JP2010505865A - エーテル結合およびカルバメート結合を介する四置換ｎｄｇａ誘導体ならびにそれらの合成および薬学的使用 - Google Patents

Abstract

エーテル結合またはカルバメート結合によってそれぞれのヒドロキシ残基のＯ基に結合した側鎖を介して、炭素原子またはヘテロ原子によって結合した種々の末端基を含むノルジヒドログアイアレチン酸誘導体化合物、薬学的組成物、これらを作製する方法、ならびに疾患および障害、特に、例えばＨＩＶ感染、ＨＰＶ感染、もしくはＨＳＶ感染などのウイルス感染、例えば種々の型の関節炎および炎症性腸疾患などの炎症性疾患、例えば糖尿病などの代謝疾患、例えば高血圧症および黄斑変性などの脈管疾患、または例えば広範な型の癌などの増殖性疾患から生じるかまたは関連する疾患の処置のための、これらの使用の方法およびこれらを備えるキットが開示される。

Description

（関連出願の引用）
本願は、２００６年１０月２日に出願された米国仮特許出願番号６０／８２７，７７６の利益を主張し、この米国仮特許出願の開示は、本明細書中に参考として援用される。

（発明の背景）
本発明は、ノルジヒドログアイアレチン酸誘導体、これらを作製する方法、ならびにウイルス感染、炎症性疾患、代謝疾患、脈管疾患（心血管疾患を含む）および増殖性疾患（例えば、癌）を処置するためにこれらを使用する方法に関する。

ノルジヒドログアイアレチン酸（ＮＤＧＡ、式Ｉ）は、以下の化学構造を有し、この化学構造中に、２つのカテコール基および１つの２，３−ジメチルブタン架橋が存在する。このブタン架橋は、２つのカテコール部分を、４位を介して連結する。ＮＤＧＡは、Ｌａｒｒｅａ ｔｒｉｄｅｎｔａｔａ（米国南西部およびメキシコに固有の砂漠植物）の葉の樹脂から単離され得る、天然化合物である。ＮＤＧＡは、（２Ｓ，３Ｒ）というメソ型の配置を有し、この配置は対称であるので、光学活性ではない。

ＮＤＧＡおよびその誘導体の研究は、最近、増加する興味を引き付けている。多数のＮＤＧＡ誘導体が報告されており、そして以下のように分類され得る：
タイプ１：エーテル結合したＮＤＧＡであり、最も一般的なＮＤＧＡ誘導体。置換された基が、カテコール部分のヒドロキシのうちの１つ以上において化学結合している。

タイプ２：エステル結合したＮＤＧＡ誘導体。置換された基が、カテコール部分のヒドロキシ基のうちの１つ以上に共有結合している。

タイプ３：末端環ＮＤＧＡ誘導体。カテコール部分のヒドロキシが一緒に結合して、エーテル結合またはカーボネート結合を介して５員〜６員環を形成している。

タイプ４：二置換ＮＤＧＡ誘導体。カテコールの一方のヒドロキシ基がメチル化されており、そして他方のヒドロキシ基が置換された基に共有結合している。

タイプ５：フェニル環修飾。置換された基がフェニル環に化学結合している。

タイプ６：ブタン架橋修飾。この架橋の中の２つのメチル基が除去されているか、または置換された基で修飾されている。

ＮＤＧＡおよびその合成誘導体は、多数の特徴を有する。リポキシゲナーゼインヒビターであるので、ＮＤＧＡは、ラットにおいて嚢胞性腎症を誘導し得る（非特許文献１）^１。さらに、ＮＤＧＡは、種々の生物活性（プロテインキナーゼＣの阻害（非特許文献２）^２、アポトーシスの誘導（非特許文献３）^３、細胞膜の変質（非特許文献４）^４、細胞Ｃａ^２＋レベルの上昇（非特許文献５）^５および平滑筋細胞におけるＣａ^２＋チャネルの活性化（非特許文献６）^６、インビトロでの予め形成されたアルツハイマーβ−アミロイド小繊維の破壊（非特許文献７）^７、酸化防止（非特許文献８）^８などが挙げられる）を示す。この天然産物であるＮＤＧＡは、世界の一部において、脂肪およびバターを保存するための食品添加物として市場で使用されている。最近、植物リグナンＮＤＧＡの誘導体が、ウイルス転写の阻害によって、ウイルス複製を遮断するために使用されている（非特許文献９〜１６）^９−１６。これらの化合物は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）^９−１３、単純疱疹ウイルス（ＨＳＶ）^{１４，１５}、およびヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）転写物^１６の産生を、これらのＳｐ１依存プロモーターの脱活性化によって阻害し得る。さらに、（テトラ−Ｏ−メチル）ノルジヒドログアイアレチン酸（Ｍ_４Ｎ，式ＩＩ，テトラメプトコル（ｔｅｒａｍｅｐｒｏｃｏｌ））は、抗ＨＩＶプロウイルス転写インヒビターとして機能し得、そして培養物中およびマウス中で、種々の形質転換されたヒト細胞およびマウス細胞の成長の停止を引き起こす（非特許文献１７〜１９）^{１７−１９}。化合物Ｍ_４Ｎは、現在、ヒト癌に対する臨床治験中である。

Ｍ_４Ｎ（式ＩＩ）は、顕著に効果的かつ非毒性の抗癌剤であるが、Ｍ_４Ｎおよび他の数種のメチル化ＮＤＧＡは全て、乏しい水溶性を示し、このことは、特定の薬物作用研究へのこれらの化合物の応用をいくらか制限している。この問題を回避するために、ＮＤＧＡの水溶性誘導体である（テトラ−Ｏ−ジメチルグリシル）ノルジヒドログアイアレチン酸（Ｇ_４Ｎ，式ＩＩＩ）が、設計および合成された^{１１，１８}。

Ｇ_４Ｎは、ＨＩＶ−１、ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２^１７に対する非常に効果的な変異非感受性インヒビターである。しかし、Ｇ_４Ｎは、いくらか不安定であり、そして水溶液中での比較的短い半減期を有する。このことは、報告によれば、ＮＤＧＡ主骨格にジメチルグリシン部分を接続するエステル結合に起因する^１８。

Ｔｒａｎｇ，Ｔ．；Ｓｔｕｔａｋ，Ｍ．；Ｑｕｉｒｉｏｎ，Ｒ．；Ｊｈａｍａｎｄａｓ，Ｋ．Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００３，１４０，２９５−３０４． Ｎａｋａｄａｔｅ，Ｔ．Ｊｐｎ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９８９，４９，１−９． Ｈａｕｓｏｔｔ，Ｂ．；Ｇｒｅｇｅｒ，Ｈ．；Ｍａｒｉａｎ，Ｂ．Ｊ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２００３，１２９，５６９−５７６． Ｆｕｊｉｗａｒａ，Ｔ．；Ｍｉｓｕｍｉ，Ｙ．；Ｉｋｅｈａｒａ，Ｙ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｍ．２００３，３０１，９２７−９３３． Ｃｈｅｎｇ，Ｊ．Ｓ．；Ｊａｎ，Ｃ．Ｒ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．ＩｎＶｉｔｒｏ２００２，１６，４８５−４９０． Ｙａｍａｍｕｒａ，Ｈ．；Ｎａｇａｎｏ，Ｎ．；Ｈｉｒａｎｏ，Ｍ．；Ｍｕｒａｋｉ，Ｋ．；Ｗａｔａｎａｂｅ，Ｍ．Ｉｍａｉｚｕｍｉ，Ｙ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．１９９９，２９１，１４０−１４６． Ｏｎｏ，Ｋ．；Ｈａｓｅｇａｗａ，Ｋ．；Ｙｏｓｈｉｉｋｅ，Ｙ．；Ｔａｋａｓｈｉｍａ，Ａ．；Ｙａｍａｄａ，Ｍ．；Ｎａｉｋｉ，Ｈ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．２００２，８１，４３４−４４０． Ｌｅｅ，Ｃ．Ｈ．；Ｊａｎｇ，Ｙ．Ｓ．；Ｈｅｒ，Ｓ．Ｊ．；Ｍｏｏｎ，Ｙ．Ｍ．；Ｂａｅｋ，Ｓ．Ｊ．；Ｅｌｉｎｇ，Ｔ．Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ．Ｒｅｓ．２００３，２８９，３３５−３４１． Ｈｗｕ，Ｊ．Ｒ．；Ｔｓｅｎｇ，Ｗ．Ｎ．；Ｇｎａｂｒｅ，Ｊ．；Ｇｉｚａ，Ｐ．；Ｈｕａｎｇ，Ｒ．Ｃ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９８，４１，２９９４−３０００． Ｈｕａｎｇ，Ｒ．Ｃ．；Ｌｉ，Ｙ．；Ｇｉｚａ，Ｐ．Ｅ．；Ｇｎａｂｒｅ，Ｊ．Ｎ．；Ａｂｄ−Ｅｌａｚｅｍ，Ｉ．Ｓ．；Ｋｉｎｇ，Ｋ．Ｙ．；Ｈｗｕ，Ｊ．Ｒ．Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ．２００３，５８，５７−６４． Ｋｉｎｇ，Ｋ．Ｙ．；Ｈａｋｉｍｅｌａｈｉ，Ｇ．Ｈ．；Ｈｕａｎｇ，Ｒ．Ｃ．；Ｈｗｕ，Ｊ．Ｒ．Ｊ．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２００２，１３，２４８−２５７． Ｇｎａｂｒｅ，Ｊ．Ｎ．；Ｂｒａｄｙ，Ｊ．Ｎ．；Ｃｌａｎｔｏｎ，Ｄ．Ｊ．；Ｉｔｏ，Ｙ．；Ｄｉｔｔｍｅｒ，Ｊ．；Ｂａｔｅｓ，Ｒ．Ｂ．；Ｈｕａｎｇ，Ｒ．Ｃ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １９９５，９２，１１２３９−１１２４３． Ｇｎａｂｒｅ，Ｊ．；Ｉｔｏ，Ｙ．；Ｍａ，Ｙ．；Ｈｕａｎｇ，Ｒ．Ｃ．Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ａ．１９９６，７１９，３５３−３６４ Ｃｈｅｎ，Ｈ．；Ｔｅｎｇ，Ｌ．；Ｌｉ，Ｊ．；Ｐａｒｋ，Ｒ．；Ｍｏｌｄ，Ｄ．Ｅ．；Ｇｎａｂｒｅ，Ｊ．；Ｈｗｕ，Ｊ．Ｒ．；Ｔｓｅｎｇ，Ｗ．Ｎ．；Ｈｕａｎｇ，Ｒ．Ｃ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９８，４１，３００１−３００７． Ｐａｒｋ，Ｒ．；Ｇｉｚａ，Ｐ．Ｅ．；Ｍｏｌｄ，Ｄ．Ｅ．；Ｈｕａｎｇ，Ｒ．Ｃ．Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ．２００３，５８，３５−４５． Ｃｒａｉｇｏ，Ｊ．；Ｃａｌｌａｈａｎ，Ｍ．；Ｈｕａｎｇ，Ｒ．Ｃ．；ＤｅＬｕｃｉａ，Ａ．Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ．２０００，４７，１９−２８． Ｃｈａｎｇ，Ｃ．−Ｃ．；Ｈｅｌｌｅｒ，Ｊ．Ｄ．；Ｋｕｏ，Ｊ．；Ｈｕａｎｇ，Ｒ．Ｃ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ２００４，１０１，１３２３９−１３２４４． Ｈｅｌｌｅｒ，Ｊ．Ｄ．；Ｋｕｏ，Ｊ．；Ｗｕ，Ｔ．Ｃ．；Ｋａｓｔ，Ｗ．Ｍ．；Ｈｕａｎｇ，Ｒ．Ｃ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００１，６１，５４９９−５５０４． Ｐａｒｋ，Ｒ．；Ｃｈａｎｇ，Ｃ．Ｃ．；Ｌｉａｎｇ，Ｙ．Ｃ．；Ｃｈｕｎｇ，Ｙ．；Ｈｅｎｒｙ，Ｒ．Ａ．；Ｌｉｎ，Ｅ．；Ｍｏｌｄ，Ｄ．Ｅ．；Ｈｕａｎｇ，Ｒ．Ｃ．Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，２００５，１１（１２），４６０１−４６０９．

従って、改善された水溶性および良好な安定性を有し、所望の薬学的効果を有する、水溶性化合物および疎水性化合物の両方としての、ＮＤＧＡ誘導体が必要とされている。本発明者らは、これらの利点を有し、そして治療組成物および処置方法において有用な、ＮＤＧＡの新規誘導体を開発した。

（発明の簡単な要旨）
本発明は、ノルジヒドログアイアレチン酸誘導体化合物、薬学的組成物、これらを作製する方法、ならびにこれらを使用する方法およびキット（疾患および障害（特に、ウイルス感染、炎症性疾患、代謝疾患、脈管疾患または増殖性疾患から生じる疾患またはこれらに関連する疾患）の処置のためのものを含む）に関する。

本発明の１つの局面は、一般構造（式ＩＶ）：

を有する「Ｓｂ_４Ｎ」と表されるノルジヒドログアイアレチン酸誘導体化合物、およびその薬学的に受容可能な塩に関する。

この化合物は、ノルジヒドログアイアレチン酸（ＮＤＧＡ）骨格を有し、この骨格は、「Ｓｂ_４Ｎ」との表現において「Ｎ」により表される。４つの基Ｘは、ＮＤＧＡヒドロキシル基のＨを置換しており（ときどき、「置換された基Ｘ」と称される）、「Ｓｂ_４Ｎ」において「Ｓｂ_４」により表される。

Ｘは、
−Ａ−Ｒ；
−（ＣＨ_２）_ｘＨａｌであって、ここでｘは、１〜１０の整数であり、そしてＨａｌは、ハロゲン原子、すなわち、塩素、フッ素、臭素またはヨウ素のうちのいずれかである、−（ＣＨ_２）_ｘＨａｌ；
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｙＨであって、ここでｙは、１〜１０の整数である、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｙＨ；および

からなる群より選択されるカルバメート結合した基からなる群より選択され、
ここでｎは、１〜６の整数であり、Ｚ_１は、２個〜６個の炭素および必要に応じて１個〜３個のハロゲン原子の飽和直鎖炭化水素鎖であり、Ｚ_２は、０〜３個の二重結合を必要に応じて含み、そしてＯ、ＮおよびＳのうちのいずれかの１個〜３個の原子を必要に応じて含む、５員〜７員環であり、そしてＺ_３は、メチルまたはエチルである。

Ｘが−Ａ−Ｒである場合、Ｒは末端基であり、そしてＡは、任意のヘテロ原子を含む直鎖飽和炭化水素側鎖であり、この側鎖は、一端において、エーテル結合またはカルバメート結合によって、それぞれのヒドロキシ残基のＯ基に結合しており、そして他端において、末端基Ｒ中の炭素原子またはヘテロ原子に結合している。

側鎖Ａは、Ｏ、ＮおよびＳからなる群より選択される１個〜５個のヘテロ原子を必要に応じて有するＣ_２〜Ｃ_１６直鎖飽和炭化水素鎖であって、それぞれのＮＧＤＡのヒドロキシ残基のＯ基にエーテル結合を介して結合している、Ｃ_２〜Ｃ_１６直鎖飽和炭化水素鎖；ならびに１〜５単位のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖からなる群より選択される。

末端基Ｒは、
５員〜７員の炭素環式環であって、１個〜３個のＮ、ＯまたはＳのヘテロ原子を有する完全に飽和した環；６員環もしくは７員環については１個〜３個の二重結合、そして５員環については１個〜２個の二重結合を含む環であって、この５員〜７員の環について１個〜３個のＮ、ＯまたはＳのヘテロ原子を有する、環；カルバメート結合、尿素結合、カーボネート結合またはアミド結合を含む環からなる群より選択される、５員〜７員の炭素環式環；ならびに
水溶性の基であって、スルホン酸のアルカリ金属塩；ホスホン酸のアルカリ金属塩；薬学的に受容可能な塩；糖およびポリヒドロキシ基からなる群より選択される、水溶性の基、
からなる群より選択される。

ここでＸは、

であり、
ａは、３〜１６の整数であり、そしてｂは、４〜１６の整数である。

本発明の別の局面は、Ｓｂ_４Ｎ化合物および薬学的に受容可能なキャリアを、必要に応じて他の薬学的に受容可能な賦形剤と共に含む、組成物である。

本発明のなお別の局面は、本明細書中で以下に記載されるようなＳｂ_４Ｎ化合物を作製する方法である。

本発明の別の局面は、ウイルス感染の予防的に、またはウイルス感染を処置するために有効な量のＳｂ_４Ｎ化合物を、単独でかまたは薬学的組成物の一部として、被験体に投与する方法である。

本発明のなお別の局面は、増殖性疾患の予防的に、または増殖性疾患を処置するために有効な量のＳｂ_４Ｎ化合物を、単独でかまたは薬学的組成物の一部として、被験体に投与する方法である。

本発明の別の局面は、炎症性疾患の予防的に、または炎症性疾患を処置するために有効な量のＳｂ_４Ｎ化合物を、単独でかまたは薬学的組成物の一部として、被験体に投与する方法である。

本発明のなお別の局面は、代謝疾患の予防的に、または代謝疾患を処置するために有効な量のＳｂ_４Ｎ化合物を、単独でかまたは薬学的組成物の一部として、被験体に投与する方法である。

本発明のなお別の局面は、脈管疾患の予防的に、または脈管疾患を処置するために有効な量のＳｂ_４Ｎ化合物を、単独でかまたは薬学的組成物の一部として、被験体に投与する方法である。

本発明のさらに別の局面は、Ｓｂ_４Ｎ化合物を含有する薬学的組成物、およびウイルス感染、増殖性疾患、炎症性疾患、代謝疾患または脈管疾患の予防的または処置するためのこの薬学的組成物の使用説明書を含む、キットである。

（発明の詳細な説明）
上記のように、本発明は、ノルジヒドログアイアレチン酸誘導体化合物、これらの化合物を含有する薬学的組成物、これらを作製する方法、ならびに疾患および障害（特に、ウイルス感染（例えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）（全ての亜型）、単純疱疹ウイルス１および２（ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２）、水痘−帯状疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス、エプスタイン−バーウイルス、ポックスウイルス（痘瘡、牛痘、サル痘、ワクシニア）、オルトヘパドナウイルス、ＪＣウイルス、およびＢＫウイルスにより引き起こされる感染であるが、これらに限定されない）；炎症性疾患（例えば、種々の型の関節炎および炎症性腸疾患であるが、これらに限定されない）；代謝疾患（例えば、糖尿病であるが、これに限定されない）；脈管疾患（例えば、高血圧症、心脈管疾患および黄斑変性）；ならびに増殖性疾患（例えば、種々の型の癌））の処置のためが挙げられるこれらの使用およびキットに関する。

本発明は、癌およびウイルス（ＨＩＶが挙げられる）を処置するために使用される薬剤；ＮＤＧＡに関連する化学構造を有する誘導体（このような誘導体が、（テトラ−Ｏ−メチル）ノルジヒドログアイアレチン酸（Ｍ_４Ｎ）（テトラメプトコル）（その少なくともいくつかの処方物は経口で生体利用可能である）に対してより強力かつ良好なＰＤ／ＰＫプロフィールを有し、そして副作用が少ないか存在しない場合）を用いる経験を含む考慮に基づく。本発明のＮＤＧＡ誘導体は、メソ形態であり、それらのエナンチオマーの可能な混合物をまったく有さず、このことは、化学的特徴付けおよび生物学的特徴付けをより容易にする。ＮＤＧＡ親化合物の修飾のための置換官能基は、首尾よい薬物分子修飾のために使用される最も一般的な化学基から選択される。これらの基は、ＨＣｌ塩形態もしくは他の塩形態で、または遊離塩基の形態で、かなりの水溶性を有するという点で、合理的な水溶性で容易に合成され得、そして容易に処方され得る。本発明のＮＤＧＡ誘導体のうちの他のものは、疎水性である。本発明のＮＤＧＡ誘導体は、これらの誘導体が水溶性化合物であっても疎水性化合物であっても、良好な安定性を有する。これらの誘導体は、市販の生成のために、容易に規模を拡大され得る。

本発明のＮＤＧＡ誘導体は、ＮＤＧＡが広範な生物学的活性を有する天然化合物であるという事実に基づいて、開発された。ＮＤＧＡは、多数の副作用を有し、これらの副作用は、本発明の誘導体により克服される。これらの誘導体は、改善された生物学的活性を有する。本発明の開発に導く研究はまた、ＮＤＧＡ誘導体（例えば、Ｍ_４Ｎ）のヒドロキシ基修飾が、腫瘍細胞の複製を防止し、そして腫瘍細胞死（アポトーシス）を選択的に誘導することを示した。このことは、ｃｄｃ２（ｐ３４）およびサービビンの、Ｓｐ１により調節される産生を防止することによって達成される。サービビンとは、前癌性細胞および癌性細胞において過剰発現されたアポトーシスタンパク質のインヒビター（ＩＡＰ）であり、そして健常な成体細胞中ではほとんど見出されない。Ｍ_４Ｎはまた、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、単純疱疹ウイルス（ＨＳＶ）、およびヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）の増殖を防止する。このことは、ウイルス増殖のために必須であるウイルスのＳｐ１依存プロモーターの脱活性化により達成される。本発明のＮＤＧＡ誘導体は、ＮＤＧＡのヒドロキシル基を修飾するために適切な官能基を使用することによって、ｃｄｃ２およびサービビンのＳｐ１により調節される産生を防止する活性を顕著に改善する。

（定義）
本明細書中で使用するために適切な「緩衝剤」としては、当該分野において慣習的である任意の緩衝剤（例えば、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、イミダゾール、および重炭酸塩）が挙げられる。

「シクロデキストリン」とは、本明細書中で使用される場合、非修飾シクロデキストリンまたは修飾シクロデキストリンを意味し、そしてα−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリンおよび修飾を含む任意の修飾シクロデキストリン（例えば、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（「ＨＰ−β−ＣＤ」）またはスルホブチルエーテルβ−シクロデキストリン（「ＳＢＥ−β−ＣＤ」））が挙げられるが、これらに限定されない。シクロデキストリンは、代表的に、６個の糖（α−シクロデキストリン）、７個の糖（β−シクロデキストリン）、および８個の糖（γ−シクロデキストリン）を有し、１個の糖あたり３個までの置換を有し、従って、０〜２４個の第一級置換が可能である（第一級置換とは、シクロデキストリン環に直接結合した置換として定義される）。本発明において使用される、修飾シクロデキストリンまたは非修飾シクロデキストリンは、任意の適切な数および位置の、第一級置換または他の修飾を有し得る。

