JP2008535826A - 高親和性hivt細胞レセプター - Google Patents
高親和性hivt細胞レセプター Download PDFInfo
- Publication number
- JP2008535826A JP2008535826A JP2008503585A JP2008503585A JP2008535826A JP 2008535826 A JP2008535826 A JP 2008535826A JP 2008503585 A JP2008503585 A JP 2008503585A JP 2008503585 A JP2008503585 A JP 2008503585A JP 2008535826 A JP2008535826 A JP 2008535826A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- tcr
- chain
- chain variable
- variable region
- complex
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
- A61K47/6425—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the peptide or protein in the drug conjugate being a receptor, e.g. CD4, a cell surface antigen, i.e. not a peptide ligand targeting the antigen, or a cell surface determinant, i.e. a part of the surface of a cell
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Virology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
【選択図】なし
Description
ヒト免疫不全ウイルス(HIV)は、後天性免疫不全症候群(AIDS)の原因因子である。このウイルスは、レンチウイルス群に属するエンベロープを有するレトロウイルスである。SLYNTVATL(配列番号16)ペプチドは、ヒト免疫不全ウイルス-1(HIV-1)を作り上げている9つの遺伝子の1つであるGag遺伝子のg17遺伝子産物に由来する。このペプチドはHLA-A*0201に搭載(load)されてHIV感染細胞の表面に提示される。したがって、SLYNTVATL−HLA-A2*0201複合体は、例えば細胞毒性又は免疫刺激性薬剤を感染細胞に送達する目的で、TCRが標的することができるHIVマーカーを提供する。しかし、この目的には、TCRがペプチド−HLA複合体に対して高い親和性及び/又は遅い解離速度を有することが望ましい。
本発明は、SLYNTVATL−HLA-A*0201複合体に対し、1μMより少ないか若しくはこれと等しい親和性(KD)及び/又は1×10-3 S-1か若しくはそれより遅い解離速度(koff)を有するTCR(但し、該TCRが細胞により提示され且つ配列番号1及び2を含んでなる場合には、該細胞は天然型T細胞ではない)を初めて利用可能にする。このTCRは、単独で又は治療剤との組合せで、前記複合体を提示するHIV感染細胞を標的するに有用である。
本発明は、1μMより少ないか等しいSLYNTVATL−HLA-A*0201複合体に対するKD及び/又は1×10-3 S-1かそれより遅いSLYNTVATL−HLA-A*0201複合体に対する解離速度(koff)を有し、但し細胞により提示され且つ配列番号1及び2を含んでなる場合には該細胞は天然型T細胞ではないことを特徴とする、SLYNTVATL−HLA-A*0201への結合特性を有し且つ少なくとも1つのTCRα鎖可変ドメイン及び/又は少なくとも1つのTCRβ鎖可変ドメインを含んでなるT細胞レセプター(TCR)を提供する。KD及び/又は(koff)の測定は、公知の方法のいずれによっても行うことができる。好ましい方法は、実施例4の表面プラズモン共鳴(Biacore)法である。
SLYNTVATL−HLA-A*0201複合体に特異的な親HIV Gag TCRは、以下のVα鎖遺伝子及びVβ鎖遺伝子使用(usage)を有する:
α鎖 − TRAV12.2
β鎖:− TRBV 5.6
天然型TCRはへテロ二量体αβ又はγδ形態で存在する。しかし、単一のTCRα鎖又はTCRβ鎖からなる組換えTCRが、ペプチドMHC分子に結合することが以前に示されている。
1つの実施形態において、本発明のTCRは、α鎖可変ドメイン及びTCRβ鎖可変ドメインを両方含んでなる。
本明細書で使用する場合、用語「可変ドメイン」は、所定のTCRの、TCRα鎖に関してはTRAV遺伝子により、TCRβ鎖に関してはTRBV遺伝子によりコードされる全てのアミノ酸を包含すると理解される(T cell receptor Factsbook(2001) LeFranc and LeFranc,Academic Press,ISBN 0-12-441352-8)。
95S又はG
96A
97H
98D
100S
を含んでなる変異したTCRを包含する。
上記で使用した番号付けは、図1a及び配列番号1に示したものと同じである。
51V又はA
52R又はL
53G
54V
上記で使用した番号付けは、図1b及び配列番号2で示したものと同じである。
本発明の追加の好ましい実施形態は、図7に示される変異したβ鎖可変領域アミノ酸配列(配列番号14及び15)の1つを含んでなるTCRにより提供される。このようなTCRの表現型上サイレントな変形体もまた、本発明の一部を形成する。
更に好ましい実施形態は、下記に列挙するα鎖可変領域アミノ酸配列とβ鎖可変領域アミノ酸配列との組合せを含んでなる本発明のTCRにより提供され、このようなTCRの表現型上サイレントな変形体もまた、本発明の一部を形成する:
-PGGG-SGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGG-P (配列番号17)
-PGGG-SGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGG-P (配列番号18)
本発明のTCRのdTCR形態又はscTCR形態は、好ましくは、天然型TCRの膜貫通配列に相当する配列も細胞質配列に相当する配列も含有しない。
SLFNTVAVL
SLSNTVATL
SSFNTVATL
SLLNTVATL
SLYNTIATL
SLYNTIAVL
SLFNTIATL
SLFNTIAVL
SLFNFVATL
変異アミノ酸には下線を付する。
1つの特定の実施形態において、本発明のTCRは、少なくとも1つのポリアルキレングリコール鎖と結合している。この結合は、当業者に公知の多くの方法で引き起こされ得る。好ましい実施形態では、ポリアルキレン鎖は、TCRと共有結合している。更なる実施形態では、本発明のこの観点のポリエチレングリコール鎖は、少なくとも2つのポリエチレン反復単位を含んでなる。
本発明の1つの観点は、少なくとも2つの本発明のTCRを含んでなる多価TCR複合体を提供する。この観点の1つの実施形態では、少なくとも2つのTCR分子は、リンカー部分を介して連結して多価複合体を形成する。好ましくは、この複合体は水溶性であるので、リンカー部分はそのように選択されるべきである。更に、リンカー部分は、形成される複合体の構造的多様性が最小となるように、TCR分子の規定位置に付着することができるべきであることが好ましい。この観点の1つの実施形態は、ポリマー鎖又はペプチド性リンカー配列が各TCRの可変領域配列中に位置しないアミノ酸残基同士の間に伸びる本発明のTCR複合体により提供される。
上記の望ましい基準を満たすリンカー部分の例は、当該分野(例えば抗体フラグメントを連結する技術分野)で公知である。
HOCH2CH2O(CH2CH2O)n−CH2CH2OH
(式中、nは2より大きい)。しかし、他の適切な(任意に置換されていてもよい)ポリアルキレングリコールをベースにするものもある。ポリプロピレングリコー及びエチレングリコールとプロピレングリコールとのコポリマーが挙げられる。
反応性化学成分−親水性ポリマー−反応性化学成分
反応性化学成分−スペーサ−親水性ポリマー−スペーサ−反応性化学成分
