JP2008162933A - Antifungal agent, cleaning agent for fungus, resin having antifungal effect and method for suppressing generation of fungus - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、浴室や洗面所など湿気の多い所に発生しやすく、黒く変色することが知られている黒カビに対して特に効果を有する、防カビ剤、カビ用洗浄剤、防カビ効果を有する樹脂、及びカビ発生抑制方法に関する。 The present invention has an antifungal agent, a mold cleaning agent, and an antifungal effect, which is particularly effective against black mold that is easily generated in humid places such as bathrooms and bathrooms and is known to discolor black. The present invention relates to a resin and a method for suppressing mold generation.
家庭における浴室、脱衣所、洗面所や台所などのような湿気の多いところでは、黒カビが発生しやすく、黒く変色することから視覚的に認知されやすく、洗浄、防カビの対象とされている。このような黒カビは、クラドスポリウム(Cladosporium)属、アルタナリア(Alternaria)属、オウレオバシディウム(Aureobasidium)属などに属する微生物に代表される真菌であり、成育から時間が経過すると、界面活性剤を使用しても除去が困難となりうる。また、黒カビ以外にも、生活の場でよく見られるカビには、ペニシリウム属（Penicillium）、アスペルギルスアスペルギルス属（Aspergillus）、フサリウム（Fusarium）属に属する微生物などの真菌があげられる。 In humid places such as bathrooms, dressing rooms, washrooms, and kitchens at home, black mold tends to be generated, and since it turns black, it is easily recognized visually, and is subject to washing and mold prevention. Such black mold is a fungus represented by microorganisms belonging to the genus Cladosporium, Alternaria, Aureobasidium, etc. Even if an agent is used, removal may be difficult. In addition to black mold, other common fungi include fungi such as microorganisms belonging to the genus Penicillium, Aspergillus, Aspergillus and Fusarium.
一般的に、塩素系洗剤などが黒カビの除菌に用いられているが、塩素系洗剤は人に対して毒性があり、環境的にも有害で、かつ酸と混合すると有害な塩素ガスを発生する、さらに手荒れや衣服の傷みなどの原因ともなり、強い殺菌効果を示すものの安全性は非常に低い。 In general, chlorine-based detergents are used to disinfect black mold, but chlorine-based detergents are toxic to humans, are environmentally harmful, and generate harmful chlorine gas when mixed with acid. In addition, although it may cause rough hands and bruises on clothes, it exhibits a strong bactericidal effect, but its safety is very low.
黒カビに対して洗浄、防カビ効果を示す従来技術の例を挙げると、例えば下記特許文献１には、必須の成分として式：ＭＨＳＯ5(但し、Ｍはアルカリ金属である)で表されるペルオキソ一硫酸水素塩と、上記のペルオキソ一硫酸水素塩１００重量部に対し１００〜６００重量部の水溶性炭酸塩とを含有してなることを特徴とする洗濯機槽用洗浄剤組成物が開示されている。そして、当該組成物は、酸性洗剤と混用しても有害ガスを発生しないことが記載されている。 As an example of the prior art showing cleaning and antifungal effects against black mold, for example, Patent Document 1 listed below discloses peroxo represented by the formula: MHSO 5 (where M is an alkali metal) as an essential component. Disclosed is a detergent composition for a washing machine tub, comprising hydrogen sulfate and 100 to 600 parts by weight of a water-soluble carbonate per 100 parts by weight of the peroxomonosulfate. ing. And it is described that the said composition does not generate | occur | produce harmful gas, even if it mixes with an acidic detergent.
また、下記特許文献２には、１，２，４−ジチアゾリジン誘導体を有効成分として含有する黒カビ防除剤が開示されている。そして、当該誘導体を有効成分とすることによって、安全かつ有効な黒カビ防除剤を提供できることが記載されている。 Patent Document 2 below discloses a black mold control agent containing a 1,2,4-dithiazolidine derivative as an active ingredient. And it is described that a safe and effective black mold control agent can be provided by using the derivative as an active ingredient.
また、下記特許文献３には、天然物であるため安全性が高いと考えられる海藻の抽出液を用いたカビ洗浄剤が開示されている。 Moreover, the following patent document 3 discloses a mold cleaning agent using a seaweed extract which is considered to be highly safe because it is a natural product.
更に、下記特許文献４には、１μｍ以下の微細粒状の透明酸化チタンを樹脂エマルジョンに混合してなることを特徴とするコーティング剤組成物が開示されている。そして、当該組成物を黒かびの発生の防止、防臭、殺菌等に用いることが記載されている。
しかしながら、上記特許文献に例示されるような従来技術では、工業的に利用するには適しなかったり、高コストであったり、安全性が低いなどの問題があり、防カビ剤やカビ発生抑制方法として必ずしも満足できるものではなかった。 However, the conventional techniques exemplified in the above-mentioned patent documents have problems such as being unsuitable for industrial use, high cost, low safety, and the like. It was not always satisfactory.
したがって本発明の目的は、カビ、特に、浴室、洗面所などで発生する黒カビに対して効果を示し、生体に対して安全、かつ衣服などの生地を傷めず、安価である防カビ剤カビ用、洗浄剤、防カビ効果を有する樹脂、及びカビ発生抑制方法を提供することにある。 Therefore, an object of the present invention is to be effective for mold, particularly black mold generated in bathrooms, washrooms, etc., is safe for living bodies, does not damage cloths such as clothes, and is an inexpensive fungicide. An object of the present invention is to provide a cleaning agent, a resin having an antifungal effect, and a method for suppressing the generation of mold.
本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意研究を行い、人体に対して無害である物質の中から、黒カビの一種であるクラドスポリウム クラドスポリオイデス（Cladosporium cladosporioides）に対して毒性を示す物質の検索を行ったところ、カニやエビなどの甲殻類の外骨格から得られるキチン・キトサンを原料として調製することができる水溶性キチンとキトヘキサオース（６糖鎖長のキトサンオリゴ糖）に強力な増殖抑制作用を見出し、本発明を完成するに至った。 The present inventors have conducted intensive research to solve the above-mentioned problems, and are toxic to Cladosporium cladosporioides, a kind of black mold, from substances that are harmless to the human body. After searching the substances shown, water-soluble chitin and chitohexaose (chitosan oligosaccharides with 6 sugar chain length) that can be prepared from chitin / chitosan obtained from crustacean exoskeletons such as crabs and shrimps Thus, the present inventors have found a powerful growth inhibitory action and completed the present invention.
すなわち、本発明の１つは、水溶性キチン及び／又はその誘導体を有効成分として含有する防カビ剤である。 That is, one of the present invention is a fungicide containing water-soluble chitin and / or a derivative thereof as an active ingredient.
本発明の水溶性キチン及び／又はその誘導体を有効成分として含有する防カビ剤によれば、有効成分である水溶性キチン及び／又はその誘導体が、カビの発芽を抑制し、カビの菌糸分裂を抑制し、又はカビのバイオフィルム形成を抑制するので、カビ発生箇所に施与することでカビの繁殖を防ぎ、又は抑制することができる。 According to the antifungal agent containing the water-soluble chitin and / or derivative thereof of the present invention as an active ingredient, the water-soluble chitin and / or derivative thereof as an active ingredient suppresses mold germination and suppresses mold mycelia. Since it suppresses or suppresses the formation of mold biofilms, it is possible to prevent or suppress the growth of mold by applying to mold generation sites.
