JP2009518302A - アンサマイシン含有組成物 - Google Patents

Abstract

油層にアンサマイシン及び２重量％未満のオレイン酸を含み、アンサマイシンはゲルダナマイシン、１７−アミノゲルダナマイシン、１７−アリアラミノ−１７−デメトキシ−ゲルダナマイシン、下記構造を有する化合物（５６３）、化合物（２３７）、又は前述のアンサマイシンの任意の塩である、水相及び油相を含む医薬組成物を提供する。

化合物５６３ 化合物２３７

Description

（関連出願）
本発明は、２００５年１２月１日付け米国仮出願第６０／７４２０９３号の優先権を主張し、これは参照により全体（図面を含む）を本願明細書に取り入れるものとする。本願明細書はまた米国出願明細第２００５／０１７６６９５号、第２００６００１４７３０号、第２００６／００６７９５３号及び第２００６／０１４８７７６号、並びに国際特許出願第２００３／０２６５７１号、２００３／０８６３８１号及び２００４／０８２６７６号にも関連し、これらの全ては参照により全体を本願明細書に取り入れるものとする。

（技術分野）
本発明は、一般に、医薬組成物及びその調製方法及び使用方法に関する。具体的には、本発明は、アンサマイシンを含有する組成物に関する（例えば、１７−アリルアミノ−１７−デメトキシ−ゲルダナマイシン（１７−ＡＡＧ））。

１７−アリルアミノ−ゲルダナマイシン（１７−ＡＡＧ）は、ゲルダナマイシン（ＧＤＭ）の合成類似化合物である。両分子とも、アンサマイシン類として知られる抗生物質分子の広い分類に属する。ＧＤＭは、最初に微生物のＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓから分離され、当初は、特定のキナーゼ類の強力阻害剤として同定され、後に、キナーゼ分解を刺激することにより、具体的には、熱ショックタンパク９０（ＨＳＰ９０）等の「分子シャペロン」を標的にすることによって作用することが示された。その後、種々の他のアンサマイシンが、多かれ少なかれ、こうした活性を実証し、１７−ＡＡＧが、なかでも最も見込みがあり、現在、集中的な臨床研究のテーマが、国立がん研究所（ＮＣＩ）によって行われている（非特許文献１−２）。

ＨＳＰ９０は、シグナル伝達、細胞周期調節、及び転写制御に関与する主要タンパク等の広範囲なタンパクのフォールディング、活性化、及び構築に関与する遍在性のシャペロンタンパクである。研究者は、ＨＳＰ９０シャペロンタンパクが、例えば、Ｒａｆ−１、ＥＧＦＲ、ｖ−Ｓｒｃ族キナーゼ、Ｃｄｋ４、及びＥｒｂＢ−２のようなステロイドホルモン受容体やプロテインキナーゼのような重要なシグナルタンパクと関連することを報告している（非特許文献３−５）。さらに、ＨＳＰ７０、ｐ６０／Ｈｏｐ／Ｓｔｉｌ、Ｈｉｐ、Ｂａｇｌ、ＨＳＰ４０／Ｈｄｊ２／Ｈｓｊｌ、イムノフィリン、ｐ２３、及びｐ５０等、特定のコシャペロンがその機能においてＨＳＰ９０を補助し得ることを示唆する研究がある（非特許文献６）。

アンサマイシン抗生物質、例えば、ハービマイシンＡ（ＨＡ）、ＧＤＭ、及び１７−ＡＡＧは、ＨＳＰ９０のＮ末端ＡＴＰ結合ポケットの堅固な結合にり抗がん性効果を引き起こすと考えられている（非特許文献７）。このポケットは高度に保存され、ＤＮＡギラーゼのＡＴＰ結合部位に弱い相同性を有する（非特許文献７及び８）。さらに、ＡＴＰとＡＤＰは、両方とも、低い親和性でこのポケットを結合し、弱いＡＴＰａｓｅ活性を有することが示されている（非特許文献９−１０）。インビトロ及びインビボの研究において、アンサマイシン及び他のＨＳＰ９０阻害剤がこのＮ末端ポケットを占有することで、ＨＳＰ９０機能が変化し、タンパクフォールディングを阻害することが実証された。高濃度においては、アンサマイシン及び他のＨＳＰ９０阻害剤は、ＨＳＰ９０に対するタンパク基質の結合を妨げることが示されている（非特許文献１１−１３）。また、アンサマイシンは、シャペロン随伴のタンパク性基質のＡＴＰ依存性遊離を阻害することが実証されている（非特許文献１４−１５）。どちらの場合も、基質はプロテアソームにおけるユビキチン依存性プロセスによって分解される（非特許文献１４及び１６−１７）。

この基質の不安定化は、腫瘍と非形質転換細胞で同様に生じ、信号伝達制御因子のサブセット、例えば、Ｒａｆ（非特許文献１８−１９）、核内ステロイド受容体（非特許文献２０−２１）、ｖ−ｓｒｃ（非特許文献２２）及び特定の膜貫通チロシンキナーゼ（非特許文献２３）の、例えばＥＧＦ受容体（ＥＧＦＲ）とＨｅｒ２／Ｎｅｕ（非特許文献２４−２７）、ＣＤＫ４、及び変異体ｐ５３（非特許文献２８）で特に有効であることが示されている。これらのタンパクのアンサマイシン誘発損失は、特定の制御経路の選択的破壊をもたらし、細胞周期の特有の段階における成長抑止（非特許文献２９）、アポトーシス、及び／又はこのように処理された細胞の分化（非特許文献３０）に帰結する。

制がんと抗腫瘍の活性に加え、ＨＳＰ９０阻害剤は、消炎剤、抗感染症剤、自己免疫の治療剤、脳卒中、虚血、多発性硬化症、心疾患、の治療剤、及び中枢神経系関連疾患の治療剤、並びに神経再生の促進に有用な薬剤等の様々な他の用途に関係している（特許文献１−４）。上記と若干重複し、限定されるものではないが、強皮症、多発性筋炎、全身性ループス、関節リウマチ、肝硬変、ケロイド形成、間質性腎炎、及び肺線維症等の線維系疾患もまたＨＳＰ９０阻害剤で治療されうるとの報告が文献にある（特許文献５）。さらにまた、ＨＳＰ９０調節、調節剤及びこれらの使用は、特許協力条約公開（ＰＣＴ）／ＵＳ０３／０４２８３、ＰＣＴ／ＵＳ０２／３５９３８、ＰＣＴ／ＵＳ０２／１６２８７、ＰＣＴ／ＵＳ０２／０６５１８、ＰＣＴ／ＵＳ９８／０９８０５、ＰＣＴ／ＵＳ００／０９５１２、ＰＣＴ／ＵＳ０１／０９５１２、ＰＣＴ／ＵＳ０ｌ／２３６４０、ＰＣＴ／ＵＳ０１／４６３０３、ＰＣＴ／ＵＳ０１／４６３０４、ＰＣＴ／ＵＳ０２／０６５１８、ＰＣＴ／ＵＳ０２／２９７１５、ＰＣＴ／ＵＳ０２／３５０６９、ＰＣＴ／ＵＳ０２／３５９３８、ＰＣＴ／ＵＳ０２／３９９９３、米国出願公開６０／２９３、２４６、６０／３７１、６６８、６０／３３５、３９１、６０／１２８、５９３、６０／３３７、９１９、６０／３４０、７６２、６０／３５９、４８４及び６０／３３１、８９３に報告がある。
ＷＯ０２／０９６９６ ＷＯ９９／５１２２３ 米国特許第６２１０９７４号 米国特許第６１７４８７５号 ＷＯ０２／０２１２３ Ｆｅｄｅｒａｌ Ｒｅｇｉｓｔｅｒ、６６巻、１２９号、３５４４３−３５４４４ページ Ｅｒｌｉｃｈｍａｎら、Ｐｒｏｃ．ＡＡＣＲ（２００１）、４２、要約４４７４ Ｂｕｃｈｎｅｒ、Ｊ．ＴＩＢＳ、１９９９年、２４巻、１３６−１４１ページ Ｌ．Ｓｔｅｐａｎｏｖａら、Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．、１９９６年、１０巻、１４９１−５０２ページ Ｋ．Ｄａｉら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、１９９６年、２７１巻、２２０３０−４ページ Ｃａｐｌａｎ、Ａ．Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．、１９９９年、９巻、２６２−６８ページ Ｃ．Ｓｔｅｂｂｉｎｓら、１９９７年、Ｃｅｌｌ、８９巻、２３９−２５０ページ Ｊ．Ｐ．Ｇｒｅｎｅｒｔら、１９９７年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７２巻、２３８４３−５０ページ Ｃ．Ｐｒｏｒｏｍｏｕら、１９９７年、Ｃｅｌｌ、９０巻、６５−７５ページ Ｂ．Ｐａｎａｒｅｔｏｕら、１９９８年、ＥＭＢＯ Ｊ、１７巻、４８２９−３６年 Ｔ．Ｈ．Ｓｃｈｅｉｂｅｌら、１９９９年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９６、１２９７−３０２ページ Ｔ．Ｗ．Ｓｃｈｕｌｔｅら、１９９５年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７０巻、２４５８５−８ページ Ｌ．Ｗｈｉｔｅｓｅｌｌら、１９９４年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９１、８３２４−８３２８ページ Ｃ．Ｌ．Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒら、１９９６年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９３、１４５３６−４１ページ Ｓｅｐｐ−Ｌｏｒｅｎｚｉｎｏら、１９９５年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７０巻、１６５８０−１６５８７ページ Ｌ．Ｓｅｐｐ−Ｌｏｒｅｎｚｉｎｏら、１９９５年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７０巻、１６５８０−１６５８７ページ Ｌ．Ｗｈｉｔｅｓｅｌｌら、１９９４年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９１、８３２４−８３２８ページ Ｔ．Ｗ．Ｓｃｈｕｌｔｅら、１９９７年、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．、２３９巻、６５５−９ページ Ｔ．Ｗ．Ｓｃｈｕｌｔｅら、１９９５年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７０巻、２４５８５−８ページ Ｂ．Ｓｅｇｎｉｔｚ及びＵ．Ｇｅｈｒｉｎｇ、１９９７年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７２巻、１８６９４−１８７０１ページ Ｄ．Ｆ．Ｓｍｉｔｈら、１９９５年、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．、１５巻、６８０４−１２ページ Ｌ．Ｗｈｉｔｅｓｅｌｌら、１９９４年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９１、８３２４−８３２８ページ Ｌ．Ｓｅｐｐ−Ｌｏｒｅｎｚｉｎｏら、１９９５年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７０巻、１６５８０−１６５８７ページ Ｆ．Ｈａｒｔｍａｎｎら、１９９７年、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、７０巻、２２１−９ページ Ｐ．Ｍｉｌｌｅｒら、１９９４年、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、５４巻、２７２４−２７３０ページ Ｅ．Ｇ．Ｍｉｍｎａｕｇｈら、１９９６年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７１巻、２２７９６−８０１ページ Ｒ．Ｓｃｈｎｕｒら、１９９５年、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｒａ．、３８巻、３８０６−３８１２ページ Ｅｒｌｉｃｈｍａｎら，Ｐｒｏｃ．ＡＡＣＲ（２００１）、４２、要約４４７４ Ｒ．Ｃ．Ｍｕｉｓｅ−Ｈｅｉｍｅｒｉｃｋｓら、１９９８年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７３巻、２９８６４−７２ページ Ａ．Ｖａｓｉｌｅｖｓｋａｙａら、１９９９年、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、５９巻、３９３５−４０ページ

