JP2010035446A - 草本系バイオマスの糖化前処理方法 - Google Patents
草本系バイオマスの糖化前処理方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2010035446A JP2010035446A JP2008199402A JP2008199402A JP2010035446A JP 2010035446 A JP2010035446 A JP 2010035446A JP 2008199402 A JP2008199402 A JP 2008199402A JP 2008199402 A JP2008199402 A JP 2008199402A JP 2010035446 A JP2010035446 A JP 2010035446A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- herbaceous biomass
- saccharification
- flavido
- alba
- inawara
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Processing Of Solid Wastes (AREA)
Abstract
【解決手段】草本系バイオマスに白色腐朽菌Phanerochaete flavido-albaを植菌し、該草本系バイオマスと共に培養することにより、該草本系バイオマスのリグニンを分解する。前記草木系バイオマスは、80〜120℃の範囲の温度で滅菌処理した後、前記培養に供する。前記草木系バイオマスは、70〜90重量%の範囲の含水率で前記培養に供する。前記培養は、20〜35℃の範囲の温度で行う。前記培養は、pH2.0〜7.0の範囲で行う。白色腐朽菌Phanerochaete flavido-albaを培養した後、前記草本系バイオマスを湿式摩砕処理する。前記草本系バイオマスは、70重量%以上の範囲の含水率で前記湿式摩砕処理に供する。前記湿式摩砕処理は、ディスクミルを用いて行う。
【選択図】 図1
Description
腐朽イナワラ、及び未腐朽イナワラの糖化率測定(簡易法)は、以下の方法で行った。菌体培養後の腐朽イナワラ(乾燥重量0.8g相当)を蒸留水35.6mlと共に市販ミキサー(トステム社製、商品名:フードミルTML17)を用いて摩砕した。摩砕条件は15秒に統一した。摩砕後、スラリー状になった試料全量を糖化反応に供した。糖化反応は、50mM酢酸ナトリウムバッファー(pH4.5)、乾燥重量0.8gの摩砕イナワラ、及び10FPU(濾紙崩壊活性;Filter Paper Unit)量のセルラーゼ溶液(Novozyme社製、Novoclast1.5L(商品名)とNovo188(商品名)との30:1(容積比)混合物)を含む反応液中で実施した。尚、イナワラ試料の含水量も考慮に入れて添加する酢酸ナトリウムバッファーの量を調整し、反応液を40mlとし、さらに抗菌剤としてアジ化ナトリウム(最終濃度0.02重量%)を加えた。反応はシェーカーを用い、100rpm、45℃で48時間行った。48時間後、遠心分離して得た上清中の還元糖をジニトロサリチル酸法で定量した。ジニトロサリチル酸法においては、濃度既知のグルコース溶液を用いて検量線を作成し、還元糖に由来する赤色反応物の吸光度を元に還元糖量を測定した。以上の方法を用いて腐朽イナワラ、及び未腐朽イナワラから得られた還元糖重量を定量した。各菌株の糖化効率改善作用は以下の式:
(腐朽イナワラ由来還元糖重量(mg)/未腐朽イナワラ由来還元糖重量(mg))
によって数値化した。
腐朽イナワラ、及び未腐朽イナワラの糖化率測定(ボールミル法)は、以下の方法で行った。菌体培養後の腐朽イナワラ(乾燥重量0.4g相当)を蒸留水10mlと共にボールミル法で摩砕した。ボールミル処理はRetsch社製MM-301(商品名)を用い、摩砕条件は15往復/秒、2minに統一した。摩砕後、スラリー状になった試料全量を糖化反応に供した。糖化反応は、50mM酢酸ナトリウムバッファー(pH4.5)、乾燥重量0.4gの摩砕イナワラ、及び16FPU(濾紙崩壊活性;Filter Paper Unit)量のメイセラーゼ(商品名、明治製菓株式会社製)を含む反応液中で実施した。尚、イナワラ試料の含水量も考慮に入れて添加する酢酸ナトリウムバッファーの量を調整し、反応液を20mlとし、さらに抗菌剤として2重量%アジ化ナトリウム(最終濃度0.02重量%)を加えた。反応はシェーカーを用い、170rpm、45℃で48時間行った。48時間後、遠心分離して得た上清中の還元糖をソモギネルソン法で定量した。ソモギネルソン法においては、濃度既知のグルコース溶液を用いて検量線を作成し、還元糖に由来する青色反応物の吸光度を元に還元糖量を測定した。以上の方法を用いて腐朽イナワラ、及び未腐朽イナワラから得られた還元糖重量を定量した。各菌株の糖化効率改善作用は以下の式:
(腐朽イナワラ由来還元糖重量(mg)/未腐朽イナワラ由来還元糖重量(mg))
によって数値化した。
