JP2010068723A - アレルギー疾患の治療のための核酸医薬 - Google Patents
アレルギー疾患の治療のための核酸医薬 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2010068723A JP2010068723A JP2008237007A JP2008237007A JP2010068723A JP 2010068723 A JP2010068723 A JP 2010068723A JP 2008237007 A JP2008237007 A JP 2008237007A JP 2008237007 A JP2008237007 A JP 2008237007A JP 2010068723 A JP2010068723 A JP 2010068723A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- sequence
- strand
- stat6
- sense strand
- seq
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/06—Antiasthmatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/04—Antipruritics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
【解決手段】STAT6遺伝子のmRNAを標的とする二本鎖RNA(dsRNA)分子であって、(a)一方の鎖が特定の配列のSTAT6遺伝子配列中の15〜50個の連続した塩基を有する配列に同一なセンス鎖であり、他方の鎖が該センス鎖の塩基配列に相補的な塩基配列を含むアンチセンス鎖であるdsRNA分子;又は、(b)一方の鎖が特定の配列のSTAT6遺伝子配列中の15〜50個の連続した塩基を有する配列において1又は数個の塩基が欠失、置換、付加した配列であって、STAT6遺伝子にハイブリダイズし得る配列からなるセンス鎖であり、他方の鎖が該センス鎖の塩基配列に相補的な塩基配列を含むアンチセンス鎖であるdsRNA分子。
【選択図】なし
Description
[1] STAT6遺伝子のmRNAを標的とする二本鎖RNA(dsRNA)分子であって、以下の(a)又は(b)のdsRNA分子:
(a) 一方の鎖が配列番号1で表されるSTAT6遺伝子配列においてチミンがウラシルに置換された塩基配列中の15〜50個の連続した塩基を有する配列に同一なセンス鎖であり、他方の鎖が該センス鎖の塩基配列に相補的な塩基配列を含むアンチセンス鎖である;又は
(b) 一方の鎖が配列番号1で表されるSTAT6遺伝子配列においてチミンがウラシルに置換された塩基配列中の15〜50個の連続した塩基を有する配列において1又は数個の塩基が欠失、置換若しくは付加した配列であって、STAT6遺伝子にハイブリダイズし得る配列からなるセンス鎖であり、他方の鎖が該センス鎖の塩基配列に相補的な塩基配列を含むアンチセンス鎖である。
(c) 一方の鎖が配列番号1で表されるヒトSTAT6遺伝子配列においてチミンがウラシルに置換された塩基配列の3426〜3446番目の塩基を有する配列、3432〜3452番目の塩基を有する配列、配列番号3で表されるマウスSTAT6遺伝子配列においてチミンがウラシルに置換された塩基配列の259〜279番目の塩基を有する配列、及び3026番目〜3046番目の塩基を有する配列からなる群から選択される塩基配列と同一なセンス鎖であり、他方の鎖が該センス鎖の塩基配列に相補的な塩基配列を含むアンチセンス鎖である;又は
(d) 一方の鎖が配列番号1で表されるヒトSTAT6遺伝子配列においてチミンがウラシルに置換された塩基配列の3426〜3446番目の塩基を有する配列、3432〜3452番目の塩基を有する配列、配列番号3で表されるマウスSTAT6遺伝子配列においてチミンがウラシルに置換された塩基配列の259〜279番目の塩基を有する配列、及び3026番目〜3046番目の塩基を有する配列からなる群から選択されるいずれかの塩基配列において1又は数個の塩基が欠失、置換若しくは付加した配列であって、STAT6遺伝子にハイブリダイズし得る配列からなるセンス鎖であり、他方の鎖が該センス鎖の塩基配列に相補的な塩基配列を含むアンチセンス鎖である。
[4] センス鎖とアンチセンス鎖がリンカー分子を介して連結されている、[1]〜[3]のいずれかのdsRNA分子。
[5] [4]のdsRNA分子のテンプレートDNAを含み該dsRNA分子を発現するベクター。
[6] [1]〜[4]のいずれかのdsRNA分子を1つ又は複数含む、STAT6遺伝子の発現を抑制し得るアレルギー疾患の治療又は予防のための医薬組成物。
[7] [5]のベクターを含む、STAT6遺伝子の発現を抑制し得るアレルギー疾患の治療又は予防のための医薬組成物。
[8] センス鎖の5’末端に1個又は複数のG(グアニン)からなるオーバーハング塩基を有する、[1]〜[3]のいずれかのdsRNA分子。
[9] センス鎖とアンチセンス鎖がリンカー分子を介して連結されている、[8]のdsRNA分子。
[10] [9]のdsRNA分子のテンプレートDNAを含み該dsRNA分子を発現するベクター。