本発明の「ＮＤＧＡ誘導体」とは、本明細書中で使用される場合、本明細書中以下で「Ｓｂ_４Ｎ」と示されるＮＤＧＡの誘導体を意味する。

「薬学的に受容可能なキャリア」とは、任意の従来の型の材料または処方助剤をカプセル化する、非毒性の、半固体または液体の、充填剤、希釈剤をいう。「薬学的に受容可能なキャリア」は、使用される投薬量および濃度において、受容者に対して非毒性であり、そしてその処方物緒他の成分と適合性である。例えば、本発明のカテコール性ブタンまたはＮＤＧＡ誘導体を含有する処方物のためのキャリアは、好ましくは、酸化剤、およびこのような誘導体に対して有害であることが既知である他の化合物を含有しない。適切なキャリアとしては、水、ブドウ糖、グリセロール、生理食塩水、エタノール、緩衝液、ジメチルスルホキシド、Ｃｒｅｍａｐｈｏｒ ＥＬ、およびこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。このキャリアは、さらなる薬剤（例えば、湿潤剤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤）を含み得る。他の材料（例えば、酸化防止剤、湿潤剤、粘度安定剤、および類似の薬剤）が、必要に応じて添加され得る。

「薬学的に受容可能な塩」としては、本明細書中で使用される場合、酸付加塩（ポリペプチドの遊離アミノ基を用いて形成される）が挙げられ、これらの塩は、無機酸（例えば、塩酸もしくはリン酸）、または有機酸（酢酸、マンデル酸およびシュウ酸など）と形成される。遊離カルボキシル基を用いて形成される塩がまた、無機塩基（例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム、または水酸化鉄（ＩＩＩ））および有機塩基（例えば、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、２−エチルアミノエタノール、およびヒスチジンなど）から誘導され得る。本発明のＮＤＧＡ誘導体の薬学的に受容可能な塩の非限定的な例としては、例えば、以下の一般式の塩：
［Ｓｂ_４Ｎ］・ｋ［酸］
が挙げられ、この式において、ＮはＮＤＧＡであり、Ｓｂは、以下の表１および表２に記載されるような置換された基Ｘであり、ｋは、整数または整数ではない数であり、そして酸は、非限定的な表Ａに例示されるような有機酸または無機酸である：

用語「薬学的に受容可能な賦形剤」としては、本明細書中で使用される場合、公共に容易に入手可能である、ビヒクル、アジュバント、または希釈剤もしくは他の補助物質（例えば、当該分野において慣用的である物質）が挙げられる。例えば、薬学的に受容可能な補助物質としては、ｐＨ調整剤および緩衝剤、張度調整剤、安定剤、湿潤剤などが挙げられる。

本明細書中で、例えば、用語「５員環」、「６員環」および「７員環」において使用される場合の「環」とは、他に特定されない限り、本明細書中で使用される場合、任意の示されたヘテロ原子を含む、炭素環式環をいう。

用語「被験体」、「宿主」、および「患者」は、本明細書中で交換可能に使用され、本発明の組成物で処置される動物をいい、サル、ヒト、ネコ、イヌ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、家畜哺乳動物、スポーツ用の哺乳動物、および哺乳動物ペットが挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書中のＮＤＧＡ誘導体に関する「実質的に精製された」化合物とは、本発明のＮＤＧＡ誘導体ではない化合物（本明細書中以下で、「非ＮＤＧＡ誘導体材料」）を実質的に含まない、化合物である。実質的に含まないとは、非ＮＤＧＡ誘導体材料を少なくとも５０％、好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０％、そしてなおより好ましくは少なくとも９０％含まないことを意味する。

本明細書中で使用される場合、用語「処置」、「処置する」などは、所望の薬理学的効果および／または生理学的効果を得ることをいう。この効果は、状態もしくは疾患またはその症状を完全にかまたは部分的に予防するという意味で、予防的であり得、そして／あるいは状態もしくは疾患および／またはこの状態または疾患に起因する有害な影響を部分的にかまたは完全に治癒するという意味で、治療的であり得る。従って、「処置」は、例えば、動物（好ましくは哺乳動物であり、より好ましくはヒト）における状態または疾患の任意の処置を網羅し、そして（ａ）状態または疾患に罹患しやすくあり得るがまだこの状態または疾患を有すると診断されていない被験体において、この状態または疾患が発症することを防止すること；（ｂ）状態または疾患を阻害すること（例えば、その発症を止めること）；および（ｃ）状態または疾患を軽減するか、緩和するか、または改善すること（例えば、この状態または疾患の後退を引き起こすこと）が挙げられる。

本発明は、例のみとして記載され、そして本発明をいかなる方法でも限定すると解釈されない。従って、本発明は、記載される特定の実施形態に限定されない。なぜなら、このような実施形態は、もちろん、変動し得るからである。本明細書中で使用される専門用語は、特定の実施形態を説明する目的のみであり、そして限定することを意図されないこともまた理解されるべきである。なぜなら、本発明の範囲は、本仮出願に基づく非仮出願に添付される特許請求の範囲によってのみ限定されるからである。

値の範囲が提供される場合、その範囲の上限と下限との間の各中間の値（その文脈がそうではないことを明白に示さない限り、その下限の単位の１０分の１まで）、および記載される範囲内の他の任意の記載される値または中間の値が、本発明の範囲内に含まれることが理解されるべきである。これらのより小さい範囲の上限および下限は、より小さい範囲に独立して含まれ得、そしてまた、記載される範囲における任意の具体的に排除される制限を条件として、本発明の範囲内に含まれる。記載される範囲がそれらの限度の一方または両方を含む場合、これらの含まれる限度のいずれかまたは両方を排除する範囲もまた、本発明に含まれる。

本明細書中で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、その文脈がそうではないことを明白に示さない限り、複数の対象物を包含することが、注意されなければならない。従って、例えば、「誘導体（ａ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ）」への言及は、複数のこのような誘導体を包含し、そして「ＮＤＧＡ誘導体（ｔｈｅ ＮＤＧＡ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ）」への言及は、１種以上のＮＤＧＡ誘導体、および本開示を考慮して当業者に公知であるその等価物への言及を包含する。

本明細書中に記載される全ての刊行物（特許、特許出願、および雑誌の論文を含む）は、それに引用される参考文献（これらもまた本明細書中に参考として援用される）も含めてその全体が、本明細書中に参考として援用される。本明細書中で議論される刊行物は、本願の出願日より前のそれらの開示のみについて提供される。本明細書中のいずれも、本発明が先行発明によるこのような刊行物よりも前の日付である資格を与えられないことの是認と解釈されるべきではない。さらに、提供される刊行物の日付は、実際の刊行日とは異なり得、このことは、個別に確認される必要があり得る。

上記のように、本発明の１つの局面は、以下の一般構造（式ＩＶ）：

を有するＳｂ_４Ｎノルジヒドログアイアレチン酸誘導体化合物、およびその薬学的に受容可能な塩に関する。

この化合物は、ノルジヒドログアイアレチン酸（ＮＤＧＡ）骨格を有し、この骨格は、「Ｓｂ_４Ｎ」の表現において「Ｎ」により表される。４つの基Ｘは、ＮＤＧＡのヒドロキシル基のＨを置換しており（ときどき、「置換された基Ｘ」と称される）、「Ｓｂ_４Ｎ」において「Ｓｂ_４」により表される。

Ｘは、
−Ａ−Ｒ；
−（ＣＨ_２）_ｘＨａｌであって、ここでｘは、１〜１０の整数であり、そしてＨａｌは、ハロゲン原子、すなわち、塩素、フッ素、臭素またはヨウ素のうちのいずれかである、−（ＣＨ_２）_ｘＨａｌ；
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｙＨであって、ここでｙは、１〜１０の整数である、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｙＨ；ならびに

からなる群より選択されるカルバメート結合した基からなる群より選択され、
ここでｎは、１〜６の整数であり、Ｚ_１は、２個〜６個の炭素および必要に応じて１個〜３個のハロゲン原子の飽和直鎖炭化水素鎖であり、Ｚ_２は、０〜３個の二重結合を必要に応じて含み、そしてＯ、ＮおよびＳのうちのいずれかの１個〜３個の原子を必要に応じて含む、５員〜７員環であり、そしてＺ_３は、メチルまたはエチルである。

Ｘが−（ＣＨ_２）_ｘＨａｌである場合、ｘは、好ましくは１〜３であり、そしてＨａｌは、塩素またはフッ素であり；より好ましくは、この例において、Ｘは、例えば、−（ＣＨ_２）_２Ｆである。

Ｘが−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｙＨである場合、ｙは、好ましくは１〜３であり、そしてより好ましくは、例えば、この例において、Ｘは−（ＣＨ_２）_２ＯＨ（ｙが１である場合）；または−（ＣＨ_２）_２−Ｏ−（ＣＨ_２）_２−ＯＨ（ｙが２である場合）である。

１つの条件は、Ｘが

である場合、
ａは、３〜１６の整数であり、そしてｂは、４〜１６の整数であることである。

Ｘの上記さらなる定義および条件に関して、側鎖Ａおよび末端基Ｒは、上記発明の簡単な要旨に記載されたものから選択され得、側鎖Ａおよび末端基Ｒは、以下の表１に表の形式で記載される：

適切な側鎖Ａの非限定的な例は、一端においてＮＤＧＡのそれぞれのヒドロキシ残基のＯ基にエーテル結合を介して結合した、Ｃ_２〜Ｃ_４の直鎖（例えば、エチレン、プロピレンまたはブチレン）；ＯまたはＮのヘテロ原子を有し、そして鎖がＮＧＤＡのそれぞれのヒドロキシ残基のＯ基にエーテル結合を介して結合している、Ｃ_２〜Ｃ_４の直鎖（例えば、エチレン、プロピレンまたはブチレン；１〜３単位のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖；あるいはカルバメート結合である。この側鎖は、他端において、末端基Ｒの炭素原子またはヘテロ原子に結合している。

適切な末端基Ｒの非限定的な例は、以下の表２に記載されている：

エーテル結合したＮＤＧＡ誘導体を合成するための一般方法は、以下のとおりである：
一般方法１：ハロゲン化アルキルとＮＤＧＡとの、塩基性触媒条件下での反応：

一般方法２：トルエンスルホン酸活性化アルコールとＮＤＧＡとの反応：

カルバメート結合したＮＤＧＡ誘導体を合成するための一般方法は、以下のとおりである：
一般方法１：イソシアネート化合物とＮＤＧＡとの反応

一般方法２：Ｎ−スクシンイミジルＮ−置換カルバメートとＮＤＧＡとの反応

本発明による例示的な特定のＮＤＧＡ誘導体化合物の調製の詳細は、以下で実施例の節に記載される。

本発明のＮＤＧＡ誘導体は、適切な処方物中で（好ましくは、適切な場合には薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤を含む薬学的組成物中の活性成分としてか、またはこの組成物中の２種以上の活性成分のうちの１つとしてであるが、排他的ではない）、このような処置を必要とする被験体に、鼻腔内送達によってか、吸入によってか、静脈内で（例えば、中心静脈内への注入または注射によって）か、静脈内で（閉塞ありまたはなしで）か、腹腔内にか、間隙にか、皮下にか、経皮的にか、皮内にか、眼内にか、筋肉内にか、局所的にか、頭蓋内にか、心室内にか、経口的にか、または頬にか、あるいは移植によって、安全に投与され得る。

さらに、これらのＮＤＧＡ誘導体は、このような処置を必要とする被験体に、溶液、懸濁物、半固体もしくは固体の形態で適切なように、または上記１以上の経路を介する投与のためのリポソーム処方物、ナノ粒子処方物、もしくはミセル処方物中で、安全に投与され得る。

さらに、リポソーム処方物、ナノ粒子処方物、またはミセル処方物中のＮＤＧＡ誘導体は、生分解性ポリマー処方物中に包埋され得、そして例えば、皮下移植によって、安全に投与され得る。

本明細書中での投与のための組成物は、任意の適切な形態であり得、例えば、限定されないが、溶液、懸濁物、錠剤、癌剤、カプセル、徐放処方物または粉末、液体（親水性もしくは疎水性のいずれか）、粉末（例えば、凍結乾燥から生じるもの）、エアロゾル、水性組成物もしくは水溶性組成物、疎水性組成物、リポソーム組成物、ミセル組成物（例えば、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０もしくはジブロックコポリマーをベースとするもの）、ナノ粒子組成物、ポリマー組成物、シクロデキストリン複合体組成物、エマルジョン、または「リポコア（ｌｉｐｏｃｏｒｅ）」と称される液体ベースのナノ粒子であり得る。

本発明は、組成物をさらに包含し、ＮＤＧＡ誘導体および薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤を含有する薬学的組成物が挙げられる。これらの組成物は、緩衝剤を含有し得、この緩衝剤は、ＮＤＧＡ誘導体の所望の用途に従って選択され、そしてまた、意図される用途のために適切な他の物質を含有し得る。当業者は、本開示を考慮して、意図される用途に適した、適切な緩衝剤（広範な種々の緩衝剤が当該分野において公知である）を容易に選択し得る。いくつかの例において、この組成物は、薬学的に受容可能な賦形剤を含有し得、種々の賦形剤が当該分野において公知である。本明細書中で使用するために適切な薬学的に受容可能な賦形剤は、種々の刊行物（例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ（Ｇｅｎｎａｒｏ，Ａ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，第１９版，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ（１９９５））；Ａｎｓｅｌら，（Ａｎｓｅｌ，Ｈ．Ｃ．ら，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，第７版，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ（１９９９））；およびＫｉｂｂｅ（Ｋｉｂｂｅ，Ａ．Ｈ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，第３版，Ａｍｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃ．）が挙げられる）に記載されている。

本明細書中の組成物は、潜在的な投与様式に従って処方される。従って、例えば、この組成物が鼻腔内または吸入により投与されることが意図される場合、この組成物は、このような目的のために当該分野において慣習的であるように、粉末またはエアロゾルの形態に転換され得る。他の処方物（例えば、経口送達または非経口送達のためのもの）もまた、当該分野において慣習的であるように使用される。

経口送達または注射可能送達のために適切な組成物または処方物としては、さらに、適応される疾患の処置のための、カテコール性ブタンを含有する薬学的組成物が挙げられ、この組成物は、薬学的に受容可能なキャリアおよび他の任意の賦形剤を用いて処方され、このキャリアは、（ａ）水溶性有機溶媒；（ｂ）シクロデキストリン（修飾シクロデキストリンを含む）；（ｃ）イオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤もしくは両性界面活性剤（ｄ）修飾セルロース；（ｅ）水不溶性脂質；およびキャリア（ａ）〜（ｅ）のうちのいずれかの組み合わせからなる群より選択される、可溶化剤および賦形剤のうちの少なくとも１つを含有する。

水溶性有機溶媒は、好ましくはジメチルスルホキシド以外のものであり得るが、必ずしも必須ではない。非限定的な例示的な水溶性有機溶媒としては、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）（例えば、ＰＥＧ ３００、ＰＥＧ ４００またはＰＥＧ ４００モノラウレート）、プロピレングリコール（「ＰＧ」）、ポリビニルピロリドン（「ＰＶＰ」）、エタノール、ベンジルアルコールまたはジメチルアセトアミドが挙げられる。

シクロデキストリンまたは修飾シクロデキストリンは、限定されないが、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、ＨＰ−β−ＣＤまたはＳＢＥ−β−ＣＤであり得る。

イオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤または両性界面活性剤としては、例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（ポリソルベートとしてもまた公知）（これは非イオン性界面活性剤であり、例えば、ポリソルベート２０およびポリソルベート８０であり、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０またはＴｗｅｅｎ（登録商標）８０として市販されている）、ｄ−α−トコフェリルポリエチレングリコール１０００スクシネート（「ＴＰＧＳ」）、グリセロールモノオレエート（モノオレイン酸グリセリンとしてもまた公知）、エステル化脂肪酸、またはエチレンオキシドとヒマシ油との３５：１のモル比での反応生成物（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬとして市販されている）などの界面活性剤が挙げられ得るが、これらに限定されない。好ましくは、特定の実施形態について、界面活性剤が非イオン性界面活性剤である場合、この非イオン性界面活性剤は、キサンタンガムの非存在下で存在する。

修飾セルロースの非限定的な例としては、エチルセルロース（「ＥＣ」）、ヒドロキシルプロピルメチルセルロース（「ＨＰＭＣ」）、メチルセルロース（「ＭＣ」）またはカルボキシメチルセルロース（「ＣＭＣ」）が挙げられる。本発明の１つの実施形態において、カテコール性ブタンは、修飾セルロースに可溶化され得、これは、使用前にエタノール（「ＥｔＯＨ」）で希釈され得る。

水不溶性脂質としては、例えば、油（例えば、ヒマシ油、ゴマ油またはハッカ油）、蝋（例えば、蜜蝋またはカルナウバ蝋）、および混合脂肪エマルジョン組成物（例えば、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（登録商標）（Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＆ Ｕｐｊｏｈｎ，現在はＰｆｉｚｅｒ、製造業者の推奨に従って使用される））が挙げられる。例えば、成人の投薬量は、２ｇの脂肪／体重ｋｇ／日（それぞれ２０ｍＬ／ｋｇ、１０ｍＬ／ｋｇおよび６．７ｍＬ／ｋｇのＩｎｔｒａｌｉｐｉｄ（登録商標）１０％、２０％および３０％）を超えないことが推奨されている。Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（登録商標）１０％は、１，０００ｍＬ中に、精製ダイズ油１００ｇ、精製卵リン脂質１２ｇ、グリセリン無水物２２ｇ、注射用水１，０００ｍＬになるまでの適量を含むと考えられる。ｐＨは、水酸化ナトリウムでｐＨ約８に調整される。Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（登録商標）２０％は、１，０００ｍＬ中に、精製ダイズ油２００ｇ、精製卵リン脂質１２ｇ、グリセリン無水物２２ｇ、注射用水１，０００ｍＬになるまでの適量を含む。ｐＨは、水酸化ナトリウムでｐＨ約８に調整される。Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（登録商標）３０％は、１，０００ｍＬ中に、精製ダイズ油３００ｇ、精製卵リン脂質１２ｇ、グリセリン無水物１６．７ｇ、注射用水１，０００ｍＬになるまでの適量を含む。ｐＨは、水酸化ナトリウムでｐＨ約７．５に調整される。これらのＩｎｔｒａｌｉｐｉｄ（登録商標）製品は、２５℃未満の制御された室温で貯蔵され、そして凍結させるべきではない。

本発明の１つの実施形態において、ＮＤＧＡ誘導体は、様々なキャリアに溶解されるかまたは溶解および希釈されて、動物（ヒトを含む）への経口投与のための液体組成物を形成する。例えば、この実施形態の１つの局面において、ＮＤＧＡ誘導体は、水溶性有機溶媒（例えば、ＰＥＧ ３００、ＰＥＧ ４００またはＰＥＧ ４００モノラウレート（「ＰＥＧ化合物」）あるいはＰＧ）に溶解される。別の実施形態において、ＮＤＧＡ誘導体は、修飾シクロデキストリン（例えば、ＨＰ−β−ＣＤまたはＳＢＥ−β−ＣＤ）に溶解される。なお別の実施形態において、本発明のＮＤＧＡ誘導体は、ＰＥＧ化合物とＨＰ−β−ＣＤとを含む組み合わせ処方物中に可溶化および／または希釈される。さらなる実施形態において、本明細書中のＮＤＧＡ誘導体は、修飾セルロース（例えば、ＨＰＭＣ、ＣＭＣまたはＥＣ）に溶解される。なお別の実施形態において、本明細書中のＮＤＧＡ誘導体は、修飾シクロデキストリンと修飾セルロースとの両方を含む別の組み合わせ処方物（例えば、ＨＰ−β−ＣＤおよびＨＰＭＣ、またはＨＰ−β−ＣＤおよびＣＭＣ）に溶解される。

なお別の実施形態において、ＮＤＧＡ誘導体は、イオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤または両性界面活性剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０、ＴＰＧＳまたはエステル化脂肪酸）に溶解される。例えば、本発明の化合物は、ＴＰＧＳ単独に溶解され得るか、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０単独に溶解され得るか、またはＴＰＧＳとＰＥＧ ４００との組み合わせ、もしくはＴｗｅｅｎ（登録商標）２０とＰＥＧ ４００との組み合わせなどに溶解され得る。

さらなる実施形態において、本発明のＮＤＧＡ誘導体は、水不溶性脂質（例えば、蝋、脂肪エマルジョン（例えば、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（登録商標））または油）に溶解される。例えば、本発明の化合物は、ハッカ油単独に溶解され得るか、ハッカ油とＴｗｅｅｎ（登録商標）２０とＰＥＧ ４００との組み合わせに溶解され得るか、ハッカ油とＰＥＧ ４００との組み合わせに溶解され得るか、ハッカ油とＴｗｅｅｎ（登録商標）２０との組み合わせに溶解され得るか、またはハッカ油とゴマ油との組み合わせに溶解され得る。

ＥＣは、上記例におけるＨＰＭＣまたはＣＭＣの代わりに用いられ得るか、あるいはＨＰＭＣまたはＣＭＣに添加され得る；ＰＥＧ ３００またはＰＥＧ ４００モノラウレートは、上記例におけるＰＥＧ ４００の代わりに用いられ得るか、またはＰＥＧ ４００に添加され得る；Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０は、上記例におけるＴｗｅｅｎ（登録商標）２０の代わりに用いられ得るか、またはＴｗｅｅｎ（登録商標）２０に添加され得る；そして他の油（例えば、トウモロコシ油、オリーブ油、ダイズ油、鉱油またはグリセロール）は、上記例におけるハッカ油またはゴマ油の代わりに用いられ得るか、あるいはハッカ油またはゴマ油に添加され得る。

さらに、加熱（例えば、約３０℃〜約９０℃の温度までの加熱）が、これらの組成物のうちのいずれかの処方の経過中に適用されて、本明細書中の化合物の溶解を達成し得るか、またはＮＤＧＡ誘導体の均一に分布した懸濁物を得ることができる。