アンサマイシンの水溶性は乏しく、現在のところ、アンサマイシン含有医薬組成物、とりわけ静脈注射処方を調製することは困難である。これまでに、有機賦形剤（例えば、ＤＭＳＯ又はヒマシ油の誘導体、クレモフォール）、脂質小胞、及び水中油型エマルジョンを使用する試みがなされてきたが、今のところ、これらは、複雑な処理工程、きつい又は臨床的に受け入れられない溶媒を必要としており、及び／又は処方の不安定に帰着している。一般的には、Ｓ．Ｖｅｍｕｒｉ及びＣ．Ｔ．Ｒｈｏｄｅｓ、”Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ａｓ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｓｙｓｔｅｍｓ：ａ ｒｅｖｉｅｗ”、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ Ａｃｔａ Ｈｅｌｖｅｔｉａｅ、７０巻、９５−１１１ページ、１９９５年を、また、ＷＯ００／３７０５０として２０００年６月２９日付け公開のＰＣＴ／ＵＳ９９／３０６３１を参照されたい。ＤＭＳＯは、その肝毒性と心臓毒性に加え、患者に投与されると、有害事象（吐き気、嘔吐、悪臭）を生じさせることが知られており、一方、クレモフォールは、患者に、過敏症反応やアナフィラキシーを引き起こしやすく、抗ヒスタミン剤やステロイドでの前治療を必要とすることが多い。

本出願人の米国特許出願２００６００１４７３０、２００６／００６７９５３、及び２００６／０１４８７７６は、アンサマイシンを溶解するためのＤＭＳＯ又はクレモフォールを必要としないエマルジョン形態のアンサマイシン組成物の調製方法を教示している。しかしながら、これらのエマルジョンは、長期使用のために冷凍又は凍結乾燥の状態で保管されなければならず、このため、臨床治療場所で投与する際に、不便又は困難を生じさせる（例えば、解凍又は再水和と適切な濃度への調節を必要とする）。製造、搬送、及び臨床治療場所での投与のための調製の際に、組成物のハンドリングにおける容易性を増大させるために、冷凍状態又は室温で高められた安定性を示すアンサマイシン組成物に対するニーズが存在する。

本発明は、油層にアンサマイシン及び２重量％未満のオレイン酸を含み、アンサマイシンはゲルダナマイシン、１７−アミノゲルダナマイシン、１７−アリアラミノ−１７−デメトキシ−ゲルダナマイシン、下記構造を有する化合物５６３、化合物２３７、又は前述のアンサマイシンの任意の塩である、水相及び油相を含む医薬組成物を提供する。

化合物５６３ 化合物２３７

一実施形態において、アンサマイシンの最終濃度は約０．５と４ｍｇ／ｍＬの間の範囲である。

別の実施形態において、組成物中のオレイン酸の量は医薬組成物の約１重量％以下である。

また別の実施形態において、組成物中の前記オレイン酸の量は医薬組成物の約０．５と０．０５重量％の間である。

さらなる実施形態において、医薬組成物はさらに中鎖トリグリセリドを含んでなる。さらに別の実施形態において、中鎖トリグリセリドの量は医薬組成物の約１５重量％以下である。

さらに別の実施形態において、医薬組成物はさらに長鎖トリグリセリドを含んでなる。さらに別の実施形態において、長鎖トリグリセリドの量は医薬組成物の約７重量％以下である。

別の実施形態において、医薬組成物はさらに乳化剤を含んでなる。

さらなる実施形態において、本発明は油相が医薬組成物の約５から３０％である医薬組成物を提供する。

さらなる実施形態において、本発明は、アンサマイシンの最終濃度が約１から３ｍｇ／ｍＬの範囲であり；組成物中オレイン酸の量が約０．５から０．０５重量％の間であり；中鎖トリグリセリドの量が約７から１３重量％の間であり；長鎖トリグリセリドの量が約２から５重量％の間の範囲であり；レシチン量が医薬組成物の約５から８重量％の間の範囲である、医薬組成物を提供する。

本発明のさらなる実施形態は、平均液滴直径が約５００ｎｍ未満の；平均液滴直径が約１５０ｎｍ未満の；又は平均液滴直径が約８０ｎｍ未満の、組成物を提供する。

さらに別の実施形態において、医薬組成物のｐＨは約５から８の範囲である。

本発明のまた別の実施形態は、油相にさらに１７−アリアラミノ−１７−デメトキシ−ゲルダナマイシン及び２重量％未満のオレイン酸を含み、前記医薬組成物は約５から８のｐＨ範囲及び約０℃から１０℃の間の範囲の温度に対して約１８ヶ月安定である、水相及び油相を含んでなる医薬組成物を提供する。

また別の実施形態は、本発明に従った医薬組成物の有効量を個体に投与することを含んでなる、ＨＳＰ−９０媒介障害を有する個体を治療する方法を提供する。ＨＳＰ−９０媒介疾病は、炎症性疾患、感染症、自己免疫不全、脳梗塞、虚血、心疾患、神経疾患、繊維遺伝子障害、増殖性障害、腫瘍、白血病、新生物、がん、悪性腫瘍、代謝病及び難病からなる群から選ばれる１つでもよい。

また別の実施形態において、本発明は、さらに、細胞毒剤、抗血管新生薬及び抗悪性腫瘍薬からなる群から選ばれる少なくとも１の治療薬を投与することを含んでなる方法を提供する。

用語「蒸発」及び「凍結乾燥」は必ずしも溶媒及び溶液の１００％除去を意味せず、より低い除去率であってもよい（例えば約９５％以上）。

用語「水和」又は「再水和」は、例えば水又はハンクス溶液、リンゲル液、又は生理食塩水等の生理的に互換性のあるバッファ等の水溶液を添加することを意味する。

用語「約」は、記述から２０％の変動を包含することを意味する。用語「〜の間」又は「約〜の間」と組み合わせて用いるときの用語「含む」は、記述された範囲の両端を含むことを意味する。

本願明細書に使用の用語「安定」は、本発明の組成物の性質を指す。冷蔵温度（例えば０−１０℃又は２−８℃）及び室温における高い安定性（オレイン酸の無い同様の組成物と比較して）は本発明の組成物の特徴である。典型的には、室温下及び約５−８（例えば５．５−７）のｐＨ値において、このようなオレイン酸含有組成物は、少なくとも３ヶ月間、平均液滴直径が１００ｎｍを超えて増加せず；冷蔵温度（例えば０−１０℃又は２−８℃）及び約５−８（例えば５．５−７）のｐＨ値において、このようなオレイン酸含有組成物は、少なくとも１２ヶ月間、平均液滴直径が５０ｎｍ（又は３５ｎｍすら）を超えて増加しない。さらに、本発明の組成物中に１７−ＡＡＧが存在する場合は、１７−ＡＡＧの２つの主要な分解生成物であるＲＳ−Ａ及び１７−ＡＧは、１２ヶ月間、それぞれ約２．５（例えば１）重量％及び７．５（例えば５）重量％以下であることが見出された。

「油」は脂肪酸及び同一物を含有するグリセリド、例えば当業に公知のモノ−、ジ−及びトリグリセリドを含む。本発明に用いる脂肪酸及びグリセリドは飽和及び／又は不飽和、天然及び／又は合成、荷電した又は電気的中性でありうる。「合成」は、当業に公知の用語として全体合成でもよく、半合成でもよい。油は、その成分において及び／又は起源において、均一でも不均一でもよい。

用語「短」「中」「長」は、炭素鎖（例えば脂肪酸又はトリグリセリド）の記載に用いるときに、それぞれ８未満の直鎖炭素原子、８から１２の直鎖炭素原子、及び１２を超える直鎖炭素原子を指す。

「生理学的に許容できるキャリア」は、生体への顕著な刺激を生じず、投与された化合物の生理活性及び特性を抑制しない、担体又は希釈剤を指す。

「賦形剤」は、化合物の投与をさらに容易にするために医薬組成物に添加される物質を指す。賦形剤の例には、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、種々の等及びでんぷんの様式、セルロース及びセルロース誘導体、ゼラチン、植物油及びポリエチレングリコールが挙げられるが、これらに限定しない。これらは、例えばショ糖は、上述の生理学的に許容できるキャリアでもありうる。さらに賦形剤の定義の範囲にはバルク剤が入る。「バルク剤」は一般的に処方のための機械的支持を提供する。こうした剤の例は糖である。本願明細書に用いる糖には、単糖、二糖、オリゴ糖及び多糖が挙げられるが、これらに限定しない。具体的な例には、果糖、ショ糖、マンノース、トレハロース、ソルボース、キシロース、マルトース、乳糖、ショ糖、デキストロース及びデキストランが挙げられるが、これらに限定しない。糖には、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、ズルシトール、キシリトール、及びアラビトール等の、糖アルコールも挙げられる。本発明の範囲に従って、糖混合物も用いられうる。種々のバルク剤、例えばグリセロール、糖、糖アルコール、及び単糖、二糖は、上述のような等張剤の機能も示しうる。バルク剤は薬物に対して化学的に無反応であり、使用条件下において有害な副作用が全くないか又は極めて限られていることが好適である。バルク剤キャリアに加えて、バルク剤の目的になりうる又はならない他のキャリアには、例えば、当業に公知で即時入手可能なアジュバント及び希釈剤が挙げられる。

「有効量」は、治療及び／又は予防の有効性を提供しうる量を意味する。勿論、治療及び／又は予防の有効性を獲得するために本発明に従って投与される化合物の特定の量は、例えば投与経路、治療される症状、及び治療される個体等を含む、症例を取り巻く特定の環境により決定するであろう。排除速度、半減期及び最大耐用量（ＭＴＤ、Ｍａｘｉｍｕｍ Ｔｏｌｅｒａｔｅｄ Ｄｏｓｅ）等の要因もさらに決定されねばならないが、当業者であれば標準手順を用いてこれらを決定しうる。

（本発明の組成物の構成成分）
（アンサマイシン）
用語「アンサマイシン」は、長鎖架橋されたベンゾキノン、ベンゾヒドロキノン、ナフトキノン又はナフトヒドロキノン部分を含んでなる「アンサ」構造を特徴とする化合物の広義の用語である。ナフトキノン又はナフトヒドロキノン系化合物の例としては、臨床的に重要な薬剤であるリファンピシン及びリファマイシンがそれぞれ挙げられる。ベンゾキノン系化合物の例としては、ゲルダナマイシン（合成誘導体である１７−ＡＡＧ及び１７−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ−アチルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン（ＤＭＡＧ）を含む）、ジヒドロゲルダナマイシン及びヘルバマイシンが挙げられる。ベンゾヒドロキノン系の例には、マクベシンが挙げられる。本発明に係るアンサマイシン及びベンゾキノン。本発明に係るアンサマイシン及びベンゾキノンは、合成、天然生成、又は両者の組み合わせ、すなわち「半合成」でもよく、２量体及びコンジュゲート変異体及びプロドラッグ形態でもよい。本発明の方法において有用なベンゾキノンアンサマイシン及びその調製方法の例には、米国特許第３５９５９５５号（ゲルダナマイシンの調製を記載）、米国特許第４２６１９８９号、第５３８７５８４号及び第５９３２５６６号が挙げられるが、これらに限定しない。ゲルダナマイシンは、ＣＮ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ提携、ドイツ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、本社米国カリフォルニア州サンディエゴ）、カタログ番号３４５８０５等、市販入手可能なものもある。ゲルダナマイシン誘導体である４，５−ジヒドロゲルダナマイシン及びそのＳｔｒｅｐｔｏｒｎｙｃｅｓ ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ（ＡＴＣＣ ５５２５６）培地由来ヒドロキノンの生化学的精製は、１９９３年６月２２日付け、Ｃｕｌｌｅｎらを発明者として列記するＰｆｉｚｅｒ Ｉｎｃ．による国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ９２／１０１８９号、公開ＷＯ９３／１４２１５に記載があり、ゲルダナマイシンの触媒的水素添加による４，５−ジヒドロゲルダナマイシン合成の代替方法も公知である。例えば、”Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ”、 Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ ｔｈｅ Ａｎｓａｎｚｙｃｉｎ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、３３巻、２７８号、１９７６年も参照されたい。本発明の種々の実施形態に関連して用いうる他のアンサマイシンは、上述の背景技術の部に列挙の文献に記載がある。本発明との比較において、アンサマイシン（例えば、１７−ＡＡＧ）の最終濃度は典型的には約０．５−４ｍｇ／ｍＬ（例えば、１−３ｍｇ／ｍＬ又は２ｍｇ／ｍＬ）である。

