者への投与は、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、胸膜内、髄腔内、局部カテーテルによる灌流または直接病巣内注入でよい。注入によって治療用蛋白質を投与する場合、投与は持続注入または単回もしくは複数回ボーラスでよい。
更なる投与経路には、経口、粘膜、肺および経皮が含まれる。経口送達は、ポリエステルミクロスフェア、ゼインミクロスフェア、プロテイノイドミクロスフェア、ポリシアノアクリレートミクロスフェアおよび脂質ベース系に好適である（例えば、ＤｉＢａｓｅおよびＭｏｒｒｅｌ，“Ｏｒａｌ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ”，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ：Ｐｈｙｓｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＳａｎｄｅｒｓおよびＨｅｎｄｒｅｎ（編）、２５５〜２８８頁（Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ社、１９９７）を参照されたい）。鼻腔内送達の実現可能性はインスリン投与のような様式により例示される（例えば、ＨｉｎｃｈｃｌｉｆｆｅおよびＩｌｌｕｍ，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．３５：１９９（１９９９）を参照されたい）。本発明の抗体を含む乾燥または液体粒子を調製し、乾燥粉末分散器、液体エアロゾル発生器または噴霧器を用いて吸入することができる（例えば、ＰｅｔｔｉｔおよびＧｏｍｂｏｔｚ，ＴＩＢＴＥＣＨ １６：３４３（１９９８）；Ｐａｔｔｏｎら、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．３５：２３５（１９９９））。この手法は、エアロゾル化インスリンを肺に送達する携帯型電子式吸入器であるＡＥＲＸ糖尿病管理システムにより例示される。低周波超音波を用いて４８，０００ｋＤａもの大きさの蛋白質が治療濃度にて皮膚を超えて送達されたことが諸研究により示され、それは経皮投与の実現可能性を例示する（Ｍｉｔｒａｇｏｔｒｉら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６９：８５０（１９９５））。電気穿孔を用いた経皮送達は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ結合活性を有する分子を投与する別の手段を提供する（Ｐｏｔｔｓら、Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１０：２１３（１９９７））。
本発明の抗体を含む医薬組成物は、医薬的に有用な組成物を調製する既知の方法に従って製剤化することができ、それによって治療用蛋白質は医薬的に許容可能な担体との混合物にて組み合わせられる。組成物は、その投与がレシピエント患者によって忍容性が示されうる場合、「医薬的に許容可能な担体」と言われる。滅菌リン酸緩衝生理食塩水は医薬的に許容可能な担体の一例である。他の好適な担体は当業者には周知である。例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ（編）、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１９版（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ １９９５）を参照されたい。
治療を目的として、本発明の抗体および医薬的に許容可能な担体が治療有効量にて患者に投与される。本発明の治療用分子と医薬的に許容可能な担体との組合せは、投与量が生理的に有意である場合、「治療有効量」にて投与されると言われる。薬剤は、その存在がレシピエント患者の生理の検出可能な変化をもたらす場合、生理的に有意である。例えば、炎症を処置するために用いられる薬剤は、その存在が炎症反応を緩和する場合、生理的に有意である。有効な処置は様々な方法にて評価されうる。一実施形態では、有効な処置は炎症の低減により判定される。他の実施形態では、有効な処置は炎症の抑制を特徴とする。更に他の実施形態では、有効な治療は、体重増加、体力回復、疼痛の減少、良好な発育およびより健康な患者からの主観的指標のような徴候を含む、患者の健康増進により評価される。
本発明の抗体を含む医薬組成物は、液体剤形、エアロゾルまたは固体剤形にて提供されうる。液体剤形は注射用溶液および経口懸濁液により例示される。例示的な固体剤形には、カプセル、錠剤および徐放剤形が含まれる。後者の剤形はミニ浸透圧ポンプおよびインプラントにより例示される（Ｂｒｅｍｅｒら、Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１０：２３９（１９９７）；Ｒａｎａｄｅ，“Ｉｍｐｌａｎｔｓ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ”，Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＲａｎａｄｅおよびＨｏｌｌｉｎｇｅｒ（編）、９５〜１２３頁（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ社 １９９５）；Ｂｒｅｍｅｒら、“Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｗｉｔｈ Ｉｎｆｕｓｉｏｎ Ｐｕｐｍｓ”，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ：Ｐｈｙｓｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＳａｎｄｅｒｓおよびＨｅｎｄｒｅｎ（編）、２３９〜２５４頁（Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ社 １９９７）；Ｙｅｗｅｙら、“Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｆｒｏｍ ａ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ Ｉｍｐｌａｎｔ”，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ：Ｐｈｙｓｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＳａｎｄｅｒｓおよびＨｅｎｄｒｅｎ（編）、９３〜１１７頁（Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ社 １９９７））。
リポソームは、静脈内、腹腔内、髄腔内、筋肉内、皮下または経口投与、吸入もしくは鼻腔内投与により、治療用ポリペプチドを患者に送達する一手段を提供する。リポソームは、水性コンパートメントを取り巻く１つ以上の脂質二重層からなる微視的小胞である（Ｂａｋｋｅｒ−Ｗｏｕｄｅｎｂｅｒｇら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１２（付録１）：Ｓ６１（１９９３）、Ｋｉｍ，Ｄｒｕｇｓ ４６：６１８（１９９３）ならびにＲａｎａｄｅ，“Ｓｉｔｅ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｕｓｉｎｇ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ａｓ Ｃａｒｒｉｅｒｓ”，Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＲａｎａｄｅおよびＨｏｌｌｉｎｇｅｒ（編）、３〜２４頁（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ社 １９９５）を全体的に参照されたい）。リポソームは組成が細胞膜に類似し、その結果、リポソームは安全に投与され得、生分解性である。調製法によってリポソームは単層状または多層状でよく、リポソームは直径が０．０２μｍ〜１０μｍ超に及び、サイズが異なりうる。リポソームには種々の物質を封入することができる：二重層における疎水性物質区画および内部水性空間内の親水性物質区画（例えば、Ｍａｃｈｙら、Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ Ｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ Ｌｉｂｂｅｙ社 １９８７）およびＯｓｔｒｏら、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊ．Ｈｏｓｐ．Ｐｈａｒｍ．４６：１５７６（１９８９）を参照されたい）。さらに、リポソームのサイズ、二重層の数、脂質組成ならびにリポソームの電荷および表面特徴に変化を持たせることにより、封入物質の治療利用可能性を制御することが可能である。
リポソームは実質的に如何なるタイプの細胞にも吸着し、次に、封入物質を緩徐に放出することができる。あるいは、吸収されたリポソームは貪食性の細胞に取り込まれうる。エンドサイトーシスにはリポソーム脂質のリソソーム内分解および封入物質の放出が続く（Ｓｃｈｅｒｐｈｏｆら、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．４４６：３６８（１９８５））。静脈内投与後、通常、小リポソーム（０．１〜１．０μｍ）は主に肝臓および脾臓に存在する細網内皮系の細胞によって取り込まれ、一方、３．０μｍ超のリポソームは肺内に沈着される。細網内皮系の細胞によるより小さいリポソームのこの選択的取り込みは、マクロファージおよび肝臓の腫瘍に化学療法剤を送達するために用いられている。
細網内皮系は、高用量のリポソーム粒子による飽和または薬理学的手段による選択的マクロファージ不活化を含む複数の方法により回避されうる（Ｃｌａａｓｓｅｎら、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ ８０２：４２８（１９８４））。加えて、糖脂質またはポリエチレングリコール誘導体化リン脂質のリポソーム膜への取り込みは、細網内皮系による取り込みの有意な減少をもたらすことが示されている（Ａｌｌｅｎら、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １０６８：１３３（１９９１）；Ａｌｌｅｎら、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １１５０：９（１９９３））。
リポソームは、リン脂質組成を多様化することにより、または受容体もしくはリガンドをリポソームに挿入することにより、特定の細胞または臓器を標的とするように調製することもできる。例えば、高含量の非イオン性界面活性剤で調製されたリポソームは、肝臓を標的とするために用いられている（Ｈａｙａｋａｗａら、日本国特許０４−２４４，０１８；Ｋａｔｏら、Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．１６：９６０（１９９３））。これらの製剤は、大豆ホスファチジルコリン、α−トコフェロールおよびエトキシル化水素化ヒマシ油（ＨＣＯ−６０）をメタノール中に混合し、その混合物を真空下にて濃縮し、次に、その混合物を水で再構成することにより調製された。大豆由来ステリルグルコシド混合物（ＳＧ）およびコレステロール（Ｃｈ）を含むジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）のリポソーム製剤も肝臓を標的とすることが示されている（Ｓｈｉｍｉｚｕら、Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．２０：８８１（１９９７））。
あるいは、抗体、抗体断片、炭水化物、ビタミンおよび輸送蛋白質のような種々の標的化リガンドが、リポソームの表面に結合させうる。例えば、リポソームは、肝細胞の表面上のみに発現するアシアロ糖蛋白質（ガラクトース）受容体を標的とするように、分岐型ガラクトシル脂質誘導体で修飾されうる（ＫａｔｏおよびＳｕｇｉｙａｍａ，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒ．Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔ．１４：２８７（１９９７）；Ｍｕｒａｈａｓｈｉら、Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．２０：２５９（１９９７））。同様に、Ｗｕら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ２７：７７２（１９９８）は、アシアロフェツインによるリポソームの標識化が、リポソームの短縮化血漿中半減期および、肝細胞によるアシアロフェツイン標識リポソームの大幅に亢進した取り込みをもたらすことを示した。一方、分岐型ガラクトシル脂質誘導体を含むリポソームの肝蓄積は、アシアロフェツインの事前注入によって阻害されうる（Ｍｕｒａｈａｓｈｉら、Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．２０：２５９（１９９７））。ポリアコニチル化ヒト血清アルブミンリポソームは、リポソームを肝細胞に標的化するための別の手法を提供する（Ｋａｍｐｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９４：１１６８１（１９９７））。さらに、Ｇｅｈｏら、米国特許第４，６０３，０４４号では、肝臓の特殊な代謝細胞と関連する肝胆道受容体に対する特異性を有する、肝細胞を標的としたリポソーム小胞送達系について述べている。
組織標的化のより一般的な手法では、標的細胞は、標的細胞によって発現されるリガンドに特異的なビオチン化抗体で事前に標識化される（Ｈａｒａｓｙｍら、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．３２：９９（１９９８））。遊離抗体の血漿消失後、ストレプトアビジン結合リポソームが投与される。別の手法では、標的化抗体がリポソームに直接結合させる（Ｈａｒａｓｙｍら、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．３２：９９（１９９８））。
ポリペプチドおよび抗体は、蛋白質のマイクロカプセル化の標準的技法を用いてリポソーム内に封入することができる（例えば、Ａｎｄｅｒｓｏｎら、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．３１：１０９９（１９８１）、Ａｎｄｅｒｓｏｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５０：１８５３（１９９０）およびＣｏｈｅｎら、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １０６３：９５（１９９１）、Ａｌｖｉｎｇら、“Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｔｕｄｉｅｓ”，Ｌｉｐｏｓｏｍｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、第二版、第三巻、Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ（編）、３１７頁（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ社 １９９３）、Ｗａｓｓｅｆら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１４９：１２４（１９８７）を参照されたい）。上記のように、治療上有用なリポソームは種々の成分を含みうる。例えば、リポソームはポリ（エチレングリコール）の脂質誘導体を含みうる（Ａｌｌｅｎら、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １１５０：９（１９９３））。
