JP2008520195A - Stabilization of granules comprising active compounds - Google Patents

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Abstract

本発明は酵素顆粒を調製するプロセスに関し、酵素を含んでなる水性混合物を顆粒形成プロセスに供給する工程を含んでなるとともに、当該混合物のpHを7よりも高くするものである。  The present invention relates to a process for preparing enzyme granules, comprising a step of supplying an aqueous mixture comprising an enzyme to the granule formation process, and the pH of the mixture is higher than 7.

Description

本発明は、酵素含有混合物を含んでなる顆粒に関し、顆粒形成プロセスに供給される前記混合物のpHを7よりも高くするものである。本発明は更に、前記顆粒を製造するための方法に関する。   The present invention relates to granules comprising an enzyme-containing mixture, wherein the pH of the mixture supplied to the granule formation process is higher than 7. The invention further relates to a method for producing said granules.

活性化合物を乾燥固体粒子又は顆粒に導入することにより、前記活性化合物を不活性化から保護し、及び/又は、前記活性化合物からその周囲を保護することが、当該技術分野では知られている。更には、前記活性化合物含有粒子に安定剤を導入することにより、前記活性化合物が環境中の攻撃性物質によって不活性化するのを防ぐことも、当該技術分野では知られている。   It is known in the art to protect the active compound from inactivation and / or protect its surroundings from the active compound by introducing the active compound into dry solid particles or granules. Furthermore, it is also known in the art to prevent the active compound from being inactivated by aggressive substances in the environment by introducing a stabilizer into the active compound-containing particles.

EP206417には、酵素コア及びアルカリ緩衝塩被膜を含んでなる酵素顆粒状組成物が開示されている。   EP 206417 discloses an enzyme granular composition comprising an enzyme core and an alkaline buffer salt coating.

酵素含有造粒物の酵素活性の低下を防止する手法が、特開昭62−79298号公報に開示されている。本文献には、酵素を含有するコア部が、pH7〜11のアルカリ緩衝塩を含有する保護層で被覆されてなる酵素組成物が記載されている。   Japanese Patent Application Laid-Open No. 62-79298 discloses a technique for preventing a decrease in enzyme activity of an enzyme-containing granulated product. This document describes an enzyme composition in which a core containing an enzyme is coated with a protective layer containing an alkaline buffer salt having a pH of 7 to 11.

EP415652及びEP290223には、被覆された酵素を含んでなる漂白組成物が開示されており、また、この被膜に、pHが11よりも高いケイ酸ナトリウム等のアルカリ化合物が含まれていてもよい旨が開示されている。   EP 415652 and EP 290223 disclose a bleaching composition comprising a coated enzyme, and that the coating may contain an alkaline compound such as sodium silicate having a pH higher than 11. Is disclosed.

本発明の目的は、高い保存安定性を有する酵素含有顆粒を提供することである。   An object of the present invention is to provide enzyme-containing granules having high storage stability.

驚くべき事に、酵素顆粒形成プロセスに供給される酵素混合物のpHを7よりも高い値に調整することにより、酵素含有顆粒の保存安定性を改善できることが明らかになった。
即ち、本発明の第1の要旨によれば、酵素顆粒を調製する方法であって、
a)酵素を含有し、pHが7よりも高い水性液体を調製する工程と、
b)工程a)の水性液体を造粒機に供給する工程と、
c)前記造粒機で粒子を調製する工程とを含んでなる方法が提供される。
本発明は更に、上述の方法により得られうる顆粒と、当該顆粒の使用に関する。
Surprisingly, it has been found that the storage stability of enzyme-containing granules can be improved by adjusting the pH of the enzyme mixture fed to the enzyme granule formation process to a value higher than 7.
That is, according to the first aspect of the present invention, a method for preparing enzyme granules comprising:
a) preparing an aqueous liquid containing an enzyme and having a pH higher than 7;
b) supplying the aqueous liquid of step a) to the granulator;
c) preparing the particles with the granulator.
The invention further relates to the granules obtainable by the method described above and the use of the granules.

定義
本発明において「%RH」とは、空気の相対湿度であると解すべきである。100%RHとは、特定の温度における水分飽和空気のことであり、よって%RHとは、空気の水分飽和率を指すことになる。
Definitions In the present invention, “% RH” should be understood as the relative humidity of air. 100% RH refers to moisture saturated air at a specific temperature, and therefore% RH refers to the moisture saturation rate of air.

化合物又は物質の「定常吸湿度」(本発明においてはCHと略称される場合がある。)とは、前記化合物の飽和水溶液を前記化合物の固相と接した状態で所定温度の閉空間内に閉じ込めた場合における、前記飽和水溶液と平衡状態にある周辺空気の%RHであると解すべきである。この定義は「Handbook of chemistry and physics」、CRC Press, Inc., Cleveland, USA, 58th edition, p E46, 1977-1978に拠るものである。これに従えば、ある化合物についてCH20℃=50%とは、化合物の飽和水溶液が20℃で湿度50%の空気と平衡状態になることを意味する。即ち、定常吸湿度とは、ある化合物の吸湿特性を表わす指標である。 The “steady moisture absorption” (sometimes abbreviated as CH in the present invention) of a compound or substance means that a saturated aqueous solution of the compound is in contact with the solid phase of the compound in a closed space at a predetermined temperature. It should be understood that it is the% RH of ambient air in equilibrium with the saturated aqueous solution when confined. This definition is based on "Handbook of chemistry and physics", CRC Press, Inc., Cleveland, USA, 58th edition, p E46, 1977-1978. According to this, CH 20 ° C. = 50% for a compound means that a saturated aqueous solution of the compound is in equilibrium with air at 20 ° C. and 50% humidity. That is, the steady moisture absorption is an index representing the moisture absorption characteristics of a certain compound.

本発明において酵素含有混合物の「pH」とは、酵素含有混合物を造粒プロセス/造粒機に供給する前に室温で測定された酵素含有水性混合物のpHであると解すべきである。   In the present invention, the “pH” of the enzyme-containing mixture should be understood as the pH of the enzyme-containing aqueous mixture measured at room temperature before feeding the enzyme-containing mixture to the granulation process / granulator.

本発明において「酵素含有混合物」は「酵素含有水性混合物」と同義であり、酵素を含有する水性液体であると解すべきである。当該混合物は、酵素以外の成分を含んでいてもよい。   In the present invention, “enzyme-containing mixture” is synonymous with “enzyme-containing aqueous mixture” and should be understood as an aqueous liquid containing an enzyme. The mixture may contain components other than the enzyme.

本発明において「酵素マトリックス」とは、酵素含有顆粒中のマトリックスであると解すべきである。「酵素含有混合物」との違いは、「酵素マトリックス」は製品顆粒、即ち酵素顆粒の調製後に得られる顆粒中に存在する、「酵素含有混合物」の乾燥形態であるという点にある。   In the present invention, “enzyme matrix” should be understood as a matrix in enzyme-containing granules. The difference from the “enzyme-containing mixture” is that the “enzyme matrix” is the dry form of the “enzyme-containing mixture” present in the product granules, ie the granules obtained after preparation of the enzyme granules.

本発明において「酵素濃縮物」とは、酵素の濃度を高める処理を施した発酵濾過液であると解すべきである。   In the present invention, the “enzyme concentrate” should be understood as a fermentation filtrate that has been subjected to a treatment for increasing the concentration of the enzyme.

序論
顆粒に含まれる酵素の安定性は、保存時の周辺環境の影響を受ける。これは前記安定性を低下させる化学的又は物理的な因子となるからである。特に湿度は、酵素含有顆粒の安定性にとって重要な因子である。あまりに高い湿度は、前記安定性に対して好ましくない影響を与える。
Introduction The stability of the enzymes contained in the granules is affected by the surrounding environment during storage. This is because it becomes a chemical or physical factor that lowers the stability. In particular, humidity is an important factor for the stability of enzyme-containing granules. Too high humidity has an unfavorable effect on the stability.

通常、酵素の造粒に使用される酵素濃縮物のpHは、6未満に調整される。これは、微生物の安定性が弱酸性環境下で向上することが知られているためである。   Usually, the pH of the enzyme concentrate used for enzyme granulation is adjusted to less than 6. This is because it is known that the stability of microorganisms is improved in a weakly acidic environment.

我々は、驚くべきことに、酵素顆粒の製剤プロセスに使用される酵素含有水性液体のpHを高くすることにより、酵素含有顆粒の保存安定性を著しく改善できることを見出した。このようにpHを高くしても、酵素が損なわれることはないことが見出された。酵素顆粒の製剤時に酵素含有液体のpHを高くすることにより、顆粒の保存後の残存酵素活性が著しく向上する。   We have surprisingly found that the storage stability of enzyme-containing granules can be significantly improved by increasing the pH of the enzyme-containing aqueous liquid used in the formulation process of enzyme granules. It was found that the enzyme was not impaired even when the pH was increased in this way. By increasing the pH of the enzyme-containing liquid during the preparation of enzyme granules, the residual enzyme activity after storage of the granules is significantly improved.

我々は更に、追加の水分障壁、例えば塩被膜を組み合わせることにより、保存安定性がより一層向上し、より高い残存酵素活性が得られることを見出した。この顕著な改善は、相対湿度が高い場合にも同様にみられる。   We have further found that combining additional moisture barriers, such as salt coatings, further improves storage stability and provides higher residual enzyme activity. This significant improvement is seen as well when the relative humidity is high.

本発明の顆粒
本発明は、コア及び被膜を含んでなる顆粒に関する。ここで、前記コアは、酵素含有水性混合物の形態で顆粒形成プロセスに加えられた酵素を含んでなり、前記混合物は7よりも高いpHを有する。
TECHNICAL FIELD The present invention relates to a granule comprising a core and a coating. Here, the core comprises an enzyme added to the granulation process in the form of an enzyme-containing aqueous mixture, the mixture having a pH higher than 7.

本発明の顆粒は酵素マトリックスを含んでなる。酵素マトリックスは、酵素を含有し、また、追加の造粒材料を含有していてもよい水性酵素含有混合物から調製される。前記顆粒は更に、少なくとも一種の被膜、特に塩被膜を含んでいてもよい。酵素マトリックスは前記顆粒のコアに存在するが、非活性コア粒子上に導入されていてもよく、コア自体であってもよい。本発明の特定の実施形態によれば、非活性コア上に酵素層が形成される。   The granule of the present invention comprises an enzyme matrix. The enzyme matrix is prepared from an aqueous enzyme-containing mixture that contains the enzyme and may contain additional granulating material. Said granules may further comprise at least one coating, in particular a salt coating. The enzyme matrix is present in the core of the granule, but it may be introduced on non-active core particles or the core itself. According to certain embodiments of the invention, an enzyme layer is formed on the inactive core.

本発明の顆粒は、従来公知のpHが7未満、例えば6未満の酵素含有水性混合物を用いて得られた顆粒に比べて、保存安定性が向上している。   The granule of the present invention has improved storage stability as compared to a granule obtained by using a conventionally known enzyme-containing aqueous mixture having a pH of less than 7, for example, less than 6.

本発明の特定の実施形態によれば、本発明はコア及び被膜を含んでなる顆粒に関する。ここで、前記コアは、酵素含有水性混合物の形態で顆粒形成プロセスに加えられた酵素を含んでなり、前記混合物は7よりも高いpHを有する。得られる顆粒は、pHが7未満の酵素含有水性混合物を用いて調製された顆粒に比べて、保存安定性が向上している。本発明のより特定の実施形態は、コア及び被膜を含んでなる顆粒に関する。ここで前記コアは、酵素含有水性混合液の形態で造粒プロセスに加えられた酵素を含んでなる。   According to a particular embodiment of the invention, the invention relates to a granule comprising a core and a coating. Here, the core comprises an enzyme added to the granulation process in the form of an enzyme-containing aqueous mixture, the mixture having a pH higher than 7. The resulting granules have improved storage stability compared to granules prepared using an enzyme-containing aqueous mixture having a pH of less than 7. A more particular embodiment of the invention relates to a granule comprising a core and a coating. The core here comprises the enzyme added to the granulation process in the form of an enzyme-containing aqueous mixture.

本発明の顆粒は、保存時の残存酵素活性に優れており、40℃の密閉ジャー内で13週間保存した後に測定される当該活性の増分が、5%超、例えば10%超、更には20%超増加する。特定の実施形態によれば、40℃の密閉ジャー内で13週間保存した後における前記顆粒の残存酵素安定性が、50%超増加する。本発明のより特定の実施形態によれば、40℃の密閉ジャー内で13週間保存した後における、酵素含有コア粒子の残存酵素活性は、5%以上、例えば10%以上、15%以上、20%以上、更には30%以上である。   The granules of the present invention are excellent in residual enzyme activity during storage, and the increase in the activity measured after storage for 13 weeks in a sealed jar at 40 ° C. is more than 5%, for example more than 10%, or even 20 Increase by more than%. According to certain embodiments, the residual enzyme stability of the granules after storage for 13 weeks in a sealed jar at 40 ° C. is increased by more than 50%. According to a more particular embodiment of the present invention, the residual enzyme activity of the enzyme-containing core particles after storage for 13 weeks in a sealed jar at 40 ° C. is 5% or more, such as 10% or more, 15% or more, 20 % Or more, and further 30% or more.

本発明の特定の実施形態によれば、40℃の密閉ジャー内で13週間保存した後における本発明の顆粒の残存酵素活性は、50%以上、例えば60%以上、70%以上、80%以上、更には90%以上である。   According to a particular embodiment of the invention, the residual enzyme activity of the granules of the invention after storage for 13 weeks in a sealed jar at 40 ° C. is 50% or more, for example 60% or more, 70% or more, 80% or more. Furthermore, it is 90% or more.

酵素含有混合物
酵素含有混合物は、酵素を含んでなる液体である。酵素を含有するとともに、追加の造粒材料を含有していてもよく、更に水等の液体を含んでいる。
Enzyme-containing mixture An enzyme-containing mixture is a liquid comprising an enzyme. While containing an enzyme, it may contain an additional granulating material, and further contains a liquid such as water.

本発明の特定の実施形態によれば、前記酵素含有混合物は、酵素濃縮物である。本発明の別の実施形態によれば、前記酵素含有混合物は、追加の造粒材料と混合された酵素濃縮物である。造粒プロセスの前に、前記酵素含有混合物のpHを、7よりも高く、例えば8よりも高く、更には9よりも高く、例えば更には10よりも高い値に調整する。本発明の特定の実施形態によれば、酵素含有混合物のpHは7から13の間である。本発明のより特定の実施形態によれば、酵素含有混合物のpHは8から12の間である。本発明の更に特定の実施形態によれば、酵素含有混合物のpHは9から12の間である。本発明の特に特定の実施形態によれば、酵素含有混合物のpHは9から11の間である。本発明の最も特定の実施形態によれば、酵素含有混合物のpHは10から11の間である。本発明の特定の実施形態によれば、酵素含有混合物のpHは12未満、特に11未満である。   According to a particular embodiment of the invention, the enzyme-containing mixture is an enzyme concentrate. According to another embodiment of the invention, the enzyme-containing mixture is an enzyme concentrate mixed with additional granulation material. Prior to the granulation process, the pH of the enzyme-containing mixture is adjusted to a value higher than 7, for example higher than 8, even higher than 9, such as higher than 10. According to a particular embodiment of the invention, the pH of the enzyme-containing mixture is between 7 and 13. According to a more particular embodiment of the invention, the pH of the enzyme-containing mixture is between 8 and 12. According to a more particular embodiment of the invention, the pH of the enzyme-containing mixture is between 9 and 12. According to a particularly particular embodiment of the invention, the pH of the enzyme-containing mixture is between 9 and 11. According to the most particular embodiment of the invention, the pH of the enzyme-containing mixture is between 10 and 11. According to a particular embodiment of the invention, the pH of the enzyme-containing mixture is less than 12, in particular less than 11.

前記酵素含有混合物をアルカリpHにするには、アルカリ化合物、例えば水酸化ナトリウムを混合物に加えればよい。   In order to bring the enzyme-containing mixture to an alkaline pH, an alkali compound such as sodium hydroxide may be added to the mixture.

酵素の他に、酵素含有マトリックスは、任意の手法で構成することができ、また、混合物に所望の機能特性を付与する、任意の材料から構成することができる。例えば、前記混合物は、水性媒体に導入することにより容易に酵素を放出させる材料からなっていてもよい。好ましい一実施形態によれば、前記コア粒子は、非活性コアの表面に前記酵素含有混合物を吸着させ、及び/又は、前記酵素含有混合物を塗布することにより構成される。   In addition to enzymes, the enzyme-containing matrix can be constructed in any manner and can be composed of any material that imparts the desired functional properties to the mixture. For example, the mixture may be made of a material that is easily released by introduction into an aqueous medium. According to a preferred embodiment, the core particle is constituted by adsorbing the enzyme-containing mixture on the surface of a non-active core and / or applying the enzyme-containing mixture.

別の特定の実施形態によれば、前記コアの調製は、所謂 T-granulate と同様に行なうことができる。これは、酵素と造粒材料とを混合することにより、コア全体に亘って酵素が導入された顆粒を形成したものであり、例えばUS4,106,991の Example 1 等に記載されている。前記コアの調製には、従来の任意の手法及び非酵素材料を用いることができる。従来公知のコア及び材料の例としては、中でも、(特に)US4,106,991、EP170360、EP304332、EP304331、EP458849、EP458845、WO97/39116、WO92/12645、WO89/08695、WO89/08694、WO87/07292、WO91/06638、WO92/13030、WO93/07260、WO93/07263、WO96/38527、WO96/16151、WO97/23606、US5,324,649、US4,689,297、EP206417、EP193829、DE4344215、DE4322229A、DD263790、特開昭61−162185号公報、特開昭58−179492号公報等に記載のものが挙げられる。   According to another particular embodiment, the preparation of the core can be carried out in the same way as so-called T-granulate. This is a mixture of an enzyme and a granulating material to form granules into which the enzyme has been introduced over the entire core, and is described in, for example, Example 1 of US Pat. No. 4,106,991. For the preparation of the core, any conventional technique and non-enzymatic material can be used. Examples of previously known cores and materials include (among others) US 4,106,991, EP 170360, EP 304332, EP 304331, EP 458849, EP 458845, WO 97/39116, WO 92/12645, WO 89/08694, WO 89/08694, WO 87 / 07292, WO91 / 06638, WO92 / 13030, WO93 / 07260, WO93 / 07263, WO96 / 38527, WO96 / 16151, WO97 / 23606, US5,324,649, US4,689,297, EP206417, EP193829, DE43444215, DE43222229A, Examples thereof include DD 263790, JP-A-61-2162185, JP-A-58-179492, and the like.

アルカリ化合物
酵素含有混合物に加えることにより7よりも高いpHを付与する化合物であれば、任意の化合物を用いて、酵素含有混合物のpHを調整することができる。好適な化合物としては塩基、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、アルカリ緩衝塩等が挙げられる。
Alkaline compound If it is a compound which gives pH higher than 7 by adding to an enzyme containing mixture, the pH of an enzyme containing mixture can be adjusted using arbitrary compounds. Suitable compounds include bases such as sodium hydroxide, potassium hydroxide, alkali buffer salts and the like.

好適な緩衝塩としては、塩化カリウム、炭酸カリウム、ピロリン酸四カリウム、トリポリリン酸カリウム、炭酸水素ナトリウム及び炭酸水素ナトリウムが挙げられる。その他の好適な塩を用いてもよい。   Suitable buffer salts include potassium chloride, potassium carbonate, tetrapotassium pyrophosphate, potassium tripolyphosphate, sodium bicarbonate and sodium bicarbonate. Other suitable salts may be used.

酵素
本発明において、酵素は如何なる酵素であってもよく、また、複数種の酵素の組み合わせであってもよい。よって、「酵素」という場合には、通常は単一の酵素又は複数種の酵素の組み合わせを含むものと解すべきである。酵素の変異種(例えば、組み換え技術により作製されるもの)も、この「酵素」の語義に含まれると解すべきである。このような酵素の変異種の例は、EP251,446(Genencor)、WO91/00345(Novo Nordisk)、EP525,610(Solvay)、及びWO94/02618(Gist-Brocades NV)等に開示されている。
Enzyme In the present invention, the enzyme may be any enzyme, or a combination of a plurality of types of enzymes. Thus, the term “enzyme” should normally be understood to include a single enzyme or a combination of multiple enzymes. It should be understood that enzyme variants (eg, those produced by recombinant techniques) are also included in the meaning of this “enzyme”. Examples of such enzyme variants are disclosed in EP251,446 (Genencor), WO91 / 00345 (Novo Nordisk), EP525,610 (Solvay), WO94 / 02618 (Gist-Brocades NV) and the like.