（長鎖トリグリセリド）
「長鎖トリグリセリド」とは、直鎖炭素原子の長さが１２を超える脂肪酸を有する化合物である。一般にはこの由来は、例えば大豆油又は大豆オイル等の植物油であり、典型的には５５−６０％リノール酸（９，１２−オクダデカジエン酸）、２２％オレイン酸（シス−９−オクタデセン酸）及び少量のパルミチン酸及びステアリン酸を含有する。本発明の組成物中に存在する長鎖トリグリセリドの量は、典型的には、組成物重量を基準として約７重量％以下（例えば約２−５重量％）である。

（中鎖トリグリセリド）
本願明細書に用いる「中鎖トリグリセリド」とは、長さが８−１２の直鎖炭素原子、より好適には長さが８−１０の直鎖炭素原子の範囲の脂肪酸を有するトリグリセリド組成物である。本発明の種々の実施形態は、Ｍｉｇｌｙｏ（登録商標）（Ｃｏｎｄｅａ Ｖｉｓｔａ Ｃｏ．、Ｃｒａｎｆｏｒｄ、米国ニュージャージー州）の使用を含んでなる。Ｍｉｇｌｙｏ（登録商標）は、およそ５０−６５％のカプリル酸（炭素８個）及び３０−４５％のカプリン酸（炭素１０個）を含有する。カプロン酸（炭素６個）も最大で約２％まで存在し、ラウリン酸（炭素１２個）も同様である。さらに微量（最大１％）のミリスチン酸（炭素１４個）が存在する。本発明の組成物中に用いうる他の中鎖脂肪酸には、Ｍｉｇｌｙｏ（登録商標）８１０、８１８、８２９及び８４０、並びに他の周知の中鎖トリグリセリドが挙げられる。Ｍｉｇｌｙｏ８１２Ｎは、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ誌に中鎖トリグリセリドとして、Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ誌に分画ココナツオイルとして、及びＪａｐａｎｅｓｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ誌にカプリル酸／カプリン酸トリグリセリドとしての論文がある。他の中鎖トリグリセリド源にはココナツオイル、パームカーネルオイル及びバターが挙げられる。本発明の組成物中に存在する典型的な中鎖トリグリセリドの量は、組成物重量を基準として約３−１０重量％（例えば約５−８重量％）である。

出願済み米国出願公開第ＵＳ２００６／０１４８９９７号に記載のように、Ｍｉｇｌｙｏ（登録商標）８１２Ｎは迅速投与されるとオクタノエートの代謝放出により鎮静作用を生じうる。１７−ＡＡＧエマルジョン（Ｍｉｇｌｙｏ（登録商標）８１２Ｎオイル）をラット静脈注入中において、注入速度が１．１グラム全脂質／ｋｇ／時間を超えると鎮静作用が観測された。関連する米国出願公開第２００６／０１４８７６６号の図１を参照されたい。鎮静作用は、犬においても１７−ＡＡＧエマルジョン処方の注入速度が１．１３グラム全脂質／ｋｇ／時間を超えると見られた。これを防止するために、インビボにおいてＭｉｇｌｙｏ８１２Ｎと競合させ、静脈注入中に生じるオクタノエート脂肪酸を減少させるために、上述のように長鎖トリグリセリド（大豆油等）が添加された。大豆油／Ｍｉｇｌｙｏ８１２Ｎ ＣＤ２３７エマルジョンでは、ラットへの注入速度が約４０グラム全脂質／ｋｇ／時間において急性の鎮静作用は見られなかった。従って、大豆油とＭｉｇｌｙｏ８１２Ｎの組み合わせは、鎮静作用に関してＣＦ２３７エマルジョン処方の耐用性を大きく改善する。同様に、サルにおいて、１２ｍＬ処方／ｋｇ／時間の静脈注入として、ＣＦ２３７エマルジョン処方の６回分投与には鎮静作用が見られず、静脈の炎症は観測されなかった。

（短鎖トリグリセリド）
「短鎖トリグリセリド」は、長さが８未満の直鎖炭素原子の脂肪酸を有する化合物である。これは本発明の組成物中に適宜存在しうる。

（乳化剤）
「乳化剤」は「界面活性剤」の同義語であり、レシチン等のリン脂質を含んでなるがこれに限らない。「レシチン」は、リン酸のコリンエステルに結合したステアリン酸、パルミチン酸及びオレイン酸の、天然生成ジグリセリドの混合物である。界面活性剤又は乳化剤の用語は、ホスファチジルコリンも含んでなり、個々の化合物は公知である。本発明に用いる乳化剤の例は、Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｎ ９０Ｇ（ＰＬ９０Ｇ、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｌｅｃｉｔｈｉｎ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｏｘｆｏｒｄ、米国コネチカット州）等の大豆レシチン、及びＬｉｐｏｉｄ Ｓ−１００（Ｌｉｐｏｉｄ ＫＧ、Ｌｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ、ドイツ）等の大豆ホスファチジルコリンである。Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｎ ９０Ｇは、これまで、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（登録商標）に約１．２％濃度、Ｄｏｘｉｌ（登録商標）（ドキソルビシン）に約１％、Ａｍｂｉｓｏｎｅ（登録商標）（アンフォテリシンＢ）に約２％、及びＰｒｏｐｏｆｏｌ（登録商標）に約１．２％等、非経口栄養製品中に用いられてきた。後者については、米国特許第６１４０３７４号を参照されたい。界面活性剤／乳化剤量は、典型的には、本発明の組成物中に組成物重量を基準として約３−１０重量％（例えば約５−８重量％）存在する。

アニオン性界面活性剤の例には、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸トリエタノールアミン、ポリオキシエチレンラウリルエーテル硫酸ナトリウム、ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル硫酸ナトリウム、ポリオキシエチレンラウリルエーテル硫酸トリエタノールアミン、ココイルサルコシンナトリウム、Ｎ−ココイルメチルタウシンナトリウム、ポリオキシエチレン（ココナツ）アルキルエーテル硫酸ナトリウム、ジエーテルヘキシルスルホコハク酸ナトリウム、ａ−オレフィンスルホン酸ナトリウム、ラウリルリン酸ナトリウム、ポリオキシエチレンラウリルエーテルリン酸ナトリウム、パーフロロアルキルカルボキシレート塩（ＵＮＩＤＩＮＥ ＤＳ−１０１及び１０２の商品名でダイキン工業社が生産）が挙げられる。

カチオン性界面活性剤の例には、塩化ジアルキル（Ｃ_１２−Ｃ_２２）ジメチルアンモニウム、塩化アルキル（ココナツ）ジメチルベンジルアンモニウム、オクタデシルアミン酢酸塩、テトラデシルアミン酢酸塩、獣脂アルキルプロピレンジアミン酢酸塩、塩化オクタデシルトリメチルアンモニウム、塩化アルキル（獣脂）トリメチルアンモニウム、塩化ドデシルトリメチルアンモニウム、塩化アルキル（ココナツ）トリメチルアンモニウム、塩化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム、塩化ビフェニルトリメチルアンモニウム、アルキル（獣脂）−イミダゾリン四級塩、塩化テトラデシルメチルベンジルアンモニウム、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ジオレイルジメチルアンモニウム、塩化ポリオキシエチレンドデシルモノメチルアンモニウム、塩化ポリオキシエチレンアルキル（Ｃ_１２−Ｃ_２２）ベンジルアンモニウム、塩化ポリオキシエチレンラウリルモノメチルアンモニウム、１−ヒドロキシエチル−２−アルキル（獣脂）−イミダゾリン四級塩、疎水基としてシロキサン基を有するシリコン陽イオン界面活性剤、疎水基としてフロロアルキル基を有するフッ素含有陽イオン界面活性剤（ＵＮＩＤＩＮＥ ＤＳ−２０２の商品名でダイキン工業社が生産）が挙げられる。

非イオン性界面活性剤の例には、ポリオキシエチレンラウリルエーテル、ポリオキシエチレントリデシルエーテル、ポリオキシエチレンセチルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンセチルエーテル、ポリオキシエチレンステアリルエーテル、ポリオキシエチレンオレイルエーテル、ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンモノラウラート、ポリオキシエチレンモノステアラート、ポリオキシエチレンモノオレアート、ソルビタンモノラウラート、ソルビタンモノステアラート、ソルビタンモノパルミタート、ソルビタンモノステアラート、ソルビタンモノオレアート、ソルビタンセスキオレアート、ソルビタントリオレアート、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウラート、ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミタート、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアラート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアート、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロックポリマー、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリエーテル修飾シリコンオイル（ＳＨ３７４６、ＳＨ３７４８、ＳＨ３７４９及びＳＨ３７７１の商品名で、東レ・ダウコーニングシリコーン社が生産）、パーフロロアルキルエチレンオキシド付加物（ＴＪＮＩＤＩＮＥ ＤＳ−４０１及びＤＳ−４０３の商品名でダイキン工業社が生産）、フロロアルキルエチレンオキシド付加物（ＵＮＩＤＩＮＥ ＤＳ−４０６の商品名でダイキン工業社が生産）及びパーフロロアルキルオリゴマー（ＵＮＩＤＩＮＥ ＤＳ−４５１の商品名でダイキン工業社が生産）が挙げられる。

（オレイン酸）
オレイン酸は、イオン化可能な、乳化特性を有する一不飽和オメガ９脂肪酸である。これは種々の動物及び植物油（オリーブ油等）に見られうる。本発明の組成物中に存在するオレイン酸の量は１重量％以下（例えば約０．５−０．０５重量％又は約０．２重量％）である。オレイン酸の解離定数は約５であるため、組成物のｐＨは、液滴直径安定化におけるオレイン酸の有効性に影響するであろう。

液滴直径安定化の改善のため、他の２次的な界面活性剤（例えば、ジミリスチルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、Ｓｏｌｕｔｏｌ ＨＳ１５、及びＴｗｅｅｎ８０）を冷蔵温度において試験したことに注目すべきである。Ｓｏｌｕｔｏｌ ＨＳ１５及びＴｗｅｅｎ８は液滴直径安定化を改善せず、ＤＭＰＧは注射器への吸引が困難な粘稠エマルジョンを生じる一方、オレイン酸は粘性等の他の特性に影響を与えずに安定化の改善を示すことが見出された。

（ショ糖）
ショ糖は、本発明においてバルク剤として用いられる。ショ糖は、活性成分を含む油性液滴の分散状態を固い結晶中に生成することにより、処方の安定性を大いに強化しうると考えられる。ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）はショ糖に置き換えて用いられうる。本発明の組成物中に存在するバルク剤（ショ糖等）の量は約１２重量％以下（例えば約７−８重量％）である。

（その他）
酸化による劣化又は脂質の過酸化を防止又は最小化するために、α−トコフェロールやブチル化ヒドロキシトルエン等の酸化防止剤及びエデト酸等の保存料を、酸素の遮断（例えば、窒素やアルゴン等の不活性ガスを存在させる処方、及び／又は遮光容器の使用）に加えて、又は代替として、含めてもよい。

さらにアンサマイシンの溶解度を増すために、薬理学的に許容できる共溶媒を組成物に加えてもよい。当業公知の多くの好適な共溶媒を用いてよい。溶媒の例には、グリセロール、ラブラフィル（ｌａｂｒａｆｉｌ、アプリコットカーネルオイルＰＥＧ−６エステル）、ラブラソル（ｌａｂｒａｓｏｌ、ＰＥＧ−８カプリル酸／カプリン酸グリセリド）、ポリエチレングリコール４００、Ｔｗｅｅｎ ８０、Ｓｏｌｕｔｏｌ ＨＳ１５、炭酸プロピレン、Ｔｒａｎｓｃｕｔｏｌ ＨＰ（エトキシジグリコール）及びグリコフロールを含んでなるが限定しない。