なおさらなる実施形態において、ＮＤＧＡ誘導体は、固体として、付随するキャリアなしでかまたはキャリアの使用を伴ってかのいずれかで、経口投与され得る。１つの実施形態において、ＮＤＧＡ誘導体は、最初に、上記例においてのような液体キャリアに溶解され、そして続いて、経口組成物としての投与のための固体組成物にされる。例えば、ＮＤＧＡ誘導体は、修飾シクロデキストリン（例えば、ＨＰ−β−ＣＤ）に溶解され、そしてこの組成物が凍結乾燥されて、経口投与のために適切な粉末を与える。

さらなる実施形態において、ＮＤＧＡ誘導体は、ＴＰＧＳ溶液に、適切である場合には加熱を伴って溶解または懸濁されて、均一に分布した溶液または懸濁物を得る。冷却すると、この組成物はクリーム状になり、そして経口投与のために適切である。

なお別の実施形態において、ＮＤＧＡ誘導体は、油に溶解され、そして蜜蝋が添加されて、蝋状の固体組成物を生成する。

一般に、経口処方物を調製する際に、本明細書中のＮＤＧＡ誘導体は、最初に可溶化され、その後、他の賦形剤が添加されて、より高い安定性の組成物を生成する。不安定な処方物は望ましくない。不安定な液体処方物は、頻繁に、結晶性沈殿物または二相溶液を形成する。不安定な固体処方物は、頻繁に、粒子が粗く、塊に見え、そして時々、水っぽい液体を含む。最適な固体処方物は、滑らかで、均質に見え、そして狭い融点範囲を有する。一般に、処方物中の賦形剤の割合は、安定正に影響を与え得る。例えば、少なすぎる硬化剤（例えば、蜜蝋）は、この処方物を、上品な経口処方物のためには水っぽくし過ぎ得る。

従って、一般に、本発明の液体処方物については、使用される賦形剤は、本明細書中のＮＤＧＡ誘導体の良溶媒であるべきである。換言すれば、これらの賦形剤は、ＮＤＧＡ誘導体を、加熱することなく溶解し得るべきである。これらの賦形剤はまた、ＮＤＧＡ誘導体とは無関係に互いに適合性であり、これらの賦形剤が安定な溶液、懸濁物またはエマルジョンを形成し得るべきである。また、一般に、本発明の固体処方物については、使用される賦形剤はまた、ＮＤＧＡ誘導体の良溶媒であって、塊および不均一な処方物を回避するべきである。水っぽ過ぎるかまたはきめが不均質な固体処方物（これらは望ましくない）を回避するために、賦形剤は、ＮＤＧＡ誘導体の非存在下でさえも滑らかな均質な固体を形成するように、互いに適合性であるべきである。

本発明は、さらに、本発明の薬学的組成物を製造する方法に関し、この方法は、ＮＤＧＡ誘導体を、好ましくは実質的に精製された形態で作製または提供する工程、この組成物を薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤と混合する工程、および所望の投与様式に適合性である様式でこの組成物を処方する工程を包含する。

本発明の化合物および組成物は、例えば、増殖性疾患（例えば、悪性、前悪性もしくは良性の腫瘍）、ウイルス性疾患、炎症性疾患、代謝疾患または脈管疾患を有する被験体に処置を提供することを望む状況で、治療剤としての用途を見出す。

本発明の化合物および組成物は、種々の腫瘍および癌（血液学的悪性疾患（例えば、白血病（例えば、急性もしくは慢性のリンパ芽球性白血病、急性もしくは慢性の骨髄性白血病、急性もしくは慢性のリンパ性白血病、急性もしくは慢性の骨髄性白血病、小児期急性白血病、慢性リンパ性白血病、ヘアリーセル白血病）、悪性皮膚Ｔ細胞、菌状息肉腫、非悪性線維性皮膚Ｔ細胞リンパ腫、リンパ腫様丘疹症、Ｔ細胞豊富皮膚リンパ様過形成、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫）、水疱性類天疱瘡、円板状エリテマトーデス、扁平苔癬、副腎皮質癌腫、肛門癌、総胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨肉腫／悪性線維性組織球腫、神経腫瘍および悪性疾患（例えば、神経芽細胞腫、多形性グリア芽細胞腫、神経膠星状細胞腫、神経膠腫、脳幹神経膠腫、脳腫瘍脳室上衣細胞腫、髄芽細胞腫、女性および男性の乳癌）、胃腸の類癌腫、副腎皮質の癌腫、膵島細胞の癌腫、明細胞癌、腱鞘の明細胞肉腫、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、子宮内膜癌、食道癌、ユーイングファミリーの腫瘍、性腺外生殖細胞腫瘍、肝臓外総胆管癌、眼癌、眼内黒色腫、腺管癌、眼の癌である網膜芽細胞腫、形成異常の口腔粘膜、侵襲性口腔腫瘍、胆嚢癌、胃癌、胃腸の類癌腫、性腺外の生殖細胞腫瘍、生殖細胞腫瘍、妊娠性絨毛腫瘍、肝細胞（肝臓）癌、下咽頭癌、眼内黒色腫、島細胞癌腫（膵臓内分泌）、カポージ肉腫、喉頭癌、肝臓癌、肺の腫瘍および癌（例えば、非小細胞肺癌および小細胞肺癌）、悪性中皮腫、黒色腫、メルケル細胞癌腫、多発性内分泌腫瘍症候群、菌状息肉腫、多発性骨髄腫、鼻腔腫瘍、鼻傍および洞の癌、鼻咽頭癌、口腔および唇の癌、口腔咽頭癌、膵臓癌、副甲状腺癌、陰茎癌、褐色細胞腫、松果体およびテント上方の未分化神経外胚葉性腫瘍、下垂体性腫瘍、胸膜肺芽細胞腫、前立腺癌、直腸癌、腎臓、骨盤および尿管の移行細胞癌、網膜芽細胞腫、横紋筋芽細胞肉腫、唾液腺癌、成人軟組織の肉腫、セザリー症候群、皮膚癌、小腸癌、精巣の腫瘍および癌、胸腺腫、甲状腺癌、尿道癌、移行細胞および扁平上皮細胞の尿癌腫、婦人科学的な腫瘍および癌（例えば、頚部癌、卵巣の腫瘍および癌、卵巣上皮癌、卵巣生殖細胞腫瘍、子宮癌、子宮内膜癌、膣癌、外陰部癌）、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、ウィルムス腫瘍、肝臓腫瘍（肝細胞癌（「ＨＣＣ」）が挙げられる）および総胆管の腫瘍、他の肺腫瘍（小細胞癌および明細胞癌が挙げられる）、様々な器官の肉腫；ならびに他の癌および腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない）を処置するために使用され得る。

本発明のＮＤＧＡ誘導体により効果的に処置され得るウイルス性疾患の非限定的な例としては、例えば、とりわけヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）（全ての亜型）、単純疱疹ウイルス１および２（ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２）、水痘‐帯状疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス、エプスタイン−バーウイルス、ポックスウイルス（痘瘡、牛痘、サル痘、ワクシニア）、オルトヘパドナウイルス、ＪＣウイルス、ならびにＢＫウイルスにより引き起こされるウイルス感染が挙げられるが、これらに限定されない。

本発明のＮＤＧＡ誘導体により効果的に処置され得る炎症性疾患の非限定的な例としては、例えば、とりわけ、慢性関節リウマチ、変形性関節症、乾癬、サルコイドーシス、全身性エリテマトーデス、スティル病、嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺疾患および炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎およびクローン病）が挙げられるが、これらに限定されない。

本発明のＮＤＧＡ誘導体により効果的に処置され得る代謝疾患の非限定的な例としては、例えば、とりわけ、真性糖尿病（若年発症および成人発症）、尿崩症、症候群Ｘ、高脂質血症、高コレステロール血症、低血糖症、アテローム、ケトアシドーシス、アディソン病、クッシング症候群、副甲状腺機能亢進症、甲状腺機能亢進症、白質萎縮およびポルフィリン症が挙げられる。

本発明のＮＤＧＡ誘導体により効果的に処置され得る脈管疾患の非限定的な例としては、例えば、とりわけ、動脈高血圧症、肺動脈高血圧症、心脈管疾患および黄斑変性が挙げられるが、これらに限定されない。

上記のように、有効量のＮＤＧＡ誘導体が宿主に投与され、ここで「有効量」とは、所望の結果を生じるために充分な投薬量を意味する。いくつかの実施形態において、この所望の結果とは、ウイルス感染または炎症性疾患、代謝疾患、増殖性疾患もしくは脈管疾患の１つ以上の症状を少なくとも減少させることである。代表的に、本発明の組成物は、約０．１％未満から約９９％までの活性成分（すなわち、本発明のＮＤＧＡ誘導体）を含む。必要に応じて、本発明は、約５％〜約９０％の活性成分を含む。投与されるべき適切な用量は、例えば、処置されるべき被験体（例えば、この被験体の一般的健康状態、この被験体の年齢、疾患または状態の状態、この被験体の体重）に依存する。一般に、約０．１ｍｇ〜約５００ｍｇが小児に投与され得、そして約０．１ｍｇ〜約５グラムが成人に投与され得る。ＮＤＧＡ誘導体は、単回用量で投与され得るか、またはより代表的には、疾患を処置するために必要とされる頻度および期間にわたって、複数用量で投与され得る。所定の薬剤についての好ましい投薬量は、本開示を考慮して、種々の手段によって当業者により容易に決定される。他の有効な投薬量は、用量応答曲線を確立する慣用的な試みによって、本開示を考慮して当業者により容易に決定され得る。ＮＤＧＡ誘導体の量は、もちろん、使用される特定のＮＤＧＡ誘導体、およびこのＮＤＧＡ誘導体を含有する処方物の性質、ならびに投与経路、被験体のサイズおよび状態、疾患の性質および程度などに依存して変化する。

ＮＤＧＡ誘導体の投与の頻度は、その用量と同様に、看護する者によって、患者の年齢、体重、疾患状態、健康状態および応答性に基づいて決定される。従って、これらの薬剤は、１日に１回以上、または従来決定されるように必要とされるだけ長時間にわたって適切であるように、投与され得る。

ＮＤＧＡ誘導体の複数の用量または単回用量を含むキットが、本発明に含まれる。このようなキットにおいて、ＮＤＧＡ誘導体を含有する組成物の複数の用量または単回用量を含む容器に加えて、所定の適応症のためのその使用に関する指示書（例えば、目的の病理状態（例えば、多数の炎症性疾患、代謝疾患、脈管疾患もしくは増殖性疾患またはウイルス感染のうちのいずれか）を処置する際のその薬物の使用および付随する利点を記載する指示を含むインフォメーションシートまたはパッケージインサート）が含まれる。

本発明は、ここで、以下の具体的な非限定的な作業実施例（その実施例が予定であると示されている場合を除く）を参照しながら、より詳細に記載される。

（一般手順）
全ての反応を、他に示されない限り、オーブンで乾燥した（１２０℃）ガラス器具内で、窒素雰囲気下で実施した。アセトン、ジクロロメタン、１，４−ジオキサン、酢酸エチル、ヘキサン、およびテトラヒドロフランを、Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．から購入した。アセトンを、４Åのモレキュラーシーブで乾燥させ、そして蒸留した。ジクロロメタン、酢酸エチル、およびヘキサンを乾燥させ、そしてＣａＨ_２から蒸留した。１，４−ジオキサンおよびテトラヒドロフランを、ナトリウムおよびベンゾフェノンから、窒素雰囲気下で蒸留することにより乾燥させた。ノルジヒドログアイアレチン酸を、Ｆｌｕｋａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．から購入した。４−（２−クロロエチル）モルホリン塩酸塩、４−（３−クロロプロピル）モルホリン塩酸塩、１−（３−クロロプロピル）ピペリジン一塩酸塩、１−（２−クロロエチル）ピペリジン一塩酸塩、２−クロロエタノール、（２−クロロエトキシ）エタン、１−（２−クロロエチル）ピロリジン塩酸塩、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、および炭酸カリウムを、Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．から購入した。

融点を、Ｂｕｅｃｈｉ Ｌａｂｏｒｔｅｃｈｎｉｋ ＡＧ ５３５融点装置を用いて得た。分析用薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を、予めコーティングされたプレート（シリカゲル６０ Ｆ−２５４，Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｃ．から購入した）で実施した。ガスクロマトグラフィー分析を、２５−ｍ架橋メチルシリコーンゴムキャピラリーカラム（内径０．３２ｍｍ）を備えるＨｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ ５８９０ Ｓｅｒｉｅｓ ＩＩ器具で実施した。窒素ガスをキャリアガスとして使用し、そして流量を、１４．０ｍＬ／分に一定に維持した。保持時間ｔ_Ｒを、以下の条件下で測定した：注入器温度２６０℃、等温カラム温度２８０℃。ガスクロマトグラフィーおよび低分解能質量分析を、Ａｇｉｌｅｎｔ ５９７３ Ｎｅｔｗｏｒｋ Ｍａｓｓ Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ＤｅｔｅｃｔｏｒおよびキャピラリーＨＰ−１カラムを備えるＡｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ６８９０Ｎ Ｎｅｔｗｏｒｋ ＧＣ Ｓｙｓｔｅｍで実施した。重力カラムクロマトグラフィーによる精製を、Ｍｅｒｃｋ Ｒｅａｇｅｎｔｓ Ｓｉｌｉｃａ Ｇｅｌ ６０（粒径０．０６３ｍｍ〜０．２００ｍｍ，７０〜２３０メッシュＡＳＴＭ）を使用して実施した。全ての化合物の純度は、ＨＰＬＣまたはＧＣにより確認して、９９．５％より高かった。

紫外（ＵＶ）スペクトルを、Ｈｉｔａｃｈｉ Ｕ３３００ ＵＶ／ＶＩＳ分光光度計で測定した。赤外（ＩＲ）スペクトルを、Ｊａｓｃｏ ＦＴ−ＩＲ−５３００フーリエ変換赤外分光計で測定した。報告される波数は、ポリスチレンの１６０１ｃｍ^−１での吸収を参照とした。吸収強度を以下の略号により記録した：ｓ，強；ｍ，中間；ｗ，弱。蛍光強度を、Ｈｉｔａｃｈ Ｆ−４５００蛍光分光光度計で測定した。プロトンＮＭＲスペクトルを、Ｖａｒｉａｎ Ｍｅｒｃｕｒｙ−４００（４００ＭＨｚ）分光計で、クロロホルム−ｄを溶媒として使用し、そして３−（トリメチルシリル）プロピオン酸ナトリウムを内部標準として使用することにより得た。炭素−１３ ＮＭＲスペクトルを、Ｖａｒｉａｎ Ｍｅｒｃｕｒｙ−４００（１００ＭＨｚ）分光計で、クロロホルム−ｄまたはＤ_２Ｏを溶媒として使用することにより得た。炭素−１３の化学シフトは、ＣＤＣｌ_３三重線の中心（δ７７．０ｐｐｍ）を参照とした。多重度を、以下の略号により記録した：ｓ，一重線；ｄ，二重線；ｔ，三重線；ｑ，四重線；ｍ，多重線；Ｊ，結合定数（ヘルツ）。高分解能質量スペクトルを、ＪＥＯＬ ＪＭＳ−ＨＸ１１０質量分析計により得た。エレクトロスプレーイオン化質量分光（ＥＳＩ−ＭＳ）分析を、Ｆｉｎｎｉｇａｎ ＬＣＱ，Ｆｉｎｎｉｇａｎ ＭＡＴのエレクトロスプレーイオン化源を備える四重極イオントラップ質量分析計で実施した。

電算を、Ｓｉｌｉｃｏｎ Ｇｒａｐｈｉｃｓ Ｏ２＋ワークステーションで実行した。Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｃｈｅｍｏｆｆｉｃｅ Ｕｌｔｒａ １０．０を使用して、化学構造および合成スキームを描いた。ソフトウェアＰＣＭｏｄｅｌ ７．５を、最大導関数が１．０ｋｃａｌ・ｍｏｌ^−１・Å^−１より小さくなるまで、一貫した原子価力場（ＣＶＦＦ）に関して最小化したエネルギーのために使用した。

（実施例１）
（１，４−ビス｛３，４−ビス［３−（ピペリジン−１−イル）プロポキシ］フェニル｝−２，３−ジメチル−（２Ｒ，３Ｓ）−ブタン遊離塩基（Ｃ_５０Ｈ_８２Ｎ_４Ｏ_４，ＦＷ＝８０３．２１）「化合物Ａ」；および四塩酸塩（Ｃ_５０Ｈ_８６Ｎ_４Ｏ_４Ｃｌ_４，ＦＷ＝９４９．０５）「化合物Ｂ」の合成）
（工程１：Ｎ−（３−クロロプロピル）−ピペリジンの合成）

Ｎ−（３−クロロプロピル）−ピペリジン塩酸塩（純度９７％、Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ製）（１００ｇ）を水（１５０ｍＬ）に溶解し、そして飽和水性炭酸カリウム（２５０ｍＬ）をそこにゆっくりと添加した。また、１０Ｎ水酸化ナトリウム（２５ｍＬ）およびジエチルエーテル（２５０ｍＬ）を添加し、そしてこの混合物を１時間攪拌した。層を分離した；その有機層を無水炭酸カリウムで乾燥させ、そしてＢｕｅｃｈｉ Ｌａｂｏｒｔｅｃｈｎｉｋ ＡＧ Ｒｏｔａｖａｐｏｒ（登録商標）エバポレーターで濃縮して、表題化合物（７７．２ｇ，９４．４％）を得、これを精製せずに次の反応のために私用した。

（工程２：１，４−ビス｛３，４−ビス［３−（ピペリジン−１−イル）プロポキシ］フェニル｝−２，３−ジメチル−（２Ｒ，３Ｓ）−ブタン「化合物Ａ」の合成）

ＮＤＧＡ（１５．０ｇ，４８．０ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１Ｌ）中の溶液に、パラフィン中６０％の水素化ナトリウムの懸濁物（１０．４ｇ，２６０ｍｍｏｌ，５．４当量）を添加し、そしてこの混合物を６５℃で１時間加熱した。次いで、この混合物を室温まで冷却し、化合物Ｎ−（３−クロロプロピル）−ピペリジン（３９．０ｇ，２４１モル，５．０当量）およびヨウ化ナトリウム（７．２ｇ，４８ｍｍｏｌ，１当量）を添加し、そしてこの混合物を室温で１２０時間攪拌した。ＴＬＣは、生成物への完全な転換を示した。

この反応の後処理を、この反応混合物を水（３Ｌ）およびジエチルエーテル（２．５Ｌ）にゆっくりと添加することにより実施した。その水層を再度ジエチルエーテル（２Ｌ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブライン（７５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、そして減圧下で濃縮した。その粗製物質をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。そのカラムを、シリカゲル（５００ｇ）および酢酸エチル：メタノール：トリエチルアミン（９３：２：５）の溶媒混合物を使用して組み立て、酢酸エチル：メタノール：トリエチルアミンの勾配（９３：２：５〜９１：４：５）を用いて溶出して、生成物を白色固体として得た（２８．ｌｇ，収率７６．６％）。この生成物を酢酸エチル：ヘキサン混合物から結晶化させて、結晶性化合物を得た（２２．５ｇ）。

ｍ．ｐ．８４℃〜８６℃。ＨＰＬＣ純度−９９．４７％。

^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣ１_３，３００ＭＨｚ），δ＝０．８１（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，６Ｈ），１．３５−１．５０（ｍ，８Ｈ），１．５３−１．６５（ｍ，１６Ｈ），１．６７−１．８０（ｍ，２Ｈ），１．９０−２．２．０３（ｍ，８Ｈ），２．４０−２．６０（ｍ，２６Ｈ），２．７２（ｍ，２Ｈ），３．９９（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，４Ｈ），４．００（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，４Ｈ），６．６５（ｄｄ，Ｊ＝１．９，８．０Ｈｚ，２Ｈ），６．６７（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，２Ｈ），６．７９（ｄ，Ｊ＝８．ＯＨｚ，２Ｈ）；構造と一致する。

^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，７５ＭＨｚ）：δ＝１６．１，２４．５，２６．０，２７．０，３８．９，３９．４，５４．７，５６．２，６７．８，６８．０，１１４．１，１ １５．２，１２１．３，１３４．９，１４７．０，１４８．８；構造と一致する。

分析：Ｃ_５０Ｈ_８２Ｎ_４Ｏ_４についての計算値Ｃ：７４．７６，Ｈ：１０．２９，Ｎ：６．９８，実測値Ｃ：７５．０７，Ｈ：１０．５９，Ｎ：６．９１。

（工程３：１，４−ビス｛３，４−ビス［３−（ピペリジン−１−イル）プロポキシ］フェニル｝−２，３−ジメチル−（２Ｒ，３Ｓ）−ブタン四塩酸塩「化合物Ｂ」の合成）

水性飽和ＨＣｌ（７．２ｍＬの１１Ｎ ＨＣｌ，７９ｍｍｏｌ，２４モル当量）の９５％エタノール（２１ｍＬ）中の氷冷した（０℃〜５℃）溶液に、１，４−ビス｛３，４−ビス［３−（ピペリジン−１−イル）プロポキシ］フェニル｝−２，３−ジメチル−（２Ｒ，３Ｓ）−ブタン（２．６５８，３．３０モル）の９５％エタノール（２１ｍＬ）中の溶液を滴下した。この溶液を０℃〜５℃で３時間攪拌し、水浴の温度を４５℃に維持しながらその溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。その塩酸塩を高真空下で４８時間乾燥させた。その粗製生成物をエタノール：エーテルから結晶化させて、２．２０ｇの生成物（収率７０．３％）を、高真空下で７２時間乾燥させた後に得た。この生成物についての分析データを以下に示す。

ｍ．ｐ．２６５℃〜２７０℃（分解）
ＨＰＬＣ純度：９９．２％（ピーク面積の％）；Ｋａｒｌ Ｆｉｓｈｅｒ法による水分含有量：２．３９３８％。元素分析−Ｃ_５０Ｈ_８６Ｎ_４Ｏ_４Ｃｌ_４，計算値：Ｃ：６３．２７；Ｈ：９．１３；Ｎ：５．９０。実測値：Ｃ：６３．６０；Ｈ：９．５９；Ｎ：５．７３。滴定法による塩素元素分析（無水をベースとする）：理論値：１４．９４％；実測値：１４．９７％（理論値の１００．３％）。

