JP2009000002A - 微生物検出用培地 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】(A)エステラーゼの基質となる色原体化合物並びに(B)ポリオキシアルキレン多価アルコール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンショ糖脂肪酸エステル、ポリオキシアルキレンアルキルエーテル及びポリオキシプロピレン・ポリオキシエチレン縮合物から選ばれる1種以上の非イオン性界面活性剤を含有する微生物検出用培地、並びにこれに被検試料を接種して培養することを特徴とする微生物の検出方法。
【選択図】なし
Description
生菌数は標準寒天培地などの非選択培地にて発育した全ての微生物数を示す。一般に、生菌数測定には、トリプトソイ寒天培地や標準寒天培地が用いられ、真菌数測定にはポテトデキストロース寒天培地やサブロー寒天培地が用いられる。
従属栄養細菌を検出する培地としては、R2A培地やPGY培地が用いられているが、実際の培養は、混釈培養または寒天平板を作成しその上にメンブレンフィルターを乗せた上で行なうが、この調製は非常に煩雑である。
そこで、メッシュを有する繊維状吸水シートに担持させた構造を利用することにより、被検液を滴下するだけで培養できる方法が見出された(特許文献1参照)。
しかしTTCでは一部発色しないコロニーが出現する。
しかし、これら色原体化合物を単独で加えると主にグラム陽性菌の発育抑制が認められた。
そこでさらに鋭意研究を重ねた結果、特定の非イオン性界面活性剤を色原体化合物と併用することにより、微生物の発育抑制がなく、より多くの微生物を色原体化合物の発色部分に依存した発色コロニーとして検出できること見出し本発明を完成した。
また、本発明は、(A)エステラーゼの基質となる色原体化合物並びに(B)ポリオキシアルキレン多価アルコール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンショ糖脂肪酸エステル、ポリオキシアルキレンアルキルエーテル及びポリオキシプロピレン・ポリオキシエチレン縮合物から選ばれる1種以上の非イオン性界面活性剤を含有する培地に被検試料を接種して培養することを特徴とする微生物の検出方法を提供するものである。
上記非イオン性界面活性剤の培地中の使用時の濃度は0.01〜10g/Lが好ましく、さらに0.05〜5.0g/L、よりさらに0.1〜1.0g/Lが好ましい。
一般的に生菌数測定に用いられている培地としては、トリプトソイ寒天培地や標準寒天培地が用いられており、真菌数測定にはポテトデキストロース寒天培地やサブロー寒天培地が挙げられるが本発明でもこれらの培地を使用することができる。また、従属栄養細菌を検出する培地としてはR2A培地やPGY培地を使用することができるが、実際には混釈培養又は寒天平板を作製し、その上にメンブレンフィルターを培地に密着させなくてはならず、操作が煩雑である。
そこで、メッシュを有する繊維状吸水シート担持されたもの(例えば、特開2000−325072号公報記載のもの)等の簡易培地を用いれば、被検液を滴下するだけで培養でき、便利である。
各特定微生物に対する選択剤を以下に示す。
コール酸ナトリウム
デオキシコール酸ナトリウム
SDS
クリスタルバイオレット
その他、目的菌以外の菌を区別(排除)するための、目的菌が特異的に利用する発色酵素基質または糖およびpH指示薬、色素、抗生物質
EDTA・2Na
塩化リチウム、硫酸リチウム
Deferoxamine
コリスチン硫酸塩(抗生物質)
アズトレオナム(抗生物質)
亜テルル酸カリウム
食塩
グリシン
卵黄
その他、目的菌以外の菌を区別(排除)するための、目的菌が特異的に利用する発色酵素基質または糖およびpH指示薬、色素、抗生物質
ポリミキシンB(抗生物質)
グリシン
卵黄
その他、目的菌以外の菌を区別(排除)するための、目的菌が特異的に利用する発色酵素基質または糖およびpH指示薬、色素、抗生物質
アジ化ナトリウム
胆汁酸塩
ゲンタマイシン
酢酸タリウム
ナリジクス酸
クエン酸ナトリウム
プロタミン硫酸塩
その他、目的菌以外の菌を区別(排除)するための、目的菌が特異的に利用する発色酵素基質または糖およびpH指示薬、色素、抗生物質
白糖
チオ硫酸ナトリウム
クエン酸ナトリウム
クエン酸鉄
コール酸ナトリウム
胆汁末
食塩
