JP2008500021A - EphA2アゴニストモノクローナル抗体およびその使用法 - Google Patents
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Abstract
Description
本願は、2003年11月20日出願の米国仮出願第60/524,177号の利益を主張し、かつ、2002年5月10日出願の米国仮出願第60/379,368号、2002年10月14日出願の米国仮出願第60/418,204号および2003年4月3日出願の米国特許仮出願第60/460,358号の利益を主張する2003年5月12日出願の米国通常特許出願第10/436,783号の一部継続出願である。それら出願の各々はその全体を参照により本明細書に組み入れるものとする。
癌
新生物、または腫瘍は、良性もしくは悪性であり得る異常な無制御の細胞増殖の結果として生じる新生物塊である。良性腫瘍は、一般に限局性のままである。悪性腫瘍は、総称的に癌と称される。「悪性」という用語は一般に、腫瘍が隣接する身体構造に侵入し破壊し、遠くの部位まで広がって死をもたらし得ることを表す(概説については、Robbins and Angell, 1976, Basic Pathology, 2d Ed., W.B. Saunders Co., Philadelphia, pp. 68-122を参照のこと)。癌は体の多くの部位で生じる可能性があり、その起源に応じて異なる挙動を示す。癌性細胞は、それらが発生した体の部分を破壊し、次いで体の他の部分に広がり、そこで新しく増殖し始め、より多くの破壊を行う。
最も生命にかかわる癌の形態は、腫瘍細胞の集団が体内の遠くのかつ異なる部位でコロニー形成能を獲得した場合にしばしば生じる。これらの転移細胞は、異なる組織中での細胞コロニー形成を通常抑制する制限を無効にすることによって生き残る。例えば、通常の乳房上皮細胞は、肺に移植しても通常は増殖または生存しないが、肺転移は、乳癌罹患率および死亡率の主な原因である。最近の証拠から、体中への転移細胞の散在が、原発腫瘍が臨床的に確認されるよりもずっと前に起こる可能性があることが示唆されている。これらの微小転移細胞は、原発腫瘍の検出および除去の後、何カ月または何年もの間潜伏したままであり得る。従って、異なる微小環境における転移細胞の増殖および生存を可能にするメカニズムのより良い理解は、転移癌と戦うために設計される治療法ならびに転移の早期検出および位置確認のための診断法の改善に関して重要である。
癌は、異常なシグナル伝達の疾患である。異常な細胞シグナル伝達は、細胞増殖および生存における足場依存性の束縛を覆す(Rhim, et al., Critical Reviews in Oncogenesis 8:305, 1997;Patarca, Critical Reviews in Oncogenesis 7:343, 1996;Malik, et al., Biochimica et Biophysica Acta 1287:73, 1996;Cance, et al., Breast Cancer Res Treat 35:105, 1995)。チロシン・キナーゼ活性は、ECM足場によって誘発され、事実、チロシン・キナーゼの発現または機能は、悪性細胞中で通常増大する(Rhim, et al., Critical Reviews in Oncogenesis 8:305,1997;Cance, et al., Breast Cancer Res Treat 35:105, 1995;Hunter, Cell 88:333, 1997)。チロシン・キナーゼ活性が悪性細胞増殖に必要であるという証拠に基づき、チロシン・キナーゼは、新しい治療学の標的となっている(Levitzki, et al., Science 267:1782, 1995;Kondapaka, et al., Molecular & Cellular Endocrinology 117:53, 1996;Fry, et al., Current Opinion in BioTechnology 6:662, 1995)。遺憾ながら、腫瘍細胞の特異的な標的化に関連する障壁により、これらの薬物の適用がしばしば制限されている。特に、チロシン・キナーゼ活性は、良性組織の機能および生存に関してしばしば重要である(Levitzki, et al., Science 267:1782, 1995)。随伴的な毒性を最小限にするためには、腫瘍細胞中で選択的に過剰発現されているチロシン・キナーゼを同定し、そして標的とすることが重要である。
EphA2は、成人の上皮で発現される130kDaの受容体チロシン・キナーゼであり、低レベルで見られ、細胞-細胞接着の部位内に多く含まれる(Zantek, et al., Cell Growth & Differentiation 10:629, 1999;Lindberg, et al., Molecular & Cellular Biology 10:6316, 1990)。EphA2は、細胞膜に固着したリガンド(エフリン(Ephrin)A1〜A5として知られている)と結合するので、この細胞下に局在することは重要である(Eph Nomenclature Committee, 1997, Cell 90:403;Gale, et al., 1997, Cell & Tissue Research 290:227)。リガンド結合の主要な結果は、EphA2自己リン酸化である(Lindberg, et al., 1990, 上掲)。しかし、他の受容体チロシン・キナーゼとは異なり、EphA2は、リガンド結合またはホスホチロシン含有量の不在下においても酵素活性を維持する(Zantek, et al., 1999, 上掲書)。EphA2は、多数の攻撃的な癌細胞に対してアップレギュレートされる。
抗転移薬の開発への1つの障害は、これらの薬物を設計および評価するのに使用するアッセイシステムである。最も通常の癌治療は、急速に増殖している細胞を標的としている。しかし、癌細胞は、より急速に増殖するとは限らないが、その代わりに、正常細胞には許容されない条件下で生存および増殖する(Lawrence and Steeg, 1996, World J. Urol. 14:124-130)。正常細胞および悪性細胞の挙動のこれらの根本的な差によって、治療的標的化の機会がもたらされる。微小転移性腫瘍が体中に既に散在しているパラダイムにより、異なる三次元微小環境における潜在的な化学療法剤を評価する必要性が強調される。多くの標準的な制癌剤アッセイは、通常の細胞培養条件(すなわち、単層増殖)下での腫瘍細胞増殖または生存を測定する。しかし、二次元アッセイにおける細胞挙動は、しばしばin vivoにおける腫瘍細胞挙動を確実に予測するものではない。
EphA2は、多くの悪性癌腫で過剰発現され、機能が変化する。EphA2は、腫瘍性タンパク質であり、癌細胞に十分に潜在的転移能力を与える。悪性細胞上に過剰発現されたEphA2は、リガンド結合と関係なくキナーゼ活性を示す。本発明者らは、EphA2レベルが低下すると、細胞の転移挙動が低減することを発見した。特に、本発明者らは、驚くべきことに、EphA2を作動(agonize)する、すなわちEphA2シグナル伝達を誘発する抗体が、実際にはEphA2の発現を低減し、腫瘍細胞の増殖および/または転移を抑制することを発見した。いかなる作用機序にも拘束されるものではないが、アゴニスト抗体は、EphA2の自己リン酸化を誘発して悪性細胞挙動を抑制し、それによってその後EphA2分解を引き起こして、発現をダウンレギュレートすることができる。従って、本発明のEphA2抗体は、EphA2シグナル伝達を作動(agonize)し、EphA2のリン酸化を増加させる(「EphA2アゴニスト抗体」)。
3.1 定義
本明細書では、「アゴニスト」という用語は、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、抗体、抗体断片、大分子、または小分子(10kD未満)を含む、別の分子の活性、活性化、または機能を増大させる任意の化合物を指す。EphA2アゴニストは、EphA2タンパク質のリン酸化および分解を増加させる。EphA2を作動(agonize)するEphA2抗体は、非癌細胞に比して、癌細胞で露出するEphA2エピトープと選択的に結合してもよいし、しなくてもよい。