酵素は Enzyme Nomenclature(NC-IUBMB、1992)ハンドブックに基づいて分類される。また、インターネットの ENZYME サイト(http://www.expasv.ch/enzyme/)も参照されたい。ENZYME は、酵素の命名法に関する情報のリポジトリである。これは主に、国際生化学・分子生物学連合(International Union of Biochemistry and Molecular Biology:IUB-MB)のNomenclature Committeeの勧告(Academic Press, Inc., 1992)に基づいており、特徴付け及びEC(Enzyme Commission)番号の付与が行なわれた各種の酵素が記載されている(Bairoch A. The ENZYME database, 2000, Nucleic Acids Res 28:304-305)。このIUBMB Enzyme Nomenclature は、酵素の基質特異性に基づくものであるが、酵素の分子機能に基づいている場合もある。こうした分類法は酵素の構造的特徴を反映したものではない。   Enzymes are classified based on the Enzyme Nomenclature (NC-IUBMB, 1992) handbook. See also the Internet ENZYME site (http://www.expasv.ch/enzyme/). ENZYME is a repository of information on enzyme nomenclature. This is mainly based on the recommendations of the Nomenclature Committee of the International Union of Biochemistry and Molecular Biology (IUB-MB) (Academic Press, Inc., 1992). Enzyme Commission) Various enzymes that have been assigned numbers are described (Bairoch A. The ENZYME database, 2000, Nucleic Acids Res 28: 304-305). This IUBMB Enzyme Nomenclature is based on the substrate specificity of the enzyme, but may also be based on the molecular function of the enzyme. These taxonomies do not reflect the structural characteristics of the enzyme.

特定のグリコシドヒドロラーゼ酵素、例えばエンドグルカナーゼ、キシラナーゼ、ガラクタナーゼ、マンナナーゼ、デキストラナーゼ、及びα−ガラクトシダーゼ等についての別の分類法として、アミノ酸配列の類似度に基づくファミリーによる分類法が、数年前から提案されている。これらは現在、90の異なるファミリーに分類されている。CAZy(ModO)インターネットサイト(Coutinho, P.M. & Henrissat, B. (1999))Carbohydrate-Active Enzymes サーバ(URL: http://afmb.cnrs-mrs.fr/~cazy/CAZY/index.html)を参照されたい(対応文献:Coutinho, P.M. & Henrissat, B. (1999) Carbohydrate-active enzymes: an integrated database approach. In "Recent Advances in Carbohydrate Bioengineering", H.J. Gilbert, G. Davies, B. Henrissat and B. Svensson eds., The Royal Society of Chemistry, Cambridge, pp. 3-12;Coutinho, P.M. & Henrissat, B. (1999) The modular structure of cellulases and other carbohydrate-active enzymes: an integrated database approach. In "Genetics, Biochemistry and Ecology of Cellulose Degradation"., K. Ohmiya, K. Hayashi, K. Sakka, Y. Kobayashi, S. Karita and T. Kimura eds., Uni Publishers Co., Tokyo, pp. 15-23)。   Another taxonomy for certain glycoside hydrolase enzymes, such as endoglucanase, xylanase, galactanase, mannanase, dextranase, and α-galactosidase, has been a family-based taxonomy several years ago. Proposed by These are currently classified into 90 different families. See CAZy (ModO) Internet site (Coutinho, PM & Henrissat, B. (1999)) Carbohydrate-Active Enzymes server (URL: http://afmb.cnrs-mrs.fr/~cazy/CAZY/index.html) (Corinho, PM & Henrissat, B. (1999) Carbohydrate-active enzymes: an integrated database approach. In "Recent Advances in Carbohydrate Bioengineering", HJ Gilbert, G. Davies, B. Henrissat and B. Svensson eds., The Royal Society of Chemistry, Cambridge, pp. 3-12; Coutinho, PM & Henrissat, B. (1999) The modular structure of cellulases and other carbohydrate-active enzymes: an integrated database approach. In "Genetics, Biochemistry and Ecology of Cellulose Degradation "., K. Ohmiya, K. Hayashi, K. Sakka, Y. Kobayashi, S. Karita and T. Kimura eds., Uni Publishers Co., Tokyo, pp. 15-23).

本発明の顆粒に導入してもよい酵素の種類としては、オキシドレダクターゼ(EC 1.-.-.-)、トランスフェラーゼ(EC 2.-.-.-)、ヒドロラーゼ(EC 3.-.-.-)、リアーゼ(EC 4.-.-.-)、イソメラーゼ(EC 5.-.-.-)、及びリガーゼ(EC 6.-.-.-)が挙げられる。   The types of enzymes that may be introduced into the granules of the present invention include oxidoreductase (EC 1 .-.-.-), transferase (EC 2 .-.-.-), hydrolase (EC 3 .-.-. -), Lyase (EC 4 .-.-.-), isomerase (EC 5 .-.-.-), and ligase (EC 6 .-.-.-).

本発明は特にオキシドレダクターゼに有用であることが分かっている。
本発明において好適なオキシドレダクターゼとしては、ペルオキシダーゼ(EC 1.1.1.1)、ラッカーゼ(EC 1.10.3.2)、及びグルコースオキシダーゼ(EC 1.1.3.4)が挙げられる。市販のオキシドレダクターゼ(EC 1.-.-.-)の例として、GluzymeTM(Novozymes A/S 社製酵素)が挙げられる。その他のオキシドレダクターゼは、別の業者から入手可能である。
The present invention has been found to be particularly useful for oxidoreductases.
Suitable oxidoreductases in the present invention include peroxidase (EC 1.1.1.1), laccase (EC 1.10.3.2), and glucose oxidase (EC 1.1.3.4). An example of a commercially available oxidoreductase (EC 1 .-.-.-) is Gluzyme (Novozymes A / S enzyme). Other oxidoreductases are available from other vendors.

好適なトランスフェラーゼとしては、以下の何れかのサブクラスに属するトランスフェラーゼが挙げられる。
a.一炭素基(one-carbon groups)を転移するトランスフェラーゼ(EC 2.1);
b.アルデヒド又はケトン残基を転移するトランスフェラーゼ(EC 2.2);アシルトランスフェラーゼ(EC 2.3);
c.グリコシルトランスフェラーゼ(EC 2.4);
d.メチル基以外のアルキル又はアリール基を転移するトランスフェラーゼ(EC 2.5);
e.窒素含有基を転移するトランスフェラーゼ(EC 2.6)。
Suitable transferases include those belonging to any of the following subclasses.
a. Transferases (EC 2.1) that transfer one-carbon groups;
b. Transferases that transfer aldehyde or ketone residues (EC 2.2); acyltransferases (EC 2.3);
c. Glycosyltransferase (EC 2.4);
d. A transferase that transfers an alkyl or aryl group other than a methyl group (EC 2.5);
e. A transferase that transfers a nitrogen-containing group (EC 2.6).

本発明において最も好適な種類のトランスフェラーゼとしては、トランスグルタミナーゼ(transglutaminase, protein-glutamine γ-glutamyltransferase;EC 2.3.2.13)が挙げられる。
他の好適なトランスフェラーゼの例は、WO96/06931(Novo Nordisk A/S)に記載されている。
The most preferred type of transferase in the present invention includes transglutaminase (protein-glutamine γ-glutamyltransferase; EC 2.3.2.13).
Examples of other suitable transferases are described in WO 96/06931 (Novo Nordisk A / S).

本発明は特にヒドロラーゼ、例えばフィターゼ(phytases)に有用であることが確認されている。   The invention has been found to be particularly useful for hydrolases such as phytases.

本発明において好適なヒドロラーゼとしては:カルボキシルエステルヒドロラーゼ(carboxylic ester hydrolases:EC 3.1.1.-)、例えばリパーゼ(EC 3.1.1.3);フィターゼ(EC 3.1.3.-)、例えば3−フィターゼ(EC 3.1.3.8)及び6−フィターゼ(EC 3.1.3.26);グリコシダーゼ(EC 3.2、これらは以下「カルボヒドラーゼ」と呼ぶ群に分類される。)、例えばα−アミラーゼ(EC 3.2.1.1);ペプチダーゼ(EC 3.4、プロテアーゼとも呼ばれる。);並びにその他のカルボニルヒドロラーゼ(carbonyl hydrolases)が挙げられる。市販のフィターゼの例としては、Bio-FeedTM Phytase(Novozymes)、RonozymeTM P(DSM Nutritional Products)、NatuphosTM(BASF)、FinaseTM(AB Enzymes)、及び PhyzymeTM product シリーズ(Danisco)が挙げられる。他の好適なフィターゼの例としては、WO98/28408、WO00/43503、及びWO03/066847に記載のものが挙げられる。 Suitable hydrolases in the present invention include: carboxyl ester hydrolases (EC 3.1.1.-), such as lipase (EC 3.1.1.3); phytase (EC 3.1.3.-), such as 3-phytase (EC 3.1.3.8) and 6-phytase (EC 3.1.3.26); glycosidases (EC 3.2, which are classified in the group hereinafter referred to as “carbohydrase”), such as α-amylase (EC 3.2.1.1); peptidase (EC 3.4, also called protease)); and other carbonyl hydrolases. Examples of commercially available phytases include Bio-Feed Phytase (Novozymes), Ronozyme P (DSM Nutritional Products), Natuphos (BASF), Finase (AB Enzymes), and Phyzyme product series (Danisco) . Examples of other suitable phytases include those described in WO 98/28408, WO 00/43503, and WO 03/066847.

本発明は特にカルボヒドラーゼ、例えばアミラーゼに有用であることが分かっている。   The present invention has been found to be particularly useful for carbohydrases, such as amylases.

ここで「カルボヒドラーゼ」という語は、特に五員及び六員環構造の炭化水素鎖(例えばスターチやセルロース)を分解可能な酵素(例えばグリコシダーゼ、EC 3.2)に加えて、炭化水素の異性化、例えばD−グルコース等の六員環構造からD−フルクトース等の五員環構造への異性化が可能な酵素をも指すものとして使用する。   Here, the term “carbohydrase” refers in particular to isomerization of hydrocarbons, for example in addition to enzymes (eg glycosidases, EC 3.2) capable of degrading 5- and 6-membered hydrocarbon chains (eg starch and cellulose). It is also used to indicate an enzyme capable of isomerization from a six-membered ring structure such as D-glucose to a five-membered ring structure such as D-fructose.

適切なカルボヒドラーゼを以下に挙げる(括弧内にEC番号を記す。):α−アミラーゼ(EC 3.2.1.1)、β−アミラーゼ(EC 3.2.1.2)、グルカン1,4−α−グルコシダーゼ(glucan 1,4-α-glucosidases;EC 3.2.1.3)、エンド−1,4−β−グルカナーゼ(endo-1,4-beta-glucanase、cellulases;EC 3.2.1.4)、エンド−1,3(4)−β−グルカナーゼ(endo-1,3(4)-β-glucanases;EC 3.2.1.6)、エンド−1,4−β−キシラナーゼ(endo-1,4-β-xylanases;EC 3.2.1.8)、デキストラナーゼ(dextranases;EC 3.2.1.11)、キチナーゼ(chitinases;EC 3.2.1.14)、ポリ−ガラクツロナーゼ(poly-galacturonases;EC 3.2.1.15)、リゾチーム(EC 3.2.1.17)、β−グルコシダーゼ(EC 3.2.1.21)、α−ガラクトシダーゼ(EC 3.2.1.22)、β−ガラクトシダーゼ(EC 3.2.1.23)、アミロ−1,6−グルコシダーゼ(amylo-1,6-glucosidases;EC 3.2.1.33)、キシラン1,4−キシロシダーゼ(xylan 1,4-β-xylosidases;EC 3.2.1.37)、グルカンエンド−1,3−β−D−グルコシダーゼ(glucan endo-1,3-β-D-glucosidases;EC 3.2.1.39)、α−デキストリンエンド−1,6−グルコシダーゼ(α-デキストリン endo-1,6-α-glucosidases;EC 3.2.1.41)、スクロースα−グルコシダーゼ(sucrose α-glucosidases;EC 3.2.1.48)、グルカンエンド−1,3−α−グルコシダーゼ(glucan endo-1,3-α-glucosidases;EC 3.2.1.59)、グルカン1,4−β−グルコシダーゼ(glucan 1,4-β-glucosidases;EC 3.2.1.74)、グルカンエンド−1,6−β−グルコシダーゼ(glucan endo-1,6-β-glucosidases;EC 3.2.1.75)、ガラクタナーゼ(galactanases;EC 3.2.1.89)、アラビナンエンド−1,5−α−L−アラビノシダーゼ(arabinan endo-1,5-α-L-arabinosidases;EC 3.2.1.99)、ラクターゼ(lactases;EC 3.2.1.108)、キトサナーゼ(chitosanases;EC 3.2.1.132)、及びキシロースイソメラーゼ(xylose isomerases;EC 5.3.1.5)。   Suitable carbohydrases are listed below (EC number in parentheses): α-amylase (EC 3.2.1.1), β-amylase (EC 3.2.1.2), glucan 1,4-α-glucosidase (glucan 1, 4-α-glucosidases (EC 3.2.1.3), endo-1,4-β-glucanase (endo-1,4-beta-glucanase, cellulases; EC 3.2.1.4), endo-1,3 (4) -β -Glucanase (endo-1,3 (4) -β-glucanases; EC 3.2.1.6), endo-1,4-β-xylanases (endo-1,4-β-xylanases; EC 3.2.1.8), dextra Dextranases (EC 3.2.1.11), chitinases (EC 3.2.1.14), poly-galacturonases (EC 3.2.1.15), lysozyme (EC 3.2.1.17), β-glucosidase (EC 3.2.1.21) ), Α-galactosidase (EC 3.2.1.22), β-galactosidase (EC 3.2.1.23), amylo-1,6-glucosida ses; EC 3.2.1.33), xylan 1,4-β-xylosidases (EC 3.2.1.37), glucan endo-1,3-β-D-glucosidase (glucan endo-1,3- β-D-glucosidases (EC 3.2.1.39), α-dextrin endo-1,6-glucosidase (α-dextrin endo-1,6-α-glucosidases; EC 3.2.1.41), sucrose α-glucosidase (sucrose α- glucosidases; EC 3.2.1.48), glucan endo-1,3-α-glucosidase (EC 3.2.1.59), glucan 1,4-β-glucosidase (glucan 1,4- β-glucosidases (EC 3.2.1.74), glucan endo-1,6-β-glucosidases (EC 3.2.1.75), galactanases (EC 3.2.1.89), arabi Nanenda-1,5-α-L-arabinosidase (arabinan endo-1,5-α-L-arabinosidases; EC 3.2.1.99), lactase lactases; EC 3.2.1.108), chitosanase (chitosanases; EC 3.2.1.132), and xylose isomerase (xylose isomerases; EC 5.3.1.5).

市販のプロテアーゼ(ペプチダーゼ)の例としては、KannaseTM、EverlaseTM、EsperaseTM、AlcalaseTM、NeutraseTM、DurazymTM、SavinaseTM、OvozymeTM、PyraseTM、Pancreatic Trypsin NOVO(PTN)、Bio-FeedTM Pro、及びClear-LensTM Pro(何れもNovozymes A/S, Bagsvaerd, Denmark から入手可能)が挙げられる。その他の好適なプロテアーゼとしては、WO01/58275及びWO01/58276に記載のものが挙げられる。 Examples of commercially available proteases (peptidases) include Kannase , Everlase , Esperase , Alcalase , Neutrase , Durazym , Savinase , Ovozyme , Pyrase , Pancreatic Trypsin NOVO (PTN), Bio-Feed Pro And Clear-Lens Pro (both available from Novozymes A / S, Bagsvaerd, Denmark). Other suitable proteases include those described in WO01 / 58275 and WO01 / 58276.

その他の市販のプロテアーゼとしては、RonozymeTM Pro、MaxataseTM、MaxacalTM、MaxapemTM、OpticleanTM、PropeaseTM、PurafectTM、及びPurafect OxTM(Genencor International Inc.、Gist-Brocades、BASF、又は DSM Nutritional Products から入手可能)が挙げられる。 Other commercially available proteases include Ronozyme Pro, Maxatase , Maxacal , Maxapem , Opticlean , Propease , Purafect , and Purafect Ox (Genencor International Inc., Gist-Brocades, BASF, or DSM Nutritional Products Available).

市販のリパーゼの例としては、LipexTM、LipoprimeTM、LipopanTM、LipolaseTM、LipolaseTM Ultra、LipozymeTM、PalataseTM、ResinaseTM、NovozymTM 435、及びLecitaseTM (何れも Novozymes A/S から入手可能)が挙げられる。 Examples of commercially available lipases include Lipex , Lipoprime , Lipopan , Lipolase , Lipolase Ultra, Lipozyme , Palatase , Resinase , Novozym 435, and Lecitase (all available from Novozymes A / S ).

その他の市販のリパーゼとしては、LumafastTM(Genencor International Inc. 社製 Pseudomonas mendocina lipase);LipomaxTM(Gist-Brocades/Genencor Int. Inc. 社製 Ps. pseudoalcaligenes lipase;及び Solvay Enzymes 社製 Bacillus sp. lipase が挙げられる。その他のリパーゼは他の業者から入手可能である。 Other commercially available lipases include Lumafast (Pseudomonas mendocina lipase from Genencor International Inc.); Lipomax (Pist. Pseudoalcaligenes lipase from Gist-Brocades / Genencor Int. Inc .; and Bacillus sp. Lipase from Solvay Enzymes. Other lipases are available from other vendors.

市販のカルボヒドラーゼの例としては、Alpha-GalTM、Bio-FeedTM Alpha、Bio-FeedTM Beta、Bio-FeedTM Plus、Bio-FeedTM Wheat、Bio-FeedTM Z、NovozymeTM 188、CarezymeTM、CelluclastTM、CellusoftTM、CelluzymeTM、CeremylTM、CitrozymTM、DenimaxTM、DezymeTM、DextrozymeTM、DuramylTM、EnergexTM、FinizymTM、FungamylTM、GamanaseTM、GlucanexTM、LactozymTM、LiquezymeTM、MaltogenaseTM、NatalaseTM、PentopanTM、PectinexTM、PromozymeTM、PulpzymeTM、NovamylTM、TermamylTM、AMGTM(Amyloglucosidase Novo)、MaltogenaseTM、SweetzymeTM、及び AquazymTM(何れもNovozymes A/S から入手可能)が挙げられる。その他のカルボヒドラーゼは別の業者から入手可能であり、その例としては、RoxazymeTM 及び RonozymeTM product シリーズ(DSM Nutritional Products)、AvizymeTM、PorzymeTM、及びGrindazymeTM product シリーズ(Danisco, Finnfeeds)、並びに、NatugrainTM(BASF)、PurastarTM、及び PurastarTM OxAm(Genencor) が挙げられる。 Examples of commercially available carbohydrases, Alpha-Gal TM, Bio- Feed TM Alpha, Bio-Feed TM Beta, Bio-Feed TM Plus, Bio-Feed TM Wheat, Bio-Feed TM Z, Novozyme TM 188, Carezyme TM, Celluclast TM, Cellusoft TM, Celluzyme TM , Ceremyl TM, Citrozym TM, Denimax TM, Dezyme TM, Dextrozyme TM, Duramyl TM, Energex TM, Finizym TM, Fungamyl TM, Gamanase TM, Glucanex TM, Lactozym TM, Liquezyme TM, Maltogenase TM , Natalase , Pentopan , Pectinex , Promozyme , Pulpzyme , Novamyl , Termamyl , AMG (Amyloglucosidase Novo), Maltogenase , Sweetzyme , and Aquazym (all available from Novozymes A / S) Can be mentioned. Other carbohydrases are available from other vendors, such as Roxazyme and Ronozyme product series (DSM Nutritional Products), Avizyme , Porzyme , and Grindazyme product series (Danisco, Finnfeeds), and Natugrain (BASF), Purastar , and Purastar OxAm (Genencor).

その他の市販の酵素としては、MannawayTM、PectawayTM、StainzymeTM、及び RenozymeTM が挙げられる。 Other commercially available enzymes include Mannaway , Pectaway , Stainzyme , and Renozyme .

本発明は特に、ラッカーゼ活性を示す酵素の製剤との関係で有用であることが分かっている。
ラッカーゼ活性を示す化合物としては、国際生化学・分子生物学連合(International Union of Biochemistry and Molecular Biology:IUB-MB)のNomenclature Committeeによって規定される酵素分類の EC 1.10.3.2 に含まれる任意のラッカーゼ酵素でも、若しくはこれらに由来する断片であってラッカーゼ活性を示す任意の断片でもよく、又は、同様の活性を示す任意の化合物、例えばカテコールオキシダーゼ(catechol oxidase:EC 1.10.3.1)、o−アミノフェノールオキシダーゼ(o-aminophenol oxidase:EC 1.10.3.4)、若しくはビリルビンオキシダーゼ(bilirubin oxidase:EC 1.3.3.5)でもよい。
The invention has been found to be particularly useful in connection with formulations of enzymes that exhibit laccase activity.
As a compound showing laccase activity, any laccase enzyme included in EC 1.10.3.2 of the enzyme classification prescribed by the Nomenclature Committee of the International Union of Biochemistry and Molecular Biology (IUB-MB) Or any fragment derived therefrom that exhibits laccase activity, or any compound exhibiting similar activity, such as catechol oxidase (EC 1.10.3.1), o-aminophenol oxidase (O-aminophenol oxidase: EC 1.10.3.4) or bilirubin oxidase (EC 1.3.3.5) may be used.