本発明の水溶性キチン及び／又はその誘導体を有効成分として含有する防カビ剤においては、水溶性キチン換算濃度が固形分換算で０．０１〜１００質量％であることが好ましい。 In the antifungal agent containing the water-soluble chitin and / or derivative thereof of the present invention as an active ingredient, the concentration in terms of water-soluble chitin is preferably 0.01 to 100% by mass in terms of solid content.
本発明のもう１つは、キトヘキサオース及び／又はその誘導体を有効成分として含有する防カビ剤である。 Another aspect of the present invention is a fungicide containing chitohexaose and / or a derivative thereof as an active ingredient.
本発明のキトヘキサオース及び／又はその誘導体を有効成分として含有する防カビ剤によれば、有効成分であるキトヘキサオース及び／又はその誘導体が、カビの発芽を抑制し、カビの菌糸分裂を抑制し、又はカビのバイオフィルム形成を抑制するので、カビ発生箇所に施与することでカビの繁殖を防ぎ、又は抑制することができる。 According to the antifungal agent containing chitohexaose and / or a derivative thereof of the present invention as an active ingredient, the active ingredient chitohexaose and / or a derivative thereof suppresses the germination of mold and suppresses mycelial division of the mold. Since it suppresses or suppresses the formation of mold biofilms, it is possible to prevent or suppress the growth of mold by applying to mold generation sites.
本発明のキトヘキサオース及び／又はその誘導体を有効成分として含有する防カビ剤においては、前記キトヘキサオース及び／又はその誘導体は、酸及び／又は酵素を用いてキトサンを分解して得られたものであることが好ましい。また、キトヘキサオース換算濃度が固形分換算で０．０１〜１００質量％であることが好ましい。 In the antifungal agent containing chitohexaose and / or a derivative thereof according to the present invention as an active ingredient, the chitohexaose and / or the derivative thereof is obtained by decomposing chitosan using an acid and / or an enzyme. It is preferable. Moreover, it is preferable that chitohexaose conversion density | concentration is 0.01-100 mass% in conversion of solid content.
本発明の上記防カビ剤は、クラドスポリウム(Cladosporium)属、アルタナリア(Alternaria)属、又はオウレオバシディウム(Aureobasidium)属に属するカビに対して用いられることが好ましい。 The antifungal agent of the present invention is preferably used against mold belonging to the genus Cladosporium, the genus Alternaria, or the genus Aureobasidium.
本発明のもう１つは、前記本発明の防カビ剤を含有することを特徴とするカビ用洗浄剤である。 Another aspect of the present invention is a mold cleaning agent characterized by containing the antifungal agent of the present invention.
本発明のカビ用洗浄剤によれば、水溶性キチン、キトヘキサオース、又はそれらの誘導体をカビ用洗浄剤に含有させることにより、洗浄の際に、防カビ作用の有効成分である水溶性キチン、キトヘキサオース、又はそれらの誘導体を洗浄対象物やブラシ、スポンジ等の洗浄道具等にいきわたらせることができるので、洗浄後の洗浄対象物や洗浄道具等におけるカビの発生を抑制することができる。また、塩素系洗浄剤などと異なり有害なガスを発生することもなく、さらに手荒れや衣服の傷みなどの原因ともなりにくい。 According to the mold cleaning agent of the present invention, the water-soluble chitin, chitohexaose, or a derivative thereof is contained in the mold cleaning agent, so that the water-soluble chitin, which is an active ingredient for antifungal action at the time of cleaning. , Chitohexaose, or their derivatives can be spread over cleaning objects such as objects to be cleaned and brushes, sponges, etc. it can. In addition, unlike chlorine-based cleaning agents, no harmful gas is generated, and it is difficult to cause rough hands and clothes.
本発明の更にもう１つは、前記本発明の防カビ剤を含有することを特徴とする防カビ効果を有する樹脂である。 Still another of the present invention is a resin having an antifungal effect characterized by containing the antifungal agent of the present invention.
本発明の防カビ効果を有する樹脂によれば、浴室、洗面所、台所、トイレ等の水回りの目地やパッキン等、カビの生えやすい箇所に用いられる樹脂に、防カビ作用の有効成分である水溶性キチン、キトヘキサオース、又はそれらの誘導体を含有させることにより、それらの表面又は内部にカビが発生するのを防ぐことができる。 According to the resin having an antifungal effect of the present invention, it is an active ingredient having an antifungal effect on a resin used in a place where mold tends to grow, such as joints and packing around water, such as a bathroom, a washroom, a kitchen, and a toilet. By containing water-soluble chitin, chitohexaose, or a derivative thereof, mold can be prevented from being generated on the surface or inside thereof.
本発明の防カビ効果を有する樹脂は、シリコーン系樹脂、アクリル系樹脂、酢酸ビニル系樹脂、エポキシ系樹脂から選ばれた１種、又は２種以上を含有してなる樹脂組成物であることが好ましい。 The resin having an antifungal effect of the present invention is a resin composition comprising one or more selected from silicone resins, acrylic resins, vinyl acetate resins, and epoxy resins. preferable.
一方、本発明のカビ発生抑制方法は、前記本発明の防カビ剤を施与することを特徴とする。 On the other hand, the method for inhibiting the occurrence of mold according to the present invention is characterized by applying the fungicide according to the present invention.
本発明のカビ発生抑制方法によれば、すでに安全性が確かめられている水溶性キチン、キトヘキサオース、又はそれらの誘導体を防カビ作用の有効成分とするので、安価に、且つ、生体に対して安全で衣服などの生地を傷めたりもせずに、カビ発生を抑制することができる。また、塩素系洗剤や酸性洗剤と混用しても有害ガスを発生することがない。 According to the method for inhibiting the occurrence of mold according to the present invention, water-soluble chitin, chitohexaose, or a derivative thereof, whose safety has already been confirmed, is used as an active ingredient for fungicidal action. It is safe and can prevent the occurrence of mold without damaging the fabric such as clothes. In addition, no harmful gas is generated even when mixed with chlorinated detergents or acidic detergents.
本発明のカビ発生抑制方法は、クラドスポリウム(Cladosporium)属、アルタナリア(Alternaria)属、又はオウレオバシディウム(Aureobasidium)属に属するカビに対して好ましく適用することができる。 The mold generation suppressing method of the present invention can be preferably applied to molds belonging to the genus Cladosporium, the genus Alternaria, or the genus Aureobasidium.
本発明によれば、有効成分である水溶性キチン、キトヘキサオース、又はそれらの誘導体が、カビの発芽を抑制し、カビの菌糸分裂を抑制し、又はカビのバイオフィルム形成を抑制するので、カビ発生箇所に施与することでカビの繁殖を防ぎ、又は抑制することができる。また、水溶性キチンやキトヘキサオースはすでに安全性が確かめられて利用されている安全かつ安価な物質であるので、防カビ剤、カビ洗浄剤あるいは防カビ効果のある壁やパッキンなどへの、幅広い応用が可能となる According to the present invention, the active ingredient water-soluble chitin, chitohexaose, or a derivative thereof suppresses fungal germination, suppresses fungal mycelial division, or suppresses fungal biofilm formation, It can prevent or suppress the growth of mold by applying to the mold occurrence site. In addition, since water-soluble chitin and chitohexaose are safe and inexpensive substances that have already been confirmed to be safe, they can be applied to fungicides, mold cleaners, mold-proof walls and packing, etc. Wide application is possible
本発明で用いられる水溶性キチンは、カニ、エビ等の甲殻類の外皮から、炭酸カルシウム、蛋白質、その他の夾雑物等を除去して得られる水不溶性のキチンを、好ましくは２０〜６０％、より好ましくは２０〜４０％、更により好ましくは２５〜３５％脱アセチル化することにより水溶性化したものである。 The water-soluble chitin used in the present invention is water-insoluble chitin obtained by removing calcium carbonate, protein, other contaminants, etc. from the shell of crustaceans such as crabs and shrimps, preferably 20 to 60%, More preferably 20 to 40%, still more preferably 25 to 35%, and water-solubilized by deacetylation.