nicka et al., 1994, Protein Engineering 7(6):805-814;Roguska et al., 1994, PNAS 91:969-973;Tan et al., 2002, J. Immunol. 169:1119-25;Caldas et al., 2000, Protein Eng. 13:353-60;Morea et al., 2000, Methods 20:267-79;Baca et al., 1997, J. Biol. Chem. 272:10678-84;Roguska et al., 1996, Protein Eng. 9:895-904;Couto et al, 1995, Cancer Res. 55(23 Supp):5973s-5977s;Couto et AL, 1995, Cancer Res. 55:1717-22;Sandhu,1994, Gene 150:409-10;Pedersen et al., 1994, J. Mol. Biol. 235:959-73;Jones et al., 1986, Nature 321:522-525;Reichmann et al., 1988, Nature 332:323-329;およびPresta, 1992, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596を参照のこと。
(後記参照のこと。)
5.発明の詳細な説明
本発明は、部分的には、EphA2モノクローナル抗体が癌細胞の表現型を抑制し得るという発明者らの発見に基づく。EphA2活性が低下すると、悪性の癌細胞増殖が選択的に抑制される。EphA2活性は、EphA2アゴニスト・モノクローナル抗体を用いて低下させることができる。特定の作用機序に拘束されることは意図しないが、悪性細胞増殖のこうした抑制は、EphA2のシグナル伝達を刺激し(すなわちそれを作動(agonizing)し)、それによってEphA2のリン酸化を引き起こし、これがその分解をもたらすことにより、達成される。悪性細胞増殖は、EphA2レベルが低下し、従ってリガンド依存的なEphA2シグナル伝達が低下することにより低減する。
上で論じたように、本発明は、抗体(好ましくはモノクローナル抗体)またはその断片であって、EphA2に免疫特異的に結合し、EphA2シグナル伝達を作動するもの(「EphA2アゴニスト抗体」)、および/または非癌細胞ではなく癌細胞で選択的に露出または増加するEphA2のエピトープに選択的に結合するもの(「露出EphA2エピトープ抗体」)の投与を含む。一実施形態では、該抗体は、EphA2の細胞外ドメインに結合し、好ましくはまたEphA2を作動し、例えばEphA2のリン酸化を増大させる。別の実施形態では、該抗体は、EphA2の細胞外ドメインに結合し、好ましくは、非癌細胞ではなく癌細胞上で選択的に露出または増加しているEphA2のエピトープにも結合する。より好ましい実施形態では、抗体は、EA2、EA3、EA4、またはEA5である。別の実施形態では、該抗体は、例えばELISAによってアッセイされるように、EA2、EA3、EA4、またはEA5によって結合されるエピトープに結合し、かつ/またはEphA2結合についてEA2、EA3、EA4、またはEA5と競合する。他の実施形態では、本発明の抗体は、EphA2に免疫特異的に結合し、EphA2のシグナル伝達を作動(agonize)し、かつ/または非癌細胞でなく癌細胞上で選択的に露出または増加しているEphA2のエピトープに選択的に結合し、結合についてEphA2リガンド、例えばエフリン(Ephrin)A1と競合してもよいし、しなくてもよい。
本発明は、異種ポリペプチド(またはその部分、好ましくは少なくとも10、少なくとも20、少なくとも30、少なくとも40、少なくとも50、少なくとも60、少なくとも70、少なくとも80、少なくとも90、または少なくとも100アミノ酸のポリペプチド)と、融合タンパク質を生成するように組換え融合または化学的にコンジュゲート(共有結合も非共有結合も含む)させた抗体またはその断片の使用を含む。融合は、必ずしも直接的でなくてよく、リンカー配列を介して生じていてもよい。例えば、抗体を使用すると、その抗体を特定の細胞表面受容体に特異的な抗体と融合またはコンジュゲートさせることにより、in vitroまたはin vivoで異種ポリペプチドを特定の細胞型に標的指向させることができる。異種ポリペプチドに融合またはコンジュゲートさせた抗体は、当技術分野で知られている方法を使用するin vitroイムノアッセイおよび精製法で使用することもできる。例えば、国際公開WO 93/21232;EP 439,095;Naramura et al., 1994, Immunol. Lett. 39:91-99;米国特許第5,474,981号;Gillies et al., 1992, PNAS 89:1428-1432;およびFell et al., 1991, J. Immunol. 146:2446-2452を参照されたく、これらの全体を参照により本明細書に援用する。ある実施形態では、検出、治療、管理、またはモニターすべき疾患は、EphA2を過剰発現する悪性の癌である。他の実施形態では、検出、治療、管理、またはモニターすべき疾患は、EphA2を過剰発現する細胞を伴う前癌状態である。特定の実施形態では、前癌状態は、ハイグレード前立腺上皮内新生物(PIN)、乳房の線維腺腫、線維嚢胞症、または複合母斑である。
抗体またはその断片は、抗体の合成についての当技術分野で周知の任意の方法によって、特に、化学合成、または好ましくは組換え発現技法によって生成することができる。
本発明の方法は、例えば、上記のような、高ストリンジェンシー、中または低ストリンジェンシー・ハイブリダイゼーション条件下で本発明の抗体をコードするポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドも、包含する。特定の実施形態では、本発明は、本発明の抗体(例えば、EA2、EA3、EA4、またはEA5)の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインをコードするヌクレオチド配列を含む単離核酸を提供する。別の特定の実施形態では、本発明は、ヒト化されたかまたはキメラ化されている本発明の抗体(例えば、EA2、EA3、EA4、またはEA5)の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインをコードするヌクレオチド配列を含む単離核酸を提供する。
本発明の抗体、その誘導体、類似体または断片(例えば、本発明の抗体の重鎖もしくは軽鎖、またはその一部分、または本発明の一本鎖抗体)の組換え発現には、本抗体をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターの構築が必要である。本発明の抗体分子、または抗体の重鎖もしくは軽鎖、またはその一部分(重鎖または軽鎖可変ドメインを含むことが好ましいが、必須ではない)をコードするポリヌクレオチドを得た後、当技術分野でよく知られている技術を用いて組換えDNA技術によって抗体分子を生成するためのベクターを作製することができる。従って、ヌクレオチド配列をコードする抗体を含むポリヌクレオチドを発現することによってタンパク質を調製する方法を本明細書に記載する。当業者によく知られている方法を用いて、抗体コード配列ならびに適切な転写および翻訳調節シグナルを含む発現ベクターを構築することができる。これらの方法には、例えばin vitro組換えDNA技術、合成技術、およびin vivo遺伝子組換えがある。すなわち本発明は、プロモーターに機能しうるように連結した、本発明の抗体分子、抗体の重鎖もしくは軽鎖、抗体の重鎖もしくは軽鎖可変ドメインまたはその一部分、重鎖または軽鎖CDRをコードするヌクレオチド配列を含む、複製可能なベクターを提供する。こうしたベクターには、抗体分子の定常領域をコードするヌクレオチド配列があり(例えば、国際公開WO 86/05807およびWO 89/01036;ならびに米国特許第5122464号を参照のこと)、重鎖全体、軽鎖全体、または重鎖全体および軽鎖全体の両方を発現させるため、抗体の可変ドメインをこのようなベクター中にクローニングすることができる。
