JP2010151838A - 網状細胞を同定するための試薬組成物及び方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】光学測定によって、血液細胞試料中の網状細胞を、その他の型の細胞と区別して同定するための試薬組成物及び方法を提供する。特に本試薬組成物は、核酸用色素及び球状化剤を含んで成る。特に本方法は、網状血小板及び網状赤血球の同定を可能にする。更に本方法は、血液細胞試料中の網状赤血球及び成熟赤血球の細胞毎のヘモグロビンを同時に決定するものである。
【選択図】なし
Description
本発明は、光学測定によって、血液細胞試料中の網状細胞を、その他の型の細胞と区別して同定するための試薬組成物及び方法に関する。特に本試薬組成物は、核酸用色素及び球状化剤を含んで成る。特に本方法は、網状血小板及び網状赤血球の同定を可能にする。更に本方法は、適切な電気的及び光学的測定によって、血液細胞試料中の細胞毎のヘモグロビンを同時に決定するものである。
網状細胞(reticulated cells)は、網状構造を有する任意の血液細胞と定義される。網状細胞には、網状赤血球(reticulated erythrocytes)及び網状血小板(reticulated platelets)が含まれる。網状赤血球は一般に網状赤血球(reticulocytes)として知られている。
コリホスフィン-O (CPO)を用いた特定の例が、米国特許5,639,666 (Shenkin)に記載されている。
前記考察から、本発明の対象は、光学測定によって、血液細胞試料中の網状細胞を、その他の型の細胞と区別して同定するための試薬組成物及び方法に関する。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
(項目1)コリホスフィン-O、球状化剤及び緩衝剤を含んで成る、網状細胞のサブクラスを同定するための試薬組成物。
(項目2)前記コリホスフィン-Oの濃度が約0.05〜50μg/mlである、項目1に記載の試薬組成物。
(項目3)前記コリホスフィン-Oの濃度が約0.5〜30μg/mlである、項目2に記載の試薬組成物。
(項目4)前記球状化剤が、アルキルアミドベタイン、アルキルベタイン、N-テトラデシル-N,N-ジメチル-3-アンモニオ-1-プロパンスルホネート、N-ドデシル-N,N-ジメチル-3-アンモニオ-1-プロパンスルホネート、n-ドデシル-D-マルトシド、n-テトラデシル-D-マルトシド、デカノイル-N-メチル-グルカミド、n-ドデシル-D-グルコピラノシド及びn-デシル-D-グルコピラノシドから成る群から選択される、項目1に記載の試薬組成物。
(項目5)前記球状化剤がドデシル-β-D-マルトシドである、項目4に記載の試薬組成物。
(項目6)その浸透圧が250〜350 mOsmである、項目4に記載の試薬組成物。
(項目7)そのpHが約6〜約9である、項目1に記載の試薬組成物。
(項目8)タンパク質又は固定剤を含有しない、項目1に記載の試薬組成物。
(項目9)網状細胞及び非網状血液細胞を含有する血液細胞試料中の網状細胞を、自動血液分析機により同定するための方法であって、
a.網状細胞を含有する血液細胞試料を、異染性色素及び球状化剤を含有する試薬組成物と混合して、細胞縣濁液を作ること;
b.前記試薬組成物によって、血液細胞内に存在する一本鎖及び二本鎖核酸を染色するために、前記細胞縣濁液を60秒間未満インキュベーションすること;
c.励起波長光によって前記細胞縣濁液を励起すること;
d.光散乱、直流、無線周波数及び蛍光から成る群から選択される少なくとも1つのパラメーターについてゲート化された第二の蛍光シグナルの存在に対して、前記細胞懸濁液中の第一の蛍光シグナルの存在を測定することであって、ここで、前記少なくとも1つのパラメーターは、白血球、赤血球及び血小板を同定するために用いられる;並びに
e.前記測定から試料中の網状細胞の数を同定すること、
を含んで成る前記方法。
(項目10)前記網状細胞が網状血小板を含む、項目9に記載の方法。
(項目11)前記網状細胞が網状赤血球を含む、項目9に記載の方法。
(項目12)白血球、赤血球及び血小板を同定するために用いる前記の少なくとも1つのパラメーターが光散乱を含む、項目9に記載の方法。
