JP2010506956A

JP2010506956A - メタボリックシンドロームを予防または処置する方法

Info

Publication number: JP2010506956A
Application number: JP2009533523A
Authority: JP
Inventors: ケー．リンチ，ステファニー; トゥロウスキー，マチェイ; エイチ．ヨコヤマ，ウォレス; アール．コンクリン，ジェリー
Original assignee: ダウグローバルテクノロジーズインコーポレイティド; ユナイテッドステイツデパートメントオブアグリカルチャー
Priority date: 2006-10-20
Filing date: 2007-10-18
Publication date: 2010-03-04
Also published as: EP2081647A2; CN101622032A; AU2007309225A1; CA2666936A1; WO2008051793A3; US20080176819A1; MX2009004142A; US20100247664A1; WO2008051793A2

Abstract

エチルセルロース等の水不溶性セルロース誘導体は、メタボリックシンドロームおよび／またはメタボリックシンドロームの異常の１つを処置または予防するために使用できる。

Description

発明の分野
本発明は、米国農務省との共同研究開発契約（番号５８−３Ｋ９５−５−１０７２）のもとになされたものである。

本発明は、メタボリックシンドロームまたはメタボリックシンドロームに関連する症状もしくは健康状態を予防または処置する方法、およびこのような方法において有用な薬剤、医薬組成物、食品、食品含有成分もしくは食品サプリメント、または栄養含有成分もしくは栄養サプリメントに関する。

発明の背景
メタボリックシンドロームは複雑な疾患であり、米国心臓協会によって以下の異常：腹部肥満、アテローム生成性の高脂血症、高血圧、耐糖能異常を伴うかまたは伴わないインスリン抵抗性、炎症性状態および血栓準備状態（（Ｇｒｕｎｄｙら，”ＤＥＦＩＮＩＴＩＯＮＯＦＭＥＴＡＢＯＬＩＣＳＹＮＤＲＯＭＥ”Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００４，Ｖ１０９，第４３３−４３８ページ，ＤｏｃｕｍｅｎｔＮｕｍｂｅｒＤＯＩ：１０．１１６１／０１．ＣＩＲ．００００１１１２４５．７５７５２．Ｃ６，ｗｗｗ．ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎａｈａ．ｏｒｇで入手可能，参照により全部を本明細書に組み入れる）により特徴付けされている。一般的に当該分野では、上記の症状のうち３つ以上を有する人はメタボリックシンドロームを有すると考えることができると理解されている。米国心臓協会は、米国成人の約２０〜２５パーセントがメタボリックシンドロームを有すると見積もっている。メタボリックシンドロームを有する人では、循環器疾患、例えば冠状動脈性心疾患もしくは動脈壁におけるプラークの蓄積に関係する他の疾患（例えば、脳梗塞および末梢血管疾患）ならびに／またはＩＩ型糖尿病のリスクが増大する。循環器疾患およびＩＩ型糖尿病は、西洋人に最も蔓延する疾患に属する。糖尿病は米国において何百万人もの人々がかかる疾患であり、これは異種の疾患ではあるが一般的に２つの主要なカテゴリー、すなわちＩ型およびＩＩ型の糖尿病に分類されている。米国内の全糖尿病者のうち約８０％がＩＩ型のカテゴリーに入る。この型の糖尿病は、インスリン分泌障害およびインスリン抵抗性の両者によって特徴付けされる。患者の大多数は肥満成人であり、体重の減少によって正常血値を回復できる場合もある。しかしこの型の糖尿病は、非肥満成人および小児においても生じる可能性がある。疑いなく、メタボリックシンドロームまたはメタボリックシンドロームに関連する症状もしくは健康状態を予防または処置する方法を見出す緊急のニーズが存在する。

循環器疾患およびＩＩ型糖尿病は西洋人に最も蔓延する疾患に属するため、極めて多くの研究努力が、メタボリックシンドロームを予防または処置する方法を見出すだけでなく、メタボリックシンドロームの症状の診断、例えば生物マーカー、およびメタボリックシンドロームの種々の症状を支配する生物学的プロセスを理解する試みにも費やされている。

Ｇｒｕｎｄｙらによる上記の論文”ＤＥＦＩＮＩＴＩＯＮＯＦＭＥＴＡＢＯＬＩＣＳＹＮＤＲＯＭＥ”は、炎症性状態が、臨床的にはＣ−反応性タンパク（ＣＲＰ）の上昇によって理解されることを教示する。複数の機構がＣＲＰの上昇の根底にあると考えられる。ＯｎｌｉｎｅＤｉｃｔｉｏｎａｒｙＭｉｄｌｉｎｅＰｌｕｓＭｅｄｉｃａｌＥｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａによれば、ＣＲＰは、肝臓によって生成する特別な型のタンパクであり、急性炎症を発症している間のみ存在する。ＴｈｅＭｅｄｉｃａｌＥｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａは、ＣＲＰが単に疾患のマーカーであるのか、またはこれが実際にアテローム硬化性疾患の原因となる役割を持つのかは知られていないことを示す。しかし、ＣＲＰの上昇は冠動脈疾患の正のリスク因子となると多くの人が考えている。

Ｇｒｕｎｄｙらによる上記の論文”ＤＥＦＩＮＩＴＩＯＮＯＦＭＥＴＡＢＯＬＩＣＳＹＮＤＲＯＭＥ”は、血栓準備状態がプラスミノゲン活性化因子阻害剤−１（ＰＡＩ−１）およびフィブリノゲンの増大によって特徴付けされることを更に教示する。フィブリノゲンは、ＣＲＰのように急性期の反応物質であり、高サイトカイン状態に応答して上昇する。Ｇｒｕｎｄｙらは、血栓準備状態および炎症性状態が代謝的に相互に関連している可能性があることを示唆する。

Ａ．Ｚａｍｂｏｎらは、ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＳｏｃｉｅｔｙＴｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ（２００３）Ｖｏｌｕｍｅ３１，ｐａｒｔ５，第１０７０ページ、以下参照、において論文“Ｒｅｌｅｖａｎｃｅｏｆｈｅｐａｔｉｃｌｉｐａｓｅｔｏｔｈｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｏｆｔｒｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ−ｒｉｃｈｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｓ”を公開した。肝性リパーゼ（ＨＬ）は、肝臓によって合成および分泌される糖タンパクである。ＨＬは、種々のリポタンパク中のトリアシルグリセロールおよびリン脂質の加水分解を触媒する。ＨＬは、アテローム生成促進作用、更に抗アテローム生成作用を有する場合がある。高トリグリセリド血症または増大したＬＤＬ（低比重リポタンパク）濃度の存在下で、高ＨＬのアテローム生成促進作用が優勢になる。しかし、ＬＤＬが低レベルである個体間では、高レベルのＨＬを有することはアテローム生成性にならず、むしろ抗アテローム生成性になる。

上記で議論したＣ−反応性タンパク、プラスミノゲン活性化因子阻害剤−１、および個体に応じて肝性リパーゼもがメタボリックシンドロームの１つ以上の症状に与える影響に鑑み、Ｃ−反応性タンパク、プラスミノゲン活性化因子阻害剤−１、肝性リパーゼもしくはこれらの２つまたは３つの発現レベルまたは濃度を支配する方法を見出すことが望ましい。

Ｃ−反応性タンパク、プラスミノゲン活性化因子阻害剤−１および肝性リパーゼがメタボリックシンドロームに与える影響に加えて、当業者は、アディポネクチンを、メタボリックシンドロームにおいて鍵となる潜在的な関与物質として示唆してきた。

ＴｏｈｒｕＦｕｎａｈａｓｈｉ，ＹｕｊｉＭａｔｓｕｚａｗａおよびＳｈｉｎｊｉＫｉｈａｒａ，“Ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎａｓａｋｅｙｐｏｔｅｎｔｉａｌｐｌａｙｅｒｉｎｍｅｔａｂｏｌｉｃｓｙｎｄｒｏｍｅ”，ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＣｏｎｇｒｅｓｓＳｅｒｉｅｓ１２６２（２００４），第３６８−３７１ページ、は、アディポネクチンの分泌不全が肥満関連障害、特にアテローム性動脈硬化、糖尿病、炎症および悪性腫瘍の進行において重要な役割を果たす場合があることを示唆する。

ＭｏｒｉＹ，ＨｏｓｈｉｎｏＫ，ＹｏｋｏｔａＫ，ＩｔｏｈＹ，ＴａｊｉｍａＮ．，”Ｒｏｌｅｏｆｈｙｐｏａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎｅｍｉａｉｎｔｈｅｍｅｔａｂｏｌｉｃｓｙｎｄｒｏｍｅａｎｄｉｔｓａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｗｉｔｈｐｏｓｔ−ｇｌｕｃｏｓｅｃｈａｌｌｅｎｇｅｈｙｐｅｒ−ｆｒｅｅｆａｔｔｙａｃｉｄｅｍｉａ：ａｓｔｕｄｙｉｎｐｒｅｄｉａｂｅｔｉｃＪａｐａｎｅｓｅｍａｌｅｓ”，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ，２００６Ａｐｒ；２９（２）：３５７−６１は、アディポネクチンが、メタボリックシンドロームを作り上げるに至る複数のリスク因子と密接に関連することを示唆し、低アディポネクチン血症に対しての、メタボリックシンドロームの代理マーカーとしての役割を示唆する。

含脂肪細胞は、グルコースおよび脂質代謝のホメオスタシスのコントロールにおいて働く種々のタンパクを発現する。インスリンは、エネルギーバランスの変化に応答してのこれらのタンパクの多くの転座および分泌を制御する。３０ｋＤａの含脂肪細胞相補体関連タンパク（Ａｃｒｐ３０）（ここでアディポネクチンとしても公知である）は、含脂肪細胞からの分泌がインスリン刺激によって促進されるタンパクである。アディポネクチンは、含脂肪細胞中で極めて多量に生成され、極めて高濃度で血漿中に安定に存在する特異で必須のアディポサイトカインである（Ｍａｔｓｕｚａｗａら，“ＡｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎａｎｄＭｅｔａｂｏｌｉｃＳｙｎｄｒｏｍｅ”，ＡｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒＴｈｒｏｍｂＶａｓｅＢｉｏｌ．２００４；２４：２９−３３）。健常者では、アディポネクチンは、血管変化の進行ならびにグルコースおよび脂質代謝の機能障害を予防するためにその役割を行ない、これは種々の攻撃因子、例えば化学物質、機械応力、または栄養負荷によって誘導される。Ｍａｔｓｕｚａｗａらによる上記の論文，“ＡｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎａｎｄＭｅｔａｂｏｌｉｃＳｙｎｄｒｏｍｅ”は、アディポネクチンが、メタボリックシンドロームの予防において鍵となる役割を果たす場合があることを示唆する。肥満者（特に内臓脂肪蓄積者）で観察される低アディポネクチン血症は、遺伝性の低アディポネクチン血症よりも大幅により高頻度である。内臓肥満の蓄積によって誘導されるＰＡＩ−１の増大とともに、低アディポネクチン血症は血管変化、更には代謝障害の主要な背景となる場合がある。