本発明は、1種または複数のEphA2アゴニスト抗体および/または露出EphA2エピトープ抗体、好ましくは1種または複数のモノクローナル性(または単一抗体種である他の供給源からの抗体)のEphA2アゴニスト抗体および/または露出EphA2エピトープ抗体の投与を含む、被験体における、EphA2の過剰発現と関連する疾患、好ましくは癌、の治療、予防または管理の方法を包含する。ある具体的な実施形態では、治療、予防または管理すべき疾患は悪性癌である。別の具体的な実施形態では、治療、予防または管理すべき疾患は、EphA2を過剰発現する細胞と関連する前癌状態である。より具体的な実施形態では、この前癌状態はハイグレード前立腺上皮内新生物(PIN)、乳腺線維腺腫、線維嚢胞症または複合母斑である。
本発明は、治療または予防有効量の本発明の1種または複数のEphA2抗体を被験体に投与することにより、癌を治療、予防または管理する方法を提供する。別の実施形態では、本発明の抗体を、1種または複数の他の治療剤と組み合わせて投与してもよい。被験体は好ましくは哺乳動物であり、例えば非霊長類(ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラットなど)および霊長類(カニクイザルなどのサルおよびヒト)である。好ましい実施形態では、被験体はヒトである。
本発明の方法および組成物により治療または予防することができる癌および関連する疾患は、上皮細胞由来の癌を含むが、それだけに限定されない。このような癌の例としては以下のものが挙げられる:これらだけに限定するものではないが、急性白血病、急性リンパ性白血病、骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性および赤白血病などの急性骨髄性白血病、ならびに骨髄異形成症候群などの白血病;これらだけに限定するものではないが、慢性骨髄性(顆粒球性)白血病、慢性リンパ性白血病、毛様細胞白血病などの慢性白血病;真性赤血球増加症;これらだけに限定するものではないが、ホジキン病、非ホジキン病などのリンパ腫;これらだけに限定するものではないが、くすぶり型多発性骨髄腫、非分泌型骨髄腫、骨硬化性骨髄腫、形質細胞白血病、孤立性形質細胞腫および髄外性形質細胞腫などの多発性骨髄腫;ヴァルデンストレームマクログロブリン血症;意義不定単クローン性免疫グロブリン血症;良性単クローン性免疫グロブリン血症;H鎖病;これらだけに限定するものではないが、骨肉腫(bone sarcoma、osteosarcoma)、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性巨細胞腫瘍、骨線維肉腫、脊索腫、骨膜性骨肉腫、軟部組織肉腫、血管肉腫(angiosarcoma、hemangiosarcoma)、線維肉腫、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、リンパ管肉腫、神経鞘腫、横紋筋肉腫、滑膜肉腫などの骨および結合組織肉腫;これらだけに限定するものではないが、神経膠腫、星状膠細胞腫、脳幹神経膠腫、上衣腫、乏突起膠腫、非神経膠腫、聴神経鞘腫、頭蓋咽頭腫、髄芽腫、髄膜腫、松果体腫、松果体芽腫、原発性脳リンパ腫などの脳腫瘍;これらだけに限定するものではないが、腺癌、小葉(小細胞)癌、腺管内癌、乳腺髄様癌、乳腺粘液癌、乳腺管状癌、乳頭癌、パジェット病および炎症性乳癌などの乳癌;これらだけに限定するものではないが、クロム親和性細胞腫および副腎皮質癌などの副腎癌;これらだけに限定するものではないが、乳頭状または濾胞性甲状腺癌、髄様甲状腺癌および未分化型甲状腺癌などの甲状腺癌;これらだけに限定するものではないが、膵島細胞腺腫、ガストリン産生腫瘍、グルカゴン産生腫瘍、ビポーマ、ソマトスタチン産生腫瘍およびカルチノイドまたは膵島細胞腫などの膵癌;これらだけに限定するものではないが、クッシング病、プロラクチン産生腫瘍、末端肥大症および尿崩症などの下垂体癌;これらだけに限定するものではないが、虹彩黒色腫、脈絡膜黒色腫、毛様体黒色腫などの眼球黒色腫および網膜芽細胞腫などの眼癌;扁平上皮癌、腺癌および黒色腫などの膣癌;扁平上皮癌、黒色腫、腺癌、基底細胞癌、肉腫およびパジェット病などの外陰癌;これらだけに限定するものではないが、扁平上皮癌および腺癌などの子宮頸癌;これらだけに限定するものではないが、子宮内膜癌および子宮肉腫などの子宮癌;これらだけに限定するものではないが、卵巣上皮癌、境界性腫瘍、胚細胞腫瘍および間質腫瘍などの卵巣癌;これらだけに限定するものではないが、扁平上皮癌、腺癌、腺様嚢胞癌、粘表皮癌、腺扁平上皮癌、肉腫、黒色腫、形質細胞腫、疣贅癌および燕麦細胞(小細胞)癌などの食道癌;これらだけに限定するものではないが、腺癌、腫瘤形成型(ポリープ状)、潰瘍形成型、表在拡大型、びまん性拡大型、悪性リンパ腫、脂肪肉腫、線維肉腫、癌肉腫などの胃癌;大腸癌;直腸癌;これらだけに限定するものではないが、肝細胞癌および肝芽腫などの肝臓癌;腺癌のなどの胆嚢癌;これらだけに限定するものではないが、乳頭状、結節型およびびまん性などの胆管癌;非小細胞肺癌、扁平上皮癌(類表皮癌)、腺癌、大細胞癌および小細胞肺癌などの肺癌;これらだけに限定するものではないが、胚腫瘍、精上皮腫、未分化型、古典的(典型的)、精母細胞性、非精上皮腫、胎児性癌、奇形腫癌、絨毛癌(卵黄嚢腫瘍)などの精巣癌;これらだけに限定するものではないが、腺癌、平滑筋肉腫および横紋筋肉腫などの前立腺癌;陰茎癌;これだけに限定するものではないが、扁平上皮癌などの口腔癌;基底癌;これらだけに限定するものではないが、腺癌、粘表皮癌および腺様嚢胞癌などの唾液腺癌;これらだけに限定するものではないが、扁平上皮癌および疣贅癌などの咽頭癌;これらだけに限定するものではないが、基底細胞癌、扁平上皮癌および黒色腫、表在拡大型黒色腫、結節型黒色腫、黒子悪性黒色腫、末端黒子型黒色腫などの皮膚癌;これらだけに限定するものではないが、腎細胞癌、腺癌、副腎腫、線維肉腫、移行上皮癌(腎盤および/または尿管)などの腎癌;ウィルムス腫瘍;これらだけに限定するものではないが、移行上皮癌、扁平上皮癌、腺癌、癌肉腫などの膀胱癌。また、混合肉腫、骨原性肉腫、内皮肉腫、リンパ管内皮肉腫、中皮腫、滑膜腫、血管芽腫、上皮癌、嚢胞腺癌、気管支原性癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌および乳頭腺癌も癌に含まれる。(この疾患の総説は、Fishmanら、1985、Medicine、第2版、J.B.Lippincott社、PhiladelphiaおよびMurphyら、1997、Informed Decisions: The Complete Book of Cancer Diagnosis, Treatment, and Recovery、Viking Penguin社、Penguin Books U.S.A.社、United States of Americaを参照のこと)。
特定の実施形態では、乳癌にかかっている患者に有効量の1種または複数の本発明のモノクローナル抗体を投与する。別の実施形態では、本発明の抗体は、それだけには限らないが、ドキソルビシン、エピルビシン、ドキソルビシンとシクロホスファミドの合剤(AC)、シクロホスファミド、ドキソルビシンおよび5-フルオロウラシルの合剤(CAF)、シクロホスファミド、エピルビシンと5-フルオロウラシルの合剤(CEF)、ハーセプチン、タモキシフェン、タモキシフェンと細胞毒化学療法の組合せ、タキサン(ドセタキセルおよびパクリタキセルなど)を含む有効量の乳癌治療に有用な1種または複数の他の薬剤と組み合わせて投与することができる。他の実施形態では、本発明の抗体は、ノード(node)陽性の局在性乳癌のアジュバント治療のためにタキサンと標準的なドキソルビシンおよびシクロホスファミドと一緒に投与することができる。
特定の実施形態では、大腸癌にかかっている患者に有効量の1種または複数の本発明のモノクローナル抗体を投与する。別の実施形態では、本発明の抗体は、それだけには限らないが、5-FUとロイコボリンの合剤、5-FUとレバミゾールの合剤、イリノテカン(CPT-11)またはイリノテカン、5-FUおよびロイコボリンの合剤(IFL)を含む有効量の大腸癌治療に有用な1種または複数の他の薬剤と組み合わせて投与することができる。