-(CH2)n- (式中、n=2〜5)
-(CH2)3NHCO(CH2)2
ポリアルキレングリコール鎖が少なくとも2つのポリエチレングリコール反復単位を含んでなる本発明のTCR複合体は、この観点の更なる実施形態を提供する。
ビニルスルホン
炭酸ベンゾトリアゾール
スクシンイミジルプロピオネート
スクシンイミジルブタノエート(succinimidyl butanoate)
チオエステル
アセトアルデヒド
アクリラート
ビオチン
一級アミン
1つの観点では、本発明のTCR(又はその多価複合体)は、択一的又は追加的に、そのα鎖又はβ鎖のC末端又はN末端に反応性のシステインを含んでなり得る。
1つの観点では、本発明のTCRは治療剤又は検出可能な成分と結合させてもよい。例えば、治療剤又は検出可能な成分はTCRに共有結合させてもよい。
本発明の1つの実施形態において、治療剤又は検出可能な成分は、一方又は両方のTCR鎖のC末端に共有結合している。
・小分子細胞毒性物質、すなわち、哺乳動物細胞を殺傷する能力を有する、分子量700ダルトン未満の化合物。このような化合物はまた、細胞毒性効果を有することができる毒性金属を含有し得る。更に、これら小分子細胞毒性物質にはまた、プロドラッグ、すなわち、生理学的条件下で崩壊又は変換して細胞毒性物質を放出する化合物が含まれると理解される。このような物質の例には、シスプラチン、メイタンシン(maytansine)誘導体、ラケルマイシン(rachelmycin)、カリケアマイシン(calicheamicin)、ドセタキセル、エトポシド、ゲムシタビン、イホスファミド、イリノテカン、メルファラン、ミトキサントロン、ソルフィマーソディウムホトフィリンII(sorfimer sodiumphotofrin II)、テモゾロマイド(temozolmide)、トポテカン、トリメトレキサート(trimetreate)、グルクロナート、オーリスタチンE(auristatin E)、ビンクリスチン及びドキソルビシンが含まれる;
・放射性核種、すなわち、1以上のα粒子若しくはβ粒子又はγ線の同時放射を伴って崩壊する元素の不安定同位体。例には、ヨウ素131、レニウム186、インジウム111、イットリウム90、ビスマス210及び213、アクチニウム225及びアスタチン213が含まれるがこれらに限定されない;キレート化剤が、高親和性TCR又はその多量体へのこれら放射性核種の結合を促進するために使用されてもよい;
・プロドラッグ、抗体を指向する酵素プロドラッグを含むがこれに限定されない;
治療には、HIV感染(CD4+)細胞の近傍への治療剤の局在化が、毒素又は免疫刺激剤の効果を増強する。ワクチン送達には、ワクチン抗原を抗原提示細胞の近傍に局在させ、該抗原の効力を増強させ得る。この方法はまた造影目的にも適用できる。
別の実施形態は、本発明のTCRをコードする核酸を含んでなる発現ベクターを有する細胞により提供される。例えば、この細胞はT細胞であり得る。
医薬的に許容されるキャリアと共に、本発明のTCR若しくは多価TCR複合体(任意に治療剤と結合していてもよい)、又は本発明のTCRを含んでなる膜調製物、又は本発明のTCRをコードする核酸を含んでなる発現ベクターを有する複数の細胞
を含んでなる医薬組成物により提供される。
アジェネラーゼ(アムプレナビル)−プロテアーゼ阻害剤
コンビビル−レトロビル(300mg)とエピビル(150mg)の組合せ
クリキシバン(インジナビル)−プロテアーゼ阻害剤
エピビル(3tc/ラミブジン)−ヌクレオシドアナログ逆転写酵素阻害剤
エプジコム(2つのヌクレオシド逆転写酵素阻害剤の組合せ(同じ丸剤中のNRTI;600mgのザイアジェン(アバカビル)及び300mgのエピビル(3TC)
フォートベイス(サキナビル)−プロテアーゼ阻害剤
フューゼオン(Fuzeon)(エンフュービルタイド(enfuvirtide))−融合阻害剤
ハイビッド(ddc/ザルシタビン)−ヌクレオシドアナログ逆転写酵素阻害剤
インビラーゼ(サキナビル)−プロテアーゼ阻害剤
レクシヴァ(ホスアンプレナビル)−2003年10月20日承認のプロテアーゼ阻害剤
ノービア(リトナビル)−プロテアーゼ阻害剤
レスクリプター(デラビルジン)−非ヌクレオシドアナログ逆転写酵素阻害剤
レトロビル、AZT(ジドブジン)−ヌクレオシドアナログ逆転写酵素阻害剤
サスティバ(エファビレンツ)−非ヌクレオシドアナログ逆転写酵素阻害剤
トリジビル(1錠剤中3つの非ヌクレオシド;アバカビル+ジドブジン+ラミブジン)
ツルバダ(エムトリシタビン+テノホビルDF)
ヴァイデックス(ddl/ジダノシン)−ヌクレオシドアナログ逆転写酵素阻害剤
ヴァイデックスEC;(ddl/ジダノシン)−ヌクレオシドアナログ逆転写酵素阻害剤;
ビラミューン(ネビラピン)−非ヌクレオシドアナログ逆転写酵素阻害剤
ビリアード(フマル酸テノホビルジソプロキシル)−ヌクレオチド逆転写酵素阻害剤(アデノシンクラス)
ゼリット(d4t/スタブジン)−ヌクレオシドアナログ逆転写酵素阻害剤
ザイアジェン(アバカビル)−ヌクレオシドアナログ逆転写酵素阻害剤
本発明のscTCR又はdTCR(好ましくは、ヒト配列に対応する定常配列及び可変配列により構成される)は、実質的に純粋な形態で、又は精製若しくは単離された調製物として提供されてもよい。例えば、本発明のscTCR又はdTCRは、他のタンパク質を実質的に含まない形態で提供されてもよい。
(a)親HIV Gag TCRのα鎖可変ドメイン及びβ鎖可変ドメインを含んでなり、そのα鎖可変ドメイン及びβ鎖可変ドメインの一方又は両方が請求項7及び8で特定したアミノ酸の1又はそれ以上において変異を含んでなるTCRを作製し;
(b)この変異TCRをSLYNTVATL−HLA-A*0201と、該TCRのSLYNTVATL−HLA-A*0201への結合を可能にするに適切な条件下で接触させ、
その相互作用のKD及び/又はkoffを測定する
ことを含んでなる。
以下の実施例で本発明を更に説明する。以下の実施例は、如何なる態様でも本発明の範囲を制限しない。
以下、添付の図面に言及する:
図2a及び2bはそれぞれ、可溶性型の親HIV Gag TCRα鎖及びβ鎖のDNA配列を示す。
図3a及び3bはそれぞれ、図2a及び2bのDNA配列から産生されるHIV Gag TCRα鎖及びβ鎖の細胞外アミノ酸配列を示す。
図5a及び5bはそれぞれ、図4a及び4bのDNA配列から産生されるHIV Gag TCRα鎖及びβ鎖の細胞外アミノ酸配列を示す。各鎖における導入システインを影付きで示す。
図7は、高親和性HIV Gag TCR変形体のβ鎖可変ドメインアミノ酸配列を詳述する。
図8aは、TRACの可溶性部分のアミノ酸配列を詳述する。
図8bは、TRBC1の可溶性部分のアミノ酸配列を詳述する。
図8cは、TRBC2の可溶性部分のアミノ酸配列を詳述する。
図10は、pEX821プラスミドのDNA配列を詳述する。
図11は、ペプチドリンカーを介して野生型ヒトIL-2に融合した可溶性の親HIV Gag TCR変形体のβ鎖アミノ酸配列を詳述する。リンカー及びIL-2のアミノ酸をイタリック体で示す。
図12は、ジスルフィド連結した可溶性の親HIV Gag TCRとSLYNTVATL−HLA-A*0201複合体との相互作用について作成したBiacore応答曲線を提供する。
図14は、pEX821プラスミドのプラスミドマップを提供する。
図15aは、ヒトT細胞中での発現について最適化された親HIV Gag TCRα鎖の全長DNA配列を提供する。
図15bは、ヒトT細胞中での発現について最適化された親HIV Gag TCRβ鎖の全長DNA配列を提供する。
図16bは、ヒトT細胞中での発現について最適化された親HIV Gag TCRβ鎖の全長アミノ酸配列を提供する。
図17aは、コントロールの非形質転換CD8+T細胞についてのFACS分析データを提供する。
図17bは、形質転換CD8+T細胞の表面上での親HIV Gag TCRの発現を示すFACS分析データを提供する。
図19は、IFN-γ産生及びTNF-α産生により測定したときの、可溶性のジスルフィド連結高親和性c11c6 HIV Gag TCRがHIVに感染したTo細胞の存在下でSLYNTVATL−HLA-A*0201反応性OX84ポリクローナルT細胞株の活性化を阻害する能力を示す。
図21は、可溶性のジスルフィド連結高親和性c11c6 HIV Gag TCRがSLYNTVATLペプチドでパルスしたT2細胞を染色する能力を示す。