（本発明の組成物の調製）
一般的に、本発明の組成物の調製方法の第１ステップはアンサマイシンの溶解である。下記の図６に示すように、組成物の油相中にアンサマイシンを溶解しやすくするために、エタノールを用いうる。まず、超音波処理又は熱を用いてエタノール中にアンサマイシンを溶解し、続いて油相成分（例えば、長鎖／中鎖トリグリセリド、オレイン酸、及び乳化剤）を組成物に添加することが、最も一般的である。全ての構成成分を混合し溶解するために、しばしば撹拌及び超音波処理が必要である。次いでエタノールを蒸発除去した後、水相を加える。

あるいは、本発明の組成物は，直接（エタノールを用いずに）、アンサマイシンを油相に溶解し、水相と混合することにより調製されうる。２相は分離調製され、次いで組み合わされる。第１エマルジョン中の２相の比は、約４：１（水相：油相）（すなわち、約２０％の油を含む水性エマルジョン）でありうる。４：１と異なる比率が用いられうることにも注意すべきである。第１エマルジョンは、次いで液滴直径を縮小するために微小流動化（例えば、平均液滴直径８０ｎｍまで）され、滅菌フィルタ処理され、無菌条件下で最終閉鎖容器に充填される。図５に、１７−ＡＡＧ含有組成物（１００ｋｇバッチ中）を調製するための一般的なプロセスフローを示す。

アンサマイシンの油相への溶解をしやすくするために、穏やかな加温（例えば約４０−６０℃）が用いられる。昇温は、アンサマイシンの融点（これは個々に幾分変化する）に基づいて調節すべきであることに注意されたい。例えば、１７−ＡＡＧの低融点形態（エタノールよりもプロパノールから再結晶して調製された１７−ＡＡＧ）は、室温でも油相に溶解しうる。

１７−ＡＡＧは高温に長時間さらされると急速に分解することに注意されたい。加温した油相に１７−ＡＡＧを溶解するときには注意（温度制御の用意等）が必要である。

本発明の組成に用いるための小数のバッファ系（クエン酸、リン酸及びＬ−ヒスチジン）を評価したが、これらの系では組成物に高い粘性及び／又は低い安定性を生じた。従って、本発明の組成物はバッファなしで用いられる。無バッファの状態では、ｐＨは冷蔵温度で徐々に低下し、約ｐＨ６で安定化する。本発明の組成物の調製において、サイズ縮小に先立ち（サイズ縮小後のＣＮＦ１０１０のｐＨ調製はエマルジョンが分離するため）、エマルジョンのｐＨを約７．５に（ＮａＯＨ等で）調節した。サイズ縮小の間、ｐＨは０．５−１．５単位で低下した。

次いで、生成組成物を乳化、均一化、微小流動化（後述を参照）し、所望の平均液滴直径を得た。次いで、組成物が薬理学的使用に適切であることを確認するために滅菌処理した。

（乳化及び微小流動化）
油相及び水相を含んでなるエマルジョンは、治療活性成分のキャリアとして、又は非経口栄養源として、当業に広く知られている。エマルジョンは、油を含む水の形態としても、水を含む油の形態としても存在しうる。本発明の場合のように、治療成分が特に油相に溶けやすい場合は、油を含む水の様式が好適な実施形態である。単純なエマルジョンは熱力学的に不安定な系であり、これから油相及び水相が分離する（油滴の合一）。エマルジョンに乳化剤を取り入れることにより、合一過程はごくわずかなレベルまで決定的に減少する。

乳化は、機械的混合、ボルテックス、及び超音波処理等の種々の公知の技法により影響されうる。超音波処理は、容器型又はペン先型の機器により使用の影響がありうる。

微小流動化装置は市販入手可能（例えば、ＨＯＳ型微小流動化装置、Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ Ｃｏｒｐ、Ｎｅｗｔｏｎ、米国マサチューセッツ州、詳細は例えば米国特許第４５３３２５４号に記載）であり、圧力補助により狭い開口部（オリフィス）を横切る通路を利用し、エマルジョン中の液滴直径を縮小する。市販入手可能なポリカーボネート膜を通過させる圧力補助押し出しも用いられうる。本発明の組成物は、分散液の粒子径を約５μｍから０．１−０．５μｍ又はこれ以下（平均粒子径）に縮小するために、高圧（１１０−１３１ＭＰａ（１６０００−１９０００ポンド毎平方インチ））で微小流動化されてもよい。

（滅菌）
滅菌は、０．４５ミクロンフィルタ等のより大きな径を通じ、及び次いで０．２ミクロンフィルタ（例えば滅菌０．２ミクロンＳａｒｔｏｒｉｕｓ Ｓａｒｔｏｂｒａｎ Ｐ ｃａｐｓｕｌｅフィルタ（５００ｃｍ^２））等のより小さな径を通じる前濾過を含む濾過により達成されうる。フィルタ材は酢酸セルロースでありうる（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ−Ｓａｒｔｏｂｒａｎ（登録商標）、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ ＡＧ、Ｇｏｅｔｔｉｎｇｅｎ、ドイツ）。

（本発明の組成物の特性分析及び使用）
（化学的物理的安定性の特性分析及び影響評価）
エマルジョンからの抽出後に、リン脂質及び劣化生成物を計測しうる。次いで脂質混合物は２次元薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）システム又は高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）システムで分離しうる。ＴＬＣにおいては、単一成分に対応するスポットを取り出し、リンを分析しうる。例えば、８２５ｎｍに現れる青色の強度を水に対して測定する分光光度計を用いる手順により、試料中の全てのリンを定量的に計測しうる。ＨＰＬＣにおいては、ホスファチジルコリン（ＰＣ）及びホスファチジルグリセロール（ＰＧ）を絶対精度及び相対精度をもって定量的に分離しうる。脂質は２０３−２０５ｎｍの範囲に検出されうる。不飽和脂肪酸（オレイン酸等）は高い吸光度を示す一方、飽和脂肪酸は２００ｎｍのＵＶ分光領域に低い吸光度を示す。

エマルジョンの外観、平均液滴直径、及び粒径分布は、観測及び維持すべき（物理的安定性を決定する）重要なパラメータでありうる。これらのパラメータを評価するための方法は数多い。例えば、動的光散乱及び電子分光の２つは、用いうる技法である。例えば、Ｓｚｏｋａ及びＰａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｅｎｇ．、９巻、４６７−５０８ページ、１９８０年を参照されたい。特に、形態学的特徴分析は、凍結破断電子顕微鏡法の使用に付随しうる。微弱光顕微鏡も用いうる。

エマルジョン液滴直径分布は、例えば、Ｈｏｒｉｂａ Ｌｉｍｉｔｅｄ（Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ、米国ミシガン州）製ＣＡＰＡ−５００、Ｃｏｕｌｔｅｒカウンター（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｉｎｃ．、Ｂｒｅａ、米国カリフォルニア州）、又はＺｅｔａｓｉｚｅｒ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｓｏｕｔｈｂｏｒｏｕｇｈ、米国マサチューセッツ州）等の粒径分布分析装置を用いて計測しうる。

加えて、組成物、とりわけ１７−ＡＡＧ等の活性成分であるアンサマイシンの化学的安定性は、組成物／エマルジョンの抽出後ＨＰＬＣにより評価されうる。劣化生成物から治療学的に活性のアンサマイシンを分離しうる、特定のアッセイ手順が開発されうる。劣化の程度は、治療学的に活性のアンサマイシンに付随するＨＰＬＣピーク中の信号減衰から、及び又は劣化生成物（例えば、１７−ＡＡＧにおける１７−ＡＧ又はＲＳ−Ａ）に付随するＨＰＬＣピーク中の信号増加のいずれかにより、評価されうる。アンサマイシンは、エマルジョン組成物の他の成分に比べて、３４５ｎｍの吸収極大から容易かつ極めて特異的に検出される。

（処方及び投薬様式）
本発明の種々の態様及び実施形態において静脈投与が好適であるが、当業者であればこの手法を変更し、又は直ちに、経口、非経口、エアロゾル、皮下、筋肉内、腹腔内、直腸内、膣内、腫瘍内、又は腫瘍周囲等の他の投与様式に適応させうることを考慮するであろう。

本発明の組成物は、上述のように、例えばボーラス注射又は連続注入等、注射による即効性又はほぼ即効性の非経口投与によく適している。後述の投与方法においては、患者内の濃度を一定に維持するために、連続静脈注入輸送器具を用いてもよい。このような器具の例には、Ｄｅｌｔｅｃ ＣＡＤＤ−ＰＬＵＳ（登録商標）５４００型静脈ポンプがある。注射用組成物は、アンプル又は複数回投与容器等の投与単位形態で、エデト酸等の保存料を添加して提示されてもよい。上述のように、本発明の組成物は、アンプル又は他の遮光又は無酸素のパッケージ内等の、不活性の環境に貯蔵されうる。

薬理学的に許容できる組成物は、活性化合物を薬理学的に用いうる調製への処理を容易にする賦形剤及び補助剤を含んでなる、１以上の生理学的に許容できるキャリアを用いて、通常の方法で処方されうる。適切な処方は、選択される投与経路に依存する。いくつかの賦形剤及び処方中へのその使用は、すでに記載した。ＰＣＴ／ＵＳ９９／３０６３ １、Ｒｅｍｍｉｎｇｔｏｎ、”Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ”、Ｍｅａｄｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、米国フィラデルフィア州（最新版）、並びに、Ｇｏｏｄｍａｎ及びＧｉｌｍａｎ、”Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ”、Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，米国ニューヨーク州（最新版）等に記載された他のものも、当業に公知である。

（投与量範囲）
進行固形腫瘍を有する成人患者における１７−ＡＡＧの薬理学的研究フェーズ１から、３週間ごとに５日間、１日１時間注入投与するときの最大耐用量（ＭＴＤ）は４０ｍｇ／ｍ^２と決定した。

（非特許文献）
Ｗｉｌｓｏｎら、Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．、要約、”Ｐｈａｓｅ Ｉ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃ Ｓｔｕｄｙ ｏｆ １７−（Ａｌｌｙｌａｍｉｎｏ）−１７−Ｄｅｎｚｅｔｈｏｘｙｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ（ＡＡＧ） ｉｎ Ａｄｕｌｔ Ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｓｏｌｉｄ Ｔｕｍｏｒｓ”、２００１年。
この研究において、終末半減期、クリアランス及び定常状態ボリュームの±標準偏差の値は２．５±０．５時間、４１．０±１３．５Ｌ、及び８６．６±３４．６Ｌ／ｍ^２と決定した。血漿Ｃｍａｘレベルは、４０及び５６ｍｇ／ｍ^２において１８６０±６６０ｎＭ及び３１７０±１３１０ｎＭと決定した。これらの値をガイドラインとして用い、本発明の処方のための有用な非経口投与量の範囲は、有効成分の約０．４０ｍｇ／ｍ^２から２２５ｍｇ／ｍ^２の間を含むと予想した。ｍｇ／ｍ^２からｍｇ薬剤／ｋｇ体重への変換には定法が存在する。

（ＨＳＰ９０媒介疾病の治療）
いくつかの実施形態において、好適な治療効果は、乳がん等の細胞増殖性障害の特徴である細胞の成長をある程度に抑制することである。治療効果は、一般的には細胞成長又は細胞質量の大きさよりも、１以上の症候をある程度軽減することであるが、これに限定しない。治療効果は、例えば、１）細胞数の減少；２）細胞サイズの縮小；３）がん転移の場合等、周辺臓器への細胞浸潤の抑制（ある程度の速度低下、好適には停止）；３）腫瘍転移の抑制（ある程度の速度低下、好適には停止）；４）ある程度の細胞成長の抑制；及び／又は、５）これら障害に伴う１以上の症候の軽減、を含みうる。