本発明で用いられる水溶性キチンは、例えば、本出願人による特開平８−２８３３０６号公報、非特許文献 J.Carbohydrate Chemistry, 21(1&2), 149-161 (2002)、特許第２８１４７０１号公報、又は特許第２８２２６１１号公報に記載された公知の方法に準じて調製することができる。以下にその概略を説明する。 Examples of the water-soluble chitin used in the present invention include, for example, Japanese Patent Application Laid-Open No. 8-283306, Non-Patent Document J. Carbohydrate Chemistry, 21 (1 & 2), 149-161 (2002), Japanese Patent No. 2814701, Or it can prepare according to the well-known method described in the patent 2822611 gazette. The outline will be described below.
<水溶性キチンの調製>
キチンを、５℃以下で、アルカリ水溶液に分散させ、アルカリ均一溶液とした後、５℃以下で、脱アセチル化率が２０％以上６０％未満、より好ましくは２０％以上４０％未満となるまで部分脱アセチル化する。
<Preparation of water-soluble chitin>
After chitin is dispersed in an alkaline aqueous solution at 5 ° C. or less to obtain an alkali homogeneous solution, until 5 ° C. or less, the deacetylation rate is 20% or more and less than 60%, more preferably 20% or more and less than 40%. Partial deacetylation.
水溶性キチン調製のためのキチンは、カニ、エビ等の甲殻類の外皮から、炭酸カルシウム、蛋白質、その他の夾雑物等を除去して得られるものを用いることができ、甲殻類の外皮から常法によって調製してもよく、通常市販されているフレーク状又は粉末状のものを用いてもよい。 Chitin for preparing water-soluble chitin can be obtained by removing calcium carbonate, protein, and other contaminants from the shells of crustaceans such as crabs and shrimps. It may be prepared by a method, and a commercially available flake or powder may be used.
水溶性キチン調製のためのアルカリ水溶液としては、アルカリ剤の５〜５０質量％水溶液を用いるのが好ましい。アルカリ剤としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化バリウム、水酸化カルシウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム等が好ましく、水酸化ナトリウムがより好ましい。 As an alkaline aqueous solution for preparing water-soluble chitin, it is preferable to use a 5 to 50% by mass aqueous solution of an alkaline agent. As the alkaline agent, sodium hydroxide, potassium hydroxide, barium hydroxide, calcium hydroxide, sodium carbonate, potassium carbonate and the like are preferable, and sodium hydroxide is more preferable.
調製法について具体的に説明すると、まず、キチンを、５℃以下、好ましくは−５〜５℃、より好ましくは０〜５℃の条件下に、アルカリ水溶液に分散させ、アルカリ均一溶液とする。 The preparation method will be specifically described. First, chitin is dispersed in an alkaline aqueous solution at 5 ° C. or lower, preferably −5 to 5 ° C., more preferably 0 to 5 ° C. to obtain an alkali homogeneous solution.
ここで、アルカリ均一溶液とは、均一な水飴状のアルカリキチン水溶液を意味し、例えばキチンをアルカリ水溶液に分散させた後、撹拌しながら、減圧して、脱気し、次いで、氷を加えて撹拌するか、又は、凍結させた後、解凍することにより調製することができる。 Here, the alkali homogeneous solution means a uniform syrupy alkaline chitin aqueous solution. For example, after chitin is dispersed in the alkaline aqueous solution, it is deaerated while stirring and deaerated, and then ice is added. It can be prepared by stirring or freezing and then thawing.
次に、このアルカリ均一溶液を、５℃以下の条件下に、所定時間熟成させて、部分脱アセチル化を行う。 Next, this alkali homogeneous solution is aged for a predetermined time under the condition of 5 ° C. or less to perform partial deacetylation.
なお、熟成とは、アルカリ均一溶液を５℃以下に保ちながら放置し、脱アセチル化を徐々に進行させることをいう。また、アルカリ均一溶液にした段階で、すでに、１０％程度は脱アセチル化されているが、この状態のものは水に不溶性であり、熟成させることにより、部分脱アセチル化を進行させ、脱アセチル化率が２０％以上６０％未満、より好ましくは２０％以上４０％未満となるようにする。 The term “aging” means that the alkali uniform solution is allowed to stand while being kept at 5 ° C. or less, and deacetylation is gradually advanced. In addition, about 10% has already been deacetylated at the stage of making the alkali homogeneous solution, but in this state, it is insoluble in water. By aging, partial deacetylation proceeds and deacetylation proceeds. The conversion rate is 20% or more and less than 60%, more preferably 20% or more and less than 40%.
脱アセチル化の進行度合いは、キチン濃度、アルカリ濃度、熟成期間、熟成温度などの要因により異なる。キチン濃度は、溶解度の関係から、１〜１０質量％程度が好ましい。 The degree of progress of deacetylation varies depending on factors such as chitin concentration, alkali concentration, aging period, and aging temperature. The chitin concentration is preferably about 1 to 10% by mass because of solubility.
また、熟成温度は、温度が低いほど、脱アセチル化の進行が遅くなり、熟成に長時間を要することになるので、−５〜５℃が好ましく、０〜５℃がより好ましい。脱アセチル化率が２０％以上、４０％未満の場合には、５℃を超える温度で熟成させると、水溶性のものが得られにくくなる。 The aging temperature is preferably −5 to 5 ° C., more preferably 0 to 5 ° C., because the lower the temperature, the slower the progress of deacetylation and the longer the aging takes. When the deacetylation rate is 20% or more and less than 40%, it is difficult to obtain a water-soluble product when aging at a temperature exceeding 5 ° C.
更に、熟成期間は、例えば、キチン濃度１．５質量％、アルカリ濃度１５質量％とした場合、脱アセチル化率を２５〜３５％とするには、３℃で、８〜１０日間、０℃で、１０〜１２日間必要である。 Furthermore, when the aging period is, for example, a chitin concentration of 1.5% by mass and an alkali concentration of 15% by mass, the deacetylation rate is 25 to 35% at 3 ° C., 8 to 10 days, 0 ° C. And 10-12 days are required.
部分脱アセチル化させた後、塩酸、酢酸等の酸を加えて、ｐＨ８〜９に調整する。ｐＨ８〜９にすると、白色ゲル状の沈殿物が生じるので、この沈殿物を、遠心分離、フィルター濾過等の固液分離操作によって回収し、水とエタノールとの混合液で洗浄して塩分を除去する。次いで、沈殿物を水に分散させ、塩酸、酢酸等の酸を微量添加して、ｐＨ５．５〜６．５に調整すると、均一な水溶液となる。この水溶液を、噴霧乾燥、凍結乾燥等により乾燥すると、粉末が得られる。 After partial deacetylation, an acid such as hydrochloric acid or acetic acid is added to adjust the pH to 8-9. When the pH is adjusted to 8-9, a white gel-like precipitate is generated. This precipitate is collected by solid-liquid separation operations such as centrifugation and filter filtration, and washed with a mixed solution of water and ethanol to remove salt. To do. Next, when the precipitate is dispersed in water and a small amount of acid such as hydrochloric acid or acetic acid is added to adjust the pH to 5.5 to 6.5, a uniform aqueous solution is obtained. When this aqueous solution is dried by spray drying, freeze drying or the like, a powder is obtained.