分解性ポリマーミクロスフェアは、治療用蛋白質の高い全身濃度を維持するように設計されている。ミクロスフェアは、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧ）、ポリ酸無水物、ポリ（オルトエステル）、非生分解性酢酸エチルビニルポリマーのような分解性ポリマーから調製され、蛋白質がそのポリマーに封入される（ＧｏｍｂｏｔｚおよびＰｅｔｔｉｔ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．６：３３２（１９９５）；Ｒａｎａｄｅ，“Ｒｏｌｅ ｏｆ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ”，Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＲａｎａｄｅおよびＨｏｌｌｉｎｇｅｒ（編）、５１〜９３頁（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ社 １９９５）；ＲｏｓｋｏｓおよびＭａｓｋｉｅｗｉｃｚ，“Ｄｅｇｒａｄａｂｌｅ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｕｓｅｆｕｌ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ”，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ：Ｐｈｙｓｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＳａｎｄｅｒｓおよびＨｅｎｄｒｅｎ（編）、４５〜９２頁（Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ社 １９９７）；Ｂａｒｔｕｓら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８１：１１６１（１９９８）；ＰｕｔｎｅｙおよびＢｕｒｋｅ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １６：１５３（１９９８）；Ｐｕｔｎｅｙ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２：５４８（１９８８））。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）コーティングされたナノスフェアも治療用蛋白質の静脈内投与のための担体を提供する（例えば、Ｇｒｅｆら、Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１０：１６７（１９９７）を参照されたい）。
本発明は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ抗体のようなＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ結合活性を有する化学修飾ポリペプチドも企図し、上述のように、ポリペプチドはポリマーに結合される。
例えば、ＡｎｓｅｌおよびＰｏｐｏｖｉｃｈ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ、第五版（Ｌｅａ ＆ Ｆｅｂｉｇｅｒ社 １９９０）、Ｇｅｎｎａｒｏ（編）、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１９版（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ １９９５）ならびにＲａｎａｄｅおよびＨｏｌｌｉｎｇｅｒ，Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ社 １９９６）に示されるように、当業者によって他の剤形が考案されうる。
例示として、医薬組成物は本発明の抗体を含む容器を含むキットとして供給されうる。本発明の抗体は、単回または複数回投与のための注射用溶液の剤形にて、または注射前に再構成される滅菌粉末として提供することができる。あるいは、そのようなキットは、治療用ポリペプチドを投与するための乾燥粉末分散器、液体エアロゾル発生器または噴霧器を含みうる。そのようなキットは、医薬組成物の適応および使用に関する文書情報を更に含みうる。さらに、そのような情報は、抗体組成物がＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに対する既知の過敏性を有する患者には禁忌であるという記載を含みうる。
本発明の抗体を含む医薬組成物は、液体剤形、エアロゾルまたは固体剤形にて供給されうる。液体剤形は、注射用溶液、エアロゾル、液滴、位相溶液および経口懸濁液により例示される。例示的な固体剤形には、カプセル、錠剤および徐放剤形が含まれる。後者の剤形はミニ浸透圧ポンプおよびインプラントにより例示される（Ｂｒｅｍｅｒら、Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１０：２３９（１９９７）；Ｒａｎａｄｅ，“Ｉｍｐｌａｎｔｓ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ”，Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＲａｎａｄｅおよびＨｏｌｌｉｎｇｅｒ（編）、９５〜１２３頁（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ社 １９９５）；Ｂｒｅｍｅｒら、“Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｗｉｔｈ Ｉｎｆｕｓｉｏｎ Ｐｕｐｍｓ”，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ：Ｐｈｙｓｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＳａｎｄｅｒｓおよびＨｅｎｄｒｅｎ（編）、２３９〜２５４頁（Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ社 １９９７）；Ｙｅｗｅｙら、“Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｆｒｏｍ ａ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ Ｉｍｐｌａｎｔ”，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ：Ｐｈｙｓｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＳａｎｄｅｒｓおよびＨｅｎｄｒｅｎ（編）、９３〜１１７頁（Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ社 １９９７））。他の固体剤形には、クリーム、ペースト剤、他の位相的適用などが含まれる。
リポソームは、静脈内、腹腔内、髄腔内、筋肉内、皮下または経口投与、吸入もしくは鼻腔内投与により、治療用ポリペプチドを患者に送達する一手段を提供する。リポソームは、水性コンパートメントを取り巻く１つ以上の脂質二重層からなる微視的小胞である（Ｂａｋｋｅｒ−Ｗｏｕｄｅｎｂｅｒｇら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１２（付録１）：Ｓ６１（１９９３）、Ｋｉｍ，Ｄｒｕｇｓ ４６：６１８（１９９３）ならびにＲａｎａｄｅ，“Ｓｉｔｅ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｕｓｉｎｇ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ａｓ Ｃａｒｒｉｅｒｓ”，Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＲａｎａｄｅおよびＨｏｌｌｉｎｇｅｒ（編）、３〜２４頁（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ社 １９９５）を全体的に参照されたい）。リポソームは組成が細胞膜に類似し、その結果、リポソームは安全に投与され得、生分解性である。調製法によってリポソームは単層状または多層状でよく、リポソームは直径が０．０２μｍ〜１０μｍ超に及び、サイズが異なりうる。リポソームには種々の物質を封入することができる：二重層における疎水性物質区画および内部水性空間内の親水性物質区画（例えば、Ｍａｃｈｙら、Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ Ｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ Ｌｉｂｂｅｙ社 １９８７）およびＯｓｔｒｏら、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊ．Ｈｏｓｐ．Ｐｈａｒｍ．４６：１５７６（１９８９）を参照されたい）。さらに、リポソームのサイズ、二重層の数、脂質組成ならびにリポソームの電荷および表面特徴に変化を持たせることにより、封入物質の治療利用可能性を制御することが可能である。
リポソームは実質的に如何なるタイプの細胞にも吸着し、次に、封入物質を緩徐に放出することができる。あるいは、吸収されたリポソームは貪食性の細胞に取り込まれうる。エンドサイトーシスにはリポソーム脂質のリソソーム内分解および封入物質の放出が続く（Ｓｃｈｅｒｐｈｏｆら、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．４４６：３６８（１９８５））。静脈内投与後、通常、小リポソーム（０．１〜１．０μｍ）は主に肝臓および脾臓に存在する細網内皮系の細胞によって取り込まれ、一方、３．０μｍ超のリポソームは肺内に沈着される。細網内皮系の細胞によるより小さいリポソームのこの選択的取り込みは、マクロファージおよび肝臓の腫瘍に化学療法剤を送達するために用いられている。
細網内皮系は、高用量のリポソーム粒子による飽和または薬理学的手段による選択的マクロファージ不活化を含む複数の方法により回避されうる（Ｃｌａａｓｓｅｎら、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ ８０２：４２８（１９８４））。加えて、糖脂質またはポリエチレングリコール誘導体化リン脂質のリポソーム膜への取り込みは、細網内皮系による取り込みの有意な減少をもたらすことが示されている（Ａｌｌｅｎら、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １０６８：１３３（１９９１）；Ａｌｌｅｎら、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １１５０：９（１９９３））。
リポソームは、リン脂質組成を多様化することにより、または受容体もしくはリガンドをリポソームに挿入することにより、特定の細胞または臓器を標的とするように調製することもできる。例えば、高含量の非イオン性界面活性剤で調製されたリポソームは、肝臓を標的とするために用いられている（Ｈａｙａｋａｗａら、日本国特許０４−２４４，０１８；Ｋａｔｏら、Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．１６：９６０（１９９３））。これらの製剤は、大豆ホスファチジルコリン、α−トコフェロールおよびエトキシル化水素化ヒマシ油（ＨＣＯ−６０）をメタノール中に混合し、その混合物を真空下にて濃縮し、次に、その混合物を水で再構成することにより調製された。大豆由来ステリルグルコシド混合物（ＳＧ）およびコレステロール（Ｃｈ）を含むジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）のリポソーム製剤も肝臓を標的とすることが示されている（Ｓｈｉｍｉｚｕら、Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．２０：８８１（１９９７））。
あるいは、本発明の抗体、抗体断片、炭水化物、ビタミンおよび輸送蛋白質のような種々の標的化リガンドが、リポソームの表面に結合させうる。例えば、リポソームは、肝細胞の表面上のみに発現するアシアロ糖蛋白質（ガラクトース）受容体を標的とするように、分岐型ガラクトシル脂質誘導体で修飾されうる（ＫａｔｏおよびＳｕｇｉｙａｍａ，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒ．Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔ．１４：２８７（１９９７）；Ｍｕｒａｈａｓｈｉら、Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．２０：２５９（１９９７））。同様に、Ｗｕら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ２７：７７２（１９９８）は、アシアロフェツインによるリポソームの標識化が、リポソームの短縮化血漿中半減期および、肝細胞によるアシアロフェツイン標識リポソームの大幅に亢進した取り込みをもたらすことを示した。一方、分岐型ガラクトシル脂質誘導体を含むリポソームの肝蓄積は、アシアロフェツインの事前注入によって阻害されうる（Ｍｕｒａｈａｓｈｉら、Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．２０：２５９（１９９７））。ポリアコニチル化ヒト血清アルブミンリポソームは、リポソームを肝細胞に標的化するための別の手法を提供する（Ｋａｍｐｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９４：１１６８１（１９９７））。さらに、Ｇｅｈｏら、米国特許第４，６０３，０４４号では、肝臓の特殊な代謝細胞と関連する肝胆道受容体に対する特異性を有する、肝細胞を標的としたリポソーム小胞送達系について述べている。
組織標的化のより一般的な手法では、標的細胞は、標的細胞によって発現されるリガンドに特異的なビオチン化抗体で事前に標識化される（Ｈａｒａｓｙｍら、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．３２：９９（１９９８））。遊離抗体の血漿消失後、ストレプトアビジン結合リポソームが投与される。別の手法では、標的化抗体がリポソームに直接結合させる（Ｈａｒａｓｙｍら、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．３２：９９（１９９８））。