上記で議論したアディポネクチン、具体的には低アディポネクチン血症がメタボリックシンドロームの１つ以上の症状に与える影響に鑑み、アディポネクチンの発現レベルまたは濃度を支配する方法を見出すことも望ましい。

メタボリックシンドロームは、健康食品（たとえば適正量の食物繊維）からなる適切な低減されたカロリーの食事によって、および十分な運動によって予防または処置できる（Ｄｅｅｎら，２００４，ＡｍｅｒｉｃａｎＦａｍｉｌｙＰｈｙｓｉｃｉａｎ，Ｖ６９／１２，ｐｐ２８７５−２８８２）。しかし、メタボリックシンドロームに罹患している多くの人は、症候群の予防または症候群からの回復のために自身の食事および運動の習慣を十分に変えることができない。よって、人々がメタボリックシンドロームを予防するのを援助し、そしてメタボリックシンドロームに悩む人々がこの疾患から回復するのを援助する薬剤、医薬組成物、食品、食品含有成分もしくは食品サプリメント、または栄養含有成分もしくは栄養サプリメントに対するニーズが依然として存在する。

メタボリックシンドロームの個々の局面を処置または予防するために幾つかの医薬組成物、栄養含有成分および食物サプリメントが提案されている。

国際公開第２００４／０２２０７４号パンフレットは、グルカゴン様ペプチド１の分泌を誘発させるための、非グルコース炭水化物および可溶性繊維またはペクチンと可溶性繊維との混合物を含む組成物の使用を開示する。該公報は、メタボリックシンドローム、糖尿病もしくは肥満をコントロールするような、または満腹、体重減少もしくは望ましい体重の維持を促進するための、広範な生物学的および医学的な適応を列挙している。開示される非グルコース炭水化物は、ガラクトース、キシロース、フルクトースまたはマンノースである。広範な可溶性繊維が開示される。

米国特許第５，５７６，３０６号明細書は、血清脂質レベル、特に総血清コレステロール、血清トリグリセリド、および低比重リポタンパク（ＬＤＬ）レベルを低減するための、および／または食後の動物における血中グルコースレベルの上昇を弱化させるための、水溶性高粘度グレードセルロースエーテル組成物の使用を開示する。

米国特許第５，５８５，３６６号明細書は、哺乳動物の血中コレステロールレベルを低減するための、水溶性セルロースエーテル、例えばヒドロキシプロピルメチルセルロースの使用を開示する。

米国特許第６，８９９，８９２号明細書は、哺乳動物の体脂肪パーセントおよび／または血流中のレプチンを低減するための、水溶性で栄養価がなく不消化性の非スターチ粘稠ポリサッカライド、例えば水溶性セルロースエーテルの使用を開示する。

米国特許第５，７２１，２２１号明細書は、人体における総血漿コレステロールレベルを低減するための、２質量パーセント水溶液として測定した場合に粘度５０〜４，０００ｃｐｓであるヒドロキシプロピルメチルセルロースの使用を開示する。

本発明の共発明者は、ＡＣＳ（ＡｍｅｒｉｃａｎＣｈｅｍｉｃａｌＳｏｃｉｅｔｙ）会合，ＳａｎＤｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，Ｍａｒｃｈ１５，２００５で、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）は、代謝系遺伝子を制御することにより、高飽和脂肪餌を給餌されたハムスターにおけるインスリン抵抗性を防止できるとの公開をしている。アメリカの食事と脂肪量が類似する高脂肪飼料を与えられたＳｙｒｉａｎハムスターはインスリン抵抗性（ＩＲ）になる。この高脂肪飼料中のセルロースをヒドロキシプロピルメチルセルロースで置き換えると、インスリン抵抗性の罹患が顕著に低減される。ＨＰＭＣは顕著にグルコース投入率を低減し、血漿インスリン、血漿脂質、非脂肪組織中の総脂肪分布、および脂肪組織の細胞サイズを加速する。

高脂肪食物中の脂肪吸収を遅くするために水溶性ＭＥＴＨＯＣＥＬ食物繊維を使用すること、およびインスリン抵抗性、ＩＩ型糖尿病の前兆の進行におけるその潜在的な低減は、ＴｈｅＤｏｗＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｍｐａｎｙによって、本発明の共発明者の上記の発見に基づき続いて公表されている。

水溶性セルロースエーテルは上記開示の処置のために極めて有用であるが、これらは「口の感触」が悪いという問題を有する。このような水溶性セルロースエーテルは、水とともにスライム状の粘稠溶液を形成する傾向があるからである。さらに、水溶性セルロースエーテルを食品中に配合および加工することは、これらの粘度（極めて高い場合がある）（特に水の存在下）に起因してあまり容易でない場合もある。

従って、個体における以下の異常：腹部肥満、アテローム生成性の脂質異常症、高血圧、耐糖能異常を伴うかまたは伴わないインスリン抵抗性、炎症性状態および血栓準備状態のうち少なくとも１つを予防または処置するために有用な化合物または組成物を見出すことが本発明の１つの目的である。

本発明の好ましい目的は、個体における上記の異常のうち少なくとも３つを予防または処置するために有用な化合物または組成物を見出すこと、特に、個体におけるメタボリックシンドロームまたはメタボリックシンドロームに関連する症状もしくは健康状態を予防または処置するために有用な化合物または組成物を見出すことである。

本発明の別の好ましい目的は、個体の体内組織におけるＣ−反応性タンパクもしくはプラスミノゲン活性化因子阻害剤−１（ＰＡＩ−Ｉ）または両者の発現レベルまたは濃度を支配するのに有用な化合物または組成物を見出すことである。

本発明の更に別の好ましい目的は、上記の使用の１つ以上のための化合物または組成物であって化合物または組成物が水とともにスライム状の粘稠溶液を形成する傾向を有さないものを見出すことである。

発明の要約

驚くべきことに、水不溶性セルロース誘導体、特にエチルセルロースが、ａ）アテローム生成性の脂質異常症、ｂ）インスリン抵抗性、ｃ）炎症性状態（proinflammatory state）または炎症状態（inflammation state）およびｄ）血栓準備状態（prothrombotic state）の症状のうち１つ以上の予防または処置のために有用であることを見出した。

驚くべきことに、水不溶性セルロース誘導体が、個体におけるメタボリックシンドロームまたはメタボリックシンドロームに関連する症状もしくは健康状態、特に循環器疾患またはＩＩ型糖尿病を予防または処置するために有用であることも見出した。

更に具体的には、驚くべきことに、水不溶性セルロース誘導体、特にエチルセルロースが、Ｃ−反応性タンパク（ＣＲＰ）、プラスミノゲン活性化因子阻害剤−１（ＰＡＩ−１）、肝性リパーゼ（ＨＬ）またはこれらの２つまたは３つの発現レベルまたは濃度を体内組織中で支配するために有用であることも見出した。メタボリックシンドロームの症状の１つである炎症性状態は、Ｃ−反応性タンパク（ＣＲＰ）の濃度または発現レベルの上昇によって臨床的に理解されている。

ＣＲＰ、ＰＡＩ−１およびＨＬがメタボリックシンドロームの１つ以上の症状の単なるマーカーであるのか、または実際にこれらの症状の１つ以上の原因となるのかは未だ完全には明らかでないが、体内組織中のこれらのレベルを支配すること、具体的にはこれらのレベルを低減させることは、メタボリックシンドロームの予防または処置において重要な因子である。

驚くべきことに、水不溶性セルロース誘導体、特にエチルセルロースが、アディポネクチンの体内組織中での発現レベルまたは濃度を支配するために有用であることも見出した。

個体の血中のＬＤＬコレステロール、ＶＬＤＬコレステロール、総コレステロールおよびトリグリセリドの測定に基づき、驚くべきことに、水不溶性セルロース誘導体、特にエチルセルロースが、アテローム生成性の脂質異常症を予防または処置するために有用であることも見出した。

脂肪肝は、インスリン抵抗性と密接に関連することが公知である。個体の肝臓の調査に基づき、驚くべきことに、水不溶性セルロース誘導体、特にエチルセルロースが、インスリン抵抗性の予防または処置のために有用であることも見出した。

従って、本発明の一側面は、個体におけるメタボリックシンドロームまたはメタボリックシンドロームに関連する症状もしくは健康状態を予防または処置する方法であり、これは個体に有効量の水不溶性セルロース誘導体を投与するステップを含む。

本発明の別の側面は、個体における、ａ）アテローム生成性の脂質異常症、ｂ）インスリン抵抗性、ｃ）炎症性状態または炎症状態およびｄ）血栓準備状態の症状のうち１つ以上を予防または処置する方法であって、これは個体に有効量の水不溶性セルロース誘導体を投与するステップを含む。

本発明の更に別の側面は、Ｃ−反応性タンパク、プラスミノゲン活性化因子阻害剤−１、肝性リパーゼもしくはアディポネクチンまたはこれらの２つもしくは３つの、個体の体内組織中での発現レベルまたは濃度を支配する方法であって、これは個体に有効量の水不溶性セルロース誘導体を投与するステップを含む。

本発明の更に別の側面は、個体における循環器疾患またはＩＩ型糖尿病を予防または処置する方法であって、これは個体に有効量の水不溶性セルロース誘導体を投与するステップを含む。

本発明の更に別の側面は、個体におけるメタボリックシンドロームまたはメタボリックシンドロームに関連する症状もしくは健康状態を予防または処置するための薬剤、医薬組成物、食品、食品含有成分もしくは食品サプリメント、または栄養含有成分もしくは栄養サプリメントを製造するための水不溶性セルロース誘導体の使用である。

本発明の更に別の側面は、個体におけるａ）アテローム生成性の脂質異常症、ｂ）インスリン抵抗性、ｃ）炎症性状態または炎症状態およびｄ）血栓準備状態の症状のうちの１つ以上を予防または処置するための薬剤、医薬組成物、食品、食品含有成分もしくは食品サプリメント、または栄養含有成分もしくは栄養サプリメントを製造するための水不溶性セルロース誘導体の使用である。

本発明の更に別の側面は、Ｃ−反応性タンパク、プラスミノゲン活性化因子阻害剤−１、肝性リパーゼもしくはアディポネクチンまたはこれらの２つもしくは３つの、個体の体内組織中での発現レベルまたは濃度を支配するための薬剤、医薬組成物、食品、食品含有成分もしくは食品サプリメント、または栄養含有成分もしくは栄養サプリメントを製造するための水不溶性セルロース誘導体の使用である。

本発明の更に別の側面は、個体における循環器疾患またはＩＩ型糖尿病を予防または処置するための有効量の水不溶性セルロース誘導体を含む、薬剤、医薬組成物、食品、食品含有成分もしくは食品サプリメント、または栄養含有成分もしくは栄養サプリメントを製造するための水不溶性セルロース誘導体の使用である。

本発明の更に別の側面は、メタボリックシンドロームまたはメタボリックシンドロームに関連する症状もしくは健康状態を予防または処置するための有効量の水不溶性セルロース誘導体を含む、薬剤、医薬組成物、食品、食品含有成分もしくは食品サプリメント、または栄養含有成分もしくは栄養サプリメントである。