ラッカーゼ酵素及び/又はラッカーゼ活性を示す化合物のうち好適なものは、微生物由来の酵素である。これらの酵素は、植物に由来するものでも、細菌(bacteria)に由来するものでも、真菌(fungi)(糸状菌(filamentous fungi)及び酵母(yeasts)を含む。)に由来するものでもよい。   Among the compounds showing laccase enzyme and / or laccase activity, preferred are microorganism-derived enzymes. These enzymes may be derived from plants, derived from bacteria, or derived from fungi (including filamentous fungi and yeasts).

真菌由来の好適な例としては、Aspergillus、Neurospora、例えば N. crassa、Podospora、Botrytis、Collybia、Fomes、Lentinus、Pleurotus、Trametes、例えば T. villosa 及び T. versicolor、Rhizoctonia、例えば R. solani、Coprinus、例えば C. cinereus、C. comatus、C. friesii、及び C. plicatilis、Psathyrella、例えば P. condelleana、Panaeolus、例えば P. papilionaceus、Myceliophthora、例えば M. thermophila、Schytalidium、例えば S. thermophilum、PoIyporus、例えば P. pinsitus、Phlebia、例えば P. radita(WO92/01046)、或いは Coriolus、例えば C. hirsutus(特開平2−238885号)の菌株に由来するラッカーゼが挙げられる。   Suitable examples from fungi include Aspergillus, Neurospora such as N. crassa, Podospora, Botrytis, Collybia, Fomes, Lentinus, Pleurotus, Trametes such as T. villosa and T. versicolor, Rhizoctonia such as R. solani, Coprinus, For example, C. cinereus, C. comatus, C. friesii, and C. plicatilis, Psathyrella, such as P. condelleana, Panaelus, such as P. papilionaceus, Myceliophthora, such as M. thermophila, Schytalidium, such as S. thermophilum, PoIyporus, such as P Pinitus, Phlebia, such as P. radita (WO92 / 01046), or Coriolus, such as C. hirsutus (JP-A-2-23885), for example, laccase.

細菌由来の好適な例としては、バチルス属(Bacillus)の菌株に由来するラッカーゼが挙げられる。   Preferable examples derived from bacteria include laccase derived from a strain of Bacillus.

本発明の特定の実施形態によれば、ラッカーゼは ヒトヨタケ属(Coprinus)、ミセリオフトラ属(Myceliophthora)、チョレイ属(Polyporus)、スキタリジウム属(Scytalidium)、又はリゾクトニア属(Rhizoctoni)に由来する。より特定の実施形態によれば、ラッカーゼは Coprinus cinereus、Myceliophthora thermophila、Polyporus pinsitus、Scytalidium thermophilum、又は Rhizoctonia solani に由来する。   According to particular embodiments of the invention, the laccase is derived from the genus Coprinus, Myceliophthora, Polyporus, Scytalidium, or Rhizoctoni. According to a more specific embodiment, the laccase is derived from Coprinus cinereus, Myceliophthora thermophila, Polyporus pinsitus, Scytalidium thermophilum, or Rhizoctonia solani.

ラッカーゼ又はラッカーゼ関連酵素は、当該ラッカーゼをコード化したDNA配列、並びに、ラッカーゼをコード化したDNA配列の発現を可能にする機能をコード化したDNA配列を担持する組み換えDNAベクターにより形質転換された宿主細胞を培地中、ラッカーゼ酵素の発現を許容する条件下で培養する工程と、前記培養物からラッカーゼを回収する工程とを含んでなる方法によって製造しうるものであってもよい。   A laccase or a laccase-related enzyme is a host transformed with a recombinant DNA vector carrying a DNA sequence encoding the laccase and a DNA sequence encoding a function enabling expression of the laccase-encoding DNA sequence It may be produced by a method comprising a step of culturing cells in a medium under conditions allowing the expression of a laccase enzyme and a step of recovering laccase from the culture.

本発明の特定の実施形態によれば、酵素は、ヒトヨタケ属(Coprinus)、ミセリオフトラ属(Myceliophthora)、チョレイ属(Polyporus)、スキタリジウム属(Scytalidium)及びリゾクトニア属(Rhizoctoni)由来のラッカーゼからなる群より選択される。特に、それぞれWO95/33836、WO96/00290、WO95/33837、及びWO95/07988で挙げられている、ヒトヨタケ属(Coprinus)、ミセリオフトラ属(Myceliophthora)、チョレイ属(Polyporus)、スキタリジウム属(Scytalidium)及びリゾクトニア属(Rhizoctoni)に由来する酵素は、引用により本明細書に組み込まれる。   According to a particular embodiment of the invention, the enzyme is from the group consisting of laccases from the genus Coprinus, Myceliophthora, Polyporus, Scytalidium and Rhizoctoni. Selected. In particular, the genus Coprinus, Myceliophthora, Polyporus, Scytalidium and Rhizoctonia, mentioned in WO95 / 33836, WO96 / 00290, WO95 / 33837 and WO95 / 07988, respectively. Enzymes from the genus (Rhizoctoni) are hereby incorporated by reference.

ラッカーゼ活性(LACU)の決定
ラッカーゼ(特に好適にはチョレイ属(Polyporus)ラッカーゼ)活性は、好気性条件下でのシリンガルダジン(syringaldazin)の酸化により決定することができる。生成した紫色は、530nmで光度測定される。分析条件は、19mMシリンガルダジン、23mM酢酸バッファ、pH5.5、30℃、反応時間1分である。
Determination of Laccase Activity (LACU) Laccase (particularly preferably Polyporus laccase) activity can be determined by oxidation of syringaldazin under aerobic conditions. The resulting purple color is photometrically measured at 530 nm. The analysis conditions are 19 mM syringaldazin, 23 mM acetate buffer, pH 5.5, 30 ° C., and reaction time of 1 minute.

1ラッカーゼユニット(LACU)は、上記条件において、1分間当たり1.0mmolのシリンガルダジンの転化を触媒する酵素量である。   One laccase unit (LACU) is the amount of enzyme that catalyzes the conversion of 1.0 mmol of syringaldazine per minute under the above conditions.

ラッカーゼ活性(LAMU)の決定
ラッカーゼ活性は、好気性条件下でのシリンガルダジンの酸化により決定することができる。生成した紫色は、530nmで測定される。分析条件は、19mMシリンガルダジン、23mM酢酸バッファ、pH7.5、30℃、反応時間1分である。
Determination of laccase activity (LAMU) Laccase activity can be determined by the oxidation of syringaldazine under aerobic conditions. The purple color produced is measured at 530 nm. The analysis conditions are 19 mM syringaldazine, 23 mM acetate buffer, pH 7.5, 30 ° C., and reaction time of 1 minute.

1ラッカーゼユニット(LAMU)は、上記条件において、1分間当たり1.0mmolのシリンガルダジンの転化を触媒する酵素量である。   One laccase unit (LAMU) is the amount of enzyme that catalyzes the conversion of 1.0 mmol of syringaldazine per minute under the above conditions.

不活性コア
不活性(inert)コアは、非活性(non-active)コアと同義であり、本発明のプロセスに供給される際には実質的に酵素を含んでいない(enzyme free)コア粒子を表わす。不活性コアは、担持核(carrier nuclei)でも、偽核(placebo nuclei)でも、種核(seeds)でもよく、その上に前記酵素含有混合物が積層されていてもよい。この不活性コアは、無機塩、糖、糖アルコール、有機酸や有機塩等の有機小分子、粘土やケイ酸塩等のミネラル、或いはこれらのうち二以上の組み合わせの何れであってもよい。顆粒の調製時には、この不活性コア上/内に酵素が吸着される。
Inert Core An inert core is synonymous with a non-active core, and when supplied to the process of the present invention, substantially inert enzyme free core particles Represent. The inert core may be a carrier nuclei, a placebo nuclei, or a seeds, on which the enzyme-containing mixture may be laminated. This inert core may be any of inorganic salts, sugars, sugar alcohols, organic small molecules such as organic acids and organic salts, minerals such as clay and silicate, or combinations of two or more thereof. During the preparation of the granules, the enzyme is adsorbed on / into this inert core.

本発明の特定の実施形態においては、前記酵素含有混合物を不活性コア上に塗布することにより、前記コア粒子が調製される。   In a particular embodiment of the invention, the core particles are prepared by applying the enzyme-containing mixture onto an inert core.

追加の造粒材料
顆粒に導入される追加の造粒材料としては、バインダー、多糖類、合成ポリマー、ワックス、促進剤(enhancing agents)、フィラー、繊維材料、酵素安定化剤、溶解化剤、架橋剤、懸濁剤、粘度調整剤、軽量球体(light spheres)、脱塩素剤、可塑剤、顔料、塩、潤滑剤(例えば界面活性剤や帯電防止剤)、及び芳香剤が挙げられる。
Additional granulation materials Additional granulation materials introduced into the granules include binders, polysaccharides, synthetic polymers, waxes, enhancing agents, fillers, fiber materials, enzyme stabilizers, solubilizers, crosslinks. Agents, suspending agents, viscosity modifiers, light spheres, dechlorinating agents, plasticizers, pigments, salts, lubricants (eg surfactants and antistatic agents), and fragrances.

追加の造粒材料は、酵素含有混合物を顆粒形成プロセスに供給する前にこの混合物に加えてもよく、前記プロセスに別途加えてもよい。   Additional granulating material may be added to the enzyme-containing mixture before feeding it into the granulation process or may be added separately to the process.

バインダー
好適なバインダーは、融点が高いか、或いは融点を全く有さず、蝋性を有さないバインダーであり、例としては、ポリビニルピロリドン、デキストリン、ポリビニルアルコール、セルロース誘導体、例えばヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、又はCMCが挙げられる。好適なバインダーとしては、デキストリン等の炭水化物バインダー、例えば Glucidex 21 D や Avedex W80 が挙げられる。
Binders Suitable binders are those with a high melting point or no melting point and no waxy properties such as polyvinylpyrrolidone, dextrin, polyvinyl alcohol, cellulose derivatives such as hydroxypropylcellulose, methylcellulose Or CMC. Suitable binders include carbohydrate binders such as dextrin, such as Glucidex 21 D and Avedex W80.

多糖類
本発明の多糖類は未修飾の天然多糖類であってもよく、修飾された天然多糖類であってもよい。
好適な多糖類としては、セルロース、ペクチン、デキストリン、及びスターチが挙げられる。スターチは水に対して可溶でもよく、不溶でもよい。
Polysaccharide The polysaccharide of the present invention may be an unmodified natural polysaccharide or a modified natural polysaccharide.
Suitable polysaccharides include cellulose, pectin, dextrin, and starch. The starch may be soluble or insoluble in water.

本発明の特定の実施形態によれば、多糖類はスターチである。本発明の特定の実施形態によれば、多糖類は不溶性スターチである。   According to a particular embodiment of the invention, the polysaccharide is a starch. According to a particular embodiment of the invention, the polysaccharide is an insoluble starch.

本発明においては、広範な種類の植物材料由来の天然スターチが(スターチ自体としても、修飾スターチの出発物質としても)好適である。適切なスターチとしては、米、とうもろこし、小麦、ジャガイモ、オート麦、キャッサバ、サゴヤシ、ユッカ、大麦、サツマイモ、モロコシ、ヤムイモ、ライ麦、キビ、ソバ、クズウコン、タロイモ、ヤウテア由来のスターチが挙げられる。これらは例えば粉状であってもよい。   In the present invention, natural starches derived from a wide variety of plant materials (either as starches themselves or as starting materials for modified starches) are suitable. Suitable starches include starches derived from rice, corn, wheat, potato, oats, cassava, sago palm, yucca, barley, sweet potato, sorghum, yam, rye, millet, buckwheat, kuzukon, taro, and yautea. These may be, for example, powdery.

本発明において好適なスターチとしては、キャッサバスターチが挙げられる。これに関して言及すると、キャッサバ及びキャッサバスターチは、タピオカ、マニオク、マンディオカ、マニホト等、各種の別称でも知られている。   Suitable starches in the present invention include cassava starch. In this regard, cassava and cassava starch are also known by various alternative names such as tapioca, manioc, mandioca, manihot.

本発明において「修飾スターチ」は、天然スターチに対して少なくとも部分的に、ある種の化学修飾、酵素修飾、及び/又は物理若しくは物理化学修飾を加えたものであって、通常は、その特性が「親の」スターチから変化したものを指す語として使用する。   In the present invention, the “modified starch” is a product obtained by adding a certain chemical modification, enzyme modification, and / or physical or physicochemical modification to natural starch at least partially. Used as a term for changes from the “parent” starch.

合成ポリマー:
合成ポリマーは、ポリビニルピロリドン(PVP)、ポリビニルアルコール(PVA)、ポリビニルアセテート、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアクリルアミド、ポリスルフォネート、ポリカルボキシレート、及びこれらのコポリマーから選択されるが、特に水溶性のポリマー又はポリマーである。
Synthetic polymer:
The synthetic polymer is selected from polyvinyl pyrrolidone (PVP), polyvinyl alcohol (PVA), polyvinyl acetate, polyacrylate, polymethacrylate, polyacrylamide, polysulfonate, polycarboxylate, and copolymers thereof, but particularly water-soluble It is a polymer or a polymer.

ワックス
本発明において「ワックス」とは、その融点が25〜150℃、好適には30から100℃、より好適には35から85℃、最も好適には40から75℃のポリマー材料を指すものと解すべきである。ワックスは室温、25℃で固体であることが好ましい。下限は、ワックスが融解し始める温度と、顆粒又は顆粒を含んでなる組成物が保存される温度との差が、適切な温度、20から30℃となるように設定することが好ましい。
Wax In the present invention, “wax” refers to a polymer material having a melting point of 25 to 150 ° C., preferably 30 to 100 ° C., more preferably 35 to 85 ° C., and most preferably 40 to 75 ° C. Should be understood. The wax is preferably solid at room temperature and 25 ° C. The lower limit is preferably set so that the difference between the temperature at which the wax begins to melt and the temperature at which the granule or the composition comprising the granule is stored is an appropriate temperature of 20 to 30 ° C.

顆粒によっては、例えば洗剤産業で使用される顆粒の場合は、ワックスの好ましい特徴の一つとして、ワックスが水に対し、特に中性又はアルカリ性の溶液に対して、可溶性又は分散性を有するという点が挙げられる。これによって、被覆された本発明の粒子を水溶液中に導入すると、即ちそれを水で希釈すると、ワックスが分解及び/又は溶解して、粒子中に含まれている活性物質が水溶液に迅速に放出され、溶解するようになる。水溶性ワックスの例としては、ポリエチレングリコール(PEG's)が挙げられる。水不溶性ワックスのうち、水溶液に分散可能なものとしては、トリグリセリドやオイルが挙げられる。顆粒によっては、例えば食用の顆粒の場合には、被膜中に不溶性ワックスを含んでいてもよい。   Depending on the granules, for example in the case of granules used in the detergent industry, one of the preferred characteristics of the wax is that the wax is soluble or dispersible in water, in particular in neutral or alkaline solutions. Is mentioned. As a result, when the coated particles of the invention are introduced into an aqueous solution, i.e. diluted with water, the wax decomposes and / or dissolves and the active substance contained in the particles is rapidly released into the aqueous solution. And become soluble. Examples of water-soluble waxes include polyethylene glycol (PEG's). Among water-insoluble waxes, those that can be dispersed in an aqueous solution include triglycerides and oils. Some granules, for example in the case of edible granules, may contain an insoluble wax in the coating.

本発明のワックス組成物は、化学的に合成される任意のワックスを含んでいてもよい。また同様に、天然の原料から分離されたワックスや、その誘導体を含んでいてもよい。即ち、本発明のワックス組成物は、以下に挙げるリストから選択されるワックスを含んでいてもよいが、これらに制限されるものではない。   The wax composition of the present invention may contain any wax that is chemically synthesized. Similarly, it may contain a wax separated from a natural raw material or a derivative thereof. That is, the wax composition of the present invention may contain a wax selected from the following list, but is not limited thereto.

- ポリエチレングリコール、PEG。分子サイズの異なる様々なPEGワックスが市販されており、分子サイズの低いPEGはその融点も低い。好適なPEGの例としては、PEG 1500、PEG 2000、PEG 3000、PEG 4000、PEG 6000、PEG 8000、PEG 9000 等が挙げられ、例えばBASF 社(Pluriol E シリーズ)、Clariant 社、Ineos 社から入手できる。ポリエチレングリコールの誘導体も使用可能である。 -Polyethylene glycol, PEG. Various PEG waxes having different molecular sizes are commercially available, and PEG having a low molecular size has a low melting point. Examples of suitable PEGs include PEG 1500, PEG 2000, PEG 3000, PEG 4000, PEG 6000, PEG 8000, PEG 9000, etc., and are available from, for example, BASF (Pluriol E series), Clariant, Ineos. . Polyethylene glycol derivatives can also be used.

- ポリプロピレン(例えば、BASF 社製ポリプロピレングリコール Pluriol P シリーズ)若しくはポリエチレン、又はそれらの混合物。ポリプロピレン及びポリエチレンの誘導体も使用可能である。 -Polypropylene (eg Polypropylene glycol Pluriol P series from BASF) or polyethylene, or mixtures thereof. Polypropylene and polyethylene derivatives can also be used.

- 室温において固体の非イオン性界面活性剤。例としては、高濃度のエトキシ基を有するエトキシ化脂肪アルコール、例えば、BASF社製 Lutensol AT シリーズ等。1分子当たりのエチレンオキシド量の異なるC16−C18の脂肪アルコール、例えば、Lutensol AT11、AT13、AT25、AT50、AT80。ここで、番号はエチレンオキシド基の平均数を表わしている。その他に有用なものとして、エチレンオキシド若しくはプロピレンオキシドのポリマー、又はこれらのブロックポリマー等のコポリマー、例えばBASF社製 Pluronic PE 6800。エトキシ化脂肪アルコールの誘導体も挙げられる。 -Nonionic surfactant that is solid at room temperature. Examples include ethoxylated fatty alcohols having a high concentration of ethoxy groups, such as the Lutensol AT series from BASF. C16-C18 fatty alcohols with different amounts of ethylene oxide per molecule, such as Lutensol AT11, AT13, AT25, AT50, AT80. Here, the number represents the average number of ethylene oxide groups. Other useful ones are polymers of ethylene oxide or propylene oxide, or copolymers of these block polymers such as Pluronic PE 6800 from BASF. Also included are derivatives of ethoxylated fatty alcohols.

- 天然原料から分離されたワックス、例えばカルナウバワックス(融点80〜88℃)、キャンデリラワックス(融点68〜70℃)、及び蜜蝋。その他のワックス及びその誘導体としては、動物や植物由来のワックス、例えば海産物由来のワックス。水素化された植物油や動物性油脂。これらのワックスの例としては、水素化牛脂、水素化パーム油、水素化綿種子、及び/又は 水素化大豆油。ここで「水素化」とは、トリグリセリド等における不飽和炭化水素鎖を飽和すること、即ち、炭素=炭素二重結合を炭素−炭素一重結合に変換することと解すべきである。水素化パーム油は、例えば独 Hobum OeIe und Fette GmbH や独 Deutche Cargill GmbH 等から市販されている。 -Waxes separated from natural raw materials, such as carnauba wax (melting point 80-88 ° C), candelilla wax (melting point 68-70 ° C), and beeswax. Other waxes and derivatives thereof are waxes derived from animals and plants, such as waxes derived from marine products. Hydrogenated vegetable and animal fats. Examples of these waxes are hydrogenated beef tallow, hydrogenated palm oil, hydrogenated cotton seed, and / or hydrogenated soybean oil. Here, “hydrogenation” should be understood as saturating unsaturated hydrocarbon chains in triglycerides and the like, that is, converting carbon = carbon double bonds to carbon-carbon single bonds. Hydrogenated palm oil is commercially available, for example, from Hobum OeIe und Fette GmbH in Germany and Deutche Cargill GmbH in Germany.

- 脂肪酸アルコール、例えば55〜60℃の融点を有する直鎖状の長鎖脂肪酸アルコール、独 Condea Chemie GMBH 製 NAFOL 1822(C18, 20, 22)。脂肪酸アルコールの誘導体。 A fatty acid alcohol, for example a linear long-chain fatty acid alcohol with a melting point of 55-60 ° C., NAFOL 1822 (C18, 20, 22) from Condea Chemie GMBH. Derivatives of fatty alcohols.

