JP2009271014A - サンプル反応装置およびサンプル反応方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】サンプル111を吸着するサンプル吸着領域112を備えている吸着構造体110と、反応液121を貯め、サンプル吸着領域112が反応液121と接するように吸着構造体110を収納する反応槽120と、吸着構造体110を反応槽120内で回転させる駆動手段130とを備えており、サンプル吸着領域112は、該回転の回転軸を覆う面上に設けられているサンプル反応装置100を提供する。
【選択図】図1
Description
転写膜としては、PVDF膜(Immobiron−pSQ、Millipore)を用いた。サンプルとしては、Carbonic anhydrase from Bovine Erythrocytes(C−3934、Sigma Co.)の希釈系列(#1:5.63nmole、#2:563pmole、#3:56.3pmole、#4:5.63pmole、#5:563fmole、#6:56.3fmole)を用いた。希釈には蒸留水を用いた。
次に、上記転写膜をブロッキング緩衝液(1.5%スキムミルクを含むTBS−T(0.05%Tween20、50mM Tris(24.2g/4L)、150mM NaCl(35g/4L)))と30分間反応させた。
ブロッキング処理後、上記転写膜を、ブロッキング緩衝液で希釈した一次抗体(抗Carbonic anhydrase from Bovine Erythrocytes ウサギ抗体(NE023/7S、Nordic Immunological Lab.))と反応させた。
一次抗体との反応後、上記転写膜を、洗浄液(TBS−T)により洗浄した。洗浄は3回5分ずつ行った。
洗浄後、上記転写膜を、ブロッキング緩衝液で希釈した二次抗体(Alexa Fluor 647 goat anti−rabbit IgG(H+L)(A21244、Invitrogen Co.))と反応させた。
一次抗体との反応後、上記転写膜を、洗浄液(TBS−T)により5分ずつ3回洗浄した。その後さらに、洗浄液(TBS(50mM Tris(24.2g/4L)、150mM NaCl(35g/4L))により5分間洗浄した。
上述した、ブロッキング処理、一次抗体との反応、洗浄、および二次抗体との反応を、図12に示すような、ブロッキング処理、一次抗体との反応、洗浄、および二次抗体との反応の、それぞれの反応のための反応槽を備えた、本発明に係るサンプル反応装置を用いて行った。また、転写膜支持体として、直径19mmの、図3(c)に示すようなスクリュー形状のものを用いた。また、ブロッキング処理、一次抗体との反応、および二次抗体との反応のための反応槽として、直径20mmの半円柱形状のものを用い、洗浄のための反応槽として、直径22mmの半円柱形状のものを用いた。すべての反応は、20℃、70%の条件下で行った。
一次抗体または二次抗体との反応工程における反応時間を15分間とした以外は、実施例1と同様に反応を行った。結果を図14(b)に示す。
一次抗体または二次抗体との反応工程における反応液を、1μlの上記抗体を全量1.23mlとなるように希釈したものを用い、反応時間を15分間とした以外は、実施例1と同様に反応を行った。結果を図14(c)に示す。
上述した、ブロッキング処理、一次抗体との反応、洗浄、および二次抗体との反応を、従来法により行った。具体的には、袋中に、上記転写膜と、上記各反応液とを投入した後、該袋を密封して袋ごと18回転/分の速度で回転させた。反応はすべて室温で行った。
110 吸着構造体
111 サンプル
112 サンプル吸着領域
113 面
114 転写膜支持体
115 転写膜
116 結合部
117 カバー
118 開口部
119 中心軸
120 反応槽
121 反応液
122 溝
130 回転駆動部(駆動手段)
131 回転軸
132 モーター
133 ギアセット
134 ギア
200 サンプル反応装置
210 吸着構造体
220 第1反応槽
221 第1反応液
222 第2反応槽
223 第2反応液
224 第3反応槽
225 第3反応液
226 第4反応槽
227 第5反応液
228 廃液槽
229 添加部
232 モーター
233 ギアセット