図4a及び4bは、SLYNTVATL−HLA-A*0201複合体に特異的な親TCRの可溶性ジスルフィド連結αβ鎖のDNA配列を提供する。これらDNA配列は、多くの受託研究会社、例えばGeneArt(ドイツ)により新たに合成され得る。また、これらDNA配列のpGMT7ベースの発現プラスミド(これは、E.coli株BL21-DE3における高レベル発現用のT7プロモーターを含有する(pLysS)(Panら,Biotechniques(2000) 29 (6):1234-8))中へのライゲーションを容易にするために、これらDNA配列に制限酵素認識部位を付加することもできる。
TCRβ鎖配列は導入したAseI及びAgeI制限酵素認識部位を含有する。この配列を、NdeI/AgeIで切断したpEX821(図10及び14を参照)中にライゲートした。
ClaI - ATCGAT
SalII - GTCGAC
AseI - ATTAAT
AgeI - ACCGGT
ラピッドDNAライゲーションキット(Roche)を製造業者の指示書に従って用い、切断したTCRα鎖及びβ鎖のDNAと切断したベクターとをライゲートした。
ライゲートしたプラスミドをコンピテントE.coli株XL1-blue細胞に形質転換し、100mg/mlアンピシリン含有LB/寒天プレート上に播種した。37℃で一晩のインキュベーション後、1つのコロニーを採取し、100mg/mlアンピシリンを含有する10mlのLB中で振盪させながら37℃で一晩増殖させた。クローン化プラスミドを、Miniprepキット(Qiagen)を用いて精製し、挿入物を自動DNAシーケンサ(Lark Technologies)を用いて配列決定した。
実施例1に記載されるように作製した可溶性のジスルフィド連結天然型HIV Gag TCRは、SLYNTVATL(配列番号16)−HLA-A*0201複合体に対して増大した親和性を有する本発明のTCRを作製するための鋳型として用いることができる。
ファージディスプレイは、高親和性変異体を同定するためにHIV Gag TCR変形体のライブラリを作成することができる1つの手段である。例えば、(Liら(2005) Nature Biotech 23 (3):349-354)に記載されるTCRファージディスプレイ及びスクリーニング法は、HIV Gag TCRに適合させて適用することができる。
変異誘発は次の条件を用いて行った:全容量50μl中、50ngのプラスミド鋳型、1μlの10mM dNTP、5μlの製造業者により供給された10×Pfu DNAポリメラーゼ緩衝液、25pmolのfwdプライマー、25pmolのrevプライマー、1μlのpfu DNAポリメラーゼ。95℃で2分間の最初の変性工程後、反応物を、変性(95℃、10秒)、アニーリング(55℃、10秒)及び伸長(72℃、8分)の25サイクルに供した。得られた生成物をDpnI制限酵素で消化して鋳型プラスミドを除き、E.coli株XL1-blueに形質転換した。変異誘発を配列決定により確証した。
それぞれ実施例1又は2のように作製した変異α鎖及びβ鎖を含む発現プラスミドを、E.coli株BL21pLysSに別々に形質転換し、1つのアンピシリン耐性コロニーを37℃にてTYP(アンピシリン100μg/ml)培地中で0.4のOD600まで増殖させた後、0.5mM IPTGでタンパク質発現を誘導した。誘導の3時間後に、Beckman J-6B中で4000rpmにて30分間の遠心分離により細胞を回収した。細胞ペレットを、50mMのTris-HCl、25%(w/v)のスクロース、1mMのNaEDTA、0.1%(w/v)のNaAzide、10mMのDTTを含有する緩衝液(pH8.0)中に再懸濁した。一晩の凍結−解凍工程の後、再懸濁細胞を、Milsonix XL2020ソニケータ中での標準の12mm径プローブを使用する1分間のバーストで合計約10分間の超音波処理に付した。封入体ペレットを、Beckman J2-21遠心機における13000rpmにて30分間の遠心分離により回収した。次いで、3回の界面活性剤での洗浄を行い、細胞残渣及び膜成分を除去した。各回、封入体ペレットをTriton緩衝液(50mMのTris-HCl、0.5%のTriton-X100、200mMのNaCl、10mMのNaEDTA、0.1%(w/v)のNaAzide、2mMのDTT、pH8.0)中でホモジナイズした後、Beckman J2-21における13000rpmにて15分間の遠心分離によりペレット化した。次いで、以下の緩衝液中での同様な洗浄により界面活性剤及び塩を除去した:50mMのTris-HCl、1mMのNaEDTA、0.1%(w/v)のNaAzide、2mMのDTT、pH8.0。最後に、封入体を30mgずつ小分けし、−70℃にて凍結させた。封入体タンパク質の収率を、6Mグアニジン-HClで可溶化し、Bradford色素結合アッセイ(PerBio)で測定することにより定量した。
表面プラズモン共鳴バイオセンサ(BIAcore 3000TM)を使用して、ペプチド−MHCリガンドへのsTCRの結合を分析した。これは、半配向様式(semi-oriented fashion)でストレプトアビジン被覆結合表面に固定した単一pMHC複合体(下記で説明)を作製し、同時に4つまでの異なるpMHC(別個のフローセルに固定)への可溶性T細胞レセプターの結合の効率的な試験を可能にすることにより容易となった。HLA複合体の手動での注入により、正確なレベルの固定化クラスI分子を容易に操作することが可能となった。
親の又は変異したHIV Gag sTCRの系列希釈物を調製し、5μl/分の一定流速で2つの異なる表面(一方は〜1000RUの特異SLYNTVATL−HLA-A*0201複合体を被覆し、2つめは〜1000RUの非特異HLA-A2-ペプチド複合体を被覆)に注入した。応答は、コントロールセルの測定値を用いて各濃度について規格化した。規格化データ応答を、TCRサンプルの濃度に対してプロットし、平衡結合定数KDを算出するために双曲線にフィットさせた(Price & Dwek,Principles and Problems in Physical Chemistry for Biochemists (第2版) 1979,Clarendon Press,Oxford)。
高親和性TCRについて、解離速度定数kd及び結合速度定数kaを実験的に測定することによりKDを決定した。平衡定数KDはkd/kaとして算出した。
1つは〜300RUの特異HLA-A2-nyesoペプチド複合体で被覆し、2つめは〜300RUの非特異HLA-A2−ペプチド複合体で被覆した2つの異なるセル上にTCRを注入した。流速を50μl/分に設定した。代表的には、250μlのTCRを〜3μM濃度で注入した。次いで、反応がベースラインに戻るまで緩衝液を流した。Biaevaluationソフトウェアを用いて動力学パラメータを算出した。また、半減期の算出を可能とするために、解離相を一次指数関数減衰式にフィットさせた。
可溶性のジスルフィド連結した天然型HIV Gag TCR(それぞれ配列番号9及び10に詳述されるαTCR鎖及びβTCR鎖からなる)とSLYNTVATL−HLA-A*0201複合体との間の相互作用を、上記の方法を用いて分析し、85nMのKD及び2.21×10-2 S-1の解離速度(koff)が示された(Biacore応答曲線については図12を参照)。
以下の表で特定されるTCRは、1μMより少ないか若しくは等しいKD及び/又は1×10-3 S-1か若しくはそれより遅いkoffを有する。
実質的に実施例1〜3に記載の方法を使用して、可溶性の高親和性HIV Gag TCR−WTヒトIL-2融合タンパク質を作製することができる。簡潔には、所望のリンカー及びWTヒトIL-2をコードするDNAを、可溶性のジスルフィド連結親HIV Gag TCRβ鎖のDNA配列の3'末端にTAA(「ストップ」)コドンの直前で付加する。図11は、WTヒトIL-2にリンカー配列を介して融合したジスルフィド連結親HIV Gag TCRβ鎖を含んでなる融合タンパク質のアミノ酸配列を提供する(配列番号24)。この融合タンパク質のリンカー及びIL-2部分はイタリック体で示されている。次いで、この構築物をコードするDNAは、pEX821中にライゲートすることができる。次いで、可溶性の親HIV Gag TCR−IL-2融合タンパク質は、実質的に実施例3に記載された方法を使用して、このβ鎖融合タンパク質を図5aに詳述される可溶性のジスルフィド連結親HIV Gag α鎖TCR鎖(配列番号9)と組み合せることにより、発現させることができる。