特定の実施形態では、前立腺癌にかかっている患者に有効量の1種または複数の本発明のモノクローナル抗体を投与する。別の実施形態では、本発明の抗体は、それだけには限らないが、外部ビーム放射線療法、放射性同位元素(すなわち、I125、パラジウム、イリジウム)の組織内移植、ロイプロイドまたは他のLHRHアゴニスト、非ステロイド性抗アンドロゲン(フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド)、ステロイド性抗アンドロゲン(酢酸シプロテロン)、ロイプロイドとフルタミドの合剤、DES、クロロトリアニセン、エチニルエストラジオール、結合型エストロゲンU.S.P.、DES二リン酸などのエストロゲン、ストロンチウム-89などの放射性同位元素、外部ビーム放射線療法とストロンチウム-89の組合せ、アミノグルテチミド、ヒドロコルチゾン、フルタミド使用中止、プロゲステロン、およびケトコナゾールなどの第2選択のホルモン療法、低用量プレドニゾン、またはドセタキセル、パクリタキセル、エストラムスチン/ドセタキセル、エストラムスチン/エトポシド、エストラムスチン/ビンブラスチン、およびエストラムスチン/パクリタキセルを含む症状の自覚的な改善およびPSAレベルの低減をもたらすことが報告されている他の化学療法レジメンを含む有効量の前立腺癌治療に有用な1種または複数の他の薬剤と組み合わせて投与することができる。
特定の実施形態では、黒色腫にかかっている患者に有効量の1種または複数の本発明のモノクローナル抗体を投与する。別の実施形態では、本発明の抗体は、それだけには限らないが、ダカルバジン(DTIC)、カルムスチン(BCNU)およびロムスチン(CCNU)などのニトロソ尿素、ビンカ・アルカロイド、白金化合物、およびタキサンを含む穏和な単一薬剤活性をもつ薬剤、ダートマス・レジメン(シスプラチン、BCNU、およびDTIC)、インターフェロンα(IFN-A)、ならびにインターロイキン-2(IL-2)を含む有効量の黒色腫癌治療に有用な1種または複数の他の薬剤と組み合わせて投与することができる。特定の実施形態では、多発性脳転移、骨転移、および脊髄圧迫にかかっている患者に、有効量の1種または複数の本発明のアゴニストモノクローナル抗体を、メルファラン(L-PAM)を用い、かつ腫瘍壊死因子α(TNF-α)を用いるかまたは用いない単一温熱肢潅流(isolated hyperthermic limb perfusion; ILP)と組み合わせて投与することにより、症状軽減および放射線療法による腫瘍のある程度の収縮を果たすことができる。
特定の実施形態では、卵巣癌にかかっている患者に有効量の1種または複数の本発明のモノクローナル抗体を投与する。別の実施形態では、本発明の抗体は、それだけには限らないが、P32療法などの腹膜内放射線療法、全腹部および骨盤放射線療法、シスプラチン、パクリタキセル(タキソール)またはドセタキセル(タキソテール)およびシスプラチンまたはカルボプラチンの合剤、シクロホスファミドとシスプラチンの合剤、シクロホスファミドとカルボプラチンの合剤、5-FUとロイコボリンの合剤、エトポシド、リポソーマル・ドキソルビシン、ゲムシタビンまたはトポテカンを含む有効量の卵巣癌治療に有用な1種または複数の他の薬剤と組み合わせて投与することができる。白金不応性疾患にかかっている患者のために有効量の1種または複数の本発明のアゴニストモノクローナル抗体をタキソール投与と組み合わせて投与することも意図している。白金不応性の疾患にかかっている患者におけるイホスファミド、シスプラチン系併用レジメンの失敗後のサルベージ化学療法としてのヘキサメチルメラミン(HIMM)、ならびに腫瘍上の細胞質エストロゲン受容体が検出可能レベルである患者におけるタモキシフェンの投与を含む、不応性卵巣癌にかかっている患者の治療も、包含される。
特定の実施形態では、小細胞肺癌にかかっている患者に有効量の1種または複数の本発明のモノクローナル抗体を投与する。別の実施形態では、本発明の抗体は、それだけには限らないが、胸部放射線療法、シスプラチン、ビンクリスチン、ドキソルビシン、およびエトポシドを単独でまたは組合せて、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン/エトポシド、およびシスプラチンの合剤(CAV/EP)、気管支内レーザー療法による局所緩和、気管支内ステント、および/または近接照射療法を含む有効量の肺癌治療に有用な1種または複数の他の薬剤と組み合わせて投与することができる。
いくつかの実施形態では、1種または複数のモノクローナル抗体の投与による治療を、それだけには限らないが、化学療法、放射線療法、ホルモン療法、および/または生物学的療法/免疫療法と組み合わせる。予防/治療剤には、それだけには限らないが、ペプチド、ポリペプチド、翻訳後修飾タンパク質を含むタンパク質、抗体などを含むタンパク質分子;小分子(1,000ダルトン未満)、無機または有機化合物;それだけには限らないが、二本鎖または一本鎖DNA、あるいは二本鎖または一本鎖RNA、および三重らせん核酸分子を含む核酸分子が含まれるが、それだけには限らない。予防/治療剤は、公知の任意の生物(それだけには限らないが、動物、植物、微生物、真菌、および原生生物、またはウイルスを含む)、または合成分子ライブラリーに由来するものでもよい。
キン、イオベングアン(iobenguane)、ヨードドキソルビシン(iododoxorubicin)、イポメアノール(ipomeanol)、イロプラクト(iroplact)、イルソグラジン、イソベンガゾール(isobengazole)、イソホモハリコンドリン(isohomohalicondrin)B、イタセトロン、ジャスプラキノライド、カハラリド(kahalalide)F、三塩酸ラメラリン-N、ランレオチド、レイナマイシン、レノグラスチム、硫酸レンチナン、レプトルスタチン(leptolstatin)、レトロゾール、白血病阻害因子、白血球αインターフェロン、ロイプロリド+エストロゲン+プロゲステロン、ロイプロレリン、レバミゾール、リアロゾール、直鎖ポリアミン類似体、親油性二糖類ペプチド、親油性白金化合物、リッソクリナミド(lissoclinamide)7、ロバプラチン(lobaplatin)、ロンブリシン、ロメトレキソール(lometrexol)、ロニダミン、ロソキサントロン(losoxantrone)、ロバスタチン、ロキソリビン(loxoribine)、ルルトテカン(lurtotecan)、ルテチウム・テキサフィリン、リソフィリン(lysofylline)、溶解ペプチド、メイタンシン、マンノスタチンA、マリマスタット、マソプロコール(masoprocol)、マスピン(maspin)、マトリリシン阻害剤、マトリックス・メタロプロテイナーゼ阻害剤、メノガリル、メルバロン(merbarone)、メテレリン(meterelin)、メチオニナーゼ(methioninase)、メトクロプラミド、MIF阻害剤、ミフェプリストン、ミルテホシン、ミリモスチム、ミスマッチ二重鎖RNA、ミトグアゾン、ミトラクトール(mitolactol)、マイトマイシン類似体、ミトナフィド(mitonafide)、マイトトキシン(mitotoxin)線維芽細胞成長因子-サポリン、ミトキサントロン、モファロテン、モルグラモスチム、モノクローナル抗体、ヒト絨毛性ゴナドトロフィン、モノホスホリル脂質A+ミオバクテリウム細胞壁sk、モピダモール(mopidamol)、多剤耐性遺伝子阻害剤、多発腫瘍抑制剤1系治療剤、マスタード抗癌薬、マイカペルオキシド(mycaperoxide)B、ミコバクテリウム細胞壁抽出物、ミリアポロン(myriaporone)、N-アセチルジナリン、N-置換ベンズアミド、ナファレリン、ナグレスチップ(nagrestip)、ナロキソン+ペンタゾシン、ナパビン(napavin)、ナフテルピン、ナルトグラスチム、ネダプラチン、ネモルビシン(nemorubicin)、ネリドロン酸(neridronic acid)、中性エンドペプチターゼ、ニルタミド、ナイサマイシン(nisamycin)、一酸化窒素調整剤、ニトロキシド抗酸化剤、ニトルリン(nitrullyn)、O6-ベンジルグアニン、オクトレオチド、オキセノン(okicenone)、オリゴヌクレオチド、オナプリストン、オンダンセトロン、オラシン、経口サイトカイン誘発剤、オルマプラチン(ormaplatin)、オサテロン、オキサリプラチン、オキザウノマイシン、パクリタキセル、パクリタキセル類似体、パクリタキセル誘導体、パラウアミン(palauamine)、パルミトイルリゾキシン、パミドロン酸、パナキシトリオール、パノミフェン、パラバクチン(parabactin)、パゼリプチン(pazelliptine)、ペガスパルガーゼ(pegaspargase)、ペルデシン、ポリ硫酸ペントサンナトリウム、ペントスタチン、ペントロゾール(pentrozole)、パーフルブロン、パーホスファミド、ペリリルアルコール、フェナジノマイシン、酢酸フェニル、ホスファターゼ阻害剤、ピシバニル、塩酸ピロカルピン、ピラルビシン、ピリトレキシム(piritrexim)、プラセチン(placetin)A、プラセチン(placetin)B、プラスミノゲン活性化剤阻害剤、白金錯体、白金化合物、白金トリアミン錯体、ポルフィマー・ナトリウム、ポルフィロマイシン、プレドニゾン、プロピルbis-アクリドン、プロスタグランジンJ2、プロテアソーム阻害剤、タンパク質A系免疫調節剤、タンパク質キナーゼC阻害剤、微細藻、タンパク質チロシン・ホスファターゼ阻害剤、プリン・ヌクレオシド・ホスホリラーゼ阻害剤、プルプリン、ピラゾロアクリジン、ピリドキシル化ヘモグロビン・ポリオキシエチレン接合体、rafアンタゴニスト、ラルチトレキセド、ラモセトロン、rasファルネシル・タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、ras阻害剤、ras-GAP阻害剤、脱メチル化レテリプチン(retelli