本発明の抗体は、蛋白質のマイクロカプセル化の標準的技法を用いてリポソーム内に封入することができる（例えば、Ａｎｄｅｒｓｏｎら、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．３１：１０９９（１９８１）、Ａｎｄｅｒｓｏｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５０：１８５３（１９９０）およびＣｏｈｅｎら、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １０６３：９５（１９９１）、Ａｌｖｉｎｇら、“Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｔｕｄｉｅｓ”，Ｌｉｐｏｓｏｍｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、第二版、第三巻、Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ（編）、３１７頁（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ社 １９９３）、Ｗａｓｓｅｆら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１４９：１２４（１９８７）を参照されたい）。上記のように、治療上有用なリポソームは種々の成分を含みうる。例えば、リポソームはポリ（エチレングリコール）の脂質誘導体を含みうる（Ａｌｌｅｎら、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １１５０：９（１９９３））。
分解性ポリマーミクロスフェアは、治療用蛋白質の高い全身濃度を維持するように設計されている。ミクロスフェアは、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧ）、ポリ酸無水物、ポリ（オルトエステル）、非生分解性酢酸エチルビニルポリマーのような分解性ポリマーから調製され、蛋白質がそのポリマーに封入される（ＧｏｍｂｏｔｚおよびＰｅｔｔｉｔ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．６：３３２（１９９５）；Ｒａｎａｄｅ，“Ｒｏｌｅ ｏｆ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ”，Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＲａｎａｄｅおよびＨｏｌｌｉｎｇｅｒ（編）、５１〜９３頁（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ社 １９９５）；ＲｏｓｋｏｓおよびＭａｓｋｉｅｗｉｃｚ，“Ｄｅｇｒａｄａｂｌｅ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｕｓｅｆｕｌ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ”，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ：Ｐｈｙｓｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＳａｎｄｅｒｓおよびＨｅｎｄｒｅｎ（編）、４５〜９２頁（Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ社 １９９７）；Ｂａｒｔｕｓら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８１：１１６１（１９９８）；ＰｕｔｎｅｙおよびＢｕｒｋｅ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １６：１５３（１９９８）；Ｐｕｔｎｅｙ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２：５４８（１９８８））。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）コーティングされたナノスフェアも治療用蛋白質の静脈内投与のための担体を提供する（例えば、Ｇｒｅｆら、Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１０：１６７（１９９７）を参照されたい）。
例えば、ＡｎｓｅｌおよびＰｏｐｏｖｉｃｈ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ、第五版（Ｌｅａ ＆ Ｆｅｂｉｇｅｒ社 １９９０）、Ｇｅｎｎａｒｏ（編）、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１９版（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ １９９５）ならびにＲａｎａｄｅおよびＨｏｌｌｉｎｇｅｒ，Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ社 １９９６）に示されるように、当業者によって他の剤形が考案されうる。
本発明は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに結合する抗体の組成物ならびに本明細書で述べるそのような抗体を含む方法および治療用途を企図する。そのような組成物は更に担体を含みうる。担体は従来の有機または無機担体でよい。担体例には、水、緩衝液、アルコール、ポリエチレングリコール、マクロゴール、ゴマ油、トウモロコシ油などが含まれる。
本発明は、次の非限定的実施例により更に例示される。
（実施例１）
（ＩＬ−１７Ｆ ｍＲＮＡはマウス喘息モデルにおいてアップレギュレートされる）
マウスでの感作・気道投与モデルにおいてＩＬ−１７Ｆ ｍＲＮＡ濃度を測定した。第零および七日目に５０％Ｉｍｊｅｃｔ Ａｌｕｍ（Ｐｉｅｒｃｅ社）中、組換えヤケヒョウヒダニ（Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ ｐｔｅｒｏｎｙｓｓｉｎｕｓ）アレルゲン１（ＤｅｒＰ１）（Ｉｎｄｏｏｒ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、英国Ｃａｒｄｉｆｆ）１０ｕｇの腹腔内注射により、８〜１０週齢のマウス群を感作した。７日後、３日間連続して（第１４，１５および１６日目）５０ｕｌ ＰＢＳ中ＤｅｒＰ１ ２０ｕｇをマウスに投与した。この群を表すのは４匹のマウスであった。陰性対照にはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）感作、次に、ＰＢＳ投与を受けた５匹のマウスが含まれた。加えて、３匹のマウスにＤｅｒＰ１感作を与え、次に、ＰＢＳ投与を行った。アレルゲンまたは対照投与後４８時間にて全肺組織を採取し、全ＲＮＡを単離した。
各対象由来の同量の全ＲＮＡを用いて第一鎖ｃＤＮＡを調製した。Ｑｉａｇｅｎ ｈｏｔｓｔａｒポリメラーゼ（Ｑｉａｇｅｎ社、Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）および製造業者の推奨を用いてＩＬ−１７Ｆ ＰＣＲを適用した。ＩＬ−１７Ｆ ＰＣＲでは、センスプライマーｚｃ４６０９８（配列番号９）およびアンチセンスプライマーｚｃ４６０９９（配列番号１０）による３５サイクルの増幅を用いた。全対象間にて鋳型の質が均一となるように、ＩＬ−１７Ｆ増幅に用いる各鋳型の同量にβアクチンＰＣＲを適用した。ＢアクチンＰＣＲは、センスプライマーｚｃ４４７７９（配列番号１１）およびアンチセンスプライマーｚｃ４４７７６（配列番号１２）による２５サイクルのＰＣＲを含んだ。
ＤｅｒＰ１感作、ＤｅｒＰ１投与処置群（喘息シミュレーション）の４匹のマウスはすべて、強力なＩＬ−１７Ｆ増幅を示した。対照的に、ＤｅｒＰ１感作／ＰＢＳ投与処置群を表す３匹の対象のうちの３匹およびＰＢＳ感作／ＰＢＳ投与処置群の５匹の対象のうちの５匹を含む陰性対照からは微弱なＩＬ−１７Ｆ増幅が見られた。Ｂアクチン増幅は喘息模擬対象と少なくとも同程度に陰性対照で強力であり、微弱な陰性対照のＩＬ−１７Ｆ増幅が鋳型の問題に起因するものではないことを示した。
（実施例２）
（ＩＬ−１７Ａはヒト末梢血単核細胞においてＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−αの濃度上昇を誘導する）
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をｆｉｃｏｌｌ密度勾配遠心分離により精製し、次に、培地のみ、５０ｎｇ／ｍｌの抗ヒトＣＤ３抗体または５０ｎｇ／ｍｌの抗ヒトＣＤ３抗体と１ ｇ／ｍｌの抗ヒトＣＤ２８抗体との組合せにて、３７℃で一晩インキュベートする。これらの条件の各々に対する同型培養を構築し、サイトカイン（無し）、２５ｎｇ／ｍｌのヒトＩＬ−１７Ａまたは２５ｎｇ／ｍｌのヒトＩＬ−１７Ｆを与える。２４時間のインキュベーション後、各培養物由来の上清を採取し、Ｂ−Ｄ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社のヒトＴｈ１／Ｔｈ２サイトメトリックビーズアレイ（ＣＢＡ）を用いてサイトカイン含量に関してアッセイする。本発明者らは、抗ＣＤ３または抗ＣＤ３＋抗ＣＤ２８で刺激され、ＩＬ−１７Ａを補充された培養物が、サイトカインが加えられず、またはＩＬ−１７Ｆを受けた培養物に対して有意に上昇した濃度のＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−αを含むことを見出した（各々３〜５倍の上昇）。抗ＣＤ３刺激を加えられなかった培養物はサイトカイン濃度の有意な変化を示さなかった。加えて、ＩＬ−１７Ａの添加は、ＩＬ−２，ＩＬ−４，ＩＬ−５およびＩＬ−１０を含む、ＣＢＡでアッセイされる他のサイトカインの有意な変化を誘導しなかった。このデータは、ＩＬ−１７ＦではなくＩＬ−１７Ａが、抗ＣＤ３または抗ＣＤ３＋抗ＣＤ２８で刺激されたＰＢＭＣ培養物において、ＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−αの産生を増大させうることを示す。
（実施例３）
（抗ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ抗体は、コラーゲン誘導性関節炎（ＣＩＡ）マウスモデルにおいて疾患の発生率および進行を低下させる）
（Ａ）コラーゲン誘導性関節炎（ＣＩＡ）マウスモデル）
１０週齢の雄ＤＢＡ／１Ｊマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ社）を１３マウス／群の３群に分類する。第２１日目に完全フロイントアジュバントに配合された１ｍｇ／ｍｌのニワトリＩＩ型コラーゲンの５０〜１００μｌの皮内尾注射液をマウスに投与し（Ｃｈｏｎｄｒｅｘ社により調製、Ｒｅｄｍｏｎｄ，ＷＡ）、３週間後の第零日目に不完全フロイントアジュバントにて調製されたことを除き、同じ注射液を投与する。第零日目から大部分のマウスが中等度の疾患症状を示す日に及ぶ異なる時点にて４週間、週３回の腹腔内注射として本発明の抗体（例えば、交差反応性抗体または二重特異性抗体）を投与する。投与群には一用量・マウス一匹当たり抗体１０または１００μｇを投与し、対照群には対照ビヒクルであるＰＢＳ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）を投与する。２回目のコラーゲン注射後、マウスは関節炎症状を示し始め、大部分のマウスが１．５〜３週間以内に炎症を発症する。カリパスを用いて足の厚みを測定することにより、かつ下述のように各足に臨床スコア（０〜３）を割り当てることにより（０＝正常、０．５＝足指炎症、１＝軽度の足炎症、２＝中等度の足炎症、および３＝重度の足炎症）、各足における疾患の程度を評価する。
（Ｂ）疾患のモニタリング）
マウスは２回目のコラーゲン注射後まもなく足炎症の徴候を示し始め得、一部のマウスは２回目のコラーゲン注射前であっても足指炎症の徴候を有し始めうる。大部分のマウスはブースト注射の１．５〜３週間以内に関節炎を発症するが、一部はより長い期間を必要としうる。通常、このモデルにおける疾患の発生率は９５〜１００％であり、４０匹のマウスを用いた試験では、通常、０〜２匹の非応答マウスが認められる（６週間の観察後に判定）。炎症が始まると、変動する低悪性度の足または足指の炎症の一般的な一過性の発生が起こりうることに留意されたい。この理由により、著明な持続性足膨張が発現するまで、マウスは疾患を確立したとはみなされない。
足における疾患の状態を評価するため、すべてのマウスを毎日観察し、これは、各足に定性的臨床スコアを割り当てることによって行われる。毎日、臨床疾患の状態に従って、各マウスの４本の足をスコアリングする。臨床スコアを求めるため、足は、足指、足自体（手もしくは足）および手もしくは足関節の３区域を有すると考えることができる。これらの区域に対する炎症の程度および重症度に留意し、それには、膨張に対する各足の観察；裂け爪もしくは足指の発赤；任意の足における浮腫もしくは発赤のエビデンスの徴候；腱もしくは骨の微細な解剖学的区分の喪失の徴候；浮腫もしくは発赤に対する手首もしくは足首の評価；ならびに炎症が脚の近位にまで伸展しているか否かの留意が含まれる。１、２または３の足スコアは、第一に、重症度の全体的印象に、第二に、どれほどの区域が関与しているかに基づく。臨床スコアリングに用いるスケールを以下に示す。
（Ｃ）臨床スコア）
０＝正常
０．５＝１本以上の足指が関与しているが、足指のみが炎症を起こしている
１＝足（１区域）に関与する軽度の炎症であり、足指（単数または複数）を含みうる
２＝足における中等度の炎症であり、一部の足指および／または手首／足首を含みうる（２区域）
３＝足、手首／足首および一部もしくはすべての足指における重度の炎症（３区域）
確定疾患は、連続して２日間持続する順位２またはそれ以上の足炎症の定性的スコアと定義される。確定疾患が存在すると同時に、日付を記録し、「確定疾患」に関するそのマウスの最初の日として指定する。
抗コラーゲン抗体の血清濃度ならびに血清免疫グロブリンおよびサイトカイン濃度をモニタリングするため、試験全体にわたって血液を採取する。血清抗コラーゲン抗体は疾患の重症度と十分に相関する。第２１日目にマウスを安楽死させ、血清およびＣＢＣのために血液を採取する。各マウスから組織学的検査のために１本の患部足を１０％ＮＢＦ中に採取し、ｍＲＮＡ分析のために１本を液体窒素中に凍結し、−８０℃で保存する。さらに、ＲＮＡ分析のために、１／２脾臓、１／２胸腺、１／２腸間膜リンパ節、１つの肝臓葉および左腎をＲＮＡｌａｔｅｒに採取し、組織学的検査のために、１／２脾臓、１／２胸腺、１／２腸間膜リンパ節、残りの肝臓および右腎を１０％ＮＢＦ中に採取する。免疫グロブリンおよびサイトカインアッセイのために血清を採取し、−８０℃で保存する。