親HIV Gag TCR鎖のシグナル配列、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインをコードするDNA構築物を合成した(GeneArt、ドイツ)。これらTCRα鎖及びTCRβ鎖のDNA配列(それぞれ図15a及び15bに提供)は、親HIV Gag TCR DNA配列から、天然型アミノ酸配列を維持しつつ、ヒトT細胞中での該コードTCR鎖の発現レベルを増大させるように変更する。図16a及び16bはそれぞれ、図15a及び15bのDNA配列によりコードされる全長アミノ酸配列を提供する。
形質導入細胞表面上での親HIV Gag TCRの提示は、HLA-A*0201−SLYNTVALT PEテトラマーを使用するFACS分析及び抗CD8モノクローナル抗体FITC同時染色により確証した。
図17bは、形質導入CD8+細胞表面上での親HIV Gag TCR発現の成功を示すFACS分析データを提供する。図17aは、コントロールの非形質導入T細胞を使用して作成したFACS分析データを提供する。
以下のアッセイを行い、可溶性の高親和性c11c6 HIV Gag TCRがSLYNTVATL−HLA-A*0201反応性ポリクローナルT細胞株の活性化を阻害し得ることを示した。
この実験に使用した可溶性のc11c6高親和性HIV Gag TCRは、それぞれ図6c(配列番号13)及び図7b(配列番号15)に示すTCRα鎖可変ドメイン及びTCRβ鎖可変領域を含んでいた。この可溶性TCRのTCRα鎖及びβ鎖の完全アミノ酸配列はそれぞれ、図18a(配列番号29)及び図18b(配列番号30)に提供される。
IFN-γ産生及びTNF-α産生をCTL活性化についての読み取り値として使用した。
R10アッセイ培地:10% FCS(熱不活化,Gibco,cat# 10108-165)、88% RPMI 1640(Gibco,cat# 42401-018)、1%グルタミン(Gibco,cat# 25030-024)及び1%ペニシリン/ストレプトマイシン(Gibco,cat# 15070-063)。
ペプチド:(種々の供給源から入手)最初にDMSO(Sigma,cat# D2650)中に4mg/mlで溶解し、凍結。
BDTM Cytometric Bead Array Kit、ヒトTh1/Th2 cytokine Kit II (BD Biosciences,San Diego,US)はアッセイに必要な全ての試薬を含む。
慢性HIV感染To標的細胞(HXB2及びHIV3B HIV Lab株)を洗浄し、R10培地中に再懸濁した。コントロールとして、非感染To標的細胞を1nMのSLYNTVATLペプチドで、37℃、5%CO2にて30分間パルスした。
96ウェルU底プレートのウェル当たりR10培地中25,000のHIV感染To標的細胞。
ウェル当たりR10培地中2×10-7Mの高親和性c11c6 HIV Gag TCR又は親HIV Gag TCR。
ウェル当たりR10培地中5000のOX84ポリクローナルエフェクターT細胞株。
コントロール:
無関係の可溶性TCR(HLA-A*0201−Tax特異的TCR及びHLA-A*0201−NY-ESO特異的TCR)又は高親和性 HIV Gag TCRに代えた上記と同じもの。
(a)抗IFNγ捕捉抗体及び(b)抗TNFα捕捉抗体で被覆したBDTM Cytometric Beadsを製造業者の指示書に従い調製した。
次いで、以下の添加物を含むアッセイチューブを調製した:
BDアッセイ希釈剤中の50μlの抗IFNγ及び抗TNFα混合BDTM Cytometric Beads
50μlのPE検出試薬
T細胞活性化アッセイウェルから採取した50μlの捕捉上清(試験サンプル)、
又は
ストック標準の系列希釈により一連の濃度で調製した50μlのIFNγ及びTNFα混合標準(較正標準)
上記CTL活性化アッセイに使用した同じ試薬及び方法を使用した。但し、2000のOX84ポリクローナルエフェクターT細胞を各T細胞活性化アッセイに使用し、非感染Toリンパ芽球様細胞(10-10〜10-8MのSLYNTVATLペプチドでパルス)を標的細胞として使用した。
可溶性の高親和性c11c6 HIV Gag TCRは、IFN-γ産生及びTNF-α産生により測定したところ、HIV感染To細胞の存在下で、SLYNTVATL−HLA-A*0201反応性OX84ポリクローナルT細胞株の活性化を強力に阻害した(図19を参照)。
可溶性の高親和性c11c6 HIV Gag TCRは、IFN-γ産生及びTNF-α産生により測定したところ、SLYNTVATLでパルスした非感染To細胞の存在下で、SLYNTVATL−HLA-A*0201反応性OX84ポリクローナルT細胞株の活性化を強力に阻害した(図20を参照)。
ペプチドパルスしたT2リンパ芽球様細胞上のSLYNTVATL−HLA-A*0201抗原の数を、可溶性の高親和性c11c6 HIV Gag TCRを用いる単一分子蛍光顕微鏡法により決定した(1つの蛍光シグナルは、標的細胞表面上の同族pMHCリガンドに結合した単一の標識TCRに関連するとの仮定に基づく)。このことは、ビオチン化TCRを用いて抗原発現ガン細胞を標的し、その後、細胞結合TCRをストレプトアビジン−Rフィコエリトリン(PE)コンジュゲートにより標識することによって容易となった。次いで、個々のPE分子を、三次元蛍光顕微鏡法により撮像した。
図21に示されるように、上記方法を使用して、ペプチドパルスしたT2細胞の表面上のSLYNTVATL−HLA-A*0201抗原に結合した高親和性c11c6 HIV Gag TCRの撮像に成功した。これら結果は、高親和性c6c11 HIV Gag TCRを使用する、SLYNTVATLペプチドでパルスした細胞上のエピトープを計数するための閾値が約10-9Mペプチドであることを示す。
Claims (55)
- T細胞レセプター(TCR)が、1μMより少ないか等しいSLYNTVATL−HLA-A*0201複合体に対するKDを有し及び/又は1×10-3 S-1かそれより遅いSLYNTVATL−HLA-A*0201複合体に対する解離速度(koff)を有することを特徴とするSLYNTVATL−HLA-A*0201への結合特性を有し且つ少なくとも1つのTCRα鎖可変ドメイン及び/又は少なくとも1つのTCRβ鎖可変ドメインを含有する(但し、該TCRが細胞により提示され且つ配列番号1及び2を含んでなる場合には該細胞は天然型T細胞ではない)TCR。
- α鎖可変ドメイン及びTCRβ鎖可変ドメインの両方を含んでなる請求項1に記載のTCR。
- αα又はββのホモダイマーである請求項1に記載のTCR。
- 前記KD及び/又はkoffが表面プラズモン共鳴により測定される請求項1〜3のいずれか1項に記載のT細胞レセプター(TCR)。
- 少なくとも1つの相補性決定領域において、親HIV Gag TCRのα鎖可変ドメイン(配列番号1)及び/又はβ鎖可変ドメイン(配列番号2)に対して変異している請求項1〜4のいずれか1項に記載のTCR。
- 少なくとも1つの可変ドメインフレームワーク領域において、親HIV Gag TCRのα鎖可変領域(配列番号1)及び/又はβ鎖可変領域(配列番号2)に対して変異している請求項1〜5のいずれか1項に記載のTCR。
- 配列番号1に示す番号付けを用いて、α鎖可変領域のアミノ酸95T、96N、97S、98G及び100Aのうち1つ又はそれより多くが変異している請求項1〜6のいずれか1項に記載のTCR。
- 配列番号2に示す番号付けを用いて、β鎖可変領域のアミノ酸51Y、52E、53E及び54Eのうち1つ又はそれより多くが変異している請求項1〜7のいずれか1項に記載のTCR。
- 配列番号1に示す番号付けを用いて、α鎖可変領域のアミノ酸95S、95G、96A、97H、98D又は100Sのうち1つ又はそれより多くを含んでなる請求項1〜6のいずれか1項に記載のTCR。
- 配列番号2に示す番号付けを用いて、β鎖可変領域のアミノ酸51V、51A、52R、52L、53G又は54Vのうち1つ又はそれより多くを含んでなる請求項1〜6及び9のいずれか1項に記載のTCR。