次に、白色腐朽菌としてPhanerochaete flavido-alba(ATCC 60998)及びヒラタケ(ATCC 34675)を再度イナワラ分解に用い、Phanerochaete flavido-alba(以下、「P. flavido-alba」と略記する)によるイナワラ糖化効率改善作用の検証を行った。従来、微量金属を含む溶液中に浸漬したイナワラにおいては、ヒラタケによるイナワラ糖化効率改善作用が若干向上することが知られている(Taniguchi M, Suzuki H, Watanabe D, Sakai K, Tanaka T.: Evaluation of pretreatment with Pleurotus ostreatus for enzymatic hydorolysis of rice straw.1: J Biosci Bioeng., 100, 637-643(2005))。そこで、実施例3で使用した乾燥イナワラを、各種微量金属を含む塩溶液(50倍希釈Kirk's salt solution、Tien, M. and Kirk, T. K.: Lignin peroxidase of Phanerochaete chrysosporium, p.238-249. In Wood, W. A. and Kellogg, S. T. (ed.), Methods in enzymology, vol. 161. Academic Press, San Diego(1988))に12時間浸漬した。翌日イナワラを塩溶液から引き上げ、含水率が80重量%程度になるように自然乾燥させた。乾燥重量4.0g相当をグラスボトル(100ml容)に詰め、120℃で、20分間の高圧蒸気滅菌を行った。また、高圧蒸気滅菌では設備が大型化するため、常圧における滅菌の可能性も検討した。すなわち、120℃で、20分間の高圧蒸気滅菌の代わりに、80℃で20分間の常圧蒸気滅菌を行ったイナワラ試料も調製した。それぞれにPDB寒天培地上で前培養したP. flavido-alba、及びヒラタケ菌株菌糸片(1cm角)を3片ずつグラスボトルに植菌した。糖化率の平均値、及び標準偏差を算出するため各試験区は4連(4本のグラスボトルを各試験系に使用)で行った。蓋を半開放状態にして通気を確保し、28℃にて静置培養を行った。28日間培養後、菌自体の成長に伴うイナワラの消費量(イナワラ重量減少率)を測定するため、腐朽イナワラの湿重量、及び含水率を測定した。結果を図3に示す。
実施例4によって得られたP. flavido-alba腐朽イナワラ、ヒラタケ(ATCC 34675)腐朽イナワラ、未腐朽イナワラにつき、ボールミル法を用いて糖化効率を評価した。結果を図4に示す。
P. flavido-albaが腐朽したイナワラ全体が、どの程度セルラーゼによって可溶化するかを調べた。実施例4において行った糖化試験後のイナワラ残渣を回収し乾燥後の全重量を測定した。結果を図6に示す。
腐朽処理中に雑菌汚染が生じる可能性を低減するため、特にバクテリアの繁殖を抑制する酸性条件下におけるP. flavido-albaのイナワラ糖化効率改善作用を調べた。乾燥イナワラを水道水に一晩浸漬した翌日水を切り、含水イナワラ(湿重量250g)を再び、20mMリン酸(pH2.07)、20mM酒石酸(pH2.42)、20mMクエン酸(pH2.49)、20mM乳酸(pH2.70)、20mM酢酸(pH3.32)2.5リットルに各々一晩浸漬した。比較対象として、湿イナワラ(湿重量250g)を再度水道水、及び50倍希釈Kirk's salts solutionに浸漬した。一晩浸漬後、各溶液のpHはわずかに上昇し、20mMリン酸(pH2.30)、20mM酒石酸(pH2.72)、20mMクエン酸(pH2.80)、20mM乳酸(pH3.22)、20mM酢酸(pH4.032)となった。また、水道水はpH6.38、50倍希釈Kirk's salts solutionはpH6.18であった。各イナワラの水を切り、含水率が80重量%程度になるように自然乾燥させた。以後の腐朽処理は実施例3と同様に、また糖化率測定は実施例1と同様に行った。結果を図7に示す。
(1)処理時間・・・24時間
(2)処理温度・・・50℃、180rpm、旋回振盪緩衝液・・・0.1−0.2M酢酸緩衝液(pH4.0−pH5.0)
(3)Total 25m基質濃度・・・イナワラ5%w/v
(4)酵素濃度・・・ジェネンコアGC220 0.5%v/v(=125μl/25ml)
結果を図8に示す。
Claims (7)
- 草本系バイオマスに白色腐朽菌Phanerochaete flavido-albaを植菌し、該草本系バイオマスと共に培養することにより、該草本系バイオマスのリグニンを分解することを特徴とする草本系バイオマスの糖化前処理方法。
- 前記草木系バイオマスは、80〜120℃の範囲の温度で滅菌処理した後、前記培養に供することを特徴とする請求項1記載の草本系バイオマスの糖化前処理方法。
- 前記培養は、20〜35℃の範囲の温度で行うことを特徴とする請求項1または請求項2記載の草本系バイオマスの糖化前処理方法。
- 前記培養は、pH2.0〜7.0の範囲で行うことを特徴とする請求項1乃至請求項3のいずれか1項記載の草本系バイオマスの糖化前処理方法。
- 白色腐朽菌Phanerochaete flavido-albaを培養した後、前記草本系バイオマスを湿式摩砕処理することを特徴とする請求項1乃至請求項4のいずれか1項記載の草本系バイオマスの糖化前処理方法。
- 前記草本系バイオマスは、70重量%以上の範囲の含水率で前記湿式摩砕処理に供することを特徴とする請求項5記載の草本系バイオマスの糖化前処理方法。
