JP2010256190A - 歯周病マーカー - Google Patents
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Abstract
【解決手段】オートインデューサー−2からなる、歯周病発症判定用マーカー及び歯周病の進行度判定用マーカー。
【選択図】なし
Description
歯周病の診断は、一般には、歯周ポケットの測定、アタッチメントレベル、X線画像診断等によって行われている。しかし、これらの診断方法は被験者への負担が大きい。さらに、これらの歯周病診断方法は操作手順が複雑であり、歯科医師の経験や技能に基づくため判定基準に個人差があるなどの問題がある。
また、本発明は、簡便にかつ正確に歯周病の進行の程度を判定することができる歯周病の進行度判定用マーカーを提供することを課題とする。
また、本発明は、簡便にかつ正確に歯周病の発症の有無を判定することができる歯周病発症判定方法を提供することを課題とする。
また、本発明は、簡便にかつ正確に歯周病の進行の程度を判定することができる歯周病進行度判定方法を提供することを課題とする。
さらに、本発明は、歯周病の予防及び改善に有効な歯周病改善剤又は予防剤の簡便かつ正確なスクリーニングに有効な、歯周病改善剤又は予防剤のスクリーニング方法を提供することを課題とする。
特開2008−214296号公報では、歯周病原菌の1つである、Porphyromonas gingivalis株を用いてオートインデューサー−2受容体のアンタゴニストを添加した場合のバイオフィルム形成抑制効果について検討されている。しかし、歯周病原菌はPorphyromonas gingivalis以外にも多菌種存在する。また、歯周病原菌以外の口腔常在菌の歯周病原菌への作用も存在する。従って、Porphyromonas gingivalis株のみを用いてバイオフィルム形成抑制効果を検討しても、ヒト等の哺乳動物の歯周病のレベル、重篤度を臨床的に説明することはできない。
また、本発明は、オートインデューサー−2からなる歯周病の進行度判定用マーカーに関する。
また、本発明は、被験体の口腔内から検体を採取し、採取した検体に含まれるオートインデューサー−2を定量し、定量したオートインデューサー−2量が多い場合歯周病が発症していると判定する、歯周病発症判定方法に関する。
また、本発明は、被験体の口腔内から検体を採取し、採取した検体に含まれるオートインデューサー−2を定量し、定量したオートインデューサー−2量が多ければ多いほど歯周病が進行していると判定する、歯周病進行度判定方法に関する。
さらに、本発明は、オートインデューサー−2を介するクオラムセンシングシステムを有する細菌と被験剤とを混合し、オートインデューサー−2活性阻害効果を有する被験剤を歯周病改善剤又は予防剤として選択する、歯周病改善剤又は予防剤のスクリーニング方法に関する。
また、本発明の歯周病進行度判定用マーカーによれば、簡便にかつ正確に歯周病の進行の程度を判定することができる。
また、本発明の歯周病発症判定方法によれば、簡便にかつ正確に歯周病の発症の有無を判定することができる。
また、本発明の歯周病進行度判定方法によれば、簡便にかつ正確に歯周病の進行の程度を判定することができる。
さらに、本発明の歯周病改善剤又は予防剤のスクリーニング方法は、歯周病の予防及び改善に有効な歯周病改善剤又は予防剤を簡便かつ正確にスクリーニングすることができる。
本発明の歯周病発症判定用マーカー(単に、歯周病判定用マーカーともいう)及び歯周病進行度判定用マーカーは、ヒト等の被験体の口腔内から採取したオートインデューサー−2からなる。本発明におけるオートインデューサー−2(以下、「AI−2」ともいう)としては細菌が産生するものでAI−2活性を有するものであれば特に制限はない。
前記フラノシルボレートジエステルの具体例を以下に示す。しかし、本発明はこれらに制限するものではない。
例えば、AI−2を認識することにより発光するレポーター細菌、好ましくはAI-2受容体およびルシフェラーゼ活性を有する細菌などを用い、その発光強度を測定するバイオアッセイにより、AI−2を定量することができる。より詳しくは、ビブリオ・ハーベイBB170株をAI−2レポーター細菌とし、AI−2の標準試料としての4−ヒドロキシ−5−メチル−3(2H)−フラノン(HMF)標品及び/又はDPD標品による検量線を作成し、被検試料を添加した場合の発光強度からAI−2を定量することができる(例えば、Chen X.et al.,Nature,vol.415,p.545-549,2002参照)。また、被検試料に含まれるAI−2をフェニレンジアミン及びN−メチル−N−(トリメチルシリル)トリフルオロ−アセトアミドと反応させた後、GC−MSによってAI−2を定量することができる(例えば、Thiel V.et al.,Chembiochem.,vol.10(3),p.479-485,2008参照)。しかし、本発明はこれらに限定するものではない。