- モノグリセリド及び/又はジグリセリド、例えばグリセリルステアレートであって、ステアレートがステアリン酸及びパルミチン酸の混合物であるものが、ワックスとして有用である。例としては、デンマークの Danisco Ingredients 社製の Dimodan PM が挙げられる。 Monoglycerides and / or diglycerides such as glyceryl stearate, where the stearate is a mixture of stearic acid and palmitic acid are useful as waxes. An example is Dimodan PM from Danisco Ingredients, Denmark.

- 脂肪酸、例えば水素化された直鎖状の長鎖脂肪酸、及び脂肪酸の誘導体。
- パラフィン、即ち固体炭化水素。
- 微結晶ワックス。
-Fatty acids such as hydrogenated linear long-chain fatty acids, and derivatives of fatty acids.
-Paraffin, ie solid hydrocarbon.
-Microcrystalline wax.

更なる実施形態によれば、本発明において有用なワックスとして、CM. McTaggart et. al., Int. J. Pharm. 19, 139 (1984) 、又は、Flanders et. al., Drug Dev. Ind. Pharm. 13, 1001 (1987) に記載のものが挙げられる。これらは引用により本明細書に組み込まれる。   According to a further embodiment, the waxes useful in the present invention include CM. McTaggart et. Al., Int. J. Pharm. 19, 139 (1984) or Flanders et. Al., Drug Dev. Ind. Pharm. 13, 1001 (1987). These are incorporated herein by reference.

本発明の特定の実施形態によれば、本発明のワックスは二種以上の異なるワックスの混合物である。本発明の特定の実施形態によれば、これらのワックス又はその組み合わせは、PEG、エトキシ化された脂肪アルコール、脂肪酸、脂肪酸アルコール、及びグリセリドからなる群より選択される。   According to a particular embodiment of the invention, the wax of the invention is a mixture of two or more different waxes. According to particular embodiments of the invention, these waxes or combinations thereof are selected from the group consisting of PEG, ethoxylated fatty alcohols, fatty acids, fatty acid alcohols, and glycerides.

本発明の別の特定の実施形態によれば、ワックスは合成ワックスから選択される。最も特定の実施形態によれば、本発明のワックスはPEG又は非イオン性界面活性剤である。本発明の最も特定の実施形態によれば、ワックスはPEGである。   According to another particular embodiment of the invention, the wax is selected from synthetic waxes. According to the most specific embodiment, the wax of the present invention is PEG or a nonionic surfactant. According to the most specific embodiment of the invention, the wax is PEG.

発酵ブロス
本発明に係る発酵ブロスは、バイオマス、例えば微生物細胞及び/又はその断片を含んでなる。
Fermentation broth The fermentation broth according to the present invention comprises biomass, for example microbial cells and / or fragments thereof.

好ましい実施形態によれば、発酵ブロスは、10%以上のバイオマスを含んでなる。より好ましくは50%以上、より一層好ましくは75%以上、最も好ましくは95%以上の、発酵に由来するバイオマスを含んでなる。別の好ましい実施形態では、ブロスは0〜31%w/wの乾燥物質を含有する。好ましくは0〜20%w/w、より好ましくは0〜15%w/w、例えば10〜15%w/wの乾燥物質を含有する。但し乾燥物質0%は上記範囲から除外される。バイオマスは上記乾燥物質の90%w/w以下、好ましくは75%w/w以下、より好ましくは50%w/w以下を占める。一方、酵素は乾燥物質の50%w/w以下、好ましくは25%w/w以下、より好ましくは10%w/w以下を占める。
発酵ブロスを濾過によって精製し、発酵濾物としてもよい。
According to a preferred embodiment, the fermentation broth comprises 10% or more biomass. More preferably 50% or more, even more preferably 75% or more, most preferably 95% or more of biomass derived from fermentation. In another preferred embodiment, the broth contains 0-31% w / w dry matter. Preferably it contains 0-20% w / w, more preferably 0-15% w / w, for example 10-15% w / w dry matter. However, 0% of dry matter is excluded from the above range. Biomass accounts for 90% w / w or less of the dry matter, preferably 75% w / w or less, more preferably 50% w / w or less. On the other hand, the enzyme accounts for 50% w / w or less, preferably 25% w / w or less, more preferably 10% w / w or less of the dry substance.
The fermentation broth may be purified by filtration to obtain a fermentation filtrate.

促進剤
ラッカーゼ等の酵素の中には、その基質特異性が十分でないために、実用に際して促進剤の併用が必要なものがある。促進剤は、基質の酸化等により、基質の利用度を高めるものである。
Accelerators Some enzymes, such as laccase, require the use of promoters in practical use because of their insufficient substrate specificity. The accelerator increases the utilization of the substrate by oxidation of the substrate or the like.

促進剤は特に、ラッカーゼとの組み合わせで、口臭等の脱臭に使用すると有用である。特例の実施形態によれば、顆粒はラッカーゼ及び促進剤を含んでなる。   Accelerators are particularly useful in combination with laccase and used for deodorization such as bad breath. According to a special embodiment, the granules comprise laccase and an accelerator.

促進剤は、>N−OHという部位を有する脂肪族、環状脂肪族、複素環式、又は芳香族化合物からなる群より選択することができる。本発明の好ましい実施形態によれば、促進剤は下記一般式Iの化合物である。

Figure 2008520195
The promoter can be selected from the group consisting of aliphatic, cycloaliphatic, heterocyclic, or aromatic compounds having a site> N-OH. According to a preferred embodiment of the present invention, the accelerator is a compound of general formula I
Figure 2008520195

ここで、R1、R2、R3、R4は各々独立に、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ホルミル、カルボキシ並びにその塩及びエステル、アミノ、ニトロ、C1-12−アルキル、C1-6−アルコキシ、カルボニル(C1-12−アルキル)、アリール、特にフェニル、スルホ、アミノスルホニル、カルバモイル、ホスホノ、ホスホノオキシ、並びにその塩及びエステルからなる群より選択される。R1、R2、R3、R4はR5で置換されていてもよい。ここでR5は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ホルミル、カルボキシ並びにその塩及びエステル、アミノ、ニトロ、C1-12−アルキル、C1-6−アルコキシ、カルボニル(C1-12−アルキル)、アリール、特にフェニル、スルホ、アミノスルホニル、カルバモイル、ホスホノ、ホスホノオキシ、並びにその塩及びエステルを表わす。[X]は、(−N=N−)、(−N=CR6−)m、(−CR6=N−)m、(−CR7=CR8−)m、(−CR6=N−NR7−)、(−N=N−CHR6−)、(−N=CR6−NR7−)、(−N=CR6−CHR7−)、(−CR6=N−CHR7−)、(−CR6=CR7−NR8−)、及び(−CR6=CR7−CHR8−)から選択される基を表わす。ここでR6、R7、及びR8は、互いに独立に、H、OH、NH2、COOH、SO3H、C1-6−アルキル、NO2、CN、Cl、Br、F、CH2OCH3、OCH3、及びCOOCH3から選択される。また、mは1又は2である。 Here, R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently hydrogen, halogen, hydroxy, formyl, carboxy and salts and esters thereof, amino, nitro, C 1-12 -alkyl, C 1-6- Selected from the group consisting of alkoxy, carbonyl (C 1-12 -alkyl), aryl, in particular phenyl, sulfo, aminosulfonyl, carbamoyl, phosphono, phosphonooxy, and salts and esters thereof. R 1 , R 2 , R 3 and R 4 may be substituted with R 5 . Where R 5 is hydrogen, halogen, hydroxy, formyl, carboxy and salts and esters thereof, amino, nitro, C 1-12 -alkyl, C 1-6 -alkoxy, carbonyl (C 1-12 -alkyl), aryl In particular phenyl, sulfo, aminosulfonyl, carbamoyl, phosphono, phosphonooxy, and salts and esters thereof. [X] is, (- N = N -) , (- N = CR 6 -) m, (- CR 6 = N-) m, (- CR 7 = CR 8 -) m, (- CR 6 = N -NR 7 -), (- N = N-CHR 6 -), (- N = CR 6 -NR 7 -), (- N = CR 6 -CHR 7 -), (- CR 6 = N-CHR 7 -), (- CR 6 = CR 7 -NR 8 -), and (-CR 6 = CR 7 -CHR 8 -) represents a group selected from. Here, R 6 , R 7 and R 8 are independently of each other H, OH, NH 2 , COOH, SO 3 H, C 1-6 -alkyl, NO 2 , CN, Cl, Br, F, CH 2. Selected from OCH 3 , OCH 3 , and COOCH 3 . M is 1 or 2.

ここで「C1-n−アルキル」という語(nは2から12である)は、1以上特定数以下の炭素原子を有する、分岐鎖又は直鎖アルキル基を表わす。一般的なC1-6−アルキル基としては、メチル、エチル、n−プロピル、iso−プロピル、ブチル、iso−ブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、ペンチル、iso−ペンチル、ヘキシル、iso−ヘキシル等が挙げられるが、これらに制限されるものではない。 Here, the term “C 1-n -alkyl” (n is 2 to 12) represents a branched or straight chain alkyl group having 1 or more and a specific number of carbon atoms. Common C 1-6 -alkyl groups include methyl, ethyl, n-propyl, iso-propyl, butyl, iso-butyl, sec-butyl, tert-butyl, pentyl, iso-pentyl, hexyl, iso-hexyl. However, it is not limited to these.

本発明のより好ましい実施形態によれば、促進剤は一般式IIの化合物である。

Figure 2008520195
According to a more preferred embodiment of the invention, the accelerator is a compound of general formula II.
Figure 2008520195

ここで、R1、R2、R3、R4は各々独立に、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ホルミル、カルボキシ並びにその塩及びエステル、アミノ、ニトロ、C1-12−アルキル、C1-6−アルコキシ、カルボニル(C1-12−アルキル)、アリール、特にフェニル、スルホ、アミノスルホニル、カルバモイル、ホスホノ、ホスホノオキシ、並びにその塩及びエステルからなる群より選択される。R1、R2、R3、R4はR5で置換されていてもよい。ここでR5は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ホルミル、カルボキシ並びにその塩及びエステル、アミノ、ニトロ、C1-12−アルキル、C1-6−アルコキシ、カルボニル(C1-12−アルキル)、アリール、特に フェニル、スルホ、アミノスルホニル、カルバモイル、ホスホノ、ホスホノオキシ、並びにその塩及びエステルを表わす。
促進剤は、式I又はIIの塩又はエステルであってもよい。
Here, R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently hydrogen, halogen, hydroxy, formyl, carboxy and salts and esters thereof, amino, nitro, C 1-12 -alkyl, C 1-6- Selected from the group consisting of alkoxy, carbonyl (C 1-12 -alkyl), aryl, in particular phenyl, sulfo, aminosulfonyl, carbamoyl, phosphono, phosphonooxy, and salts and esters thereof. R 1 , R 2 , R 3 and R 4 may be substituted with R 5 . Where R 5 is hydrogen, halogen, hydroxy, formyl, carboxy and salts and esters thereof, amino, nitro, C 1-12 -alkyl, C 1-6 -alkoxy, carbonyl (C 1-12 -alkyl), aryl In particular phenyl, sulfo, aminosulfonyl, carbamoyl, phosphono, phosphonooxy and their salts and esters.
The accelerator may be a salt or ester of formula I or II.

更に好ましい促進剤は、複素環式化合物のオキソ誘導体及びN−ヒドロキシ誘導体、並びに、複素環式化合物のオキソ−及びホルミル−誘導体のオキシムである。当該複素環式化合物としては、五員環の窒素含有複素環、特にピロール、ピラゾール及びイミダゾール、並びにそれらの水素化等価体(例えばピロリジン)、並びにトリアゾール、例えば1,2,4−トリアゾール;六員環の窒素含有複素環、特にモノ−、ジ−及びトリアジナン(例えばピペリジン及びピペラジン)、モルホリン及びそれらの不飽和等価体(例えばピリジン及びピリミジン);並びに、上述の複素環を部分構造として含有する縮合複素環、例えばインドール、ベンゾチアゾール、キノリン、及びベンゾアゼピンが挙げられる。   Further preferred accelerators are oxo derivatives and N-hydroxy derivatives of heterocyclic compounds, and oximes of oxo- and formyl derivatives of heterocyclic compounds. Such heterocyclic compounds include five-membered nitrogen-containing heterocycles, particularly pyrrole, pyrazole and imidazole, and their hydrogenated equivalents (eg pyrrolidine), and triazoles such as 1,2,4-triazole; Ring nitrogen-containing heterocycles, especially mono-, di- and triazinans (eg piperidine and piperazine), morpholines and their unsaturated equivalents (eg pyridine and pyrimidine); and condensations containing the above-mentioned heterocycles as partial structures Heterocycles such as indole, benzothiazole, quinoline, and benzoazepine are mentioned.

これらの分類に属する化合物のうち、好ましい促進剤の例としては、ピリジンアルドオキシム;N−ヒドロキシピロリジンジオン、例えばN−ヒドロキシスクシンイミド 及びN−ヒドロキシフタルイミド;3,4−ジヒドロ−3−ヒドロキシベンゾ[1,2,3]トリアジン−4−オン;ホルムアルドオキシムトリマー(N,N’,N”−トリヒドロキシ−1,3,5−トリアジナン);並びにビオルル酸(1,3−ジアジナン−2,4,5,6−テトロン−5−オキシム)が挙げられる。   Of the compounds belonging to these classes, examples of preferred accelerators include pyridine aldoxime; N-hydroxypyrrolidinediones such as N-hydroxysuccinimide and N-hydroxyphthalimide; 3,4-dihydro-3-hydroxybenzo [1 , 2,3] triazin-4-one; formaldoxime trimer (N, N ′, N ″ -trihydroxy-1,3,5-triazinan); and violuric acid (1,3-diazinane-2,4, 5,6-Tetron-5-oxime).

本発明に適用することが可能な、より一層好ましい促進剤としては、芳香族化合物のオキソ−及びホルミル−誘導体のオキシム、例えばベンゾキノンジオキシム及びサリチルアルドオキシム(2−ヒドロキシベンズアルデヒドオキシム)、並びにN−ヒドロキシアミド及びN−ヒドロキシアニリド、例えばN−ヒドロキシアセトアニリドが挙げられる。   Even more preferred accelerators that can be applied in the present invention include oximes of oxo- and formyl-derivatives of aromatic compounds such as benzoquinone dioxime and salicylaldoxime (2-hydroxybenzaldehyde oxime), and N- Examples include hydroxyamides and N-hydroxyanilides such as N-hydroxyacetanilide.

好ましい促進剤は、1−ヒドロキシベンゾトリアゾール;1−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物;1−ヒドロキシベンゾトリアゾールナトリウム塩;1−ヒドロキシベンゾトリアゾールカリウム塩;1−ヒドロキシベンゾトリアゾールリチウム塩;1−ヒドロキシベンゾトリアゾールアンモニウム塩;1−ヒドロキシベンゾトリアゾールカルシウム塩;1−ヒドロキシベンゾトリアゾールマグネシウム塩;及び1−ヒドロキシベンゾトリアゾール−6−スルホン酸からなる群より選択される。
特に好ましい促進剤は、1−ヒドロキシベンゾトリアゾールである。
Preferred accelerators are 1-hydroxybenzotriazole; 1-hydroxybenzotriazole hydrate; 1-hydroxybenzotriazole sodium salt; 1-hydroxybenzotriazole potassium salt; 1-hydroxybenzotriazole lithium salt; 1-hydroxybenzotriazole ammonium 1-hydroxybenzotriazole calcium salt; 1-hydroxybenzotriazole magnesium salt; and 1-hydroxybenzotriazole-6-sulfonic acid.
A particularly preferred accelerator is 1-hydroxybenzotriazole.

上述のN−ヒドロキシ化合物の説明には、等価な限りにおいて、N−オキシド等の互変体が含まれるものと解される。   It is understood that the above description of the N-hydroxy compound includes tautomers such as N-oxide as long as they are equivalent.

その他の好ましい促進剤の群として、−CO−NOH−基を有し、一般式IIIで表わされるものが挙げられる。

Figure 2008520195
Another preferred group of accelerators includes those having a -CO-NOH- group and represented by general formula III.
Figure 2008520195

ここで、Aは、

Figure 2008520195
である。 Where A is
Figure 2008520195
It is.

また、Bは、Aと同じであるか、H又はC1-12−アルキルである。ここで、アルキルは、ヒドロキシ、エステル、又はエーテル基(例として、エーテルの酸素が直接A−N(OH)C=O−に結合しているものが挙げられる。よって、N−ヒドロキシカルバミン酸エステル誘導体が含まれる。)である。また、R2、R3、R4、R5及びR6は、互いに独立に、H、OH、NH2、COOH、SO3H、C1-8−アルキル、アシル、NO2、CN、Cl、Br、F、CF3、NOH−CO−フェニル、CO−NOH−フェニル、C1-6−CO−NOH−A、CO−NOH−A、COR12、フェニル−CO−NOH−A、OR7、NR8R9、COOR10、又はNOH−CO−R11である。ここで、R7、R8、R9、R10、R11及びR12は、C1-12−アルキル又はアシルである。 B is the same as A, or H or C 1-12 -alkyl. Here, the alkyl is a hydroxy, ester, or ether group (for example, one in which the oxygen of the ether is directly bonded to A—N (OH) C═O—. Therefore, N-hydroxycarbamic acid ester Derivatives). R 2, R 3, R 4, R 5 and R 6 are independently of each other H, OH, NH 2 , COOH, SO 3 H, C 1-8 -alkyl, acyl, NO 2 , CN, Cl, Br, F, CF 3, NOH-CO- phenyl, CO-NOH- a phenyl, C 1-6 -CO-NOH-A , CO-NOH-A, COR12, phenyl -CO-NOH-A, OR7, NR8R9, COOR10, and NOH -CO-R11. Here, R7, R8, R9, R10, R11 and R12 are C 1-12 -alkyl or acyl.

AのR2、R3、R4、R5、及びR6は、好ましくは、H、OH、NH2、COOH、SO3H、C1-3−アルキル、アシル、NO2、CN、Cl、Br、F、CF3、NOH−CO−フェニル、CO−NOH−フェニル、COR12、OR7、NR8R9、COOR10、又はNOH−CO−R11である。ここで、R7、R8、及びR9は、C1-3−アルキル又はアシルであり、R10、R11、及びR12は、C1-3−アルキルである。;より好ましくは、AのR2、R3、R4、R5、及びR6は、H、OH、NH2、COOH、SO3H、CH3、アシル、NO2、CN、Cl、Br、F、CF3、CO−NOH−フェニル、COCH3、OR7、NR8R9、又はCOOCH3である。ここで、R7、R8、及びR9は、CH3又はCOCH3である。更に好ましくは、AのR2、R3、R4、R5、及びR6は、H、OH、COOH、SO3H、CH3、アシル、NO2、CN、Cl、Br、F、CO−NOH−フェニル、OCH3、COCH3、又はCOOCH3である。特に、AのR2、R3、R4、R5、及びR6は、H、OH、COOH、SO3H、CH3、NO2、CN、Cl、Br、CO−NOH−フェニル、又はOCH3である。 R 2, R 3, R 4, R 5 and R 6 in A are preferably H, OH, NH 2 , COOH, SO 3 H, C 1-3 -alkyl, acyl, NO 2 , CN, Cl, Br, F, CF 3, NOH-CO- phenyl, CO-NOH- phenyl, COR12, OR7, NR8R9, COOR10 , or NOH-CO-R11. Here, R7, R8, and R9 are C 1-3 -alkyl or acyl, and R10, R11, and R12 are C 1-3 -alkyl. ; More preferably, the A R2, R3, R4, R5, and R6, H, OH, NH 2, COOH, SO 3 H, CH 3, acyl, NO 2, CN, Cl, Br, F, CF 3 , CO-NOH- phenyl, COCH 3, OR7, NR8R9, or COOCH 3. Here, R7, R8, and R9 are CH 3 or COCH 3 . More preferably, R 2, R 3, R 4, R 5 and R 6 of A are H, OH, COOH, SO 3 H, CH 3 , acyl, NO 2 , CN, Cl, Br, F, CO-NOH-phenyl, OCH 3 , COCH 3 , or COOCH 3 . In particular, the A R2, R3, R4, R5, and R6, H, OH, COOH, SO 3 H, CH 3, NO 2, CN, Cl, Br, CO-NOH- phenyl, or OCH 3.