ポリミキシンB
SDS
その他、目的菌以外の菌を区別(排除)するための、目的菌が特異的に利用する発色酵素基質または糖およびpH指示薬、色素、抗生物質
マラカイトグリーン
塩化マグネシウム
胆汁酸塩
ブリリアントグリーン
チオ硫酸ナトリウム
クエン酸ナトリウム
クエン酸鉄
L-リジン塩酸塩
Tergitol 4
スルファピリジン(抗生物質)
ノボビオシン(抗生物質)
その他、目的菌以外の菌を区別(排除)するための、目的菌が特異的に利用する発色酵素基質または糖およびpH指示薬、色素、抗生物質
実施例1
培地の作製
表1に示した、トリプトソイ寒天(TSA)、標準寒天培地(SPC)、R2A寒天培地のそれぞれ1リットル使用量を1リットルの精製水に加え、121℃、15分間加温溶解する。溶解後培地が冷めたことを確認し、一方にはろ過滅菌した5-ブロモ-4-クロロ-3-インドキシル-3-アセテート(X−acetate)のみを0.1g/Lになるように加え良く撹拌した後、プラスチックシャーレ(90φmm)に20mlずつ分注して培地が固まるまで静置した。
一方、トリプトソイ寒天(TSA)、標準寒天培地(SPC)、R2A寒天培地のそれぞれ1リットル使用量およびポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート(Tween80)を0.5g/Lを1リットルの精製水に加え、121℃、15分間加温溶解する。溶解後培地が冷めたことを確認し、ろ過滅菌した5-ブロモ-4-クロロ-3-インドキシル-3-アセテートのみを0.1g /Lになるように加え良く撹拌した後、プラスチックシャーレ(90φmm)に20mlずつ分注して培地が固まるまで静置し本発明の微生物検出用培地を作製した。
供試菌株はトリプトソイブイヨンで24時間前培養したものを用い、これを生理食塩水で希釈し、ミクロプランターを用いて供試し、25℃、2日間培養した。結果を表2、3に示す。
R2A培地組成をメッシュを有する繊維状吸水シートに担持させた構造(特開2000−325072号公報の実施例、段落「00025」)を利用した簡易培地に適用した場合のコロニーの性状及び発育菌数を観察した。培養条件は、25℃、5日間とした。
非選択培地にエステラーゼの基質となる発色剤(X−acetate)0.1g/LとTween80 0.5g/Lとを併用し、さらにブドウ球菌に対する選択剤を適宜加えることによりブドウ球菌を発色コロニーとして検出可能な選択培地(表5)とした。この培地を用いた発育動態を表6及び7に示す。培養条件は、35℃、24時間とした。
Claims (6)
- (A)エステラーゼの基質となる色原体化合物並びに(B)ポリオキシアルキレン多価アルコール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンショ糖脂肪酸エステル、ポリオキシアルキレンアルキルエーテル及びポリオキシプロピレン・ポリオキシエチレン縮合物から選ばれる1種以上の非イオン性界面活性剤を含有する微生物検出用培地。
- (B)非イオン性界面活性剤が、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルである請求項1記載の微生物検出用培地。
- (A)エステラーゼの基質となる色原体化合物が、オキシインドール誘導体又はハロゲン化オキシインドール誘導体である請求項1又は2記載の微生物検出用培地。
- (A)エステラーゼの基質となる色原体化合物並びに(B)ポリオキシアルキレン多価アルコール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンショ糖脂肪酸エステル、ポリオキシアルキレンアルキルエーテル及びポリオキシプロピレン・ポリオキシエチレン縮合物から選ばれる1種以上の非イオン性界面活性剤を含有する培地に被検試料を接種して培養することを特徴とする微生物の検出方法。
- (B)非イオン性界面活性剤が、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルである請求項4記載の微生物の検出方法。
- (A)エステラーゼの基質となる色原体化合物が、オキシインドール誘導体又はハロゲン化オキシインドール誘導体である請求項4又は5記載の微生物の検出方法。
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