JP2009527346A - リゾチーム含有組成物を使用する水設備における微生物増殖を制御する方法 - Google Patents
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Abstract
【選択図】なし
Description
A.殺藻活性の評価.本試験法は藻類増殖を阻害(抑制)する効果について化合物を試験する技術を提供するものである。MIC値は、所与の微生物の増殖を完全に阻害(抑制)するのに必要な化合物の最小レベルと定義される最小阻止濃度を表す。
器具:
試験管、18〜150mm。滅菌試験管が望ましい。
インキュベーター、温度を一定にし(±2℃)、光を調節することが可能。
試薬および材料:
KNO3
K2HPO4
MgSO4・7H2O
Fe‐クエン酸アンモニウム(1%溶液)
原液:
原液成分 g/200g脱イオン水中
A.K2HPO4 1.50
B.MgSO4.7H2O 1.50
C.Na2CO3 0.80
D.CaCl2.2H2O 0.50
E.Na2SiO3.9H2O 1.16
F.クエン酸 1.20
G.PIV金属
Na2EDTA 0.750 g
FeCl3.6H2O 0.097 g
MnCl2.4H2O 0.041 g
ZnCl2 0.005 g
CoCl2.6H2O 0.002 g
Na2MoO4.2H2O 0.004 g
脱イオン水 1,000.000 ml
播種物
手順:
培地調製:
改変アレン培地(Allen, A. A., 1968)
NaNO3 1.5g
K2HPO4 5.0ml 原液A
MgSO4.7H2O 5.0ml 原液B
Na2CO3 5.0ml 原液C
CaCl2.2H2O 10.0ml 原液D
Na2SiO3.9H2O 10.0ml 原液E
クエン酸 1.0ml 原液F
PIV金属 1.0ml 原液G
脱イオン水 1000.0ml
化合物混和:
播種:
試験管1本当たり、培地の種類ごとに、また播種物の種類ごとに、播種物を100マイクロリットル添加する。
インキュベーション:
24℃にセットしたインキュベーター中に、処置薬が入った試験管を置く。植物栽培用蛍光灯で光を供給し、16時間の照明時間および8時間の遮光時間を作る。
試験管の評定:
処置薬が入った試験管を陽性であるか陰性であるかについて評定する:
・試験管中の培地で藻類が増殖していれば(底に緑色沈殿)、陽性(汚染されている)。
・試験管中の培地が無色のままであれば陰性(汚染なし)。
対照は常に陽性である。化合物の最小阻止濃度(MIC)は藻類増殖の陰性を示す最小の用量である。
相乗効果の評価:
FIC=[A]/MICA+[B]/MICB、
式中、MICAおよびMICB=化合物AおよびB単独のMICであり、
[A]および[B]=化合物AおよびBを合わせた場合のMICである。
器具:
1.試験管、18x150mm使い捨て培養試験管‐滅菌済
2.滅菌1mlおよび10mlピペット
3.温度を37℃±1℃に維持可能なインキュベーター
4.オートクレーブ
5.pHメーター
6.1〜200ulマイクロピペットチップ
7.Eppendorfマイクロピペット
8.McFarland標準液#1
9.ペトリ皿:プラスチック製使い捨てペトリ皿、100x15mmサイズ
3.培地調製:
1.Difco Plate Count寒天:23.5gを1Lの脱イオン水に懸濁して寒天を再水和し、沸騰させて溶解する。必要に応じて分注し、スチームオートクレーブ中、121℃で15分間滅菌する。
2.基礎塩基質、pH7:
Trizma(登録商標)(Tris)HCl 3.9g
Trizma(登録商標)(Tris)塩基 0.05g
(注記:以下を添加する前にpHを適切にする。どちらか一方を多めにした適切なTrizma(登録商標)バッファーで調整する)
グルコース 0.02グラム
ペプトン 0.01グラム
硝酸アンモニウム 1.0 グラム
硫酸マグネシウム、七水和物 0.25グラム
塩化カルシウム 0.25グラム
121℃で15分間高圧滅菌する。
対照の平均CFU/ml−処置プレートの平均CFU/ml x100
対照の平均CFU/ml
FIC=[A]/MICA+[B]/MICB、
式中、MICAおよびMICB=化合物AおよびB単独のMICであり、
[A]および[B]=化合物AおよびBを合わせた場合のMICである。
これは藻類を制御するための純粋に酵素的な系である。リゾチームは本発明の有効成分として単独で使用されることが好ましい。
・リゾチーム(Sigma)、塩化リゾチーム(NutriScience)、塩化リゾチーム(MP Biomedicals)をクロレラ種(ATCC7516)に対して試験した。インキュベーション期間は24℃で14日間であり、16時間の照明時間および8時間の遮光時間の下で行った。