[11] [8]又は[9]のdsRNA分子を1つ又は複数含む、インターフェロン及び/又は細胞障害を誘導しない、STAT6遺伝子の発現を抑制し得るアレルギー疾患の治療又は予防のための医薬組成物。
[12] [10]のベクターを含む、インターフェロン及び/又は細胞障害を誘導しない、STAT6遺伝子の発現を抑制し得るアレルギー疾患の治療又は予防のための医薬組成物。
[13] 鼻腔投与するための、[6]、[7]、[11]又は[12]のアレルギー疾患の治療又は予防のための医薬組成物。
[14] 皮膚に塗布するための軟膏である、[6]、[7]、[11]又は[12]のアレルギー疾患の治療又は予防のための医薬組成物。
本発明は転写調節因子STAT6(Signal transducers and activators of transcription 6)のmRNAを標的とする二本鎖からなるdsRNA(double stranded RNA)分子に関する。該dsRNA分子の一方の鎖は転写因子STAT6遺伝子配列又はその一部に同一な塩基配列を有しハイブリダイズし得るセンス鎖であり、他方の鎖は該センス鎖の塩基配列に相補的な塩基配列を含むアンチセンス鎖であるdsRNA分子であり、該センス鎖とアンチセンス鎖は相補的に結合する。この際、センス鎖とアンチセンス鎖は完全に相補的である必要は必ずしもなく、相補的に結合する限り、1又は複数、すなわち、1〜10個、好ましくは1〜5個、さらに好ましくは、1〜3個、2個若しくは1個のミスマッチがあってもよい。STAT6遺伝子中の標的配列は、コーディング領域であっても、非コーディング領域であってもよい。
動物
BALB/cマウスは三協ラボサービス株式会社より購入した。全てのマウスは無菌環境施設で、東京医科歯科大学の動物実験ガイドラインに基づき、餌と水を与え飼育した。実験には7-12週齢のマウスを用い、1グループは少なくとも4匹以上とした。
実験に使用するsmall RNAであるSTAT6 siRNA及びSTAT6 shRNAはハプロファーマ社(株)との共同研究により作製した。既存のものよりも強力なRNAiを誘導する理論(Ui-Tei K, et al., Nucleic.Acids.Res.(2004).32: 936-948)を基盤として、BLAST Search(http://www.ncbi.nml.nih,gov/blast/index.shtml;off target効果の回避)の利用並びにmRNAの高次構造を予測(http://www.bioinfo.rpi.edu/~zukerm/)をすることにより、まず、siRNAの候補配列を決定した。
In vivoにおける実験はマウスを用いる予定であったため、マウスSTAT6 siRNAについてもヒトと同様にin vitroにおける検討を行う必要があった。そこでマウスSTAT6 siRNAの配列候補をヒトの場合と同じ理論をもとに3種類設計した。RNA干渉の効果判定に関しては新生児マウス背部の皮膚より採取した正常線維芽細胞を用いた。
STAT6 siRNAの細胞内導入はLipofectamineTM 2000(Invitrogen社)にて行った。
細胞内導入は2種類のプロトコールで行った。それぞれのプロトコールを図1A及びBに示す。
6wellプレートに正常線維芽細胞を播種する。培養は培養液としてDullbeco’s modified Eagle’s medium (DMEM; Sigma社)に10% fetal calf serum (FCS; Sigma社)と1% antibiotics/antimycotics (Gibco-BRL社)を添加したものを用い、37℃、5% CO2の条件下で行った。60〜70% subconfluentの状態でsiRNA又はshRNAを導入し、導入後、さらに48時間培養を継続し細胞を回収する。
siRNA又はshRNAの導入はプロトコール1と同様に行う。導入後、培養液をDMEMに2%FCSと1 % antibiotics/antimycoticsを添加したものに変更した(Serum starvation)。24時間後にrhIL-4(マウスではrmIL-4 10ng/mLとTNFα 40ng/mL)(全てR & D社)で細胞を刺激し、その24時間後に細胞上清を回収する。
shRNAは、ダイサー(Dicer)に分解される前段階で細胞内に導入されるため、二本鎖を別々に発現するsiRNAより特異的に働き、また、導入によるインターフェロン応答を軽減できる。shRNAとsiRNAの構造を図2に示す。
Day0に5%2,4,6-trinitrochlorobenzene (TNCB) (in acetone: olive oil=4:1) (Nacalai Tesque社)、0.5% 2,4-dinitrofluorobenzene (DNFB) (in acetone: olive oil=4:1) (Nacalai Tesque社)、又は5% 4-ethoxymethylene-2-phenyl-2-oxazolin-5-one (Oxazolone) (in acetone: olive oil=4:1) (Sigma社)を剃毛腹部にそれぞれ50μL塗布して感作した。(DNFBのみDays0、1の連日塗布。)その後、Day5で耳介に1% TNCB (in acetone: olive oil =1:4)、0.2%DNFB (in acetone: olive oil=4:1)、又は1%Oxazolone (in acetone: olive oil=4:1)をそれぞれ耳介に20μL塗布して惹起。接触過敏反応の指標として耳介腫脹を、dial thickness gauge (Peacock社)を用いて測定した。