あらゆる時点で本発明の抗体を投与するマウス群は、足炎症の開始および／または進行の遅延を特徴とする。これらの結果は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ交差反応性および／または二重特異性抗体が、このモデルに関連する炎症ならびに疾患の発生率および進行を低減することができることを示す。これらの結果は、そのような抗体の投与が血清ＴＮＦａ，ＩＬ−１ｂおよび抗コラーゲン抗体の濃度低下をもたらしたという観察によって更に支持される。
（実施例４）
（抗ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ抗体は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）モデルにおいて疾患の発生率および進行を低下させる）
ＩＢＤ患者由来の培養腸組織が健常対照由来の組織と比べて高い濃度の炎症性メディエーターを産生することを示すためにこのモデルを設計する。この亢進した炎症性メディエーター（ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７ＡおよびＦ、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−ａ、ＩＦＮ−ｇ、ＭＩＰファミリーメンバー、ＭＣＰ−１、Ｇ−およびＧＭ−ＣＳＦなどを含むが、これに限定されない）の産生は、炎症経路および下流エフェクター細胞の活性化に対するその作用を経て、クローン病（ＣＤ）および潰瘍性大腸炎（ＵＣ）のようなＩＢＤと関連する症状および病理の原因となる。次に、これらの経路および構成要素はインビボにて認められる組織・細胞の損傷／破壊をもたらす。したがって、このモデルはＩＢＤのこの亢進した炎症性メディエーターの側面をシミュレートすることができる。さらに、健常対照またはヒト腸管上皮細胞（ＩＥＣ）系由来の腸組織を、これらの炎症性構成要素の存在下で培養すると、炎症経路シグナル伝達および組織・細胞損傷のエビデンスを認めることができる。
インビボにてヒトＩＢＤにおいて有効となりうる治療法は、炎症性メディエーターの産生および／または存在を阻害し、かつ／あるいは中和することにより、上記エキソビボまたはＩＥＣモデルにおいて奏功しうる。
このモデルにおいて、ヒト腸組織をＩＢＤ患者または腸生検、再切開を受けている健常対照または死後組織採取から採取し、Ａｌｅｘａｋｉｓら（Ｇｕｔ ５３：８５−９０；２００４）の変形例を用いて処理する。無菌条件下にて多量のＰＢＳで試料を穏やかに洗浄し、次に、完全組織培養培地（細菌の異常増殖を阻止するための抗生物質を加えて）の存在下、組織切片を培養する。組織切片の同じプール由来の試料を以下の１つで処理する：ビヒクル（ＰＢＳ）；組換えヒト（ｒｈ）ＩＬ−１７Ａ；ｒｈＩＬ−１７Ｆ；またはｒｈＩＬ−１７Ａ＋ｒｈＩＬ−１７Ｆ。加えて、これらを本発明の抗体（例えば、交差反応性抗体または二重特異性抗体）の有無にかかわらずに処理する。この実験的プロトコルは、細胞が既存のストックから継代されることを除き、ヒトＩＥＣ系に関する試験のために続けられる。培養時間を変えた後（１時間から数日間まで）、上清を採取し、上記一覧を含む炎症性メディエーターの濃度に関して分析する。ＩＢＤ患者由来の試料あるいはｒｈＩＬ−１７Ａおよび／またはＦで処理された試料において、未処理健常対照組織試料と比べて炎症性サイトカインおよびケモカインの濃度は上昇する。本発明の抗体の添加は炎症性メディエーターの産生を著明に低下させ、したがって、ヒトＩＢＤにおいて有効であることが期待されうる。
（実施例５）
（抗ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ抗体は、多発性硬化症（ＭＳ）モデルにおいて疾患の発生率および進行を低下させる）
多発性硬化症（ＭＳ）は、リンパ球細胞および単核細胞の炎症性浸潤ならびにＣＮＳ全体にわたる脱髄の存在を含む複数の因子によって媒介されると考えられている複雑な疾患である。ミクログリアは中枢神経系（ＣＮＳ）に集合するマクロファージ様細胞であり、損傷または感染と同時に活性化する。ミクログリアはＭＳを含む種々のＣＮＳ疾患に重要な役割を果たすものとして関係づけられており、疾患の開始、進行のメカニズムおよび治療法を研究するために用いられうる（Ｎａｇａｉら、Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ Ｄｉｓ ８：１０５７−１０６８；２００１；Ｏｌｓｏｎら、Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｍｅｔｈｏｄｓ １２８：３３−４３；２００３）。したがって、不死化ヒトミクログリア細胞系および／または樹立されたヒト星状膠細胞系は、これらの細胞型に対する炎症性メディエーターの作用の一部およびその中和の可能性を研究するために用いることができる。炎症性メディエーター（ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７ＡおよびＦ、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−ａ、ＩＦＮ−ｇ、ＭＩＰファミリーメンバー、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＰ−１０、ＭＣＰ−１、Ｇ−およびＧＭ−ＣＳＦなどを含むが、これに限定されない）は、炎症経路および下流エフェクター細胞の活性化に対するその作用を経て、ＭＳと関連する症状および病理の原因となりうる。
ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの炎症促進作用ならびに本発明の抗体のこれらの作用を中和または低減する能力を評価するため、培養グリア細胞を以下の１つで処理する：ビヒクル；ｒｈＩＬ−１７Ａ；ｒｈＩＬ−１７Ｆ；ｒｈＩＬ−１７Ａ＋ＩＬ−１７Ｆ。加えて、これらを本発明の抗体の有無にかかわらずに処理する。培養時間を変えた後（１時間から数日間まで）、上清および細胞を採取し、上記一覧を含む炎症性メディエーターの濃度および／または発現に関して分析する。ビヒクル単独で処理された培養物と比べて、ｒｈＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆの存在下では炎症性サイトカインおよびケモカインの濃度は上昇する。本発明の抗体の添加は炎症性メディエーターの産生および発現を著明に低下させ、したがって、ヒトＭＳと関連する炎症側面において有効であることが期待されうる。
（実施例６）
（抗ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ抗体は、関節リウマチ（ＲＡ）および骨関節炎（ＯＡ）モデルにおいて疾患の発生率および進行を低下させる）
ＲＡおよびＯＡ患者由来のヒト滑膜培養物（滑膜マクロファージ、滑膜線維芽細胞および関節軟骨細胞を含む）および外植片が、健常対照由来の培養物／外植片と比べて高い濃度の炎症性メディエーターを産生することを示すためにこのモデルを設計する。この亢進した炎症性メディエーター（オンコスタチンＭ、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７ＡおよびＦ、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−ａ、ＩＦＮ−ｇ、ＩＰ−１０、ＲＡＮＴＥＳ、ＲＡＮＫＬ、ＭＩＰファミリーメンバー、ＭＣＰ−１、Ｇ−およびＧＭ−ＣＳＦ、一酸化窒素などを含むが、これに限定されない）の産生は、炎症経路および下流エフェクター細胞の活性化に対するその作用を経て、ＲＡおよびＯＡと関連する症状および病理の原因となる。次に、これらの経路および構成要素は、炎症性浸潤、軟骨および基質の喪失／破壊、骨量減少ならびにプロスタグランジンおよびシクロオキシゲナーゼのアップレギュレーションをもたらす。したがって、このモデルはインビトロおよびエキソビボ試験においてＲＡおよびＯＡの破壊的炎症側面をシミュレートすることができる。さらに、健常対照由来の外植片および滑膜培養物を、これらの複数の炎症性構成要素（例えば、オンコスタチンＭ，ＴＮＦ−ａ，ＩＬ−１ｂ，ＩＬ−６，ＩＬ−１７ＡおよびＦ，ＩＬ−１５など）の存在下で培養すると、炎症経路シグナル伝達を認めることができる。インビボにてヒトＲＡにおいて有効となりうる治療法は、炎症性メディエーターの産生および／または存在を阻害し、かつ／あるいは中和することにより、上記インビトロおよびエキソビボモデルにおいて奏功しうる。
このモデルにおいて、ヒト滑膜外植片をＲＡ、ＯＡ患者または関節置換を受けている健常対照または死後組織採取から採取し、ＷｏｏｌｅｙおよびＴｅｔｌｏｗ（Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓ ２：６５−７０；２０００）ならびにｖａｎ‘ｔ Ｈｏｆら（Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ ３９：１００４−１００８；２０００）の変形例を用いて処理する。滑膜線維芽細胞、滑膜マクロファージおよび関節軟骨細胞の培養物も検討する。同型試料を以下の１つ：ビヒクル（ＰＢＳ）；組換えヒト（ｒｈ）ＩＬ−１７Ａ；ｒｈＩＬ−１７Ｆ；またはｒｈＩＬ−１７Ａ＋ｒｈＩＬ−１７Ｆで処理し、一部の試料は、オンコスタチンＭ、ＴＮＦ−ａ、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−６、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１５の様々な組合せを含む。加えて、これらを本発明の抗体の有無にかかわらずに処理する。培養時間を変えた後（１時間から数日間まで）、上清を採取し、上記一覧を含む炎症性メディエーターの濃度に関して分析する。ＲＡまたはＯＡ患者由来の試料あるいはｒｈＩＬ−１７Ａおよび／またはＦ（単独または他の炎症性サイトカインと組み合わせて）で処理された試料において、未処理健常対照外植片または未処理細胞培養物と比べて炎症性サイトカインおよびケモカインの濃度は上昇する。本発明の抗体の添加は炎症性メディエーターの産生を著明に低下させ、したがって、ヒトＲＡおよびＯＡにおいて有効であることが期待されうる。
（実施例７）
（マウス疾患モデルにおけるＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの発現）
ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの発現に関して既知の技法を用いて、疾患（喘息、ＤＳＳ大腸炎、アトピー性皮膚炎および実験的アレルギー性脳脊髄炎）の４つのマウスモデルを分析した。
喘息モデルにおいて、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆは、罹患および非罹患マウスにおける肺、脾臓、肺流入領域リンパ節および肺浸潤細胞において、極めて低いレベルから検出不可能なレベルにて発現する。
喘息モデルに反して、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７ＦはＤＳＳ大腸炎モデルにおいて近位および遠位結腸にて罹患マウスにおいて高度にアップレギュレートされたが、正常マウスではアップレギュレートされなかった。いずれのサイトカインも腸間膜リンパ節において有意にアップレギュレートされなかった。さらに、急性ＤＳＳ誘導性大腸炎の状況では両方のサイトカインのアップレギュレーションが見出されたが、慢性ＤＳＳ誘導性大腸炎では見出されなかった。
アトピー性皮膚炎では、ＩＬ−１７Ａ ｍＲＮＡは検出できなかった。ＩＬ−１７Ｆは皮膚および皮膚流入領域リンパ節に発現することが見出されたが、疾患で有意に制御されるようには思われなかった。
実験的アレルギー性脳脊髄炎では、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆは罹患マウスにおける脊髄においてアップレギュレートされるように思われたが、健常マウスではそうではなかった。ＩＬ−１７Ｆは脊髄に比べてリンパ節において高度に発現した可能性もあるが、リンパ節における発現は疾患で制御されなかった。しかし、これらの組織における全体的な発現レベルはかなり低かった。
要するに、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの発現は、ＤＳＳ誘導性大腸炎および実験的アレルギー性脳脊髄炎モデルの状況では疾患で制御されるように思われるが、喘息またはアトピー性皮膚炎ではそのようではなかった。
（実施例８）
（ヒトＩＬ−１７ＡおよびＦのＥ．ｃｏｌｉ発現ベクターの構築）
（ＩＬ−１７Ａ）
（ｐＣＨＡＮ２８の構築）
ヒトＩＬ−１７Ａ発現構築物を以下のように作製した。２つのオリゴヌクレオチドプライマーｚｃ４８，６８６（配列番号１３）およびｚｃ４８，６８５（配列番号１４）を用いたＰＣＲ増幅により、未変性ＩＬ−１７Ａ配列を作製した。ＰＣＲ条件は次の通りであった：９４℃で３０秒間、５０℃で３０秒間および７２℃で１分間を２５サイクル；次に、４℃で浸漬。ＤＮＡ断片を２容積の無水エタノールで沈殿させた。ペレットを１０μＬ Ｈ２Ｏ中に再懸濁させ、ＳｍａＩ切断レシピエントベクターｐＴＡＰ２３８への組換えに用い、ヒトＩＬ−１７Ａをコードする構築物を生成した。その結果生じたクローンをｐＣＨＡＮ２８と指定した。それらをＮｏｔＩ（１０μＬ ＤＮＡ，５μＬバッファー３ Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ＢｉｏＬａｂｓ社、２μＬ Ｎｏｔ Ｉ，３３μＬ Ｈ２Ｏ ３７℃で１時間）で消化し、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼバッファー（７μＬの前消化物、２μＬの５倍バッファー、１μＬのＴ４ ＤＮＡリガーゼ）で再連結した。このステップでは、ベクターを簡素化するために酵母配列ＣＥＮ−ＡＲＳを除去した。酵母配列の非存在を確認するため、ＤＮＡのアリコートをＰｖｕ２およびＰｓｔＩで消化した。ヒトＩＬ−１７Ａ発現構築物をＥ．ｃｏｌｉ株Ｗ３１１０に形質転換させた。ヒトＩＬ−１７Ａのポリヌクレオチド配列は配列番号５に示され、対応するコードされたＩＬ−１７Ａポリペプチドは配列番号６に示される。
（ＩＬ−１７Ｆ）
（ｐＴＡＰ４１９の構築）
ヒトＩＬ−１７Ｆ発現構築物を以下のように作製した。２つのオリゴヌクレオチドプライマーｚｃ４２，８５２（配列番号１５）およびｚｃ４２，８５４（配列番号１６）を用いたＰＣＲ増幅により、未変性ＩＬ−１７Ｆ配列を作製した。ＰＣＲ条件は次の通りであった：９４℃で３０秒間、５０℃で３０秒間および７２℃で１分間を２５サイクル；次に、４℃で浸漬。ＤＮＡ断片を２容積の無水エタノールで沈殿させた。ペレットを１０μＬ Ｈ２Ｏ中に再懸濁させ、ＳｍａＩ切断レシピエントベクターｐＴＡＰ２３８への組換えに用い、ヒトＩＬ−１７Ｆをコードする構築物を生成した。その結果生じたクローンをｐＴＡＰ４１９と指定した。それらをＮｏｔＩ（１０μＬ ＤＮＡ，５μＬバッファー３ Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ＢｉｏＬａｂｓ社、２μＬ Ｎｏｔ Ｉ，３３μＬ Ｈ２Ｏ ３７℃で１時間）で消化し、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼバッファー（７μＬの前消化物、２μＬの５倍バッファー、１μＬのＴ４ ＤＮＡリガーゼ）で再連結した。このステップでは、ベクターを簡素化するために酵母配列ＣＥＮ−ＡＲＳを除去した。酵母配列の非存在を確認するため、ＤＮＡのアリコートをＰｖｕ２およびＰｓｔＩで消化した。ヒトＩＬ−１７Ｆ発現構築物をＥ．ｃｏｌｉ株Ｗ３１１０に形質転換させた。ヒトＩＬ−１７Ｆのポリヌクレオチド配列は配列番号７に示され、対応するコードされたＩＬ−１７Ｆポリペプチドは配列番号８に示される。