- 1つ又はそれより多くの表現型上サイレントな置換を任意に含んでもよい、配列番号11〜13に示すα鎖可変領域アミノ酸配列の1つを含んでなる請求項1〜6のいずれか1項に記載のTCR。
- 1つ又はそれより多くの表現型上サイレントな置換を任意に含んでもよい、配列番号14〜15に示すβ鎖可変領域アミノ酸配列の1つを含んでなる請求項1〜6及び11のいずれか1項に記載のTCR。
- 1つ又はそれより多くの表現型上サイレントな置換を任意に含んでもよい、配列番号19に示すα鎖定常ドメインアミノ酸配列及び/又は配列番号20及び21に示すβ鎖定常ドメインアミノ酸配列の1つを更に含んでなる請求項1〜13のいずれか1項に記載のTCR。
- 二量体T細胞レセプター(dTCR)又は単鎖T細胞レセプター(scTCR)である請求項1〜14のいずれか1項に記載のTCR。
- TCRα鎖可変領域に相当するアミノ酸配列により構成される第1のセグメントと、
TCRβ鎖定常ドメイン細胞外配列に相当するアミノ酸配列のN末端に融合したTCRβ鎖可変領域配列に相当するアミノ酸配列により構成される第2のセグメントと、
該第1のセグメントのC末端を該第2のセグメントのN末端に連結するリンカー配列と
を含んでなるscTCRである請求項4〜15のいずれか1項に記載のTCR。 - TCRβ鎖可変領域に相当するアミノ酸配列により構成される第1のセグメントと、
TCRα鎖定常ドメイン細胞外配列に相当するアミノ酸配列のN末端に融合したTCRα鎖可変領域配列に相当するアミノ酸配列により構成される第2のセグメントと、
該第1のセグメントのC末端を該第2のセグメントのN末端に連結するリンカー配列と
を含んでなるscTCRである請求項4〜15のいずれか1項に記載のTCR。 - 前記第1の鎖と前記第2の鎖との間にジスルフィド結合を更に含んでなり、該ジスルフィド結合が天然型αβT細胞レセプター中に等価物を有さないジスルフィド結合であり、前記リンカー配列の長さ及び該ジスルフィド結合の位置が、前記第1のセグメント及び前記第2のセグメントの可変ドメイン配列が天然型αβT細胞レセプター中と実質的に同様に相互に配向するような長さ及び位置である請求項16又は17に記載のTCR。
- 結合性部分において、前記リンカー配列が、前記第1のセグメントのC末端を前記第2のセグメントのN末端に連結する請求項16〜18のいずれか1項に記載のscTCR。
- 結合性部分において、前記リンカー配列が式-PGGG-(SGGGG)5-P- (配列番号17)又は-PGGG-(SGGGG)6-P- (配列番号18) (式中、Pはプロリンであり、Gはグリシンであり、Sはセリンである)を有する請求項16〜19のいずれか1項に記載のscTCR。
- TCRα鎖可変領域配列に相当する配列がTCRα鎖定常ドメイン細胞外配列に相当する配列のN末端に融合した第1のポリペプチドと、
TCRβ鎖可変領域配列に相当する配列がTCRβ鎖定常ドメイン細胞外配列に相当する配列のN末端に融合した第2のポリペプチドと
を含んでなり、該第1のポリペプチド及び該第2のポリペプチドが、天然型αβT細胞レセプター中に等価物を有さないジスルフィド結合により連結しているdTCRである請求項1、2及び4〜15のいずれか1項に記載のTCR。 - 前記ジスルフィド結合が前記定常ドメイン配列のアミノ酸残基同士を連結し、該ジスルフィド結合が天然型TCR中に等価物を有さない請求項21に記載のTCR。
- 前記ジスルフィド結合が、天然型TCRにおいてβ炭素原子が0.6nm未満離れているアミノ酸残基に相当するシステイン残基同士の間にある請求項22に記載のTCR。
- 前記ジスルフィド結合が、TRAC*01のエキソン1のThr 48及びTRBC1*01若しくはTRBC2*01のエキソン1のSer 57又はこれらの非ヒト等価物から置換されたシステイン残基同士間にある請求項22に記載のTCR。
- 前記dTCR又はscTCRの結合性部分が、天然型TCR中でジスルフィド結合により連結される残基に相当する残基同士間のジスルフィド結合を含む請求項15〜24のいずれか1項に記載のTCR。
- 前記dTCR又はscTCRの結合性部分が、天然型TCRの膜貫通配列に相当する配列も細胞質配列に相当する配列も含まない請求項14〜23のいずれか1項に記載のTCR。
- 少なくとも1つのポリアルキレングリコール鎖と結合している請求項1〜26のいずれか1項に記載のTCR。
- 前記ポリアルキレングリコール鎖が共有的に連結している請求項27に記載のTCR。
- 前記ポリアルキレングリコール鎖が少なくとも2つのポリエチレングリコール反復単位を含んでなる請求項27又は28に記載のTCR。
- α鎖又はβ鎖のC末端又はN末端に反応性システインを更に含んでなる請求項1〜29のいずれか1項に記載のTCR。
- 治療剤又は検出可能部分と結合している請求項1〜30のいずれか1項に記載のTCR。
- 治療剤又は検出可能部分と共有的に連結している請求項31に記載のTCR。
- 治療剤又は検出可能部分が、一方又は両方のTCR鎖のC末端に共有的に連結している請求項31に記載のTCR。
- 免疫エフェクター分子である治療剤と結合している請求項31〜33のいずれか1項に記載のTCR。
- 前記免疫エフェクター分子がサイトカインである請求項34に記載のTCR。
- 前記免疫エフェクター分子がIL-2又はその機能的変形体若しくはフラグメントである請求項34に記載のTCR。
- 前記治療剤が細胞毒性剤である請求項31〜33のいずれか1項に記載のTCR。
- 前記治療剤が放射性核種である請求項31〜33のいずれか1項に記載のTCR。
- 請求項1〜38のいずれかに記載の少なくとも2つのTCRを含んでなる多価TCR複合体。
- 非ペプチド性ポリマー鎖又はペプチド性リンカー配列により連結した請求項1〜39のいずれかに記載の少なくとも2つのTCRを含んでなる多価TCR複合体。
- 前記ポリマー鎖又はペプチド性リンカー配列が、各TCRの可変領域配列中に位置しないアミノ酸残基同士間に伸びている請求項40に記載のTCR複合体。
- 前記TCRが、ポリアルキレングリコール鎖又はヒト多量体化ドメイン由来のペプチド性リンカーにより連結されている請求項40又は41に記載のTCR複合体。
- 二価アルキレンスペーサ基が、前記ポリアルキレングリコール鎖と前記複合体のTCRへのその結合点との間に位置する請求項42に記載のTCR複合体。
- 前記ポリアルキレングリコール鎖が、少なくとも2つのポリエチレングリコール反復単位を含んでなる請求項40又は41に記載のTCR複合体。
- 請求項1〜30のいずれかに記載の少なくとも2つのTCRを含んでなり、(i)該TCRの少なくとも1つが請求項31〜38のいずれか1項に記載のとおり治療剤と結合している多価TCR複合体。
- 請求項1〜26のいずれか1項に記載のTCRを含んでなる膜調製物。
- 請求項1〜26のいずれか1項に記載のTCRをコードする核酸を含んでなる発現ベクターを有する細胞。
- 請求項1〜45のいずれか1項に記載のTCR若しくは多価TCR複合体、又は請求項46に記載の膜調製物、又は複数の請求項47に記載の細胞を、医薬的に許容されるキャリアと共に含んでなる医薬組成物。
- AIDSに罹患している対象に、請求項1〜45のいずれか1項に記載のTCR若しくは多価TCR複合体、又は請求項46に記載の膜調製物、又は請求項1〜30のいずれか1項に記載のTCRの複数を提示する複数のT細胞の有効量を投与することを含んでなるAIDSの治療方法。
- TCR若しくは多価TCR複合体又はTCRを含んでなる膜調製物が、治療剤と結合した形態で投与される請求項49に記載の方法。
- 複数のTCRを提示する複数のT細胞が投与され、T細胞がCD8+T細胞である請求項49に記載の方法。
- AIDSの治療用組成物の製造における、請求項1〜45のいずれか1項に記載のTCR若しくは多価TCR複合体、又は請求項46に記載の膜調製物、又は複数の請求項47に記載の細胞の使用。
- TCR若しくは多価TCR複合体又はTCRを含んでなる膜調製物が治療剤と結合した形態で投与される請求項52に記載の使用。
- 複数のTCRを提示する複数のT細胞が投与され、該T細胞がCD8+T細胞である請求項52に記載の使用。
- (a)HIV Gag TCRのα鎖可変領域及びβ鎖可変領域を含んでなり、該α鎖可変領域及びβ鎖可変領域の一方又は両方が請求項7又は8で特定したアミノ酸の1つ又はそれより多くに変異を含んでなるTCRを作製し;