BのR2、R3、R4、R5、及びR6は、好ましくは、H、OH、NH2、COOH、SO3H、C1-3−アルキル、アシル、NO2、CN、Cl、Br、F、CF3、NOH−CO−フェニル、CO−NOH−フェニル、COR12、OR7、NR8R9、COOR10、又はNOH−CO−R11である。ここで、R7、R8、及びR9は、C1-3−アルキル又はアシルであり、R10、R11、及びR12は、C1-3−アルキルである。より好ましくは、BのR2、R3、R4、R5、及びR6は、H、OH、NH2、COOH、SO3H、CH3、アシル、NO2、CN、Cl、Br、F、CF3、CO−NOH−フェニル、COCH3、OR7、NR8R9、又はCOOCH3である。ここで、R7、R8、及びR9は、CH3又はCOCH3である。更に好ましくは、BのR2、R3、R4、R5、及びR6は、H、OH、COOH、SO3H、CH3、アシル、NO2、CN、Cl、Br、F、CO−NOH−フェニル、OCH3、COCH3、又はCOOCH3である。特に、BのR2、R3、R4、R5、及びR6は、H、OH、COOH、SO3H、CH3、NO2、CN、Cl、Br、CO−NOH−フェニル、又はOCH3である。 R 2, R 3, R 4, R 5, and R 6 of B are preferably H, OH, NH 2 , COOH, SO 3 H, C 1-3 -alkyl, acyl, NO 2 , CN, Cl, Br, F, CF 3, NOH-CO- phenyl, CO-NOH- phenyl, COR12, OR7, NR8R9, COOR10 , or NOH-CO-R11. Here, R7, R8, and R9 are C 1-3 -alkyl or acyl, and R10, R11, and R12 are C 1-3 -alkyl. More preferably, R 2, R 3, R 4, R 5 and R 6 of B are H, OH, NH 2 , COOH, SO 3 H, CH 3 , acyl, NO 2 , CN, Cl, Br, F, CF 3 , CO-NOH- phenyl, COCH 3, OR7, NR8R9, or COOCH 3. Here, R7, R8, and R9 are CH 3 or COCH 3 . More preferably, R 2, R 3, R 4, R 5 and R 6 of B are H, OH, COOH, SO 3 H, CH 3 , acyl, NO 2 , CN, Cl, Br, F, CO-NOH-phenyl, OCH 3 , COCH 3 , or COOCH 3 . In particular, the B R2, R3, R4, R5, and R6, H, OH, COOH, SO 3 H, CH 3, NO 2, CN, Cl, Br, CO-NOH- phenyl, or OCH 3.

Bは、H又はC1-3−アルキルであることが好ましい。ここで、当該アルキルは、ヒドロキシ、エステル又はエーテル基を有していてもよい。好ましくは、当該アルキルが、エステル又はエーテル基を有している。より好ましくは、当該アルキルが、エーテル基を有している。 B is preferably H or C 1-3 -alkyl. Here, the alkyl may have a hydroxy, ester or ether group. Preferably, the alkyl has an ester or ether group. More preferably, the alkyl has an ether group.

ある実施形態によれば、A及びBは互いに独立に、

Figure 2008520195
であるか、或いはBが、H又はC1-3−アルキルである。当該アルキルは、ヒドロキシ、エステル又はエーテル基を含んでいてもよい(例として、エーテルの酸素が直接A−N(OH)C=O−に結合しているものが挙げられる。よって、N−ヒドロキシカルバミン酸エステル誘導体が含まれる。)。そして、R2、R3、R4、R5、及びR6は、互いに独立に、H、OH、NH2、COOH、SO3H、C1-3−アルキル、アシル、NO2、CN、Cl、Br、F、CF3、NOH−CO−フェニル、CO−NOH−フェニル、COR12、OR7、NR8R9、COOR10、又はNOH−CO−R11である。ここで、R7、R8、及びR9は、C1-3−アルキル又はアシルであり、R10、R11、及びR12は、C1-3−アルキルである。 According to one embodiment, A and B are independent of each other,
Figure 2008520195
Or B is H or C 1-3 -alkyl. The alkyl may contain a hydroxy, ester or ether group (examples include those in which the oxygen of the ether is directly bonded to A—N (OH) C═O—). Carbamate derivatives are included.) R 2, R 3, R 4, R 5, and R 6 are independently of each other H, OH, NH 2 , COOH, SO 3 H, C 1-3 -alkyl, acyl, NO 2 , CN, Cl, Br, F , CF 3, NOH-CO- phenyl, CO-NOH- phenyl, COR12, OR7, NR8R9, COOR10 , or NOH-CO-R11. Here, R7, R8, and R9 are C 1-3 -alkyl or acyl, and R10, R11, and R12 are C 1-3 -alkyl.

別の実施形態によれば、A及びBは、互いに独立に、

Figure 2008520195
であるか、或いはBが、H又はC1-3−アルキルである。当該アルキルは、ヒドロキシ又はエーテル基を含んでいてもよい(例として、エーテルの酸素が直接A−N(OH)C=O−に結合しているものが挙げられる。よって、N−ヒドロキシカルバミン酸エステル誘導体が含まれる。)。そして、R2、R3、R4、R5、及びR6は、互いに独立に、H、OH、NH2、COOH、SO3H、CH3、アシル、NO2、CN、Cl、Br、F、CF3、CO−NOH−フェニル、COCH3、OR7、NR8R9、又はCOOCH3である。ここで、R7、R8、及びR9は、CH3又はCOCH3である。 According to another embodiment, A and B are independent of each other,
Figure 2008520195
Or B is H or C 1-3 -alkyl. The alkyl may contain a hydroxy or ether group (for example, those in which the oxygen of the ether is directly bonded to A—N (OH) C═O—. Therefore, N-hydroxycarbamic acid Ester derivatives are included). Then, R2, R3, R4, R5, and R6 are, independently of one another, H, OH, NH 2, COOH, SO 3 H, CH 3, acyl, NO 2, CN, Cl, Br, F, CF 3, CO-NOH- phenyl, COCH 3, OR7, NR8R9, or COOCH 3. Here, R7, R8, and R9 are CH 3 or COCH 3 .

別の実施形態によれば、A及びBは、互いに独立に、

Figure 2008520195
であるか、或いはBが、H又はC1-3−アルキルである。当該アルキルは、ヒドロキシ又はエーテル基を含んでいてもよい(例として、エーテルの酸素が直接A−N(OH)C=O−に結合しているものが挙げられる。よって、N−ヒドロキシカルバミン酸エステル誘導体が含まれる。)。そして、R2、R3、R4、R5、及びR6は、互いに独立に、H、OH、COOH、SO3H、CH3、アシル、NO2、CN、Cl、Br、F、CO−NOH−フェニル、OCH3、COCH3、又はCOOCH3である。 According to another embodiment, A and B are independent of each other,
Figure 2008520195
Or B is H or C 1-3 -alkyl. The alkyl may contain a hydroxy or ether group (for example, those in which the oxygen of the ether is directly bonded to A—N (OH) C═O—. Therefore, N-hydroxycarbamic acid Ester derivatives are included). Then, R2, R3, R4, R5, and R6 are, independently of one another, H, OH, COOH, SO 3 H, CH 3, acyl, NO 2, CN, Cl, Br, F, CO-NOH- phenyl, OCH 3 , COCH 3 , or COOCH 3 .

別の実施形態によれば、A及びBは、互いに独立に、

Figure 2008520195
であるか、或いはBが、C1-3−アルキルである。当該アルキルは、エーテル基を含んでいてもよい(例として、エーテルの酸素が直接A−N(OH)C=O−に結合しているものが挙げられる。よって、N−ヒドロキシカルバミン酸エステル誘導体が含まれる。)。そして、R2、R3、R4、R5、及びR6は、互いに独立に、H、OH、COOH、SO3H、CH3、NO2、CN、Cl、Br、CO−NOH−フェニル、又はOCH3である。 According to another embodiment, A and B are independent of each other,
Figure 2008520195
Or B is C 1-3 -alkyl. The alkyl may contain an ether group (for example, those in which ether oxygen is directly bonded to A—N (OH) C═O—. Therefore, N-hydroxycarbamic acid ester derivatives Is included.) Then, R2, R3, R4, R5, and R6 are, independently of one another, H, OH, COOH, SO 3 H, CH 3, NO 2, CN, Cl, Br, CO-NOH- phenyl, or OCH 3 is there.

ここで「C1-n−アルキル」という語(nは2から12である)は、1以上特定数以下の炭素原子を有する、分岐鎖又は直鎖アルキル基を表わす。一般的なC1-6−アルキル基としては、メチル、エチル、n−プロピル、iso−プロピル、ブチル、iso−ブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、ペンチル、iso−ペンチル、ヘキシル、iso−ヘキシル等が挙げられるが、これらに制限されるものではない。 Here, the term “C 1-n -alkyl” (n is 2 to 12) represents a branched or straight chain alkyl group having 1 or more and a specific number of carbon atoms. Common C 1-6 -alkyl groups include methyl, ethyl, n-propyl, iso-propyl, butyl, iso-butyl, sec-butyl, tert-butyl, pentyl, iso-pentyl, hexyl, iso-hexyl. However, it is not limited to these.

また、ここで「アシル」という語は、C1-6−アルキル基等の一価の置換基がカルボニル基を介して結合した基を表わす。例としては、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、ピバロイル、バレリル等が挙げられる。 Here, the term “acyl” represents a group in which a monovalent substituent such as a C 1-6 -alkyl group is bonded via a carbonyl group. Examples include acetyl, propionyl, butyryl, isobutyryl, pivaloyl, valeryl and the like.

ある実施形態によれば、Aの置換基R2、R3、R4、R5、及びR6のうち少なくとも1つがHであり、好ましくはAの置換基R2、R3、R4、R5、及びR6のうち少なくとも2つがHであり、より好ましくはAの置換基R2、R3、R4、R5、及びR6のうち少なくとも3つがHであり、最も好ましくはAの置換基R2、R3、R4、R5、及びR6のうち少なくとも4つがHであり、特にAの置換基R2、R3、R4、R5、及びR6の全てがHである。   According to certain embodiments, at least one of the substituents R2, R3, R4, R5, and R6 of A is H, preferably at least two of the substituents R2, R3, R4, R5, and R6 of A. One is H, more preferably at least three of the substituents R2, R3, R4, R5, and R6 of A are H, most preferably of the substituents R2, R3, R4, R5, and R6 of A. At least four are H, and in particular, all of the substituents R2, R3, R4, R5, and R6 of A are H.

別の実施形態によれば、Bの置換基R2、R3、R4、R5、及びR6のうち少なくとも1つがHであり、好ましくはBの置換基R2、R3、R4、R5、及びR6のうち少なくとも2つがHであり、より好ましくはBの置換基R2、R3、R4、R5、及びR6のうち少なくとも3つがHであり、最も好ましくはBの置換基R2、R3、R4、R5、及びR6のうち少なくとも4つがHであり、特にBの置換基R2、R3、R4、R5、及びR6の全てがHである。   According to another embodiment, at least one of the substituents R2, R3, R4, R5 and R6 of B is H, preferably at least of the substituents R2, R3, R4, R5 and R6 of B. Two are H, more preferably at least three of the substituents R2, R3, R4, R5 and R6 of B are H, most preferably of the substituents R2, R3, R4, R5 and R6 of B. Of these, at least four are H, and in particular, all of the substituents R2, R3, R4, R5, and R6 of B are H.

本発明に係る特定の実施形態によれば、促進剤は、
4−ニトロ安息香酸−N−ヒドロキシアニリド;
4−メトキシ安息香酸−N−ヒドロキシアニリド;
N,N’−ジヒドロキシ−N,N’−ジフェニルテレフタルアミド;
デカン酸−N−ヒドロキシアニリド;
N−ヒドロキシ−4−シアノアセトアニリド;
N−ヒドロキシ−4−アセチルアセトアニリド;
N−ヒドロキシ−4−ヒドロキシアセトアニリド;
N−ヒドロキシ−3−(N’−ヒドロキシアセトアミド)アセトアニリド;
4−シアノ安息香酸−N−ヒドロキシアニリド;
N−ヒドロキシ−4−ニトロアセトアニリド;
N−ヒドロキシアセトアニリド;
N−ヒドロキシ−N−フェニル−カルバミン酸イソプロピルエステル;
N−ヒドロキシ−N−フェニル−カルバミン酸メチルエステル;
N−ヒドロキシ−N−フェニル−カルバミン酸フェニルエステル;
N−ヒドロキシ−N−フェニル−カルバミン酸エチルエステル;及び
N−ヒドロキシ−N−(4−シアノフェニル)−カルバミン酸メチルエステル
からなる群より選択される。
According to a particular embodiment according to the invention, the accelerator is
4-nitrobenzoic acid-N-hydroxyanilide;
4-methoxybenzoic acid-N-hydroxyanilide;
N, N′-dihydroxy-N, N′-diphenylterephthalamide;
Decanoic acid-N-hydroxyanilide;
N-hydroxy-4-cyanoacetanilide;
N-hydroxy-4-acetylacetanilide;
N-hydroxy-4-hydroxyacetanilide;
N-hydroxy-3- (N′-hydroxyacetamido) acetanilide;
4-cyanobenzoic acid-N-hydroxyanilide;
N-hydroxy-4-nitroacetanilide;
N-hydroxyacetanilide;
N-hydroxy-N-phenyl-carbamic acid isopropyl ester;
N-hydroxy-N-phenyl-carbamic acid methyl ester;
N-hydroxy-N-phenyl-carbamic acid phenyl ester;
N-hydroxy-N-phenyl-carbamic acid ethyl ester; and N-hydroxy-N- (4-cyanophenyl) -carbamic acid methyl ester.

その他の好ましい促進剤の群として、一般式IVのフェノール系化合物(アルキルシリンゲイト:alkyl syringates)が挙げられる。

Figure 2008520195
Another preferred group of accelerators includes phenolic compounds of the general formula IV (alkyl syringates).
Figure 2008520195

ここで、当該式の符号Aは、−D、−CH=CH−D、−CH=CH−CH=CH−D、−CH=N−D、−N=N−D、又は−N=CH−D等の基を指す。ここでDは、−CO−E、−SO2−E、−N−XY、及び−N+−XYZからなる群より選択される。ここで、Eは、−H、−OH、−R、又は−ORである。X、Y、及びZは同一でも異なっていてもよく、−H及び−Rから選択される。ここでRはC1-16アルキルであり、好ましくはC1-8アルキルである。ここでアルキルは飽和でも不飽和でもよく、分岐を有していてもいなくてもよく、カルボキシ、スルホ又はアミノ基で置換されていてもよい。また、B及びCは同一でも異なっていてもよく、Cm2m+1から選択される。ここでm=1、2、3、4又は5である。 Here, the symbol A in the formula is -D, -CH = CH-D, -CH = CH-CH = CH-D, -CH = ND, -N = ND, or -N = CH. It refers to a group such as -D. Here, D is selected from the group consisting of —CO—E, —SO 2 —E, —N—XY, and —N + —XYZ. Here, E is -H, -OH, -R, or -OR. X, Y, and Z may be the same or different and are selected from -H and -R. Here, R is C 1 -C 16 alkyl, preferably C 1 -C 8 alkyl. Here, alkyl may be saturated or unsaturated, may or may not be branched, and may be substituted with a carboxy, sulfo or amino group. B and C may be the same or different and are selected from C m H 2m + 1 . Here, m = 1, 2, 3, 4 or 5.

上述した一般式IVにおいて、Aはヒドロキシ基に対してパラ位に示されているが、代わりにメタ位に存在していてもよい。   In the above general formula IV, A is shown in the para position relative to the hydroxy group, but may alternatively be present in the meta position.

本発明の特定の実施形態によれば、促進剤は一般式Vで表わされる群より選択される。

Figure 2008520195
According to a particular embodiment of the invention, the accelerator is selected from the group represented by the general formula V:
Figure 2008520195

ここで、Aは−H、−OH、−CH3、−OCH3、−O(CH2nCH3等の基であり、n=1、2、3、4、5、6、7又は8である。 Here, A is a group such as —H, —OH, —CH 3 , —OCH 3 , —O (CH 2 ) n CH 3 , and n = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8.

更に他の好ましい促進剤の群として、一般式VIで表わされる化合物が挙げられる。

Figure 2008520195
Yet another preferred group of accelerators includes compounds represented by general formula VI.
Figure 2008520195

前記一般式において、Aは、単結合、又は、(−CH2−)、(−CH=CH−)、(−NR11−)、(−CH=N−)、(−N=N−)、(−CH=N−N=CH−)、若しくは(>C=O)の何れかの基を表わす。 In the above general formula, A represents a single bond or (—CH 2 —), (—CH═CH—), (—NR 11 —), (—CH═N—), (—N═N—), It represents any group of (—CH═N—N═CH—) or (> C═O).

前記一般式において、置換基R1〜R11は、同一でも異なっていてもよく、各々独立に、下記ラジカルの何れかを表わす。水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ホルミル、アセチル、カルボキシ並びにそのエステル及び塩、カルバモイル、スルホ並びにそのエステル及び塩、スルファモイル、メトキシ、ニトロ、アミノ、フェニル、C1-8−アルキル。 In the above general formula, the substituents R1 to R11 may be the same or different and each independently represents any of the following radicals. Hydrogen, halogen, hydroxy, formyl, acetyl, carboxy and esters and salts thereof, carbamoyl, sulfo and esters and salts thereof, sulfamoyl, methoxy, nitro, amino, phenyl, C 1-8 -alkyl.

ここで、カルバモイル、スルファモイル、フェニル、及びアミノ基は、未置換でもよく、一又は二以上の置換基R12によって置換されていてもよい。また、C1-8−アルキル基は飽和でも不飽和でもよく、分岐を有していてもいなくてもよく、更には、未置換でも、一又は二以上の置換基R12によって置換されていてもよい。 Here, the carbamoyl, sulfamoyl, phenyl, and amino groups may be unsubstituted or substituted by one or more substituents R12. The C 1-8 -alkyl group may be saturated or unsaturated, may or may not be branched, and may be unsubstituted or substituted with one or more substituents R 12. Good.

ここで、置換基R12は、下記ラジカルの何れかを表わす。水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ホルミル、アセチル、カルボキシ並びにそのエステル及び塩、カルバモイル、スルホ並びにそのエステル及び塩、スルファモイル、メトキシ、ニトロ、アミノ、フェニル、又はC1-8−アルキル。ここでカルバモイル、スルファモイル、及びアミノ基は、未置換でもよく、一又は二以上のヒドロキシ又はメチルによって置換されていてもよい。 Here, the substituent R12 represents any of the following radicals. Hydrogen, halogen, hydroxy, formyl, acetyl, carboxy and esters and salts thereof, carbamoyl, sulfo and esters and salts thereof, sulfamoyl, methoxy, nitro, amino, phenyl, or C 1-8 -alkyl. Here, the carbamoyl, sulfamoyl and amino groups may be unsubstituted or substituted by one or more hydroxy or methyl.

前記一般式において、R5及びR6が結合して、基−B−を形成していてもよい。ここでBは単結合、又は(−CH2−)、(−CH=CH−)、(−CH=N−)のうち何れかの基を表わす。或いは、Bは硫黄又は酸素を表わす。 In the general formula, R5 and R6 may be bonded to form a group -B-. Here, B represents a single bond or any group of (—CH 2 —), (—CH═CH—), and (—CH═N—). Alternatively, B represents sulfur or oxygen.

本発明の特定の実施形態において、促進剤は、一般式VIIで表わされる群より選択される。

Figure 2008520195
In certain embodiments of the invention, the promoter is selected from the group represented by general formula VII.
Figure 2008520195

前記一般式において、Xは単結合、酸素、又は硫黄を表わす。
前記一般式において、置換基R1〜R9は、同一でも異なっていてもよく、各々独立に下記ラジカルの何れかを表わす。水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ホルミル、アセチル、カルボキシ並びにそのエステル及び塩、カルバモイル、スルホ並びにそのエステル及び塩、スルファモイル、メトキシ、ニトロ、アミノ、フェニル、C1-8−アルキル。
In the above general formula, X represents a single bond, oxygen, or sulfur.
In the general formula, the substituents R1 to R9 may be the same or different and each independently represents any of the following radicals. Hydrogen, halogen, hydroxy, formyl, acetyl, carboxy and esters and salts thereof, carbamoyl, sulfo and esters and salts thereof, sulfamoyl, methoxy, nitro, amino, phenyl, C 1-8 -alkyl.

カルバモイル、スルファモイル、フェニル、及びアミノ基は、未置換でもよく、一又は二以上の置換基R10によって置換されていてもよい。また、C1-8−アルキル基は、飽和でも不飽和でもよく、分岐を有していてもいなくてもよく、更には未置換でも、一又は二以上の置換基R10によって置換されていてもよい。 The carbamoyl, sulfamoyl, phenyl, and amino groups may be unsubstituted or substituted with one or more substituents R10. The C 1-8 -alkyl group may be saturated or unsaturated, may or may not be branched, and may be unsubstituted or substituted by one or more substituents R 10. Good.