１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ，３００ＭＨｚ）：δ＝０．６５−０．８０（ｓｓ，６Ｈ），１．４０−２．０（ｍ，２６Ｈ），２．１０−２．１５（ｍ，８Ｈ），２．１８−２．２４（ｍ，２Ｈ），２．５６−２．６１（ｍ，２Ｈ），２．７０−３．０５（ｍ，８Ｈ），３．０５−３．２０（ｍ，８Ｈ），３．２０−３．６０（ｍ，８Ｈ），４．０５（ｔ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，８Ｈ），６．７１（ｄｄ，Ｊ＝１．８，８．４Ｈｚ，２Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，２Ｈ），６．９２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ）。

^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣ１_３，７５ＭＨｚ）δ＝１６．０（ＣＨ_３），２３．４（ＣＨ_２），２４．５（ＣＨ_２），２７．５（ＣＨ_２），３８．８（Ａｒ−ＣＨ_２），３９．４（ＣＨ），５４．６（ＮＣＨ_２），５４．９（ＮＣＨ_２），６８．１（ＯＣＨ_２），１１３．４（Ａｒ），１１４．１（Ａｒ），１２１．４（Ａｒ），１３５．０（Ａｒ），１４６．８（Ａｒ），１４８．５（Ａｒ）ｐｐｍ；構造と一致する。

ＬＣ−ＭＳ，ｍ／ｅ＝８３９（Ｍ＋Ｋ），８０３（Ｍ＋）遊離塩基Ｃ_５０Ｈ_８２Ｎ_４Ｏ_４と一致する。

（実施例２）
（１，４−ビス｛３，４−ビス［４−（Ｎ−ピペリジノ）ブトキシ］フェニル｝−２，３−ジメチル−（２Ｒ，３Ｓ）−ブタン遊離塩基（Ｃ_５４Ｈ_９０Ｏ_４Ｎ_４，ＦＷ＝８５９．３２）−「化合物Ｃ」；および四塩酸塩（Ｃ_５４Ｈ_９０Ｏ_４Ｎ_４・４ＨＣｌ，ＦＷ＝１００５．１６）−「化合物Ｄ」の合成）
（工程１：Ｎ−（４−クロロブチル）ピペリジンの合成）

２Ｌの三口丸底フラスコに、ピペリジン（８５．１５ｇ，１．０ｍｏｌ）、アセトン（１０００ｍＬ）、および無水炭酸カリウム（２７６．４２ｇ，２．０ｍｏｌ，２．０当量）を入れた。このフラスコに、機械攪拌子および冷却器を備え付けた。４−クロロ−１−ブロモ−ブタン（１８８．６ｇ，１．１ｍｏｌ，１．１当量）を、室温で絶えず攪拌しながら、３０分間かけて滴下した。次いで、この懸濁混合物を４０℃で攪拌した。この反応の進行をＴＬＣにより監視し、これにより、この反応が４時間後に完了したことを確認した。この混合物を室温まで冷却し、そして不溶性物質を濾過により除去し、そしてジクロロメタン（２×１００ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液を、乾燥するまで減圧下で濃縮した。次いで、その残渣をジクロロメタン（５００ｍＬ）と混合した。不溶性物質を濾過により除去し、そしてジクロロメタン（２×１００ｍＬ）により洗浄した。合わせた濾液および洗浄液を濃縮し、フラッシュシリカゲルカラムで精製し、これにより、予測した生成物を淡黄色油状物として得た（９８．３９ｇ，収率５６％）。

^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ），δ＝１．３７（ｍ，２Ｈ，ＣＨ_２），１．６０（ｍ，８Ｈ，４ＣＨ_２），２．４６（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，４Ｈ，２ＣＨ_２Ｎ），２．８９（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ_２Ｎ），３．５６（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＣＨ_２Ｃｌ）ｐｐｍ；構造と一致する。

^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，７５ＭＨｚ），δ＝２４．５，２５．１，２５．５，２６．１，４４．１（ＣＨ_２ＮＣｌ），５３．１（ＣＨ_２Ｎ），５５．４（ＣＨ_２Ｎ）ｐｐｍ；構造と一致する。

ＭＳ（ＥＩ），ｍ／ｅ＝１７６（Ｍ＋１）；構造と一致する。

（工程２：１，４−ビス｛３，４−ビス［４−（Ｎ−ピペリジノ）ブトキシ］フェニル｝−２，３−ジメチル−（２Ｒ，３Ｓ）−ブタン「化合物Ｃ」の合成）

ノルジヒドログアイアレチン酸（ＮＤＧＡ，６０２ｍｇ，２．０ｍｍｏｌ）および水酸化リチウム一水和物（１．０ｇ，２４．０ｍｍｏｌ，１２当量）をｔｅｒｔ−ブタノール（１００ｍＬ）中に含有する溶液に、Ｎ−（４−クロロブチル）ピペリジン（２．１１ｇ，１２．０ｍｍｏｌ，６．０当量）を添加した。この溶液を絶えず攪拌しながら５０℃で加熱した。この反応をＴＬＣ（ＣＨ_２Ｃｌ_２：ＭｅＯＨ：Ｅｔ_３Ｎ＝９５：３：２，Ｖ／Ｖ／Ｖ）により監視し、これにより、この反応が２０時間後に完了したことを確認した。この反応懸濁物を室温まで冷却し、そしてジクロロメタン（２００ｍＬ）と水（１００ｍＬ）とで分配した。この混合物を振盪してよく混合した。その有機相を分離し、そしてその水相をジクロロメタン（２×１００ｍＬ）で抽出した。その有機層および抽出物を合わせ、そして水性飽和重炭酸ナトリウム（１００ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）で洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥させた後に、この溶液を減圧下で濃縮した。その残渣をシリカゲルカラムで、ジクロロメタン、メタノールおよびトリエチルアミン（９５：３：２，Ｖ／Ｖ／Ｖ）を溶出液として使用して精製し、これにより、予測した生成物を白色半固体物質として得た（７０４．６ｍｇ，収率４１％）。

ＨＰＬＣ純度−９８．５％。

^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣ１_３，３００ＭＨｚ），δ＝０．８１（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，６Ｈ，２ＣＨ_３），１．３５−１．５０（ｍ，８Ｈ，４ＣＨ_２），１．５３−１．６５（ｍ，２４Ｈ，１２ＣＨ_２），１．６７−１．８０（ｍ，２Ｈ），１．９０−２．２．０３（ｍ，８Ｈ），２．４０−２．６０（ｍ，２６Ｈ），２．７２（ｍ，２Ｈ），３．９９（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，４Ｈ），４．００（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，４Ｈ），６．６５（ｄｄ，Ｊ＝１．９，８．０Ｈｚ，２Ｈ），６．６７（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，２Ｈ），６．７９（ｄ，Ｊ＝８．ＯＨｚ，２Ｈ）ｐｐｍ；構造と一致する。

^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）１６．１，２４．５，２５．４，２６．０，２７．０，３８．９，３９．４，５４．７，５６．２，６７．８，６８．０，１１４．１，１ １５．２，１２１．３，１３４．９，１４７．０，１４８．８ｐｐｍ；構造と一致する。

分析：Ｃ_５４Ｈ_９０Ｎ_４Ｏ_４（８５９．３２）についての計算値Ｃ：７５．４８，Ｈ：１０．５６，Ｎ：６．５２，実測値Ｃ：７５．０７，Ｈ：１０．５９，Ｎ：６．９１；構造と一致する。

（工程３：１，４−ビス｛３，４−ビス［４−（Ｎ−ピペリジノ）ブトキシ］フェニル｝−２，３−ジメチル−（２Ｒ，３Ｓ）−ブタン四塩酸塩「化合物Ｄ」の合成）

水性飽和ＨＣｌ（２．２ｍＬの１１Ｎ ＨＣｌ，２４ｍｍｏｌ，２４モル当量）の、９５％エタノール（７ｍＬ）中の氷冷した（０℃〜５℃）溶液に、１，４−ビス｛３，４−ビス［４−（ピペリジン−１−イル）ブトキシ］フェニル｝−２，３−ジメチル−（２Ｒ，３Ｓ）−ブタン（８５９．３２ｍｇ，１．０モル）の９５％エタノール（７ｍＬ）中の溶液を滴下した。この溶液を０℃〜５℃で３時間攪拌し、水浴の温度を４５℃に維持しながら、その溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。この塩酸塩を高真空下で４８時間乾燥させた。次いで、その粗製生成物をエタノール：エーテルから結晶化させて、高真空下で７２時間乾燥させた後に、７３６．９ｍｇの生成物（収率７３．３％）を得た。この生成物についての分析データを以下に示す。

ｍ．ｐ．２２５℃〜２３０℃（分解）。

ＨＰＬＣ純度：９９．２％（ピーク面積の％）。元素分析−Ｃ_５４Ｈ_９０Ｏ_４Ｎ_４ ４ＨＣｌ，ＦＷ＝１００５．１６，計算値：Ｃ：６４．５３；Ｈ：９．４３；Ｎ：５．５７。実測値：Ｃ：６４．２３；Ｈ：９．２１；Ｎ：５．４３。滴定法による塩素元素分析（無水をベースとする）：理論値：１４．１１％；実測値：１４．２１％（理論値の１００．７％）。

^１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ，４００ＭＨｚ）：δ＝０．７６（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，６Ｈ，２×ＣＨ_３），１．２８−１．３７（ｍ，８Ｈ），１．３６−１．４６（ｍ，８Ｈ，４×ピペリジンＣＨ_２），１．４３−２．５６（ｍ，１６Ｈ，８×ピペリジンＣＨ_２），１．５５−１．６８（ｍ，２Ｈ，２×ＣＨ），２．３６−２．５１（ｍ，１６Ｈ，８×ピペリジンＣＨ_２Ｎ），２．６４（ｄｄ，Ｊ＝１３．２，１．２Ｈｚ，２Ｈ，２×ＡｒＣＨ），２．７１（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，８Ｈ，４×ＣＨ_２Ｎ），４．０３（ｔ，８Ｈ，４×ＣＨ_２Ｏ），６．６０−６．７５（ｍ，６Ｈ，６×ＡｒＨ）ｐｐｍ；構造と一致する。

^１３Ｃ ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ，１００ＭＨｚ），δ＝１５．９３，２３．８５，２４．００，２５．０６，２５．７２，３８．９２，３９．３１，５４．８７，５４．９７，５７．８７，６７．１３，６７．２８，１１３．９０，１１４．９６，１２１．３８，１３４．７１，１４６．７５，１４８．４８ｐｐｍ；構造と一致する。

ＭＳ（ＥＩ），ｍ／ｅ＝８５９（Ｍ＋），遊離塩基Ｃ_５４Ｈ_９０Ｎ_４Ｏ_４と一致する。

（実施例３）
（１，４−ビス｛３，４−ビス（２−メチル−チアゾール−４−イル−メトキシ）フェニル｝−２，３−ジメチル−（２Ｒ，３Ｓ）−ブタン遊離塩基（Ｃ_３８Ｈ_４６Ｎ_４Ｏ_４Ｓ_４，ＦＷ＝７４７．０２）「化合物Ｅ」；四塩酸塩（Ｃ_３８Ｈ_４６Ｎ_４Ｏ_４Ｓ_４・４ＨＣｌ，ＦＷ＝８９２．８７）「化合物Ｆ」の合成）
（工程１：１，４−ビス｛３，４−ビス（２−メチル−チアゾール−４−イル−メトキシ）フェニル｝−２，３−ジメチル−（２Ｒ，３Ｓ）−ブタン「化合物Ｅ」の合成）

４−クロロメチル−２−メチルチアゾールのその塩酸塩からの調製：４−クロロメチル−２−メチルチアゾール塩酸塩（２５ｇ，１３５ｍｍｏｌ）に、５０％水性炭酸カリウム（１００ｍＬ）およびエーテル（４００ｍＬ）を添加した。この混合物を室温で１５分間攪拌した。その有機層を分離し、無水炭酸カリウムで乾燥させ、そして減圧（３０ｍｍＨｇ〜４０ｍｍＨｇ）下２５℃で濃縮乾固させた。その残渣を高真空（０．１ｍｍＨｇ〜０．５ｍｍＨｇ）下室温で一晩乾燥させて、４−クロロメチル−２−メチルチアゾールを得た（２０ｇ，収率９９．５％）。

１，４−ビス｛３，４−ビス（２−メチル−チアゾール−４−イル−メトキシ）フェニル｝−２，３−ジメチル−（２Ｒ，３Ｓ）−ブタンの調製：ＮＤＧＡ（１．５０ｇ，４．９６ｍｏｌ）のＤＭＦ（５０ｍＬ）中の氷冷溶液に、パラフィン中６０％の水素化ナトリウムの懸濁物（１．９８ｇ＝１．１９ｇ ＮａＨ，４９．６ｍｍｏｌ，１０モル当量）を添加した。この混合物を０℃で３０分間、および室温で３０分間攪拌した。次いで、４−クロロメチル−２−メチルチアゾール（５．８６ｇ，３９．６９ｍｍｏｌ，８．０モル当量）のＤＭＦ（２０ｍＬ）中の溶液を添加し、そしてこの反応混合物を室温で１６時間攪拌した。この反応混合物を飽和水性塩化アンモニウム（３００ｍＬ）およびエーテル（６００ｍＬ）に添加した。振盪後、その有機層を分離し、そしてその水層をエーテル（２×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層および抽出物を水（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、そして無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、そして減圧（３０ｍｍＨｇ〜４０ｍｍＨｇ）下２５℃で濃縮乾固させた。その残渣を最少量のジクロロメタンに溶解し、そしてヘキサン：酢酸エチル（５０：５０〜０：１００）を溶出液としてを使用するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーカラムにより精製して、予測した生成物を白色固体として得た（１．５６ｇ，収率４２．０９％）。これをアセテート−ヘキサンからの結晶化によりさらに精製した。

Ｍｐ ８５−８７℃，ＨＰＬＣ純度：９８．９％。

^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝０．８４（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，６Ｈ，２×ＣＨ_３），２．０１（ｍ，２Ｈ，２×ＣＨ），２．６５−２．７０（ｍ，４Ｈ，２×Ａｒ−ＣＨ_２）２．８１（ｓ，６Ｈ，２×ＣＨ_３），５．２３（ｄ，Ｊ＝２０．７Ｈｚ，８Ｈ，４×ＯＣＨ_２），６．７０−６．８４（ｍ，６Ｈ，６×Ａｒ−Ｈ），７．０７（ｓ，４Ｈ，４−Ａｒ−Ｈ）ｐｐｍ；構造と一致する。

^１３Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１６．５（ＣＨ_３），１９．５（ＣＨ_３），３８．６（Ａｒ−ＣＨ_２），３９．４（ＣＨ），７２．６（ＯＣＨ_２），１１２．１（Ａｒ），１１３．８（Ａｒ），１１５．４（Ａｒ），１２２．８（Ａｒ），１３１．１（Ａｒ），１３５．０（Ａｒ），１４７．４（Ａｒ），１４９．５（Ａｒ），１５９．８（Ａｒ），１６５．３（Ａｒ）ｐｐｍ；構造と一致する。

ＬＣ−ＭＳ，ｍ／ｅ＝７７０（Ｍ＋Ｎａ^＋），７４７（Ｍ＋）。

分析：Ｃ_３８Ｈ_４２Ｎ_４Ｏ_４Ｓ_４，ＦＷ＝７４７．０２についての計算値，Ｃ：６１．１０，Ｈ：５．６７，Ｎ：７．５０，実測値Ｃ：６０．８６，Ｈ：５．８６，Ｎ：７．３１。

（工程２：１，４−ビス｛３，４−ビス（２−メチル−チアゾール−４−イル−メトキシ）フェニル｝−２，３−ジメチル−（２Ｒ，３Ｓ）−ブタン四塩酸塩「化合物Ｆ」の合成）

１，４−ビス｛３，４−ビス（２−メチル−チアゾール−４−イル−メトキシ）フェニル｝−２，３−ジメチル−（２Ｒ，３Ｓ）−ブタン（０．５０ｇ，０．６ｍｍｏｌ）のアセトン（２０ｍＬ）中の溶液に、塩酸ガスをこの溶液に通して室温で１０分間、絶えず攪拌しながらゆっくりとバブリングした。その沈殿物を吸引濾過により収集した。収集した物質を最少量のメタノールに溶解し、そして無水エーテルにより粉砕した。次いで、その固体物質を吸引濾過により収集し、そして減圧下で一晩乾燥させて、０．５１ｇ（収率８５％）の予測された四塩酸塩を白色固体として得た。

ｍ．ｐ．９１℃〜９２℃。ＨＰＬＣ純度：９８．９％（ピーク面積純度）
^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，メタノール−ｄ_４）：δ＝０．７４（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，６Ｈ，２×ＣＨ_３），２．１１（ｍ，２Ｈ，２×ＣＨ），２．５５−２．６０（ｍ，４Ｈ，２×Ａｒ−ＣＨ_２）２．７５（ｓ，６Ｈ，２×ＣＨ_３），５．２８（ｄ，Ｊ＝２０．７Ｈｚ，８Ｈ，４×ＯＣＨ_２），６．７７−６．８７（ｍ，６Ｈ，６×Ａｒ−Ｈ），７．０９（ｓ，４Ｈ，４−Ａｒ−Ｈ），１０．５６（ｂｒｓ，ＮＨ）ｐｐｍ；構造と一致する。

^１３Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，メタノール−ｄ_４）：δ＝１６．７（ＣＨ_３），１９．５（ＣＨ_３），３８．６（Ａｒ−ＣＨ_２），３９．４（ＣＨ），７２．６（ＯＣＨ_２），１１２．１（Ａｒ），１１３．８（Ａｒ），１１５．４（Ａｒ），１２２．８（Ａｒ），１３１．１（Ａｒ），１３５．０（Ａｒ），１４７．４（Ａｒ），１４９．５（Ａｒ），１５９．８（Ａｒ），１６５．３（Ａｒ）ｐｐｍ；構造と一致する。

ＬＣ−ＭＳ，ｍ／ｅ＝７７０（Ｍ＋Ｎａ^＋），７４７（Ｍ＋）親化合物の構造と一致する。

分析：Ｃ_３８Ｈ_４２Ｎ_４Ｏ_４Ｓ_４・４ＨＣｌ，ＦＷ＝８９２．８７についての計算値，Ｃ：５１．１２ Ｈ：５．１９，Ｎ：６．２７，実測値Ｃ：５０．８６，Ｈ：５．０６，Ｎ：６．０１。

（実施例４）
（１，４−ビス｛３，４−ビス（２−（Ｎ，Ｎ’−ジメチルアミノ）−エトキシ）フェニル｝−２，３−ジメチル−（２Ｒ，３Ｓ）−ブタン遊離塩基（Ｃ_３４Ｈ_５８Ｎ_４Ｏ_４，ＦＷ＝５８６．８５）「化合物Ｇ」；四塩酸塩（Ｃ_３４Ｈ_５８Ｎ_４Ｏ_４・４ＨＣｌ，ＦＷ＝７３２．６９）「化合物Ｈ」の合成）
（工程１：１，４−ビス｛３，４−ビス（２−（Ｎ，Ｎ’−ジメチルアミノ）−エトキシ）フェニル｝−２，３−ジメチル−（２Ｒ，３Ｓ）−ブタン「化合物Ｇ」の合成）

ＮＧＤＡ（１．５０ｇ，４．９６ｍｍｏｌ）のアセトン（１５０ｍＬ）中の溶液に、無水炭酸カリウム（６．８４ｇ，４９．６ｍｍｏｌ，１０モル当量）およびＮ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−（２−クロロエチル）アミン塩酸塩（４．２８ｇ，２９．７ｍｍｏｌ，６モル当量）を添加した。この混合物を還流下で１２時間攪拌した。この反応の進行をＴＬＣ（ジクロロメタン：メタノール＝９５：５，ｖ：ｖ）により監視し、かなりの量のＮＤＧＡが未反応であることが示された。従って、さらなる無水炭酸カリウム（６．８４ｇ，４９．６ｍｍｏｌ，１０モル当量）およびＮ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−（２−クロロエチル）アミン塩酸塩（４．２８ｇ，２９．７ｍｍｏｌ，６モル当量）を添加し、そしてこの混合物を還流下でさらに６４時間攪拌した。ＴＬＣでの監視は、この反応が完了したことを示した。この混合物を室温まで冷却した。不溶性物質を吸引濾過により除去し、そしてアセトン（２×５０ｍＬ）で洗浄した。その濾液および洗浄液を合わせ、そして減圧（３０ｍｍＨｇ〜４０ｍｍＨｇ）下２５℃で濃縮乾固させた。その残渣を最少量のジクロロメタンに溶解した。その不溶性物質を吸引濾過により除去した。その濾液を、ジクロロメタン：メタノール：トリエチルアミンの勾配溶出（９４：１：５〜８５：１０：５）を使用するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーカラムにより精製して、予測した生成物を白色固体として得た（１．５６ｇ，収率５３．６％）。これをアセテート−ヘキサンからの結晶化によりさらに精製した。

Ｍｐ ９８℃〜１００℃，ＨＰＬＣ純度：９９．１％（ピーク面積純度）。

^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝０．８１（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，６Ｈ，２×ＣＨ_３），１．９５（ｍ，２Ｈ，２×ＣＨ），２．６０−２．６５（ｍ，４Ｈ，２×Ａｒ−ＣＨ_２），２．７２（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，８Ｈ，４×ＮＣＨ_２）２．８６（ｓ，６Ｈ，２×ＮＣＨ_３），４．０８（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，８Ｈ，４×ＯＣＨ_２），６．６０−６．７５（ｍ，６Ｈ，６×Ａｒ−Ｈ）ｐｐｍ；構造と一致する。

^１３Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１５．２（ＣＨ_３），３６．６（Ａｒ−ＣＨ_２），３８．７（ＣＨ），４５．５（ＮＣＨ_３），５６．７（ＮＣＨ_３），６５．４（ＯＣＨ_２），１１２．８（Ａｒ），１１４．４（Ａｒ），１２１．８（Ａｒ），１３２．８（Ａｒ），１４６．４（Ａｒ），１４７．５（Ａｒ）ｐｐｍ；構造と一致する。