このようにして得られる水溶性キチンの分子量範囲はおおよそ１０，０００〜５００，０００であり、かつ、キチンの特性を有しつつ水溶性であることが特徴である。なお、脱アセチル化率が２０％未満の場合、水に溶解せず、４０％以上の場合、脱アセチル化に長時間を要し、経済的に不利である。また、一般的に、脱アセチル化率が高くなるほど、反応性が増すなどの問題もある。したがって、脱アセチル化率は、２０〜４０％であることがより好ましく、２５〜３５％であることが更により好ましい。 The molecular weight range of the water-soluble chitin thus obtained is approximately 10,000 to 500,000, and is characterized by being water-soluble while having the characteristics of chitin. When the deacetylation rate is less than 20%, it does not dissolve in water, and when it is 40% or more, it takes a long time for deacetylation, which is economically disadvantageous. In general, the higher the deacetylation rate, the higher the reactivity. Therefore, the deacetylation rate is more preferably 20 to 40%, and still more preferably 25 to 35%.
上記脱アセチル化率は、コロイド滴定法によって測定した値であって、具体的には次の方法によって測定した値を意味する。 The deacetylation rate is a value measured by a colloid titration method, and specifically means a value measured by the following method.
すなわち、１１０℃で１時間乾燥した試料０．５ｇを正確に秤量し、これを０．５％（ｖ／ｖ）酢酸溶液に溶かして正確に１００ｇとする。この試料を溶解した酢酸溶液１．０ｇを２００ｍｌの三角フラスコに正確にはかりとり、脱イオン水５０ｍｌを加え、十分攪拌混合する。指示薬として０．１％トルイジンブルー溶液０．２ｍｌを加え、Ｎ／４００ポリビニル硫酸カリウム溶液（ＰＶＳＫ）で滴定する。そして、下記数１により脱アセチル化率を算出する。 That is, 0.5 g of a sample dried at 110 ° C. for 1 hour is accurately weighed and dissolved in a 0.5% (v / v) acetic acid solution to make exactly 100 g. Accurately measure 1.0 g of the acetic acid solution in which this sample is dissolved in a 200 ml Erlenmeyer flask, add 50 ml of deionized water, and mix thoroughly. Add 0.2 ml of 0.1% toluidine blue solution as an indicator and titrate with N / 400 potassium potassium sulfate solution (PVSK). Then, the deacetylation rate is calculated by the following formula 1.
なお、上記水溶性キチン調製の諸条件によっては、得られる水溶性キチンの脱アセチル化率が、実質的に無視できる範囲で２０％以上、６０％未満の範囲を逸脱する場合があるが、上記水溶性その他の特徴を有し、上記水溶性キチンと同等の特性を有するものであれば、そのような水溶性キチンであっても本発明において用いることができる。 Depending on the conditions for the preparation of the water-soluble chitin, the deacetylation rate of the obtained water-soluble chitin may deviate from the range of 20% or more and less than 60% within a substantially negligible range. Any water-soluble chitin can be used in the present invention as long as it has other water-soluble characteristics and has the same characteristics as the above-mentioned water-soluble chitin.
一方、本発明で用いられるキトヘキサオース（６糖鎖長のキトサンオリゴ糖）は、市販のものをそのまま用いることもできるが、工業的に製造するためには、カニ、エビ等の甲殻類の殻等から常法によって調製されるキトサンを化学的又は酵素的に部分加水分解した後、イオン交換等のクロマトグラフィーによって分画、精製して得られたキトヘキサオースを用いることができる。その場合、キトサンの部分加水分解は、キトサンを塩酸、酢酸、蟻酸等の酸とともに加熱した後、酸を除去するか、又は中和脱塩し、結晶化等により粉末化する方法、あるいはキトサンを希酸に溶解後、キトサナーゼ、Ｄ−グルコサミニダーゼ等のキトサン分解酵素を作用させる方法等によって行うことができる。 On the other hand, as the chitohexaose (chitosan oligosaccharide having a 6 sugar chain length) used in the present invention, a commercially available product can be used as it is. However, for industrial production, crustaceans such as crabs and shrimps are used. Chitohexaose obtained by chemically or enzymatically partially hydrolyzing chitosan prepared from shells and the like and then fractionating and purifying by chromatography such as ion exchange can be used. In that case, the partial hydrolysis of chitosan can be accomplished by heating the chitosan with an acid such as hydrochloric acid, acetic acid, formic acid, etc., and then removing the acid or neutralizing and desalting, and then pulverizing the chitosan by crystallization. After dissolving in dilute acid, it can be carried out by a method in which a chitosan degrading enzyme such as chitosanase or D-glucosaminidase is allowed to act.
本発明で用いられるキトヘキサオースを工業的に製造するためには、例えば、本出願人による特開２００３−２１２８８９号公報に開示されたキトヘキサオースの調製法により行うことができる。その方法によれば、原料に由来する部分アセチル化キトオリゴ糖などの不純物を効率よく除去することができると共に製造過程におけるキトサンオリゴ糖の着色を防止することができ、高純度のキトサンオリゴ糖を効率よく製造できるので、好ましく用いることができる。 In order to industrially produce chitohexaose used in the present invention, it can be carried out, for example, by the method for preparing chitohexaose disclosed in Japanese Patent Application Laid-Open No. 2003-212889 by the present applicant. According to this method, impurities such as partially acetylated chitooligosaccharides derived from raw materials can be efficiently removed, and coloring of chitosan oligosaccharides during the production process can be prevented, and high-purity chitosan oligosaccharides can be efficiently used. Since it can manufacture well, it can use preferably.
キトサンの部分加水分解物として得られるキトサンオリゴ糖は、通常重合度２〜８糖程度の混合物、すなわちキトビオース、キトトリオース、キトテトラオース、キトペンタオース、キトヘキサオース、キトヘプタオース、キトオクタオース等の混合物である。本発明で用いられるキトヘキサオースは、その混合物からカラムクロマトグラフィーや溶剤分画等の方法によって分画、精製することができる。 The chitosan oligosaccharide obtained as a partial hydrolyzate of chitosan is usually a mixture having a polymerization degree of about 2 to 8 sugars, that is, a mixture of chitobiose, chitotriose, chitotetraose, chitopentaose, chitohexaose, chitoheptaose, chitooctaose, etc. It is. Chitohexaose used in the present invention can be fractionated and purified from the mixture by a method such as column chromatography or solvent fractionation.
また、本発明においては、キトヘキサオース以外のキトサンオリゴ糖が、カビの増殖を促進するなど、キトヘキサオースの作用に負の影響を与えることがないので、上記のようなキトサンの部分加水分解物として得られるキトサンオリゴ糖をそのまま有効成分とすることもできる。なお、キトサンオリゴ糖又はその混合物は、各社から市販されており、例えば、「ＣＯＳ−ＹＳ」（商品名、焼津水産化学工業株式会社製）などを好ましく用いることができる。 Further, in the present invention, chitosan oligosaccharides other than chitohexaose do not negatively affect the action of chitohexaose, such as promoting the growth of fungi, so the partial hydrolysis of chitosan as described above Chitosan oligosaccharide obtained as a product can be used as an active ingredient as it is. In addition, chitosan oligosaccharide or its mixture is marketed from each company, For example, "COS-YS" (a brand name, Yaizu Suisan Chemical Co., Ltd. product) etc. can be used preferably.
本発明においては、有効成分として水溶性キチンの誘導体やキトヘキサオースの誘導体を用いることもできる。 In the present invention, a water-soluble chitin derivative or chitohexaose derivative may be used as an active ingredient.