置換基R10は、下記ラジカルの何れかを表わす。水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ホルミル、アセチル、カルボキシ並びにそのエステル及び塩、カルバモイル、スルホ並びにそのエステル及び塩、スルファモイル、メトキシ、ニトロ、アミノ、フェニル、又はC1-8−アルキル。ここで、カルバモイル、スルファモイル、及びアミノ基は、未置換でもよく、一又は二以上のヒドロキシ又はメチルによって置換されていてもよい。 The substituent R10 represents any of the following radicals. Hydrogen, halogen, hydroxy, formyl, acetyl, carboxy and esters and salts thereof, carbamoyl, sulfo and esters and salts thereof, sulfamoyl, methoxy, nitro, amino, phenyl, or C 1-8 -alkyl. Here, the carbamoyl, sulfamoyl, and amino groups may be unsubstituted or substituted with one or more hydroxy or methyl.

フィラー
好適なフィラーとしては、水に可溶性及び/又は不溶性の無機塩、例えば、微粉砕したアルカリケイ酸塩、アルカリ炭酸塩及び/又はアルカリ塩化物、粘土、例えばカオリン(例えばEnglish China Clay 社製 SPESWHITETM)、ベントナイト、タルク、ゼオライト、白亜、炭酸及び/又はケイ酸カルシウムが挙げられる。一般的なフィラーとしては、硫酸ナトリウム(disodium sulphate)及びリグノスルホン酸カルシウムが挙げられる。他のフィラーとしては、シリカ、石膏、カオリン、タルク、ケイ酸マグネシウムアルミニウム、並びにセルロース繊維が挙げられる。
Fillers Suitable fillers include water-soluble and / or insoluble inorganic salts such as finely divided alkali silicates, alkali carbonates and / or alkali chlorides, clays such as kaolin (eg SPESWHITE from English China Clay) TM ), bentonite, talc, zeolite, chalk, carbonic acid and / or calcium silicate. Common fillers include sodium sulphate and calcium lignosulfonate. Other fillers include silica, gypsum, kaolin, talc, magnesium aluminum silicate, and cellulose fibers.

繊維材料
好適な繊維材料としては、例えば、おが屑状等の繊維状の純粋又は非精製のセルロース、純粋な繊維セルロース、綿、又は他の形態の純粋又は非精製の繊維セルロースが挙げられる。また、繊維セルロースを用いた濾過助剤も使用できる。繊維状のセルロースとしては、CepoTM や ArbocellTM等、幾つかの銘柄が市場で入手可能である。好ましい繊維セルロースとしては、ArbocelTM BFC200 が挙げられる。また、EP304331B1に記載等の合成繊維も使用することができる。一般的な繊維としては、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリエステル、特にナイロン、ポリビニルホルマット(polyvinylformat)、ポリ(メタ)アクリル化合物からなるものが挙げられる。
Fibrous materials Suitable fibrous materials include, for example, fibrous pure or non-purified cellulose such as sawdust, pure fiber cellulose, cotton, or other forms of pure or non-refined fiber cellulose. Moreover, the filter aid using fiber cellulose can also be used. The cellulose fibrous, Cepo TM and Arbocell TM, etc., are available in several of the stocks market. A preferred fiber cellulose is Arbocel BFC200. In addition, synthetic fibers described in EP304331B1 can also be used. Typical fibers include polyethylene, polypropylene, polyester, particularly nylon, polyvinylform, and poly (meth) acrylic compounds.

酵素安定化又は酵素保護剤
酵素安定化又は保護剤は、幾つかのカテゴリーに分類される。アルカリ性又は中性の物質、還元剤、酸化防止剤、及び/又は第1遷移系列の金属イオンの塩等である。これらは各々、同一又は異なるカテゴリーの他の保護剤と併用してもよい。アルカリ性の保護剤の例としては、アルカリ金属のケイ酸塩、炭酸塩又は重炭酸塩であって、酸化体等を能動的に中和することにより化学的な捕捉効果を発揮するものが挙げられる。還元性の保護剤の例としては、亜硫酸塩、チオ亜硫酸塩又はチオ硫酸塩等の塩が挙げられる。酸化防止剤の例としては、メチオニン、ブチル化ヒドロキシトルエン(BHT)又はブチル化ヒドロキシアニソール(BHA)が挙げられる。最も好ましい化合物としてはチオ硫酸塩、例えばチオ硫酸ナトリウムが挙げられる。また、酵素安定剤としては、ホウ酸塩、ホウ砂、ギ酸塩、ジ−及びトリカルボン酸、並びにいわゆる可逆的酵素阻害剤、例えスルフヒドリル基を有する有機化合物、又は、アルキル化若しくはアリール化されたホウ酸が挙げられる。
Enzyme stabilization or protection agents Enzyme stabilization or protection agents fall into several categories. Examples include alkaline or neutral substances, reducing agents, antioxidants, and / or salts of metal ions of the first transition series. Each of these may be used in combination with other protective agents of the same or different categories. Examples of alkaline protective agents include alkali metal silicates, carbonates or bicarbonates that exhibit a chemical scavenging effect by actively neutralizing oxidants and the like. . Examples of the reducing protective agent include salts such as sulfites, thiosulfites, and thiosulfates. Examples of antioxidants include methionine, butylated hydroxytoluene (BHT) or butylated hydroxyanisole (BHA). Most preferred compounds include thiosulfates, such as sodium thiosulfate. Also, enzyme stabilizers include borates, borax, formate, di- and tricarboxylic acids, and so-called reversible enzyme inhibitors such as organic compounds having sulfhydryl groups, or alkylated or arylated borates. Examples include acids.

架橋剤:
架橋剤の例としては、酵素融和性の(enzyme-compatible)界面活性剤、例えばエトキシ化アルコール、特に10から80のエトキシ基を有するものが挙げられる。
Cross-linking agent:
Examples of cross-linking agents include enzyme-compatible surfactants such as ethoxylated alcohols, particularly those having 10 to 80 ethoxy groups.

溶解化剤:
顆粒の溶解性は、被覆粒子を洗剤の製剤成分として使用する場合等には、特に重要である。当業者には知られているように、種々の方法で得られた多数の薬剤が、製剤の溶解性を高める目的で使用できる。当該技術分野で知られている一般的な薬剤は、National Pharmacopeia のものである。
Solubilizer:
The solubility of the granules is particularly important when the coated particles are used as a formulation component of a detergent. As is known to those skilled in the art, a number of drugs obtained by various methods can be used to increase the solubility of the formulation. A common drug known in the art is that of National Pharmacopeia.

軽量球体(Light spheres):
軽量球体は真密度が低い小粒子である。一般的には、内部に空気又はガスを有する中空の球形粒子である。このような材料は通常、固体材料を膨張させることにより調製される。これらの軽量球体は、無機性のものでも有機性のものでもよい。例としては The PQ Corporation から入手可能な PM-series(プラスチック製の中空球)が挙げられる。軽量球体は、スターチやその誘導体等の多糖類から調製することもできる。Biodac(登録商標)は、中空を有さないセルロース製の軽量材料(製紙廃材)の例であり、GranTek Inc から入手できる。これらの材料は、本発明の顆粒に単独で含まれていてもよく、異なる軽量材料の混合物として含まれていてもよい。
Light spheres:
Light spheres are small particles with low true density. Generally, it is a hollow spherical particle having air or gas inside. Such materials are usually prepared by expanding a solid material. These lightweight spheres may be inorganic or organic. An example is the PM series (plastic hollow sphere) available from The PQ Corporation. Light spheres can also be prepared from polysaccharides such as starch and derivatives thereof. Biodac® is an example of a lightweight material made of cellulose (paper waste) that does not have a hollow and is available from GranTek Inc. These materials may be included alone in the granules of the present invention, or may be included as a mixture of different lightweight materials.

懸濁剤:
懸濁剤、即ち(例えば洗浄用途において、粒子の溶解による漂白作用を上昇させるための)媒介物質及び/又は溶媒が、前記顆粒に含まれていてもよい。
Suspending agent:
Suspending agents, ie mediators and / or solvents (for example in washing applications to increase the bleaching action due to dissolution of the particles) may be included in the granules.

粘度調整剤:
粘度調整剤が、前記顆粒に存在していてもよい。
Viscosity modifier:
A viscosity modifier may be present in the granules.

可塑剤:
本発明において顆粒に有効な可塑剤としては、例えば:ポリオール、例えば糖、糖アルコール、グリセリン、グリセロールトリメチロールプロパン、ネオペンチルグリコール、トリエタノールアミン、モノ−、ジ−、及びトリエチレングリコール又はグリコール(PEGs)であって、分子量が1000未満のもの;尿素、フタル酸エステル、例えばフタル酸ブチル又はジメチル;チオシアン酸塩、非イオン性界面活性剤、例えばエトキシ化アルコール及びエトキシ化リン酸塩、並びに水が挙げられる。
Plasticizer:
Examples of plasticizers effective for the granules in the present invention include: polyols such as sugar, sugar alcohol, glycerin, glycerol trimethylolpropane, neopentyl glycol, triethanolamine, mono-, di-, and triethylene glycol or glycol ( PEGs) having a molecular weight of less than 1000; urea, phthalates such as butyl or dimethyl phthalate; thiocyanates, nonionic surfactants such as ethoxylated alcohols and ethoxylated phosphates, and water Is mentioned.

顔料:
好適な顔料としては、制限されるものではないが、微細化した白色化剤、例えば二酸化チタン又はカオリン、着色顔料、水溶性着色剤、並びに一又は二以上の顔料及び水可溶性着色剤の組み合わせが挙げられる。
Pigment:
Suitable pigments include, but are not limited to, miniaturized whitening agents such as titanium dioxide or kaolin, colored pigments, water-soluble colorants, and combinations of one or more pigments and water-soluble colorants. Can be mentioned.

塩:
塩としては無機塩、例えば硫酸塩、亜硫酸塩、リン酸塩、ホスホン酸塩、硝酸塩、塩化物又は炭酸塩等の塩でもよく、単純有機酸(炭素原子10未満、例えば炭素原子6以下)の塩、例えばクエン酸塩、マロン酸塩又は酢酸塩等でもよい。これらの塩におけるカチオンの例としては、アルカリ又はアルカリ土類金属イオンが挙げられるが、アンモニウムイオン又は第1遷移系列の金属イオン、例えばナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、亜鉛又はアルミニウムである。アニオンの例としては、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硫酸塩、亜硫酸塩、重硫酸塩、チオ硫酸塩、リン酸塩、一塩基リン酸塩、二塩基リン酸塩、次亜リン酸塩、二水素ピロリン酸塩、四ホウ酸塩、ホウ酸塩、炭酸塩、重炭酸塩、メタケイ酸塩、クエン酸塩、りんご酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、乳酸塩、ギ酸塩、酢酸塩、酪酸塩、プロピオン酸塩、安息香酸塩、酒石酸塩、アスコルビン酸塩、又はグルコン酸塩が挙げられる。特に、アルカリ−又はアルカリ土類金属の硫酸塩、亜硫酸塩、リン酸塩、ホスホン酸塩、硝酸塩、塩化物若しくは炭酸塩、又は、クエン酸塩、マロン酸塩又は酢酸塩等の単純有機酸を用いることができる。特有な例としては、NaH2PO4、Na2HPO4、Na3PO4、(NH4)H2PO4、K2HPO4、KH2PO4、Na2SO4、K2SO4、KHSO4、ZnSO4、MgSO4、CuSO4、Mg(NO32、(NH42SO4、ホウ酸ナトリウム、酢酸マグネシウム、及びクエン酸ナトリウムが挙げられる。
salt:
The salt may be an inorganic salt such as a sulfate, sulfite, phosphate, phosphonate, nitrate, chloride or carbonate, or a simple organic acid (less than 10 carbon atoms, such as 6 carbon atoms or less). It may be a salt such as citrate, malonate or acetate. Examples of cations in these salts include alkali or alkaline earth metal ions, ammonium ions or first transition series metal ions such as sodium, potassium, magnesium, calcium, zinc or aluminum. Examples of anions include chloride, bromide, iodide, sulfate, sulfite, bisulfate, thiosulfate, phosphate, monobasic phosphate, dibasic phosphate, hypophosphite, Dihydrogen pyrophosphate, tetraborate, borate, carbonate, bicarbonate, metasilicate, citrate, malate, maleate, malonate, succinate, lactate, formic acid Examples include salts, acetates, butyrate, propionate, benzoate, tartrate, ascorbate, or gluconate. In particular, alkaline or alkaline earth metal sulfates, sulfites, phosphates, phosphonates, nitrates, chlorides or carbonates, or simple organic acids such as citrates, malonates or acetates. Can be used. Specific examples include NaH 2 PO 4 , Na 2 HPO 4 , Na 3 PO 4 , (NH 4 ) H 2 PO 4 , K 2 HPO 4 , KH 2 PO 4 , Na 2 SO 4 , K 2 SO 4 , KHSO 4, ZnSO 4, MgSO 4 , CuSO 4, Mg (NO 3) 2, (NH 4) 2 SO 4, sodium borate, magnesium acetate and sodium citrate and the like.

また、塩は、WO99/32595に記載されているような、水和塩、即ち、(一又は二以上の)結晶結合水を有する結晶性の塩水和物であってもよい。水和塩の例としては、硫酸マグネシウム七水和物(MgSO4(7H2O))、硫酸亜鉛七水和物(ZnSO4(7H2O))、硫酸銅五水和物(CuSO4(5H2O))、二塩基リン酸ナトリウム七水和物(Na2HPO4(7H2O))、硝酸マグネシウム六水和物(Mg(NO32(6H2O))、ホウ酸ナトリウム十水和物、クエン酸ナトリウム二水和物、及び酢酸マグネシウム四水和物が挙げられる。 The salt may also be a hydrated salt, i.e. a crystalline salt hydrate with one or more crystal-bound waters, as described in WO 99/32595. Examples of hydrated salts include magnesium sulfate heptahydrate (MgSO 4 (7H 2 O)), zinc sulfate heptahydrate (ZnSO 4 (7H 2 O)), copper sulfate pentahydrate (CuSO 4 ( 5H 2 O)), dibasic sodium phosphate heptahydrate (Na 2 HPO 4 (7H 2 O)), magnesium nitrate hexahydrate (Mg (NO 3 ) 2 (6H 2 O)), sodium borate Decahydrate, sodium citrate dihydrate, and magnesium acetate tetrahydrate.

潤滑剤:
本明細書において「潤滑剤」という語は、表面摩擦を低減し、前記顆粒の表面を潤滑化し、静電気の蓄積傾向を低減し、及び/又は、前記顆粒の破砕し易さを低減する薬剤を広く指すものとする。潤滑剤はまた、被膜中のバインダーの粘着性を低減することにより、被覆プロセスを改善する役割も有する。即ち、潤滑剤は凝集防止剤や湿潤剤として機能する。好適な潤滑剤の例としては、低級ポリエチレングリコール(PEGs)、エトキシ化脂肪アルコール、並びに、鉱物油、植物油、及び動物油が挙げられる。中でも、潤滑剤は鉱物油又は非イオン性界面活性剤であり、特に、潤滑剤は他の被覆材料とは混和しない。
lubricant:
As used herein, the term “lubricant” refers to an agent that reduces surface friction, lubricates the surface of the granules, reduces the tendency to accumulate static electricity, and / or reduces the ease of crushing the granules. Widely refer to. Lubricants also have a role in improving the coating process by reducing the tackiness of the binder in the coating. That is, the lubricant functions as an anti-aggregation agent and a wetting agent. Examples of suitable lubricants include lower polyethylene glycols (PEGs), ethoxylated fatty alcohols, and mineral oils, vegetable oils, and animal oils. Among these, the lubricant is mineral oil or a nonionic surfactant, and in particular, the lubricant is not miscible with other coating materials.

塩被膜
酵素顆粒は高相対湿度に極めて敏感であるので、そのような条件下でも許容しうる程度の保存安定性を得るために、前記顆粒を更に改善する手法が求められる。我々は、前記顆粒を塩被膜で被覆することにより、特に高湿度下における酵素安定性を改善できることを見出した。特に、WO00/01793に記載の塩被膜が、本発明における被膜として好適であることが分かった。
Since salt-coated enzyme granules are extremely sensitive to high relative humidity, in order to obtain acceptable storage stability under such conditions, a technique to further improve the granules is required. We have found that coating the granules with a salt coating can improve enzyme stability, especially under high humidity. In particular, it was found that the salt coating described in WO00 / 01793 is suitable as a coating in the present invention.

本発明において好適な塩としては、追加の造粒材料の欄において前述したものが挙げられる。本発明において特に好適な塩としては、Na2HPO4(CH20℃=95%)、Na3PO4(CH25℃=92%)、(NH4)H2PO4(CH20℃=93.1%)、KH2PO4(CH20℃=92%)、Na2SO4(CH20℃=93%)、K2SO4(CH25℃=99%)、KHSO4(CH20℃=86%)、ZnSO4(CH20℃=90%)、及びクエン酸ナトリウム(CH25℃=86%)が挙げられる。本発明の特定の実施形態において、塩は、Na2HPO4、Na3PO4、(NH4)H2PO4、KH2PO4、Na2SO4、K2SO4、KHSO4、ZnSO4、及びクエン酸ナトリウムからなる群より選択される。 Suitable salts in the present invention include those described above in the section of additional granulation materials. Particularly suitable salts in the present invention include Na 2 HPO 4 (CH 20 ° C. = 95%), Na 3 PO 4 (CH 25 ° C. = 92%), (NH 4 ) H 2 PO 4 (CH 20 ° C. = 93 0.1%), KH 2 PO 4 (CH 20 ° C. = 92%), Na 2 SO 4 (CH 20 ° C. = 93%), K 2 SO 4 (CH 25 ° C. = 99%), KHSO 4 (CH 20 ° C. = 86%), ZnSO 4 (CH 20 ° C. = 90%), and sodium citrate (CH 25 ° C. = 86%). In certain embodiments of the invention, the salt is Na 2 HPO 4 , Na 3 PO 4 , (NH 4 ) H 2 PO 4 , KH 2 PO 4 , Na 2 SO 4 , K 2 SO 4 , KHSO 4 , ZnSO. 4 and selected from the group consisting of sodium citrate.

前記被膜は、60%w/w以上、例えば65%w/w又は70%w/wの塩を含有するが、好ましくは75%w/w以上、例えば80%w/w以上、85%w/w以上、例えば90%w/w以上、又は95%w/w以上であってもよい。   The coating contains a salt of 60% w / w or more, such as 65% w / w or 70% w / w, but preferably 75% w / w or more, such as 80% w / w or more, 85% w / w. / W or more, for example, 90% w / w or more, or 95% w / w or more.

本発明の特定の実施形態において、塩被膜は、50%を超える塩を含んでなり、例えば70%を超える塩を含んでなり、例えば90%を超える塩を含んでなり、例えば100%が塩である。   In certain embodiments of the invention, the salt coating comprises more than 50% salt, such as more than 70% salt, such as more than 90% salt, such as 100% salt. It is.

特定の実施形態において、塩被膜の塗布量は酵素コアの50%w/w超であり、例えば酵素コアの100%w/w超であり、更には酵素コアの200%w/w超である。   In certain embodiments, the amount of salt coating applied is greater than 50% w / w of the enzyme core, such as greater than 100% w / w of the enzyme core, and even greater than 200% w / w of the enzyme core. .

追加の被膜
本発明の顆粒は、追加の被膜層を一層又は二層以上含んでいてもよい。
本発明の特定の実施形態によれば、前記顆粒は少なくとも二層の被膜層を含んでなる。
Additional coating The granule of the present invention may contain one or more additional coating layers.
According to a particular embodiment of the invention, the granules comprise at least two coating layers.

追加の被膜は、例えば前記顆粒に対して更なる特徴又は性質を付与するものである。即ち、追加の被膜は、例えば以下の効果のうち一又は二以上を達成するものである。   The additional coating, for example, imparts further features or properties to the granules. That is, the additional coating achieves one or more of the following effects, for example.

(i) 顆粒の塵粉生成性の低減。
(ii) 環境中の敵性化合物からの前記顆粒中の活性化合物の保護。
(iii) 液性媒体(例えば酸性媒体)に前記顆粒を導入する際に任意の濃度で溶解。
(iv) 前記顆粒により高い物理的強度を付与する。
(i) Reduction of dust generation of granules.
(ii) Protection of the active compound in the granules from hostile compounds in the environment.
(iii) Dissolving at an arbitrary concentration when the granules are introduced into a liquid medium (for example, an acidic medium).
(iv) High physical strength is imparted to the granules.