ＬＣ−ＭＳ，ｍ／ｅ＝６０９（Ｍ＋Ｎａ^＋），５８６（Ｍ＋）；構造と一致する。

分析：Ｃ_３４Ｈ_５８Ｎ_４Ｏ_４，ＦＷ＝５８６．８５についての計算値，Ｃ：６９．５９，Ｈ：９．９６，Ｎ：９．５５，実測値Ｃ：６９．８６，Ｈ：９．７６，Ｎ：９．３１。

（工程２：１，４−ビス｛３，４−ビス（２−（Ｎ，Ｎ’−ジメチルアミノ）−エトキシ）フェニル｝−２，３−ジメチル−（２Ｒ，３Ｓ）−ブタン四塩酸塩「化合物Ｈ」の合成）

１，４−ビス｛３，４−ビス（２−（Ｎ，Ｎ’−ジメチルアミノ）−エトキシ）フェニル｝−２，３−ジメチル−（２Ｒ，３Ｓ）−ブタン（０．５０ｇ，０．８５ｍｍｏｌ）のアセトン（２０ｍＬ）中の溶液に、塩酸ガスを、この溶液に通して室温で１０分間、絶えず攪拌しながらゆっくりとバブリングした。その沈殿物を吸引濾過により収集した。収集した物質を最少量のメタノールに溶解し、そして無水エーテルにより粉砕した。次いで、その固体物質を吸引濾過により収集し、そして減圧下で一晩乾燥させて、０．４４ｇ（収率７０％）の予測された四塩酸塩を白色固体として得た。

ｍ．ｐ．７８℃〜８０℃。ＨＰＬＣ純度：９９．２％（ピーク面積純度）。

^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，メタノール−ｄ_４）：δ＝０．７６（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，６Ｈ，２×ＣＨ_３），１．８５（ｍ，２Ｈ，２×ＣＨ），２．６３−２．６９（ｍ，４Ｈ，２×Ａｒ−ＣＨ_２），２．７５（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，８Ｈ，４×ＮＣＨ_２）２．９６（ｓ，６Ｈ，２×ＮＣＨ_３），４．０１（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，８Ｈ，４×ＯＣＨ_２），６．６５−６．７７（ｍ，６Ｈ，６×Ａｒ−Ｈ），１０．５５（ｂｒ ｓ，ＮＨ）ｐｐｍ；構造と一致する。

^１３Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，メタノール−ｄ_４）：δ＝１６．２（ＣＨ_３），３５．６（Ａｒ−ＣＨ_２），３７．９（ＣＨ），４６．６（ＮＣＨ_３），５５．９（ＮＣＨ_３），６４．７（ＯＣＨ_２），１１２．５（Ａｒ），１１５．４（Ａｒ），１２２．８（Ａｒ），１３１．７（Ａｒ），１４５．４（Ａｒ），１４６．５（Ａｒ）ｐｐｍ；構造と一致する。

ＬＣ−ＭＳ，ｍ／ｅ＝６０９（Ｍ＋Ｎａ^＋），５８６（Ｍ＋）構造と一致する。分析：Ｃ_３４Ｈ_５８Ｎ_４Ｏ_４・４ＨＣｌ，ＦＷ＝７３２．６９についての計算値，Ｃ：５５．７３，Ｈ：８．５３，Ｎ：７．６５，実測値Ｃ：５５．３８，Ｈ：８．３６，Ｎ：７．３１。

（実施例５）
（１，４−ビス｛３，４−ビス（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル｝−２，３−ジメチル−（２Ｒ，３Ｓ）−ブタン遊離塩基（Ｃ_２６Ｈ_３８Ｏ_８，ＦＷ＝４７８．５８）「化合物Ｉ」の合成）
（方法１：（類似の合成手順については、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９８７，（３），２２３−２２４；Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９８１，１０３，２３６１を参照のこと））

ＮＤＧＡ（２．０ｇ，６．６１ｍｍｏｌ）の無水ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（２０ｍＬ）中の溶液に、炭酸エチレン（３．４９ｇ，３９．６９ｍｍｏｌ，６．０モル当量）およびテトラエチルアンモニウムブロミド（６９ｍｇ，０．３３ｍｍｏｌ，０．０５モル当量）を添加した。この混合物を１４０℃で攪拌した。この反応をＴＬＣ（ジクロロメタン：メタノール＝９：１，Ｖ／Ｖ）により監視し、これにより、この反応が３６時間後に完了したことが示された。次いで、ＤＭＦを減圧（２０ｍｍＨｇ〜３０ｍｍＨｇ）下８０℃〜９０℃で除去して乾固させた。次いで、その残渣をジクロロメタン（２００ｍＬ）に溶解し、そして水性重炭酸ナトリウム（５０ｍＬ）およびブライン（２×５０ｍＬ）により洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥させた後に、その溶媒を減圧（３０ｍｍＨｇ〜４０ｍｍＨｇ）下３０℃〜４０℃で除去して乾固させた。その残渣を最少量のジクロロメタンに溶解し、そしてジクロロメタン：メタノールの勾配溶出（１０：０〜９：１，Ｖ／Ｖ）を使用するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーカラムにより精製して、予測された生成物を得、これをジクロロメタン−エーテルからの再結晶によりさらに精製して、純粋な生成物０．８８ｇを得た（収率２７．８％）。

ｍ．ｐ．１２０℃〜１２２℃、ＨＰＬＣ純度９９．４％。

^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝０．７３（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，６Ｈ，２×ＣＨ_３），１．８５（ｍ，２Ｈ，２×ＣＨ），２．３５，２．６５（ｍｍ，４Ｈ，２×Ａｒ−ＣＨ_２），３．７４（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，８Ｈ，４×ＯＣＨ_２），３．９３（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，８Ｈ，４×ＯＣＨ_２），６．５６−６．７２（ｍ，６Ｈ，６×Ａｒ−Ｈ）ｐｐｍ；構造と一致する。

^１３Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１５．４（ＣＨ_３），３５．２（Ａｒ−ＣＨ_２），３７．９（ＣＨ），６１．８（ＯＣＨ_２），６８．７（ＯＣＨ_２），１１２．３（Ａｒ），１１５．４（Ａｒ），１２２．９（Ａｒ），１３２．８（Ａｒ），１４６．４（Ａｒ），１４８．１（Ａｒ）ｐｐｍ；構造と一致する。

ＬＣ−ＭＳ，ｍ／ｅ＝５０１（Ｍ＋Ｎａ^＋），４７８（Ｍ＋）；構造と一致する。

分析：Ｃ_２６Ｈ_３８Ｏ_８，ＦＷ＝４７８．５８についての計算値，Ｃ：６５．２５，Ｈ：８．００，実測値Ｃ：６５．０１，Ｈ：８．３４。

（方法２：（類似の合成手順については、Ｓｙｎｔｈ．Ｃｏｍｍｕｎ．２００２，３２（１２），１９０９−１９１５を参照のこと））

ＮＤＧＡ（１．５ｇ，４．９６ｍｍｏｌ）のｎ−ブタノール（１５０ｍＬ）中の溶液に、水酸化ナトリウム（４．０ｇ，９９．２０ｍｍｏｌ，２０モル当量）の、水（２０ｍＬ）および２−クロロエタノール（８．０ｇ，９９．２２ｍｍｏｌ，２０モル当量）中の溶液を添加した。この混合物を還流しながら攪拌した。この反応をＴＬＣ（ジクロロメタノール：メタノール，９：１，Ｖ／Ｖ）により監視し、そして３６時間後に完了したことが示された。この混合物を０℃まで冷却し、そしてｐＨ７．０まで、濃塩酸により注意深く中和した。この混合物を減圧（３０ｍｍＨｇ〜４０ｍｍＨｇ）下７０℃〜８０℃で濃縮乾固した。その残渣を混合し、そして酢酸エチル（２００ｍＬ）と一緒に攪拌した。不溶性物質を濾過により除去し、そして酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で洗浄した。その濾液および洗浄液を合わせ、ブライン（２×１００ｍＬ）で洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥させた後に、この混合物を減圧（３０ｍｍＨｇ〜４０ｍｍＨｇ）下３０℃〜４０℃で濃縮乾固した。次いで、その残渣を最少量のジクロロメタンに溶解し、そしてジクロロメタン：メタノールの勾配溶出（９５：５〜８０：２０，Ｖ／Ｖ）を使用するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーカラムにより精製して、予測した化合物を白色固体として得、これをジクロロメタン−エーテルからの再結晶によりさらに精製して、純粋な生成物１．３２ｇ（５５．６％、ｍｐ．１２０℃〜１２２℃、ＨＰＬＣ純度９８．５％）を得た。分析データは、方法１から得られたサンプルと同一であった。

（方法３：（類似の実験手順については、Ｂｕｌｌ．Ｋｏｒｅａｎ Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００４，２５（１２），１９４１−１９４４を参照のこと））

ＮＤＧＡ（１．５ｇ，４．９６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１５０ｍＬ）中の溶液に、無水炭酸カリウム（１３．７０ｇ，９９．２０ｍｍｏｌ，２０モル当量）および（２−クロロエトキシ）エタン（１０．５７ｇ，９９．２２ｍｍｏｌ，２０モル当量）を添加した。この混合物を１３０℃で攪拌した。この反応をＴＬＣ（ジクロロメタノール：メタノール，９：１，Ｖ／Ｖ）により監視し、そして４８時間後に完了したことが示された。この混合物を減圧（５ｍｍＨｇ〜１０ｍｍＨｇ）下５０℃〜６０℃で濃縮乾固した。その残渣を混合し、そして酢酸エチル（２００ｍＬ）と一緒に攪拌した。不溶性物質を濾過により除去し、そして酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で洗浄した。その濾液および洗浄液を合わせ、ブライン（２×１００ｍＬ）で洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥させた後に、この混合物を減圧（３０ｍｍＨｇ〜４０ｍｍＨｇ）下３０℃〜４０℃で濃縮乾固した。次いで、その残渣を最少量のジクロロメタンに溶解し、そしてジクロロメタン：メタノールの勾配溶出（９５：５〜８０：２０，Ｖ／Ｖ）を使用するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーカラムにより精製して、予測した化合物を白色固体として得、これをジクロロメタン−エーテルからの再結晶によりさらに精製して、純粋な生成物１．５０ｇ（収率６３．１％，ｍｐ．１２０℃〜１２２℃、ＨＰＬＣ純度９８．５％）を得た。分析データは、方法１から得られたサンプルと同一であった。

（実施例６）
（１，４−ビス｛３，４−ビス［２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシｌ］フェニル｝−２，３−ジメチル−（２Ｒ，３Ｓ）−ブタン遊離塩基（Ｃ_３４Ｈ_５４Ｎ_４Ｏ_１２，ＦＷ＝６５４．７９）「化合物Ｊ」の合成）

ＮＤＧＡ（１．５ｇ，４．９６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１５０ｍＬ）中の溶液に、無水炭酸カリウム（１３．７０ｇ，９９．２０ｍｍｏｌ，２０モル当量）および（２−クロロエトキシ）エタノール（１２．３６ｇ，９９．２２ｍｍｏｌ，２０モル当量）を添加した。この混合物を１３０℃で攪拌した。この反応をＴＬＣ（ジクロロメタノール：メタノール，９：１，Ｖ／Ｖ）により監視し、そして７２時間後に完了したことが示された。この混合物を減圧（５ｍｍＨｇ〜１０ｍｍＨｇ）下５０℃〜６０℃で濃縮乾固した。その残渣を混合し、そして酢酸エチル（２００ｍＬ）と一緒に攪拌した。不溶性物質を濾過により除去し、そして酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で洗浄した。その濾液および洗浄液を合わせ、ブライン（２×１００ｍＬ）で洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥させた後に、この混合物を減圧（３０ｍｍＨｇ〜４０ｍｍＨｇ）下３０℃〜４０℃で濃縮乾固した。次いで、その残渣を最少量のジクロロメタンに溶解し、そしてジクロロメタン：メタノールの勾配溶出（９５：５〜８０：２０，Ｖ／Ｖ）を使用するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーカラムにより精製して、予測された化合物を得、これをジクロロメタン−エーテルからの再結晶によりさらに精製して、純粋な生成物１．２５ｇ（収率３８．５％）を淡黄色の半固体として、ＨＰＬＣ純度９８．５％で得た。

^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝０．７４（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，６Ｈ，２×ＣＨ_３），１．８８（ｍ，２Ｈ，２×ＣＨ），２．３８，２．６８（ｍｍ，４Ｈ，２×Ａｒ−ＣＨ_２），３．６０−４．０１（ｍ，３２Ｈ，１６×ＯＣＨ_２），６．５８−６．７４（ｍ，６Ｈ，６×Ａｒ−Ｈ）ｐｐｍ；構造と一致する。

^１３Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１５．４（ＣＨ_３），３６．３（Ａｒ−ＣＨ_２），３８．５（ＣＨ），６１．３（ＯＣＨ_２），６９．７（ＯＣＨ_２），７０．７（ＯＣＨ_２），７１．２（ＯＣＨ_２），１１２．４（Ａｒ），１１４．１（Ａｒ），１２３．４（Ａｒ），１３１．６（Ａｒ），１４５．９（Ａｒ），１４９．５（Ａｒ）ｐｐｍ；構造と一致する。

ＬＣ−ＭＳ，ｍ／ｅ＝６７７（Ｍ＋Ｎａ^＋），６７２（Ｍ＋Ｈ_２Ｏ），６５５（Ｍ＋）；構造と一致する。

分析：Ｃ_３４Ｈ_５４Ｏ_１２，ＦＷ＝６５４．７９についての計算値，Ｃ：６２．３７，Ｈ：８．３１，実測値Ｃ：６２．０１，Ｈ：８．１４。

（実施例７）
（１，４−ビス［３，４−ビス（２−フルオロ−エトキシル）フェニル］−２，３−ジメチル−（２Ｒ，３Ｓ）−ブタン（Ｃ_２５Ｈ_３４Ｏ_４Ｆ_４，ＦＷ＝４８６．５４）「化合物Ｋ」の合成）

氷水浴中で冷却した、化合物Ｉ（４７９ｍｇ，１．０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１０ｍＬ）中の懸濁物に、ジエチルアミノ硫黄トリフルオリド（ＤＡＳＴ，８０５ｍｇ，５ｍｍｏｌ）を添加した。得られた黄色がかった溶液を室温で１０時間攪拌した後に、冷却しながら飽和重炭酸ナトリウム（２ｍＬ）でクエンチした。その有機層を飽和ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４（ｓ）で乾燥させ、濾過し、そして減圧下で濃縮した。その残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶出液としてジクロロメタン中１０％メタノール）により精製し、そして所望の画分を収集して、予測された化合物をオフホワイトの固体（２７７ｍｇ，０．４７ｍｍｏｌ）として収率５７％で得た。

ｍ．ｐ．９８℃〜１０２℃，ＨＰＬＣ純度：９７．５％（ピーク面積純度）。

^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）：δ＝０．７６（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，６Ｈ，２×ＣＨ_３），１．６３−１．７０（ｍ，２Ｈ，２×ＣＨ），２．１８（ｄｄ，Ｊ＝１３Ｈｚ，２Ｈ，２×ＡｒＣＨ），２．７６（ｄｄ，Ｊ＝１３．２，４．６Ｈｚ，２Ｈ，２×ＡｒＣＨ），４．０９（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，８Ｈ，４×ＣＨ_２Ｏ），４．６６（ｍ，Ｊ＝４７Ｈｚ，８Ｈ，４×ＣＨ_２Ｆ），６．５５−６．７２（ｍ，６Ｈ，６×ＡｒＨ）；予測された構造と一致する。

^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，１００ＭＨｚ）：δ＝１５．９０，３８．６８，３９．２３，６４．２３，６４．５０，６６．４９，６６．８６，１１３．７５，１１４．８０，１２１．５６，１３４．９６，１４６．６３，１４８．３８；予測された構造と一致する。

ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｅ：４８６（Ｍ＋），４９６（Ｍ＋），５２５（Ｍ＋Ｋ）；予測された構造と一致する。

分析：Ｃ_２５Ｈ_３４Ｏ_４Ｆ_４，ＦＷ＝４８６．５４についての計算値，Ｃ：６４．１８；Ｈ：７．０４。実測値，Ｃ：６３．９５；Ｈ：６．８５。

（実施例８）
（１，４−ビス｛３，４−ビス［４−（Ｎ−モルホリノ）ブトキシ］フェニル｝−２，３−ジメチル−（２Ｒ，３Ｓ）−ブタン遊離塩基（Ｃ_５０Ｈ_８２Ｎ_４Ｏ_８，ＦＷ＝８６７．２１）「化合物Ｌ」；四塩酸塩（Ｃ_５４Ｈ_８２Ｎ_４Ｏ_８・４ＨＣｌ，ＦＷ＝１０１３．０５）「化合物Ｍ」の合成）
（工程１：Ｎ−（４−クロロブチル）モルヒネの合成）

２Ｌの三口丸底フラスコに、モルホリン（８７．１２ｇ，１．０ｍｏｌ）、アセトン（１０００ｍＬ）、および無水炭酸カリウム（２７６．４２ｇ，ｇ，２．０ｍｏｌ，２．０当量）を入れた。このフラスコに、機械攪拌子および冷却器を備え付けた。４−クロロ−１−ブロモ−ブタン（１８８．６ｇ，１．１ｍｏｌ，１．１当量）を、室温で絶えず攪拌しながら、３０分間かけて滴下した。次いで、この懸濁混合物を４０℃で攪拌した。この反応の進行をＴＬＣにより監視し、これにより、この反応が４時間後に完了したことを確認した。この混合物を室温まで冷却し、そして不溶性物質を濾過により除去し、そしてジクロロメタン（２×１００ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液を減圧下で、乾燥するまで濃縮した。次いで、その残渣をジクロロメタン（５００ｍＬ）と混合した。不溶性物質を濾過により除去し、そしてジクロロメタン（２×１００ｍＬ）により洗浄した。合わせた濾液および洗浄液を濃縮し、そしてフラッシュシリカゲルカラムで精製し、これにより、予測した生成物を淡黄色油状物として得た（８０．８３ｇ，収率４５．５％）。

^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ），δ＝１．３５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ_２），１．７５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ_２），２．４１（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，４Ｈ，２ＣＨ_２Ｎ），２．９７（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ_２Ｎ），３．６５（ｍ，６Ｈ，２ＯＣＨ_２，ＣＨ_２Ｃｌ）ｐｐｍ；構造と一致する。

^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，７５ＭＨｚ），δ＝２５．４，２５．８，４５．４，５３．２，６０．２，６５．５ｐｐｍ；構造と一致する。

ＭＳ（ＥＩ），ｍ／ｅ＝１７８（Ｍ＋１）；構造と一致する。

（工程２：１，４−ビス｛３，４−ビス［４−（Ｎ−モルフィノ）ブトキシ］フェニル｝−２，３−ジメチル−（２Ｒ，３Ｓ）−ブタン「化合物Ｌ」の合成）

ＮＤＧＡ（６０２ｍｇ，２．０ｍｍｏｌ）および水酸化リチウム一水和物（１．０ｇ，２４．０ｍｍｏｌ，１２当量）をｔｅｒｔ−ブタノール（１００ｍＬ）中に含む溶液に、Ｎ−（４−クロロブチル）モルホリン（２．１３ｇ，１２．０ｍｍｏｌ，６．０当量）を添加した。次いで、この溶液を５０℃で、絶えず攪拌しながら加熱した。この反応をＴＬＣ（ＣＨ_２Ｃｌ_２：ＭｅＯＨ：Ｅｔ_３Ｎ＝９２：６：２，Ｖ／Ｖ／Ｖ）により監視し、これにより、この反応が２０時間後に完了したことを確認した。この反応懸濁物を室温まで冷却し、そしてジクロロメタン（２００ｍＬ）と水（１００ｍＬ）とで分配した。この混合物を振盪してよく混合した。その有機相を分離し、そしてその水相をジクロロメタン（２×１００ｍＬ）で抽出した。その有機層および抽出物を合わせ、そして水性飽和重炭酸ナトリウム（１００ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）で洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥させた後に、この溶液を減圧下で濃縮した。その残渣を、ジクロロメタン、メタノールおよびトリエチルアミン（９２：６：２，Ｖ／Ｖ／Ｖ）を溶出液として使用して、シリカゲルカラムで精製し、これにより、予測した生成物を白色半固体物質として得た（６６７．７５ｍｇ，収率３８．５％）。

ＨＰＬＣ純度−９９．２％。元素分析−Ｃ_５０Ｈ_８２Ｎ_４Ｏ_８，ＦＷ＝８６７．２１_，計算値：Ｃ：６９．２５；Ｈ：９．５３；Ｎ：６．４６。実測値：Ｃ：６９．０５；Ｈ：９．２１；Ｎ：６．４３；構造と一致する。

^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）：δ＝０．７４（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，６Ｈ，２×ＣＨ_３），１．３２−１．４６（ｍ，１６Ｈ）１．６２−１．７１（ｍ，２Ｈ，２×ＣＨ），２．２６（ｄｄ，Ｊ＝１３．４，９．２Ｈｚ，２Ｈ，２×ＡｒＣＨ），２．７５（ｄｄ，Ｊ＝１３．２，４．６Ｈｚ，２Ｈ，２×ＡｒＣＨ），２．５１−２．７９（ｍ，１６Ｈ，８×モルホリンＣＨ_２），２．８９（ｔ，Ｊ＝１２．２Ｈｚ，８Ｈ，４×ＣＨ_２Ｎ），３．５６−３．７６（ｍ，１６Ｈ，８×モルホリンＣＨ_２），４．１１（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，８Ｈ，４×ＣＨ_２Ｏ），６．４７−６．６９（ｍ，６Ｈ，６×ＡｒＨ）ｐｐｍ，構造と一致する。

^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，１００ＭＨｚ）：δ＝１６．９６，２４．３１，２４．９１，３８．７７，４０．１８，５４．３１，５５．７９，５６．４６，６０．５９，６５．６０，６７．５８，６７．７０，１１５．６８，１１６．０９，１２２．３９，１３５．７５，１４５．３９，１４９．２９ｐｐｍ；構造と一致する。

ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｅ：８６７（Ｍ＋），４３４（１／２Ｍ＋），構造（Ｃ_５４Ｈ_８２Ｏ_８Ｎ_４）と一致する。

分析：Ｃ_５０Ｈ_８２Ｎ_４Ｏ_８（８６７．２１）についての計算値Ｃ：６９．２５，Ｈ：９．５３，Ｎ：６．４６，実測値Ｃ：６８．９４，Ｈ：９．３９，Ｎ：６．９１，構造と一致する。

（工程３：１，４−ビス｛３，４−ビス［４−（Ｎ−モルフィノ）ブトキシ］フェニル｝−２，３−ジメチル−（２Ｒ，３Ｓ）−ブタン四塩酸塩「化合物Ｍ」の合成）

水性飽和ＨＣｌ（２．２ｍＬの１１Ｎ ＨＣｌ，２４ｍｍｏｌ，２４モル当量）の９５％エタノール（７ｍＬ）中の氷冷した（０℃〜５℃）溶液に、１，４−ビス｛３，４−ビス［４−（Ｎ−モルホリノ）ブトキシ］フェニル｝−２，３−ジメチル−（２Ｒ，３Ｓ）−ブタン（８６７．２１ｍｇ，１．０モル）の９５％エタノール（７ｍＬ）中の溶液を滴下した。この溶液を０℃〜５℃で３時間攪拌し、水浴の温度を４５℃に維持しながらその溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。その塩酸塩を高真空下で４８時間乾燥させた。次いで、その粗製生成物をエタノール：エーテルから結晶化させて、高真空下で７２時間乾燥させた後に６９１．９ｍｇの生成物（収率６８．３％）を得た。この生成物についての分析データを以下に示す。

ｍ．ｐ．２１５℃〜２２０℃（分解）。

ＨＰＬＣ純度：９８．２％（ピーク面積の％）。元素分析−Ｃ_５０Ｈ_８２Ｎ_４Ｏ_８，・・４ＨＣｌ，ＦＷ＝１０１３．０５_，計算値：Ｃ：５９．２８；Ｈ：８．５６；Ｎ：５．５３。実測値：Ｃ：５８．９４；Ｈ：８．２１；Ｎ：５．４３。滴定法による塩素元素分析（無水をベースとする）：理論値：１４．００％；実測値：１４．０５％。

^１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ，４００ＭＨｚ）：δ＝０．７２（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，６Ｈ，２×ＣＨ_３），１．３２−１．４２（ｍ，１６Ｈ）１．６２−１．６８（ｍ，２Ｈ，２×ＣＨ），２．１６（ｄｄ，Ｊ＝１３．４，９．２Ｈｚ，２Ｈ，２×ＡｒＣＨ），２．７２（ｄｄ，Ｊ＝１３．２，４．６Ｈｚ，２Ｈ，２×ＡｒＣＨ），２．４１−２．５９（ｍ，１６Ｈ，８×モルホリンＣＨ_２），２．７０（ｔ，Ｊ＝１２．２Ｈｚ，８Ｈ，４×ＣＨ_２Ｎ），３．４６−３．７２（ｍ，１６Ｈ，８×モルホリンＣＨ_２），４．０１（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，８Ｈ，４×ＣＨ２Ｏ），６．５７−６．７０（ｍ，６Ｈ，６×ＡｒＨ）ｐｐｍ；構造と一致する。

^１３Ｃ ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ，１００ＭＨｚ）：δ＝１５．９６，２３．９１，２４．８９，３８．５７，３９．０８，５３．３１，５３．７９，５７．４６，５９．７９，６６．５０，６６．５８，６６．７０，１１３．６８，１１４．６９，１２１．３９，１３４．７５，１４６．３９，１４８．２９ｐｐｍ；構造と一致する。

ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｅ：８６７（Ｍ＋），４３４（１／２Ｍ＋），遊離塩基（Ｃ_５４Ｈ_８２Ｎ_４Ｏ_８）と一致する。

（実施例９）
（１，４−ビス｛３，４−ビス［４−（Ｎ−メチル−ピペラジノ−Ｎ’−イル）ブトキシ］フェニル｝−２，３−ジメチル−（２Ｒ，３Ｓ）−ブタン遊離塩基（Ｃ_５４Ｈ_９４Ｎ_８Ｏ_４，ＦＷ＝９１９．３８）「化合物Ｎ」；八塩酸塩（Ｃ_５４Ｈ_９４Ｎ_８Ｏ_４・８ＨＣｌ，ＦＷ＝１２１１．０６）「化合物Ｏ」の合成）
（工程１：Ｎ−メチル−Ｎ’−（４−クロロブチル）ピペラジンの合成）

２Ｌの三口丸底フラスコに、Ｎ−メチル−ピペラジン（１００．１６ｇ，１．０ｍｏｌ）、アセトン（１０００ｍＬ）、および無水炭酸カリウム（２７６．４２ｇ，２．０ｍｏｌ，２．０当量）を入れた。このフラスコに、機械攪拌子および冷却器を備え付けた。４−クロロ−１−ブロモ−ブタン（１８８．６ｇ，１．１ｍｏｌ，１．１当量）を、室温で絶えず攪拌しながら３０分間かけて滴下した。次いで、この懸濁混合物を４０℃で攪拌した。この反応の進行をＴＬＣにより監視し、これにより、この反応が４時間後に完了したことを確認した。この混合物を室温まで冷却し、そして不溶性物質を濾過により除去し、そしてジクロロメタン（２×１００ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液を、乾燥するまで減圧下で濃縮した。次いで、その残渣をジクロロメタン（５００ｍＬ）と混合した。不溶性物質を濾過により除去し、そしてジクロロメタン（２×１００ｍＬ）により洗浄した。合わせた濾液および洗浄液を濃縮し、そしてフラッシュシリカゲルカラムで精製し、これにより、予測した生成物を淡黄色油状物として得た（９２．５ｇ，収率４８．５％）。

^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ），δ＝１．３７（ｍ，２Ｈ，ＣＨ_２），１．８１（ｍ，２Ｈ，ＣＨ_２），２．２５（ｓ，３Ｈ，ＮＣＨ_３），２．３３（ｍ，８Ｈ，４ＮＣＨ_２），３．１０（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ，２ＣＨ_２Ｎ），３．６５（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ_２Ｃｌ）ｐｐｍ；構造と一致する。

^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，７５ＭＨｚ），δ＝２５．４，２５．９，４４．１，４５．８，５２．１，５３．１，５５．８ｐｐｍ；構造と一致する。

ＭＳ（ＥＩ），ｍ／ｅ＝１９１（Ｍ＋１）；構造と一致する。

（工程２：１，４−ビス｛３，４−ビス［４−（Ｎ−メチル−ピペラジノ−Ｎ’−イル）ブトキシ］フェニル｝−２，３−ジメチル−（２Ｒ，３Ｓ）−ブタン「化合物Ｎ」の合成）

ＮＤＧＡ（６０２ｍｇ，２．０ｍｍｏｌ）および水酸化リチウム一水和物（１．０ｇ，２４．０ｍｍｏｌ，１２当量）をｔｅｒｔ−ブタノール（１００ｍＬ）中に含む溶液に、Ｎ−メチル−Ｎ’−（４−クロロブチル）ピペラジン（２．２９ｇ，１２．０ｍｍｏｌ，６．０当量）を添加した。この溶液を５０℃で絶えず攪拌しながら加熱した。この反応をＴＬＣ（ＣＨ_２Ｃｌ_２：ＭｅＯＨ：Ｅｔ_３Ｎ＝９２：６：２，Ｖ／Ｖ／Ｖ）により監視し、これにより、この反応が２０時間後に完了したことを確認した。この反応懸濁物を室温まで冷却し、そしてジクロロメタン（２００ｍＬ）と水（１００ｍＬ）とで分配した。この混合物を振盪してよく混合した。その有機相を分離し、そしてその水相をジクロロメタン（２×１００ｍＬ）で抽出した。その有機層および抽出物を合わせ、そして水性飽和重炭酸ナトリウム（１００ｍＬ）、およびブライン（１０ｍＬ）で洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥させた後に、この溶液を減圧下で濃縮した。その残渣を、ジクロロメタン、メタノールおよびトリエチルアミン（９２：６：２，Ｖ／Ｖ／Ｖ）を溶出液として使用してシリカゲルカラムで精製し、これにより、予測した生成物を白色半固体物質として得た（８５５．０２ｍｇ，収率４６．５％）。

ＨＰＬＣ純度：９８．２％（ピーク面積の％）。元素分析−Ｃ_５４Ｈ_９４Ｏ_８Ｎ_４，ＦＷ＝９１９．３８_，計算値：Ｃ：７０．５５；Ｈ：１０．３１；Ｎ：１２．１９。実測値：Ｃ：７０．６５；Ｈ：１０．１１；Ｎ：１２．４３；構造と一致する。

^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）：δ＝０．７６（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，６Ｈ，２×ＣＨ_３），１．３６−１．５６（ｍ，１６Ｈ），１．６５−１．７１（ｍ，４Ｈ），２．４２（ｓ，６Ｈ），２．４５−２．６５（ｍ，２２Ｈ），２．８５（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，４Ｈ），２．９５（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，４Ｈ），４．２３（ｑ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，８Ｈ），６．６５−６．７８（ｍ，６Ｈ，６ｘＡｒＨ）ｐｐｍ；構造と一致する。

^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，１００ＭＨｚ）：δ＝１５．６１，２３．５５，２４．５６，３２．２６，３５．５８，４６．２７，５３．１３，５５．０５，５６．３６，６６．４４，６６．８６，１１３．７７，１１５．６３，１２１．１５，１４５．６６，１４７．９７，１５０．０２ｐｐｍ；構造と一致する。

ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｅ：９２０（Ｍ＋），４６０（Ｍ＋），構造と一致する。

（工程３：１，４−ビス｛３，４−ビス［４−（Ｎ−メチル−ピペラジノ−Ｎ’−イル）ブトキシ］フェニル｝−２，３−ジメチル−（２Ｒ，３Ｓ）−ブタン八塩酸塩「化合物Ｏ」の合成）

水性飽和ＨＣｌ（２．２ｍＬの１１Ｎ ＨＣｌ，２４ｍｍｏｌ，２４モル当量）の９５％エタノール（７ｍＬ）中の氷冷した（０℃〜５℃）溶液に、１，４−ビス｛３，４−ビス［４−（Ｎ−メチル−ピペラジノ−Ｎ’−イル）ブトキシ］フェニル｝−２，３−ジメチル−（２Ｒ，３Ｓ）−ブタン（９１９．３８ｍｇ，１．０モル）の９５％エタノール（７ｍＬ）中の溶液を滴下した。この溶液を０℃〜５℃で３時間攪拌し、水浴の温度を４５℃に維持しながらその溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。その塩酸塩を高真空下で４８時間乾燥させた。次いで、その粗製生成物をエタノール：エーテルから結晶化させて、高真空下で７２時間乾燥させた後に９１４．３５ｍｇの生成物を得た（収率７５．５％）。この生成物についての分析データを以下に示す。

ｍ．ｐ．２１５℃〜２２０℃（分解）。

ＨＰＬＣ純度：９８．２％（ピーク面積の％）。元素分析−Ｃ_５４Ｈ_９４Ｎ_８Ｏ_４・８ＨＣｌ，ＦＷ＝１２１１．０６，計算値：Ｃ：５３．５５；Ｈ：８．４９；Ｎ：９．２５。実測値：Ｃ：５３．２４；Ｈ：８．２１；Ｎ：９．４３。滴定法による塩素元素分析（無水をベースとする）：理論値：２３．４２％；実測値：２３．３５％；構造と一致する。

^１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ，４００ＭＨｚ）：δ＝０．７５（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，６Ｈ，２×ＣＨ_３），１．３３−１．４６（ｍ，１６Ｈ），１．５５−１．６４（ｍ，４Ｈ），２．３２（ｓ，６Ｈ），２．３５（ｓ，６Ｈ），２．４５−２．６５（ｍ，１６Ｈ），２．８３（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，４Ｈ），２．８２（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，４Ｈ），４．１０（ｑ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，８Ｈ），６．６５−６．７８（ｍ，６Ｈ，６ｘＡｒＨ）ｐｐｍ；構造と一致する。．９（Ａｒ），１３２．８（Ａｒ），１４６．４（Ａｒ），１４８．１（Ａｒ）ｐｐｍ；構造と一致する。

^１３Ｃ ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ，１００ＭＨｚ）：δ＝１５．９１，２３．８５，２５．０６，３１．２６，３５．３８，４６．１７，５３．７３，５５．１５，５７．３６，６７．３４，６７．４６，１１４．４７，１１４．７３，１２０．９５，１４６．０６，１４８．７７，１４９．９２ｐｐｍ；構造と一致する。

ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｅ：９２０（Ｍ＋），４６０（Ｍ＋）；構造と一致する。

以下の予定実施例１−５は、示される化合物を作製するために効果的であると考えられる反応スキームを示す。

（予定実施例Ａ）
（１，４−ビス｛３，４−ビス［２−（１−メチル−ピペラジン−４−イル）−エトキシ］フェニル｝−２，３−ジメチル−（２Ｒ，３Ｓ）−ブタン遊離塩基（Ｃ_４６Ｈ_７８Ｎ_８Ｏ_４；ＦＷ＝８０７．１６）；四塩酸塩（Ｃ_４６Ｈ_７８Ｎ_８Ｏ_４・４ＨＣｌ，ＦＷ＝９５３．０１）の合成）

（予定実施例Ｂ）
（１，４−ビス｛３，４−ビス［２−（ピペリジン−１−イル）エチルカルバモイルオキシ］フェニル｝−２，３−ジメチル−（２Ｒ，３Ｓ）−ブタン遊離塩基（Ｃ_５０Ｈ_７８Ｎ_８Ｏ_８，ＦＷ＝９１９．２０）；四塩酸塩（Ｃ_５０Ｈ_７８Ｎ_８Ｏ_８・４ＨＣｌ，ＦＷ＝１０６５．０５）の合成）

（予定実施例Ｃ）
（１，４−ビス｛３，４−ビス［２−（モルホリン−１−イル）エチルカルバモイルオキシ］フェニル｝−２，３−ジメチル−（２Ｒ，３Ｓ）−ブタン遊離塩基（Ｃ_４６Ｈ_７０Ｎ_８Ｏ_１２，ＦＷ＝９２７．０９）；四塩酸塩（Ｃ_４６Ｈ_７０Ｎ_８Ｏ_１２・４ＨＣｌ，ＦＷ＝１０７２．９４）の合成）

（予定実施例Ｄ）
（１，４−ビス｛３，４−ビス［（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチル）カルバモイルオキシ］フェニル｝−２，３−ジメチル−（２Ｒ，３Ｓ）−ブタン遊離塩基（Ｃ_３８Ｈ_６２Ｎ_８Ｏ_８，ＦＷ＝７５８．９５）の合成）

（予定実施例Ｅ）
（１，４−ビス｛３，４−ビス［（フラン−２−イル）メチル−カルバモイルオキシ］フェニル｝−２，３−ジメチル−（２Ｒ，３Ｓ）−ブタン遊離塩基（Ｃ_４２Ｈ_４２Ｎ_４Ｏ_１２，ＦＷ＝７９４．８０）の合成）

本発明は、実施された一般プロトコルに従う、インビトロの細胞傷害性および有効性の研究に関する、以下の特定の非限定的な作業実施例に関して、さらに記載される。

（細胞傷害性および有効性の研究）
本発明の化合物のうちの特定のものを、インビトロで研究した。これらのインビトロ研究は、種々のクラスの本発明のＮＤＧＡ誘導体が、ウイルス感染または増殖性疾患、炎症性疾患代謝疾患もしくは脈管疾患の予防処置または発症後の処置のために安全かつ有効であることを立証した。以下の実施例は、このような試験に含まれた研究を説明する。

（細胞傷害性研究）
細胞傷害性に関して実施された研究は、周知のＭＴＳ、トリパンブルーおよびＭＴＴプロトコルを含んだ。ＭＴＳ研究を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６（登録商標）ＡＱ_{ｕｅｏｕｓ} Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ ＵＳＡ）を使用して行った。代謝的に活性な、すなわち生存している細胞は、ＭＴＳ（テトラゾリウム化合物（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム，内部塩））を、色のついたホルマザンに変え、このホルマザンは、組織培養培地に可溶である。ホルマザンの吸光度の測定値を、４９０ｎｍで読み取る。使用の準備ができた試薬を、９６ウェルプレート中の倍地中の細胞に直接添加し、１時間〜４時間インキュベートし、そしてその結果をプレートリーダーにより記録した。ＩＣ_５０を、収集したデータをグラフ化することにより評価した。ＩＣ_５０とは、コントロールと比較した、試験物質の成長または生存能の５０％を阻害する、試験物質の濃度である。

トリパンブルーアッセイにおいて、細胞をトリプシン処理し、そしてサンプルを、トリパンブルー色素と生理食塩水との溶液に添加する。生存細胞は、この色素を細胞膜の外側に維持し得、損傷細胞または死細胞は維持し得ない。生存細胞および非生存（青色）細胞を係数し、そして生存細胞の百分率を計算する。増殖率を、プラシーボ処理した細胞からの値を使用して、処理された細胞の生存能を処理されていない細胞の生存能と比較することにより計算する。

ＭＴＴアッセイは、生存細胞の数を決定するための比色定量方法である。代謝的に活性な細胞は、ＭＴＴ試薬（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド）を紫色のホルマザン結晶に変え、この結晶は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に可溶化される。ＭＴＴ試薬をＭＴＴ（無色）培地に添加する。この培地を細胞に添加し、そしてこれらの細胞を４時間インキュベートする。ＤＭＳＯをこれらの細胞に添加し、そして混合する。次いで、この着色した溶液を５４０ｎｍで読み取り、そして６３０ｎｍで補正する。ＩＣ_５０を、収集したデータをグラフ化することにより評価する。

（抗ウイルス活性のＳＥＡＰアッセイ）
抗ウイルス活性を、ＳＥＡＰ（ＳＥｃｒｅｔｅｄ Ａｌｋａｌｉｎｅ Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ）アッセイを使用して決定する。このアッセイにおいて、細胞を、ＳＥＡＰプラスミドおよびＴＡＴプラスミドと一緒にトランスフェクトする。ＴＡＴは、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）遺伝子発現のトランス作用因子であり、そしてＨＩＶ遺伝子発現のために必須な２つ以上のウイルス調節因子（ＴＡＴおよびＲＥＶ）のうちの１つである。ＴＡＴは、ＴＡＲ ＲＮＡエレメントに結合し、そして長い末端反復（ＬＴＲ）プロモーターからの転写を活性化することによって、作用する。ＴＡＴタンパク質は、転写の伸長を安定化し、そしてまた、転写阻害に関与することが示されている。以前の研究は、ＴＡＴが、抗体依存性Ｔ細胞増殖の減少を媒介し、免疫応答の失敗に実質的に寄与することを示した。ＴＡＴはまた、カポージ細胞増殖を直接刺激する。

ＴＡＴは、明らかな細胞ホモログを有さないので、この強い陽性レギュレーターは、抗ＡＩＤＳ薬物の開発のための魅力的な標的になっている。現在利用可能なＨＩＶ逆トランスクリプターゼインヒビター（ＡＺＴ、ＤＤＩ）、または感染の新たな回数を防止する潜在的なプロテアーゼインヒビターとは異なり、ウイルス遺伝子ＴＡＴにより調節される組み込まれたプロウイルスＤＮＡの発現を抑制するインヒビターは、このウイルスを初期段階で停止させる（Ｈｓｕら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５４：１７９９−１８０２，１９９１）。宿主真核生物において遺伝子発現を転写レベルおよび転写後レベルで制御する因子の説明を試みる努力が、最近、ＴＡＴ機能の定量的評価を可能にした（Ｓｉｍ，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６１６：６４−７０，１９９０）。ＴＡＴにより調節されるトランス活性化（ＴＡＴ−ＴＲＳ）についてのインヒビターをスクリーニングするために、ＳＥＡＰレポーター遺伝子が、プラスミドｐＢＣ１２／ＨＩＶ／ＳＥＡＰのＨＩＶ−１ ＬＴＲプロモーターの制御下に置かれる。ＴＡＴコードされた活性は、第二のプラスミド構築物ｐＢＣ１２／ＣＭＶ／ｔ２により供給される。ＣＯＳ−７細胞とこれらの２つのプラスミドとの一時的な共トランスフェクションは、培養培地内へのアルカリホスファターゼの分泌をもたらし、このアルカリホスファターゼが、単純な比色定量アッセイにより分析される（Ｂｅｒｇｅｒら，Ｇｅｎｅ ６６：１−１０，１９８８）。従って、ＳＥＡＰアッセイは、ＴＡＴトランス活性化の間接的な決定を提供する。

ＳＥＡＰアッセイにおいて、インヒビターは、ＳＥＡＰレポーター遺伝子発現の減少を、ＴＡＴタンパク質（ＴＡＴ−ＴＲＳ）によるＨＩＶ−１ ＬＴＲプロモーターのトランス活性化を介して引き起こすべきである。ＴＡＴタンパク質は、サイトメガロウイルスプロモーターの制御下で発現され、そして非内因性の、耐熱形態の分泌アルカリホスファターゼの発現を誘導する。ＴＡＴトランス活性化が薬物により遮断される場合、レポーターＳＥＡＰは、培地中に排出されない。ＳＥＡＰは、パラ−ニトロフェニルホスフェート基質によって、４０５ｎｍで比色定量的に検出される。Ｇｎａｂｒｅ^１３を参照のこと。これらの細胞は、ＭＴＴアッセイにより分析されて、細胞傷害性をＳＥＡＰ阻害と比較される。その目的は、その薬物が、毒性になりすぎずにＳＥＡＰを阻害することである。

（抗増殖活性）
抗増殖活性を、ＴｉｔｅｒＴＡＣＳ（登録商標）Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ ＵＳＡ）を使用して、ＤＮＡ断片化に基づく細胞のアポトーシスに関して決定し、そしてＥＬＩＳＡ ＶＥＧＦ（脈管上皮成長因子）およびサービビンアッセイにより決定する。