本発明に用いられる水溶性キチン誘導体としては、例えば、キチンの構成単位であるＮ−アセチルグルコサミン残基のＣ６位の第１級アルコール基をエチレングリコール化したグリコールキチン（エチレングリコールキチン）や、前記Ｃ６位の第１級アルコール基をカルボキシメチル化したカルボキシメチルキチンなどが例示できる。これらの誘導体は公知の方法に準じて、水溶性キチンを化学修飾することにより得ることができる。 Examples of the water-soluble chitin derivative used in the present invention include glycol chitin (ethylene glycol chitin) obtained by ethylene glycolating the primary alcohol group at the C6 position of the N-acetylglucosamine residue which is a structural unit of chitin, Examples thereof include carboxymethyl chitin in which the C6 primary alcohol group is carboxymethylated. These derivatives can be obtained by chemically modifying water-soluble chitin according to a known method.
本発明に用いられるキトヘキサオース誘導体としては、例えば、キトヘキサオースの部分アセチル化体やキトヘキサオースの糖アルコール体が例示できる。これらの誘導体は公知の方法に準じて、キトヘキサオースをアセチル化、又は還元することにより、それぞれ得ることができる。 Examples of the chitohexaose derivative used in the present invention include a partially acetylated form of chitohexaose and a sugar alcohol form of chitohexaose. These derivatives can be respectively obtained by acetylating or reducing chitohexaose according to a known method.
また、本発明で用いられる水溶性キチン、キトヘキサオース、又はそれらの誘導体は、塩酸塩、硝酸塩及び酢酸塩等の無機酸塩等の酸塩、ナトリウム塩やカリウム塩などのアルカリ金属塩、又はマグネシウム塩やカルシウム塩などのアルカリ土類金属塩、クエン酸、乳酸などの有機塩などの形態をとっていてもよい。 In addition, water-soluble chitin, chitohexaose, or a derivative thereof used in the present invention is an acid salt such as an inorganic acid salt such as hydrochloride, nitrate, and acetate, an alkali metal salt such as sodium salt or potassium salt, or It may be in the form of an alkaline earth metal salt such as magnesium salt or calcium salt, or an organic salt such as citric acid or lactic acid.
本発明において、「水溶性キチン換算濃度」とは、水溶性キチンについては、水溶性キチンの濃度を意味し、上記水溶性キチン誘導体や塩の形態をとったものについては、その量を理論的に水溶性キチン当りに換算した濃度を意味する。 In the present invention, “water-soluble chitin equivalent concentration” means the concentration of water-soluble chitin for water-soluble chitin, and the amount of water-soluble chitin derivatives and salts in the form of salts is theoretically determined. The concentration in terms of water-soluble chitin.
同様に、本発明における、「キトヘキサオース換算濃度」とは、キトヘキサオースについてはキトヘキサオースの濃度を意味し、上記キトヘキサオース誘導体や塩の形態をとったものについては、その量を理論的にキトヘキサオース当りに換算した濃度を意味する。 Similarly, in the present invention, the “concentration of chitohexaose” means the concentration of chitohexaose for chitohexaose, and the amount of the chitohexaose derivative or salt in the form of the salt. Theoretically, it means the concentration converted per chitohexaose.
本発明の防カビ剤は、公知の技術に準じて、粉体、ブロック、クリーム、ジェル、溶液、ペースト、エアーゾル用懸濁・乳化液などを調製する際に、水溶性キチン、水溶性キチン誘導体、又はそれらの塩類、及びキトヘキサオース、キトヘキサオース誘導体、又はそれらの塩類を配合することにより、得ることができる。この場合、水、緩衝液、乳化溶媒等の溶媒に上記水溶性キチン又はキトヘキサオースをもたらす有効成分のみが単独で配合されているような単純な組成とすることもできる。 The antifungal agent of the present invention is a water-soluble chitin or water-soluble chitin derivative when preparing powders, blocks, creams, gels, solutions, pastes, suspensions / emulsions for aerosols, etc. according to known techniques. Or a salt thereof, and chitohexaose, a chitohexaose derivative, or a salt thereof can be obtained. In this case, a simple composition in which only an active ingredient that brings about the above-mentioned water-soluble chitin or chitohexaose in a solvent such as water, a buffer solution, or an emulsifying solvent can be used.
水溶性キチン及びキトヘキサオースは、易水溶性であり、他の多くの化合物とも混合容易であるため、粉体、ブロック、クリーム、ジェル、溶液、ペースト、エアーゾル用懸濁・乳化液などの幅広い形態で使用することが可能である。また、水溶性キチンの場合は、高分子であるため、水に溶解すると粘性を与えることができ、その粘性効果は、酸性から弱アルカリ性まで幅広く発揮される。従って、クリーム、ジェル、ペースト等の形態とするにあたって、水溶性キチン自身の特性により適度な粘度を与えることができる。 Water-soluble chitin and chitohexaose are easily water-soluble and can be easily mixed with many other compounds, so a wide range of powders, blocks, creams, gels, solutions, pastes, suspensions and emulsions for aerosols, etc. It can be used in the form. In the case of water-soluble chitin, since it is a polymer, it can be given viscosity when dissolved in water, and its viscosity effect is widely exhibited from acidic to weakly alkaline. Therefore, when it is in the form of cream, gel, paste, etc., an appropriate viscosity can be given due to the characteristics of the water-soluble chitin itself.
本発明においては、上記防カビ剤中の水溶性キチン濃度は、カビ増殖抑制に必要な水溶性キチンの濃度に照らして、適宜選択することができるが、好ましくは水溶性キチン換算濃度が固形分換算で０．０１〜１００質量％であり、より好ましくは固形分換算で０．５〜１００質量％である。 In the present invention, the concentration of water-soluble chitin in the antifungal agent can be appropriately selected in light of the concentration of water-soluble chitin required for mold growth inhibition, but preferably the water-soluble chitin equivalent concentration is a solid content. It is 0.01-100 mass% in conversion, More preferably, it is 0.5-100 mass% in solid content conversion.
また、上記防カビ剤中のキトヘキサオース濃度は、カビ増殖抑制に必要なキトヘキサオースの濃度に照らして、適宜選択することができるが、好ましくはキトヘキサオース換算濃度が固形分換算で０．０１〜１００質量％であり、より好ましくは固形分換算で０．５〜１００質量％である。 The concentration of chitohexaose in the above fungicide can be appropriately selected in light of the concentration of chitohexaose necessary for inhibiting mold growth, but the chitohexaose equivalent concentration is preferably 0 in terms of solid content. It is 0.01-100 mass%, More preferably, it is 0.5-100 mass% in conversion of solid content.
本発明のカビ用洗浄剤は、公知の技術に準じて洗浄剤を調製する際に、水溶性キチン、水溶性キチン誘導体、又はそれらの塩類、及びキトヘキサオース、キトヘキサオース誘導体、又はそれらの塩類を配合することにより、得ることができる。この場合、市販の洗浄剤などへ配合することもできる。 The mold cleaning agent of the present invention, when preparing the cleaning agent according to a known technique, water-soluble chitin, water-soluble chitin derivatives, or salts thereof, chitohexaose, chitohexaose derivatives, or their It can be obtained by blending salts. In this case, it can also mix | blend with a commercially available cleaning agent etc.