細胞からのタンパク抽出はCell lysis buffer (Cell signaling社)を用いた。電気泳動後、Hybond-P (Amersham pharmacia biotech社)に転写。電気泳動は80V 30min、その後130V 60minの条件で行った。1次抗体として、抗ヒトβ-アクチン抗体又は抗mouse β-アクチン抗体と、抗ヒトSTAT6抗体又は抗mouse STAT6抗体(共にSanta Cruz Biotechnology社)を用いて反応後、2次抗体としてペルオキシダーゼ標識抗ラビットimmunoglobulins抗体(DAKO)と反応。発色にはECL plus Western blotting detection Reagents (GE Healthcare)を用いた。
正常線維芽細胞からのRNAの抽出はISOGEN (ニッポンジーン社)を用いて行った。逆転写はhexanucleotide mixture (A260; 6.25U/ml) (Roche社)、dNTPs (0.125mM) (Takara Bio社)、human placenta RNase inhibitor (80U) (Takara Bio社)、reverse transcriptase (400U; Moloney murine leukemia virus) (Takara Bio社)を含んだ反応緩衝液と800ngのRNAを用いて行った。全量を40μLとし、37℃ 60minで反応を行った。
定量的PCR反応は、Stratagene社のBrilliant SYBR Green QPCR Master Mixを用いて、プロトコルに従って行った。測定にはMx3000P Real-Time PCR system (Stratagene社)を用いた。
Day3にSTAT6 siRNA (in OPTI-MEM(登録商標)I: LipofectamineTM2000= 50: 1) を耳介皮下に30μL投与(1nmol/ear)した。
STAT6 siRNA含有軟膏は、親水ワセリンを基剤として2%となるよう調製した。この軟膏を、Day3に耳介に10nmol/earとなるように塗布した。
Days 0, 7, 14, 21にovalbumin (albumin from chicken egg white, Grade V ) (OVA) (Sigma社) 0.1mg、alum 1mgを腹腔内投与して感作。Days 21から27にかけて0.2mg/日のOVAを連日鼻腔内に吸入させて惹起した。鼻炎の症状の指標として、Day 27の最終惹起直後に5分間あたりのくしゃみの回数をカウントした。
接触過敏反応モデルでは、耳介組織を回収し、10%ホルマリンで固定してパラフィンブロックを作成。これを薄切し、May- Grunwald- Giemsa染色にて病理組織学的検討を行った。鼻炎モデルでは、最終惹起12hr後の鼻粘膜組織切片をMay- Grunwald- Giemsa染色にて病理組織学的検討を行った。細胞数は、400倍の視野下で単核細胞、好中球、好酸球、肥満細胞の浸潤細胞数を少なくとも5視野数えて数値化した。
統計学的有意差は、Student’s t-testを用いて検討した。
1. ヒトSTAT6 siRNA導入によるSTAT6の発現抑制
作成したヒトSTAT6 siRNAの6つの候補配列について、効率よくSTAT6発現を抑制できる配列の検討をWestern blot法を用いて行った。図3に結果を示す。図3中、2〜7レーンは今回新規に作成した6種類のSTAT6 siRNAであり、既存の配列(Rippmann JF et al., FEBS Lett.(2005).579: 173-178)は8レーンである。新規作成したもののうち4、5レーンについては既存のものに比して明らかに強力なSTAT6発現の抑制効果を示している。
5’ - GCUUCUGAUACGUGUAUGAGA sense strand (配列番号5)
UCCGAAGACUAUGCACAUACU - 5’ anti-sense strand (配列番号6)
3430 (STAT6 siRNA 4)
5’ - GAUACGUGUAUGAGACUAUGC sense strand (配列番号7)
GACUAUGCACAUACUCUGAUA - 5’ anti-sense strand (配列番号8)
IL-4刺激により、STAT6経路に依存してヒト線維芽細胞から産生されるeotaxin-3の産生は、実験1により選定されたSTAT6 siRNA 3あるいはSTAT6 siRNA 4の導入によって有意に抑制された。図4にELISAで測定した結果を示す。また、無刺激状態での線維芽細胞からのeotaxin-3産生には影響を与えなかった(data not shown)。