本発明の更に別の側面は、個体におけるａ）アテローム生成性の脂質異常症、ｂ）インスリン抵抗性、ｃ）炎症性状態または炎症状態およびｄ）血栓準備状態の症状のうちの１つ以上を予防または処置するための有効量の水不溶性セルロース誘導体を含む、薬剤、医薬組成物、食品、食品含有成分もしくは食品サプリメント、または栄養含有成分もしくは栄養サプリメントである。

本発明の更に別の側面は、Ｃ−反応性タンパク、プラスミノゲン活性化因子阻害剤−１、肝性リパーゼもしくはアディポネクチンまたはこれらの２つもしくは３つの、個体の体内組織中での発現レベルまたは濃度を支配するための有効量の水不溶性セルロース誘導体を含む、薬剤、医薬組成物、食品、食品含有成分もしくは食品サプリメント、または栄養含有成分もしくは栄養サプリメントである。

本発明の更に別の側面は、個体における循環器疾患またはＩＩ型糖尿病を予防または処置するための有効量の水不溶性セルロース誘導体を含む、薬剤、医薬組成物、食品、食品含有成分もしくは食品サプリメント、または栄養含有成分もしくは栄養サプリメントである。

本発明の更に別の側面は、エチルセルロースを有効成分として含む、薬剤、医薬組成物、食品、食品含有成分もしくは食品サプリメント、または栄養含有成分もしくは栄養サプリメントである。

本発明の更に別の側面は、メタボリックシンドロームまたはメタボリックシンドロームに関連する症状もしくは健康状態を予防または処置するための薬剤としての水不溶性セルロース誘導体である。

本発明の更に別の側面は、個体におけるａ）アテローム生成性の脂質異常症、ｂ）インスリン抵抗性、ｃ）炎症性状態または炎症状態およびｄ）血栓準備状態の症状のうちの１つ以上を予防または処置するための薬剤としての水不溶性セルロース誘導体である。

本発明の更に別の側面は、Ｃ−反応性タンパク、プラスミノゲン活性化因子阻害剤−１、肝性リパーゼもしくはアディポネクチンまたはこれらの２つもしくは３つの、体内組織中での発現レベルまたは濃度を支配するための薬剤としての水不溶性セルロース誘導体である。

本発明の更に別の側面は、個体における循環器疾患またはＩＩ型糖尿病を予防または処置するための薬剤としての水不溶性セルロース誘導体である。

図１は、微結晶セルロースを含む高脂肪餌をハムスターに給餌した後の、ハムスターの肝臓の倍率５０００倍での代表的な透過型電子顕微鏡画像の複写である。図２は、水不溶性セルロース誘導体を含む高脂肪餌をハムスターに給餌した後の、ハムスターの肝臓の倍率５０００倍での代表的な透過型電子顕微鏡画像の複写である。

発明の詳細な説明
本明細書で用いる用語「メタボリックシンドローム」は、以下の異常：腹部肥満、アテローム生成性の脂質異常症、高血圧、耐糖能異常を伴うかまたは伴わないインスリン抵抗性、炎症性状態および血栓準備状態、のうち少なくとも３つによって特徴付けされる。

用語「メタボリックシンドロームに関連する症状もしくは健康状態」は、本明細書において、国際公開第２００４／０２２０７４号パンフレットに開示されるように定義し、これに限定するものではないが、高血糖、高インスリン血症、高脂血症、グルコース代謝障害、糖尿病性網膜症、黄斑変性、白内障、糖尿病性腎症、糸球体硬化症、糖尿病性神経障害、勃起不全、月経前症候群、血管再狭窄、および／または潰瘍性大腸炎、狭心症、心筋梗塞、脳梗塞、皮膚および／または結合組織の障害、足潰瘍、代謝アシドーシス、関節炎、骨粗しょう症ならびに耐糖能異常の状態から選択される１つ以上の症状または健康状態を含む。

「循環器疾患またはＩＩ型糖尿病」は、循環器疾患またはＩＩ型糖尿病をそれぞれ包含するが、組合せでの循環器疾患およびＩＩ型糖尿病も包含する。

腹部肥満は、腹部の領域における過剰な体脂肪によって一般的に特徴付けされる。

用語「高血圧」は、高い血液圧力として一般的に公知である。

インスリン抵抗性は、一般的には、体のインスリンが血中グルコース代謝を制御する能力の障害によって特徴付けされる。

アテローム生成性の脂質異常症は、一般的に、血中の、低比重リポタンパク［ＬＤＬ］コレステロールおよびトリグリセリドのレベルの増大および高比重リポタンパク［ＨＤＬ］コレステロールレベルの低下によって特徴付けされる。

米国特許第５，５７６，３０６号明細書に開示されるように、脂質は血中で血漿リポタンパクによって輸送される。リポタンパク（これは総血清タンパクの８％〜１０％を構成する）は特定のタンパク（アポリポタンパクとして公知）を含み、そしてコレステロール、トリグリセリドおよびリン脂質の量を変動させる。空腹時の血漿中に見出されるリポタンパクの３つの主要な分類は極低比重リポタンパク（ＶＬＤＬ）、低比重リポタンパク（ＬＤＬ）および高比重リポタンパク（ＨＤＬ）である。ＶＬＤＬは、５０％超のトリグリセリド、約２０％のコレステロールおよび約１０％のタンパクを含む。ＬＤＬは大幅により小さい粒子であり、そして約５０％のコレステロール、２０％のタンパクおよび約５％のトリグリセリドを含む。ＨＤＬはリポタンパクのうち最も小さく、そして約５０％のタンパク、１０％のトリグリセリドおよび２０％のコレステロールを含む。加えて、カイロミクロン（脂肪を含有する食事に応答して腸において合成される）が血漿中に一時的に現れ、そして数時間以内に循環からなくなる。これらは通常空腹時には存在せず、そして約９０質量％のトリグリセリド、および５％のコレステロールを含む。通常の成人において、ＬＤＬは循環しているコレステロールの約６５％を運び、ＨＤＬは約２５％を運び、そしてＶＬＤＬは約１０％を運ぶ。

本明細書で用いる用語「メタボリックシンドロームまたはメタボリックシンドロームに関連する症状もしくは健康状態を予防または処置する方法」および「ａ）アテローム生成性の脂質異常症、ｂ）インスリン抵抗性、ｃ）炎症性状態または炎症状態、およびｄ）血栓準備状態の症状のうち１つ以上を予防または処置する方法」は、上記の症候群または症状の進行を、時間もしくは重症性において遅らせるか、または進行しているかもしくは進行した症候群もしくは症状の重症性を低減する、任意の処置を包含する。

用語「Ｃ−反応性タンパク、プラスミノゲン活性化因子阻害剤−１もしくは肝性リパーゼ（ＨＬ）またはこれらの２つもしくは３つの、個体の体内組織中での発現レベルまたは濃度を支配（influence）する」は、体内組織（例えば血液）において、個体による水不溶性セルロース誘導体の摂取後のＣＲＰおよび／もしくはＰＡＩ−１および／もしくはＨＬの発現レベルまたは濃度が、非有効物質（例えば非修飾セルロースそのもの）の摂取後のＣＲＰおよび／もしくはＰＡＩ−１および／もしくはＨＬの発現レベルまたは濃度と比べて異なる（好ましくはより低い）ことを意味する。

用語「ＣＲＰおよび／もしくはＰＡＩ−１および／もしくはＨＬの発現レベルを支配する」は、ＣＲＰおよび／もしくはＰＡＩ−１および／もしくはＨＬの発現の直接的な制御に限定するものではなく、ＣＲＰおよび／もしくはＰＡＩ−１および／もしくはＨＬの発現の間接的な支配（例えば、異なる（好ましくはより低い）遺伝子発現を招来する体内組織中の状態もしくは代謝産物の支配によるもの）も包含する。

用語「個体の体内組織中のアディポネクチンの発現レベルまたは濃度を支配する」は、体内組織（例えば血液）において、個体による水不溶性セルロース誘導体の摂取後のアディポネクチンの発現レベルまたは濃度が、非有効物質（例えば非修飾セルロースそのもの）の摂取後のアディポネクチンの発現レベルまたは濃度と比べて異なる（一般的にはより高い）ことを意味する。

用語「アディポネクチンの発現レベルを支配する」は、アディポネクチンの発現の直接的な制御に限定するものではなく、アディポネクチン発現の間接的な支配（例えば、異なる（好ましくはより高い）遺伝子発現を招来する体内組織中の状態または代謝産物の支配によるもの）も包含する。

本発明は、個体の処置に関し、これは人類を含む任意の動物を意味する。好ましい個体は哺乳動物である。用語「哺乳動物」は、哺乳動物に分類される任意の動物、例えば人類、家畜および農場動物（牛等）、人間以外の霊長類、動物園の動物、競技動物（馬等）、またはペット動物（犬および猫等）を意味する。

本発明において有用なセルロース誘導体は水不溶性である。用語「セルロース誘導体」は、非修飾セルロースそのもの（これも水不溶性の傾向がある）は包含しない。出願人が行なった実験は、水不溶性セルロース誘導体が、メタボリックシンドロームまたはメタボリックシンドロームに関連する症状もしくは健康状態の予防または処置において、非修飾セルロースと顕著に異なる効果を有することを示した。

本明細書で用いる用語「水不溶性」は、セルロース誘導体が水中で、１００グラムの蒸留水に２５℃１気圧で２グラム未満、好ましくは１グラム未満の溶解性を有することを意味する。

本発明において使用するために好ましいセルロース誘導体は、水不溶性のセルロースエーテル、特にエチルセルロース、プロピルセルロースまたはブチルセルロースである。他の有用な水不溶性セルロース誘導体は、化学的、好ましくは疎水的に修飾されて水不溶性が付与されたセルロース誘導体である。化学修飾は、疎水性、長鎖、分岐または非分岐のアルキル基、アリールアルキル基またはアルキルアリール基で実現できる。「長鎖」は、典型的には少なくとも５個の炭素原子、より典型的には少なくとも１０個の炭素原子、特に少なくとも１２個の炭素原子を意味する。他の種類の水不溶性セルロースは、種々の架橋剤を用いる場合の架橋セルロースである。化学修飾された、例えば疎水的に修飾された水不溶性セルロース誘導体は当該分野で公知である。これらは、これらの水中での溶解性が、１００グラムの蒸留水中、２５℃および１気圧で２グラム未満、好ましくは１グラム未満である限りにおいて有用である。最も好ましいセルロース誘導体はエチルセルロースである。エチルセルロースは、好ましくはエトキシル置換が４０〜５５パーセント、より好ましくは４３〜５３パーセント、最も好ましくは４４〜５１パーセントである。エトキシル置換パーセントは、置換生成物の質量基準であり、そしてＡＳＴＭＤ４７９４−９４（２００３）に記載されるようにＺｅｉｓｅｌガスクロマトグラフィ法に従って評価する。エチルセルロースの分子量は、２５℃にて８０体積パーセントのトルエンと２０体積パーセントのエタノールとの混合物中で測定される、エチルセルロースの５質量パーセント溶液の粘度で表される。エチルセルロース濃度は、トルエン、エタノールおよびエチルセルロースの総質量基準である。粘度は、ＡＳＴＭＤ９１４−００にて概説され、そしてＡＳＴＭＤ４４６−０４（これはＡＳＴＭＤ９１４−００において引用されている）にて更に詳述されるようにウベローデ管を用いて測定する。エチルセルロースは、一般的に、２５℃で８０体積パーセントのトルエンと２０体積パーセントのエタノールとの混合物中で５質量パーセント溶液として測定される粘度が４００ｍＰａ・ｓ以下、好ましくは３００ｍＰａ・ｓ以下、より好ましくは１００ｍＰａ・ｓ以下である。好ましいエチルセルロースは、プレミアムグレードＥＴＨＯＣＥＬエチルセルロース（ＴｈｅＤｏｗＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｍｐａｎｙ，Ｍｉｄｌａｎｄ，Ｍｉｃｈｉｇａｎから市販で入手可能）である。２種以上の水不溶性セルロース誘導体の組合せもまた有用である。