本発明のカビ用洗浄剤には、洗浄作用を有する成分として、界面活性剤等を配合させることができる。また、更に抗菌作用を有する抗菌成分を配合させることもできる。また、塩素系洗浄剤等、従来のカビ用洗浄剤に使用されている有効成分を併用しても良い。 In the mold cleaning agent of the present invention, a surfactant or the like can be added as a component having a cleaning action. Further, an antibacterial component having an antibacterial action can be added. Moreover, you may use together the active ingredient currently used for the cleaning agent for conventional molds, such as a chlorine-type cleaning agent.
水溶性キチンやキトヘキサオースは、洗浄作用を有する洗浄剤や抗菌作用を有する抗菌剤などへ混合しても、それらの有効性を低減させることなくその防カビ作用を発揮することができる。また、塩素系洗浄剤などと異なり有害なガスを発生することもなく、さらに手荒れや衣服の傷みなどの原因ともなりにくく、従来のカビ用洗浄剤の有効成分を併用した際にも、塩素系有効成分の配合量を減量することができ、上記不具合を軽減することが可能である。 Even when water-soluble chitin and chitohexaose are mixed with a cleaning agent having a cleaning action or an antibacterial agent having an antibacterial action, the fungicidal action can be exhibited without reducing their effectiveness. In addition, unlike chlorine-based cleaning agents, it does not generate harmful gases, and is unlikely to cause rough hands or damage to clothes. When combined with the active ingredients of conventional mold cleaning agents, The amount of the active ingredient can be reduced, and the above-mentioned problems can be reduced.
本発明においては、上記カビ用洗浄剤中の水溶性キチン濃度は、カビ増殖抑制に必要な水溶性キチンの濃度に照らして、適宜選択することができるが、好ましくは水溶性キチン換算濃度が、固形分換算で０．０１〜１００質量％であり、より好ましくは固形分換算で０．５〜１００質量％である。また、１００ｍｌ溶液状で使用するとして換算したときの濃度が、０．００１〜５質量％であることが好ましく、０．０５〜５質量％であることがより好ましい。１００ｍｌ溶液状で使用するとして換算したときの濃度が、０．００１質量％以下である場合には、上記防カビの効果が得られないので好ましくなく、５質量％であると、粘性が高まり、使用しづらくなるので好ましくない。 In the present invention, the concentration of water-soluble chitin in the mold cleaning agent can be appropriately selected in light of the concentration of water-soluble chitin necessary for mold growth inhibition, but preferably the water-soluble chitin equivalent concentration is It is 0.01-100 mass% in conversion of solid content, More preferably, it is 0.5-100 mass% in conversion of solid content. Moreover, it is preferable that it is 0.001-5 mass%, and, as for the density | concentration when converted as using as a 100 ml solution form, it is more preferable that it is 0.05-5 mass%. When the concentration when converted to be used in the form of a 100 ml solution is 0.001% by mass or less, the above-mentioned antifungal effect cannot be obtained. Since it becomes difficult to use, it is not preferable.
本発明においては、上記カビ用洗浄剤中のキトヘキサオース濃度は、カビ増殖抑制に必要なキトヘキサオースの濃度に照らして、適宜選択することができるが、好ましくはキトヘキサオース換算濃度が固形分換算で０．０１〜１００質量％であり、より好ましくは固形分換算で０．５〜１００質量％である。また、１００ｍｌ溶液状で使用するとして換算したときの濃度が、０．００１〜１０質量％であることが好ましく、０．０５〜５質量％であることがより好ましい。１００ｍｌ溶液状で使用するとして換算したときの濃度が、０．００１質量％以下である場合には、上記防カビの効果が得られないので好ましくなく、１０質量％以上であると、粘性が高まり、使用しづらくなるので好ましくない。 In the present invention, the chitohexaose concentration in the mold cleaning agent can be appropriately selected in light of the concentration of chitohexaose required for mold growth inhibition, but preferably the chitohexaose conversion concentration is solid. It is 0.01 to 100% by mass in terms of minutes, and more preferably 0.5 to 100% by mass in terms of solids. Moreover, it is preferable that it is 0.001-10 mass%, and, as for the density | concentration when converted as using as a 100 ml solution form, it is more preferable that it is 0.05-5 mass%. When the concentration when converted to be used as a 100 ml solution is 0.001% by mass or less, the above-mentioned antifungal effect cannot be obtained, which is not preferable. When the concentration is 10% by mass or more, the viscosity increases. This is not preferable because it is difficult to use.
本発明の防カビ効果を有する樹脂は、公知の技術に準じて樹脂を調製する際に、水溶性キチン、水溶性キチン誘導体、又はそれらの塩類、及びキトヘキサオース、キトヘキサオース誘導体、又はそれらの塩類を配合することにより、得ることができる。 The resin having an antifungal effect of the present invention is prepared by preparing water-soluble chitin, water-soluble chitin derivatives, or salts thereof, chitohexaose, chitohexaose derivatives, or the like when preparing the resin according to a known technique. It can obtain by mix | blending these salts.
上記樹脂としては、シリコーン系樹脂、アクリル系樹脂、酢酸ビニル系樹脂、エポキシ系樹脂から選ばれた１種、又は２種以上を含有してなる樹脂組成物等を好ましく例示できる。上記水溶性キチン及びキトヘキサオースをもたらす有効成分は、その樹脂が成形、硬化される前の調製液に配合され、成形・硬化後には樹脂中に封入される。 Preferred examples of the resin include a resin composition containing one or more selected from silicone resins, acrylic resins, vinyl acetate resins, and epoxy resins. The active ingredient that provides the water-soluble chitin and chitohexaose is blended in a preparation solution before the resin is molded and cured, and is encapsulated in the resin after molding and curing.
水溶性キチン及びキトヘキサオースは、樹脂に配合して用いても、樹脂の硬化性、成形性等への影響が少なく、その防カビ作用を有効に発揮することができるので、浴室、洗面所、台所、トイレ等の水回りの目地や弁当箱パッキンのシリコーン等、カビの生えやすい箇所に用いられる樹脂等の様々な樹脂に配合することで、それらの表面又は内部にカビが繁殖するのを防ぐことができる。 Water-soluble chitin and chitohexaose have little effect on the curability and moldability of the resin even if they are used in the resin, and can effectively exert their fungicidal action. By mixing with various resins such as resin used in areas where mold tends to grow, such as water joints in kitchens and toilets, silicone in lunch box packing, etc., molds propagate on their surfaces or inside. Can be prevented.
本発明においては、上記防カビ効果を有する樹脂中の水溶性キチン濃度は、カビ増殖抑制に必要な水溶性キチンの濃度に照らして、適宜選択することができるが、好ましくは水溶性キチン換算濃度が１０〜５０質量％であり、より好ましくは３０〜５０質量％である。 In the present invention, the concentration of water-soluble chitin in the resin having an antifungal effect can be appropriately selected in light of the concentration of water-soluble chitin required for mold growth inhibition, but preferably a concentration equivalent to water-soluble chitin Is 10-50 mass%, More preferably, it is 30-50 mass%.
本発明においては、上記防カビ効果を有する樹脂中のキトヘキサオース濃度は、カビ増殖抑制に必要なキトヘキサオースの濃度に照らして、適宜選択することができるが、好ましくはキトヘキサオース換算濃度が１０〜５０質量％であり、より好ましくは３０〜５０質量％である。 In the present invention, the concentration of chitohexaose in the resin having the antifungal effect can be appropriately selected in light of the concentration of chitohexaose necessary for mold growth inhibition, but preferably the concentration in terms of chitohexaose. Is 10-50 mass%, More preferably, it is 30-50 mass%.