(b)該変異TCRをSLYNTVATL−HLA-A*0201と、該TCRのSLYNTVATL−HLA-A*0201への結合を可能にするに適切な条件下で接触させ、
相互作用のKD及び/又はkoffを測定する
ことを含んでなる、
(i)少なくとも1つのTCRα鎖可変領域及び/又は少なくとも1つのTCRβ鎖可変領域を含んでなり、(ii)1μMより少ないSLYNTVATL−HLA-A*0201複合体に対するKD及び/又は1×10-3より遅いSLYNTVATL−HLA-A*0201複合体に対する解離速度(koff)を有することを特徴とするSLYNTVATL−HLA-A*0201への結合特性を有する高親和性TCRを作製する方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB0506760A GB0506760D0 (en) | 2005-04-01 | 2005-04-01 | High affinity HIV TCRS |
GB0516487A GB0516487D0 (en) | 2005-08-10 | 2005-08-10 | High affinity HIV T cell receptors |
PCT/GB2006/001147 WO2006103429A2 (en) | 2005-04-01 | 2006-03-29 | High affinity hiv t cell receptors |
Related Child Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012049174A Division JP5612623B2 (ja) | 2005-04-01 | 2012-03-06 | 高親和性hivt細胞レセプター |
JP2014094723A Division JP5885220B2 (ja) | 2005-04-01 | 2014-05-01 | 高親和性hivt細胞レセプター |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2008535826A true JP2008535826A (ja) | 2008-09-04 |
JP2008535826A5 JP2008535826A5 (ja) | 2009-05-14 |
Family
ID=37053744
Family Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2008503585A Pending JP2008535826A (ja) | 2005-04-01 | 2006-03-29 | 高親和性hivt細胞レセプター |
JP2012049174A Expired - Fee Related JP5612623B2 (ja) | 2005-04-01 | 2012-03-06 | 高親和性hivt細胞レセプター |
JP2014094723A Expired - Fee Related JP5885220B2 (ja) | 2005-04-01 | 2014-05-01 | 高親和性hivt細胞レセプター |
Family Applications After (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012049174A Expired - Fee Related JP5612623B2 (ja) | 2005-04-01 | 2012-03-06 | 高親和性hivt細胞レセプター |
JP2014094723A Expired - Fee Related JP5885220B2 (ja) | 2005-04-01 | 2014-05-01 | 高親和性hivt細胞レセプター |
Country Status (16)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US8378074B2 (ja) |
EP (4) | EP2301964A1 (ja) |
JP (3) | JP2008535826A (ja) |
CN (2) | CN105461802A (ja) |
AU (1) | AU2006228308B2 (ja) |
CA (1) | CA2602463C (ja) |
CY (1) | CY1118160T1 (ja) |
DK (1) | DK2275441T3 (ja) |
ES (2) | ES2699320T3 (ja) |
HU (1) | HUE032037T2 (ja) |
LT (1) | LT2275441T (ja) |
NZ (2) | NZ584523A (ja) |
PL (1) | PL2275441T3 (ja) |
PT (1) | PT2275441T (ja) |
SI (1) | SI2275441T1 (ja) |
WO (1) | WO2006103429A2 (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2018527954A (ja) * | 2015-09-15 | 2018-09-27 | アダプティミューネ リミテッドAdaptimmune Limited | Tcrライブラリ |
JP2019512252A (ja) * | 2016-03-23 | 2019-05-16 | イムノコア リミテッド | T細胞レセプター |
Families Citing this family (27)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20040191260A1 (en) | 2003-03-26 | 2004-09-30 | Technion Research & Development Foundation Ltd. | Compositions capable of specifically binding particular human antigen presenting molecule/pathogen-derived antigen complexes and uses thereof |
WO2003070752A2 (en) | 2002-02-20 | 2003-08-28 | Dyax Corporation | Mhc-peptide complex binding ligands |
WO2006036445A2 (en) | 2004-09-24 | 2006-04-06 | Trustees Of Dartmouth College | Chimeric nk receptor and methods for treating cancer |
US8119772B2 (en) * | 2006-09-29 | 2012-02-21 | California Institute Of Technology | MART-1 T cell receptors |
JP5292550B2 (ja) * | 2007-03-23 | 2013-09-18 | 静岡県 | T細胞レセプターβ鎖遺伝子及びα鎖遺伝子 |
WO2009125394A1 (en) * | 2008-04-09 | 2009-10-15 | Technion Research & Development Foundation Ltd. | Anti human immunodeficiency antibodies and uses thereof |
GB0816096D0 (en) * | 2008-09-04 | 2008-10-15 | Medigene Ltd | Diabetes t cell receptors |
US8933198B2 (en) | 2009-03-25 | 2015-01-13 | Altor Bioscience Corporation | HIV VPR-specific T cell receptors |
WO2011044186A1 (en) * | 2009-10-06 | 2011-04-14 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Human single-chain t cell receptors |