好ましくは、水不溶性セルロース誘導体の平均粒子サイズは０．１ミリメートル未満であり、より好ましくは０．０５ミリメートル未満、最も好ましくは０．０２ミリメートル未満である。好ましくは、水不溶性セルロース誘導体は、個体に投与する前に食用の脂肪または油に暴露し、セルロース誘導体が脂肪または油を吸収するようにする。有利には、水不溶性セルロース誘導体を約４０〜６０℃で過剰の脂肪または油に暴露する。

本発明の好ましい態様において、水不溶性セルロース誘導体、特にエチルセルロースは、ａ）アテローム生成性の脂質異常症、ｂ）インスリン抵抗性、ｃ）炎症性状態または炎症状態およびｄ）血栓準備状態の症状のうち少なくとも２つ、より好ましくは少なくとも３つを予防または処置するために有用である。

更に、本発明の好ましい態様において、水不溶性セルロース誘導体、特にエチルセルロースは、Ｃ−反応性タンパク（ＣＲＰ）および肝性リパーゼ（ＨＬ）の発現レベルまたは濃度を支配するために有用である。

水不溶性セルロース誘導体は、薬剤、医薬組成物、食品、食品含有成分もしくは食品サプリメント、または栄養含有成分もしくは栄養サプリメントにおいてまたはこれらとして投与または摂取できる。薬剤、医薬組成物、食品、食品含有成分もしくは食品サプリメント、または栄養含有成分もしくは栄養サプリメントは、固体または液体であることができる。水不溶性セルロース誘導体を投与する所望の期間は、摂取される水不溶性セルロース誘導体の量、個体の全体的な健康、個体の活性レベルおよび関係する因子に応じて変動させることができる。メタボリックシンドロームまたはメタボリックシンドロームに関連する症状もしくは健康状態は、典型的には高脂肪量のバランスを欠いた栄養によって誘導されるため、高脂肪量の栄養が摂取される限り水不溶性セルロース誘導体を投与または摂取することが賢明である。一般的に少なくとも１〜１２週間、好ましくは３〜８週間の投与が推奨される。

本明細書で開示する投与の継続期間および１日当たりの用量は、一般的な範囲であって、種々の要素（例えば具体的なセルロース誘導体、個体の体重、年齢および健康状態等）に応じて変動させてもよいことを理解すべきである。水不溶性セルロース誘導体を摂取する際には医師または栄養学の専門家の処方または助言に従うことが賢明である。

本発明に従い、水不溶性セルロース誘導体は、好ましくは食品、食品含有成分もしくは食品サプリメント、または栄養含有成分もしくは栄養サプリメントであって０．５〜２０質量パーセント、より好ましくは２〜１５質量パーセント、最も好ましくは４〜１２質量パーセントの１種以上の水不溶性セルロース誘導体を含むものを製造するために用いる。与えられる質量パーセントは水不溶性セルロース誘導体の総量に関する。投与量は、乾燥質量基準で、個体の１日当たりの食事の総質量の好ましくは１〜１０パーセントの範囲である。好ましくは、水不溶性セルロース誘導体は、単一の用量または量ではなく１日を通じて十分な量で投与または摂取される。水不溶性セルロース誘導体が水と組合されて投与または摂取される場合、水不溶性セルロース誘導体は一般的に「口の感触」を守るという問題（これは、水溶性セルロース誘導体では、これらが水とともにスライム状の粘稠溶液を形成するという傾向に起因して生じる場合がある）を被らない。水不溶性セルロース誘導体は、好ましくは食品と組合せ、または食材として投与されるが、これに代えて、これらを水性懸濁液として、または粉末形状で、または医薬組成物もしくは栄養組成物として投与できる。水不溶性セルロース誘導体を含む医薬組成物または栄養組成物は、許容可能な担体とともに医薬または栄養物の単位用量形状で投与できる。医薬上許容可能な担体としては、錠剤化賦形剤、ゼラチンカプセル、または担体，例えばポリエチレングリコールもしくは天然ゲルが挙げられる。医薬または栄養物の単位用量形状としては、錠剤、カプセル、ゼラチンカプセル、予計量粉末および予計量溶液が挙げられる。従って、水不溶性セルロース誘導体は、好ましくは錠剤、顆粒、カプセルおよび懸濁液として処方する。

水不溶性セルロース誘導体を水性懸濁液としてまたは粉末の形状で、医薬組成物もしくは栄養組成物として、または他の食品含有成分と組合せて投与するのかに関わらず、投与される水不溶性セルロース誘導体の量は、一般的に、哺乳動物の体重１ポンド当たり、１日当たり水不溶性セルロース誘導体１０〜３００ミリグラムの範囲である。約２ｇ〜約３０ｇ、好ましくは約３ｇ〜約１５ｇの水不溶性セルロース誘導体が毎日大型哺乳動物（人間等）によって摂取される。

投与または摂取の方法は変えることができるが、水不溶性セルロース誘導体は、好ましくは人間によって彼または彼女の毎日の食事の食品含有成分として摂取される。水不溶性セルロース誘導体は、液体ビヒクル，例えば水、ミルク、植物油、ジュース等、または摂取可能な固体もしくは半固体の食材，例えば「べジー」バーガー、スプレッドもしくはパン製品と組合せることができる。

多くの食材が一般的に水不溶性セルロース誘導体と親和性である。例えば、水不溶性セルロース誘導体を食品中（例えばミルクシェーク、ミルクシェークミックス、朝食ドリンク、ジュース、フレーバー飲料、フレーバー飲料ミックス、ヨーグルト、プリン、アイスクリーム、アイスミルク、フロスティング、フローズンヨーグルト、チーズケーキフィリング、キャンディーバー、例えば「ヘルスバー」，例えばグラノールバーおよびフルーツバー、ガム、ハードキャンディ、マヨネーズ、ペストリーフィリング，例えばフルーツフィリングもしくはクリームフィリング、シリアル、パン、詰め物、ドレッシングおよびインスタントポテトミックス）に混合できる。有効量の水不溶性セルロース誘導体は、サラダドレッシング、フロスティング、マーガリン、スープ、ソース、グレイビー、マヨネーズ、マスタードおよび他のスプレッドにおける人工脂肪または脂肪サプリメントとしても使用できる。従って、本明細書で用いる用語としての「食品含有成分」は、上記食材のためのレシピにおいて一般的に採用される含有成分を包含し、例えば、粉、オートミール、フルーツ、ミルク、卵、スターチ、大豆タンパク、シュガー、シュガーシロップ、植物油、バターまたは乳化剤，例えばレシチンが挙げられる。食材の魅力を付加するのに適切であるように着色およびフレーバー付けを加えることができる。

水不溶性セルロース誘導体は家畜および農場動物（牛等）、人間以外の霊長類、動物園の動物、競技動物（馬等）、またはペット動物（犬および猫等）にも、公知の様式で、薬剤、医薬組成物、食品、食品含有成分もしくは食品サプリメント、または栄養含有成分もしくは栄養サプリメントにおいてまたはこれらとして投与できる。投与の好ましい手法は水不溶性セルロース誘導体のペット餌中または他の動物餌中への導入である。

水不溶性セルロース誘導体は、任意に、水溶性または水不溶性の天然由来ポリマーまたはその誘導体，例えばアラビアガム、キサンタンガムまたはその誘導体、カラヤゴム、トラガカントゴム、ガティゴム、グアーガムまたはその誘導体、滲出ゴム、海藻ゴム、種子ゴム、微生物ゴム、カラギーナン、デキストラン、ゼラチン、アルギネート、ペクチン、スターチまたはその誘導体、キトサンまたは他のポリサッカライド、好ましくはベータ−グルカン、ガラクトマンナン、ヘミセルロース、オオバコ、グアー、キサンタン、微結晶セルロース、非晶セルロースまたはキトサンと組合せて用いる。

本発明の幾つかの態様において、水不溶性セルロース誘導体を水溶性セルロース誘導体と組合せて使用または投与することが特に有益である。１種以上の水不溶性セルロース誘導体と１種以上の水溶性セルロース誘導体との組合せの有用な量およびこのような組合せの薬剤、医薬組成物、食品、食品含有成分もしくは食品サプリメント、または栄養含有成分もしくは栄養サプリメントにおける投与、摂取または内包のための有用な手法は、一般的に水不溶性セルロース誘導体のみについて上記したのと同じである。

水溶性セルロース誘導体は、水中の溶解性が、１００グラムの蒸留水中、２５℃および１気圧で少なくとも２グラム、好ましくは少なくとも３グラム、より好ましくは少なくとも５グラムである。好ましい水溶性セルロース誘導体は、水溶性のセルロースエステルおよびセルロースエーテルである。好ましいセルロースエーテルは、水溶性カルボキシＣ₁−Ｃ₃アルキルセルロース，例えばカルボキシメチルセルロース；水溶性カルボキシＣ₁−Ｃ₃アルキルヒドロキシＣ₁−Ｃ₃アルキルセルロース，例えばカルボキシメチルヒドロキシエチルセルロース；水溶性Ｃ₁−Ｃ₃アルキルセルロース，例えばメチルセルロース；水溶性Ｃ₁−Ｃ₃アルキルヒドロキシＣ₁−Ｃ₃アルキルセルロース，例えばヒドロキシエチルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースまたはエチルヒドロキシエチルセルロース；水溶性ヒドロキシＣ₁−Ｃ₃アルキルセルロース，例えばヒドロキシエチルセルロースまたはヒドロキシプロピルセルロース；水溶性混合ヒドロキシＣ₁−Ｃ₃アルキルセルロース，例えばヒドロキシエチルヒドロキシプロピルセルロース、水溶性混合Ｃ₁−Ｃ₃アルキルセルロース，例えばメチルエチルセルロース；または水溶性アルコキシヒドロキシエチルヒドロキシプロピルセルロースであり、アルコキシ基は直鎖または分岐鎖で２〜８個の炭素原子を有する。より好ましいセルロースエーテルは、メチルセルロース、メチルエチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびカルボキシメチルセルロースであり、これらは当業者により水溶性セルロースエーテルに分類される。最も好ましい水溶性セルロースエーテルは、メチルモル置換ＤＳ_{メトキシル}が０．５〜３．０、好ましくは１〜２．５のメチルセルロース、および、ＤＳ_{メトキシル}が０．９〜２．２、好ましくは１.１〜２．０、およびＭＳ_{ヒドロキシプロポキシル}が０．０２〜２．０、好ましくは０．１〜１．２のヒドロキシプロピルメチルセルロースである。メチルセルロースのメトキシル量は、ＡＳＴＭ法Ｄ１３４７−７２（再承認１９９５）に従って評価できる。ヒドロキシプロピルメチルセルロースのメトキシルおよびヒドロキシプロポキシルの量は、ＡＳＴＭ法Ｄ−２３６３−７９（再承認１９８９）によって評価できる。メチルセルロースおよびヒドロキシプロピルメチルセルロース（例えばＫ１００Ｍ，Ｋ４Ｍ，ＫｌＭ，Ｆ２２０Ｍ，Ｆ４ＭおよびＪ４Ｍのヒドロキシプロピルメチルセルロース）は、ＴｈｅＤｏｗＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｍｐａｎｙから市販で入手可能である。