ＤＮＡ断片化アッセイにおいて、アポトーシスのインサイチュ検出を、ＴｉｔｅｒＴＡＣＳ（登録商標）９６ウェルＡｐｏｐｔｏｓｉｓ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｋｉｔ（カタログ番号ＴＡ６００（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．））で特異的に達成する。ＴｉｔｅｒＴＡＣＳ（登録商標）アッセイは、培養された細胞のアポトーシスの定量を、比色定量検出を使用する標識細胞の直接計数なしで提供する。細胞を試験化合物で処理し、実験ネガティブコントロールとして未処理のままにするか、またはポジティブコントロールとしてＴＡＣＳヌクレアーゼで処理する。ＴＡＣＳヌクレアーゼは、ポジティブコントロールが各実験系について発生することを可能にする。標識化前の、細胞のＴＡＣＳヌクレアーゼでの短時間の処理は、各細胞におけるＤＮＡ切断を発生させ、研究中の系に対して特異的な、適切なポジティブコントロールを提供する。ＤＮＡ断片へのｄＮＴＰｓの付加を触媒するＴｄＴ酵素は、ストレプトアビジン−ＨＲＰ溶液、続いてＴＡＣＳ−Ｓａｐｐｈｉｒｅ基質を使用するよって、４５０ｎｍでの比色定量検出を可能にする。４５０ｎｍにおける高い吸光度は、細胞におけるアポトーシスを示す。処理された細胞を未処理の細胞およびヌクレアーゼ切断した細胞と比較して、アポトーシスの程度を評価する。

ＥＬＩＳＡ（酵素結合イムノソルベント検定法）ＶＥＧＦ研究を、製造業者の指示に従って、Ｅｎｄｏｇｅｎ（登録商標）Ｈｕｍａｎ ＶＥＧＦ ＥＬＩＳＡキット（カタログ番号ＥＨＶＥＧＦ（Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ ＵＳＡ））を使用して行った。低酸素症状態を各細胞に、これらの細胞をデスフェロキサミン（ＤＦＯ）（これは、鉄をキレートする）で処理し、そしてこれらの細胞にＶＥＧＦを培地中に分泌させることよって、生じさせた。その上清（培地）を除去し、そして試験のために凍結させ、そしてこれらの細胞を、結果が細胞計数に対して正規化され得るように、トリパンブルーアッセイで係数した。ＶＥＧＦをサンドイッチＥＬＩＳＡで測定する。サンドイッチＥＬＩＳＡは、培地中のタンパク質を抗体でコーティングされたマイクロプレート上に捕捉し、次いでビオチン化抗体試薬を使用してこのタンパク質を検出する。標準曲線からの結果は、使用者が各サンプル中のタンパク質の量を定量することを可能にする。

（ＥＬＩＳＡ−サービビンアッセイ）
サービビンとは、多くのヒト癌において異常に発現するが、正常な成人組織中では発現しない、インヒビターであり、従って、細胞の死／生存の末期エフェクター段階の可能なモジュレーターと考えられている。サービビンは、Ｇ_２−Ｍにおいて、細胞周期に依存する様式で発現し、有糸分裂紡錘体微小管に直接結合する。サービビンのＴｈｒ３４におけるリン酸化は、細胞分裂の際の細胞の生存能を維持するために必要とされ得るようであり、そしてリン酸化が不完全なサービビン変異体の発現は、数種のヒト黒色腫細胞株におけるアポトーシスを誘発することが示されている。リン酸化サービビンは、カスパーゼ経路に作用して、カスパーゼ−３およびカスパーゼ−９の形成を抑制し、これによって、アポトーシスを阻害する。従って、サービビンの発現を減少させる化合物は、アポトーシスおよび細胞死の割合を増加させると予測される。

サービビンに対する試験化合物の影響を、製造業者の指示に従って、Ｓｕｒｖｅｙｏｒ^ＴＭ ＩＣ Ｈｕｍａｎ Ｔｏｔａｌ Ｓｕｒｖｉｖｉｎ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ（カタログ番号ＳＵＶ６４７ （Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．））を使用して研究した。細胞溶解物を、サービビンタンパク質含有量について分析した。このキットは、サービビンに特異的な抗体でコーティングされたプレート、およびこのプレートに結合したサービビンを認識するビオチン化抗体を備える。このプレートを、４５０ｎｍに設定されたプレートリーダーで読み取り、そして５４０ｎｍで補正する。Ｂｒａｄｆｏｒｄ法（Ｂｒａｄｆｏｒｄ，Ｍ．１９７６，Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ ７２：２４８−２５４）によるタンパク質アッセイを使用して、サンプルを、全タンパク質含有量に従って定量および正規化した。標準曲線からの結果は、使用者が、各サンプル中のサービビンタンパク質の量を定量することを可能にする。

（抗炎症活性）
抗炎症活性を、試験化合物の、初代ヒトケラチノサイト（ＰＨＫ）に対する影響に基づいて決定した。ＰＨＫは、炎症プロセスにおいて重要な役割を果たし、多数のサイトカイン、接着分子、成長因子および増殖因子を合成する。試験化合物がケラチノサイトを阻害してインターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、細胞間接着分子−１（ＩＣＡＭ−１、ＣＤ５４としてもまた公知）および単球走化性タンパク質−１（ＭＣＰ−１）の産生を防止または減少させ得るか否かを決定するために、研究を実施した。ＰＨＫを、最初にＴＮＦ−αで処理して、炎症前状態を誘導し、そして炎症前サイトカインの放出を誘導した。次いで、特異的サイトカインを、製造業者の指示に従って、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．のタンパク質アッセイ（Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ ＥＬＩＳＡキット；ＭＣＰ−１キットについてはカタログ番号ＤＣＰ００、ＧＭ−ＣＳＦキットについてはカタログ番号ＤＧＭ００、そしてＩＦＮ−γについてはカタログ番号ＤＩＦ５０）を使用してアッセイした。

（抗ウイルス活性および抗増殖活性に関する細胞傷害性研究のための一般プロトコル）
ＡＴＣＣから得、そしてＡＴＣＣにより示されるように維持した３つの細胞株（ＨｅＬａ（子宮頚部腺癌）、Ａ５４９（肺腺癌）、およびＣＯＳ−７（ＳＶ４０形質転換したサル腎臓））を試験した。これらの細胞株の研究は、哺乳動物（ヒトを含む）の疾患に対する試験物質の影響を示すと考えられる。

全ての化合物をＤＭＳＯに溶解した。ＤＭＳＯをプラシーボとして使用する。これらのサンプルを、最初にＤＭＳＯ中１０ｍＭの希釈物に溶解し、次いで、５ｍＭ、１ｍＭ、０．５ｍＭ、０．１ｍＭ、０．０５ｍＭ、および０．０１ｍＭの溶液にさらに希釈した。これらの溶液を、培地に１％の濃度（１μｌ〜１００μｌの培地）で添加して、これらの細胞を１００μＭ、５０μＭ、１０μＭ、５μＭ、１μＭ、０．５μＭ、および０．１μＭの化合物で処理した。低いＩＣ_５０を有することがわかった化合物を、ＤＭＳＯでさらに希釈した。溶液を使用前に、沈殿物について確認した（特に、１０ｍＭの溶液）。沈殿物が存在した場合、これらの溶液を６５℃まで温め、そして温めた培地に添加した。

９６ウェルプレートのウェルに、１００μｌの培地中の１．５−８×１０^４個の細胞を播種し、そして一晩インキュベートした。このプレートの外周のウェルを２００μｌの滅菌脱イオン（ＤＩ）水で満たして、培地の蒸発を抑制した。２４時間後、試験化学物質を、培地中に、培地体積の１％の濃度で調製した。試験サンプル培地を添加し、ピペットで混合し、その後、１ウェルあたり１００μｌを添加した。培地を、「培地のみ」のウェルに添加した。このウェルプレートおよびその内容物を、実施する研究に依存して２４時間〜７２時間インキュベートした。ＭＴＳアッセイの日に、ＭＴＳ試薬を冷蔵庫から取り出し、そして室温に戻した。マルチチャネルピペットを使用して、２０μｌのＭＴＳ試薬を各ウェルに添加し、そして１時間〜４時間インキュベートした。このプレートを、４９０ｎｍで、６９０ｎｍの参照波長を用いて、インキュベーター内での１時間後に読み取り、その後、ブランクウェルが約０．２ＯＤになるまで読み取った。次いで、これらの結果をＭｉｃｒｏｓｏｆｔ（登録商標）Ｅｘｃｅｌ（登録商標）テンプレート（データが入力されると全ての必要な計算を実行するように設計されている）に走査した。これらのデータを、統計学的誤差について確認した。その群についてのデータ点の平均の１０％以内であるデータ点を含めた。ブランク（「培地のみ」）の平均を減算し、そしてこれらのデータを、増殖応答（処理あり／処理なし）を表す図に挿入した。

（ＳＥＡＰプロトコル）
以下のＳＥＡＰプロトコルを、ＨＩＶ転写のＴＡＴにより媒介されるトランス活性化の活性を測定するためのレポーター系として使用した。ＭＴＴアッセイは、細胞増殖を測定し、そしてＳＥＡＰ活性のレベルが細胞傷害性のみに起因するわけではないことを確認するために使用される。これらのアッセイを、抗ウイルス薬剤、特に、抗ＨＩＶ候補としての潜在的な薬物リード化合物についてスクリーニングする際に使用した。

ＣＯＳ−７（ミドリザル腎臓）細胞を、Ｆｕｇｅｎｅ ６試薬（Ｒｏｃｈｅ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ，カタログ番号１１８１５０９１００１，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，Ｉｎｄｉａｎａ，ＵＳＡ）を使用して、２つのプラスミド（ｐＨＩＶＳＥＡＰ（ＨＩＶ ＬＴＲプロモーターの制御下の発現ベクターＳＥＡＰ）およびｐＣＴＡＴ（ＣＭＶ（サイトメガロウイルス）プロモーターの制御下のＨＩＶ ＴＡＴ転写因子発現ベクター））を用いて共トランスフェクトした。試験化合物での４８時間の処理後、サンプルを、ｐ−ニトロフェニルホスフェート基質の添加後に、ＳＥＡＰ活性について４０５でｎｍ分析した。ＳＥＡＰ活性阻害の百分率を、プラシーボコントロールに対して計算した。

（実施例１０）
（ＳＥＡＰ／ＭＴＴおよびＭＴＳ研究−細胞傷害性および抗ウイルス有効性）
上に記載された一般プロトコルに基づく上記作業実施例からの示された化合物に対する、ＳＥＡＰ／ＭＴＴ研究およびＭＴＳの結果を、以下の表３に示す。表３において、左側の欄は、試験した化合物を識別し、そしてＥＣ_５０は、コントロールの効果の５０％を有する化合物の濃度を示す。ＩＣ_５０を、上記のように定義した。

ＭＴＳアッセイを使用して試験した２つの細胞株において、細胞生存能の指標としての生物学的活性を有する化合物からの結果を、表３に示す。ＩＣ_５０濃度は、これらの化合物による細胞生存能の阻害の種々の程度を示す。全ての化合物は、用量依存様式で細胞生存能を減少させ得たので、用量依存様式でアポトーシスを誘導し得た。化合物Ａは、Ａ５４９細胞において、最も強い細胞生存能阻害を示し、一方で、その塩酸塩（化合物Ｂ）は、ＨｅＬａ細胞において最も強い阻害を示した。

ＳＥＡＰアッセイにより決定される場合のＴＡＴ−トランス活性化の阻害の程度もまた、表３に示されるように、化合物間で変動した。化合物Ａはまた、およそ０．５μＭ〜１．０μＭのＥＣ_５０を有する、有意な抗ウイルス活性を示した。ＭＴＴにより決定される場合の、試験細胞（ＣＯＳ−７）の細胞生存能の阻害濃度は、通常、ＴＡＴ−トランス活性化についての有効濃度と類似していた。

（実施例１１）
（ＴｉｔｅｒＴＡＣＳ（登録商標）、ＶＥＧＡおよびサービビンアポトーシス研究に基づく抗増殖活性）
上記一般プロトコルに基づく上記作業実施例からの示された化合物に対する、ＴｉｔｅｒＴＡＣＳ（登録商標）ＤＮＡ断片化、ＥＬＩＳＡ ＶＥＧＡおよびＥＬＩＳＡサービビンアポトーシス研究の結果を、以下の表４に示す。

陽性＝アポトーシスを誘導する。
陰性＝アポトーシスを誘導しない。

試験した化合物は、低いマイクロモル濃度で、サービビンタンパク質のレベルの有意な低下を示した。従って、これらの化合物はまた、ＤＮＡ断片化アッセイにより決定される場合に、強いアポトーシス誘導を示した。化合物Ｄ、Ｍ、ＯおよびＨは、サービビンタンパク質発現を減少させ、従って、アポトーシスを誘導し得る。これらの化合物は、用量依存様式でサービビンを低下させ得、そして用量依存様式でアポトーシスを誘導し得る。化合物Ｄは、サービビンタンパク質産生の最も強力なインヒビターであり、サービビン産生についておよそ４μＭのＩＣ_５０を有した。

ＶＥＧＦタンパク質の放出もまた、これらの化合物により減少される。ＶＥＧＦタンパク質産生の阻害は、化合物Ｂ、Ｄ、Ｍ、Ｏ、ＧおよびＨについて、低いマイクロモルの濃度の範囲であった。全ての化合物による阻害が、用量依存様式で観察された。化合物Ｂは、ＶＥＧＦ産生について、およそ２μＭのＩＣ_５０を示し、一方で、化合物ＤとＭとの両方は、およそ９μＭのＶＥＧＦ ＩＣ_５０を示した。

表４からの結果は、本発明の化合物が、ウイルス活性を阻害する際に有効であり、そして試験された細胞において細胞死（アポトーシス）を引き起こす際に有効であることを示す。試験した化合物のうちで、化合物Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｇ、Ｈ、ＭおよびＯは、より低いＥＣ_５０値およびＩＣ_５０値に起因して、他の化合物よりも効果的であるようである。化合物Ａは、最も効果的であるようである。

（実施例１２）
（アメリカ国立がん研究所ＤＴＰヒト腫瘍細胞株スクリーン）
アメリカ国立がん研究所（ＮＣＩ）は、癌薬物発見を支持して提示された物質をスクリーニングするための、開発的治療プログラム（ＤＴＰ）（ｈｔｔｐ：／／ｄｔｐ．ｎｃｉ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｂｒａｎｃｈｅｓ／ｂｔｂ／ｉｖｃｌｓｐ．ｈｔｍｌ）を提供する。インビトロ細胞株スクリーニングプロジェクト（ＩＶＣＬＳＰ）は、熱心なサービスであり、ＤＴＰ抗癌薬物発見プログラムに対する直接的な支持を提供し、そして１年間に３，０００の化合物を、潜在的な抗癌活性についてスクリーニングするように設計されている。このスクリーンの操作は、白血病、黒色腫、ならびに肺、結腸、脳、卵巣、乳房、前立腺および腎臓の癌を代表する、６０の異なるヒト腫瘍細胞株を利用する。その目的は、特定の腫瘍細胞株の選択的増殖阻害または細胞殺傷を示す、合成化合物または天然産物サンプルのさらなる評価を優先することである。このスクリーンは、与えられた化合物により生成された６０の細胞株の用量応答の複雑さが、パターン認識アルゴリズム（ＣＯＭＰＡＲＥプログラム。ｈｔｔｐ：／／ｄｔｐ．ｎｃｉ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｏｃｓ／ｃｏｍｐａｒｅ／ｃｏｍｐａｒｅ．ｈｔｍｌを参照のこと）において利用され得る生物学的応答パターンを生じる点で、独特である。これらのアルゴリズムを使用して、試験化合物に対する推定作用機構を割り当てること、またはその応答パターンが独特であってＮＣＩデータベースに含まれる標準プロトタイプ化合物のいずれの機構とも類似ではないことを決定することが、可能である。さらに、６０の細胞株における種々の細胞分子標的の特徴付けに従って、特定の分子標的と最も相互作用しやすい化合物を選択することが可能であり得る。

このスクリーニングは、２段階のプロセスであり、全ての化合物の、６０の細胞株に対する１０μＭの単回用量での評価で開始する。この単回用量スクリーンからの出力は、平均グラフとして報告され、そしてＣＯＭＰＡＲＥプログラムによる分析のために利用可能である。有意な増殖阻害を示す化合物を、５つの濃度レベルにおいて、６０の細胞パネルに対して評価する。

（インビトロ癌スクリーンの方法論）
癌スクリーニングパネルのヒト腫瘍細胞株は、５％牛胎仔血清および２ｍＭのＬ−グルタミンを含むＲＰＭＩ １６４０培地中で増殖される。代表的なスクリーニング実験について、細胞を、９６ウェルマイクロタイタープレートに１００μＬで、個々の細胞株の倍化時間に依存して５，０００細胞／ウェル〜４０，０００細胞／ウェルの範囲のプレーティング密度で播く。細胞を播いた後に、これらのマイクロタイタープレートを３７℃、５％ ＣＯ_２、９５％空気および１００％相対湿度で２４時間インキュベートし、その後、実験薬物を添加する。

２４時間後、各細胞株の２つのプレートをインサイチュでトリクロロ酢酸（ＴＣＡ）で固定して、薬物添加の時点（Ｔｚ）での各細胞株についての細胞の割合の尺度を提供する。実験薬物を、所望の最終最大試験濃度の４００倍でＤＭＳＯに溶解し、そして使用前に凍結させて保存する。薬物の添加の時点で、凍結した濃厚物のアリコートを溶解し、そして５０μｇ／ｍｌのゲンタマイシンを含有する完全培地で所望の最終最大試験濃度の２倍に希釈する。さらなる４回の１０倍または１／２ｌｏｇ連続希釈物を作製して、合計５つの薬物濃厚物およびコントロールを提供する。これらの異なる薬物希釈物の１００μｌのアリコートを、すでに１００μｌの培地を含む適切なマイクロタイターウェルに添加し、所望の最終薬物濃度を生じる。

薬物の添加後、これらのプレートを、さらに４８時間、３７℃、５％ ＣＯ_２、９５％空気、および１００％相対湿度でインキュベートする。接着系細胞については、このアッセイを、冷ＴＣＡの添加により停止させる。５０μｌの冷５０％（ｗ／ｖ）ＴＣＡ（最終濃度１０％ ＴＣＡ）を穏やかに添加し、そして４℃で６０分間インキュベートすることによって、細胞をインサイチュで固定する。上清を処分し、そしてこれらのプレートを水道水で５回洗浄して、空気乾燥させる。スルホローダミンＢ（ＳＲＢ）溶液（１００μｌ）を、１％酢酸中０．４％（ｗ／ｖ）で各ウェルに添加し、そしてプレートを室温で１０分間インキュベートする。染色後、未結合の色素を、１％酢酸で５回洗浄することにより除去し、そしてこれらのプレートを空気乾燥させる。続いて、結合した染料を１０ｍＭのｔｒｉｚｍａ塩基で可溶化し、そしてその吸光度を、自動プレートリーダーで５１５ｎｍの波長で読み取る。浮遊系細胞について、５０μｌの８０％ ＴＣＡ（最終濃度１６％ ＴＣＡ）を穏やかに添加することにより、ウェルの底部に沈降した細胞を固定することによってこのアッセイを停止させることを除いて、その方法論は同じである。７つの吸光度の測定値［時刻ゼロ（Ｔｚ）、コントロール増殖（Ｃ）、および５つの濃度レベルでの薬物の存在下での試験増殖（Ｔｉ）］を使用して、増殖の百分率を、各薬物濃度レベルで計算する。増殖阻害の百分率を、以下のように計算する：
［（Ｔｉ−Ｔｚ）／（Ｃ−Ｔｚ）］×１００（Ｔｉ＞／＝Ｔｚである濃度について）
［（Ｔｉ−Ｔｚ）／Ｔｚ］×１００（Ｔｉ＜Ｔｚである濃度について）。

３つの用量応答パラメータを、各実験薬剤について計算する。５０％の増殖阻害（ＧＩ_５０）を、［（Ｔｉ−Ｔｚ）／（Ｃ−Ｔｚ）］×１００＝５０から計算する。これは、薬物インキュベーション中にコントロール細胞中での正味のタンパク質増加（ＳＲＢ染色により測定される場合）の５０％の減少を生じる薬物濃度である。総増殖阻害（ＴＧＩ）を生じる薬物濃度を、Ｔｉ＝Ｔｚから計算する。処理後の細胞の正味の損失を示すＬＣ_５０（薬物処理の終了時に測定されるタンパク質を、開始時のタンパク質と比較した場合に、５０％の減少を生じる薬物の濃度）を、［（Ｔｉ−Ｔｚ）／Ｔｚ］×１００＝−５０から計算する。活性のレベルに達した場合に、これらの３つ全てのパラメータの各々についての値を計算する。しかし、その効果が達成されないかまたは超過される場合、そのパラメータについての値は、試験した最大濃度より高いかまたは最小濃度より低いかとして表される。

１０μＭの化合物Ａについての、上記のようなＮＣＩ ＤＴＰ研究の結果の要約を、表５に示す：

これらの結果は、１０μＭの濃度の化合物Ａが、６０の細胞株のうちの多数の型に対して、ベースの広い活性を有したことを示す。最大の阻害効果は、腎臓癌細胞株に対して示され、それに前立腺癌細胞株がすぐ続き、最小の阻害効果は、乳癌に対して示された。

（実施例１３）
（抗炎症製活性および抗脈管疾患活性のＰＨＫ研究）
上記作業実施例の化合物のうちの数種の抗炎症活性を、初代ヒトケラチノサイト（ＰＨＫ）に対する試験化合物の効果に基づいて、上記のように、そしてこの研究において使用されたキットについての製造業者の指示に従って、決定した。これらの研究は、代表的に、抗炎症性の調査のために主として使用されるが、これらの研究はまた、脈管疾患にも適用され得る。なぜなら、ケラチノサイトにおける結果が、脈管内皮に対して外挿され得るからである。

ＰＨＫを用いるＭＣＰ−１データのみが用量依存性であるので、ＭＣＰ−１についてのＩＣ_５０は計算され得るが、他のサイトカインについては計算され得ない。種々の化合物に対するＭＣＰ−１研究の結果を、以下の表６に示す。