（実施例９）
（Ｅ．ｃｏｌｉにおけるＩＬ−１７Ａの発現）
ヒトＩＬ １７Ａ ＣＨ６および発現ベクターｐＺＭＰ２０を用いて相同組換えによってｐＩＬ １７Ａ ＣＨ６を含む発現プラスミドを構築した。プライマーｚｃ４８８９５（配列番号１７）およびｚｃ４８８９３（配列番号１８）を用いたＰＣＲ増幅により、断片を生成した。ＰＣＲ断片ＩＬ １７Ａ ＣＨ６は、ヒトＩＬ １７Ａをテンプレートとして用いて作製された、Ｃ末端における６ｘＨｉｓタグに融合したＩＬ １７Ａコード領域を含む。該断片は、挿入ポイントにおいてｐＺＭＰ２０ベクター配列との５’重複部分およびｐＺＭＰ２０ベクターとの３’重複部分を含む。用いられたＰＣＲ条件は次の通りであった：９４℃で５分間を１サイクル；９４℃で１分間、次に５５℃で２分間、次に７２℃で３分間を３５サイクル；７２℃で１０分間を１サイクル。ＰＣＲ反応混合物を１％アガロースゲル上に流し、ＱＩＡｑｕｉｃｋ（商標）ゲル抽出キット（Ｑｉａｇｅｎ社、カタログ番号２８７０４）を用いてインサートのサイズに対応するバンドをゲル抽出した。
プラスミドｐＺＭＰ２０は、ＣＭＶプロモーター、コード配列の挿入のための多数の制限部位、ｏｔＰＡシグナルペプチド配列（この場合、組換えによって除去される）；ポリオウイルス由来の配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）エレメントおよび膜貫通ドメインのＣ末端において切断されたＣＤ８の細胞外ドメイン；Ｅ．ｃｏｌｉ複製開始点；ＳＶ４０プロモーター、エンハンサーおよび複製開始点、ＤＨＦＲ遺伝子およびＳＶ４０ターミネーターを含む哺乳動物選択可能マーカー発現ユニット；ならびにＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅにおける選択・複製に必要なＵＲＡ３およびＣＥＮ−ＡＲＳ配列を有する発現カセットを含む哺乳動物発現ベクターである。プラスミドｐＺＭＰ２０をＢｇｌＩＩで切断し（挿入ポイントを作製）、その後、ＰＣＲ断片と共に酵母に組み換えた。１００マイクロリットルのコンピテント酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）細胞を独立して１０μｌのインサートＤＮＡおよび１００ｎｇの切断ｐＺＭＰ２０ベクターと混合し、その混合物を０．２ｃｍ電気穿孔キュベットに移した。０．７５ｋＶ（５ｋＶ／ｃｍ）、∞オームおよび２５μＦの電源（ＢｉｏＲａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）設定を用いて酵母／ＤＮＡ混合物に電気パルスを印加した。６００μｌの１．２Ｍソルビトールを該キュベットに加え、酵母を１００μｌおよび３００μｌアリコートにて２つのＵＲＡ−Ｄプレート上に蒔き、３０℃でインキュベートした。約７２時間後、単一プレート由来のＵｒａ＋酵母形質転換細胞を１ｍｌ Ｈ２Ｏ中に再懸濁させ、短時間回転させて酵母細胞をペレット化した。細胞ペレットを０．５ｍｌの溶解緩衝液（２％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、１％ＳＤＳ、１００ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．０）、１ｍＭ ＥＤＴＡ）中に再懸濁させた。５００マイクロリットルの溶解混合物を、２５０μｌ酸洗浄ガラスビーズおよび３００μｌフェノール−クロロホルムを含むＥｐｐｅｎｄｏｒｆチューブに加え、３分間ボルテックスし、最速にてＥｐｐｅｎｄｏｒｆ遠心分離機において５分間回転させた。３００マイクロリットルの水相を未使用チューブに移し、ＤＮＡを６００μｌエタノール（ＥｔＯＨ）で沈殿させ、次に、最速にて３０分間遠心分離した。該チューブをデカントし、ペレットを１ｍＬの７０％エタノールで洗浄した。該チューブをデカントし、ＤＮＡペレットを３０μｌ ＴＥ中に再懸濁させた。
５μｌの酵母ＤＮＡプレップおよび５０μｌの細胞を用いてエレクトロコンピテントＥ．ｃｏｌｉ宿主細胞（ＤＨ１２Ｓ）の形質転換を行った。２．０ｋＶ，２５μＦおよび４００オームにて細胞に電気パルスを印加した。電気穿孔後、１ｍｌ ＳＯＣ（２％Ｂａｃｔｏ（商標）トリプトン（Ｄｉｆｃｏ社、Ｄｅｔｒｏｉｔ，ＭＩ）、０．５％酵母抽出物（Ｄｉｆｃｏ社）、１０ｍＭ ＮａＣｌ、２．５ｍＭ ＫＣｌ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、１０ｍＭ ＭｇＳＯ４、２０ｍＭグルコース）を加え、次に、５０μｌおよび２００μｌアリコートにて２つのＬＢ ＡＭＰプレート（ＬＢブロス（Ｌｅｎｎｏｘ社）、１．８％Ｂａｃｔｏ（商標）寒天（Ｄｉｆｃｏ社）、１００ｍｇ／Ｌアンピシリン）上に細胞を蒔いた。
構築物のための３つのクローンのインサートを配列解析に付し、正確な配列を含む各構築物のための１つのクローンを選択した。製造業者の使用説明書に従って市販キット（ＱＩＡＧＥＮプラスミドメガキット、Ｑｉａｇｅｎ社、Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）を用いて比較的大きいスケールのプラスミドＤＮＡを単離した。
一過性トランスフェクションによってｐＩＬ １７Ａ ＣＨ６の発現を達成した。６つの１０００ｍＬフラスコに２５０ｍＬの２９３Ｆ細胞を１Ｅ６ ｃ／ｍＬにて播種し、傍らに置いた。２０ｍＬのＯｐｔｉＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、カタログ番号３１９８５−０７０）を２つの５０ｍＬ円錐チューブの各々に入れた。２ｍＬのリポフェクタミン２０００（Ｉｎｖｔｉｒｏｇｅｎ社、カタログ番号１１６６８−０１９）を、ＯｐｔｉＭＥＭ含有５０ｍＬ円錐チューブの一方に混合し、１．５ｍｇのＩＬ １７Ａ ＣＨ６ ｐＺＭＰ２０発現プラスミドを他方のチューブに入れた。チューブを数回反転させ、室温で５分間インキュベートさせた。次に、２つのチューブを混合し、数回反転させ、室温で３０分間インキュベートさせた。次に、細胞培養物を回転させながら、ＤＮＡ−リポフェクタミン２０００混合物を６つのフラスコの各々に均等に配分した。次に、３７℃、６％ＣＯ２にてフラスコを振盪機上のインキュベーターに入れ、１２０ＲＰＭにて振盪した。９６時間後に培養物を採取した。
（実施例１０）
（Ｅ．ｃｏｌｉにおけるＩＬ−１７Ｆの発現）
ヒトＩＬ １７Ｆ ＣＨ６および発現ベクターｐＺＭＰ２０を用いて相同組換えによってｐＩＬ １７Ｆ ＣＨ６を含む発現プラスミドを構築した。プライマーｚｃ４８８９４（配列番号１９）およびｚｃ４８８９２（配列番号２０）を用いたＰＣＲ増幅により、断片を生成した。ヒトＩＬ １７Ｆ ＣＨ６は、ヒトＩＬ １７Ｆの従前に作製されたクローンをテンプレートとして用いて作製された、Ｃ末端における６ｘＨｉｓタグに融合したＩＬ １７Ｆコード領域を含む。該断片は、挿入ポイントにおいてｐＺＭＰ２０ベクター配列との５’重複部分およびｐＺＭＰ２０ベクターとの３’重複部分を含む。用いられたＰＣＲ条件は次の通りであった：９４℃で５分間を１サイクル；９４℃で１分間、次に５５℃で２分間、次に７２℃で３分間を３５サイクル；７２℃で１０分間を１サイクル。ＰＣＲ反応混合物を１％アガロースゲル上に流し、ＱＩＡｑｕｉｃｋ（商標）ゲル抽出キット（Ｑｉａｇｅｎ社、カタログ番号２８７０４）を用いてインサートのサイズに対応するバンドをゲル抽出した。
プラスミドｐＺＭＰ２０は、ＣＭＶプロモーター、コード配列の挿入のための多数の制限部位、ｏｔＰＡシグナルペプチド配列（この場合、組換えによって除去される）；ポリオウイルス由来の配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）エレメントおよび膜貫通ドメインのＣ末端において切断されたＣＤ８の細胞外ドメイン；Ｅ．ｃｏｌｉ複製開始点；ＳＶ４０プロモーター、エンハンサーおよび複製開始点、ＤＨＦＲ遺伝子およびＳＶ４０ターミネーターを含む哺乳動物選択可能マーカー発現ユニット；ならびにＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅにおける選択・複製に必要なＵＲＡ３およびＣＥＮ−ＡＲＳ配列を有する発現カセットを含む哺乳動物発現ベクターである。
プラスミドｐＺＭＰ２０をＢｇｌＩＩで切断し（挿入ポイントを作製）、その後、ＰＣＲ断片と共に酵母に組み換えた。１００マイクロリットルのコンピテント酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）細胞を独立して１０μｌのインサートＤＮＡおよび１００ｎｇの切断ｐＺＭＰ２０ベクターと混合し、その混合物を０．２ｃｍ電気穿孔キュベットに移した。０．７５ｋＶ（５ｋＶ／ｃｍ）、∞オームおよび２５μＦの電源（ＢｉｏＲａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）設定を用いて酵母／ＤＮＡ混合物に電気パルスを印加した。６００μｌの１．２Ｍソルビトールを該キュベットに加え、酵母を１００μｌおよび３００μｌアリコートにて２つのＵＲＡ−Ｄプレート上に蒔き、３０℃でインキュベートした。約７２時間後、単一プレート由来のＵｒａ＋酵母形質転換細胞を１ｍｌ Ｈ２Ｏ中に再懸濁させ、短時間回転させて酵母細胞をペレット化した。細胞ペレットを０．５ｍｌの溶解緩衝液（２％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、１％ＳＤＳ、１００ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．０）、１ｍＭ ＥＤＴＡ）中に再懸濁させた。５００マイクロリットルの溶解混合物を、２５０μｌ酸洗浄ガラスビーズおよび３００μｌフェノール−クロロホルムを含むＥｐｐｅｎｄｏｒｆチューブに加え、３分間ボルテックスし、最速にてＥｐｐｅｎｄｏｒｆ遠心分離機において５分間回転させた。３００マイクロリットルの水相を未使用チューブに移し、ＤＮＡを６００μｌエタノール（ＥｔＯＨ）で沈殿させ、次に、最速にて３０分間遠心分離した。該チューブをデカントし、ペレットを１ｍＬの７０％エタノールで洗浄した。該チューブをデカントし、ＤＮＡペレットを３０μｌ ＴＥ中に再懸濁させた。
５μｌの酵母ＤＮＡプレップおよび５０μｌの細胞を用いてエレクトロコンピテントＥ．ｃｏｌｉ宿主細胞（ＤＨ１２Ｓ）の形質転換を行った。２．０ｋＶ，２５μＦおよび４００オームにて細胞に電気パルスを印加した。電気穿孔後、１ｍｌ ＳＯＣ（２％Ｂａｃｔｏ（商標）トリプトン（Ｄｉｆｃｏ社、Ｄｅｔｒｏｉｔ，ＭＩ）、０．５％酵母抽出物（Ｄｉｆｃｏ社）、１０ｍＭ ＮａＣｌ、２．５ｍＭ ＫＣｌ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、１０ｍＭ ＭｇＳＯ４、２０ｍＭグルコース）を加え、次に、５０μｌおよび２００μｌアリコートにて２つのＬＢ ＡＭＰプレート（ＬＢブロス（Ｌｅｎｎｏｘ社）、１．８％Ｂａｃｔｏ（商標）寒天（Ｄｉｆｃｏ社）、１００ｍｇ／Ｌアンピシリン）上に細胞を蒔いた。
構築物のための３つのクローンのインサートを配列解析に付し、正確な配列を含む各構築物のための１つのクローンを選択した。製造業者の使用説明書に従って市販キット（ＱＩＡＧＥＮプラスミドメガキット、Ｑｉａｇｅｎ社、Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）を用いて比較的大きいスケールのプラスミドＤＮＡを単離した。
一過性トランスフェクションによってヒトＩＬ １７Ｆ ＣＨ６の発現を達成した。６つの１０００ｍＬフラスコに２５０ｍＬの２９３Ｆ細胞を１Ｅ６ ｃ／ｍＬにて播種し、傍らに置いた。２０ｍＬのＯｐｔｉＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、カタログ番号３１９８５−０７０）を２つの５０ｍＬ円錐チューブの各々に入れた。２ｍＬのリポフェクタミン２０００（Ｉｎｖｔｉｒｏｇｅｎ社、カタログ番号１１６６８−０１９）を、ＯｐｔｉＭＥＭ含有５０ｍＬ円錐チューブの一方に混合し、１．５ｍｇのＩＬ １７Ｆ ＣＨ６ ｐＺＭＰ２０発現プラスミドを他方のチューブに入れた。チューブを数回反転させ、室温で５分間インキュベートさせた。次に、２つのチューブを混合し、数回反転させ、室温で３０分間インキュベートさせた。次に、細胞培養物を回転させながら、ＤＮＡ−リポフェクタミン２０００混合物を６つのフラスコの各々に均等に配分した。次に、３７℃、６％ＣＯ２にてフラスコを振盪機上のインキュベーターに入れ、１２０ＲＰＭにて振盪した。９６時間後に培養物を採取した。
（実施例１１）
（ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに結合するモノクローナル抗体の特徴づけ）
各セットにおける最良の１回目のクローン由来の上清を含む抗体に関して２つのアッセイを行う。第一に、マウス−ＩｇＧ ＥＬＩＳＡキット（カタログ番号１ ３３３ １５１（Ｒｏｃｈｅ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ社）を用いて、中和アッセイにおいて用いられる各上清中のＩｇＧ濃度を定量する。これにより、各上清に対する特定の中和活性の定量が可能になり、したがって、最も強力な抗ＩＬ １７ＡおよびＩＬ−１７ＦならびにＩＬ−１７Ａ＋ＩＬ−１７Ｆ中和ｍＡｂを産生しているハイブリドーマを特定した。この分析から最も強力なｍＡｂを更なる特徴づけのために選択する。第二に、Ｂｉａｃｏｒｅ １０００表面プラズモン共鳴装置を用いて上清に関して予備的エピトープ特異性（「ビニング（ｂｉｎｎｉｎｇ）」）試験を行う。
（競合エピトープ結合）
ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに対するモノクローナル抗体の機能的結合特性を評価するため、エピトープビニング（ｂｉｎｎｉｎｇ）およびウエスタンブロット試験を行う。ＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆ上の異なるエピトープまたは抗原決定基に結合する抗体を決定するため、ビニング（ｂｉｎｎｉｎｇ）試験を完結する。ＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆ上の同じまたは類似のエピトープに結合するモノクローナル抗体は、それぞれ、同時に結合することができず、単一のファミリーまたは「ビン（ｂｉｎ）」に機能上分類される。ＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆ上の異なるエピトープに結合するモノクローナル抗体は、同時に結合することができ、別個のファミリーまたは「ビン（ｂｉｎ）」に分類される。Ｂｉａｃｏｒｅ １０００（商標）装置を用いて試験を行った。Ｂｉａｃｏｒｅは、ルーチンに用いられるモノクローナル抗体のエピトープビン（ｂｉｎ）パネルである種々のアッセイ形式の単に１つである。多くの参考文献（例えば、Ｔｈｅ Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、第六巻６ Ｇｌｅｎｎ Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ（編））にモノクローナル抗体を「ビン（ｂｉｎ）」するために（当業者が）用いることができる代替方法が述べられており、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに対するモノクローナル抗体の結合特性に関する一貫性のある情報を得ることが期待されうる。エピトープビニング（ｂｉｎｎｉｎｇ）試験は、可溶性未変性抗原、Ｅ．ｃｏｌｉ由来または哺乳動物由来の組換えＩｌ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆを用いて行う。