水溶性セルロース誘導体は、一般的に、２質量パーセント水溶液として摂氏２０度で測定される粘度５ｃｐｓ〜２，０００，０００ｃｐｓ（＝ｍＰａ・ｓ）、好ましくは５０ｃｐｓ〜２００，０００ｃｐｓ、より好ましくは７５ｃｐｓ〜１００，０００ｃｐｓ、特に１，０００ｃｐｓ〜５０，０００ｃｐｓを有する。粘度は回転式粘度計で測定できる。

本発明を以下の例によって更に説明するが、これは本発明の範囲を限定するものと解釈すべきではない。特記がない限り、全ての部およびパーセントは質量基準である。

例
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）法（これにより、コレステロールリポタンパクの、これらの粒子サイズに基づく分離および同時測定が可能になる）で血中の極低比重リポタンパク（ＶＬＤＬ）、低比重リポタンパク（ＬＤＬ）および高比重リポタンパク（ＨＤＬ）のコレステロールレベルを評価した。Ａｇｉｌｅｎｔ１１００クロマトグラフを、ポストカラム誘導体化反応器（温度制御されたウォータージャケット中のミキシングコイルとＨｅｗｌｅｔｔ−ＰａｃｋａｒｄＨＰＬＣポンプ７９８５１−Ａとからなる）とともに採用し、これを用いてコレステロール試薬を流速０．２ｍｌ／分で送達した。コレステロールリポタンパク標準（ウシ）を用いてＵＶ検出器を較正した。較正は標準ピーク面積を用いて行なった。典型的には、心穿刺を介して血液を５ｍｌシリンジ中に収集し、ＥＤＴＡカリウム溶液（２１グラム針に通して）でリンスした。血液を５ｍｌポリプロピレンチューブ（凝固を防止するためにＥＤＴＡカリウム溶液を含む）に移し、そしてロッカー上に数分間置き、次いで遠心分離まで氷上に貯蔵した。次いで、遠心分離を１，５００ｒｐｍで３０分間４℃で、市販の臨床用遠心分離機で実施した。血漿（上清）の１分割単位をエッペンドルフチューブに移し、そして１５μｌの血漿をＡｇｉｌｅｎｔ１１００オートサンプラー経由でＳｕｐｅｒｏｓｅ６ＨＲＨＰＬＣカラム上に注入した。リポタンパクは、０．１５ＭＮａＣｌを含むバッファー（ｐＨ７．０，０．０２％アジ化ナトリウム）とともに、流速０．５ｍｌ／分で溶出させた。同じ装置設定およびＳＥＣ評価方法を、血中トリグリセリド（ＴＧ）の分析に適用したが、ポストカラム誘導体化試薬は異なった。総コレステロール（ＴＣ）レベルは、ＶＬＤＬ，ＬＤＬおよびＨＤＬのレベルを合計することにより得た。ＶＬＤＬおよびＬＤＬのレベルの合計（ＶＬＤＬ＋ＬＤＬ）も用いて血中の「悪玉」コレステロール全体のレベルを明らかにした。

ハムスターの肝臓の脂肪量質量パーセントも評価した。新たに取出した肝臓を液体窒素中で直ちに凍結させた。凍結した小片を脂肪分析用に凍結乾燥させた。凍結乾燥させた肝臓を機械的に微粉末に粉砕し、小さなＺｉｐｌｏｃ（商標）袋中に貯蔵した。次いで、正確に２００ｍｇとした凍結乾燥肝臓粉末を、ヘキサン／イソプロパノールブレンド物（３：２）を用いて抽出した。ＤｉｏｎｅｘＡＳＥ２００抽出装置を用いた。抽出物の溶媒を蒸発させ、続いて脂肪量評価のための重量分析に供した。

例において用いた粉末化エチルセルロースは、ＴｈｅＤｏｗＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｍｐａｎｙより商標名ＥＴＨＯＣＥＬＳｔａｎｄａｒｄ１０ＰｒｅｍｉｕｍおよびＥＴＨＯＣＥＬＳｔａｎｄａｒｄ１０ＰｒｅｍｉｕｍＦＰグレードで市販にて入手可能である。ＥＴＨＯＣＥＬＳｔａｎｄａｒｄ１０Ｐｒｅｍｉｕｍは、ＥＴＨＯＣＥＬＳｔａｎｄａｒｄ１０ＰｒｅｍｉｕｍＦＰよりもかなり大きい粒子を有する。したがって第１のものをここで「粗（ｃｏａｒｓｅ）」粒子といい、第２のものをここで「微細（ｆｉｎｅ）」粒子という。これはエトキシル量４８．０−４９．５パーセント、および、ブルックフィールド粘度計を用い、８０体積パーセントのトルエンと２０体積パーセントのエタノールとの混合物中、５質量％溶液として２５℃で測定した粘度約１０ｍＰａ・ｓを有する。

例１および２の手順
開始時体重７０〜９０グラムのオスのゴールデンＳｙｒｉａｎハムスター（Ｓａｓｃｏｓｔｒａｉｎ，ＣｈａｒｌｅｓＲｉｖｅｒ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）で動物実験を行なった。動物実験は、ＡｎｉｍａｌＣａｒｅａｎｄＵｓｅＣｏｍｍｉｔｔｅｅ，ＷｅｓｔｅｒｎＲｅｇｉｏｎａｌＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒ，ＵＳＤＡ，Ａｌｂａｎｙ，ＣＡによって承認された。オスのＳｙｒｉａｎゴールデンハムスターを２つの群に分けた：第１の群は「処置群」とよび、高脂肪処置餌および水を不断給餌し、一方、第２の群は「対照群」とよび、高脂肪対照餌および水を不断給餌した。各群で１０匹のハムスターをカウントした。両群に３連続週の期間給餌した。

水不溶性セルロースエーテルは５質量パーセントのレベルで処置餌中に存在した。これを、餌の粉末化成分と混合する前にまず餌の液体化された脂肪成分中に懸濁させた。１０００ｇの完成した高脂肪処置餌は、８０ｇのバター脂肪、１００ｇのコーン油、２０ｇの魚油および１ｇのコレステロール、２００ｇのカゼイン、４９８ｇのコーンスターチ、３ｇのＤＬメチオニン、３ｇの酒石酸水素コリン、３５ｇのミネラル混合物、１０ｇのビタミン混合物、および５０ｇのＥＴＨＯＣＥＬＳｔａｎｄａｒｄＰｒｅｍｉｕｍ１０「粗」グレードエチルセルロースを含んでいた。

対照餌は、水不溶性セルロース誘導体を同じ量の微結晶セルロース（ＭＣＣ）（対照餌を調製する間に餌の粉末化成分中に混合した）で置き換えたことのみを除いて処置餌と全く同じ組成を有した。

例１
ハムスターに餌を３連続週給餌した後、血液サンプルをハムスターから採取して血漿を得た。コレステロールリポタンパクおよびトリグリセリドのレベルについて血漿を分析した。結果を以下の表１に列挙する。

例１における結果は、水不溶性セルロース誘導体（例えばエチルセルロース）が個体におけるアテローム生成性の脂質異常症を予防または処置するために有用であることを示すものである。

例２
ハムスターに餌を３連続週給餌した後、肝臓を取出し、犠牲にしたハムスターの肝臓の脂肪量質量パーセントを上記したように重量分析的に評価した。結果を以下の表２に列挙する。

例３
例３のための手順は、例１および２のための手順と極めて類似した。例１および２と同じ種類および同じ開始時体重範囲のオスのＳｙｒｉａｎゴールデンハムスターも処置群と対照群とに各群当たり５匹のハムスターとして分けた。これらに、処置餌が３質量パーセントのＥＴＨＯＣＥＬＳｔａｎｄａｒｄＰｒｅｍｉｕｍ１０「粗」グレードエチルセルロースを含有し、このエチルセルロースを追加の約３００ｇの水を添加しながら餌の粉末化成分と混合し、次いで餌の液体化脂肪画分と混合したことを除いて、例１および２で示した餌と同じ餌を給餌した。対照餌は水不溶性セルロース誘導体に代えて３質量パーセントの微結晶セルロースを含有していた。

ハムスターに餌を３連続週給餌した後、肝臓を取出し、犠牲にしたハムスターの肝臓の脂肪量質量パーセントを上記のように重量分析的に評価した。肝臓の脂肪量はハムスターの肝臓の質量％として計算した。結果を以下の表３に列挙する。

図１は、対照餌を給餌されたハムスターの肝臓の倍率５，０００倍での代表的な透過型電子顕微鏡画像を示す。図２は、処置餌を給餌されたハムスターの肝臓の倍率５０００倍での代表的な透過型電子顕微鏡画像を示す。ここで図１を参照し、肝細胞核が良好に形成されていないこと、細胞核の膜が異常であり、そして肝組織が多くの脂肪球を含有していることに注目されよう。ここで図１と比較して図２を参照し、図２では、肝細胞核が良好に形成されていること、細胞核の膜が正常な外観を有し、そして図２が示す肝組織が含有する脂肪球はより少なくかつより小さいことにより、水不溶性セルロース誘導体を含む餌について好ましい効果を示すことに注目されよう。