WO2011059836A2 (en) | 2009-10-29 | 2011-05-19 | Trustees Of Dartmouth College | T cell receptor-deficient t cell compositions |
US9273283B2 (en) | 2009-10-29 | 2016-03-01 | The Trustees Of Dartmouth College | Method of producing T cell receptor-deficient T cells expressing a chimeric receptor |
GB201016672D0 (en) | 2010-10-04 | 2010-11-17 | Electronic Shipping Solutions Ltd | Secure exchange/authentication of electronic documents |
EP2502934B1 (en) | 2011-03-24 | 2018-01-17 | Universitätsmedizin der Johannes Gutenberg-Universität Mainz | Single chain antigen recognizing constructs (scARCs) stabilized by the introduction of novel disulfide bonds |
US9833476B2 (en) | 2011-08-31 | 2017-12-05 | The Trustees Of Dartmouth College | NKP30 receptor targeted therapeutics |
EP3505537A1 (en) | 2012-05-07 | 2019-07-03 | Trustees of Dartmouth College | Anti-b7-h6 antibody, fusion proteins, and methods of using the same |
RU2020108070A (ru) * | 2012-07-27 | 2020-03-16 | Дзе Борд Оф Трастиз Оф Дзе Юниверсити Оф Иллинойс | Конструирование t-клеточных рецепторов |
EP3149031B1 (en) | 2014-05-29 | 2019-12-18 | The United States of America, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services | Anti-human papillomavirus 16 e7 t cell receptors |
CA2955984A1 (en) | 2014-07-22 | 2016-01-28 | The University Of Notre Dame Du Lac | Molecular constructs and uses thereof |
NL2014935B1 (en) | 2015-06-08 | 2017-02-03 | Applied Immune Tech Ltd | T cell receptor like antibodies having fine specificity. |
GB201516277D0 (en) * | 2015-09-15 | 2015-10-28 | Adaptimmune Ltd And Immunocore Ltd | TCR libraries |
EP3211003A1 (en) * | 2016-02-24 | 2017-08-30 | Institut Pasteur | T cell receptors from the hiv-specific repertoire, means for their production and therapeutic uses thereof |
KR102473964B1 (ko) | 2016-04-08 | 2022-12-06 | 이뮤노코어 리미티드 | T 세포 수용체 |
DE102017115966A1 (de) * | 2017-07-14 | 2019-01-17 | Immatics Biotechnologies Gmbh | Polypeptidmolekül mit verbesserter zweifacher Spezifität |
EP3428194B1 (en) | 2017-07-14 | 2021-08-18 | Immatics Biotechnologies GmbH | Improved dual specificity polypeptide molecule |
WO2019217837A1 (en) * | 2018-05-11 | 2019-11-14 | Memorial Sloan-Kettering Cancer Center | T cell receptors targeting pik3ca mutations and uses thereof |
WO2020028595A2 (en) * | 2018-07-31 | 2020-02-06 | Janux Therapeutics, Inc. | Inhibitory t cell receptor peptides and discovery methods |
WO2023156663A1 (en) * | 2022-02-20 | 2023-08-24 | Immunocore Limited | Hiv-specific binding molecules and tcr |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6759243B2 (en) * | 1998-01-20 | 2004-07-06 | Board Of Trustees Of The University Of Illinois | High affinity TCR proteins and methods |
IL139344A0 (en) * | 1998-05-19 | 2001-11-25 | Avidex Ltd | Soluble t cell receptor |
DE60203125T2 (de) | 2001-08-31 | 2006-04-06 | Avidex Ltd., Abingdon | Löslicher t zell rezeptor |
US7751825B2 (en) | 2002-06-27 | 2010-07-06 | Qualcomm Incorporated | Controlling geographic location information of devices operating in wireless communication systems |
NZ539225A (en) | 2002-10-09 | 2006-09-29 | Avidex Ltd | Single chain recombinant T cell receptors |
ATE432290T1 (de) * | 2002-11-09 | 2009-06-15 | Immunocore Ltd | T ZELL REZEPTOR ßDISPLAYß |
DE602005009825D1 (de) * | 2004-05-19 | 2008-10-30 | Medigene Ltd | Verfahren zur verbesserung von t-zellrezeptoren |
-
2006
- 2006-03-29 EP EP10014971A patent/EP2301964A1/en not_active Withdrawn
- 2006-03-29 LT LTEP10008612.3T patent/LT2275441T/lt unknown
- 2006-03-29 ES ES15171918T patent/ES2699320T3/es active Active
- 2006-03-29 CA CA2602463A patent/CA2602463C/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-03-29 PL PL10008612T patent/PL2275441T3/pl unknown