- 前記湿式摩砕処理は、ディスクミルを用いて行うことを特徴とする請求項5または請求項6記載の草本系バイオマスの糖化前処理方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2008199402A JP2010035446A (ja) | 2008-08-01 | 2008-08-01 | 草本系バイオマスの糖化前処理方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2008199402A JP2010035446A (ja) | 2008-08-01 | 2008-08-01 | 草本系バイオマスの糖化前処理方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2010035446A true JP2010035446A (ja) | 2010-02-18 |
Family
ID=42008638
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2008199402A Pending JP2010035446A (ja) | 2008-08-01 | 2008-08-01 | 草本系バイオマスの糖化前処理方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP2010035446A (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2014524943A (ja) * | 2011-06-09 | 2014-09-25 | ザイレコ,インコーポレイテッド | バイオマス処理 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007037469A (ja) * | 2005-08-03 | 2007-02-15 | Kyoto Univ | リグノセルロース分解作用を有する白色腐朽菌及びその利用 |
JP2008006372A (ja) * | 2006-06-29 | 2008-01-17 | Oji Paper Co Ltd | 木質系バイオマスの前処理方法 |
JP2008092883A (ja) * | 2006-10-13 | 2008-04-24 | National Institute Of Advanced Industrial & Technology | 糖の製造方法 |
-
2008
- 2008-08-01 JP JP2008199402A patent/JP2010035446A/ja active Pending
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007037469A (ja) * | 2005-08-03 | 2007-02-15 | Kyoto Univ | リグノセルロース分解作用を有する白色腐朽菌及びその利用 |
JP2008006372A (ja) * | 2006-06-29 | 2008-01-17 | Oji Paper Co Ltd | 木質系バイオマスの前処理方法 |
JP2008092883A (ja) * | 2006-10-13 | 2008-04-24 | National Institute Of Advanced Industrial & Technology | 糖の製造方法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
JPN6013027603; Int Biodeterior Biodegrad Vol.57, 2006, p.24-30 * |
JPN6014000067; Biotechnology and Bioengineering vol.28, no.4, 1986, p.504-510 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2014524943A (ja) * | 2011-06-09 | 2014-09-25 | ザイレコ,インコーポレイテッド | バイオマス処理 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN101974436B (zh) | 一种木质纤维素降解菌及其应用 | |
Singh et al. | Optimization of extraction of bulk enzymes from spent mushroom compost | |
Shahriarinour et al. | Effect of medium composition and cultural condition on cellulase production by Aspergillus terreus | |
Philippoussis et al. | Agro-food industry wastes and agricultural residues conversion into high value products by mushroom cultivation | |