脂肪肝は、インスリン抵抗性、および一般的にメタボリックシンドロームと密接に関連することが公知である（例えば、以下の刊行物：１）Ｋｎｏｂｌｅｒ，Ｈ，ＳｃｈａｔｔｎｅｒＡ，ＺｈｏｒｎｉｃｋｉＴ，ＭａｌｎｉｃｋＳＤＨ，ＫｅｔｅｒＤ，ＳｏｋｏｌｏｖｓｋａｙａＮ，ＬｕｒｉｅＹ，およびＢａｓｓＤＤ，Ｆａｔｔｙｌｉｖｅｒ−ａｎａｄｄｉｔｉｏｎａｌａｎｄｔｒｅａｔａｂｌｅｆｅａｔｕｒｅｏｆｔｈｅｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＱＪＭｅｄ９２：７３−７９，１９９９；２）Ｎｇｕｙｅｎ−ＤｕｙＴＢ，ＮｉｃｈａｍａｎＭＺ，ＣｈｕｒｃｈＴＳ，ＢｌａｉｒＳＮ，およびＲｏｓｓＲ，Ｖｉｓｃｅｒａｌｆａｔａｎｄｌｉｖｅｒｆａｔａｒｅｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐｒｅｄｉｃｔｏｒｓｏｆｍｅｔａｂｏｌｉｃｒｉｓｋｆａｃｔｏｒｓｉｎｍｅｎ，ＡｍＪＰｈｙｓｉｏｌＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌＭｅｔａｂ２８４：Ｅ１０６５−Ｅ１０７１，２００３；３）ＭａｒｃｈｅｓｉｎｉＧ，ＢｒｉｚｉＭ，ＢｉａｎｃｈｉＧ，ＴｏｍａｓｓｅｔｔｉＳ，ＢｕｇｉａｎｅｓｉＥ，ＬｅｎｚｉＭ，ＭｃＣｕｌｌｏｕｇｈＡＪ，ＮａｔａｌｅＳ，ＦｏｒｌａｎｉＧ，およびＭｅｌｃｈｉｏｎｄａＮ，ＮｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃＦａｔｔｙＬｉｖｅｒＤｉｅａｓｅ−ＡＦｅａｔｕｒｅｏｆｔｈｅＭｅｔａｂｏｌｉｃＳｙｎｄｒｏｍｅ，Ｄｉａｂｅｔｅｓ５０：１８４４−１８５０，２００１；４）ＧａｒｇＡおよびＭｉｓｒａＡ，ＨｅｐａｔｉｃＳｔｅａｔｏｓｉｓ，ＩｎｓｕｌｉｎＲｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ａｎｄＡｄｉｐｏｓｅＴｉｓｓｕｅＤｉｓｏｒｄｅｒｓ，ＪＣｌｉｎＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌＭｅｔａｂ８７（７）：３０１９−３０２２，２００２を参照のこと）。

例２および３における結果は、水不溶性セルロース誘導体（例えばエチルセルロース）が、インスリン抵抗性を予防または処置するために有用であることを示すものである。

例４
例１および２と同じ種類および同じ開始時体重範囲のオスのＳｙｒｉａｎゴールデンハムスターを３つの群に分けた。第１の群は「処置群Ｄ」とよび、１つの種類の高脂肪処置餌と水とを不断給餌し、第２の群は「処置群Ｆ」とよび、他の種類の高脂肪処置餌と水とを不断給餌し、一方第３の群は「対照群」とよび、高脂肪対照餌と水とを不断給餌した。処置群Ｄおよび処置群Ｆは各１０匹のハムスターをカウントし、一方対照群は１２匹のハムスターをカウントした。３つの群を３連続週の期間給餌した。

水不溶性セルロースエーテルは５質量パーセントのレベルで処置餌ＤおよびＦ中に存在した。処置餌Ｄの場合、水不溶性セルロースエーテルを、餌の液体化脂肪成分とブレンドする前にまず餌の粉末化成分中に混合した。処置餌Ｆの場合、水不溶性セルロースエーテルを、餌の粉末化画分と混合する前にまず餌の液体化脂肪画分中に懸濁させた。両処置餌Ｄ，Ｆについて、１０００ｇの完成した各々の高脂肪処置餌は、８０ｇのバター脂肪、１００ｇのコーン油、２０ｇの魚油および１ｇのコレステロール、２００ｇのカゼイン、４９８ｇのコーンスターチ、３ｇのＤＬメチオニン、３ｇの酒石酸水素コリン、３５ｇのミネラル混合物、１０ｇのビタミン混合物、および５０ｇのＥＴＨＯＣＥＬＳｔａｎｄａｒｄＰｒｅｍｉｕｍ１０ＦＰ「微細」グレードエチルセルロースを含んでいた。

ハムスターに餌を３連続週給餌した後、血液サンプルをハムスターから採取して血漿を得た。コレステロールリポタンパクおよびトリグリセリドのレベルについて血漿を分析した。ＬＤＬ、ＶＬＤＬおよびＴＣ（総コレステロール）のレベルを測定し、そして例１において上記したように評価した。結果を以下の表４に列挙する。

例４の結果は、例１の結果を裏付ける。例えば、個体における血漿中の総コレステロールレベルは、エチルセルロースを含む高脂肪餌を個体が摂取した後で、エチルセルロースに代えて微結晶セルロースを含む対応の高脂肪餌を個体が摂取した後よりも顕著に低い。

例５
例１および２と同じ種類および同じ開始時体重範囲のオスのＳｙｒｉａｎゴールデンハムスターを２つの群に分けた。一方の群を「処置群」とよび、高脂肪処置餌と水とを不断給餌し、一方、他方の群を「対照群」とよび、高脂肪対照餌と水とを不断給餌した。両群は各１０匹のハムスターをカウントした。これらの群を８連続週の期間給餌した。

水不溶性セルロースエーテルは５質量パーセントのレベルで処置餌中に存在した。この処置餌の場合、水不溶性セルロースエーテルは、餌の粉末化画分と混合する前にまず餌の液体化脂肪画分中に懸濁させた。この処置餌について、１０００ｇの完成した各々の高脂肪処置餌は、１５０ｇのバター脂肪、５０ｇのコーン油、２００ｇのカゼイン、４９９ｇのコーンスターチ、３ｇのＤＬメチオニン、３ｇの酒石酸水素コリン、３５ｇのミネラル混合物、１０ｇのビタミン混合物、および５０ｇのＥＴＨＯＣＥＬＳｔａｎｄａｒｄＰｒｅｍｉｕｍ１０ＦＰ「微細」グレードエチルセルロースを含んでいた。

ハムスターに餌を８連続週給餌した後、ランダムな基準で処置群の動物および対照群の動物から肝臓を取出した。処置群のハムスターを以下の表５にＨＦ−ＥＣ−１，ＨＦ−ＥＣ−２，ＨＦ−ＥＣ−３，ＨＦ−ＥＣ−４，ＨＦ−ＥＣ−５，ＨＦ−ＥＣ−６およびＨＦ−ＥＣ−７として規定する。対照群のハムスターを以下の表５でＨＦ−対照−１およびＨＦ−対照−２，ＨＦ−対照−３およびＨＦ−対照−４として規定する。

伝令リボ核酸（ｍＲＮＡ）をこれらのハムスターのこれらの肝臓から抽出した。全ｍＲＮＡを、ＢａｒｔｌｅｙおよびＩｓｈｉｄａ（２００２）に従って抽出、精製および逆転写した。Ｂａｒｔｌｅｙ，Ｇ．Ｅ．およびＩｓｈｉｄａ，Ｂ．Ｋ．（２００２）ＤｉｇｉｔａｌＦｒｕｉｔＲｉｐｅｎｉｎｇ：ＤａｔａＭｉｎｉｎｇｉｎｔｈｅＴＩＧＲＴｏｍａｔｏＧｅｎｅＩｎｄｅｘ．ＰｌａｎｔＭｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐ．２０：１１５−１３０の教示は参照により本明細書に包含される。

上記の全ｍＲＮＡからの逆転写によって得たｃＤＮＡを１０倍に希釈して、製造者のプロトコルに従って、以下のＳＹＢＲＧｒｅｅｎＳｕｐｅｒｍｉｘ（ＢＩＯ−ＲＡＤ）で更に記載されるように、長さ２０〜２４塩基の遺伝子に対する特定プライマーとのリアルタイムＰＣＲ反応に１マイクロリットル分割単位を用いた。ただし以下の変更を行なった：１．反応は２５マイクロリットル全体積で３重の反応で行ない、２．ＭＸ３０００Ｐ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）装置を用いてＰＣＲを行なった。ＰＣＲ条件は５分、９５℃、続いて４０サイクルの９４℃×１５秒、５５〜６０℃×１分および７２℃×３０秒のインキュベーションである。以下のプライマーを用いた：

ＣＲＰ：ＣＧＴＧＴＴＧＴＣＡＴＴＡＴＧＴＡＧＧＴＣＴＴＡ（フォワード），
ＧＴＡＧＣＴＴＴＡＴＴＧＡＣＴＣＡＴＧＧＡＣＣ（リバース）；
ＰＡＩ−１：ＴＴＣＡＣＡＡＧＴＣＴＴＴＣＣＧＡＣＣＡＡ（フォワード），
ＧＧＧＧＧＣＣＡＴＧＣＧＧＧＣＴＧＡＧＡ（リバース）；
ＨＬ：ＡＡＧＡＧＡＡＴＴＣＣＣＡＴＣＡＣＣＣＴＧ（フォワード），
ＣＴＧＴＴＴＴＣＣＣＡＣＴＴＧＡＡＣＴＴＧＡ（リバース）；
アクチン：ＡＣＧＴＣＧＡＣＡＴＣＣＧＣＡＡＡＧＡＣＣＴＣ（フォワード），
ＧＡＴＣＴＣＣＴＴＣＴＧＣＡＴＣＣＧＧＴＣＡ（リバース）

プライマー効率は、ｃＤＮＡの希釈カーブを用いて評価した。相対定量は、Ｌｉｖａｋ，ＫＪ．ａｎｄＳｃｈｍｉｔｔｇｅｎ，Ｔ．Ｄ．（２００１）にあるようにアクチン転写への規格化によって行なった。Ｌｉｖａｋ，ＫＪ．ａｎｄＳｃｈｍｉｔｔｇｅｎ，Ｔ．Ｄ．（２００１），Ａｎａｌｙｓｉｓｏｆｒｅｌａｔｉｖｅｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｄａｔａｕｓｉｎｇｒｅａｌ−ｔｉｍｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲａｎｄｔｈｅ２^-ΔΔCＴＭｅｔｈｏｄ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．２５：４０２−４０８の教示は、参照により本明細書に組み入れる。ＤＮＡコンタミネーションの量を評価するための陰性対照は、同一濃度の全ｍＲＮＡ（精製後のサンプル）で逆転写なしで行なった。陰性対照は、プライマー組の幾つかについて行なった。各々の場合において、非逆転写対照シグナルは逆転写したサンプルよりも５以上のサイクル後で実現された。

ハムスターＨＦ−ＥＣ−１のＣ−反応性タンパク（ＣＲＰ）、プラスミノゲン活性化因子阻害剤−１（ＰＡＩ−１）および肝性リパーゼ（ＨＬ）の遺伝子発現を、ハムスターＨＦ−対照−１およびＨＦ−対照−２のＣＲＰ，ＰＡＩおよびＨＬの遺伝子発現と比較した。遺伝子発現の比ＨＦ−ＥＣ−１／ＨＦ−対照−１およびＨＦ−ＥＣ−１／ＨＦ−対照−２を以下の表５に列挙する。他の対のハムスターのＣＲＰ，ＰＡＩおよびＨＬの遺伝子発現についての比を以下の表５に列挙するように評価した。表５中に表す数値は、対照に対する相対値であることが理解される。すなわち、数値が１未満の場合には、特定遺伝子の発現が処置群のハムスターにおいて対照群のハムスターよりも低く、逆もあてはまる。