ptine)、エチドロン酸レニウムRe 186、リゾキシン、リボザイム、RIIレチンアミド、ログレチミド(rogletimide)、ロヒツカイン(rohitukine)、ロムルチド、ロキニメクス(roquinimex)、ルビギノン(rubiginone)B1、ルボキシル(ruboxyl)、サフィンゴル(safingol)、サイントピン(saintopin)、SarCNU、サルコフィトールA、サルグラモスチム、Sdi 1ミメティクス、セムスチン、老化由来阻害剤1、センス・オリゴヌクレオチド、シグナル伝達阻害剤、シグナル伝達調整剤、一本鎖抗原結合タンパク質、シゾフィラン、ソブゾキサン、ナトリウム・ボロカプテート、フェニル酢酸ナトリウム、ソルベロール(solverol)、ソマトメジン結合タンパク質、ソネルミン、スパルホシン酸(sparfosic acid)、スピカマイシンD、スピロムスチン(spiromustine)、スプレノペンチン、スポンジスタチン1、スクアラミン、幹細胞阻害剤、幹細胞分裂阻害剤、スチピアミド(stipiamide)、ストロメリシン阻害剤、スルフィノシン(sulfinosine)、超活性血管作用性腸ペプチド・アンタゴニスト、スラジスタ(suradista)、スラミン、スワンソニン、合成グリコサミノグリカン、タリムスチン(tallimustine)、タモキシフェン・メチオジド、タウロムスチン(tauromustine)、タキソール、タザロテン、テコガラン・ナトリウム、テガフール、テルラピリリウム(tellurapyrylium)、テロメラーゼ阻害剤、テモポルフィン、テモゾロマイド、テニポシド、テトラクロロデカオキシド、テトラゾミン(tetrazomine)、タリブラスチン(thaliblastine)、サリドマイド、チオコラリン(thiocoraline)、チオグアニン、トロンボポエチン、トロンボポエチン・ミメティク、チマルファシン(thymalfasin)、チモポエチン受容体アゴニスト、チモトリナン(thymotrinan)、甲状腺刺激ホルモン、スズ・エチル・エチオプルプリン、チラパザミン、二塩化チタノセン、トプセンチン(topsentin)、トレミフェン、全能性幹細胞因子、翻訳阻害剤、トレチノイン、トリアセチルウリジン、トリシリビン(triciribine)、トリメトレキセート、トリプトレリン、トロピセトロン、ツロステライド(turosteride)、チロシン・キナーゼ阻害剤、チルホスチン、UBC阻害剤、ウベニメクス、尿生殖洞由来成長阻害因子、ウロキナーゼ受容体アンタゴニスト、バプレオチド(vapreotide)、バリオリン(variolin)B、ベクター系、赤血球遺伝子治療剤、ベラレゾール(velaresol)、ベラミン(veramine)、ベルジンス(verdins)、ベルテポルフィン、ビノレルビン、ビンキサルチン(vinxaltine)、バイタクシン、ボロゾール、ザノテロン(zanoterone)、ゼニプラチン(zeniplatin)、ジラスコルブ(zilascorb)、およびジノスタチン・スチマラマーが含まれる。好ましい追加の抗癌剤は、5-フルオロウラシルおよびロイコボリンである。
5.3.1 アゴニスト抗体
本発明の抗体は、EphA2受容体に免疫特異的に結合するだけでなく、好ましくはEphA2受容体を作動(すなわち、EphA2をリン酸化)させうる。EphA2は作動するとリン酸化され、その後分解される。EphA2のリン酸化、活性、または発現のレベルをアッセイするための当技術分野で周知の方法ならどんな方法でも、候補EphA2抗体をアッセイしてそのアゴニスト活性を測定するために用いることができる(例えば、下記の6.2.1節を参照のこと)。
本発明の抗体は、好ましくは、癌細胞(例えば、EphA2を過剰発現する細胞、および/またはリガンドに結合していない実質的なEphA2を有する細胞)上に露出するが、EphA2がリガンドに結合している非癌細胞上には露出しないEphA2エピトープに結合することができる。この実施形態では、本発明の抗体は、非癌細胞上には露出せず、癌細胞上に露出したEphA2エピトープに向けられる(例えば、下記の6.6節を参照のこと)。非癌細胞と癌細胞のEphA2膜分布の違いにより、非癌細胞上には露出しない癌細胞上の所与のエピトープを明らかにする。例えば、通常EphA2はそのリガンドであるEphrin Alに結合し、細胞間接触領域に局在する。しかし、癌細胞は一般に、細胞間接触を減少させる一方、そのリガンドに対して過剰量のEphA2を過剰発現する。従って、癌細胞では、細胞間接触部に局在しない非結合EphA2の量が増加する。一実施形態では、非結合で非局在のEphA2に選択的に結合する抗体が、本発明の抗体である。
本発明の予防および/または治療プロトコルの毒性および有効性は、例えばLD50(集団の50%に対し致死的な投与量)およびED50(集団の50%において治療上有効な投与量)を決定するための、細胞培養物または実験動物中での標準的な製薬手法により確認することができる。毒性効果を示す用量と治療効果を示す用量の比を治療係数とし、LD50/ED50比として表す。治療係数が大きい予防および/または治療剤が好ましい。毒性の副作用を示す予防および/または治療剤も使用できるが、そのような薬剤が患部組織の部位を標的とする送達系を設計するにあたっては、非感染細胞に対する潜在的ダメージを最小限に抑え、それにより副作用を低減させるよう注意を払うべきである。
本発明の手順および組成物は、ヒトに使用する前に、期待する治療上および予防上の活性について、in vitroでそしてin vivoで検査するのが好ましい。例えば、ある特定の治療プロトコルを付与するか否かの判定に使用できるin vitroアッセイとしてin vitro細胞培養アッセイがあり、そのアッセイでは患者の組織サンプルを培養にて増殖させ、またそのサンプルをプロトコルにかけるか、あるいはそのサンプルにプロトコルを付与し、例えばEphA2リン酸化/分解の増加など、このプロトコルの組織サンプルへの効果を観察する。接触した細胞の増殖またはその生存が低レベルであることは、その治療剤は患者の状態を治療するのに有効であることを示している。別の方法として、患者の細胞を培養せず、腫瘍または悪性細胞株の細胞を用いて治療剤および治療方法をスクリーニングしてもよい。当技術分野で標準とされているアッセイ方法の多くを、この生存および/または増殖の評価に使用することができる。例えば細胞増殖は、3H-チミジン取り込み測定、細胞の直接計数、または癌原遺伝子(fos、mycなど)や細胞周期マーカーなど既知遺伝子の転写活性の変化の検知により、評価することができる。細胞生存度はトリパンブルー染色により評価でき、分化度は形態やEphA2リン酸化/分解の増加などにより視覚化して評価することができる。
本発明の組成物には、医薬組成物の製造に有用なバルク薬剤組成物(不純または未滅菌組成物)および、単位剤形を製造するのに使用可能な医薬組成物(すなわち、被験体または患者に投与するのに適している組成物)が含まれる。このような組成物には、予防または治療有効量の本明細書に開示する予防剤および/または治療剤、またはそれらの薬剤と製薬上許容される担体の組合せが含まれる。本発明の組成物には、予防または治療有効量の本発明の1種または複数のEphA2抗体と、製薬上許容される担体との組合せが含まれるのが好ましい。別の実施形態では、本発明の組成物は追加の抗癌剤をさらに含む。特定の実施形態では、追加の抗癌剤として、限定するものではないが、化学療法剤、放射線療法剤、ホルモン療法剤、生物学的療法剤、および免疫療法剤が挙げられる。