ある実施形態において、本発明の組成物はＨＳＰ−９０依存／媒介性疾病の治療又は予防に用いられる。ある実施形態において、組成物は医薬製造に用いられる。他の実施形態において、組成物は、ＨＳＰ−９０依存の疾病及び症状の治療及び／又は予防処置のための医薬製造に用いられる。このような疾病及び症状の例には、炎症性疾患、感染症、自己免疫不全、脳梗塞、虚血、心疾患、神経疾患、繊維遺伝子障害、増殖性障害、腫瘍、白血病、慢性リンパ性白血病、後天性免疫不全症候群、新生物、がん、悪性腫瘍、代謝病及び難病が挙げられる。繊維遺伝子障害は、強皮症、多発性筋炎、全身性ループス（全身性エリテマトーデス）、リウマチ様関節炎、肝硬変、ケロイド形成、間質性腎炎及び肺線維症を含んでなるが限定しない。

本願発明の組成物は、治療する症状に対して特定の有効性を選択する他の公知の治療薬剤又は方法と組み合わせて用いてもよい。例えば、本願の組成物は公知の抗がん剤及び細胞毒性薬剤又は他の治療方法（放射線等）との組み合わせに有用でありうる。さらに、本願の方法及び組成物は、細胞増殖をイニシエートする核シグナルに細胞表面成長因子を連結する情報伝達経路部分への他の抑制剤との組み合わせにも有用でありうる。

本発明の方法は、ＶＥＧＦ受容体を標的とするリボザイム及びアンチセンスを含むＶＥＧＦ受容体阻害剤、アンジオスタチン及びエンドスタチンを含んでなるが限定しない、血管形成を抑制することにより腫瘍細胞の成長及び侵襲性を抑制する他の薬剤とも共用しうる。

本発明の方法と組み合わせて用いうる抗新生物薬剤の例には、一般的かつ適切なものとして、アルキル化剤、代謝拮抗物質、エピドフィロトキシン（ｅｐｉｄｏｐｈｙｌｌｏｔｏｘｉｎｓ）、抗悪性腫瘍酵素、トポイソメラーゼ阻害剤、プロカルバジン、ミトキサントロン、白金配位化合物、生体応答調節剤及び成長阻害物質、ホルモン／抗ホルモン治療薬及び造血性成長因子が挙げられる。抗悪性腫瘍薬系の例には、アントラサイクリン、ビンカ薬物、マイトマイシン、ブレオマイシン、細胞毒ヌクレオチド、エポシロン、ディスコデルモライド、プテリジン、ジイネン及びポドフィロトキシンが挙げられる。これらの系に属する特に有用なメンバーには、例えば、カルミノマイシン、ダウノルビシン、アミノプテリン、メトトレキセート、メトプテリン、ジクロロメトトレキセート、マイトマイシンＣ、ポルフィロマイシン、５−フルオロウラシル、６−メルカプトプリン、ゲムシタビン、シトシンアラビノシド、エトポシド、リン酸エトポシド又はテニポシド等のポドフィロトキシン又はポドフィロトキシン誘導体、メルファラン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ロイロシジン、ビンデシン、ロイロシン、パクリタキセル等が挙げられる。他の有用な抗悪性腫瘍薬には、エストラムスチン、カルボプラチン、シクロホスファミド、ブレオマイシン、ゲムシタビン、イフォサミド、メルファラン、ヘキサメチルメラミン、チオテパ、シタラビン、イダトレキサート、トリメトレキサート、ダカルバジン、Ｌ−アスパラギナーゼ、カンプトセシン、ＣＰＴ−１１、トポテカン、ａｒａ−Ｃ、イカルタミド、フルタミド、ロイプロリド、ピリドベンゾインドール誘導体、インターフェロン及びインターロイキンが挙げられる。

（本発明の組成物の利点）
オレイン酸を含まないアンサマイシン含有組成物（例えば、出願中の米国出願明細第２００６／００１４７３０号及び第２００６／０１４８７７６号に記載のもの）は、物品の物理的安定性を保つために凍結保存（約−２０℃）又は凍結乾燥しなければならない。凍結状態であっても、オレイン酸を含まないアンサマイシン含有組成物の安定性はロットごとに変化する場合があった。安定性のデータに基づくならば、２年間安定なロット（Ｃ０４Ｈ０４４）もあれば、わずか６ヶ月安定なロットも（ロットＣ０５Ｅ０１１及びＣ０５Ｆ０２２等）あった。図１を参照されたい。図１の６個の組成物は、全て組成は同一（下記の表１を参照）であり、オレイン酸を含まない。これらの組成物は、実施例５の記載と同様の方法で調製した。
表１ 図１に示す組成物の組成

他方、ＣＮＦ１０１０含有オレイン酸の液滴直径安定性は、−２０℃で保存すると安定ではなく（図２参照）、オレイン酸を含まない組成物に見られるロットごとの変化を伴った。オレイン酸含有組成物の３ロットは、全て下記の表２に記載の組成物を含み、実施例５に記載の方法を用いて調製した。

オレイン酸のない組成物の有効期間は冷蔵保存では許容できず、室温では限られる（１週間未満）ため、１ヶ月以上の安定期間を維持するためには凍結保存（又は凍結乾燥）が必要である。これと比べて、オレイン酸を有する組成物は冷蔵温度及び室温できわめて長期間（冷蔵状態での有効期間は１−２年、室温での安定性維持は１ヶ月以上）保存可能である。図３に、室温におけるオレイン酸含有及び非含有組成物の液滴直径安定性を示す。さらに、オレイン酸含有組成物はロット間の変化がより小さかった。図４及び図５に、冷蔵温度におけるオレイン酸含有及び非含有組成物の液滴直径安定性におけるオレイン酸の効果を示す。

アンサマイシンは、油／水エマルジョン中では化学的に安定でない場合があり、１７−ＡＡＧは温度依存して未確認分解生成物ＲＳ−Ａ、及び同様に活性代謝物である１７−アミノゲルダナマイイシン（１７−ＡＧ）に分解する。本発明の組成物において、１７−ＡＧは１年に約１．７％の速度で生成し、ＲＳ−Ａは１年に約０．６％生成する。これらのＲＳ−Ａ及び１７−ＡＧの生成速度から、現状の仕様（ＲＳ−Ａ及び１７−ＡＧのそれぞれが２．５％及び７．５％以下）に従って、本発明の組成物は２年以内の冷蔵保存が許容されると予想する。

以下の実施例は例示のためのみであり、本発明を限定することを意図しない。

（実施例１：１７−ＡＡＧ代替物１の調製）
乾燥２Ｌフラスコに１．４５Ｌ乾燥ＴＨＦ中４５．０ｇ（８０．４ｍｍｏｌ）ゲルダナマイシンを入れ、５０ｍＬ乾燥ＴＨＦ中３６．０ｍＬ（４７０ｍｍｏｌ）アリルアミンを３０分間にわたって滴下して加えた。反応混合物を室温、窒素下で４時間撹拌し、ＴＬＣ分析で反応終了を確認した［（ＧＤＭ：鮮黄色：Ｒｆ＝０．４０；（５％ＭｅＯＨ−９５％ＣＨＣｌ３）；１７−ＡＡＧ：紫色：Ｒｆ＝０．４２（５％ＭｅＯＨ−９５％ＣＨＣｌ３）］。溶媒をロータリーエバポレータで除去し、粗成物を２５℃のＨ_２Ｏ：ＥｔＯＨ（９０：１０）４２０ｍＬでスラリー化し、ろ過し、４５℃で８時間乾燥し、４０．９ｇ（６６．４ｍｍｏｌ）の１７紫色結晶を得た（収率８２．６％、２５４ｎｍモニターのＨＰＬＣにより９８％超の純度）。示差走査熱量測定（ＤＳＣ）測定によるＭＰ２０６〜２１２℃。^１Ｈ−ＮＭＲ及びＨＰＬＣは、所望の生成物と一致した。

（実施例２：低融点形態１７−ＡＡＧの調製）
代替の精製方法として、実施例１の粗製１７−ＡＡＧを８０℃で２−プロピルアルコール（イソプロパノール）８００ｍＬに溶解後、室温まで冷却した。ろ過後、４５℃で８時間乾燥し、１７−ＡＡＧの紫色結晶４４．６ｇ（７２．３６ｍｍｏｌ）を得た（収率９０％、２５４ｎｍモニターのＨＰＬＣにより９９％超の純度）。示差走査熱量測定（ＤＳＣ）によるＭＰ１４７〜１７５℃。^１Ｈ−ＮＭＲ及びＨＰＬＣは、所望の生成物と一致した。

（実施例３：低融点形態１７−ＡＡＧ代替物１の調製）
代替の精製方法として、実施例２の１７−ＡＡＧ生成物を２５℃のＨ_２Ｏ：ＥｔＯＨ（９０：１０）４００ｍＬでスラリー化し、ろ過し、４５℃で８時間乾燥し、１７−ＡＡＧの紫色結晶４２．４ｇ（６８．６ｍｍｏｌ）を得た（収率９５％、２５４ｎｍモニターのＨＰＬＣにより９９％超の純度）。ＭＰ１４７〜１７５℃、^１Ｈ−ＮＭＲ及びＨＰＬＣは、所望の生成物と一致した。

（実施例４：１７−ＡＡＧ以外の同様な処方のアンサマイシンについての他のアンサマイシンの調製）
基本的に任意のアンサマイシンを１７−ＡＡＧと置き換え、上記の実施例に記載したように処方しうる。種々のこうしたアンサマイシンの調製は、ＰＣＴ／ＵＳ０３／０４２８３に詳述している。これらの２つの調製を以下に記載する。

（化合物５６３：１７−（ベンゾイル）−アミノゲルダナマイシン）
ＥｔＯＡｃ中の１７−アミノゲルダナマイシン（１ｍｍｏｌ）の溶液を室温にてＮａ_２ＳＯ_４（０．１Ｍ、３００ｍｌ）で処理した。２時間後、水層をＥｔＯＡｃで２回抽出し、混合有機層をＮａ_２ＳＯ_４の上で乾燥し、減圧濃縮し、黄色固体として１８，２１−ジヒドロ−１７−アミノゲルダナマイシンを得た。この後者を無水ＴＨＦに溶かし、カニューレを通して塩化ベンゾイル（１．１ｍｍｏｌ）とＭＳ４Ａ．ＡＮＧ．（１．２ｇ）の混合物に移した。２時間後、ＥｔＮ（ｉ−Ｐｒ）_２（２．５ｍｍｏｌ）を反応混合物にさらに添加した。終夜撹拌の後、反応混合物をろ過し、減圧濃縮した。次いで、水を残留物に添加し、これをＥｔＯＡｃで３回抽出し、混合有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、減圧濃縮して粗成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィーで精製し、１７−（ベンゾイル）−アミノゲルダナマイシンを得た。ＣＨ_２Ｃｌ_２：ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ、８０：１５：５においてＲｆ＝５０。Ｍｐ＝２１８〜２２０℃、^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣ１_３）０．９４（ｔ，６Ｈ），１．７０（ブロードｓ，２Ｈ），１．７９（ブロードｓ，４Ｈ），２．０３（ｓ，３Ｈ），２．５６（ｄｄ，１Ｈ），２．６４（ｄｄ，１Ｈ），２．７６−２．７９（ｍ，１Ｈ），３．３３（ｂｒｓ，７Ｈ），３．４４−３．４６（ｍ，１Ｈ），４．３２５（ｄ，１Ｈ），５．１６（ｓ，１Ｈ），５．７７（ｄ，１Ｈ），５．９１（ｔ，１Ｈ），６．５７（ｔ，１Ｈ），６．９４（ｄ，１Ｈ），７．４８（ｓ，１Ｈ），７．５２（ｔ，２Ｈ），７．６２（ｔ，１Ｈ），７．９１（ｄ，２Ｈ），８．４７（ｓ，１Ｈ），８．７７（ｓ，１Ｈ）