(項目13)前記色素がコリホスフィン-Oを含む、項目9に記載の方法。
(項目14)前記球状化剤が、アルキルアミドベタイン、アルキルベタイン、N-テトラデシル-N,N-ジメチル-3-アンモニオ-1-プロパンスルホネート、N-ドデシル-N,N-ジメチル-3-アンモニオ-1-プロパンスルホネート、n-ドデシル-D-マルトシド、n-テトラデシル-D-マルトシド、デカノイル-N-メチル-グルカミド、n-ドデシル-D-グルコピラノシド又はn-デシル-D-グルコピラノシドを含む、項目9に記載の方法。
(項目15)前記球状化剤がドデシル-β-D-マルトシドを含む、項目14に記載の方法。
(項目16)フローサイトメーターにより前記試料を励起し、且つその蛍光を測定する、ただしその際にインキュベーションした血液試料を、当該自動分析機の検知領域に通過させる、項目9に記載の方法。
(項目17)前記血液試料が全血である、項目9に記載の方法。
(項目18)前記試料中に存在する血液細胞の細胞毎のヘモグロビン濃度を決定することを更に含んで成る、項目9に記載の方法。
本発明の1つの点として、網状細胞のサブクラスを同定するために、コリホスフィン-O、球状化剤及び緩衝剤を含有する試薬組成物を提供する。
この方法は、網状細胞を含有する血液細胞試料を、異染性色素及び球状化剤を含有する試薬組成物と混合して、細胞縣濁液を作ること;前記試薬組成物によって、血液細胞内に存在する一本鎖及び二本鎖核酸を染色するために、前記細胞縣濁液を60秒間未満インキュベーションすること;励起波長光によって前記試料を励起すること;白血球、赤血球及び血小板を同定するために光散乱、直流、無線周波数及び蛍光から成る群から選択される少なくとも1つのパラメーターを用いて、それに基づいて選別(ゲート化、gate)し、そして前記細胞縣濁液中の第一の蛍光シグナルを、第二の蛍光シグナルに対して測定すること;並びに、前記測定から試料中の網状細胞の数を同定すること、を含んで成る。
以下の記載から分かる通り、本発明は、60秒間未満で網状細胞を同定する新規な方法を提供するものであり、この点で従来技術に比べて有益であり、特に網状血小板を同定するために有用である。
以下の記載から本発明及びその有利な点を良く理解できるだろう。
本発明は、血液細胞試料において網状細胞を識別するための試薬組成物及び方法、更に細胞毎のヘモグロビン濃度を同時に識別するための方法に関する。特に本方法は、網状血小板を同定するものである。最初の態様として、本発明の試薬組成物は、コリホスフィン-O、球状化剤及び緩衝剤を含んで成る。
この方法は、網状細胞を含有する血液細胞試料を、異染性色素及び球状化剤を含有する試薬組成物と混合して、細胞縣濁液を作ること;前記試薬組成物によって、血液細胞内に存在する一本鎖及び二本鎖核酸を染色するために、前記細胞縣濁液を60秒間未満インキュベーションすること;励起波長光によって前記試料を励起すること;白血球、赤血球及び血小板を同定するために光散乱、直流、無線周波数及び蛍光から成る群から選択される少なくとも1つのパラメーターを用いて、それに基づいて選別し、そして前記細胞縣濁液中の第一の蛍光シグナルを、第二の蛍光シグナルに対して測定すること;並びに、前記測定から試料中の網状細胞の数を同定すること、を含んで成る。
本発明の方法を以下の実施例により説明する。しかし本発明はその実施例に限定されるものではない。
網状細胞の同定
患者の血液試料を、EDTA三リン酸(K3ETDA)中に採取した。患者の血液試料0.002mlを本試薬組成物2.0mlに加えた。この試料を混合し、室温で約25秒間インキュベーションした。次にフローサイトメーターにおいて488nmの励起により当血液試料を分析した。
網状赤血球の同定及び細胞毎のヘモグロビン
二番目の患者の血液試料を、EDTA三リン酸(K3ETDA)中に採取した。患者の血液試料0.002mlを本試薬組成物2.0mlに加えた。この試料を混合し、室温で約25秒間インキュベーションした。次にフローサイトメーターにおいて532nmの励起により当血液試料を分析した。
網状細胞検査の特性
三番目の患者の血液試料を、EDTA三リン酸(K3ETDA)中に採取した。患者の血液試料0.002mlを本試薬組成物2.0mlに加えた。この試料を混合し、室温で約25秒間インキュベーションした。次にフローサイトメーターにおいて532nmの励起により当血液試料を分析した。