上記実験1、2で効果がみられたsiRNA 2つの配列をもとにしてshRNAを作製した(それぞれSTAT6 shRNA3、STAT6 shRNA4)。そして、これらのin vitroでのSTAT6発現への効果を検討した。まず、Real time PCR法にて確認したSTAT6のmRNAレベルの発現は、siRNAの結果と同様、新規配列の2つにおいてより強力な抑制効果が得られた)。図5にELISAで測定した結果を示す。
shRNA導入にても、siRNA導入時と同様、新規作成したものが既存のものより強いeotaxin-3産生抑制効果がみられた。図7にELISAで測定した結果を示す。
マウスSTAT6 siRNAの候補配列を以下に示す。図8にSTAT6タンパク発現の抑制をWestern blot法にて確認した結果を示す。図8に示すように、STAT6 siRNA 1, 2, 3の全てにSTAT6タンパク発現を抑制する効果が見られた。その中でも最も効率よくSTAT6タンパク発現を抑制したSTAT6 siRNA 3を以後STAT6 siRNAとして用いた。図9にSTAT6 mRNA発現の抑制をRT-PCRにより確認した結果を、図10にIL-4(10ng/mL)とTNF-alpha(40ng/mL)の共刺激により産生されるeotaxin (CCL11)濃度をELISA法にて定量した結果を示す。図9及び10に示すように、STAT6 mRNAの発現、eotaxin (CCL11)の産生に関しても、新たに開発したマウスSTAT6 siRNAは抑制効果を示した。
5’ - GCCGAGGCACCCUGUAUAUCC sense strand (配列番号9)
GACGGCUCCGUGGGACAUAUA - 5’ anti-sense strand (配列番号10)
マウスSTAT6 siRNA 2
5’ - CCUGGUUCUGUUAAGGAUUCA sense strand (配列番号11)
GGGGACCAAGACAAUUCCUAA - 5’ anti-sense strand (配列番号12)
マウスSTAT6 siRNA3
5’ - CGAAUGUGAUACAACUGUAUC sense strand (配列番号13)
GAGCUUACACUAUGUUGACAU - 5’ anti-sense strand (配列番号14)
TNCB、DNFB、Oxazoloneによる接触過敏反応は、STAT6 siRNAの耳介への皮下投与により有意に抑制された(図11)。また、TNCBに対する接触過敏反応においてギムザ染色により病理組織学的検討を行ったところ、STAT6 siRNAを投与した群において、コントロール群と比較して、顕著な浮腫の軽減と細胞浸潤の減少がみられた(図12)。浸潤している細胞のプロフィール検討では、単核細胞、好酸球、好中球、脱顆粒している肥満細胞において細胞数の減少がみられた(図13)。
STAT6 siRNA含有軟膏を作成し、耳介に塗布したところ、コントロール群と比較して耳介腫脹に有意な抑制が得られた(図14)。この結果から、STAT6 siRNAは軟膏としての使用が可能と考えられた。
OVA感作マウスの鼻腔にDays 21から27にかけて連日OVAを吸入させて鼻炎反応を誘発。そして、Days 22, 23, 24にPBSに溶解したSTAT6 siRNA (3nmol/day)を鼻腔内に投与して、その治療効果を検討した。その結果、STAT6 siRNAの投与により、くしゃみの回数が有意に減少した(図15)。炎症反応の抑制は、好酸球浸潤の顕著な減少など、病理組織学的にも確認された。図16にギムザ染色の結果を、図17に好酸球浸潤数を示す。
Claims (14)
- STAT6遺伝子のmRNAを標的とする二本鎖RNA(dsRNA)分子であって、以下の(a)又は(b)のdsRNA分子:
(a) 一方の鎖が配列番号1又は3で表されるSTAT6遺伝子配列においてチミンがウラシルに置換された塩基配列中の15〜50個の連続した塩基を有する配列に同一なセンス鎖であり、他方の鎖が該センス鎖の塩基配列に相補的な塩基配列を含むアンチセンス鎖である;又は
(b) 一方の鎖が配列番号1又は3で表されるSTAT6遺伝子配列においてチミンがウラシルに置換された塩基配列中の少なくとも15〜50個の連続した塩基を有する配列において1又は数個の塩基が欠失、置換若しくは付加した配列であって、STAT6遺伝子にハイブリダイズし得る配列からなるセンス鎖であり、他方の鎖が該センス鎖の塩基配列に相補的な塩基配列を含むアンチセンス鎖である。 - dsRNA分子が、以下の(c)又は(d)である、請求項1記載のdsRNA分子:
(c) 一方の鎖が配列番号1で表されるヒトSTAT6遺伝子配列においてチミンがウラシルに置換された塩基配列の3426〜3446番目の塩基を有する配列、3432〜3452番目の塩基を有する配列、配列番号3で表されるマウスSTAT6遺伝子配列においてチミンがウラシルに置換された塩基配列の259〜279番目の塩基を有する配列、及び3026番目〜3046番目の塩基を有する配列からなる群から選択される塩基配列と同一なセンス鎖であり、他方の鎖が該センス鎖の塩基配列に相補的な塩基配列を含むアンチセンス鎖である;又は