（化合物２３７：二量体）
３，３’−ジアミノ−ジプロピルアミン（１．３２ｇ、９．１ｍｍｏｌ）を、火炎乾燥フラスコ中、ゲルダナマイシン（１０ｇ、１７．８３ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（２００ｍｌ）溶液にＮ_２下において滴下して加え、室温で撹拌した。１２時間後、反応混合物を水で希釈した。生成した沈殿をろ過し、粗成物を得た。粗成物をシリカクロマトグラフィーによってクロマトグラフィーに供し（５％のＣＨ_３ＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２）、紫色固体として所望の二量体を利用可能にした。フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）の後、純粋な紫色生成物が得られた。収率９３％、融点１６５℃、^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣ１_３）０．９７（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，６Ｈ，２ＣＨ３），１．０（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，６Ｈ，２ＣＨ３），１．７２（ｍ，４Ｈ，２ＣＨ２），１．７８（ｍ，４Ｈ，２ＣＨ２），１．８０（ｓ，６Ｈ，２ＣＨ３），１．８５（ｍ，２Ｈ，２ＣＨ），２．０（ｓ，６Ｈ，２ＣＨ３），２．４（ｄｄ，Ｊ＝１１Ｈｚ，２Ｈ，２ＣＨ），２．６７（ｄ，Ｊ＝１５ Ｈｚ，２Ｈ，２ＣＨ），２．６３（ｔ，Ｊ＝１０Ｈｚ，２Ｈ，２ＣＨ），２．７８（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，４Ｈ，２ＣＨ２），３．２６（ｓ，６Ｈ，２ＯＣＨ３），３．３８（ｓ，６Ｈ，２０ＣＨ３），３．４０（ｍ，２Ｈ，２ＣＨ），３．６０（ｍ，４Ｈ，２ＣＨ２），３．７５（ｍ，２Ｈ，２ＣＨ），４．６０（ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ，２Ｈ，２ＣＨ），４．６５（Ｂｓ，２Ｈ，２０Ｈ），４．８０（Ｂｓ，４Ｈ，２ＮＨ２），５．１９（ｓ，２Ｈ，２ＣＨ），５．８３（ｔ，Ｊ＝１５Ｈｚ，２Ｈ，２ＣＨ．ｄｂｄ．），５．８９（ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ，２Ｈ，２ＣＨ．ｄｂｄ．），６．５８（ｔ，Ｊ＝１５Ｈｚ，２Ｈ_，２ＣＨ．ｄｂｄ．），６．９４（ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ，２Ｈ，２ＣＨ．ｄｂｄ．），７．１７（ｍ，２Ｈ，２ＮＨ），７．２４（ｓ，２Ｈ，２ＣＨ．ｄｂｄ．），９．２０（ｓ，２Ｈ，２ＮＨ）；ＭＳ（ｍ／ｚ）１１８９（Ｍ＋Ｈ）。

対応するＨＣｌ塩は以下の方法によって調製した。ＥｔＯＨ中のＨＣｌ溶液（５ｍｌ、０．１２３Ｎ）を室温でＴＨＦ（１５ｍｌ）とＥｔＯＨ（５０ｍｌ）中の化合物＃２３７（上記のように調製した１グラム）の溶液に添加した。反応混合物を１０分間撹拌した。沈殿した塩をろ過し、多量のＥｔＯＨで洗浄し、真空中で乾燥した。

（実施例５：オレイン酸を用いた１７−ＡＡＧ組成物の調製）
この方法は、実施例１〜４で調製した任意のアンサマイシンについて用いうる。下記の記載は、１００ｋｇバッチの１７−ＡＡＧ組成物の典型的な調製を示す。

（油相（バッチ要求の２％過剰で調製））
Ｍｉｇｌｙｏｌ８１２Ｎ（９８９４ｇ）、大豆油（３３６６ｋｇ）、及びオレイン酸（２０４ｇ）を２５Ｌ３１６Ｌのステンレス鋼タンク中で、シルバーソン高せん断ミキサーを用い、約５分間混合した。Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｎ９０Ｇ（ＰＬ９０Ｇ；６７３２）を、混合中のオイルにゆっくり添加した。ＰＬ９０Ｇが溶け、澄んだ粘性のある黄色溶液が生成するまで混合を続けた。１７−ＡＡＧは純度に対して重量調節し、製造中の分解を補うために３％過剰（２１７．３ｇ）を含めた。油相に１７−ＡＡＧを添加し、１７−ＡＡＧが溶解するまで（約１時間）、シルバーソン高せん断ミキサーを用いて混合した。次いで、１．０／０．５μｍの混合セルロースエステルのフィルタ膜を含む５インチのカプセルフィルタを通して、１７−ＡＡＧ油相を４０℃でろ過し、乳化プロセスの妨げになる粒子を除去した。１７−ＡＡＧ油相の組成は、１．０６％の１７−ＡＡＧ、１．００％のオレイン酸、１６．４９％の大豆油、３２．９８％のＰＬ９０Ｇ、及び４８．４７％のＭｉｇｌｙｏｌ８１２Ｎである。

（水相）
水相は油相と別に調製した。注射用蒸留水（７１．５ｋｇ）を１５０Ｌのタンクに加えた。タンクに搭載したオーバーヘッドミキサーを用い、ボルテックス撹拌に対してショ糖（７５００ｇ）、続いてＥＤＴＡ（５．０ｇ）を加えた。全てのショ糖とＥＤＴＡが溶解するまで、水相を混合した。水相組成（重量％）は、ショ糖 ９．３８％、ＥＤＴＡ ０．００６３％、及び水９０．６２％であった。

（一次エマルジョン）
水相タンクをインラインの高せん断ミキサーに接続し、混合を開始した。１７−ＡＡＧ含有の油相を、混合中の水相にペリスタポンプで移し、一次エマルジョンを作成した。添加には約３０分間を要し、１７−ＡＡＧ含有の油相を移した後、混合をさらに１０分間にわたって継続した。

インラインミキサーで混合しながら、０．１Ｎ ＮａＯＨを用いて一次エマルジョンのｐＨを約５．０から約７．５±０．３に調節した。注射用蒸留水を適量添加し、１００ｋｇとした。

（微小流動化（サイズ縮小））
一次エマルジョンを１５℃未満に冷やした後、別の１５０Ｌタンクへ、単一の別経路を用いて微小流動化した。微小流動化は、エマルジョンの平均液滴直径が８０ｎｍ以下になるまで継続した。微小流動化の際、生成物の温度を１５℃未満に維持した。次いで、微小流動化したエマルジョンを、混合セルロースエステルのフィルタ膜を含む１．０／０．２μｍのカプセルフィルタを通してろ過した。

（ろ過と充填）
次いで、直列に配置したカプセルの前置フィルタ（１．０／０．２μｍのＭＣＥフィルタ膜）と２つの無菌化グレードのデュラポアカプセルフィルタ（ポリフッ化ビニリデンのフィルタ膜）を通して、エマルジョンを無菌充填領域の中に無菌ろ過し、生成物を２０ｍＬのタイプ１透明ガラスビンの中に充填し（２０ｍＬ）、次いでブロモブチルゴムのストッパーとアルミニウムのフリップオフのシールでシールした。

表２ 実施例５の組成物

本発明の組成物は、関連出願に記載の方法を用いて調製することも可能であった。以下の実施例は、ＵＳ２００６／００１４７３０とＵＳ２００６／０１４８７７６の実施例４が、本発明の組成物を生成するためにどのようにして修正可能であったかを例証する。

（実施例６：オレイン酸を有する１７−ＡＡＧ組成物の別の調製法）
１７−ＡＡＧ（又は上記実施例１〜４に記載の任意のアンサマイシン）を５Ｌのポリプロピレンビーカーに秤量した。リン脂質に対する１７−ＡＡＧ重量の約５０倍量のエタノールを添加し、溶解が完了するまで混合した。次いで、１７−ＡＡＧをエタノール／リン脂質の溶液に添加し、溶解が完了するまで混合した。次いで、Ｍｉｇｌｙｏｌ８１２Ｎ、大豆油、及びオレイン酸を、溶液に添加した。固体の溶解を助長するため、超音波槽及び／又は約４５℃までの加熱を使用してもよい。所望の溶解を確実にするため、光学顕微鏡を使用して溶液をチェックしてもよい。

激しい撹拌と組み合わせて、液体表面の上に乾燥空気又は窒素ガスの流れを強制的に通し、エタノール含有率が、例えば、その最初の存在の５０重量％未満（例えば、５〜１０％未満）に低下するまで、エタノールを蒸発させた。１７−ＡＡＧの完全な溶解を確認するには、偏光フィルタを備えた光学顕微鏡下で溶液をチェックしうる（結晶、沈殿とも無いこと）。

ＥＤＴＡ（２ナトリウム、２水和物、ＵＳＰ）、ショ糖、及び注射用蒸留水（共に水相）を５Ｌのポリプロピレンビーカー中に秤量し、固体が溶解するまで撹拌した。次いで、水相を油相に添加し、エマルジョンヘッドを備えた高速の乳化機／ホモジナイザーを使用し、表面に付着したオイルが「はぎ取られる」まで、５０００ｒｐｍで徹底的な混合を行った。次いで、２〜５分間せん断速度を１００００ｒｐｍまで高め、均一な一次エマルジョンを生成させた。平均液滴直径を測定するにはレーザー光散乱（ＬＬＳ）を使用してもよく、例えば、光学顕微鏡下で溶液をさらにチェックし、結晶と固体の相対的な存在又は不在を判断してもよい。

エマルジョンのｐＨは、０．２Ｎ ＮａＯＨを用いて６．０±０．２に調節した。次いで、平均液滴直径が１９０ｎｍ以下になるまで、７５ミクロンのエマルジョン相互作用チャンバー（Ｆ２０Ｙ）を備え、約７５８ｋＰａ（１１０ｐｓｉ）の静水圧で作動する（４１４〜６５５ｋＰａ（６０〜９５ｐｓｉ）の動作圧）ＨＯＳ型ミクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ社、ニュートン、マサチューセッツ州、米国）に、一次エマルジョンを６〜８回通過させた。進捗を評価するため、個々の通過の後にＬＬＳを使用してもよい。光学顕微鏡下で偏光を使用し、結晶の存在について溶液をさらにチェックしてもよい。

次いで、層流フード中、エマルジョンを０．４５ミクロンのゲルマンミニカプセルフィルタ（Ｐａｌｌ社、イーストヒルズ、ニューヨーク州、米国）を通過させた後、無菌０．２ミクロンＳａｒｔｏｒｉｕｓ Ｓａｒｔｏｂｒａｎ Ｐカプセルフィルタ（５００ｃｍ^２）（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ ＡＧ、Ｇｏｅｔｔｉｎｇｅｎ、ドイツ）を通過させた。４１４ｋＰａ（６０ｐｓｉ）以下の圧力で、スムースで連続的な流れを維持した。次いで、ろ液を収集し、少量をレーザー光散乱（ＬＬＳ）及び／又は高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）でのテスト用に取り分けた。

（生物学的実施例）
（実施例７：処方Ａ（オレイン酸なし）と処方Ｂ（オレイン酸あり）の静脈内投与後のラットにおける比較の薬物動態（１７−ＡＡＧ））
（概要）
処方Ａ及び処方Ｂの静脈内（ｉ．ｖ．）投与の後、１７−（アリルアミノ）−１７−デメトキシゲルダナマイシン（１７−ＡＡＧ）とその活性代謝生成物（１７−ＡＧ）の薬物動態（ＰＫ）をラットにおいて評価した。処方Ａは、１７−ＡＡＧの水中油型（培地と長鎖トリグリセリドと大豆レシチン）のエマルジョン処方である。処方Ｂは、オレイン酸の付加的成分を０．２重量％の最終濃度で含む以外は、処方Ａと同じ組成を有する。

頸静脈カテーテル処置のメスのスプラーグドーリーラット７匹に、１０ｍｇ／ｋｇの投与量で尾静脈を通し、処方Ａ（ｎ＝３）又は処方Ｂ（ｎ＝４）の単一の２分間の静脈内注入を受けさせた。各動物は、投薬前及び投薬後の１０回の間隔で、カテーテルから採血した。標準化ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法を用い、１７−ＡＡＧと１７−ＡＧの血清濃度を測定した。個々の動物の時間に対する１７−ＡＡＧと１７−ＡＧの濃度の曲線を、非区画法を用いて解析した。