結果を以下の表５に示す。各々の動物の対および各遺伝子についての表５中の値は、３重の測定の平均である。ミーン値およびミーン値の標準誤差（ＳＥＭ）の値を示す。

^* “ＳｔａｎｄａｒｄＰｒａｃｔｉｃｅｆｏｒＤｅａｌｉｎｇＷｉｔｈＯｕｔｌｙｉｎｇＯｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｓ”ＡＳＴＭＥ１７８−８０に基づいたミーン値およびＳＥＭの計算のために見積もった。Ｇｒｕｂｂの分析［Ｇｒｕｂｂｓ，Ｆｒａｎｋ（Ｆｅｂｒｕａｒｙ１９６９），ＰｒｏｃｅｄｕｒｅｓｆｏｒＤｅｔｅｃｔｉｎｇＯｕｔｌｙｉｎｇＯｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｓｉｎＳａｍｐｌｅｓ，Ｔｅｃｈｎｏｍｅｔｒｉｃｓ，Ｖｏｌ．１１，Ｎｏ．１，ｐｐ．１−２１およびｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｔｌ．ｎｉｓｔ．ｇｏｖ／ｄｉｖ８９８／ｈａｎｄｂｏｏｋ／ｅｄａ／ｓｅｃｔｉｏｎ３／ｅｄａ３５ｈ．ｈｔｍ］を用いて統計的異常値分析を行なった。

データは、動物の同じ群内で幾らかばらつきを示すが、結果は生物学的に生物系で得るものであるためこれは予測すべきものである。それでも、データは明確な傾向を示す。ＣＲＰ，ＰＡＩ−１およびＨＬの遺伝子発現は、一般的に、エチルセルロースを含む餌を給餌された処置群の動物において、水不溶性セルロース誘導体に代えて微結晶セルロースを含む餌を給餌された対照群の動物においてよりも低い。

ＣＲＰおよび／またはＰＡＩ−１および／またはＨＬの遺伝子発現を低減することは、メタボリックシンドロームの予防または処置における重要な因子である。

例６
開始時体重５０〜６０グラムのオスのゴールデンＳｙｒｉａｎハムスター（ＬＶＧｓｔｒａｉｎ，ＣｈａｒｌｅｓＲｉｖｅｒ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）で、以下に特定する各々の餌で動物実験を行なった。動物実験は、ＡｎｉｍａｌＣａｒｅａｎｄＵｓｅＣｏｍｍｉｔｔｅｅ，ＷｅｓｔｅｒｎＲｅｇｉｏｎａｌＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒ，ＵＳＤＡ，Ａｌｂａｎｙ，ＣＡによって承認された。

例６で用いたエチルセルロースは、ＥＴＯＣＥＬＳｔａｎｄａｒｄＰｒｅｍｉｕｍ１０「微細」グレードエチルセルロースであった。これはＴｈｅＤｏｗＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｍｐａｎｙから市販で入手可能であり、そしてエトキシル量４８．０−４９．５パーセント、および、ブルックフィールド粘度計を用い、８０体積パーセントのトルエンと２０体積パーセントのエタノールとの混合物中、５質量％溶液として２５℃で測定した粘度約１０ｍＰａ・ｓを有する。

オスのＳｙｒｉａｎゴールデンハムスターを３つの群に分けた：２つの群は「処置群」とよび、「乾燥ＥＣ」および「脂肪ＥＣ」を含有する餌を給餌した。１つの群は「対照群」とよび、微結晶セルロース（ＭＣＣ）を含有する餌を給餌した。各群は各約１０匹のハムスターからなった。これらの群を３連続週の期間給餌した。

処置群１：乾燥ＥＣ
この処置群には、５０ｇのＥＴＨＯＣＥＬＳｔａｎｄａｒｄＰｒｅｍｉｕｍ１０ＦＰ「微細」グレードエチルセルロースを含有したことを除いて例１および２におけるような乾燥ＥＣ処置餌を給餌した。

処置群２：脂肪ＥＣ
処置群２用の脂肪ＥＣ餌は、餌を調製する間に５０ｇのＥＴＨＯＣＥＬＳｔａｎｄａｒｄＰｒｅｍｉｕｍ１０ＦＰ「微細」グレードエチルセルロースを餌脂肪部分中に５０℃で分散させたことを除いて処置群１用の餌と同じであった。

対照群：ＭＣＣ
対照餌は、エチルセルロース誘導体を同量の微結晶セルロース（ＭＣＣ）（対照餌を調製する間に餌の粉末化成分中に混合した）で置き換えたことのみを除いて処置餌と全く同じ組成であった。

ハムスターに餌を３連続週給餌した後、処置群および対照群の両者から、血漿を得て、そして肝臓を取出した。処置群の犠牲にしたハムスターを以下の表６中で「乾燥ＥＣ」および「脂肪ＥＣ」と規定する。対照群の犠牲にしたハムスターを以下の表６中でＭＣＣと規定する。

定量ＲＴ−ＰＣＲ分析ハムスター肝臓中のＰＡＩ−１

プラスミノゲン活性化因子阻害剤−１（ＰＡＩ−１）の遺伝子発現を、例５に記載するｍＲＮＡ抽出および分析によって評価した。全ｍＲＮＡを、例５に記載するようにＢａｒｔｌｅｙおよびＩｓｈｉｄａ（２００２）に従って抽出、精製および逆転写した。

乾燥ＥＣハムスターおよび脂肪ＥＣハムスターのＰＡＩ−１遺伝子発現を、対照ＭＣＣハムスターのＰＡＩ−１遺伝子発現と比較した。遺伝子発現の比を以下の表６に列挙する。ミーン値およびミーン値の標準誤差（ＳＥＭ）の値を示す。表６中に表す数値は、対照に対する相対値であることが理解される。すなわち、数値が１未満の場合には、特定遺伝子の発現が処置群のハムスターにおいて対照群のハムスターよりも低く、逆もあてはまる。

表６は、水不溶性セルロース誘導体（例えばエチルセルロース）の投与が、ＰＡＩ−１遺伝子発現に対して顕著な効果を有することを示す。餌は３週しか給餌されていないが、微結晶セルロースに代えてエチルセルロースを有する餌を給餌されたハムスターは、顕著により低いＰＡＩ−１遺伝子発現を有していた。ＰＡＩ−１遺伝子発現の低減は、メタボリックシンドロームを予防または処置するための水不溶性セルロース誘導体（例えばエチルセルロース）の有用性を明確に示すものである。

ハムスター血漿中のアディポネクチンの分析
二重抗体サンドイッチ酵素イムノアッセイ法に基づき、アディポネクチンについてハムスターＥＤＴＡ血漿サンプルをアッセイした。

血漿サンプルは、アッセイの開始前に、ＡｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎＥＬＩＳＡＫｉｔ，Ｂ−ＢｒｉｄｇｅＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．（ＭｏｕｎｔａｉｎＶｉｅｗ，ＣＡ）による試薬バッファーで希釈した。全試薬を戻した後、１００μｌの逐次希釈したアディポネクチン標準および希釈した血漿サンプルを、正しい番号の抗体コートウエルに添加した。サンプル中のアディポネクチンはまず、ウエル内に固定化された抗アディポネクチンポリコローナル抗体にバインドする（第１反応）。プレートを２２〜２８℃で６０分間インキュベートした。インキュベートに続き、各ウエルを洗浄バッファーで３回洗浄した。洗浄後、１００μｌのビオチン化された第２の抗アディポネクチンポリクローナル抗体を各ウエルに添加して２２〜２８℃で６０分間インキュベートした（第２反応）。ビオチン化された第２のウサギ抗アディポネクチンポリクローナル抗体は、第１反応においてウエル内に捕捉されたアディポネクチンにバインドする。インキュベーションに続き、各ウエルを３回洗浄バッファーで洗浄した。洗浄後、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）とストレプトアビジンとのコンジュゲートを各ウエルに添加して２２〜２８℃で６０分間インキュベートした（反応３）。ＨＲＰコンジュゲートされたストレプトアビジンは、第２反応においてウエル内に捕捉されたビオチン化されたウサギ抗アディポネクチン抗体を認識してこれにバインドする。洗浄後、酵素の発色基質を全てのウエルに添加してインキュベートする。停止溶液を添加することによって着色を終了させる。各ウエルの吸収を４５０ｎｍにてＳｙｎｅｒｇｙ（商標）ＨＴＭｕｌｔｉ−ＤｅｔｅｃｔｉｏｎＭｉｃｒｏｐｌａｔｅＲｅａｄｅｒで測定した。

ハムスター血漿中のＰＡＩ−１の分析
ハムスターＥＤＴＡ血漿サンプルを、合成発色基質法のプラスミノゲン活性化剤（ウロキナーゼ（ｕＰＡ）または組織プラスミノゲン活性化剤（ｔＰＡ））活性の阻害に基づきＰＡＩ−１活性についてアッセイした。

アッセイキットＳＴＡＣＨＲＯＭＰＡＩ，ＤｉａｇｎｏｓｔｉｃａＳｔａｇｏ（Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，ＮＪ）で与えられる手順に基づき、ＰＡＩ−１の比色分析により血漿サンプルを直接アッセイした。マイクロプレートフォーマット用のプロトコルを用いた。全試薬を戻した後、２５μｌの血漿またはＰＡＩキャリブレータおよび１００μｌの試薬１（ｕＰＡ）を指定ウエルに加えた。予め加温したプレートリーダー内で３７℃で４分間プレートをインキュベートした。このステップによってＰＡＩ-１とｕＰＡとの間のバインディングが開始した。ＰＡＩ-１阻害後の残存ｕＰＡ活性を測定するために、１００μｌの試薬２（プラスミノゲン）を各ウエルに加えて、反応混合物を３７℃で４分間インキュベートした。反応の結果としてプラスミンが生成し、そして、１００μｌの予め加温した基質（試薬３）の３７℃での添加時の反応速度によってプラスミンのアミド分解活性を評価した。４０５ｎｍの吸収を、基質添加から１５秒後および４５秒後で測定した。アッセイをカイネティックモードで行なったため、試薬を即座に添加して各試薬の添加の正確な時間を記録しなければならなかった。２つの時点のΔ吸収値によって得た標準カーブ対特定ロットで与えられるキャリブレータ活性レベルのプロットに基づいてＰＡＩ-１レベルを評価した。

種々の餌によるハムスター血漿を得た後、血漿をＰＡＩ−１およびアディポネクチンについて分析した。ＰＡＩ−１およびアディポネクチンタンパクのレベルを測定および評価した。結果を表７に列挙する。

ハムスター血漿中のＰＡＩ−１レベルを、ラット（細胞培養または動物）中の生体活性ＰＡＩ-１タンパクを測定するために用いてきた酵素法によって測定した。しかしこの方法はＰＡＩ−１活性を測定するのみでなくＰＡＩ−２に対する感受性も有することが報告された。測定されるこの実験のハムスター血漿サンプル中のＰＡＩ−１レベルは、ｍＬ当たりのアミド分解単位（ＡＵ）として表される。データは幾らかかのばらつきを示す：結果は生物学的に生物系で得るものであるためこれは予測すべきものである。ハムスター血漿によるデータは、ＰＡＩ−１のＰＣＲ分析についての肝臓によるデータと同様の傾向を示す。ＰＡＩ−１タンパクのレベルは、エチルセルロースを含む餌を給餌された処置群の動物において、微結晶セルロースを含む餌を給餌された対照群の動物においてよりも一般的に低い。