ＭＣＰ−１タンパク質産生によりアッセイされた場合に、ＴＮＦ−αで処理されたＰＨＫにおいて抗炎症活性を有した化合物からの結果を、表６に示す。ＭＣＰ−１タンパク質についてのＩＣ_５０濃度は、この炎症性サイトカインの種々の程度の阻害を示す。これらの試験の他のものの結果において、試験された全ての化合物は、用量依存様式でＭＣＰ−１タンパク質産生を減少させ得た。化合物Ｂは、ＴＮＦ−αで処理されたＰＨＫにおいて、ＭＣＰ−１の最も強い阻害を示した。

（実施例１４）
（経口生体利用性の指標としての透過性研究）
透過性研究が、本発明および本願の譲受人のために、外部の契約者により実施され、Ｃａｃｏ−２単層を通る化合物Ａの透過性を決定した。経口生体利用性の重要な要因は、化合物が小腸において吸収される能力である。細胞単層を通る薬物の見かけの透過性（Ｐ_ａｐｐ）の測定は、ヒトの腸での吸収によく相関付けられており、そして数種のヒト細胞株（Ｃａｃｏ−２、ＬＬＣ−ＰＫ１およびＭＤＣＫが挙げられる）は、この測定のために適切である（Ａｒｔｕｒｓｓｏｎ，Ｐ．ら，Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｏｒａｌ ｄｒｕｇ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎｓ ａｎｄ ａｐｐａｒｅｎｔ ｄｒｕｇ ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ（Ｃａｃｏ−２）ｃｅｌｌｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍ １７５：８８０−８８５（１９９１）；Ｓｔｅｗａｒｔ，Ｂ．Ｈ．ら，Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｉｅｓ ｉｎ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｓｉｔｕ ｍｏｄｅｌｓ：ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｔｏ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎｓ．Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ １２：６９３（１９９５））。Ｐ−糖タンパク質（Ｐ−ｇｐ、ＭＤＲ１によりコードされる）は、ＡＢＣトランスポータースーパーファミリーのメンバーであり、そしてヒトの腸、肝臓および他の組織において発現される。Ｐ−ｇｐの腸での発現は、このトランスポーターの基質である薬物分子の経口生体利用性に影響を与え得る。Ｐ−ｇｐとの相互作用は、分極細胞系（例えば、Ｃａｃｏ−２細胞単層）ならびにヒトＰ−ｇｐ ｃＤＮＡ発現ＬＬＣ−ＰＫ_１およびＭＤＣＫ細胞単層における薬物輸送の直接アッセイを使用して、研究され得る。

Ｃａｃｏ−２細胞（ヒト腺癌結腸細胞株Ｃａｃｏ−２、ＡＴＣＣカタログ番号ＨＴＢ−３７、第１８継代と第４５継代との間で使用される）を、ＢＤ Ｆａｌｃｏｎ^ＴＭ ＨＴＳ ２４−マルチウェル、１μｍカルチャーインサート（ＢＤカタログ番号３５１１８０）（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｌａｂｗａｒｅ，Ｗｏｂｕｒｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）に播種した。培地を３日〜４日ごとに交換しながら、これらの細胞を２１日〜２５日間培養した。単層の一体性を、実験前の経上皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）測定および実験後のルシファーイエローのＡからＢへの流れの決定により評価した。

輸送緩衝液は、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ（Ｎ−［２−ヒドロキシエチル］ピペラジン−Ｎ’−［２−エタンスルホン酸］）の添加により緩衝され、そしてｐＨを７．４にＮａＯＨで調整されたＨＢＳＳ（ハンクスバランス塩溶液）であった。受容溶液を、１％ ＤＭＳＯを輸送緩衝液に添加することにより調製した。試験溶液は、最終ＤＭＳＯ濃度が１％の、輸送緩衝液中のＤＭＳＯ中の化合物Ａの溶液であった。２つの透過性比較化合物のドナー溶液（「高」としての５０μＭの［^３Ｈ］−プロプラノロールおよび「低」としての５０μＭの［^１４Ｃ］−マンニトール）ならびにポジティブコントロールであるＰ−ｇｐ基質のドナー溶液（５μＭの［^３Ｈ］−ジゴキシン）を、放射性標識したストック溶液および非放射性標識ストック溶液のアリコートを輸送緩衝液に最終ＤＭＳＯ濃度１％で希釈することによって、調製した。

試験品を、単一濃度（１μＭ）で、ＡからＢの方向とＢからＡの方向との両方においてアッセイした。ドナー溶液および受容溶液を、単層の先端チャンバまたは基底外側チャンバ（測定されるべき輸送の方向に依存する）に添加した。これらの単層をオービタルシェーカー（５０ｒｐｍ）で３７℃で、周囲の湿度およびＣＯ_２でインキュベートした。９０分後、ドナーチャンバおよび受容チャンバからのサンプルを、分析のために取り出した。

サンプルからアッセイプレートへの非特異的結合の程度を決定するために、サンプル溶液を、２４ウェルアッセイプレートの１つのウェル内で、上記条件下でインキュベートした。９０分後、サンプルを、分析のために各ウェルから取り出した。全てのサンプルを収集した後に、ルシファーイエロー溶液を、各単層に、１００μＭの最終濃度で添加した。インサートを、輸送緩衝液を含む新たな受容プレートに入れた。オービタルシェーカー（５０ｒｐｍ）で３７℃で周囲の湿度およびＣＯ_２での３０分間のインキュベーション後、サンプルを受容チャンバから取り出して、ルシファーイエローの流れの百分率を測定した。

高い透過性（５０μＭの［^３Ｈ］−プロプラノロール）および低い透過性（５０μＭの［^１４Ｃ］−マンニトール）を代表する、２つの透過性比較化合物を、ドナーチャンバおよび受容チャンバからのサンプルを９０分目という１つの時点で採取して、ＡからＢへの方向でアッセイした。コントロールであるＰ−ｇｐ基質は、５μＭの［^３Ｈ］−ジゴキシンであり、ドナーチャンバおよび受容チャンバからのサンプルを９０分目という１つの時点で採取して、ＡからＢへの方向とＢからＡへの方向との両方でアッセイした。二連の単層を、各インキュベーションのために使用した。

サンプルを、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳによって、内部標準に対するピーク面積比を使用して分析した。試験品の濃度を、試験品を含むドナー溶液の、見かけの濃度での輸送緩衝液中への適切な希釈物について得られたピーク面積比に基づいて計算した。応答が質量分析検出器の直線範囲内であることを確実にするために適切であるように、サンプルを希釈した。比較サンプルおよびコントロールサンプルを、液体シンチレーション計数により分析した。ルシファーイエロー濃度を、蛍光プレートリーダーを使用して決定した。

実験前の経上皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）測定（平均４１１Ωｃｍ^２）および実験後のルシファーイエローのＡからＢへの流れ（平均０．１％）により、単層の一体性を確認した。ポジティブコントロールであるジゴキシンの分極により、機能的なＰ−ｇｐ輸送モデルを確認した。透過性比較物質であるマンニトールおよびプロプラノロールについてのＰ_ａｐｐ値は、この試験システムを用いてこの試験設備で観察された履歴範囲内であり（マンニトールについて平均４．１×１０^−７±ＳＤ２．４×１０^−７、プロプラノロールについて１．５×１０^−５±４．２×１０^−５）、適切に機能するモデルであることを示した。

透過性比較物質であるマンニトールおよびプロプラノロール、ならびにコントロールであるＰ−ｇｐ基質ジゴキシンについての結果を、以下の表７に報告する。

ｎ．ｄ．−決定しなかった。

Ｃａｃｏ−２細胞単層において試験化合物について得られた二方向透過性データおよび分極比を、表８に報告する。

インキュベーションの終了時における化合物Ａの、先端チャンバおよび基底外側チャンバからの回収（質量収支）、および２４ウェル培養プレートの細胞のない１つのウェルからの回収（非特異的結合）を、表９に報告する。

＊質量収支／１００％を超える回収の値は、代表的に、インキュベーションの経過にわたり増加した溶解度に起因する。

（結論）
試験結果は、非常に有望であった。腸吸収のインビトロモデルとしての、Ｃａｃｏ−２細胞単層における透過性研究は、ＢＣＳ透過性分類システムにより決定される場合に、化合物Ａが中間クラスに入ることを実証する。

単層ＴＥＥＲの結果および実験後のルシファーイエローの流れの結果は、アッセイの間中の機能的細胞単層の存在を示した。Ｐ−ｇｐ輸送についてのポジティブコントロールであるジゴキシンは、分極した輸送を示し（５．４の分極比、表７）、試験システムが適切に機能していることを示した。

質量収支および非特異的結合の決定は、化合物Ａが、プラスチックプレートおよび／または細胞に、拡散および輸送のために利用可能な化合物の量を減少させたかもしれない程度まで、結合したことを示した。その結果として、見かけのＰ_ａｐｐ値および分極比（表８）は、化合物Ａの透過性を過小評価しているかもしれないので、表１０に示されるようなＢＣＳ透過性クラスに対して評価する場合に、注意して使用されるべきである。

化合物Ａについて観察されたＡ−Ｂ透過性は、マンニトールとプロプラノロールとについて観察された透過性の中間であった。ＢＣＳ透過性分類（表１０）に基づけば、化合物Ａは、中間の透過性の化合物であると考えられる。

化合物Ａは、０．１〜０．２の分極比を示し、この化合物について、Ａ−Ｂ透過性がＢ−Ａ透過性を上回ったことを示す。この知見は、Ｐ−ｇｐにより媒介されるＢ−Ａ流出と一致し、そしてＰ−ｇｐ以外の輸送媒体による能動的なＡ−Ｂ流れの包含を示唆し得る。

上記研究は、本発明のＮＤＧＡ誘導体の代表的な化合物が、有用な薬学的化合物であることを実証する。

上記実施形態に対して、これらの実施形態の広い新規概念から逸脱することなく、変更がなされ得ることが当業者により理解される。従って、本発明は、開示される特定の実施形態には限定されず、添付の特許請求の範囲により規定されるような本発明の趣旨および範囲内での改変を網羅することを意図されることが、理解される。

（参考文献）
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５．（ａ）Ｃｈｅｎｇ，Ｊ．Ｓ．；Ｊａｎ，Ｃ．Ｒ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．ＩｎＶｉｔｒｏ２００２，１６，４８５−４９０．（ｂ）Ｗａｎｇ，Ｊ．Ｌ．；Ｃｈａｎｇ，Ｈ．Ｊ．；Ｔｓｅｎｇ，Ｌ．Ｌ．；Ｌｉｕ，Ｃ．Ｐ．；Ｌｅｅ，Ｋ．Ｃ．；Ｃｈｏｕ，Ｋ．Ｊ．；Ｃｈｅｎｇ，Ｊ．Ｓ．；Ｌｏ，Ｙ．Ｋ．；Ｓｕ，Ｗ．；Ｌａｗ，Ｙ．Ｐ．；Ｃｈｅｎ，Ｗ．Ｃ．；Ｃｈａｎ，Ｒ．Ｃ．；Ｊａｎ，Ｃ．Ｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．２００１，８９，３０１−３０５．（ｃ）Ｓｕ，Ｗ．；Ｔｓｅｎｇ，Ｌ．Ｌ．；Ｌｉｎ，Ｍ．Ｃ．；Ｃｈａｎｇ，Ｈ．Ｊ．；Ｌｅｅ，Ｋ．Ｃ．；Ｃｈｏｕ，Ｋ．Ｊ．；Ｌｏ，Ｙ．Ｋ．；Ｃｈｅｎｇ，Ｊ．Ｓ．Ｃｈａｎｇ，Ｈ．Ｔ．；Ｗａｎｇ，Ｊ．Ｌ．；Ｌｉｕ，Ｃ．Ｐ．；Ｃｈｅｎ，Ｗ．Ｃ．；Ｊａｎ，Ｃ．Ｒ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．２００２，４０，２４９−２５４．（ｄ）Ｈｕａｎｇ，Ｊ．Ｋ．；Ｃｈｅｎ，Ｗ．Ｃ．；Ｈｕａｎｇ，Ｃ．Ｊ．；Ｈｓｕ，Ｓ．Ｓ．；Ｃｈｅｎ，Ｊ．Ｓ．；Ｃｈｅｎｇ，Ｈ．Ｈ．；Ｃｈａｎｇ，Ｈ．Ｔ．；Ｊｉａｎｎ，Ｂ．Ｐ．；Ｊａｎ，Ｃ．Ｒ．Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ２００４，７５，２３４１−２３５１．
６．Ｙａｍａｍｕｒａ，Ｈ．；Ｎａｇａｎｏ，Ｎ．；Ｈｉｒａｎｏ，Ｍ．；Ｍｕｒａｋｉ，Ｋ．；Ｗａｔａｎａｂｅ，Ｍ．Ｉｍａｉｚｕｍｉ，Ｙ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．１９９９，２９１，１４０−１４６．
７．Ｏｎｏ，Ｋ．；Ｈａｓｅｇａｗａ，Ｋ．；Ｙｏｓｈｉｉｋｅ，Ｙ．；Ｔａｋａｓｈｉｍａ，Ａ．；Ｙａｍａｄａ，Ｍ．；Ｎａｉｋｉ，Ｈ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．２００２，８１，４３４−４４０．
８．Ｌｅｅ，Ｃ．Ｈ．；Ｊａｎｇ，Ｙ．Ｓ．；Ｈｅｒ，Ｓ．Ｊ．；Ｍｏｏｎ，Ｙ．Ｍ．；Ｂａｅｋ，Ｓ．Ｊ．；Ｅｌｉｎｇ，Ｔ．Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ．Ｒｅｓ．２００３，２８９，３３５−３４１．
９．Ｈｗｕ，Ｊ．Ｒ．；Ｔｓｅｎｇ，Ｗ．Ｎ．；Ｇｎａｂｒｅ，Ｊ．；Ｇｉｚａ，Ｐ．；Ｈｕａｎｇ，Ｒ．Ｃ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９８，４１，２９９４−３０００．
１０．Ｈｕａｎｇ，Ｒ．Ｃ．；Ｌｉ，Ｙ．；Ｇｉｚａ，Ｐ．Ｅ．；Ｇｎａｂｒｅ，Ｊ．Ｎ．；Ａｂｄ−Ｅｌａｚｅｍ，Ｉ．Ｓ．；Ｋｉｎｇ，Ｋ．Ｙ．；Ｈｗｕ，Ｊ．Ｒ．Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ．２００３，５８，５７−６４．
１１．Ｋｉｎｇ，Ｋ．Ｙ．；Ｈａｋｉｍｅｌａｈｉ，Ｇ．Ｈ．；Ｈｕａｎｇ，Ｒ．Ｃ．；Ｈｗｕ，Ｊ．Ｒ．Ｊ．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２００２，１３，２４８−２５７．
１２．Ｇｎａｂｒｅ，Ｊ．Ｎ．；Ｂｒａｄｙ，Ｊ．Ｎ．；Ｃｌａｎｔｏｎ，Ｄ．Ｊ．；Ｉｔｏ，Ｙ．；Ｄｉｔｔｍｅｒ，Ｊ．；Ｂａｔｅｓ，Ｒ．Ｂ．；Ｈｕａｎｇ，Ｒ．Ｃ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １９９５，９２，１１２３９−１１２４３．
１３．Ｇｎａｂｒｅ，Ｊ．；Ｉｔｏ，Ｙ．；Ｍａ，Ｙ．；Ｈｕａｎｇ，Ｒ．Ｃ．Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ａ．１９９６，７１９，３５３−３６４
１４．Ｃｈｅｎ，Ｈ．；Ｔｅｎｇ，Ｌ．；Ｌｉ，Ｊ．；Ｐａｒｋ，Ｒ．；Ｍｏｌｄ，Ｄ．Ｅ．；Ｇｎａｂｒｅ，Ｊ．；Ｈｗｕ，Ｊ．Ｒ．；Ｔｓｅｎｇ，Ｗ．Ｎ．；Ｈｕａｎｇ，Ｒ．Ｃ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９８，４１，３００１−３００７．
１５．Ｐａｒｋ，Ｒ．；Ｇｉｚａ，Ｐ．Ｅ．；Ｍｏｌｄ，Ｄ．Ｅ．；Ｈｕａｎｇ，Ｒ．Ｃ．Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ．２００３，５８，３５−４５．
１６．Ｃｒａｉｇｏ，Ｊ．；Ｃａｌｌａｈａｎ，Ｍ．；Ｈｕａｎｇ，Ｒ．Ｃ．；ＤｅＬｕｃｉａ，Ａ．Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ．２０００，４７，１９−２８．
１７．Ｃｈａｎｇ，Ｃ．−Ｃ．；Ｈｅｌｌｅｒ，Ｊ．Ｄ．；Ｋｕｏ，Ｊ．；Ｈｕａｎｇ，Ｒ．Ｃ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ２００４，１０１，１３２３９−１３２４４．
１８．Ｈｅｌｌｅｒ，Ｊ．Ｄ．；Ｋｕｏ，Ｊ．；Ｗｕ，Ｔ．Ｃ．；Ｋａｓｔ，Ｗ．Ｍ．；Ｈｕａｎｇ，Ｒ．Ｃ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００１，６１，５４９９−５５０４．
１９．（ａ）．Ｐａｒｋ，Ｒ．；Ｃｈａｎｇ，Ｃ．Ｃ．；Ｌｉａｎｇ，Ｙ．Ｃ．；Ｃｈｕｎｇ，Ｙ．；Ｈｅｎｒｙ，Ｒ．Ａ．；Ｌｉｎ，Ｅ．；Ｍｏｌｄ，Ｄ．Ｅ．；Ｈｕａｎｇ，Ｒ．Ｃ．Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，２００５，１１（１２），４６０１−４６０９．（ｂ）．Ｃｈａｎｇ，Ｃ．Ｃ．；Ｌｉａｎｇ，Ｙ．Ｃ．；Ｋｕｌｔｚ，Ａ．；Ｈｓｕ，Ｃ．Ｉ．；Ｌｉｎ，Ｃ．Ｆ．；Ｍｏｌｄ，Ｄ．Ｅ．；Ｃｈｏｕ，Ｔ．Ｃ．；Ｌｅｅ，Ｙ．Ｃ．；Ｈｕａｎｇ Ｒ．Ｃ．２００６年３月１７日日にオンライン公開。Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ。

Claims (8)

1. 以下の一般構造（式ＩＶ）：
   

   

   を有する、ノルジヒドログアイアレチン酸（ＮＤＧＡ）誘導体化合物およびその薬学的に受容可能な塩であって、一般構造（式ＩＶ）において、
   Ｘは、
   −Ａ−Ｒ；
   −（ＣＨ_２）_ｘＨａｌであって、ここでｘは、１〜１０の整数であり、そしてＨａｌは、ハロゲン原子である、−（ＣＨ_２）_ｘＨａｌ、および
   −（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｙＨであって、ここでｙは、１〜１０の整数である、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｙＨ；および
   

   

   からなる群より選択されるカルバメート結合した基
   からなる群より選択され、
   ここでｎは、１〜６の整数であり、Ｚ_１は、２個〜６個の炭素および必要に応じて１個〜３個のハロゲン原子の飽和直鎖炭化水素鎖であり、Ｚ_２は、０〜３個の二重結合を必要に応じて含み、そしてＯ、ＮおよびＳのうちのいずれかの１個〜３個の原子を必要に応じて含む、５員〜７員環であり、そしてＺ_３は、メチルまたはエチルであり；
   ここでＸが−Ａ−Ｒである場合、Ｒは末端基であり、そしてＡは、一端においてそれぞれのヒドロキシ残基のＯ基にエーテル結合またはカルバメート結合によって結合し、そして他端において該末端基Ｒの炭素原子またはヘテロ原子に結合している、直鎖飽和炭化水素側鎖であり；
   ここで該側鎖Ａは、Ｏ、ＮおよびＳからなる群より選択される１個〜５個のヘテロ原子を必要に応じて有し、ＮＧＤＡのそれぞれのヒドロキシ残基のＯ基にエーテル結合を介して結合しているＣ_２〜Ｃ_１６直鎖飽和炭化水素鎖；ならびに１〜５単位のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖からなる群より選択され；
   ここでＲは、
   ５員〜７員の炭素環式環であって、１個〜３個のＮ、ＯまたはＳのヘテロ原子を有する完全に飽和した環；１個〜３個の二重結合を含み、１個〜３個のＮ、ＯまたはＳのヘテロ原子を有する環；カルバメート結合、尿素結合、カーボネート結合またはアミド結合を含む環からなる群より選択される、５員〜７員の炭素環式環；ならびにスルホン酸のアルカリ金属塩、ホスホン酸のアルカリ金属塩、薬学的に受容可能な塩、糖およびポリヒドロキシ基からなる群より選択される、水溶性の基
   からなる群より選択され；そして
   ここでＸが
   

   

   である場合、ａは、３〜１６の整数であり、そしてｂは、４〜１６の整数である、
   化合物。
2. 請求項１に記載のＮＤＧＡ誘導体および薬学的に受容可能なキャリアを、必要に応じて他の薬学的に受容可能な賦形剤と共に含有する、組成物。
3. ウイルス感染の予防的に、またはウイルス感染を処置するために有効な量の、請求項１に記載のＮＤＧＡ誘導体を、単独でかまたは薬学的組成物の一部として、被験体に投与する方法。
4. 増殖性疾患の予防的に、または増殖性疾患を処置するために有効な量の、請求項１に記載のＮＤＧＡ誘導体を、単独でかまたは薬学的組成物の一部として、被験体に投与する方法。
5. 炎症性疾患の予防的に、または炎症性疾患を処置するために有効な量の、ＮＤＧＡ誘導体を、単独でかまたは薬学的組成物の一部として、被験体に投与する方法。
6. 代謝疾患の予防的に、または代謝疾患を処置するために有効な量の、ＮＤＧＡ誘導体を、単独でかまたは薬学的組成物の一部として、被験体に投与する方法。
7. 脈管疾患の予防的に、または脈管疾患を処置するために有効な量の、ＮＤＧＡ誘導体を、単独でかまたは薬学的組成物の一部として、被験体に投与する方法。
8. 請求項１に記載のＮＤＧＡ誘導体を含有する薬学的組成物、ならびにウイルス感染、増殖性疾患、炎症性疾患、代謝疾患および脈管疾患のうちの少なくとも１つの予防的にかまたは処置するための該薬学的組成物の使用のための指示書を備える、キット。