（ウエスタンブロット）
ウエスタンブロット形式を用いて、ハイブリドーマ由来のモノクローナル抗体の、変性・減少／変性したＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆに結合し、これを検出する能力も評価する。
（エピトープビニング（ｂｉｎｎｉｎｇ））
（Ａ）材料および方法）
Ｂｉａｃｏｒｅ １０００（商標）システム（Ｂｉａｃｏｒｅ社、スウェーデンＵｐｐｓａｌｌａ）においてエピトープビニング（ｂｉｎｎｉｎｇ）試験を行う。方法は方法定義言語（Ｍｅｔｈｏｄ Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ Ｌａｎｇｕａｇｅ）（ＭＤＬ）を用いてプラグラムされ、Ｂｉａｃｏｒｅ制御ソフトウェアｖ１．２を用いて実行される。ポリクローナルヤギ抗マウスＩｇＧ Ｆｃ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社、Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）をＢｉａｃｏｒｅ ＣＭ５センサーチップに共有結合的に固定化し、一連の試験の一次モノクローナル抗体を該チップに結合する（捕捉する）ために用いる。次に、ポリクローナルＩｇＧ Ｆｃ断片（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社、Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）を用いて該チップ上の非占有Ｆｃ結合部位をブロックする。次に、ＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆを注入し、捕捉された一次モノクローナル抗体に特異的に結合させる。Ｂｉａｃｏｒｅ装置はセンサーチップ表面に結合した蛋白質の質量を測定し、したがって、一次抗体およびＩＬ−１７ＡもしくはＩＬ−１７Ｆ抗原の結合を各サイクルについて検証する。一次抗体および抗原の該チップへの結合後、一連の試験のモノクローナル抗体を二次抗体として注入し、予め結合した抗原に結合させる。二次モノクローナル抗体が一次モノクローナル抗体と同時にＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆ抗原に結合することができる場合、該チップの表面上の質量の増加、すなわち、結合が検出される。しかし、二次モノクローナル抗体が一次モノクローナル抗体と同時にＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆ抗原に結合することができない場合、付加的質量、すなわち、結合は検出されない。バックグラウンド（結合がない）シグナルのレベルを確定するため、各モノクローナル抗体をそれ自体に対して試験し、陰性対照として用いる。
各精製モノクローナル抗体をパネル全体の選択モノクローナル抗体と組み合わせて一次抗体として試験する。すべての精製モノクローナル抗体を等濃度にて試験する。サイクル間において該チップ上のヤギ抗マウスＩｇＧ Ｆｃ捕捉抗体を２０ｍＭ ＨＣｌで再生させる。一次抗体または抗原の非存在下での二次抗体の応答の欠如を示すため、対照サイクルを実行する。ＢｉｏＥｖａｌｕａｔｉｏｎ ３．２ ＲＣＩソフトウェアを用いてデータを編集し、データ処理のためにＥｘｃｅｌ（商標）にロードする。
（Ｂ）ウエスタンブロット）
ウエスタンブロット形式を用いて、各クローン由来のモノクローナル抗体の、変性・減少／変性した２つの供給源由来のＩｌ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆを検出する能力を評価する。ウエスタンブロット形式においてＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆを検出することが公知であるウサギポリクローナル抗体を陽性対照として用いる。
（材料および方法）
ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ抗原を２つの供給源から得る：ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７ＦをＥ．ｃｏｌｉまたは哺乳動物細胞、例えば、２９３細胞（本明細書で述べる）において産生させ、精製する。各抗原のアリコート（１００ｎｇ／レーン）を分子量スタンダード（ＳｅｅＢｌｕｅ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）と共に非還元または還元試料緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）中の４〜１２％ＮｕＰＡＧＥ Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）上にロードし、１倍ＭＥＳ泳動緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）中にて電気泳動を行った。電気泳動後、蛋白質を該ゲルから０．２μｍニトロセルロース膜（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）に移した。ニトロセルロースブロットをＷｅｓｔｅｒｎ Ａバッファー（ＺｙｍｏＧｅｎｅｔｉｃｓ社、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．４）、５ｍＭ ＥＤＴＡ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．０５％ Ｉｇｅｐａｌ、０．２５％ゼラチン）中２．５％脱脂粉乳中にて一晩ブロックし、次に、切片に切断し、各抗体（Ｗｅｓｔｅｒｎ Ａバッファー中０．２μｇ／ｍＬの各モノクローナル抗体または０．５μｇ／ｍＬのウサギポリクローナル抗体）に曝露させた。次に、西洋わさびペルオキシダーゼにコンジュゲートした二次抗体；ヒツジ抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰ（Ａｍｅｒｓｈａｍ社：Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を用いてモノクローナル抗体を探り、ロバ抗ウサギＩｇＧ−ＨＲＰ（Ａｍｅｒｓｈａｍ社）を用いてポリクローナル抗体を探るためにブロットを探索する。次に、化学発光試薬（Ｌｕｍｉ−Ｌｉｇｈｔ Ｐｌｕｓ Ｒｅａｇｅｎｔ：Ｒｏｃｈｅ社、ドイツＭａｎｎｈｅｉｍ）を用いて結合した抗体を検出し、ブロット像をＬｕｍｉ−Ｉｍａｇｅｒ（Ｍａｎｎｈｅｉｍ−Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ社）またはＸ線フィルム（Ｋｏｄａｋ社）上に記録する。
（実施例１２）
（２９３一過性細胞系由来のＣ末端Ｈｉｓ標識ＩＬ１７Ａ蛋白質の精製）
（マウスＩＬ−１７Ａ）
固形物（それぞれ、Ｆｌｕｋａ社、ＪＴ Ｂａｋｅｒ社）を加えることにより、供給された培地を２５ｍＭイミダゾール、５００ｍＭ ＮａＣｌ（ｐＨ７．５）に調整した（総容積１．４１Ｌ）。ウエスタンブロット、ＲＰ−ＨＰＬＣ（１．１１ｍｇ／Ｌ）によってｈｉｓ標識標的の発現を分析した。調整した培地を４℃で一晩、Ｎｉ ＮＴＡ Ｈｉｓ Ｂｉｎｄ Ｓｕｐｅｒｆｌｏｗ（Ｎｏｖａｇｅｎ社）カラム（５ｍＬ，１ｃｍ径、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）上にロードした。ＩＬ １７Ａ標的物質がないようにＲＰ−ＨＰＬＣおよびウエスタンブロットによって通過液を調べた。Ａ２８０ｎｍにおけるＵＶベースラインが安定化するまで、５０ｍＭ ＮａＰＯ４、２５ｍＭイミダゾール、０．５Ｍ ＮａＣｌ（ｐＨ７．５）でＮｉ ＮＴＡカラムを洗浄した。２ステップにてカラムを溶出した：５００ｍＭイミダゾールストックを用いて上記バッファーを４５ｍＭおよび５００ｍＭイミダゾールに調整した。銀染色分析によって溶出画分を調べ、プールされた標的物質を含む画分に関して調べた（５００ｍＭステップ溶出）。Ｎｉ ＮＴＡプールをＲＰ−ＨＰＬＣによって分析した。Ｎｉ ＮＴＡプールを１０ｋＤ ＭＷＣＯ Ｕｌｔｒａｃｅｌ膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）に対して２ｍＬに濃縮し、１．０２ｍＬ／分にて５０ｍＭ ＮａＰＯ４，１０９ｍＭ ＮａＣｌ（ｐＨ７．３）で流れるＳｕｐｅｒｄｅｘ（登録商標）７５カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、１２／６０ｍｍ）上に注入した。２つのピークが分離し、銀染色により分析した。マウスＩＬ １７Ａは残る夾雑蛋白質から良好に分離した。１０ｋＤａ ＭＷＣＯ Ｕｌｔｒａｃｅｌ膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を用いてプールされた純粋標的物質を含む画分を再度２．０ｍＬに濃縮し、０．２２ｕｍにて濾過し、アリコートした。
（ヒトＩＬ−１７Ａ）
固形物（それぞれ、Ｆｌｕｋａ社、ＪＴ Ｂａｋｅｒ社）を加えることにより、供給された培地を２５ｍＭイミダゾール、５００ｍＭ ＮａＣｌ（ｐＨ７．５）に調整した（総容積１．４１Ｌ）。Ａ１０２２Ｇをスタンダードとして用いたウエスタンブロット、更にＲＰ−ＨＰＬＣ（３．１９ｍｇ／Ｌ）によってｈｉｓ標識標的物質の発現を分析した。調整した培地を４℃で一晩、Ｎｉ ＮＴＡ Ｈｉｓ Ｂｉｎｄ Ｓｕｐｅｒｆｌｏｗ（Ｎｏｖａｇｅｎ社）カラム（５ｍＬ，１ｃｍ径、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）上にロードした。ＩＬ １７Ａ標的物質がないようにＲＰ−ＨＰＬＣおよびウエスタンブロットによって通過液を調べた。Ａ２８０ｎｍにおけるＵＶベースラインが安定化するまで、５０ｍＭ ＮａＰＯ４、２５ｍＭイミダゾール、０．５Ｍ ＮａＣｌ（ｐＨ７．５）でＮｉ ＮＴＡカラムを洗浄した。２ステップにてカラムを溶出した：５００ｍＭイミダゾールストックを用いて上記バッファーを４５ｍＭおよび５００ｍＭイミダゾールに調整した。銀染色分析によって溶出画分を調べ、プールされた標的物質を含む画分に関して調べた（５００ｍＭステップ溶出）。Ａ１０２２Ｆをスタンダードとして用いたＲＰ−ＨＰＬＣによってＮｉ ＮＴＡプールを分析した。Ｎｉ ＮＴＡプールを１０ｋＤ ＭＷＣＯ Ｕｌｔｒａｃｅｌ膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）に対して５ｍＬに濃縮し、２．７１ｍＬ／分にて５０ｍＭ ＮａＰＯ４，１０９ｍＭ ＮａＣｌ（ｐＨ７．３）で流れるＳｕｐｅｒｄｅｘ（登録商標）７５カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、２６／６０ｍｍ）上に注入した。２つのピークが分離し、銀染色により分析した。マウスＩＬ １７Ａは残る夾雑蛋白質から良好に分離した。１０ｋＤａ ＭＷＣＯ Ｕｌｔｒａｃｅｌ膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を用いてプールされた純粋標的物質を含む画分を再度９．０ｍＬに濃縮し、０．２２ｕｍにて濾過し、アリコートした。
（実施例１３）
（２９３一過性細胞系由来のＣ末端Ｈｉｓ標識ＩＬ１７Ｆ蛋白質の精製）
一過性発現からの２９３Ｆ培地におけるＩＭＡＣアフィニティー捕捉。培地を２５ｍＭイミダゾール；２５ｍＭ ＮａＰｈｏｓ；４００ｍＭ ＮａＣｌおよびｐＨ７．５に調整した。このようにして調整した培地を、２５ｍＭ ＮａＰｈｏｓ；２５ｍＭイミダゾール；５００ｍＭ ＮａＣｌ（ｐＨ７．５）にて平衡したＱｉａｇｅｎ ＮＴＡ Ｓｕｐｅｒｆｌｏｗ（１ｃｍ径）の５ｍｌ層上に１ｍｌ／分にてロードした。ロードの完了後、カラムを２０ＣＶ平衡化緩衝液で洗浄し、その後、溶出緩衝液と２５ｍＭ ＮａＰｈｏｓ；５００ｍＭイミダゾール；５００ｍＭ ＮａＣｌ（ｐＨ７．５）との間に形成された１０ＣＶ勾配で溶出した。ＲＰ−ＨＰＬＣによって産物に関して画分をアッセイし、プールし、ＳＥＣステップのために濃縮した。ＩＭＡＣステップからの濃縮プールを、５０ｍＭ ＮａＰｈｏｓ；１０９ｍＭ ＮａＣｌ（ｐＨ７．２）にて平衡したＰｈａｒｍａｃｉａ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ７５ ＳＥＣカラム上に注入した。約０．５ＣＶにて溶出する大きな対称ピークが産物を含む。アリコート化に備えて試料をプールし、０．２ミクロンまで無菌濾過した。
（実施例１４）
（上皮性関門機能によるヒトＩＢＤ試料におけるＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに結合する抗体の有効性）
上皮性関門の完全性維持は健康な胃腸管の保持において重要な因子である。実験的エビデンスは、腸における上皮性関門の漏出性がＩＢＤの発症の原因となりうることを示唆している。通常、腸固有層にある免疫細胞は、細胞−細胞接触または可溶性因子の産生によって腸上皮細胞と相互作用し、免疫監視を維持して上皮性関門の完全性に寄与する。しかし、遷延性または調節不全の免疫介在性炎症は、上皮性関門の細胞の完全性および機能における障害の原因になりうる。以下の試験は、上皮性関門の完全性に対するＴ細胞由来ＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆの直接作用を測定するように設計したものである。
本実施例では、Ｃａｃｏ−２細胞のような腸上皮細胞系を半透膜上に分化させ、ＩＢＤ患者または正常患者からの生検由来のＴ細胞または単球と基底側において共培養する。経上皮電気抵抗または染料拡散に対する単層の抵抗性の評価を用いて、上皮単層の完全性を経時的にモニタリングする。共培養物における単層の経上皮抵抗性の低下は、共培養物におけるＴ細胞または単球の活性に誘導される単層の崩壊を示唆しうる。本発明の抗体のようなＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆのインヒビターを用いて、上皮単層の崩壊に対するＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの相対的寄与度を求め、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆのインヒビターが上皮性関門の完全性を維持するのに有効でありうるかを試験することができうる。そのような分子による活性化Ｔ細胞に誘導される上皮単層の崩壊の阻止は、本発明の抗体がヒトにおけるＩＢＤの治療に有効でありうることを示唆しうる。