追加の被膜として、従来知られている所望の性質の(一又は二以上の)被膜を適用可能である。従来の被膜材料及び被覆方法としては、例えば、US4,106,991、EP170360、EP304332、EP304331、EP458849、EP458845、WO97/39116、WO92/12645、WO89/08695、WO89/08694、WO87/07292、WO91/06638、WO92/13030、WO93/07260、WO93/07263、WO96/38527、WO96/16151、WO97/23606、US5,324,649、US4,689,297、EP206417、EP193829、DE4344215、DE4322229A、DD263790、特開昭61−162185号公報、特開昭58−179492号公報、又はPCT/DK/01/00628に記載のものが挙げられる。   As the additional coating, a coating having one or more desired properties known in the art can be applied. Conventional coating materials and coating methods include, for example, US 4,106,991, EP170360, EP304332, EP304331, EP458849, EP458588, WO97 / 39116, WO92 / 12645, WO89 / 08695, WO89 / 08694, WO87 / 07292, WO91 / 06638, WO92 / 13030, WO93 / 07260, WO93 / 07263, WO96 / 38527, WO96 / 16151, WO97 / 23606, US5,324,649, US4,689,297, EP206417, EP193829, DE43444215, DE432222A, DD263790 In Japanese Patent Laid-Open No. 61-162185, Japanese Patent Laid-Open No. 58-179492, or PCT / DK / 01/00628 Those placing of, and the like.

本発明の特定の実施形態によれば、追加の被膜は、US4,106,991又はEP0,569,468に記載されたワックス被膜であり、これらは引用により本明細書に組み込まれる。好適なワックスについては、上述の「ワックス」の欄を参照されたい。本発明の特定の実施形態によれば、追加の被膜はPEG及び/又はパーム油を含んでなる。   According to a particular embodiment of the invention, the additional coatings are the wax coatings described in US 4,106,991 or EP 0,569,468, which are hereby incorporated by reference. For suitable waxes, see the “Wax” section above. According to certain embodiments of the invention, the additional coating comprises PEG and / or palm oil.

追加の被膜材料
前記被膜は、上述の「追加の造粒材料」の欄で記載した、追加の被膜材料、例えばバインダー、フィラー、繊維材料、酵素安定化剤、溶解化剤、懸濁剤、粘度調整剤、軽量球体、可塑剤、塩、潤滑剤、及び芳香剤を含んでいてもよい。更に他の成分として、顔料が挙げられる。
Additional coating material The coating is an additional coating material, such as a binder, filler, fiber material, enzyme stabilizer, solubilizer, suspending agent, viscosity, as described above under “Additional granulation material”. Conditioners, lightweight spheres, plasticizers, salts, lubricants, and fragrances may be included. Furthermore, a pigment is mentioned as another component.

顆粒の調製
本発明はまた、本発明の顆粒の製造に関する。本発明の特定の実施形態は、酵素顆粒を調製する方法であって、
a)酵素を含有し、pHが7よりも高い水性混合物を調製する工程と、
b)工程a)の混合物を粒子形成プロセスに供給し、酵素含有コア粒子を得る工程と、
c)工程b)のコア粒子を少なくとも一層の被膜で被覆する工程とを含んでなる方法である。
Preparation of granules The invention also relates to the production of the granules of the invention. A particular embodiment of the present invention is a method of preparing enzyme granules comprising
a) preparing an aqueous mixture containing an enzyme and having a pH higher than 7;
b) supplying the mixture of step a) to a particle formation process to obtain enzyme-containing core particles;
and c) a step of coating the core particles in step b) with at least one layer of coating.

上記方法の工程c)は、特定の実施形態においては、流動床装置において実施される。
本発明のより特定の実施形態においては、工程c)の酵素含有混合物が不活性コア粒子に塗布される。
Step c) of the above method is performed in a fluidized bed apparatus in certain embodiments.
In a more specific embodiment of the invention, the enzyme-containing mixture of step c) is applied to the inert core particles.

本発明の別の特定の実施形態は、酵素顆粒を調製する方法であって、
a)酵素を含有し、pHが7よりも高い水性混合物を調製する工程と、
b)工程a)の水性液体を造粒機に供給する工程と、
c)造粒機において粒子を調製する工程とを含んでなるものである。
Another specific embodiment of the present invention is a method of preparing enzyme granules comprising
a) preparing an aqueous mixture containing an enzyme and having a pH higher than 7;
b) supplying the aqueous liquid of step a) to the granulator;
c) a step of preparing particles in a granulator.

更なる実施形態によれば、前記酵素含有混合物は8よりも高いpHに調整される。更なる実施形態によれば、前記酵素含有混合物は9から11のpHに調整される。   According to a further embodiment, the enzyme-containing mixture is adjusted to a pH higher than 8. According to a further embodiment, the enzyme-containing mixture is adjusted to a pH of 9 to 11.

本発明の特定の実施形態によれば、酵素を含んでなる水性液体を調製し、これを造粒機に供給し、その水性液体のpHを、造粒機内において、7よりも高いpHに調整する。   According to a particular embodiment of the invention, an aqueous liquid comprising an enzyme is prepared and supplied to a granulator, and the pH of the aqueous liquid is adjusted to a pH higher than 7 in the granulator. To do.

本発明の特定の実施形態によれば、造粒機内で調製される前記酵素含有粒子は、被膜層によって被覆される。   According to a particular embodiment of the invention, the enzyme-containing particles prepared in a granulator are coated with a coating layer.

特定の実施形態によれば、前記被膜は塩被膜である。更なる実施形態によれば、前記塩被膜中の塩は、20℃における定常吸湿度が60%よりも高い。更には、前記塩被膜中の塩は、NaH2PO4、Na2HPO4、Na3PO4、(NH4)H2PO4、K2HPO4、KH2PO4、Na2SO4、K2SO4、KHSO4、ZnSO4、MgSO4、CuSO4、Mg(NO32、(NH42SO4、NaCl、ホウ酸ナトリウム、酢酸マグネシウム、及びクエン酸ナトリウムからなる群より選択される。 According to a particular embodiment, the coating is a salt coating. According to a further embodiment, the salt in the salt coating has a steady moisture absorption at 20 ° C. higher than 60%. Furthermore, the salts in the salt coating are NaH 2 PO 4 , Na 2 HPO 4 , Na 3 PO 4 , (NH 4 ) H 2 PO 4 , K 2 HPO 4 , KH 2 PO 4 , Na 2 SO 4 , Selected from the group consisting of K 2 SO 4 , KHSO 4 , ZnSO 4 , MgSO 4 , CuSO 4 , Mg (NO 3 ) 2 , (NH 4 ) 2 SO 4 , NaCl, sodium borate, magnesium acetate, and sodium citrate. Is done.

特定の実施形態によれば、酵素は、オキシドレダクターゼ、カルボヒドラーゼ、及びヒドロラーゼからなる群より選択される。更には、オキシドレダクターゼはラッカーゼである。更には、ラッカーゼは、ヒトヨタケ属(Coprinus)、ミセリオフトラ属(Myceliophthora)、チョレイ属(Polyporus)、スキタリジウム属(Scytalidium)及びリゾクトニア属(Rhizoctoni)に由来する群より選択される。   According to certain embodiments, the enzyme is selected from the group consisting of oxidoreductase, carbohydrase, and hydrolase. Furthermore, oxidoreductase is a laccase. Furthermore, the laccase is selected from the group derived from the genus Coprinus, Myceliophthora, Polyporus, Scytalidium and Rhizoctoni.

本発明の特定の実施形態によれば、前記酵素顆粒の調製は造粒機で行なわれる。造粒機は、任意の種類の酵素含有粒子を形成しうる装置である。   According to a particular embodiment of the invention, the preparation of the enzyme granules is carried out in a granulator. A granulator is an apparatus that can form any type of enzyme-containing particles.

本発明の特定の実施形態によれば、造粒機は、流動床装置、噴霧乾燥機、流動床噴霧乾燥機、押出機、ローラー圧縮機、及び混合機からなる群より選択される。   According to a particular embodiment of the invention, the granulator is selected from the group consisting of a fluid bed apparatus, a spray dryer, a fluid bed spray dryer, an extruder, a roller compressor, and a mixer.

前記酵素顆粒は、コア及び被膜を含んでなり、このコアは、前記酵素マトリックスを含んでなる。特定の実施形態によれば、このコア粒子は、前記酵素含有混合物を不活性コア粒子上に塗布することにより調製される。   The enzyme granule comprises a core and a coating, the core comprising the enzyme matrix. According to a particular embodiment, the core particles are prepared by applying the enzyme-containing mixture onto inert core particles.

前記のコア及び被膜を調製する方法は、「Handbook of Powder Technology;Particle size enlargement」、C. E. Capes 著、Volume 1、1980、Elsevier に記載されている。調製法としては公知の供給及び顆粒製剤技術が挙げられる。その例は以下の通りである。   Methods for preparing the cores and coatings are described in “Handbook of Powder Technology; Particle size enlargement” by C. E. Capes, Volume 1, 1980, Elsevier. Preparation methods include known supply and granule formulation techniques. Examples are as follows.

a)噴霧乾燥品、即ち、液体の酵素含有溶液を噴霧乾燥塔で霧化し、小液滴が乾燥塔内を降下する間に乾燥し、酵素含有粒子材料とする。これによって極小の粒子を形成できる(Michael S. Showell 編「Powdered detergents」、Surfactant Science Series、1998、vol. 71、page 140-142、Marcel Dekker)。 a) A spray-dried product, that is, a liquid enzyme-containing solution is atomized in a spray-drying tower and dried while small droplets descend in the drying tower to form an enzyme-containing particulate material. This makes it possible to form very small particles (Michael S. Showell, “Powdered detergents”, Surfactant Science Series, 1998, vol. 71, pages 140-142, Marcel Dekker).

b)層状品、即ち、前記酵素含有混合物によって、予め形成した非活性コア粒子の周囲を層状に被覆する。通常は酵素含有混合物を、予め形成したコア粒子を流動させた流動床装置内で霧化し、前記酵素含有混合物をコア粒子に付着させ、これを乾燥させることにより、コア粒子表面上に乾燥した酵素層を得る。これにより、所望のサイズの有用なコア粒子が分かっている場合には、当該所望のサイズの粒子が得られる。この種の製品は、例えばWO97/23606に記載されている。 b) A layered product, i.e., the enzyme-containing mixture is coated with a layer around the previously formed non-active core particles. Usually, the enzyme-containing mixture is atomized in a fluidized bed apparatus in which core particles formed in advance are fluidized, and the enzyme-containing mixture is attached to the core particles and dried to thereby dry the enzyme on the surface of the core particles. Get a layer. This provides particles of the desired size when useful core particles of the desired size are known. Such products are described, for example, in WO 97/23606.

c)吸着コア粒子、即ち、酵素含有混合物によりコア周囲を層状に被膜するのではなく、酵素含有混合物をコア表面上及び/又は内部に吸着させる。このようなプロセスは、WO97/39116に記載されている。 c) Rather than coating the core periphery with adsorbed core particles, ie the enzyme-containing mixture, the enzyme-containing mixture is adsorbed on and / or in the core surface. Such a process is described in WO 97/39116.

d)押出し又はペレット化品、即ち、酵素含有ペーストをプレスによりペレット化し、又は圧力下で小開口から押出し、粒子上に切り出して略乾燥する。このような粒子は通常、比較的大きなサイズを有する。押出し口(通常はプレートに形成された穿孔)を形成する材料によって、押出し口における圧力差に許容限界が生じるからである。また、小さな開口の使用時に非常に高い押出し圧を加えると、活性化合物ペーストの発熱が促進され、活性化合物に有害である。(Michael S. Showell 編「Powdered detergents」、Surfactant Science Series、1998、vol. 71、page 140-142、Marcel Dekker) d) Extruded or pelletized product, i.e., enzyme-containing paste is pelletized by pressing, or extruded from a small opening under pressure, cut out onto particles and substantially dried. Such particles usually have a relatively large size. This is because the material that forms the extrusion port (usually the perforations formed in the plate) creates an acceptable limit on the pressure difference at the extrusion port. Also, if a very high extrusion pressure is applied when using a small opening, the heat generation of the active compound paste is promoted, which is harmful to the active compound. (Michael S. Showell, “Powdered detergents”, Surfactant Science Series, 1998, vol. 71, pages 140-142, Marcel Dekker)

e)小球化(Prilled)品、即ち、溶融したワックス中に酵素粉末を懸濁させ、得られた懸濁液を、回転円板噴霧機等を用いて冷却チャンバー内に噴霧し、液滴を速やかに凝固させる(Michael S. Showell 編「Powdered detergents」、Surfactant Science Series、1998、vol. 71、page 140-142、Marcel Dekker)。得られた製品においては、活性化合物が不活性物質の表面に集中することなく、不活性物質の全面に均一に存在する。この技術に関する文献としては、US4,016,040及びUS4,713,245も挙げられる。 e) Prilled product, that is, enzyme powder is suspended in molten wax, and the obtained suspension is sprayed into a cooling chamber using a rotary disk sprayer or the like to form droplets. Is rapidly solidified (edited by Michael S. Showell, “Powdered detergents”, Surfactant Science Series, 1998, vol. 71, pages 140-142, Marcel Dekker). In the resulting product, the active compound is uniformly present on the entire surface of the inert substance without concentrating on the surface of the inert substance. References relating to this technique include US 4,016,040 and US 4,713,245.

f)混合機造粒品、即ち、従来の造粒成分の乾燥粉末組成物に酵素液を加える。前記の液及び粉末を適切な比率で混合すると、液の湿分が乾燥粉末に吸収され、乾燥粉末の成分が付着して凝集し、粒子が生成して、活性化合物を含有する顆粒が形成される。このプロセスはUS4,106,991(NOVO NORDISK)、並びに、関連文献であるEP170360B1(NOVO NORDISK)、EP304332B1(NOVO NORDISK)、EP304331(NOVO NORDISK)、WO90/09440(NOVO NORDISK)、及びWO90/09428(NOVO NORDISK)に記載されている。このプロセスで得られる製品のうち、各種の高剪断混合機が造粒機として使用できる特定の製品については、活性化合物である酵素、フィラー、及びバインダー等からなる顆粒をセルロース繊維と混合し、粒子を強化することにより、いわゆる T-granulate を形成することができる。強化粒子はより強固であり、酵素粉塵の発生がより少ない。 f) Enzyme solution is added to the mixer granulated product, that is, the dry powder composition of the conventional granulating component. When the above liquid and powder are mixed in an appropriate ratio, the moisture of the liquid is absorbed into the dry powder, the components of the dry powder adhere and agglomerate, particles are formed, and granules containing the active compound are formed. The This process is described in US 4,106,991 (NOVO NORDISK) and related documents EP170360B1 (NOVO NORDISK), EP304332B1 (NOVO NORDISK), EP304331 (NOVO NORDISK), WO90 / 09440 (NOVO NORDISK), and WO90 / 09428 ( NOVO NORDISK). Among the products obtained by this process, for specific products that can be used as granulators by various high shear mixers, granules composed of active compounds such as enzymes, fillers, binders, etc. are mixed with cellulose fibers to produce particles. By strengthening, so-called T-granulate can be formed. The reinforcing particles are stronger and produce less enzyme dust.

g)微細化、即ち、活性物質を含有する大きな粒子、ペレット、タブレット、ブリケット等を粉砕又は破砕してコアを製造する。粉砕又は破砕品を篩い分けすることにより、所望のコア粒子の画分が得られる。サイズが大き過ぎる粒子や小さ過ぎる粒子は再利用できる。微細化は、Martin Rhodes 編「Principles of Powder Technology」、1990、Chapter 10、John Wiley & Sons に記載されている。 g) Refinement, that is, large particles, pellets, tablets, briquettes and the like containing the active substance are pulverized or crushed to produce a core. By sieving the pulverized or crushed product, a desired core particle fraction can be obtained. Particles that are too large or too small can be reused. Refinement is described in Martin Rhodes, “Principles of Powder Technology”, 1990, Chapter 10, John Wiley & Sons.

h)流動床造粒。流動床造粒は、微粒子を気流中で浮遊させ、この流動粒子上に酵素液をノズルから噴霧することにより行なう。噴霧液滴と衝突すると、粒子は濡れて粘着するようになる。これらの粘着性の粒子が他の粒子に衝突して付着し、顆粒を形成する。 h) Fluid bed granulation. Fluidized bed granulation is performed by suspending fine particles in an air stream and spraying an enzyme solution on the fluidized particles from a nozzle. When colliding with the spray droplets, the particles become wet and stick. These sticky particles collide and adhere to other particles to form granules.

i)これらのコアは、流動床乾燥機等により、乾燥に供してもよい。当業者であれば、酵素分野で知られている他の顆粒乾燥法を用いることもできる。乾燥は、製品温度が25℃から90℃の範囲で行なうことが好ましい。酵素によっては、塩で被覆する前の酵素含有コアが、少量の水を含んでいることが重要な場合もある。水感受性の活性化合物を、過剰な水を除去することなく塩で被覆してしまうと、過剰な水がコアの内部に閉じ込められてしまい、酵素の活性に好ましからぬ影響を及ぼす場合がある。乾燥後のコアの水分含有量は、好ましくは0.1〜10%w/wである。 i) These cores may be subjected to drying using a fluid bed dryer or the like. One skilled in the art can use other granule drying methods known in the enzyme arts. Drying is preferably performed at a product temperature in the range of 25 ° C to 90 ° C. Depending on the enzyme, it may be important that the enzyme-containing core prior to salt coating contains a small amount of water. If a water-sensitive active compound is coated with a salt without removing excess water, the excess water can be trapped inside the core, which can undesirably affect the activity of the enzyme. The moisture content of the core after drying is preferably 0.1 to 10% w / w.

塩被膜の調製
塩被膜を酵素含有コア顆粒に塗布するには、流動床内でコア顆粒に噴霧すればよい。塩被膜の塗布には更に、真空混合機、ドラジェ型(dragee type)コーター(パンドラム(pan-drum)コーター)、種子粉衣用装置、回転底を有する装置(例えば、Roto Glatt、CF granulators (Freund)、torbed processors (Gauda)、又は、回転流動床処理装置、例えば Omnitex(Nara)等を使用してもよい。
Preparation of the salt coating In order to apply the salt coating to the enzyme-containing core granules, the core granules may be sprayed in a fluidized bed. For the application of salt coatings, vacuum mixers, drage type coaters (pan-drum coaters), seed dressing devices, devices with a rotating bottom (eg Roto Glatt, CF granulators (Freund ), Torbed processors (Gauda), or rotating fluidized bed processing equipment such as Omnitex (Nara).

塩層の形成後、顆粒を乾燥してもよい。塩被覆顆粒の乾燥は、当業者が利用可能な如何なる手法で行なってもよい。例としては噴霧乾燥、凍結乾燥、真空乾燥、流動床乾燥、パンドラム(pan drum)コーティング、及びマイクロ波乾燥が挙げられる。また、塩被覆顆粒の乾燥は、造粒法と組み合わせて行なってもよい。造粒法の例としては、流動床、流動床噴霧乾燥機(FSD)、又は多段乾燥機(MSD)の使用が挙げられる。   After forming the salt layer, the granules may be dried. The salt-coated granules may be dried by any technique available to those skilled in the art. Examples include spray drying, freeze drying, vacuum drying, fluid bed drying, pan drum coating, and microwave drying. Further, the salt-coated granules may be dried in combination with a granulation method. Examples of granulation methods include the use of fluidized beds, fluidized bed spray dryers (FSD), or multistage dryers (MSD).

追加の被膜の調製
当該技術分野で公知の従来の被膜及び被膜形成法を好適に使用することが可能であるが、例としては、デンマークPA200200473、WO89/08694、WO89/08695、270608B1、及び/又はWO00/01793に記載のものが挙げられる。従来の被膜材料の他の例としては、US4,106,991、EP170360、EP304332、EP304331、EP458849、EP458845、WO97/39116、WO92/12645A、WO89/08695、WO89/08694、WO87/07292、WO91/06638、WO92/13030、WO93/07260、WO93/07263、WO96/38527、WO96/16151、WO97/23606、WO01/25412、WO02/20746、WO02/28369、US5879920、US5,324,649、US4,689,297、US6,348,442、EP206417、EP193829、DE4344215、DE4322229A、DE263790、JP61162185A、及び/又はJP58179492に記載のものも挙げられる。
Preparation of additional coatings Conventional coatings and coating formation methods known in the art can be suitably used, including, for example, Danish PA200200473, WO89 / 08694, WO89 / 08695, 270608B1, and / or The thing of WO00 / 01793 is mentioned. Other examples of conventional coating materials are US 4,106,991, EP170360, EP304332, EP304331, EP458849, EP4588845, WO97 / 39116, WO92 / 12645A, WO89 / 08695, WO89 / 08694, WO87 / 07292, WO91 / 06638. , WO92 / 13030, WO93 / 07260, WO93 / 07263, WO96 / 38527, WO96 / 16151, WO97 / 23606, WO01 / 25412, WO02 / 20746, WO02 / 28369, US5879920, US5,324,649, US4,689,297 , US 6,348,442, EP 206417, EP 193829, DE 4344215, DE 4322229A, DE 263790, P61162185A, and also include those described in / or JP58179492.