処方Ａと処方Ｂの投与後の１７−ＡＡＧと１７−ＡＧについての平均ＰＫパラメーターは、有意には相違しなかった。

代謝産物の１７−ＡＧは、１７−ＡＡＧのＣＹＰ３Ａ４仲介の酸化生成物であり、このため、血漿中への出現は、エマルジョン液滴からの１７−ＡＡＧの放出とそれに続く遊離１７−ＡＡＧの肝細胞への拡散に依存する。２つの処方の投与後、同一の１７−ＡＧのＴｍａｘ及び類似の１７−ＡＧのＡＵＣ及び時間に対する濃度プロファイルが観測されたため、１７−ＡＡＧ放出の速度と範囲及び以降の肝臓分布が処方中のオレイン酸の包含によっては変化しないことが示唆された。

要約すれば、下記に提示するデータは、処方Ｂ（本発明の１つの実施形態による）におけるオレイン酸の存在が、ラットに静脈内投与した後の処方Ａで観察されるものから、１７−ＡＡＧとその活性代謝産物１７−ＡＧのＰＫを変化させないことを示唆した。
（略語）
ｉ．ｖ． 静脈内
Ｃ_ｍａｘ 最大血清濃度
Ｔ_ｍａｘ Ｃ_ｍａｘの時間
Ｃｌ_ｔｏｔ 全クリアランス
処方Ａ １７−ＡＡＧの培地と長鎖トリグリセリドと大豆レシチン）の水中処方
処方Ｂ １７−ＡＡＧの培地と長鎖トリグリセリド、大豆レシチンとオレイン酸０．２重量％の水中処方
ＰＫ 薬物動態
１７−ＡＡＧ １７−（アリルアミノ）−１７−デメトキシゲルダナマイシン
１７−ＡＧ １７−（アミノ）−１７−デメトキシゲルダナマイシン
ＡＵＣ_{（０−ｔｌａｓｔ）} ゼロから最終測定可能濃度の時間までの血漿濃度の時間曲線下の領域
Ｖ_ｄｓｓ 分布の定常状態の体積

処方Ａは、１７−ＡＡＧの水中油型（培地と長鎖トリグリセリドと大豆レシチン）のエマルジョン処方である。処方Ｂは、オレイン酸の付加的成分を０．２重量％の最終濃度で含む以外は、処方Ａと同じ組成を有する。本研究の目的は、処方Ａと処方Ｂをラットに静脈内投与した後の１７−ＡＡＧとその活性代謝産物１７−ＡＧのＰＫを比較することであった。

（材料と方法）
処方Ａは、製造後に−２０℃で冷凍し、インビボ研究の前夜に、４℃にて終夜で解凍し、使用の約２時間前に室温に移動した。処方Ｂは、製造後に４℃にて保管し、使用の約２時間前に室温に移動した。１７−ＡＡＧの濃度とエマルジョンの液滴直径は、下記のように、製造時に各被験物質について測定した。

（１７−ＡＡＧ濃度と液滴直径についての用量サンプルの分析）
１７−ＡＡＧ濃度を測定するため、Ａｇｉｌｅｎｔ１１００シリーズのバイナリポンプ、Ａｇｉｌｅｎｔ１１００シリーズのオートサンプラー、Ａｇｉｌｅｎｔ１１００シリーズのＭＷＶＵＶ検出器、及びＺｏｒｂａｘ３００ＳＢ−Ｃ１８，３．５μｍ粒径カラム（４．６ｍｍ×１５０ｍｍ）からなるＨＰＬＣシステムで、標準化された方法論を実施した。吸光度は３３２ｎｍでモニターした。注入体積は５０μＬであり、移動相の流速は１．０ｍＬ／分であった。４８０ｍＬ２０ｍＭのトリス−ＨＬＣ（ｐＨ７．０）と５２０ｍＬのアセトニトリルを組み合わせることによって、均一濃度の移動相を調製した。各被験物質のサンプルを、ＨＰＬＣ分析の前に、メタノールで２０倍に希釈した。

平均のエマルジョン液滴直径は、Ｍｉｃｒｏｆｌｅｘ ｖｅｒ．１０．１．１ソフトウエア（Ｍｉｃｒｏｔｒａｃ）を備えたＮａｎｏｔｒａｃ１５０（Ｍｉｃｒｏｔｒａｃ）を使用し、レーザー光散乱分光法（ＬＬＳ）によって測定した。バッチサンプルは、分析前に、脱イオン水で１００倍に希釈した。

（試験システム）
使用した頸静脈カテーテル処置のメスのスプラーグドーリーラットは、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．（ポーテージ、ミシガン州）から入手した。投薬後の体重は（０２／２５／０５）、２６８．５グラムから２８３．６グラムの範囲であり、処方Ａと処方Ｂを投薬したラットは、それぞれ平均で２７０．５グラムと２７４．９グラムであった。

（実験的設計）
７匹の頸静脈カテーテル処置のメスのスプラーグドーリーラットが、１０ｍｇ／ｋｇの投与量（６０ｍｇ／ｍ^２）で尾静脈を通し、処方Ａ（ｎ＝３）又は処方Ｂ（ｎ＝４）の単一の２分間の静脈内注入を受けた。投薬の前に、動物を約５分間にわたって加温パッド（約４０℃）の上に置き、血管拡張を促進した。次いで、加温パッド（４０℃）の上でラットを手で拘束し（Ｒｏｄｅｎｔ Ｒｅｓｔｒａｉｎｔ Ｃｏｎｅ、Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、Ｔｅｒｕｍｏ Ｓｕｒｆｌｏ（登録商標）翼付き注入セット（２７Ｇ×１／２”）を使用し、尾静脈中に被験物質を制御された２分間注入として投与した（Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ２２型注入ポンプ）。投与した用量体積（処方Ａと処方Ｂをそれぞれ４．５５ｍＬ／ｋｇと５．２６ｍＬ／ｋｇ）は、投薬日に測定した体重と製造時に測定した処方の１７−ＡＡＧ濃度に基づいた。血液サンプル（約２５０μＬ）は、投薬前とそれから投薬より１、５、１０、１５、及び１５分間、並びに、１、２、３、４、及び６時間の後に、頸動脈のカテーテルから収集した。カテーテルは、各血液サンプルの直後に生理食塩水の注入（約２５０μＬ）で洗い流した。血液は、ポリプロピレンの微小遠心管に移し、室温で約１０分間にわたって凝固させ、その後、遠心分離まで氷上に保持した。血液を１００００Ｇで１０分間にわたって遠心分離し、血清を透明な微小遠心管に移し、分析まで−２０℃で保管した。

（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳによる１７−ＡＡＧと１７−ＡＧの濃度測定）
標準化されたＬＣ／ＭＳ／ＭＳアッセイを用い、１７−ＡＡＧと１７−ＡＧの濃度を測定した。このアッセイは、ＬＣＱ Ｄｅｃａイオントラップ質量分析計と一体になったＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｎｎｉｇａｎ ＬＣ Ｓｕｒｖｅｙｏｒ高性能液体クロマトグラム（ＨＰＬＣ）で行った（グラジエントポンプ、溶媒脱気器、ＰＤＡ検出器、カラムヒーター、及び自動サンプラーからなる）。分析物は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ ＲＰ−ＭＡＸ Ｃ１２，４μｍ粒径カラム（７５ｍｍ×２．０ｍｍ）でクロマトグラフィーに供した。傾斜法を、水からなる移動相Ａ（１．０％の酢酸）とともに使用した。移動相Ｂは、アセトニトリルからなった（１．０％の酢酸）。５０％Ａ／５０％Ｂでの平衡の後、移動相の混合物を５分間にわたって２％Ａ／９８％Ｂに換え、１５分間の合計実行時間とした。流速は０．４ｍＬ／分で、カラムは３０℃に維持した。両分析物の吸光度を３３５ｎｍでモニターした。

１７−ＡＡＧと１７−ＡＧの原液をメタノールで連続的に希釈し、０．３〜３０μｇ／ｍＬの棘波的な標準溶液を得た。１７−ＡＡＧと１７−ＡＧの較正基準を、メタノールに溶かした１７−ＡＡＧと１７−ＡＧの溶液をラット血清の中にスパイクすることによって調製した（ＢｉｏＣｈｅｍｅｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｓ）。

アセトニトリル中のタンパクの沈殿とそれに続く遠心分離及び有機層の蒸発により、分析用の較正基準とサンプルを調製した。陰イオンモードにおいてエレクトロスプレーイオン化を用い、質量分析（ＨＰＬＣ／ＭＳ^２−ＳＲＭ）と一体になった高性能液体クロマトグラフィーにより、移動相もどりの抽出物を分析した。二通りの１７−ＡＡＧについての６点の標準曲線（５０〜５０００ｎｇ／ｍＬ）と１７−ＡＧについての５点の標準曲線（５０〜３０００ｎｇ／ｍＬ）、及び三通りの４つの品質管理基準を、定量のために使用した。

この方法の定量下限は、両方の分析物について５０ｎｇ／ｍＬであった。個々の１７−ＡＡＧと１７−ＡＧの濃度データは、アペンディクスＡにある。代表的な標準曲線とクロマトグラムがアペンディクスＢに示されている。

（薬物動態解析）
個々の動物の時間に対する１７−ＡＡＧの濃度データは、コンパートメント法を用いて解析した（ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ、バージョン４．１）。最終半減期（ｔ_１／２）、０から無限までの時間に対する濃度の曲線下の領域（ＡＵＣ_０−∞）、全クリアランス（Ｃｌｔｏｔ）、及び分布の定常状態の体積（Ｖ_ｄｓｓ）を求めた。１７−ＡＧについて、時間に対する濃度のデータのプロフィルは、非区画法を用いて解析し（ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ、バージョン４．１）、ｔ_１／２と、０から最後の測定可能濃度までの曲線の下の領域（ＡＵＣｔｌａｓｔ）を推定した。報告した１７−ＡＡＧと１７−ＡＧのＣｍａｘとＴｍａｘの値は観測値である。処方Ａと処方ＢについてのＰＫパラメータ値は、等分散を仮定するスチューデントｔ検定を用いて比較した（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌ２０００、バージョン９．０．６９２６ＳＰ−３）。

（結果）
本研究に使用した処方Ａと処方Ｂの１７−ＡＡＧ濃度は、それぞれ２．２５ｍｇ／ｍＬと１．９０ｍｇ／ｍＬであった。平均のエマルジョン液滴直径は、処方Ａと処方Ｂについて、それぞれ１０５ｎｍと６０ｎｍであった。

表四に、個々のラットの１７−ＡＡＧ及び１７−ＡＧの血清濃度のデータを示す。

表３：１７−ＡＡＧの薬物動態パラメータの概要

表４：１７−ＡＧの薬物動態パラメータの概要

^ａ注入開始から測定
ＮＡ＝該当なし

１７−ＡＡＧ（表３）と１７−ＡＧ（表４）の平均ＰＫパラメータの推定値は、処方Ａと処方Ｂの投与の後、有意には相違しなかった。表５〜７に、個々のラットのＰＫパラメータを示す。両処方の投与後、活性代謝産物１７−ＡＧのＴ_ｍａｘは注入の１分後に生じ、母体のＡＵＣに対する代謝産物の比は、有意には相違しなかった。

代謝産物１７−ＡＧは、１７−ＡＡＧのＣＹＰ３Ａ４仲介酸化の生成物であり（Ｃｏｎｆｏｒｍａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓテクニカルレポート００−１０１０−ＰＣ／ＰＫ−ＴＲ−００６−Ａ）、このため、血漿中への出現は、エマルジョン滴からの１７−ＡＡＧの放出とそれに続く遊離１７−ＡＡＧの肝細胞中の拡散に依存する。同一の１７−ＡＧのＴ_ｍａｘと類似の１７−ＡＧのＡＵＣの観察、及び２つの処方の投与後の時間に対する濃度のプロフィルは、１７−ＡＡＧ放出と次の肝臓分配の速度と範囲が、処方にオレイン酸を含めることによっては、変化しないことを示唆する。