一方、本発明のカビ発生抑制方法においては、その施与手段は特に制限されず、例えば、塗布、噴霧、散布、予め抗菌素材としての素材へ封入しておくなどの手段によって、カビの発生を抑制したい箇所、又は、カビが生えている箇所に水溶性キチン、水溶性キチン誘導体、又はそれらの塩類、及びキトヘキサオース、キトヘキサオース誘導体、又はそれらの塩類を施与する。 On the other hand, in the method for inhibiting mold generation according to the present invention, the application means is not particularly limited. A water-soluble chitin, a water-soluble chitin derivative, or a salt thereof, and chitohexaose, a chitohexaose derivative, or a salt thereof are applied to a site that is desired to be suppressed or a mold is growing.
例えば、建物や浴室の壁であれば、直接散布し、あるいは塗料に混合してコーティング剤として塗装するなどの手段により行う。また、上述のとおり、水溶性キチン、キトヘキサオース、又はそれらの誘導体をカビ用洗浄剤に含有させることにより、洗浄の際に、防カビ作用の有効成分である水溶性キチン又はキトヘキサオースを洗浄対象物やブラシ、スポンジ等の洗浄道具等にいきわたらせることができるので、洗浄後の洗浄対象物や洗浄道具等におけるカビの発生を抑制する効果を期待できる。 For example, in the case of a wall of a building or bathroom, it is performed by means such as direct spraying or mixing with a paint and painting as a coating agent. In addition, as described above, by adding water-soluble chitin, chitohexaose, or a derivative thereof to the mold cleaning agent, water-soluble chitin or chitohexaose, which is an active ingredient for antifungal action, is added at the time of cleaning. Since it can be used for cleaning objects such as objects to be cleaned and brushes, sponges, etc., it can be expected to suppress the occurrence of mold in the objects to be cleaned and cleaning tools after cleaning.
上記の施用量は、カビの種類、適用箇所の材質、表面の性状等によって適宜選択することができる。水溶性キチンの場合には、１ｍ２当たり１〜１００，０００ｇ程度であることが好ましく、１ｍ２当たり１００〜１０，０００ｇ程度であることがより好ましい。キトヘキサオースの場合には、１ｍ２当たり１〜１００，０００ｇ程度であることが好ましく、１ｍ２当たり１００〜１０，０００ｇ程度であることがより好ましい。その施用量が少なすぎると十分な防除効果が期待できず、多すぎる場合は十分に固定化できない場合があるので好ましくない。 The application amount can be appropriately selected depending on the type of mold, the material of the application site, the surface properties, and the like. In the case of water-soluble chitin is preferably about 1~100,000g per 1 m 2, and more preferably about 100~10,000g per 1 m 2. In the case of Quito maltohexaose is preferably about 1~100,000g per 1 m 2, and more preferably about 1 m 2 per 100～10,000G. If the application amount is too small, a sufficient control effect cannot be expected, and if it is too large, it may not be possible to immobilize sufficiently.
本発明が適用されるカビの種類には特に制限はないが、家庭における浴室、脱衣所、洗面所や台所などのような湿気の多いところに発生しやすい黒カビである、クラドスポリウム(Cladosporium)属、アルタナリア(Alternaria)属、オウレオバシディウム(Aureobasidium)属の微生物に属するカビに対して、好ましく用いることができる。 There is no particular limitation on the type of mold to which the present invention is applied, but Cladosporium is a black mold that tends to occur in damp places such as bathrooms, dressing rooms, toilets, and kitchens at home. It can be preferably used for molds belonging to microorganisms of the genera, genus Alternaria and genus Aureobasidium.
以下実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、これらの実施例は本発明の範囲を限定するものではない。 EXAMPLES Hereinafter, the present invention will be specifically described with reference to examples, but these examples do not limit the scope of the present invention.
以下の試験例に用いたクラドスポリウム クラドスポリオイデス（Cladosporium cladosporioides NRBC4457）（以下、C. cladosporioidesとする。）は、独立行政法人製品評価技術基盤機構より購入した。本菌をポテトデキストロース培地中で２７℃静置培養し、培養液表面に形成されバイオフィルム上に発生するC. cladosporioides 胞子を回収し、以下の実験に使用した。 Cladosporium cladosporioides NRBC4457 (hereinafter referred to as C. cladosporioides) used in the following test examples was purchased from National Institute of Technology and Evaluation. This bacterium was statically cultured in a potato dextrose medium at 27 ° C., and C. cladosporioides spores formed on the surface of the culture solution and collected on the biofilm were collected and used in the following experiments.
また、以下の試験例及び製造例に用いた水溶性キチンは、本出願人による特開平８−２８３３０６号公報に記載された公知の方法に準じて、焼津水産化学工業株式会社にて調製されたものを使用した。 The water-soluble chitin used in the following test examples and preparation examples, in accordance with a known method described in JP-A 8-283306 Patent Gazette filed by the present applicant, is prepared by Yaizu Suisankagaku Industry Co., Ltd. Used.
更に、以下の試験例及び製造例に用いたキトヘキサオースは、焼津水産化学工業株式会社にてキトサンを分解、精製することによって調製された純度９７．５％以上のものを使用した。なお以下試験例において、キトヘキサオースは「ＣＯＳ−６」と記載する。 Furthermore, chitohexaose used in the following test examples and production examples was used with a purity of 97.5% or more prepared by decomposing and purifying chitosan at Yaizu Suisan Chemical Co., Ltd. In the following test examples, chitohexaose is referred to as “COS-6”.
＜試験例１＞ 水溶性キチンの発芽抑制試験
C. cladosporioides 胞子をポテトデキストロース培地に懸濁し、４×１０４（ｃｅｌｌｓ／ｍｌ）の懸濁液を調製した。この懸濁液に水溶性キチンを最終濃度が１０、１、０．１ｍｇ／ｍｌになるように加え、２７℃で静置培養を行った。また、対照（コントロール）として、水溶性キチンを添加しないものについても同様の培養を行った。そして培養開始２４、４８、７２、及び９６時間後に、菌数を濁度（ＯＤ６２０ｎｍ）として測定した。その結果を図１に示す。また、図２には、水溶性キチン１ｍｇ／ｍｌ添加したときの、培養２４時間後における胞子体の発芽状態の顕微鏡写真を示す。
<Test Example 1> Germination inhibition test of water-soluble chitin
C. cladosporioides spores were suspended in a potato dextrose medium to prepare a suspension of 4 × 10 4 (cells / ml). Water-soluble chitin was added to this suspension so that the final concentrations were 10, 1, and 0.1 mg / ml, and stationary culture was performed at 27 ° C. In addition, as a control, the same culture was performed for those to which water-soluble chitin was not added. Then, 24, 48, 72, and 96 hours after the start of the culture, the number of bacteria was measured as turbidity (OD620 nm). The result is shown in FIG. In addition, FIG. 2 shows a micrograph of the germination state of spores after 24 hours of culture when 1 mg / ml of water-soluble chitin is added.
図１に示すとおり、水溶性キチンは濃度依存的にC. cladosporioidesの菌数の増加を抑制し、濃度１ｍｇ／ｍｌ以上では、培養開始９６時間後まで菌数の増加が確認されなかった。 As shown in FIG. 1, water-soluble chitin suppressed the increase in the number of C. cladosporioides bacteria in a concentration-dependent manner, and at a concentration of 1 mg / ml or more, the increase in the number of bacteria was not confirmed until 96 hours after the start of culture.