従って前記の図から、本発明の方法は、25秒以内に、しかも前記参照方法と同様に正確に行われ得ることが実証される。
網状血小板及び成熟血小板の分析方法
図5は、コリホスフィン-Oによる染色動態の決定を示す。一つ目の分析では、網状血小板及び成熟血小板内に含まれる濃密顆粒中に存在するADPを脱顆粒化するために、全血試料に脱顆粒化剤を加える。二つ目の分析では、その脱顆粒化剤を用いない。この実施例では、脱顆粒化剤はトロンビン受容体活性化タンパク質(TRAP)である。
Claims (17)
- 異染性色素、球状化剤及び緩衝剤を含んで成る、網状細胞のサブクラスを同定するための試薬組成物であって、血液細胞縣濁液中に含まれる網状細胞内の一本鎖及び二本鎖核酸を30秒未満内に染色し;ここで、前記試薬組成物は、固定剤を含有しない、試薬組成物。
- 前記異染性色素の濃度が約0.05〜50μg/mlである、請求項1に記載の試薬組成物。
- 前記異染性色素の濃度が約0.5〜30μg/mlである、請求項2に記載の試薬組成物。
- 前記球状化剤が、アルキルアミドベタイン、アルキルベタイン、N-テトラデシル-N,N-ジメチル-3-アンモニオ-1-プロパンスルホネート、N-ドデシル-N,N-ジメチル-3-アンモニオ-1-プロパンスルホネート、n-ドデシル-D-マルトシド、n-テトラデシル-D-マルトシド、デカノイル-N-メチル-グルカミド、n-ドデシル-D-グルコピラノシド及びn-デシル-D-グルコピラノシドから成る群から選択される、請求項1に記載の試薬組成物。
- 前記球状化剤がドデシル-β-D-マルトシドである、請求項4に記載の試薬組成物。
- その浸透圧が250〜350 mOsmである、請求項4に記載の試薬組成物。
- そのpHが約6〜約9である、請求項1に記載の試薬組成物。
- タンパク質を含有しない、請求項1に記載の試薬組成物。
- 網状細胞及び非網状血液細胞を含有する血液細胞試料中の網状細胞を、自動血液分析機により同定するための方法であって、
a.網状細胞を含有する血液細胞試料を、異染性色素及び球状化剤を含有する試薬組成物と混合して、細胞縣濁液を作ること;
b.前記試薬組成物によって、血液細胞内に存在する一本鎖及び二本鎖核酸を染色するために、前記細胞縣濁液を30秒間未満インキュベーションすること;
c.励起波長光によって前記細胞縣濁液を励起すること;
d.光散乱、直流、無線周波数及び蛍光から成る群から選択される少なくとも1つのパラメーターについてゲート化された第二の蛍光シグナルの存在に対して、前記細胞懸濁液中の第一の蛍光シグナルの存在を測定することであって、ここで、前記少なくとも1つのパラメーターは、白血球、赤血球及び血小板を同定するために用いられる;並びに
e.前記測定から試料中の網状細胞の数を同定すること、
を含んで成る前記方法。 - 前記網状細胞の数を同定することが網状血小板の同定を含む、請求項9に記載の方法。
- 前記網状細胞の数を同定することが網状赤血球の同定を含む、請求項9に記載の方法。
- 白血球、赤血球及び血小板を同定するために用いる前記の少なくとも1つのパラメーターが光散乱を含む、請求項9に記載の方法。
- 前記球状化剤が、アルキルアミドベタイン、アルキルベタイン、N-テトラデシル-N,N-ジメチル-3-アンモニオ-1-プロパンスルホネート、N-ドデシル-N,N-ジメチル-3-アンモニオ-1-プロパンスルホネート、n-ドデシル-D-マルトシド、n-テトラデシル-D-マルトシド、デカノイル-N-メチル-グルカミド、n-ドデシル-D-グルコピラノシド又はn-デシル-D-グルコピラノシドを含む、請求項9に記載の方法。
- 前記球状化剤がドデシル-β-D-マルトシドを含む、請求項13に記載の方法。
- フローサイトメーターにより前記試料を励起し、且つその蛍光を測定する、ただしその際にインキュベーションした血液細胞試料を、当該自動血液分析機の検知領域に通過させる、請求項9に記載の方法。
- 前記血液細胞試料が全血である、請求項9に記載の方法。
- 前記試料中に存在する血液細胞の細胞毎のヘモグロビン濃度を決定することを更に含んで成る、請求項9に記載の方法。
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