- 2006-03-29 HU HUE10008612A patent/HUE032037T2/en unknown
- 2006-03-29 ES ES10008612.3T patent/ES2599010T3/es active Active
- 2006-03-29 NZ NZ584523A patent/NZ584523A/en not_active IP Right Cessation
- 2006-03-29 US US11/887,536 patent/US8378074B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-03-29 SI SI200632107A patent/SI2275441T1/sl unknown
- 2006-03-29 WO PCT/GB2006/001147 patent/WO2006103429A2/en active Application Filing
- 2006-03-29 PT PT100086123T patent/PT2275441T/pt unknown
- 2006-03-29 DK DK10008612.3T patent/DK2275441T3/en active
- 2006-03-29 CN CN201510785932.6A patent/CN105461802A/zh active Pending
- 2006-03-29 AU AU2006228308A patent/AU2006228308B2/en not_active Ceased
- 2006-03-29 EP EP10008612.3A patent/EP2275441B8/en active Active
- 2006-03-29 CN CN201210563915.4A patent/CN103059128B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2006-03-29 EP EP06726555A patent/EP1863842A2/en not_active Withdrawn
- 2006-03-29 EP EP15171918.4A patent/EP2985291B1/en not_active Not-in-force
- 2006-03-29 NZ NZ561338A patent/NZ561338A/en not_active IP Right Cessation
- 2006-03-29 JP JP2008503585A patent/JP2008535826A/ja active Pending
-
2012
- 2012-03-06 JP JP2012049174A patent/JP5612623B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2013
- 2013-01-03 US US13/733,545 patent/US9255135B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2014
- 2014-05-01 JP JP2014094723A patent/JP5885220B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2016
- 2016-10-26 CY CY20161101092T patent/CY1118160T1/el unknown
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
J. IMMUNOL. METHODS, 277[1-2](2003) P.75-86, JPN6011047054, ISSN: 0002011341 * |
NATURE BIOTECH. 23[3] P.349-354, JPN6011047056, ISSN: 0002011342 * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2018527954A (ja) * | 2015-09-15 | 2018-09-27 | アダプティミューネ リミテッドAdaptimmune Limited | Tcrライブラリ |
JP2019512252A (ja) * | 2016-03-23 | 2019-05-16 | イムノコア リミテッド | T細胞レセプター |
JP7051699B2 (ja) | 2016-03-23 | 2022-04-11 | イムノコア リミテッド | T細胞レセプター |
US11440944B2 (en) | 2016-03-23 | 2022-09-13 | Immunocore Limited | Engineered immune-mobilizing T-cell receptors with enhanced affinity for HIV-1 Gag |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5885220B2 (ja) | 高親和性hivt細胞レセプター | |
EP1885754B1 (en) | T cell receptors which specifically bind to vygfvracl-hla-a24 | |
US8217144B2 (en) | High affinity Melan-A T cell receptors | |
JP4773434B2 (ja) | 高親和性ny−esot細胞受容体 | |
JP5149789B2 (ja) | Vygfvracl−hla−a24に特異的に結合するt細胞レセプター | |
JP5186209B2 (ja) | テロメラーゼ高親和性t細胞受容体 | |
JP2008520227A (ja) | 可溶性二官能性タンパク質 | |
CN101155829A (zh) | 高亲和力hiv t细胞受体 | |
AU2012211503B2 (en) | High affinity HIV T cell receptors | |
AU2013202288B2 (en) | High affinity HIV T cell receptors |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20090324 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20090324 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20100120 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20100120 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20110906 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20111202 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20111209 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120306 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20121204 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20130301 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20130308 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20130327 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20130403 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20140107 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140501 |