本発明に従って使用される医薬組成物は、1種または複数の生理的に許容される担体を用いて、通常の方法で調製することができる。
癌の治療、予防、または管理に有効であろう本発明の組成物の量は、標準的な研究技法により決定することができる。例えば、癌の治療、予防、または管理に有効であろうこの組成物の用量は、例えば本明細書で開示されているか、当業者に周知である動物モデルなどの動物モデルにこの組成物を投与することで決定することができる。さらに、in vitroアッセイを任意選択で使用して最適な用量の範囲を特定するのに役立ててもよい。
本発明は本発明のEphA2抗体を充填した1つまたは複数の容器を含む医薬パックまたはキットを提供する。また、癌治療に有用な1種または複数の他の予防剤または治療剤も、この医薬パックまたはキットに含めてもよい。本発明は本発明の組成物の1種または複数の成分を充填した1つまたは複数の容器を含む医薬パックまたはキットも提供する。場合により、医薬品または生物学的療法剤の製造・使用および販売を管理する政府機関が規定する形式で、ヒトへの投与のための製造・使用および販売を当該機関が承認したことを示す注意書を、この容器に添付してもよい。
6.1 モノクローナル抗体の調製
抗原の調製
Rasで形質転換されたMCF-10A細胞をRIPAバッファーで抽出した。チロシンリン酸化タンパク質を、固定化したPY20抗体を使い部分精製した(Kannerら、1989、J.Immunol.Meth. 120、115〜124頁)。結合したタンパク質を25mMのフェニルリン酸を用い競合的に溶出させた。PY-20反応性タンパク質を含む画分を、ホスホチロシン特異的抗体を用いたウェスタン・ブロット解析により確認した。
EphA2免疫反応性の予備スクリーニングとして、バルク培養ハイブリドーマからの上清を、EphA2に対する免疫反応性についてスクリーニングした。生存腫瘍細胞上の細胞外EphA2エピトープを同定するように免疫化方法を計画した。すなわち、生細胞に対する抗体反応性について選択する蛍光ベースのELISAプロトコル(FluorELISA)を利用した。このスクリーニング法は、立体構造が拘束されているエピトープを認識する抗体に対して不利に働いたかもしれないウェスタン・ブロット解析よりも好ましかった。
6.2.1 EphA2のリン酸化と分解
EphA2抗体は、MDA-MB-231細胞内のEphA2のチロシンリン酸化および分解を促進した(図1A〜1C)。EA5(図1A〜1B、レーン2〜3)、EA2(図1A〜1B、レーン4〜5)または対照(図1A〜1B、レーン1)の存在下で、細胞単層を37℃で8分間インキュベートした。次にEphA2特異的抗体(D7、Upstate Biologicals社、Lake Placid、NYより購入;アメリカン・タイプ・ティシュー・コレクション(American Type Tissue Collection)に2000年12月8日寄託し、ATCC番号PTA 2755が割り振られた。)を用いて細胞溶解液を免疫沈降させ、SDS-PAGEにより分離し、ホスホチロシン特異的抗体(4G10、Upstate Biologicals社、Lake Placid、NY、より購入)を用いてウェスタン・ブロット解析に掛けた(図1A)。メンブレンを剥がし、ローディング対照として免疫沈降に使用したEphA2特異的抗体(D7)で再プローブした。
腫瘍細胞を軟寒天中に懸濁させた。Zelinskiらの既報(2001、Cancer Res.61:2301〜2306頁)に従い、軟寒天中でのコロニー形成をアッセイした。抗体または対照液(PBS)を底部と上部の寒天溶液に加えた。精製した抗体または対照液(PBS)の存在下で、細胞を軟寒天内に37℃で7日間懸濁させた。Olympus社製40x対物レンズ装着倒立型位相差顕微鏡CK-3を使い、コロニー形成を顕微鏡下でスコアリングした。少なくとも3個の細胞を含むクラスターを陽性としてスコアリングした。高倍率視野当たりの平均コロニー数を示す。各実験において別々の10箇所の高倍率顕微鏡視野を平均した。またここに示す結果は少なくとも3回の別々の実験を代表するものである。
MATRIGEL(商標)などの微小三次元環境における腫瘍細胞の挙動から、乳房上皮細胞の分化状態と攻撃性を信頼性をもって予測することができる。単層で培養した良性(MCF-10A)もしくは悪性(MDA-MB-231)の乳房上皮細胞を、EphA2抗体(10μg/ml)もしくは対照液(PBS)の存在下、MATRRIGEL(商標)上でインキュベートする。MATRRIGEL(商標)上での細胞の挙動を、Zelinskiら(2001、Cancer Res.61:2301〜2306頁)に従い分析する。簡単に説明すると、組織培養皿をMATRRIGEL(商標)(Collaborative Biomedical Products社、Bedford、MA)を用い37℃でコーティングし、あらかじめEphA2抗体もしくは対照液(PBS)と共に氷上で1時間インキュベートしておいた1x105個のMDA-MB-231細胞もしくはMCF-10A細胞を加える。MATRRIGEL(商標)上で細胞を37℃で24時間インキュベートし、オリンパス社製倒立型光学顕微鏡IX-70を用い評価する。画像はすべて35mmフィルム(T-Max-400:Kodak社、Rochester、NY)上に記録する。
EA5はin vivoでの腫瘍細胞の増殖を阻害することができる。胸腺欠損マウスに対し、5x106個のMDA-MB-231乳癌細胞を同所的に(orthotopically)または皮下に、そして、5x106個のA549肺癌細胞を皮下に移植した。この腫瘍が平均体積100mm3に増殖した後、マウスに6mg/kgのEA5または陰性対照(PBSまたは1A7抗体)を3週間にわたり週2回腹腔内投与した。実験動物は通例最後の処置から少なくとも2週間後または腫瘍が2000mm3を超えた時点で屠殺した。腫瘍増殖を評価し、腫瘍体積を初期腫瘍体積(100mm3)で割った比率として、または総体積として示した。EA5は、同所的(図4A)または皮下(図4B、D)に移植されたMDA-MB-231細胞の増殖を阻害した。EA5はまた皮下移植されたA549細胞の増殖も阻害した(図4C)。
エストロゲン感受性乳癌細胞MCF-7をトランスフェクトし、ヒトEphA2(MCF-7EphA2)を安定に過剰発現させた(pNeoMSV-EphA2はScripps InstituteのT.Hunter博士より頂いた)。対応する対照と比較して、トランスフェクトした細胞でのEphA2の異所過剰発現を、ウエスタン・ブロット分析により確認した(データ示さず)。
EphA2の免疫反応性は腫瘍性前立腺上皮細胞と非腫瘍性のものとを識別した。根治的恥骨後式前立腺全摘出の93例を、インディアナ大学医療センターの外科病理学の記録から入手した。患者の年齢は44歳から77歳にわたった(平均63歳)。根治的前立腺全摘出試料の原発腫瘍をグリーソンの方法(Bostwick「Neoplasms of the prostate」、BostwickとEble編集、1997、Urologic Surgical Pathology、St.Louis:Mosby出版社、343〜422頁;GlesonとMellinger 1974、J.Urol.111:58〜64頁)に従い分類した。グリーソン分類は4から10にわたった。病理病期を1997年版TNM(腫瘍、リンパ節、転移)基準(Flemingら、1997、AJCC Cancer Staging Manual、Philadelphia:Raven and Lippincott出版社)に従い評価した。病理病期は、T2a(n=9患者数)、T2b(n=43)、T3a(n=27)およびT3b(n=14)であった。13患者に手術時にリンパ節転移があった。
転移性乳癌患者で本発明のアゴニストモノクローナル抗体の薬物動態および安全性を評価するための研究を設計した。癌患者は現在タキソールとタキソテールによる治療を受けている。現在治療を受けている患者はその処方による治療を継続することが許されている。
