JP2010115139A - 低発芽率胞子形成性納豆菌株および該株を用いて製造した納豆菌胞子の少ない納豆 - Google Patents
低発芽率胞子形成性納豆菌株および該株を用いて製造した納豆菌胞子の少ない納豆 Download PDFInfo
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Abstract
【解決手段】sleB遺伝子およびcwlD遺伝子の二重破壊による、胞子発芽能欠損納豆菌変異株NABD(FERMP-21701)の創製、および、当該納豆菌を用いて製造される胞子数の少ない納豆。
【選択図】なし
Description
このような本発明は、より具体的な態様として、発芽関連遺伝子が欠損されており、該欠損が、該遺伝子の薬剤耐性遺伝子での置換によるものである納豆菌変異株を提供するものである。更に具体的な態様として、発芽関連遺伝子が、sleB遺伝子、cwlD遺伝子、cwlJ遺伝子およびpdaA遺伝子の少なくとも1つからなる納豆菌変異株を提供するものである。
また、本発明は、sleB遺伝子がカナマイシン耐性遺伝子で置換され、かつ、cwlD遺伝子がテトラサイクリン耐性遺伝子で置換されている、低発芽率胞子形成性納豆菌変異株 Bacillus subtilis(natto)NABD(FERM P-21701)を提供するものである。
更にまた、本発明は、上記の納豆菌変異株を用いて製造される納豆を提供するものである。
具体的には市販納豆菌である、宮城野菌(宮城野納豆製作所)や高橋菌(高橋祐蔵研究所)、宮城野納豆菌からの分離株 NAFM5などが挙げられる。
なお、この菌株は、形成胞子の発芽効率が低下していること以外の菌学的性質は、市販の納豆菌のもの〔食総研報(Rep.Natl.Food Res.Inst.)No.50,18〜21(1987)および大豆月報、12月号、21〜29(1985)参照〕と大差はなかった。即ち、この変異株 NABDは、好気性、グラム染色陽性の桿菌であり、菌(栄養細胞)の大きさ(1×2〜3μm)、生育適温(35〜45℃)、各種の糖の発酵性、DNAのGC含量等の性質がBergey´s Manual 8版の枯草菌(Bacillus subtilis)の性質と一致しており、かつ粘質物を生成し、ビオチン要求性であることから、いわゆる納豆菌(Bacillus subtilis(natto))に属しているものである。
育種親株としては、宮城野納豆菌より分離されたNAFM5を用いた。また、納豆菌の形質転換は、Anagnostopoulos C.、Spizizen J., 1961 " Requirements for transformation in Bacillus subtilis." J Bacteriol 81:741-746に記載の方法により行った。
pdaA、sleB、cwlDの組み合わせによる二重破壊、およびsleB−cwlJの二重破壊が、胞子発芽率に与える影響を調べた。
pdaA、sleB、cwlDの単一破壊株およびsleB−cwlD、sleB−cwlJの二重破壊株を用いて実際に納豆を試作し、これら破壊株の納豆での効果を確認した。破壊株は胞子を形成すると発芽しなくなるので、納豆の種菌としては、−80℃で凍結保存しておいた破壊株をLB液体培地で一晩培養したものを用いた。得られた培養液を滅菌水で1000倍に希釈し、種菌液とした。大豆は一晩常温にて水につけておいた丸大豆を、ざるに入れ、121℃で50分間オートクレーブして煮豆とした。この煮豆がさめてから種菌液を煮豆50g当たり1mlの割合で摂取し、40℃で17時間発酵させた。その後4℃で3日間保存して熟成を行い納豆とした。また、コントロールとして親株であるNAFM5についても同様の手順で納豆を試作した。
本発明の納豆菌変異株によれば、通常どおりの胞子形成が行われることから、納豆の品質に影響を与えることなく、納豆を製造することが可能である。
Claims (6)
- 発芽率が1%以下である胞子を形成することを特徴とする納豆菌変異株。
- 発芽関連遺伝子が欠損されている、請求項1に記載の納豆菌変異株。
- 発芽関連遺伝子の欠損が、該遺伝子の薬剤耐性遺伝子での置換によるものである、請求項2に記載の納豆菌変異株。
- 発芽関連遺伝子が、sleB遺伝子、cwlD遺伝子、cwlJ遺伝子およびpdaA遺伝子の少なくとも1つからなる、請求項2又は3に記載の納豆菌変異株。
- sleB遺伝子がカナマイシン耐性遺伝子で置換され、かつ、cwlD遺伝子がテトラサイクリン耐性遺伝子で置換されている、低発芽率胞子形成性納豆菌変異株 Bacillus subtilis(natto)NABD(FERM P-21701)。
- 請求項1〜5のいずれか一項に記載の納豆菌変異株を用いて製造されたことを特徴とする納豆。
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---|---|---|---|---|
CN106635942A (zh) * | 2016-12-05 | 2017-05-10 | 齐鲁工业大学 | 一种芽孢表面稳定展示海藻糖合酶的工程菌及其构建方法 |
JP2018139542A (ja) * | 2017-02-28 | 2018-09-13 | 株式会社Mizkan Holdings | 新規温度感受性納豆菌、及び胞子低含有納豆 |
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Non-Patent Citations (2)
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JPN6013035874; J.Bacteriol. Vol.185, 2003, p.2315-2329 * |
JPN7013002707; J.Bacteriol. Vol.189, No.21, 2007, p.7681-7689 * |
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CN106635942B (zh) * | 2016-12-05 | 2020-05-29 | 齐鲁工业大学 | 一种芽孢表面稳定展示海藻糖合酶的工程菌及其构建方法 |
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