(d) 一方の鎖が配列番号1で表されるヒトSTAT6遺伝子配列においてチミンがウラシルに置換された塩基配列の3426〜3446番目の塩基を有する配列、3432〜3452番目の塩基を有する配列、配列番号3で表されるマウスSTAT6遺伝子配列においてチミンがウラシルに置換された塩基配列の259〜279番目の塩基を有する配列、及び3026番目〜3046番目の塩基を有する配列からなる群から選択されるいずれかの塩基配列において1又は数個の塩基が欠失、置換若しくは付加した配列であって、STAT6遺伝子にハイブリダイズし得る配列からなるセンス鎖であり、他方の鎖が該センス鎖の塩基配列に相補的な塩基配列を含むアンチセンス鎖である。 - dsRNA分子が、配列番号5で表されるセンス鎖と配列番号6で表されるアンチセンス鎖、配列番号7で表されるセンス鎖と配列番号8で表されるアンチセンス鎖、配列番号9で表されるセンス鎖と配列番号10で表されるアンチセンス鎖、配列番号11で表されるセンス鎖と配列番号12で表されるアンチセンス鎖、及び配列番号13で表されるセンス鎖と配列番号14で表されるアンチセンス鎖からなる群より選択されるいずれかの塩基対からなる、請求項2記載のdsRNA分子。
- センス鎖とアンチセンス鎖がリンカー分子を介して連結されている、請求項1〜3のいずれか1項に記載のdsRNA分子。
- 請求項4に記載のdsRNA分子のテンプレートDNAを含み該dsRNA分子を発現するベクター。
- 請求項1〜4のいずれか1項に記載のdsRNA分子を1つ又は複数含む、STAT6遺伝子の発現を抑制し得るアレルギー疾患の治療又は予防のための医薬組成物。
- 請求項5記載のベクターを含む、STAT6遺伝子の発現を抑制し得るアレルギー疾患の治療又は予防のための医薬組成物。
- センス鎖の5’末端に1個又は複数のG(グアニン)からなるオーバーハング塩基を有する、請求項1〜3のいずれか1項に記載のdsRNA分子。
- センス鎖とアンチセンス鎖がリンカー分子を介して連結されている、請求項8記載のdsRNA分子。
- 請求項9に記載のdsRNA分子のテンプレートDNAを含み該dsRNA分子を発現するベクター。
- 請求項8又は9に記載のdsRNA分子を1つ又は複数含む、インターフェロン及び/又は細胞障害を誘導しない、STAT6遺伝子の発現を抑制し得るアレルギー疾患の治療又は予防のための医薬組成物。
- 請求項10に記載のベクターを含む、インターフェロン及び/又は細胞障害を誘導しない、STAT6遺伝子の発現を抑制し得るアレルギー疾患の治療又は予防のための医薬組成物。
- 鼻腔投与するための、請求項6、7、11又は12に記載のアレルギー疾患の治療又は予防のための医薬組成物。
- 皮膚に塗布するための軟膏である、請求項6、7、11又は12に記載のアレルギー疾患の治療又は予防のための医薬組成物。
Priority Applications (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2008237007A JP2010068723A (ja) | 2008-09-16 | 2008-09-16 | アレルギー疾患の治療のための核酸医薬 |
PCT/JP2009/055383 WO2010032506A1 (ja) | 2008-09-16 | 2009-03-12 | アレルギー疾患の治療のための核酸医薬 |
US13/119,080 US20110300182A1 (en) | 2008-09-16 | 2009-03-12 | Nucleic acid drug for treatment of allergic disease |
EP09814351A EP2354223A4 (en) | 2008-09-16 | 2009-03-12 | NUCLEIC ACID DRUG TO TREAT AN ALLERGIC DISEASE |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2008237007A JP2010068723A (ja) | 2008-09-16 | 2008-09-16 | アレルギー疾患の治療のための核酸医薬 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2010068723A true JP2010068723A (ja) | 2010-04-02 |
Family
ID=42039353
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2008237007A Pending JP2010068723A (ja) | 2008-09-16 | 2008-09-16 | アレルギー疾患の治療のための核酸医薬 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20110300182A1 (ja) |
EP (1) | EP2354223A4 (ja) |
JP (1) | JP2010068723A (ja) |