この実験のハムスターサンプルにおける血漿アディポネクチン濃度を表７に列挙する。対照（ＭＣＣ）餌と比べ、データは明確な傾向を示す。アディポネクチンのレベルは、脂肪ＥＣ餌および乾燥ＥＣ餌を給餌したハムスターについて、微結晶セルロースを含む餌を給餌された対照群の動物よりも一般的に高かった。アディポネクチンタンパク発現における上昇は、メタボリックシンドロームの予防または処置において重要な因子である。

ハムスター肝臓中の総脂質％、トリグリセリド、総コレステロール、および遊離コレステロール
脂質、トリグリセリド、遊離コレステロールおよび総コレステロールについてのハムスター肝臓の分析のための方法を以下に纏める。凍結乾燥粉砕された肝臓サンプルを抽出セル内の砂層間に挟んだ。セルをＤｉｏｎｅｘ加速溶媒抽出器内に置き、そして抽出を１００℃、約２０００ｐｓｉｇにて７５／２５へキサン／２−プロパノールで行なった。サンプル抽出物を窒素流下で蒸発乾固させ；残渣を一定質量にし、計量して総脂質％を評価した。残渣を５／２体積／体積のクロロホルム／メタノール溶液中に溶解させ、完全に混合し、１分割単位をバイアルに移し、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００の３％溶液中で脂質を可溶化し、そして混合物を窒素流下で蒸発乾固させた。１ｍＬの脱イオン水をサンプル残渣に添加し、混合物を完全に混合してトリグリセリド、遊離コレステロールおよび総コレステロールの種の量を臨床分析装置（血漿サンプルについて上記したもの）で評価した。統計ソフトウエアプログラムＪＭＰを用い、多変量解析を用いてデータ群を分析した。各検体についてマハラノビス距離に基づいて異常値を特定した。次いでＡＮＯＶＡ分析およびミーン値試験から異常値を除いた。

ハムスターに餌を３連続週給餌した後、ハムスターを犠牲にして肝臓を抽出した。肝臓抽出物を、総脂質％、トリグリセリド、遊離コレステロールおよび総コレステロール％について分析した。レベルを測定および評価した。結果を表８中に列挙する。

結果は、脂肪ＥＣ餌および乾燥ＥＣ餌が、ミーン総脂質において、対照餌ＭＣＣからそれぞれ３６％および３８％の低減を示したことを示す。肝臓トリグリセリドレベルは、脂肪ＥＣ餌および乾燥ＥＣ餌について、ミーントリグリセリドレベルにおいて対照餌ＭＣＣからそれぞれ１２％および１５％の低減を示した。肝臓遊離コレステロールレベルは、乾燥ＥＣ餌および脂肪ＥＣ餌について、ミーン遊離コレステロールにおいて対照餌ＭＣＣからそれぞれ２５％および３２％の低減を示した。乾燥ＥＣ餌および脂肪ＥＣ餌についての肝臓総コレステロールレベルは、ミーン総コレステロールにおいて対照餌ＭＣＣからそれぞれ７９％および８１％の低減を示した。

纏めると、例６における結果は、水不溶性セルロース誘導体（例えばエチルセルロース）がメタボリックシンドロームの予防または処置のために有用であることを示すものである。

Claims

個体におけるメタボリックシンドロームまたはメタボリックシンドロームに関連する症状もしくは健康状態を予防または処置する方法であって、個体に有効量の水不溶性セルロース誘導体を投与するステップを含む、方法。
個体におけるａ）アテローム生成性の脂質異常症、ｂ）インスリン抵抗性、ｃ）炎症性状態または炎症状態およびｄ）血栓準備状態の症状のうち１つ以上を予防または処置する方法であって、個体に有効量の水不溶性セルロース誘導体を投与するステップを含む、方法。
Ｃ−反応性タンパク、プラスミノゲン活性化因子阻害剤−１もしくは肝性リパーゼまたはこれらの２つもしくは３つの、個体の体内組織中での発現レベルまたは濃度を支配する方法であって、個体に有効量の水不溶性セルロース誘導体を投与するステップを含む、方法。
アディポネクチンの個体の体内組織中での発現レベルまたは濃度を支配する方法であって、個体に有効量の水不溶性セルロース誘導体を投与するステップを含む、方法。
個体における循環器疾患またはＩＩ型糖尿病を予防または処置する方法であって、個体に有効量の水不溶性セルロース誘導体を投与するステップを含む、方法。
水不溶性セルロース誘導体が水不溶性セルロースエーテルである、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
水不溶性セルロースエーテルがエチルセルロースである、請求項６に記載の方法。
水不溶性セルロース誘導体が、平均粒子サイズ０．１ミリメートル未満の粉末である、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
投与される水不溶性セルロース誘導体の１日当たりの量が、乾燥質量基準で、個体の１日当たりの食事の総質量の１〜１０パーセントの範囲である、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
水不溶性セルロース誘導体を、水溶性セルロース誘導体との組合せで投与する、請求項１〜９のいずれかに記載の方法。
個体におけるメタボリックシンドロームまたはメタボリックシンドロームに関連する症状もしくは健康状態を予防または処置するための薬剤、医薬組成物、食品、食品含有成分もしくは食品サプリメント、または栄養含有成分もしくは栄養サプリメントを製造するための水不溶性セルロース誘導体の使用。
個体におけるａ）アテローム生成性の脂質異常症、ｂ）インスリン抵抗性、ｃ）炎症性状態または炎症状態および４）血栓準備状態の症状のうちの１つ以上を予防または処置するための薬剤、医薬組成物、食品、食品含有成分もしくは食品サプリメント、または栄養含有成分もしくは栄養サプリメントを製造するための水不溶性セルロース誘導体の使用。
Ｃ−反応性タンパク、プラスミノゲン活性化因子阻害剤−１もしくは肝性リパーゼまたはこれらの２つもしくは３つの、個体の体内組織中での発現レベルまたは濃度を支配するための薬剤、医薬組成物、食品、食品含有成分もしくは食品サプリメント、または栄養含有成分もしくは栄養サプリメントを製造するための水不溶性セルロース誘導体の使用。
アディポネクチンの個体の体内組織中での発現レベルまたは濃度を支配するための薬剤、医薬組成物、食品、食品含有成分もしくは食品サプリメント、または栄養含有成分もしくは栄養サプリメントを製造するための水不溶性セルロース誘導体の使用。
個体における循環器疾患またはＩＩ型糖尿病を予防または処置するための薬剤、医薬組成物、食品、食品含有成分もしくは食品サプリメント、または栄養含有成分もしくは栄養サプリメントを製造するための、水不溶性セルロース誘導体の使用。
水不溶性セルロース誘導体が、水不溶性セルロースエーテルである、請求項１１〜１５のいずれかに記載の使用。
水不溶性セルロースエーテルが、エチルセルロースである、請求項１６に記載の使用。
水不溶性セルロース誘導体が、平均粒子サイズ０．１ミリメートル未満の粉末である、請求項１１〜１７のいずれかに記載の使用。
水不溶性セルロース誘導体を、個体に投与する前に食用の脂肪または油に暴露する、請求項１１〜１８のいずれかに記載の使用。
水不溶性セルロース誘導体を、水溶性セルロース誘導体との組合せで用いる、請求項１１〜１８のいずれかに記載の使用。
メタボリックシンドロームまたはメタボリックシンドロームに関連する症状もしくは健康状態を予防または処置するための有効量の水不溶性セルロース誘導体を含む、薬剤、医薬組成物、食品、食品含有成分もしくは食品サプリメント、または栄養含有成分もしくは栄養サプリメント。
個体におけるａ）アテローム生成性の脂質異常症、ｂ）インスリン抵抗性、ｃ）炎症性状態または炎症状態およびｄ）血栓準備状態の症状のうち１つ以上を予防または処置するための有効量の水不溶性セルロース誘導体を含む、薬剤、医薬組成物、食品、食品含有成分もしくは食品サプリメント、または栄養含有成分もしくは栄養サプリメント。
Ｃ−反応性タンパク、プラスミノゲン活性化因子阻害剤−１もしくは肝性リパーゼまたはこれらの２つもしくは３つの、個体の体内組織中での発現レベルまたは濃度を支配するための有効量の水不溶性セルロース誘導体を含む、薬剤、医薬組成物、食品、食品含有成分もしくは食品サプリメント、または栄養含有成分もしくは栄養サプリメント。
アディポネクチンの個体の体内組織中での発現レベルまたは濃度を支配するための有効量の水不溶性セルロース誘導体を含む、薬剤、医薬組成物、食品、食品含有成分もしくは食品サプリメント、または栄養含有成分もしくは栄養サプリメント。
個体における循環器疾患またはＩＩ型糖尿病を予防または処置するための有効量の水不溶性セルロース誘導体を含む、薬剤、医薬組成物、食品、食品含有成分もしくは食品サプリメント、または栄養含有成分もしくは栄養サプリメント。
水不溶性セルロース誘導体が、水不溶性セルロースエーテルである、請求項１９〜２２のいずれかに記載の薬剤、医薬組成物、食品、食品含有成分もしくは食品サプリメント、または栄養含有成分もしくは栄養サプリメント。
水不溶性セルロースエーテルが、エチルセルロースである、請求項２３に記載の薬剤、医薬組成物、食品、食品含有成分もしくは食品サプリメント、または栄養含有成分もしくは栄養サプリメント。
水不溶性セルロース誘導体が、平均粒子サイズ０．１ミリメートル未満の粉末である、請求項１９〜２４のいずれかに記載の薬剤、医薬組成物、食品、食品含有成分もしくは食品サプリメント、または栄養含有成分もしくは栄養サプリメント。
水不溶性セルロース誘導体を水溶性セルロース誘導体との組合せで含む、請求項１９〜２５のいずれかに記載の薬剤、医薬組成物、食品、食品含有成分もしくは食品サプリメント、または栄養含有成分もしくは栄養サプリメント。
エチルセルロースを有効成分として含む、薬剤、医薬組成物、食品、食品含有成分もしくは食品サプリメント、または栄養含有成分もしくは栄養サプリメント。
メタボリックシンドロームまたはメタボリックシンドロームに関連する症状もしくは健康状態を予防または処置するための薬剤としての水不溶性セルロース誘導体。
個体におけるａ）アテローム生成性の脂質異常症、ｂ）インスリン抵抗性、ｃ）炎症性状態または炎症状態およびｄ）血栓準備状態の症状のうちの１つ以上を予防または処置するための薬剤としての水不溶性セルロース誘導体。
Ｃ−反応性タンパク、プラスミノゲン活性化因子阻害剤−１もしくは肝性リパーゼまたはこれらの２つもしくは３つの、体内組織中での発現レベルまたは濃度を支配するための薬剤としての水不溶性セルロース誘導体。
アディポネクチンの、個体の体内組織中での発現レベルまたは濃度を支配するための薬剤としての水不溶性セルロース誘導体。
個体における循環器疾患またはＩＩ型糖尿病を予防または処置するための薬剤としての水不溶性セルロース誘導体。
水不溶性セルロースエーテルである、請求項３１〜３５のいずれかに記載の水不溶性セルロース誘導体。
エチルセルロースである、請求項３６に記載の水不溶性セルロース誘導体。
平均粒子サイズが０．１ミリメートル未満である、請求項３１〜３７のいずれかに記載の水不溶性セルロース誘導体。