被膜は上述と同様の方法により調製可能である。
得られた顆粒について、MarumeriserTM 等による面取り(例えば球形化)や、締固め(compaction)を行なってもよい。
The coating can be prepared by the same method as described above.
The obtained granules may be chamfered (for example, spheroidized) or compacted by Marumeriser TM or the like.

本発明の顆粒を含んでなる組成物
本発明はまた、本発明の顆粒を含んでなる組成物に関する。前記組成物は如何なる組成物であってもよいが、とりわけ好適な組成物としては、パーソナルケア組成物、クリーニング組成物、漂白等の繊維加工用組成物、調剤用組成物、皮革加工用組成物、パルプ又は紙加工用組成物、食品及び飲料品用組成物、及び動物飼料用組成物が挙げられる。
Composition Comprising the Granules of the Present Invention The present invention also relates to a composition comprising the granules of the present invention. The composition may be any composition, and particularly suitable compositions include personal care compositions, cleaning compositions, bleaching and other fiber processing compositions, dispensing compositions, and leather processing compositions. , Pulp or paper processing compositions, food and beverage compositions, and animal feed compositions.

クリーニング組成物としては、洗剤及び抗菌組成物が挙げられる。繊維加工用組成物としては、繊維の酵素漂白用、及び/又は、デニム等のストーンウォッシュ用組成物が挙げられる。食品及び飲料品用組成物としては、ワイン、油脂、柑橘類及びジュース製品、スターチ及び糖製品、アルコール及び/又は醸造製品、大豆製品、並びにベーキング用粉又は生地等の製造業に用いられる酵素組成物が挙げられる。本発明は特に、キャット・リター(cat litter)組成物、おむつ材(diapers)、マウス・ウォッシュ(mouth wash)組成物、チューイング・ガム(chewing gum)、及びチューイング・ミント(chewing mints)等に、消臭目的で配合されることが好ましい。本発明は特に口臭の除去に有用である。   Cleaning compositions include detergents and antimicrobial compositions. Examples of the fiber processing composition include a composition for enzyme bleaching of fibers and / or a composition for stone wash such as denim. As compositions for food and beverages, enzyme compositions used in manufacturing industries such as wine, fats and oils, citrus and juice products, starch and sugar products, alcohol and / or brewed products, soy products, and baking powder or dough Is mentioned. The present invention is particularly applicable to cat litter compositions, diapers, mouth wash compositions, chewing gum, chewing mints, and the like. It is preferable to blend for the purpose of deodorization. The present invention is particularly useful for removing bad breath.

本発明はまた、本発明の顆粒の、消臭、繊維加工、皮革加工、パルプ加工、紙加工、食品、飲料品、硬表面、並びに、人体又は動物体における使用を包含する。前記顆粒はまた、人体又は動物体の治療薬の製造にも使用できる。本発明の特定の実施形態によれば、本発明の顆粒又は組成物は、液体肥料の消臭に使用される。   The present invention also encompasses the use of the granules of the present invention in deodorizing, fiber processing, leather processing, pulp processing, paper processing, food, beverages, hard surfaces, and human or animal bodies. The granules can also be used in the manufacture of therapeutic agents for the human or animal body. According to a particular embodiment of the invention, the granules or compositions of the invention are used for deodorizing liquid fertilizers.

本発明は更に、本発明の顆粒を含んでなる組成物を歯磨きに用いる工程を含んでなる消臭方法に関する。また、本発明の顆粒を含んでなる組成物をネコ用トイレ(cat tray)に加える工程を含んでなる消臭方法に関する。更には、本発明の顆粒を含んでなるおむつ材を取り替える工程を含んでなる消臭方法に関する。特定の実施形態によれば、ミント、チューイング・ガム、又はマウス・ウォッシュを口内に摂取する工程を含んでなる、口の消臭方法に関する。   The present invention further relates to a deodorizing method comprising the step of using a composition comprising the granules of the present invention for brushing teeth. Moreover, it is related with the deodorizing method which comprises the process of adding the composition containing the granule of this invention to the toilet (cat tray) for cats. Furthermore, it is related with the deodorizing method which comprises the process of replacing the diaper material which comprises the granule of this invention. According to certain embodiments, it relates to a method of deodorizing the mouth, comprising the step of ingesting mint, chewing gum, or mouth wash into the mouth.

実施例1
ミセリオフトラ属(Myceliophthora)ラッカーゼ顆粒を以下の手順で調製した。20%の乾燥物質を含有するpH5.5、活性5275LAMU/gの液状濃縮物0.525kgを、流動床型 Huttlin HKC-5-TJ を用いて、塩化ナトリウムのコア3.5kg(平均サイズ315μm及びスパン0.94)上に噴霧し、前記コア上に酵素の層を形成した後、乾燥に供した。Huttlin 床のパラメータは以下の通りであった。
エアインレット温度:70℃
製品温度:56℃
エアボリューム:450m3/h
霧化エア:1.5bar
ミクロクリマエア(Micro clima air):0.65bar
Example 1
Myceliophthora laccase granules were prepared by the following procedure. 0.525 kg of a pH 5.5, active 5275 LAMU / g liquid concentrate containing 20% dry matter was added to a 3.5 kg sodium chloride core (average size 315 μm and with a fluid bed Huttlin HKC-5-TJ). It was sprayed on the span 0.94) to form an enzyme layer on the core, and then subjected to drying. The parameters of the Huttlin floor were as follows:
Air inlet temperature: 70 ° C
Product temperature: 56 ° C
Air volume: 450m 3 / h
Atomization air: 1.5 bar
Micro clima air: 0.65 bar

活性が777LAMU/gの顆粒が得られた。追加の被膜を有さない状態における、この顆粒単体での保存安定性を調べるため、密閉ジャー内で25℃で26週、40℃で13週保存し、また、ジャーを開放して40℃及び相対湿度60%に曝し、4週間保存した。保存試験の結果を表Iに示す。   Granules with an activity of 777 LAMU / g were obtained. To examine the storage stability of this granule alone without additional coating, it was stored in a sealed jar for 26 weeks at 25 ° C and 13 weeks at 40 ° C, and the jar was opened at 40 ° C and Exposed to 60% relative humidity and stored for 4 weeks. The results of the storage test are shown in Table I.

Figure 2008520195
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実施例2
噴霧前における濃縮物のpHを、1NのNaOHを用い、pH7からpH10までの範囲内で調整した他は、実施例1の記載と同様の手順で一群の顆粒を得た。得られた顆粒について、実施例1と同様に、密閉ジャー内での保存安定性を調べた。実施例2について得られた結果を表IIA〜Bに示す。濃縮物のpHを10まで調整することにより、保存安定性が顕著に向上していることが分かる。40℃/60%RHの湿潤条件下では、残存活性は何れも1%未満であり、湿度を遮る追加の障壁が必要であることが分かる。
Example 2
A group of granules was obtained in the same procedure as described in Example 1, except that the pH of the concentrate before spraying was adjusted within the range of pH 7 to pH 10 using 1N NaOH. The obtained granules were examined for storage stability in a sealed jar in the same manner as in Example 1. The results obtained for Example 2 are shown in Tables IIA-B. It can be seen that the storage stability is remarkably improved by adjusting the pH of the concentrate to 10. It can be seen that under wet conditions of 40 ° C./60% RH, any residual activity is less than 1%, and an additional barrier to block humidity is required.

Figure 2008520195
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実施例3
噴霧前の濃縮物のpHをpH10、pH10.5、及びpH11に調整するとともに、GEA Precision Coater 流動床を用いて、酵素層と、最後に塩層を形成した他は、実施例1の記載と同様の手順で一群の顆粒を得た。pH10.5の濃縮物から得られた顆粒には、更に、塩化ナトリウムの50%被膜(コアに添着された酵素の%として算出した)を形成した。この被膜は塩24%を含む水溶液から調製した。これらの顆粒について、実施例1と同様に、密閉ジャー内での保存安定性を調べた。実施例3について得られた結果を表IIIA〜Cに示す。pHを高くすることにより、また、塩被膜を追加することにより、温度及び湿度安定性がともに向上していることが分かる。
Example 3
The pH of the concentrate before spraying was adjusted to pH 10, pH 10.5 and pH 11, and the enzyme layer and finally the salt layer were formed using a GEA Precision Coater fluidized bed. A group of granules was obtained in a similar procedure. The granules obtained from the pH 10.5 concentrate further formed a 50% coating of sodium chloride (calculated as% of enzyme attached to the core). This coating was prepared from an aqueous solution containing 24% salt. These granules were examined for storage stability in a sealed jar in the same manner as in Example 1. The results obtained for Example 3 are shown in Tables IIIA-C. It can be seen that both temperature and humidity stability are improved by increasing the pH and adding a salt coating.

Figure 2008520195
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実施例4
噴霧前のpHを10.5に調整した濃縮物を用いて、実施例1の記載と同様の手順で、一群のラッカーゼ添着コアを得た。これを更に、実施例3と同様に塩で被覆した。但し、コアとしては硫酸ナトリウムを用い、被膜としても同様に硫酸ナトリウムを用いた。被膜は、酵素添着コアの50%、100%、及び200%の量となるように形成した。被膜用の水溶液としては、26%の硫酸ナトリウムと、1.3%のデキストリン Avedex W80を含有するものを用いた。被膜用溶液の温度は、グラウバー塩の形成を避けるため、40℃〜45℃の範囲内に維持した。これらの群について得られた安定性のデータを表IVA〜Cに示す。
Example 4
Using a concentrate whose pH before spraying was adjusted to 10.5, a group of laccase-attached cores was obtained in the same procedure as described in Example 1. This was further coated with salt as in Example 3. However, sodium sulfate was used as the core, and sodium sulfate was also used as the coating. The coating was formed in amounts of 50%, 100%, and 200% of the enzyme impregnated core. As an aqueous solution for coating, a solution containing 26% sodium sulfate and 1.3% dextrin Avedex W80 was used. The temperature of the coating solution was maintained in the range of 40 ° C. to 45 ° C. to avoid the formation of the Grauber salt. The stability data obtained for these groups are shown in Tables IVA-C.

Figure 2008520195
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実施例5
以下に記載する手順でラッカーゼ顆粒を作製した。
Cassava 特許に記載のように、活性5630LAMU/g、pH5.5の液状ラッカーゼ濃縮物3.5kgを、50リットルの Lodige ミキサー内で、キャッサバのコア(粒子サイズ600〜700μm)15kgに噴霧して吸着させた。吸着後の湿潤状態の酵素添着顆粒を、従来の流動床により乾燥させた。
Example 5
Laccase granules were prepared according to the procedure described below.
As described in the Cassava patent, 3.5 kg of active 5630 LAMU / g, pH 5.5 liquid laccase concentrate is sprayed onto 15 kg of cassava core (particle size 600-700 μm) in a 50 liter Lodige mixer I let you. The wet enzyme-impregnated granules after adsorption were dried by a conventional fluidized bed.

乾燥した添着酵素2kgを、続いて、US4,106,991に記載の手順により、5リットルの Lodige ミキサー内で、a)80gのPEG 4000、及び、b)240gのカオリンで被覆した。   2 kg of dried adsorbing enzyme was subsequently coated with a) 80 g PEG 4000 and b) 240 g kaolin in a 5 liter Lodige mixer according to the procedure described in US 4,106,991.

被覆顆粒単体の保存安定性を調べるために、密閉ジャー内で、25℃で26週、40℃で13週、また、ジャーを開放して40℃及び相対湿度60%に曝し、4週間保存した。保存試験の結果を表Vに示す。   In order to examine the storage stability of the coated granules alone, they were stored in a sealed jar for 26 weeks at 25 ° C, 13 weeks at 40 ° C, and the jar was opened and exposed to 40 ° C and 60% relative humidity for 4 weeks. . The results of the storage test are shown in Table V.

Figure 2008520195
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実施例6
吸着前の濃縮物のpHを、1NのNaOHにより、pH7からpH10までの範囲で調整するとともに、調整後のラッカーゼ濃縮物0.60kgに対し、5リットルのLodige ミキサー内で、2.0kgのキャッサバコアを噴霧した他は、実施例5の記載と同様の手順で一群の顆粒を得た。実施例5と同様の手順で、カオリン/PEG 4000 被膜を形成した。得られた顆粒の密閉ジャー内での保存安定性を、実施例1と同様に調べた。実施例6の結果を表VIA〜Bに示す。濃縮物のpHを10まで調整することにより、保存安定性が顕著に向上していることが分かる。40℃/60%RHの湿潤条件下では、残存活性は何れも1%未満から僅かに上回る程度であり、湿度を遮る追加の障壁が必要であることが分かる。
Example 6
The pH of the concentrate before adsorption was adjusted in the range from pH 7 to pH 10 with 1N NaOH, and 2.0 kg of cassava was added in a 5-liter Lodige mixer to 0.60 kg of the adjusted laccase concentrate. A group of granules was obtained in the same procedure as described in Example 5 except that the core was sprayed. A kaolin / PEG 4000 film was formed in the same procedure as in Example 5. The storage stability of the obtained granules in a sealed jar was examined in the same manner as in Example 1. The results of Example 6 are shown in Tables VIA-B. It can be seen that the storage stability is remarkably improved by adjusting the pH of the concentrate to 10. It can be seen that under wet conditions of 40 ° C./60% RH, the residual activity is all from less than 1% to slightly above, and an additional barrier to block humidity is required.

Figure 2008520195
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Figure 2008520195
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実施例7
吸着前の濃縮物のpHをpH10、pH10.5、及びpH11に調整した他は、実施例5の記載と同様の手順で一群の顆粒を得た。pH10.5の濃縮物から得られた酵素添着コアには、カオリン/PEG被膜の代わりに、硫酸ナトリウムの50%及び100%被膜(酵素添着コアに対する%として算出した)を形成した。被膜の形成は、実施例4と同様、硫酸ナトリウム溶液を用いて、Huttlin 流動床内で行なった。パラメータは、酵素添着コア3kg、エアインレット温度80℃、製品温度50℃、及び、エアボリューム500m3/hとした。得られた顆粒の密閉ジャー内での保存安定性を、実施例1と同様に調べた。実施例7の結果を表VIIA〜Cに示す。pHを高くすることにより、また、塩被膜を追加することにより、温度及び湿度安定性がともに向上していることが分かる。
Example 7
A group of granules was obtained in the same procedure as described in Example 5 except that the pH of the concentrate before adsorption was adjusted to pH 10, pH 10.5, and pH 11. Instead of the kaolin / PEG coating, 50% and 100% sodium sulfate coating (calculated as a percentage of the enzyme-implanted core) was formed on the enzyme-implanted core obtained from the pH 10.5 concentrate. The coating was formed in a Huttlin fluidized bed using a sodium sulfate solution as in Example 4. The parameters were 3 kg of enzyme-impregnated core, air inlet temperature 80 ° C., product temperature 50 ° C., and air volume 500 m 3 / h. The storage stability of the obtained granules in a sealed jar was examined in the same manner as in Example 1. The results of Example 7 are shown in Tables VIIA-C. It can be seen that both temperature and humidity stability are improved by increasing the pH and adding a salt coating.

Figure 2008520195
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Claims (28)

酵素顆粒を調製する方法であって、
a)酵素を含有し、pHが7よりも高い水性液体を調製する工程と、
b)工程a)の水性液体を造粒機に供給する工程と、
c)前記造粒機で粒子を調製する工程とを含んでなる方法。
A method for preparing enzyme granules comprising:
a) preparing an aqueous liquid containing an enzyme and having a pH higher than 7;
b) supplying the aqueous liquid of step a) to the granulator;
c) preparing particles with the granulator.
前記粒子を被膜層で被覆する工程を更に含んでなる、請求項1記載の方法。   The method of claim 1, further comprising the step of coating the particles with a coating layer. 前記pHが8よりも高い、請求項1記載の方法。   The method of claim 1, wherein the pH is higher than 8. 前記pHが9から12である、請求項1記載の方法。   The method of claim 1, wherein the pH is 9-12. 前記被膜層が塩を含んでなる、請求項2記載の方法。   The method of claim 2, wherein the coating layer comprises a salt. 前記被膜中の前記塩が20℃において60%よりも高い定常吸湿度を有する、請求項5記載の方法。   The method of claim 5, wherein the salt in the coating has a steady moisture absorption of greater than 60% at 20 ° C. 前記被膜中の前記塩が、NaH2PO4、Na2HPO4、Na3PO4、(NH4)H2PO4、K2HPO4、KH2PO4、Na2SO4、K2SO4、KHSO4、ZnSO4、MgSO4、CuSO4、Mg(NO32、(NH42SO4、NaCl、ホウ酸ナトリウム、酢酸マグネシウム、及びクエン酸ナトリウムからなる群より選択される、請求項5記載の方法。 The salt in the coating is NaH 2 PO 4 , Na 2 HPO 4 , Na 3 PO 4 , (NH 4 ) H 2 PO 4 , K 2 HPO 4 , KH 2 PO 4 , Na 2 SO 4 , K 2 SO. 4 , selected from the group consisting of KHSO 4 , ZnSO 4 , MgSO 4 , CuSO 4 , Mg (NO 3 ) 2 , (NH 4 ) 2 SO 4 , NaCl, sodium borate, magnesium acetate, and sodium citrate. The method of claim 5. 前記酵素が、オキシドレダクターゼ、カルボヒドラーゼ、及びヒドロラーゼからなる群より選択される、請求項1記載の方法。   The method of claim 1, wherein the enzyme is selected from the group consisting of oxidoreductase, carbohydrase, and hydrolase. 前記オキシドレダクターゼがラッカーゼである、請求項8記載の方法。   9. The method of claim 8, wherein the oxidoreductase is laccase. 前記ラッカーゼが、ヒトヨタケ属(Coprinus)、ミセリオフトラ属(Myceliophthora)、チョレイ属(Polyporus)、スキタリジウム属(Scytalidium)及びリゾクトニア属(Rhizoctoni)に由来する群より選択される、請求項9記載の方法。   10. The method of claim 9, wherein the laccase is selected from the group derived from the genus Coprinus, Myceliophthora, Polyporus, Scytalidium, and Rhizoctoni. 前記水性液体が促進剤を更に含んでなる、請求項1記載の方法。   The method of claim 1, wherein the aqueous liquid further comprises an accelerator. 前記水性液体が酵素濃縮物である、請求項1記載の方法。   The method of claim 1, wherein the aqueous liquid is an enzyme concentrate. 追加の造粒材料を前記造粒機に供給する工程を更に含んでなる、請求項1記載の方法。   The method of claim 1, further comprising supplying additional granulation material to the granulator. 工程b)において前記水性液体を不活性コア粒子に塗布する、請求項1記載の方法。   The method of claim 1 wherein the aqueous liquid is applied to the inert core particles in step b). 工程a)における前記造粒機が、流動床装置、噴霧乾燥機、及び混合造粒機からなる群より選択される、請求項1記載の方法。   The method of claim 1, wherein the granulator in step a) is selected from the group consisting of a fluid bed apparatus, a spray dryer, and a mixed granulator. 請求項1〜15の何れかに記載の方法により得られうる顆粒。   The granule which can be obtained by the method in any one of Claims 1-15. 前記酵素がラッカーゼであり、前記顆粒が促進剤を更に含んでなる、請求項16記載の顆粒。   The granule according to claim 16, wherein the enzyme is a laccase and the granule further comprises an accelerator. 前記顆粒が不活性コア粒子を含んでなる、請求項16記載の顆粒。   The granule of claim 16, wherein the granule comprises inert core particles. 前記顆粒が追加の造粒材料を含んでなる、請求項16記載の顆粒。   The granule of claim 16, wherein the granule comprises additional granulating material. 請求項16〜19の何れかに記載の顆粒を含んでなる組成物。   A composition comprising the granule according to any one of claims 16 to 19. 前記組成物がチューイング・ガムである、請求項20記載の組成物。   21. The composition of claim 20, wherein the composition is a chewing gum. 前記組成物がチューイング・ミントである、請求項20記載の組成物。   21. The composition of claim 20, wherein the composition is a chewing mint. 前記組成物がマウス・ウォッシュ組成物である、請求項20記載の組成物。   21. The composition of claim 20, wherein the composition is a mouth wash composition. 前記組成物が歯磨きペーストである、請求項20記載の組成物。   21. The composition of claim 20, wherein the composition is a toothpaste. 前記組成物がキャット・リター組成物である、請求項20記載の組成物。   21. The composition of claim 20, wherein the composition is a cat litter composition. 前記組成物がおむつ材である、請求項20記載の組成物。   21. The composition of claim 20, wherein the composition is a diaper material. 請求項16記載の顆粒又は請求項20記載の組成物の、消臭への使用。   Use of the granule according to claim 16 or the composition according to claim 20 for deodorization. 請求項16記載の顆粒又は請求項20記載の組成物の、液体肥料の消臭への使用。   Use of the granule according to claim 16 or the composition according to claim 20 for deodorizing liquid fertilizer.
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