WO (1) | WO2010032506A1 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2018062510A1 (ja) * | 2016-09-29 | 2018-04-05 | 国立大学法人東京医科歯科大学 | オーバーハングを有する二本鎖核酸複合体 |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2015144714A1 (en) * | 2014-03-24 | 2015-10-01 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of allergic contact dermatitis |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2006080564A1 (ja) * | 2005-01-28 | 2006-08-03 | Haplopharma Inc. | 副作用のないRNAi医薬 |
JP2007523658A (ja) * | 2004-02-25 | 2007-08-23 | アラーナ エルティーディー. | アレルギー性疾患を治療するための物質および方法 |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ATE517992T1 (de) * | 2002-11-14 | 2011-08-15 | Dharmacon Inc | Funktionelle und hyperfunktionelle sirna |
US20040115634A1 (en) * | 2002-12-11 | 2004-06-17 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of stat 6 expression |
CA2558682A1 (en) * | 2004-02-20 | 2005-09-01 | Genesis Research And Development Corporation Limited | Targeted delivery of rna interference molecules for the treatment of ige-mediated disorders |
DE102004026309A1 (de) * | 2004-05-26 | 2005-12-29 | Haarlems Allergenen Laboratorium B.V. | Pharamzeutische Zusammensetzung zur Behandlung allergischer Erkrankungen, pathologischer Atemswegsveränderungen und von Krebs durch Modulation der Genexpression des Stat6 |
US20060258610A1 (en) * | 2005-05-12 | 2006-11-16 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of STAT 6 expression for the treatment of airway hyperresponsiveness |
JP4600470B2 (ja) | 2007-02-20 | 2010-12-15 | セイコーエプソン株式会社 | 送電制御装置、送電装置、電子機器及び無接点電力伝送システム |
-
2008
- 2008-09-16 JP JP2008237007A patent/JP2010068723A/ja active Pending
-
2009
- 2009-03-12 WO PCT/JP2009/055383 patent/WO2010032506A1/ja active Application Filing
- 2009-03-12 EP EP09814351A patent/EP2354223A4/en not_active Withdrawn
- 2009-03-12 US US13/119,080 patent/US20110300182A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007523658A (ja) * | 2004-02-25 | 2007-08-23 | アラーナ エルティーディー. | アレルギー性疾患を治療するための物質および方法 |
WO2006080564A1 (ja) * | 2005-01-28 | 2006-08-03 | Haplopharma Inc. | 副作用のないRNAi医薬 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
JPN6009016579; 日皮会誌 第118巻, 第4号, 20080325, p. 863 * |
JPN6013020935; FEBS Lett. Vol. 579, 2005, p. 173-178 * |
JPN6013020937; J. Invest. Dermatol. Vol. 128, 20080313, p. S122 * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2018062510A1 (ja) * | 2016-09-29 | 2018-04-05 | 国立大学法人東京医科歯科大学 | オーバーハングを有する二本鎖核酸複合体 |