234 アーム
Claims (19)
- サンプルを吸着するサンプル吸着領域を備えている吸着構造体と、
反応液を貯め、該サンプル吸着領域が該反応液と接するように該吸着構造体を収納する反応槽と、
該吸着構造体を該反応槽内で回転させる駆動手段とを備えており、
該サンプル吸着領域は、該回転の回転軸を覆う面上に設けられていることを特徴とするサンプル反応装置。 - 上記回転軸を覆う面が、上記回転軸と平行な面であることを特徴とする請求項1に記載のサンプル反応装置。
- 上記回転軸を覆う面が、円柱面、または楕円柱面であることを特徴とする請求項1または2に記載のサンプル反応装置。
- 上記吸着構造体が、上記サンプル吸着領域が設けられている転写膜と、該転写膜を支持する転写膜支持体とを備えていることを特徴とする請求項1〜3のいずれか一項に記載のサンプル反応装置。
- 上記転写膜支持体と上記転写膜との間に空隙が設けられていることを特徴とする請求項4に記載のサンプル反応装置。
- 上記転写膜支持体に、上記回転軸に平行な直線に斜めに交わる方向に沿った溝が設けられていることを特徴とする請求項4または5に記載のサンプル反応装置。
- 上記吸着構造体が、上記サンプル吸着領域を覆うカバーをさらに備えていることを特徴とする請求項1〜6の何れか一項に記載のサンプル反応装置。
- 上記カバーが、上記反応液を透過させることを特徴とする請求項7に記載のサンプル反応装置。
- 上記反応槽の内面が、半円柱面状、または六角柱以上の多角柱を長さ方向に対して平行な中心軸を通る面で切断したときの壁面状であることを特徴とする請求項1〜8のいずれか一項に記載のサンプル反応装置。
- 上記反応槽の内面に、上記回転軸に平行な直線に斜めに交わる方向に沿った溝または突起が設けられていることを特徴とする請求項1〜9のいずれか一項に記載のサンプル反応装置。
- 上記反応槽に上記反応液を添加する添加手段と、該反応槽から流出する該反応液を受ける廃液槽とをさらに備えていることを特徴とする請求項1〜10のいずれか一項に記載のサンプル反応装置。
- 複数の上記反応槽を備えており、上記駆動手段が、上記吸着構造体を任意の該反応槽に移動させることを特徴とする請求項1〜11のいずれか一項に記載のサンプル反応装置。
- 上記サンプルがタンパク質であり、上記反応液が、該タンパク質の抗体を含んでいることを特徴とする請求項1〜12のいずれか一項に記載のサンプル反応装置。
- 上記サンプルがタンパク質であり、上記複数の反応槽が、ブロッキング緩衝液を貯める第1反応槽、該タンパク質に結合する一次抗体を含む反応液を貯める第2反応槽、該一次抗体に結合する二次抗体を含む反応液を貯める第3反応槽、および洗浄液を貯める第4反応槽を含んでいることを特徴とする請求項12に記載のサンプル反応装置。
- サンプルを吸着する転写膜を支持する転写膜支持体と、
反応液を貯め、該転写膜支持体が支持する転写膜が該反応液と接するように該転写膜支持体を収納する反応槽と、
該転写膜支持体を該反応槽内で回転させる駆動手段とを備えており、
該転写膜支持体は、該転写膜を、該回転の回転軸を覆う面上に支持することを特徴とするサンプル反応装置。 - サンプルを吸着するサンプル吸着領域を備えている吸着構造体を、反応液が貯められた反応槽内で回転させる工程を包含しており、
該サンプル吸着領域は、該回転の回転軸を覆う面上に設けられていることを特徴とするサンプル反応方法。 - 一つの軸を覆うように設けられている、サンプルを吸着するサンプル吸着領域と、該サンプル吸着領域を覆うカバーとを備えていることを特徴とするサンプル保存用チップ。
- サンプルを吸着するサンプル吸着領域を備えている吸着構造体と、
反応液を貯め、該サンプル吸着領域が該反応液と接するように該吸着構造体を収納する複数の反応槽と、
該吸着構造体を任意の該反応槽に移動させる駆動手段とを備えていることを特徴とするサンプル反応装置。 - サンプルを吸着するサンプル吸着領域を備えている吸着構造体を、第1反応液が貯められた第1反応槽内に移動させる第1反応工程と、
第1反応工程の後に、上記吸着構造体を、第2反応液が貯められた第2反応槽に移動させる第2反応工程とを包含することを特徴とするサンプル反応方法。
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