Songulashvili et al. | Laccase and manganese peroxidase activities of Phellinus robustus and Ganoderma adspersum grown on food industry wastes in submerged fermentation | |
WO2006092984A1 (ja) | キノコ廃菌床の前処理及びその利用による糖、エタノールへの変換方法 | |
Sherief et al. | Lignocellulolytic enzymes and substrate utilization during growth and fruiting of Pleurotus ostreatus on some solid wastes | |
Zadrazil | Changes in in vitro digestibility of wheat straw during fungal growth and after harvest of oyster mushrooms (Pleurotus spp.) on laboratory and industrial scale | |
JP2009221093A (ja) | 竹の有効成分を含む発酵肥料およびその製造方法 | |
Narinthorn et al. | Alkaline and fungal pretreatments for improving methane potential of Napier grass | |
Guan et al. | Enhanced degradation of lignin in corn stalk by combined method of Aspergillus oryzae solid state fermentation and H2O2 treatment | |
Elisashvili et al. | Lignocellulolytic enzymes profile during growth and fruiting of Pleurotus ostreatus on wheat straw and tree leaves | |
Ali et al. | Screening and statistical optimization of physiochemical parameters for the production of xylanases from agro-industrial wastes | |
Elisashvili et al. | Lignocellulolytic enzyme activity during growth and fruiting of the edible and medicinal mushroom Pleurotus ostreatus (Jacq.: Fr.) Kumm.(Agaricomycetideae) | |
CN101638645A (zh) | 一种固态机械发酵生产木聚糖酶方法 | |
Liu et al. | Effect of Supplements $ Mn^{2+} $, $ Cu^{2+} $, and Aromatic Compounds and Penicillium decumbens on Lignocellulosic Enzyme Activity and Productivity of Catathelasma ventricosum | |
JPH05192036A (ja) | キノコの栽培方法 | |
CN106063520A (zh) | 一种高营养价值湖羊饲料的制备方法 | |
JP2009213440A (ja) | アルコールの製造方法 | |
JP2010035446A (ja) | 草本系バイオマスの糖化前処理方法 | |
Grover et al. | Ethanol production from spent oyster mushroom substrate | |
CN105016870A (zh) | 一种采用板栗蒲制作的蜜环菌用蓬松透气保湿型培养基以及制备方法 | |
WO2017183110A1 (ja) | バイオガス製造方法および装置 | |
Bento et al. | Influence of white-rot fungi on chemical composition and in vitro digestibility of lignocellulosic agro-industrial residues | |
CN103509764B (zh) | 一种应用于栓菌固态发酵产漆酶的培养基 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20110603 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20110606 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20130611 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130802 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20140114 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20140805 |