JPWO2018062510A1 (ja) * | 2016-09-29 | 2019-07-18 | 国立大学法人 東京医科歯科大学 | オーバーハングを有する二本鎖核酸複合体 |
US11260134B2 (en) | 2016-09-29 | 2022-03-01 | National University Corporation Tokyo Medical And Dental University | Double-stranded nucleic acid complex having overhang |
JP7129702B2 (ja) | 2016-09-29 | 2022-09-02 | 国立大学法人 東京医科歯科大学 | オーバーハングを有する二本鎖核酸複合体 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP2354223A1 (en) | 2011-08-10 |
WO2010032506A1 (ja) | 2010-03-25 |
US20110300182A1 (en) | 2011-12-08 |
EP2354223A4 (en) | 2012-03-07 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US10405749B2 (en) | RNA agents for P21 gene modulation | |
JP2013532973A (ja) | Rna分子およびその使用 | |
EP2111449B1 (en) | H19 silencing nucleic acid agents for treating rheumatoid arthritis | |
JP5681955B2 (ja) | 短いrna分子 | |
EP2123752A2 (en) | Novel nucleic acid | |
JP5845493B2 (ja) | miRNA導入による新規hiPSC作製法 | |
TW201106977A (en) | Development of universal cancer drugs and vaccines | |
US20210147853A1 (en) | Use of Trinucleotide Repeat RNAs To Treat Cancer | |
US20100088775A1 (en) | Methods of modulating epithelial-mesenchymal transition and mesenchymal-epithelial transition in cells and agents useful for the same | |
JP2007530431A (ja) | 膵臓癌を治療するための組成物および方法 | |
Chen et al. | Long non-coding RNA (lncRNA) small nucleolar RNA host gene 15 (SNHG15) alleviates osteoarthritis progression by regulation of extracellular matrix homeostasis | |
TW201250005A (en) | Microrna as a cancer progression predictor and its use for treating cancer | |
Chen et al. | Shrimp antiviral mja-miR-35 targets CHI3L1 in human M2 macrophages and suppresses breast cancer metastasis | |
JP4467559B2 (ja) | 細胞増殖を阻害する組成物および方法 | |
WO2010032506A1 (ja) | アレルギー疾患の治療のための核酸医薬 | |
Gottumukkala et al. | Ribonucleic acid interference induced gene knockdown | |
CN104884096A (zh) | 人乳头瘤病毒感染相关癌症的治疗用组合物 | |
EP4124656A1 (en) | Pd-l1 micrornas | |
TW201718854A (zh) | 供p21基因調控之RNA干擾劑 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20110824 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20110824 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20111025 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20130507 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20130917 |