ＩＢＤ患者由来の一次上皮によって形成される単層を用いて共培養系を作製することもでき、これらの細胞が健常患者由来の上皮細胞と比べてＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに対してより感受性が高いかを判定する。そうであれば、これらのデータは、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの阻害がＩＢＤの治療に適した方策でありうることを示唆しうる。
（実施例１５）
（正常およびヒトＩＢＤ試料由来の粘膜固有層Ｔ細胞および単球／マクロファージに対するＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの作用）
調節不全または持続性免疫介在性炎症は、組織損傷または不適切なまたは遷延性免疫応答に至る恒久的な歪みを経て、ＩＢＤと関連する症状および病理の原因になりうる。このモデルでは、腸組織の隣接環境のサイトカイン環境に存在しうるＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆへの疾患関連Ｔ細胞および単球の曝露の下流の結果の可能性を判定することができる。
インビボにてヒトＩＢＤにおいて有効となりうる治療法は、炎症性メディエーター（ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７ＡおよびＦ、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−ａ、ＩＦＮ−ｇ、ＭＩＰファミリーメンバー、ＭＣＰ−１、Ｇ−およびＧＭ−ＣＳＦなどを含むが、これに限定されない）の産生および／または存在を阻害し、かつ／あるいは中和することにより、上記エキソビボモデルにおいて奏功しうる。
このモデルでは、ＨＢＳＳ中にてハサミを用いて慎重に生検試料を切り刻むことによってＴ細胞および単球／マクロファージを生検試料から単離し、コラゲナーゼおよびディスパーゼＩＩで処理し、振盪機内にて３７℃で１時間インキュベートする。細胞懸濁液を、ナイロンメッシュを通して濾過して細片および細胞凝集塊を除去し、ＨＢＳＳ中にて多数回洗浄する。Ｔ細胞およびマクロファージ／単球は直接細胞選別またはビーズの枯渇／富化プロトコルを用いて単離することができる。ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの存在下にて単離細胞をインキュベートする。これにより、Ｔ細胞および単球／マクロファージによる炎症性メディエーターの産生が誘導され、あるいは引き続くＴ細胞応答を高度に炎症促進性の応答に歪めることになる。ＩＢＤ患者由来の細胞によって産生される炎症性メディエーターのタイプと正常患者由来の細胞によって産生される炎症性メディエーターのタイプとの比較を行うことができ、ＩＢＤ患者由来のＴ細胞および単球／マクロファージが、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの存在下、より炎症促進性のプロファイルを生じさせることが示唆されうる。ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに誘導される下流炎症性メディエーターの産生を中和する本発明の抗体の添加は、そのような抗体がＩＢＤ患者の治療において有効でありうることを示唆する。
（実施例１６）
（過敏性腸症候群（“ＩＢＳ”）：ＣＮＳに向けられた発病におけるＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに結合する抗体の有効性）
ＩＢＳの特徴を示す症状を誘発するためにストレス刺激を用いる、一次性のＣＮＳを標的とした発病に重点を置いたモデル。新生仔心理社会的ストレスモデルは、内臓痛覚過敏、下痢およびストレス感受性を含む、ＩＢＳ患者に関連する臨床特徴の一部を模倣したものである。出生後４〜１８日間、毎日１８０分間、同腹仔の母親からの連日の分離は、母親の行動の変化をもたらし、なめる／毛づくろい行動の時間を有意に減少させる。新生仔に対するストレスはＣＮＳの恒久的変化をもたらし、ストレス誘発性の内臓痛および体性痛覚の感受性の変化を生じさせる。これらの動物においてストレスに応答する大腸運動機能が亢進し、予備的データは腸透過性亢進のエビデンスを示す（Ｍａｙｅｒら、２００２）。本発明の抗体による処置ならびに引き続いての大腸運動機能の分析、上皮透過性およびストレス刺激への応答により、このＩＢＳ動物モデルにおける有効性が判定されうる。これらのインヒビターによる処置後の症状の発生率の低下は、ＩＢＳの処置における有効性の可能性を示唆しうる。
（実施例１７）
（過敏性腸症候群（“ＩＢＳ”）：一次性の腸に向けられたストレス誘発因子におけるＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに結合する抗体の有効性）
これは一次性の腸に向けられたストレス（すなわち、腸炎症、感染または身体的ストレス）誘発因子に重点を置いたモデルである。動物研究では、軽度の炎症または免疫活性化が、運動性および／または腸の求心性・上皮機能の変化の基礎でありうることが示されている（Ｍａｙｅｒら、２００２）。このモデルにおいて、連日のカラシ油の大腸内注射の形にて新生仔動物（８〜２１日齢）において連日の大腸刺激を生じさせる。カラシ油は神経刺激剤であり、大腸内投与後に内臓痛覚過敏を誘発することが示されている。このモデルは内臓過敏および排便習慣の変化を含むＩＢＳの重要な特徴を模倣したものである。動物はＩＢＳ患者の重要な特徴である下痢または便秘も示す（Ｍａｙｅｒら、２００２；Ｋｉｍｂａｌｌら、２００５）。このモデルに関連する症状の発症の変化を判定するため、本発明の抗体を送達しうる。本発明者らのインヒビターによる治療後の内臓過敏および腸運動変化の発生率または大きさの低減は、これらの分子がＩＢＳの処置において有効である可能性を示唆しうる。
（実施例１８）
（ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体の作製）
（Ａ）捕捉アッセイ）
捕捉ＥＬＩＳＡアッセイを用いて、抗血清中の抗ヒトＩＬ−１７Ｆまたは抗ヒトＩＬ−１７Ａ抗体の、ＩＬ−１７Ｆおよび／またはＩＬ−１７Ａに結合する能力を評価した。このアッセイでは、まず、コーティングバッファー（０．１Ｍ Ｎａ２ＣＯ３（ｐＨ９．６））中１０００ｎｇ／ｍＬの濃度にて、９６ウェルポリスチレンＥＬＩＳＡプレートのウェルに１００μＬ／ウェルのヤギ抗マウスＩｇＧ，Ｆｃ特異的抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ社）を被覆した。各リガンドに対して１つのプレートを調製した。プレートを４℃で一晩インキュベートし、その後、非結合抗体を吸引し、３００μＬ／ウェルの洗浄バッファー（０．１３７Ｍ ＮａＣｌ，０．００２７Ｍ ＫＣｌ，０．００７２Ｍ Ｎａ２ＨＰＯ４，０．００１５Ｍ ＫＨ２ＰＯ４，０．０５％（ｖ／ｖ）ポリソルベート２０（ｐＨ７．２）と定義されるＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ）でプレートを２回洗浄した。２００μＬ／ウェルのブロッキングバッファー（ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ＋１％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ））でウェルを１時間ブロックし、その後、洗浄バッファーでプレートを２回洗浄した。最初の１：１０００希釈から開始し、１：１，０００，０００に及ぶ血清の連続１０倍希釈液（ブロッキングバッファー中）を調製した。次に、分子のＦｃ部分を通じて血清中マウスＩｇＧをアッセイプレートに結合するため、各希釈液の複製試料をアッセイプレート（１００μＬ／ウェル）に移した。正常マウス血清は陰性対照として機能し、ヒトＩＬ １７ＲＣ−Ｆｃ蛋白質を陽性アッセイ対照として加えた。注意：この対照に対する被覆はヤギ抗ヒトＩｇＧ，Ｆｃ特異的抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ社）であった。室温で１時間のインキュベーション後、ウェルを吸引し、上述のようにプレートを２回洗浄した。次に、５００ｎｇ／ｍＬの濃度にてビオチン化ＩＬ １７Ｆ（ビオチン：蛋白質のモル比６：１）またはビオチン化ＩＬ １７Ａ（ビオチン：蛋白質のモル比１０：１）をウェル（別個のプレート）（１００μＬ／ウェル）に加えた。室温で１時間のインキュベーション後、非結合ビオチン化リガンドをウェルから吸引し、プレートを２回洗浄した。次に、５００ｎｇ／ｍＬの濃度にて西洋わさびペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジン（Ｐｉｅｒｃｅ社、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を各ウェル（１００μＬ／ウェル）に加え、プレートを室温で１時間インキュベートした。非結合ＨＲＰ−ＳＡの除去後、プレートを２回洗浄し、１００μＬ／ウェルのテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）（ＢｉｏＦＸ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社、Ｏｗｉｎｇｓ Ｍｉｌｌｓ，ＭＤ）を各ウェルに加え、プレートを室温で２分間インキュベートした。４５０ｎｍ ＴＭＢ反応停止剤（ＢｉｏＦＸ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社、Ｏｗｉｎｇｓ Ｍｉｌｌｓ，ＭＤ）の１００μＬ／ウェルの添加によって染色進行を停止し、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｓｐｅｃｔｒａ ＭＡＸ ３４０装置において４５０ｎｍにてウェルの吸光度値を読み取った。
（Ｂ）直接アッセイ）
直接ＥＬＩＳＡアッセイを用いて、抗血清中の抗ヒトＩＬ−１７Ｆまたは抗ヒトＩＬ−１７Ａ抗体の、ＩＬ−１７Ｆおよび／またはＩＬ−１７Ａに結合する能力を評価した。このアッセイでは、まず、コーティングバッファー（０．１Ｍ Ｎａ２ＣＯ３（ｐＨ９．６））中１０００ｎｇ／ｍＬの濃度にて、９６ウェルポリスチレンＥＬＩＳＡプレートのウェルに１００μＬ／ウェルのＩＬ−１７ＦまたはＩＬ−１７Ａを被覆した。各リガンドに対して１つのプレートを調製した。プレートを４℃で一晩インキュベートし、その後、非結合抗体を吸引し、３００μＬ／ウェルの洗浄バッファー（０．１３７Ｍ ＮａＣｌ，０．００２７Ｍ ＫＣｌ，０．００７２Ｍ Ｎａ２ＨＰＯ４，０．００１５Ｍ ＫＨ２ＰＯ４，０．０５％（ｖ／ｖ）ポリソルベート２０（ｐＨ７．２）と定義されるＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ）でプレートを２回洗浄した。２００μＬ／ウェルのブロッキングバッファー（ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ＋１％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ））でウェルを１時間ブロックし、その後、洗浄バッファーでプレートを２回洗浄した。最初の１：１０００希釈から開始し、１：１，０００，０００に及ぶ血清の連続１０倍希釈液（ブロッキングバッファー中）を調製した。次に、血清中の特定の蛋白質をアッセイプレートに結合するため、各希釈液の複製試料をアッセイプレート（１００μＬ／ウェル）に移した。正常マウス血清は陰性対照として機能し、ｚｃｙｔｏｒ１４（ロットＡ１０３４Ｆ）を陽性アッセイ対照として加えた。室温で１時間のインキュベーション後、ウェルを吸引し、上述のようにプレートを２回洗浄した。次に、１：５０００の濃度にて西洋わさびペルオキシダーゼ標識ヤギ抗マウスＩｇＧ，Ｆｃ特異的抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ社）を両方のプレート（１００μＬ／ウェル）に加えた。室温で１時間のインキュベーション後、非結合抗体をウェルから吸引し、プレートを２回洗浄した。テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）（ＢｉｏＦＸ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社、Ｏｗｉｎｇｓ Ｍｉｌｌｓ，ＭＤ）（１００μＬ／ウェル）を各ウェルに加え、プレートを室温で２分間インキュベートした。４５０ｎｍ ＴＭＢ反応停止剤（ＢｉｏＦＸ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社、Ｏｗｉｎｇｓ Ｍｉｌｌｓ，ＭＤ）の１００μＬ／ウェルの添加によって染色進行を停止し、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｓｐｅｃｔｒａ ＭＡＸ ３４０装置において４５０ｎｍにてウェルの吸光度値を読み取った。
（Ｃ）中和アッセイ）
プレートベースの中和アッセイを用いて、抗血清中の抗ヒトＩＬ−１７Ｆまたは抗ヒトＩＬ−１７Ａ抗体の、その同族受容体を通したＩＬ−１７Ｆおよび／またはＩＬ−１７Ａの刺激活性を阻害（中和）する能力を評価した。このアッセイでは、まず、コーティングバッファー（０．１Ｍ Ｎａ２ＣＯ３（ｐＨ９．６））中１０００ｎｇ／ｍＬの濃度にて、９６ウェルポリスチレンＥＬＩＳＡプレートのウェルに１００μＬ／ウェルのヒトＩＬ １７ＲＣ−Ｆｃ蛋白質を被覆した。各リガンドに対して１つのプレートを調製した。プレートを４℃で一晩インキュベートし、その後、非結合受容体を吸引し、３００μＬ／ウェルの洗浄バッファー（０．１３７Ｍ ＮａＣｌ，０．００２７Ｍ ＫＣｌ，０．００７２Ｍ Ｎａ２ＨＰＯ４，０．００１５Ｍ ＫＨ２ＰＯ４，０．０５％（ｖ／ｖ）ポリソルベート２０（ｐＨ７．２）と定義されるＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ）でプレートを２回洗浄した。２００μＬ／ウェルのブロッキングバッファー（ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ＋１％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ））でウェルを１時間ブロックし、その後、洗浄バッファーでプレートを２回洗浄した。最初の１：５００希釈から開始し、１：５００，０００に及ぶ血清の連続１０倍希釈液（ブロッキングバッファー中）を調製した。次に、２００ｎｇ／ｍＬの濃度にてビオチン化ＩＬ−１７Ｆ（ビオチン：蛋白質のモル比６：１）またはビオチン化ＩＬ−１７Ａ（ビオチン：蛋白質のモル比１０：１）を希釈プレート（別個のプレート）のウェル（１００μＬ／ウェル）に加え、上下に数回ピペッティングすることによって十分に混合し、室温で１時間インキュベートした。注意：血清希釈液とビオチン化リガンドとの等容積での混合は、一連の希釈が１：１０００から１：１，０００，０００になり、リガンド濃度は１００ｎｇ／ｍｌになる。次に、各血清希釈／ビオチン化リガンド溶液の複製試料をアッセイプレート（１００μＬ／ウェル）に移した。正常マウス血清は陰性対照として機能し、ヒトＩＬ−１７ＲＣ−Ｆｃ蛋白質を陽性アッセイ対照として加えた。室温で１時間のインキュベーション後、ウェルを吸引し、上述のようにプレートを２回洗浄した。次に、５００ｎｇ／ｍＬの濃度にて西洋わさびペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジン（Ｐｉｅｒｃｅ社、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を各ウェル（１００μＬ／ウェル）に加え、プレートを室温で１時間インキュベートした。非結合ＨＲＰ−ＳＡの除去後、プレートを２回洗浄し、１００μＬ／ウェルのテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）（ＢｉｏＦＸ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社、Ｏｗｉｎｇｓ Ｍｉｌｌｓ，ＭＤ）を各ウェルに加え、プレートを室温で３分間インキュベートした。４５０ｎｍ ＴＭＢ反応停止剤（ＢｉｏＦＸ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社、Ｏｗｉｎｇｓ Ｍｉｌｌｓ，ＭＤ）の１００μＬ／ウェルの添加によって染色進行を停止し、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｓｐｅｃｔｒａ ＭＡＸ ３４０装置において４５０ｎｍにてウェルの吸光度値を読み取った。