EphA2抗体のエピトープを特徴づけた。EA5およびEA2は選択的に悪性細胞に結合する。抗EphA2モノクローナル抗体であるEA5およびEA2は、免疫蛍光染色法で示されるように、良性乳房上皮腫瘍細胞MCF-10A(図11C〜11D)よりも悪性乳房上皮腫瘍細胞MDA-MB-231(図11A〜11B)により強く結合する。さらに、EA5は悪性前立腺細胞に対し免疫反応性を示した。抗EphA2モノクローナル抗体EA5は、ホルマリン固定しパラフィン包埋した保管臨床サンプル中の悪性前立腺癌細胞を同定した(図12)。
当業者は、本明細書に記載の本発明の特定の実施形態の多くの均等物を認識し、あるいは単に日常的な実験を用いて確かめることができるはずである。こうした均等物は、特許請求の範囲に包含されるものである。本明細書に記載したすべての刊行物、特許および特許出願は、あたかもその各々が具体的にかつ個別に参考として本明細書に取り込まれていたと同程度に、本明細書中に参照により本明細書に取り込むものとする。
Claims (123)
- 癌治療を必要とする患者の癌を治療する方法であって、前記患者に、EphA2アゴニスト抗体または露出EphA2エピトープ抗体であるEphA2抗体を治療有効量で投与することを含む方法。
- 前記投与が、無処理の癌細胞におけるEphA2リン酸化のレベルに比して癌細胞におけるEphA2リン酸化を増加させる、請求項1に記載の方法。
- 前記投与が、無処理の癌細胞におけるEphA2発現のレベルに比して癌細胞におけるEphA2発現を低下させる、請求項1に記載の方法。
- 前記EphA2抗体が、細胞間接触をしていない細胞上で発現されたときのEphA2と結合する、請求項1に記載の方法。
- 前記の露出EphA2エピトープ抗体がEA5のヒト型、ヒト化型、またはキメラ型である、請求項4に記載の方法。
- 前記EphA2抗体が、リガンドと安定的に相互作用することのできないEphA2と結合する、請求項1に記載の方法。
- 前記EphA2抗体が、リガンドに結合していないEphA2と結合する、請求項1に記載の方法。
- 前記癌が上皮細胞由来のものである、請求項1に記載の方法。
- 前記癌が、前記癌細胞の組織型を有する非癌細胞に比してEphA2を過剰発現する細胞を含む、請求項8に記載の方法。
- 前記癌が、皮膚、肺、結腸、乳房、前立腺、膀胱、腎臓、もしくは膵臓の癌であるか、または腎細胞癌もしくは黒色腫である請求項8に記載の方法。
- 前記癌が転移癌である、請求項1に記載の方法。
- 前記EphA2抗体がモノクローナル抗体である、請求項1に記載の方法。
- 前記EphA2抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体であり、かつEphA2への結合についてEA5と競合する、請求項1に記載の方法。
- 前記EphA2抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である、請求項1に記載の方法。
- 前記EphA2抗体が、EA5のヒト型、ヒト化型、またはキメラ型である、請求項1に記載の方法。
- EphA2抗体ではない追加の抗癌治療を施すことを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記の追加の癌治療が、化学療法、生物学的療法、免疫療法、放射線療法、ホルモン療法、および手術からなる群から選択される、請求項16に記載の方法。
- 癌治療を必要とする患者における第1の治療に対して完全にまたは部分的に不応性である癌の治療方法であって、前記患者に、EphA2アゴニスト抗体または露出EphA2エピトープ抗体であるEphA2抗体を治療有効量で投与することを含む第2の治療を施すことを含む方法。
- 前記の第1の治療が、化学療法、ホルモン療法、生物学的療法、または放射線療法である、請求項18に記載の方法。
- 前記の第2の治療が、化学療法、ホルモン療法、生物学的療法、または放射線療法を施すことをさらに含む、請求項18に記載の方法。
- 前記第2の治療を施すのと同時に前記第1の治療を施すことを含む、請求項18に記載の方法。
- 前記の露出EphA2エピトープ抗体が、細胞間接触をしていないときのEphA2と結合する、請求項18に記載の方法。
- 前記の露出EphA2エピトープ抗体が、リガンドと安定的に相互作用することのできないEphA2と結合する、請求項18に記載の方法。
- 前記の露出EphA2エピトープ抗体が、リガンドよりも多く認められるEphA2と結合する、請求項18に記載の方法。
- 前記EphA2抗体が、EA5のヒト型、ヒト化型、またはキメラ型である、請求項24に記載の方法。
- アゴニスト抗体または露出EphA2エピトープ抗体である治療有効量のEphA2抗体と、製薬上許容される担体とを含む医薬組成物。
- 前記EphA2抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体であり、かつEphA2への結合についてEA5と競合する、請求項26に記載の医薬組成物。
- 前記EphA2抗体がモノクローナル抗体である、請求項26に記載の医薬組成物。
- 前記EphA2抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である、請求項26に記載の医薬組成物。
- 前記EphA2抗体が、EA5のヒト型、ヒト化型、またはキメラ型である、請求項26に記載の医薬組成物。
- EphA2抗体ではない抗癌剤を含む、請求項26に記載の医薬組成物。
- 前記抗癌剤が、化学療法剤、放射線療法剤、ホルモン療法剤、生物学的療法剤、または免疫療法剤である、請求項31に記載の医薬組成物。
- EphA2と免疫特異的に結合し、その結合がEphA2の少なくとも1種の活性を作動させる単離抗体。
- EphA2の前記活性がEphA2リン酸化またはEphA2分解である、請求項33の単離抗体。
- 露出EphA2エピトープ抗体である単離抗体。
- 前記露出EphA2エピトープ抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体であり、かつEphA2への結合についてEA5と競合する、請求項35に記載の単離抗体。
- モノクローナル抗体である、請求項33または35に記載の単離抗体。
- 前記抗体がヒトである、請求項33または35に記載の単離抗体。
- 前記抗体がヒト化されている、請求項33または35に記載の単離抗体。
- 前記抗体がキメラ化されている、請求項34または35に記載の単離抗体。
- 前記抗体が誘導体である、請求項33または35に記載の単離抗体。
- 誘導体抗体ではない抗体と比べてin vivo半減期が延長されている、請求項41に記載の単離抗体。
- EA5のヒト型、ヒト化型、またはキメラ型である、請求項33または35に記載の抗体。
- 請求項43に記載の抗体を産生する細胞系。
- EphA2と免疫特異的に結合し、かつ、以下のCDR:
配列番号18のアミノ酸配列を含むVL CDR1、配列番号19のアミノ酸配列を含むVL CDR2、配列番号20のアミノ酸配列を含むVL CDR3、配列番号22のアミノ酸配列を含むVH CDR1、配列番号23のアミノ酸配列を含むVH CDR2、または配列番号24のアミノ酸配列を含むVH CDR3、
のうち少なくとも1つを有する抗体であって、ここで該抗体のEphA2への結合がEphA2の少なくとも1種の活性を作動させる、前記抗体。 - 前記のEphA2の活性が、EphA2リン酸化またはEphA2分解である、請求項45に記載の抗体。
- 前記VL CDRおよびVH CDR群のうち少なくとも2つ、少なくとも3つ、少なくとも4つ、少なくとも5つ、または6つ全てを含む、請求項45に記載の抗体。
- 配列番号17のアミノ酸配列を有するVLドメインを含み、EphA2と免疫特異的に結合する抗体。
- 配列番号21のアミノ酸配列を有するVHドメインをさらに含む、請求項48に記載の抗体。
- 配列番号18のアミノ酸配列を有するVL CDR1を含み、EphA2と免疫特異的に結合する抗体。
- 配列番号19のアミノ酸配列を有するVL CDR2をさらに含む、請求項50に記載の抗体。
- 配列番号20のアミノ酸配列を有するVL CDR3をさらに含む、請求項50に記載の抗体。
- 配列番号19のアミノ酸配列を有するVL CDR2および配列番号20のアミノ酸配列を有するVL CDR3をさらに含む、請求項50に記載の抗体。
- 配列番号22のアミノ酸配列を有するVH CDR1をさらに含む、請求項50に記載の抗体。
- 配列番号23のアミノ酸配列を有するVH CDR2をさらに含む、請求項50に記載の抗体。