MICB=BUSAN 77(商標)製品単独のMIC=0.7mg製品/l
[A]=BUSAN 77(商標)製品と併用した塩化リゾチームのMIC(mg製品/l)
[B]=塩化リゾチームと併用したBUSAN 77(商標)製品のMIC(mg有効成分/l)
*=A値<1は同時に使用した両成分の相乗的活性を意味する。
MICB=BUSAN 77(商標)製品単独のMIC=2.00mg製品/l
[A]=BUSAN 77(商標)製品と併用した塩化リゾチームのMIC(mg製品/l)
[B]=塩化リゾチームと併用したBUSAN 77(商標)製品のMIC(mg有効成分/l)
*=A値<1は同時に使用した両成分の相乗的活性を意味する。
MICB=BUSAN 77(商標)製品単独のMIC=2.00mg製品/l
[A]=BUSAN 77(商標)製品と併用した塩化リゾチームのMIC(mg製品/l)
[B]=塩化リゾチームと併用したBUSAN 77(商標)製品のMIC(mg有効成分/l)
*=A値<1は同時に使用した両成分の相乗的活性を意味する。
MICB=BUSAN 77(商標)製品単独のMIC=2.00mg製品/l
[A]=BUSAN 77(商標)製品と併用した塩化リゾチームのMIC(mg製品/l)
[B]=塩化リゾチームと併用したBUSAN 77(商標)製品のMIC(mg有効成分/l)
*=A値<1は同時に使用した両成分の相乗的活性を意味する。
注記:E.アエロゲネスに対する塩化リゾチームのMICは、示した濃度範囲内で測定しなかったが、相乗作用の存在を示すため、試験した最高濃度である1000mg製品/lを越えるものとして示した。
MICB=BUSAN 77(商標)製品単独のMIC=0.8mg製品/l
[A]=BUSAN 77(商標)製品と併用した塩化リゾチームのMIC(mg製品/l)
[B]=塩化リゾチームと併用したBUSAN 77(商標)製品のMIC(mg製品/l)
*=A値<1は同時に使用した両成分の相乗的活性を意味する。
MICB=塩化ナトリウム単独のMIC=20,000mg製品/l
[A]=塩化ナトリウムと併用した塩化リゾチームのMIC(mg製品/l)
[B]=塩化リゾチームと併用した塩化ナトリウムのMIC(mg有効成分/l)
*=A値<1は同時に使用した両成分の相乗的活性を意味する。
Claims (17)
- 水設備において少なくとも1種の微生物の増殖を制御する方法であって、本質的にリゾチームから成る組成物を水設備に添加する工程を含む方法。
- 該水設備において藻類の増殖を制御する、請求項1記載の方法。
- 前記リゾチームが熱処理または熱改変リゾチームである、請求項1記載の方法。
- 前記リゾチームがリゾチーム二量体である、請求項1記載の方法。
- 該リゾチームを該水設備に添加し、リゾチーム濃度が約0.01〜約100ppmである、請求項1記載の方法。
- 該リゾチームを該水設備に添加し、リゾチーム濃度が約0.1〜約10ppmである、請求項1記載の方法。
- 該水設備が水泳用プール、温水槽または温泉である、請求項1記載の方法。
- 該水設備が塩素発生機を備えた再循環水設備であり、該再循環水設備が約2,000〜約6,000ppmの塩化ナトリウムを含む、請求項1記載の方法。
- 該水設備が水産養殖用の手段である、請求項1記載の方法。
- 該水設備が塩素除去される再循環水設備である、請求項1記載の方法。
- 水設備において少なくとも1種の微生物の増殖を制御する方法であって、少なくとも1種のリゾチームと少なくとも1種の四級アンモニウム化合物とを合わせて含む組成物を添加する工程を含む方法。
- 該リゾチームを該水設備に添加し、リゾチーム濃度が約0.01〜約5,000ppmである、請求項11記載の方法。
- 該リゾチームを該水設備に添加し、リゾチーム濃度が約0.1〜約500ppmである、請求項11記載の方法。
- 該四級アンモニウム化合物を該水設備に添加し、該四級アンモニウム化合物濃度が約0.01〜約1,000ppmである、請求項11記載の方法。
- 該四級アンモニウム化合物を該水設備に添加し、該四級アンモニウム化合物濃度が約0.1〜約100ppmである、請求項11記載の方法。
- 該リゾチームおよび四級アンモニウム化合物を該水設備に添加し、リゾチーム濃度が約0.1〜約500ppm、また該四級アンモニウム化合物濃度が約0.1〜約100ppmである、請求項11記載の方法。
- 水設備において藻類の増殖を制御する、請求項11記載の方法。
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