（Ｄ）免疫化スキーム）
２週毎に６週間（３回接種）、腹腔内注射によってｂａｌｂ／Ｃマウス５匹をＩＬ−１７Ｆ−ＢＳＡ（各々５０μｇ）で免疫化した。２週間後、腹腔内注射によってこれらのマウスをＩＬ １７Ｆ−ＢＳＡ（各々５０μｇ）で追加免疫した。血清評価のため、最後の３つの追加免疫後、毎週血液を採取した。最後の追加免疫後約２カ月にて、皮下注射によってマウス５匹すべてをＩＬ−１７Ｆ−ＢＳＡ（各々５０μｇ）で追加免疫し、血清評価のため、最終的な血液を採取した。
（Ｅ）ＥＬＩＳＡによる血清評価の結論）
捕捉ＥＬＩＳＡアッセイも直接ＥＬＩＳＡアッセイも、マウス５匹すべてがＩＬ−１７Ｆに対する有意な抗体反応を発現したことを示す。直接アッセイは、５匹のマウス中４匹がＩＬ−１７Ａにも中程度に結合し、１匹のマウスがＩＬ−１７Ａに微弱に結合することを示す。中和アッセイは、５匹のマウス中２匹がＩＬ−１７Ｆの結合を中程度に阻害し、他の２匹がＩＬ−１７Ｆの結合を微弱に阻害することを示す。１匹のマウスはＩＬ−１７Ｆの結合を全く阻害しない。このアッセイによって更に示されることは、５匹のマウス中２匹がＩＬ−１７Ａの結合を微弱に阻害し、一方、他の３匹が結合を阻害しないことである。１匹のマウスは異なる程度にて両リガンドの結合を阻害する。
（Ｆ）融合手順）
最終免疫後の最低４週間後、最も有意なＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７Ａ中和力価を有するマウスを、皮下注射によってＰＢＳ中約５０μｇのＩＬ−１７Ａ−ＢＳＡで最終的に免疫化した。通常の条件下であれば、５日後にこのマウスの脾臓およびリンパ節が採取され、単一細胞懸濁液中に調製され、標準的社内プロトコルを用いてＰＥＧ １５００によりリンパ系細胞：骨髄腫細胞比２：１にてＡｇ８マウス骨髄腫細胞系に融合されていたであろう。この場合、マウスは注射後に死亡し、脾臓を採取し、単一細胞懸濁液中に調製し、−８０℃で５日間凍結した。脾細胞懸濁液を迅速に解凍した後、上述のように融合を完了した。融合混合物を一連の９６ウェル平底プレートに分配した。第四〜七日目に融合プレートのウェルに栄養を与えた（最低２回、最大３回）。融合物のプレーティングの８日後にウェルをアッセイした。
（Ｇ）融合物のスクリーニング）
ハイブリドーマの上清を培養プレートから希釈せずに試験したことを除き、上述のＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７Ａに対する捕捉ＥＬＩＳＡおよび中和ＥＬＩＳＡをスクリーニングに用いた。すべての「陽性」クローン（実施例１９において詳述）を、複製した試料を用いた両アッセイを繰り返すことによって確認した。すべての「陽性」クローンを２４ウェルプレートにおける培養に拡張した。２４ウェル培養物の密度が約４〜６×１０５細胞／ｍＬである場合、上清（約１．８ｍＬ）を個々に採取して各クローン用に保存し、各ウェル由来の細胞を凍結保存した。いずれのクローンが要求される試薬ニーズを満たすかを更に評価するために採取した上清を用いた。適切なクローンを１回および２回目のクローニングに付し、その後、精製のためにスケールアップした。
ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに対するモノクローナル抗体を発現するハイブリドーマを、Ｂｕｄａｐｅｓｔ条約の下で原寄託としてＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ；Ｍａｎａｓｓａｓ ＶＡ）特許寄託機関に寄託し、次のＡＴＣＣアクセッション番号を付与された：クローン３３９．１５．５．３（ＡＴＣＣ特許寄託物名称ＰＴＡ−７９８７，２００６年１１月７日に寄託）；クローン３３９．１５．３．６（ＡＴＣＣ特許寄託物名称ＰＴＡ−７９８８，２００６年１１月７日に寄託）；およびクローン３３９．１５．６．１６（ＡＴＣＣ特許寄託物名称ＰＴＡ−７９８９，２００６年１１月７日に寄託。
（実施例１９）
（ＩＬ−１７Ａ／Ｆ ｍＡｂ競合結合アッセイプロトコル）
（実施例１８において開示されているように）本発明のＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体の、リガンドＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに結合する能力を評価するため、フローサイトメトリーベースの競合結合アッセイを用いた。リガンドＩＬ−１７ＡもしくはＩＬ−１７Ｆおよびリガンドに結合するように標的化された本発明のＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体の存在下、完全長ＩＬ−１７ＲＣを安定にトランスフェクションされたＢＨＫ細胞系のインキュベーションは、細胞表面に結合した（したがって、抗体に結合していない）リガンドの検出および相対的定量化を可能にする。リガンドのビオチン化は、二次性のストレプトアビジン結合フルオロフォアを用いてＦＡＣＳ検出を可能にする。抗体の滴定を超える細胞結合リガンドの減少は細胞の平均蛍光の低下として記録される。
１００ｕｌ容積にて染色媒質（ＨＢＳＳ＋１％ＢＳＡ＋０．１％ＮａＡｚｉｄｅ＋１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ）中にてビオチン化リガンドを個々に１ｕｇ／ｍｌにて滴定量の抗体と予め混合し、室温で１５分間インキュベートする。完全長ＩＬ １７ＲＣを安定にトランスフェクションされたＢＨＫ細胞系を、Ｖｅｒｓｅｎｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社 カタログ番号１５０４０−０６６）での再懸濁、２×１０ｅ５細胞／１００ｕｌへの平衡化、ペレット化およびリガンド／抗体事前混合液中の再懸濁によってリガンド染色のために調製する。染色細胞を４℃で３０分間インキュベートし、染色媒質中にて１回洗浄し、１：１００の比率でストレプトアビジン−ＰＥ（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ社 カタログ番号５５４０６１）で染色する。細胞を４℃で３０分間、暗室でインキュベートし、染色媒質中にて２回洗浄し、染色媒質とＣｙｔｏｆｉｘ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社 ５５４６５５）との比率１：１で再懸濁させる。データ収集および解析のためにＢＤ ＬＳＲＩＩフローサイトメーターまたは類似の器具を用いる。図に示すグラフは進行プロトコルを用いた典型的な分析結果を表す。Ｐｒｉｚｍソフトウェアプログラムを用いてグラフを作成した。Ｙ値は、リガンドのみおよびリガンドなし／抗体なし対照ウェルに基づく最大および最小（１００％および０％）に正規化されたＭＦＩ、したがって、リガンドの細胞への結合パーセントを表す。ソフトウェアが各曲線のＩＣ５０を計算する。
表１は、各ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体に関して得られるＩＣ５０値を含む。
Figure 2010530357
 例示を目的として本発明の具体的な実施形態について本明細書で述べたが、前述から、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、様々な改変が可能であることが理解されよう。

Claims (34)

  1. 配列番号２のアミノ酸配列もしくはその断片または配列番号４のアミノ酸配列もしくはその断片を含み、かつ
    ａ）クローン指定番号３３９．１５．５．３（ＡＴＣＣ特許寄託物名称ＰＴＡ−７９８７）のハイブリドーマと、
    ｂ）クローン指定番号３３９．１５．３．６（ＡＴＣＣ特許寄託物名称ＰＴＡ−７９８８）のハイブリドーマと、
    ｃ）クローン指定番号３３９．１５．６．１６（ＡＴＣＣ特許寄託物名称ＰＴＡ−７９８９）のハイブリドーマと
    から選択されるハイブリドーマによって産生される抗体に結合することができるポリペプチドに結合する単離抗体。
  2. 前記抗体が、配列番号４のアミノ酸残基２３，２５，２７，２９および３４を含むエピトープあるいは配列番号２のアミノ酸残基２０，２２，２４，２６および３１を含むエピトープに結合する、請求項１に記載の単離抗体。
  3. 前記抗体が、配列番号４のアミノ酸残基２３〜３４を含むエピトープ；配列番号２のアミノ酸残基２０〜３１を含むエピトープ；配列番号４のアミノ酸残基６７〜７３を含むエピトープ；または配列番号２のアミノ酸残基６９〜７５を含むエピトープに結合する、請求項１に記載の単離抗体。
  4. 前記抗体が、配列番号４のアミノ酸残基８７〜９３または配列番号２のアミノ酸残基６９〜７５を含むエピトープに結合する、請求項１に記載の単離抗体。
  5. 前記抗体が、配列番号４のアミノ酸残基７９〜８５を含むエピトープまたは配列番号２のアミノ酸残基８１〜８７を含むエピトープに結合する、請求項１に記載の単離抗体。
  6. 前記抗体が、配列番号４のアミノ酸残基１４７〜１５２を含むエピトープまたは配列番号２のアミノ酸残基１４９〜１５４を含むエピトープに結合する、請求項１に記載の単離抗体。
  7. 前記抗体が、配列番号４のアミノ酸残基１０５〜１０９および１４７〜１５２を含む不連続エピトープあるいは配列番号２のアミノ酸残基１０７〜１１１および１４８〜１５４を含む不連続エピトープに結合する、請求項１に記載の単離抗体。
  8. 前記抗体が、配列番号４のアミノ酸残基７９〜８５，１１９〜１２２および１３０〜１３４を含む不連続エピトープあるいは配列番号２のアミノ酸残基８１〜８７，１２１〜１２４および１３２〜１３６を含む不連続エピトープに結合する、請求項１に記載の単離抗体。
  9. 前記抗体が、モノクローナル抗体、ｓｃＦｖまたは二重特異性もしくは二価抗体である、請求項１に記載の単離抗体。
  10. 前記モノクローナル抗体が、マウスモノクローナル抗体、キメラモノクローナル抗体、ヒト化モノクローナル抗体およびヒトモノクローナル抗体からなる群より選択される、請求項９に記載の単離抗体。
  11. 前記抗体が、配列番号２のアミノ酸配列もしくはその断片を含むポリペプチドに結合するか、または配列番号４のアミノ酸配列もしくはその断片を含むポリペプチドに結合する交差反応性モノクローナル抗体である、請求項１に記載の単離抗体。
  12. 請求項１に記載の抗体を含む単離抗血清。
  13. 請求項１に記載の単離抗体と、該抗体による結合を検出する手段とを含む診断キット。
  14. 有効量の請求項１に記載の抗体と、医薬的に許容可能なビヒクル、担体または賦形剤とを含む、炎症を処置または予防するための医薬組成物。
  15. 処置または予防する感染が、喘息、慢性炎症性疾患および急性炎症性疾患からなる群より選択される、請求項１７に記載の医薬組成物。
  16. 疾患が、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、関節炎、アトピー性皮膚炎または乾癬を含む慢性炎症性疾患である、請求項１５に記載の医薬組成物。
  17. 前記疾患が、内毒素血症、敗血症、トキシックショック症候群または感染症を含む急性炎症性疾患である、請求項１６に記載の医薬組成物。
  18. ヒトまたは動物患者に有効量の請求項１に記載の抗体を投与するステップを含む、炎症を処置または予防する方法。
  19. 請求項１に記載の抗体を投与するステップを含む、請求項１８に記載の炎症を処置する方法であって、該抗体がポリペプチドのその受容体への結合を低減し、該ポリペプチドが配列番号２のアミノ酸配列もしくはその断片または配列番号４のアミノ酸配列もしくはその断片を含む、方法。
  20. 前記疾患が、喘息、炎症性腸疾患、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、関節炎、アトピー性皮膚炎または乾癬である、請求項１９に記載の方法。
  21. 前記疾患が、内毒素血症、敗血症、トキシックショック症候群または感染症を含む急性炎症性疾患である、請求項２０に記載の方法。
  22. 前記抗体が、配列番号２のアミノ酸配列もしくはその断片を含むポリペプチドまたは配列番号４のアミノ酸配列もしくはその断片を含むポリペプチドの炎症促進活性を低下させる、請求項１に記載の単離抗体。
  23. 前記抗体が、配列番号２のアミノ酸配列もしくはその断片を含むポリペプチドまたは配列番号４のアミノ酸配列もしくはその断片を含むポリペプチドの炎症促進活性を低下させる、請求項２２に記載の単離抗体。
  24. 前記ポリペプチドが、ＡＴＣＣ特許寄託物名称ＰＴＡ−７９８７のハイブリドーマによって産生される抗体に結合することができる、請求項１に記載の単離抗体。
  25. 前記ポリペプチドが、ＡＴＣＣ特許寄託物名称ＰＴＡ−７９８８のハイブリドーマによって産生される抗体に結合することができる、請求項１に記載の単離抗体。
  26. 前記ポリペプチドが、ＡＴＣＣ特許寄託物名称ＰＴＡ−７９８９のハイブリドーマによって産生される抗体に結合することができる、請求項１に記載の単離抗体。
  27. ａ）ＡＴＣＣ特許寄託物名称ＰＴＡ−７９８７のハイブリドーマと、
    ｂ）ＡＴＣＣ特許寄託物名称ＰＴＡ−７９８８のハイブリドーマと、
    ｃ）ＡＴＣＣ特許寄託物名称ＰＴＡ−７９８９のハイブリドーマと
    から選択されるハイブリドーマを含む単離抗体産生細胞。
  28. 請求項２７に記載の抗体産生細胞によって産生される抗体。
  29. ＡＴＣＣ特許寄託物名称ＰＴＡ−７９８７のハイブリドーマ。
  30. 請求項２９に記載のハイブリドーマによって産生される抗体。
  31. ＡＴＣＣ特許寄託物名称ＰＴＡ−７９８８のハイブリドーマ。
  32. 請求項３１に記載のハイブリドーマによって産生される抗体。
  33. ＡＴＣＣ特許寄託物名称ＰＴＡ−７９８９のハイブリドーマ。
  34. 請求項３３に記載のハイブリドーマによって産生される抗体。
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