AI−2を定量するための被験試料は、口腔内から採取した検体を破砕/抽出処理後にカットオフ分子量が3000以下のフィルターで限外ろ過し、夾雑物を除去することが好ましい。
本発明において、被験試料の調製、保存をガラス容器などAI−2の吸着性が低い容器を用いることが好ましい。ガラス容器を用いることで被験試料に含まれるAI−2を正確に定量することができる。
本発明における「オートインデューサー−2活性阻害効果」とは、AI−2活性に対する阻害効果をいう。具体的には、前述の、AI−2受容体を有する細菌による生物発光、スウォーミング、バイオフィルム形成、タンパク質分解酵素の産生、抗生物質の合成、遺伝子受容能の発達、プラスミド接合伝達、病原因子産生および胞子形成等のAI−2活性に対する阻害効果をいう。
(1) 歯垢中AI−2の定量
ビブリオ・ハーベイBB170株(ATCCより分譲、AB(Autoinducer Bioassay)培地(10mMリン酸カリウムbuffer[pH7.0]、0.3M NaCL、0.05M MgSO4、0.2%カザミノ酸、2%グリセロール、1mM L−アルギニン、1μg/mLチアミン、0.01μg/mLリボフラビン)で30℃にて一晩培養)をAI−2レポーター細菌とし、AB培地にて5000倍に希釈し、レポーター細菌液を調製した。レポーター細菌液に様々な濃度のHMF標品(シグマ製)又はDPD標品(OMM Scientific製)をレポーター細菌液:標品の容量比が9:1となるように混合し、30℃にて好気振盪培養を行った。4時間後の発光強度をケミルミネッセンス計(LB940型、ベルトールドジャパン製)で測定し、発光強度とAI−2量とに関する検量線を作成した。
被験者の歯周ポケットに歯科用プローブを挿入し、歯周ポケットの深さ(PD)を測定し、3段階で評価した。なお、歯周ポケットの深さ(PD)は1mmごとに測定した。
(PD)
3mm以下:健常・軽度歯周病(歯肉炎)
4〜5mm:中等度歯周病(歯周炎)
6mm以上:重度歯周病(歯周炎)
被験者の歯周ポケットに歯科用プローブを挿入し、歯肉の炎症度合いを4段階で評価した。Gingival Index(GI)スコアの判定は、以下の通りとした。
(GI)
0: 正常歯肉
1: 歯肉に炎症あり。プロービングで出血なし。
2: 歯肉に炎症あり。プロービングで出血あり。
3: 自然出血・腫瘍形成
被験者の歯周ポケットに歯科用プローブを挿入し、歯周ポケットからの出血の有無を4段階で評価した。出血指数(Bleeding on Probing、BOP)スコアの判定は、以下の通りとした。
(BOP)
0: 出血なし
1: 点状出血あり
2: 線状出血あり
3: 自然出血あり
ビブリオ・ハーベイBB170株(AB培地で30℃にて一晩培養)をAI−2レポーター細菌とし、AB培地にて4500倍に希釈し、レポーター細菌液を調製した。レポーター細菌液及び各被験剤を混合し室温で10分プレインキュベートした後、DPDを添加し、30℃にて好気振盪培養を行い、4時間後の発光強度をケミルミネッセンス計(LB940型、ベルトールドジャパン製)で測定した。測定した発光強度から、実施例1と同様の方法でAI−2を定量した。
飼育終了後、麻酔下にて下顎骨を摘出し、実体顕微鏡下で撮影した。顕微鏡写真を図1(a)〜(c)に示す。評価部位は摘出下顎骨の舌側面とし、得られた写真を画像解析に供した。得られた写真を画像解析に供し、第一臼歯近心咬頭頂から歯槽骨頂上までの垂直距離を測定した。
従って、AI−2活性阻害効果を有する被験剤を選択することにより、歯周病改善剤又は予防剤のスクリーニングすることができる。
Claims (5)
- オートインデューサー−2からなる歯周病発症判定用マーカー。
- オートインデューサー−2からなる歯周病の進行度判定用マーカー。
- 被験体の口腔内から検体を採取し、採取した検体に含まれるオートインデューサー−2を定量し、定量したオートインデューサー−2量が多い場合、歯周病が発症していると判定する、歯周病発症判定方法。
- 被験体の口腔内から検体を採取し、採取した検体に含まれるオートインデューサー−2を定量し、定量したオートインデューサー−2量が多ければ多いほど歯周病が進行していると判定する、歯周病進行度判定方法。
- オートインデューサー−2を介するクオラムセンシングシステムを有する細菌と被験剤とを混合し、オートインデューサー−2活性阻害効果を有する被験剤を歯周病改善剤又は予防剤として選択する、歯周病改善剤又は予防剤のスクリーニング方法。
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