- 配列番号24のアミノ酸配列を有するVH CDR3をさらに含む、請求項50に記載の抗体。
- 配列番号22のアミノ酸配列を有するVH CDR1および配列番号23のアミノ酸配列を有するVH CDR2をさらに含む、請求項50に記載の抗体。
- 配列番号22のアミノ酸配列を有するVH CDR1および配列番号24のアミノ酸配列を有するVH CDR3をさらに含む、請求項50に記載の抗体。
- 配列番号23のアミノ酸配列を有するVH CDR2および配列番号24のアミノ酸配列を有するVH CDR3をさらに含む、請求項50に記載の抗体。
- 配列番号24のアミノ酸配列を有するVH CDR3をさらに含む、請求項57に記載の抗体。
- 配列番号19のアミノ酸配列を有するVL CDR2および配列番号22のアミノ酸配列を有するVH CDR1を含む、単離抗体。
- 配列番号19のアミノ酸配列を有するVL CDR2および配列番号23のアミノ酸配列を有するVH CDR2を含む抗体。
- 配列番号19のアミノ酸配列を有するVL CDR2および配列番号24のアミノ酸配列を有するVH CDR3を含む抗体。
- 配列番号23のアミノ酸配列を有するVH CDR2をさらに含む、請求項61に記載の抗体。
- 配列番号24のアミノ酸配列を有するVH CDR3をさらに含む、請求項61に記載の抗体。
- 配列番号24のアミノ酸配列を有するVH CDR3をさらに含む、請求項62に記載の抗体。
- 配列番号24のアミノ酸配列を有するVH CDR3をさらに含む、請求項64に記載の抗体。
- 配列番号22のアミノ酸配列を有するVH CDR1をさらに含む、請求項51に記載の抗体。
- 配列番号23のアミノ酸配列を有するVH CDR2をさらに含む、請求項51に記載の抗体。
- 配列番号24のアミノ酸配列を有するVH CDR3をさらに含む、請求項51に記載の抗体。
- 配列番号22のアミノ酸配列を有するVH CDR1および配列番号23のアミノ酸配列を有するVH CDR2をさらに含む、請求項51に記載の抗体。
- 配列番号22のアミノ酸配列を有するVH CDR1および配列番号24のアミノ酸配列を有するVH CDR3をさらに含む、請求項51に記載の抗体。
- 配列番号23のアミノ酸配列を有するVH CDR2および配列番号24のアミノ酸配列を有するVH CDR3をさらに含む、請求項51に記載の抗体。
- 配列番号24のアミノ酸配列を有するVH CDR3をさらに含む、請求項71に記載の抗体。
- 配列番号22のアミノ酸配列を有するVH CDR1をさらに含む、請求項52に記載の抗体。
- 配列番号23のアミノ酸配列を有するVH CDR2をさらに含む、請求項52に記載の抗体。
- 配列番号24のアミノ酸配列を有するVH CDR3をさらに含む、請求項52に記載の抗体。
- 配列番号22のアミノ酸配列を有するVH CDR1および配列番号23のアミノ酸配列を有するVH CDR2をさらに含む、請求項52に記載の抗体。
- 配列番号22のアミノ酸配列を有するVH CDR1および配列番号24のアミノ酸配列を有するVH CDR3をさらに含む、請求項52に記載の抗体。
- 配列番号23のアミノ酸配列を有するVH CDR2および配列番号24のアミノ酸配列を有するVH CDR3をさらに含む、請求項52に記載の抗体。
- 配列番号24のアミノ酸配列を有するVH CDR3をさらに含む、請求項78に記載の抗体。
- 配列番号20のアミノ酸配列を有するVL CDR3をさらに含む、請求項61に記載の抗体。
- 配列番号20のアミノ酸配列を有するVL CDR3をさらに含む、請求項62に記載の抗体。
- 配列番号20のアミノ酸配列を有するVL CDR3をさらに含む、請求項63に記載の抗体。
- 配列番号20のアミノ酸配列を有するVL CDR3をさらに含む、請求項64に記載の抗体。
- 配列番号20のアミノ酸配列を有するVL CDR3をさらに含む、請求項65に記載の抗体。
- 配列番号20のアミノ酸配列を有するVL CDR3をさらに含む、請求項66に記載の抗体。
- 配列番号24のアミノ酸配列を有するVH CDR3をさらに含む、請求項85に記載の抗体。
- 配列番号22のアミノ酸配列を有するVH CDR1をさらに含む、請求項53に記載の抗体。
- 配列番号23のアミノ酸配列を有するVH CDR2をさらに含む、請求項53に記載の抗体。
- 配列番号24のアミノ酸配列を有するVH CDR3をさらに含む、請求項53に記載の抗体。
- 配列番号22のアミノ酸配列を有するVH CDR1および配列番号23のアミノ酸配列を有するVH CDR2をさらに含む、請求項53に記載の抗体。
- 配列番号22のアミノ酸配列を有するVH CDR1および配列番号24のアミノ酸配列を有するVH CDR3をさらに含む、請求項53に記載の抗体。
- 配列番号23のアミノ酸配列を有するVH CDR2および配列番号24のアミノ酸配列を有するVH CDR3をさらに含む、請求項53に記載の抗体。
- 配列番号24のアミノ酸配列を有するVH CDR3をさらに含む、請求項92に記載の抗体。
- ヒトフレームワーク領域を含む、請求項45に記載の抗体。
- フレームワーク領域中に1個、2個、3個、4個、または5個の突然変異を有する、請求項96に記載の抗体。
- 定常領域を含む、請求項45に記載の抗体。
- ヒトの定常領域を含む、請求項96または98に記載の抗体。
- 請求項45に記載の抗体のヒト型、ヒト化型、またはキメラ型の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインをコードするヌクレオチド配列を含む、単離核酸。
- 請求項100に記載の核酸を含むベクター。
- 請求項101に記載のベクターを含む宿主細胞。
- 請求項45に記載の抗体の治療有効量を、癌治療を必要とする患者に投与することを含む、該患者における癌の治療方法。
- 前記投与が、無処理の癌細胞におけるEphA2リン酸化のレベルに比して癌細胞におけるEphA2のリン酸化を増加させる、請求項103に記載の方法。
- 前記癌が上皮細胞由来のものである、請求項103に記載の方法。
- 前記癌が、前記癌細胞の組織型を有する非癌細胞に比してEphA2を過剰発現する細胞を含む、請求項105に記載の方法。
- 前記癌が、皮膚、肺、結腸、乳房、前立腺、膀胱、腎臓、もしくは膵臓の癌であるか、または腎細胞癌もしくは黒色腫である請求項105に記載の方法。
- 前記癌が転移癌である、請求項103に記載の方法。
- 前記抗体が、請求項115または118に記載の抗体である、請求項103に記載の方法。
- EphA2抗体ではない追加の抗癌治療を施すことを含む、請求項103に記載の方法。
- 前記の追加の癌治療が、化学療法、生物学的療法、免疫療法、放射線療法、ホルモン療法、および手術からなる群から選択される、請求項110に記載の方法。
- 癌治療を必要とする患者における第1の治療に対して完全にまたは部分的に不応性である癌の治療方法であって、前記患者に、請求項45に記載の抗体を治療有効量で投与することを含む第2の治療を施すことを含む方法。
- 前記の第1の治療が、化学療法、ホルモン療法、生物学的療法、または放射線療法である、請求項112に記載の方法。
- 前記の第2の治療が、化学療法、ホルモン療法、生物学的療法、または放射線療法を施すことをさらに含む、請求項112に記載の方法。
- 前記第2の治療を施すのと同時に前記第1の治療を施すことを含む、請求項112に記載の方法。
- 治療有効量の請求項45に記載の抗体と製薬上許容される担体とを含む医薬組成物。
- 治療有効量の請求項96または98に記載の抗体と製薬上許容される担体とを含む医薬組成物。
- EphA2抗体ではない抗癌剤を含む、請求項116に記載の医薬組成物。
- 前記抗癌剤が、化学療法剤、放射線療法剤、ホルモン療法剤、生物学的療法剤、または免疫療法剤である、請求項118に記載の医薬組成物。
- EA2またはEA5ではない、請求項33、35、または45に記載の抗体。
- 異種ポリペプチドとコンジュゲートさせた、請求項33、35、45、47、96、97、または98に記載の抗体。
- 治療剤または薬物成分とコンジュゲートさせた、請求項33、35、45、47、96、97、または98に記載の抗体。
- 診断剤または検出剤とコンジュゲートさせた、請求項33、35、45、47、96、97、または98に記載の抗体。
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