要するに、これらのデータは、処方Ｂ中のオレイン酸の存在が、ラットに対する静脈内投与後に処方Ａについて観察されるものから、１７−ＡＡＧとその活性代謝産物１７−ＡＧのＰＫを変化させないことを示す。

表５ １７−ＡＡＧ血清濃度のデータ（血清中ｎｇ／ｍＬ）

ＮＤ＝検出せず

表６ １７−ＡＧ血清濃度のデータ（血清中ｎｇ／ｍＬ）

ＮＤ＝検出せず

表７

本願で引用した文献はいずれも、本発明が属する分野における技術レベルを示すものであり、これらの全体は参照により本願明細書に取り入れられる。しかしながら、いずれも先行技術であると認められるものではない。他の実施形態は添付の特許請求の範囲内にある。

凍結状態（−２０℃）貯蔵のオレイン酸無含有の６組成物（Ｃ０４Ｈ０４４、Ｃ０５Ｅ０１１、Ｃ０５Ｆ０２２、Ｃ０５Ｌ０４３、Ｃ０５Ｌ０４７及びＣ０６Ａ００７）の物理的安定性（平均液滴直径）を示す図である。 凍結状態（−２０℃）貯蔵のオレイン酸０．２％含有の３組成物（Ｎ１９１−０２１、Ｎ１９１−０５８及びＮ１９１−１５０）の物理的安定性（平均液滴直径）を示す図である。 室温下オレイン酸含有及び無含有の組成物の物理的安定性（平均液滴直径）を示す図である。Ｎ１９１−０２１、Ｎ１９１−０５８及びＮ１９１−１５０の３つはオレイン酸含有組成物ロットであり、一方Ｅ０５ Ａ００２はオレイン酸を含まない。 冷蔵温度（５℃）におけるオレイン酸無含有の６組成物（Ｃ０４Ｈ０４４、Ｃ０５Ｅ０１１、Ｃ０５Ｆ０２２、Ｃ０５Ｌ０４３、Ｃ０５Ｌ０４７及びＣ０６Ａ００７）の物理的安定性（平均液滴直径）を示す図である。 冷蔵温度（５℃）におけるオレイン酸０．２％含有の３組成物（Ｎ１９１−０２１、Ｎ１９１−０５８及びＮ１９１−１５０）の物理的安定性（平均液滴直径）を示す図である。

Claims (50)

1. 水相及び油相を含んでなる医薬組成物であって、前記油相はアンサマイシン及び２重量％未満のオレイン酸を含み、アンサマイシンはゲルダナマイシン、１７−アミノゲルダナマイシン、１７−アリアラミノ−１７−デメトキシ−ゲルダナマイシン、下記構造を有する化合物５６３又は化合物２３７、又はこれらの任意のアンサマイシンの塩である、医薬組成物：
   

   

   化合物５６３ 化合物２３７。
2. 前記アンサマイシンは１７−アリアラミノ−１７−デメトキシ−ゲルダナマイシンである、請求項１に記載の医薬組成物。
3. 前記アンサマイシンの最終濃度は約０．５から４ｍｇ／ｍＬの範囲である、請求項１に記載の医薬組成物。
4. 前記アンサマイシンの最終濃度は約１から３ｍｇ／ｍＬの範囲である、請求項１に記載の医薬組成物。
5. 前記アンサマイシンの最終濃度は約２ｍｇ／ｍＬである、請求項１に記載の医薬組成物。
6. 前記組成物中の前記オレイン酸の量は前記医薬組成物の約１重量％以下である、請求項１に記載の医薬組成物。
7. 前記組成物中の前記オレイン酸の量は前記医薬組成物の約０．５から０．０５重量％の範囲である、請求項１に記載の医薬組成物。
8. 前記組成物中の前記オレイン酸の量は前記医薬組成物の約０．２重量％である、請求項１に記載の医薬組成物。
9. さらに中鎖トリグリセリドを含んでなる、請求項１に記載の医薬組成物。
10. 前記中鎖トリグリセリドの量は前記医薬組成物の約１５重量％以下である、請求項９に記載の医薬組成物。
11. 前記中鎖トリグリセリドの量は前記医薬組成物の約７から１３重量％の範囲である、請求項９に記載の医薬組成物。
12. さらに長鎖トリグリセリドを含んでなる、請求項９に記載の医薬組成物。
13. 前記長鎖トリグリセリドの量は前記医薬組成物の約７重量％以下である、請求項１２に記載の医薬組成物。
14. 前記長鎖トリグリセリドの量は前記医薬組成物の約２から５重量％の範囲である、請求項１２に記載の医薬組成物。
15. さらに乳化剤を含んでなる、請求項１に記載の医薬組成物。
16. 前記乳化剤はレシチンである、請求項１５に記載の医薬組成物。
17. 前記乳化剤は大豆レシチンである、請求項１６に記載の医薬組成物。
18. 前記レシチンの量は前記医薬組成物の約３から１０重量％の範囲である、請求項１５に記載の医薬組成物。
19. 前記レシチンの量は前記医薬組成物の約５から８重量％の範囲である、請求項１５に記載の医薬組成物。
20. 前記油相は前記医薬組成物の約５から３０重量％である、請求項１に記載の医薬組成物。
21. 前記オレイン酸の量は前記医薬組成物の約０．５から０．０５重量％の間である、請求項２に記載の医薬組成物。
22. 前記アンサマイシンは１７−アリアラミノ−１７デメトキシ−ゲルダナマイシンであり、前記組成物中のオレイン酸の量は前記医薬組成物の約０．２重量％である、請求項５に記載の医薬組成物。
23. 前記アンサマイシンの最終濃度は約１から３ｍｇ／ｍＬの範囲であり、前記医薬組成物に対して、前記組成物中のオレイン酸の量は約０．５から０．０５重量％の間であり、前記中鎖トリグリセリドの量は約７から１３重量％の範囲であり、前記長鎖トリグリセリドの量は約２から５重量％の範囲であり、レシチン量は約５から８重量％の範囲である、請求項１に記載の医薬組成物。
24. 前記アンサマイシンの最終濃度は約２ｍｇ／ｍＬであり、前記医薬組成物に対して、前記組成物中オレイン酸の量は約０．２重量％あり、前記中鎖トリグリセリドの量は約７から１３重量％の範囲であり、前記長鎖トリグリセリドの量は約２から５重量％の範囲であり、レシチン量は約５から８重量％の範囲であり、前記アンサマイシンは１７−アリアラミノ−１７−デメトキシ−ゲルダナマイシンである、請求項１に記載の医薬組成物。
25. 平均液滴直径は約５００ｎｍ未満である、請求項１に記載の医薬組成物。
26. 平均液滴直径は約１５０ｎｍ未満である、請求項１に記載の医薬組成物。
27. 平均液滴直径は約８０ｎｍ未満である、請求項１に記載の医薬組成物。
28. 平均液滴直径は約８０ｎｍ未満である、請求項２３に記載の医薬組成物。
29. 平均液滴直径は約８０ｎｍ未満である、請求項２４に記載の医薬組成物。
30. 前記医薬組成物のｐＨは約５から８の範囲である、請求項２３に記載の医薬組成物。
31. 前記医薬組成物のｐＨは約５から８の範囲である、請求項２４に記載の医薬組成物。
32. 水相及び油相を含んでなる医薬組成物であって、前記油相はさらに１７−アリアラミノ−１７−デメトキシ−ゲルダナマイシン及び２重量％未満のオレイン酸を含み、前記医薬組成物は約５から８のｐＨ範囲及び約０℃から１０℃の温度範囲において少なくとも１８ヶ月安定である、医薬組成物。
33. 前記ｐＨ範囲は約５．５から７．５であり、前記温度範囲は約２℃から８℃である、請求項３１に記載の医薬組成物。
34. 前記組成物の平均液滴直径は室温において１００ｎｍを超えて増加せず、少なくとも３ヶ月間、ｐＨは５から８の範囲である、請求項３１に記載の医薬組成物。
35. 前記組成物の平均液滴直径は室温において５０ｎｍを超えて増加せず、少なくとも３ヶ月間、ｐＨは５．５から７の範囲である、請求項３１に記載の医薬組成物。
36. 前記組成物の平均液滴直径は約０から１０℃の範囲の温度において１００ｎｍを超えて増加せず、少なくとも１２ヶ月間、ｐＨは５から８の範囲である、請求項３１に記載の医薬組成物。
37. 前記組成物の平均液滴直径は約２から８℃の範囲の温度において３５ｎｍを超えて増加せず、少なくとも１２ヶ月間、ｐＨは５．５から７の範囲である、請求項３１に記載の医薬組成物。
38. ＨＳＰ−９０媒介障害を有する個体を治療する方法であって、請求項１の医薬組成物の有効量を前記個体に投与することを含んでなる、方法。
39. ＨＳＰ−９０媒介障害を有する個体を治療する方法であって、請求項２３の医薬組成物の有効量を前記個体に投与することを含んでなる、方法。
40. ＨＳＰ−９０媒介障害を有する個体を治療する方法であって、請求項２４の医薬組成物の有効量を前記個体に投与することを含んでなる、方法。
41. 前記ＨＳＰ−９０媒介障害は、炎症性疾患、感染症、自己免疫不全、脳梗塞、虚血、心疾患、神経疾患、繊維遺伝子障害、増殖性障害、腫瘍、白血病、新生物、がん、悪性腫瘍、代謝病及び難病からなる群から選択される、請求項３８に記載の方法。
42. 前記ＨＳＰ−９０媒介障害は、炎症性疾患、感染症、自己免疫不全、脳梗塞、虚血、心疾患、神経疾患、繊維遺伝子障害、増殖性障害、腫瘍、白血病、新生物、がん、悪性腫瘍、代謝病及び難病からなる群から選択される、請求項３９に記載の方法。
43. 前記ＨＳＰ−９０媒介障害は、炎症性疾患、感染症、自己免疫不全、脳梗塞、虚血、心疾患、神経疾患、繊維遺伝子障害、増殖性障害、腫瘍、白血病、新生物、がん、悪性腫瘍、代謝病及び難病からなる群から選択される、請求項４０に記載の方法。
44. 前記ＨＳＰ−９０媒介障害は、炎症性疾患、感染症、自己免疫不全、脳梗塞、虚血、心疾患、神経疾患、繊維遺伝子障害、増殖性障害、腫瘍、白血病、新生物、がん、悪性腫瘍、代謝病及び難病からなる群から選択される、請求項４３に記載の方法。
45. さらに細胞毒剤、抗血管新生薬及び抗悪性腫瘍薬からなる群から選ばれる少なくとも１の治療薬を投与することを含んでなる、請求項３８に記載の方法。
46. さらに細胞毒剤、抗血管新生薬及び抗悪性腫瘍薬からなる群から選ばれる少なくとも１の治療薬を投与することを含んでなる、請求項３９に記載の方法。
47. さらに細胞毒剤、抗血管新生薬及び抗悪性腫瘍薬からなる群から選ばれる少なくとも１の治療薬を投与することを含んでなる、請求項４０に記載の方法。
48. 少なくとも１の抗悪性腫瘍薬は、アルキル化剤、代謝拮抗物質、エピドフィロトキシン、抗悪性腫瘍酵素、トポイソメラーゼ阻害剤、プロカルバジン、ミトキサントロン、白金配位化合物、免疫増強剤及び成長阻害物質、ホルモン／抗ホルモン治療薬及び造血性成長因子からなる群から選ばれる、請求項４７に記載の方法。
49. 医薬品製造における、請求項１から３１のいずれかに記載の組成物の使用。
50. ＨＳＰ−９０媒介疾病及び症状の治療及び予防処置のための医薬品製造における、請求項１から３１のいずれかに記載の組成物の使用。

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