また、図２の顕微鏡写真に明らかなように、コントロール群では、培養２４時間後に菌糸形で増殖する様子が観察されるのに対し、水溶性キチン１ｍｇ／ｍｌを添加した場合には胞子体のみが観察され、水溶性キチンが胞子から菌糸体への変化（発芽）を抑制していることが明らかとなった。また、上記図1に示すとおり、経時的に菌数を濁度として測定した結果、水溶性キチン濃度１ｍｇ／ｍｌ以上では、培養開始９６時間後まで菌数の増加が確認されないことから、この水溶性キチンによるC. cladosporioides発芽抑制効果は、持続的な効果であることが推察された。 In addition, as is apparent from the micrograph of FIG. 2, in the control group, it is observed that the mycelium grows after 24 hours of culturing, whereas when 1 mg / ml of water-soluble chitin is added, only the spores are observed. It was revealed that water-soluble chitin suppressed the change (sprouting) from spores to mycelium. In addition, as shown in FIG. 1 above, as a result of measuring the number of bacteria as turbidity over time, an increase in the number of bacteria was not confirmed until 96 hours after the start of culture at a water-soluble chitin concentration of 1 mg / ml or more. It was speculated that the inhibitory effect on germination of C. cladosporioides by sex chitin was a sustained effect.
更に、培養開始９６時間後のC. cladosporioides培養液の状態を観察したところ、図３に示すように肉眼でも水溶性キチンによるC. cladosporioidesの増殖抑制効果が確認できた。 Furthermore, when the state of the C. cladosporioides culture solution 96 hours after the start of the culture was observed, as shown in FIG. 3, the growth inhibitory effect of C. cladosporioides by water-soluble chitin could be confirmed with the naked eye.
＜試験例２＞ 水溶性キチンの菌糸分裂抑制試験
C. cladosporioides胞子のポテトデキストロース培地懸濁液４×１０４（ｃｅｌｌｓ／ｍｌ）を調整し、２７℃で２４時間静置培養を行い、胞子状態の菌体を全て発芽させ菌糸分裂を誘導させた。ここに水溶性キチンを最終濃度が１ｍｇ／ｍｌになるように加え、２７℃で更に静置培養し、水溶性キチンを添加してから２４時間及び４８時間後に菌数を濁度（OD６２０nm）として測定した。その結果に図４に示す。
Test Example 2 Inhibition test of hyphal division of water-soluble chitin
C. cladosporioides spore potato dextrose medium suspension 4 × 10 4 (cells / ml) was prepared and allowed to stand at 27 ° C. for 24 hours to germinate all spore-like cells to induce hyphal division. . Water-soluble chitin was added to a final concentration of 1 mg / ml, followed by further static culture at 27 ° C., and 24 hours and 48 hours after addition of water-soluble chitin, the number of bacteria was determined as turbidity (OD 620 nm). It was measured. The result is shown in FIG.
その結果、水溶性キチン添加群では、C. cladosporioidesの菌数の増加が抑制されていた。この結果から、水溶性キチンにはC. cladosporioides菌糸体にも作用して、菌糸分裂を抑制する効果のあることが明らかになった。 As a result, in the water-soluble chitin addition group, the increase in the number of bacteria of C. cladosporioides was suppressed. From this result, it became clear that water-soluble chitin acts on C. cladosporioides mycelia and has an effect of suppressing mycelial division.
＜試験例３＞ 水溶性キチン含有寒天培地上でのC. cladosporioides増殖確認試験
C. cladosporioidesは、偏性好気生菌で、嫌気条件下では増殖することができない。水溶性キチンは、その添加により培養液の粘度を高め、培養液深部への酸素の供給を妨げている可能性があり、水溶性キチンによるC. cladosporioides増殖抑制効果が、培地内への酸素取り込みを阻害することによる、二次的な現象である可能性が否定できなかった。そこで、その可能性を排除するために、水溶性キチンを配合した寒天培地表面で菌を培養することで菌体を好気条件下に置き、培養を行った。
<Test Example 3> C. cladosporioides growth confirmation test on agar medium containing water-soluble chitin
C. cladosporioides are obligately aerobic bacteria and cannot grow under anaerobic conditions. Addition of water-soluble chitin may increase the viscosity of the culture solution and hinder the supply of oxygen to the deep part of the culture solution. The possibility that it is a secondary phenomenon due to inhibition of the above could not be denied. In order to eliminate this possibility, the cells were cultured under aerobic conditions by culturing the bacteria on the surface of an agar medium containing water-soluble chitin.
すなわち、水溶性キチン（１０ｍｇ／ｍｌ）を配合したポテトデキストロース寒天培地を作成し、その表面にC. cladosporioides 胞子（４×１０４ｃｅｌｌｓ）を移植して、２７℃で６日間静置培養後、増殖状態を観察した。 That is, a potato dextrose agar medium containing water-soluble chitin (10 mg / ml) was prepared, and C. cladosporioides spores (4 × 10 4 cells) were transplanted on the surface thereof, followed by stationary culture at 27 ° C. for 6 days. The growth state was observed.
その結果、図５に示すように、水溶性キチン配合寒天表面では、C. cladosporioidesの増殖が抑制されており、水溶性キチンは C. cladosporioidesに対して直接的に作用して、その発芽抑制効果及び／又は菌糸分裂抑制効果を発揮していることが明らかとなった。 As a result, as shown in FIG. 5, the growth of C. cladosporioides is suppressed on the surface of the agar containing water-soluble chitin, and the water-soluble chitin acts directly on C. cladosporioides and its germination inhibiting effect. And / or it became clear that the mycelial division suppression effect was exhibited.
＜試験例４＞ キチン・キトサンオリゴ糖によるC. cladosporioides増殖抑制試験
C. cladosporioides胞子のポテトデキストロース培地懸濁液（４ｘ１０４ ｃｅｌｌｓ／ｍｌ）を調整し、ここにキチンオリゴ糖（Ｎ−アセチルキトビオース：ＮＡＣＯＳ−２、Ｎ−アセチルキトトリオース：ＮＡＣＯＳ−３、Ｎ−アセチルキトテトラオース：ＮＡＣＯＳ−４、Ｎ−アセチルキトペンタオース：ＮＡＣＯＳ−５、又はＮ−アセチルキトヘキサオース：ＮＡＣＯＳ−６）、及びキトサンオリゴ糖（キトビオース：ＣＯＳ−２、キトトリオース：ＣＯＳ−３、キトテトラオース：ＣＯＳ−４、キトペンタオース：ＣＯＳ−５、又はキトヘキサオース：ＣＯＳ−６）（いずれも焼津水産化学工業製）を最終濃度が１０ｍｇ／ｍｌになるように加え、２７℃で静置培養を行った。培養開始７２時間後に、菌の増殖を肉眼で観察し、増殖していたものは「＋」、何も添加しない対照群と比較して増殖が抑制されていたものは「−」として、その増殖を評価した。その結果を表１に示す。
<Test Example 4> C. cladosporioides growth inhibition test with chitin / chitosan oligosaccharide
A potato dextrose medium suspension of C. cladosporioides spores ( 4 × 10 4 cells / ml) was prepared, and chitin oligosaccharides (N-acetylchitobiose: NACOS-2, N-acetylchitotriose: NACOS-3, N-acetylchitotetraose: NACOS-4, N-acetylchitopentaose: NACOS-5, or N-acetylchitohexaose: NACOS-6, and chitosan oligosaccharide (chitobiose: COS-2, chitotriose: COS- 3, chitotetraose: COS-4, chitopentaose: COS-5, or chitohexaose: COS-6) (both manufactured by Yaizu Suisan Chemical Co., Ltd.) were added to a final concentration of 10 mg / ml, 27 Static culture was performed at 0 ° C. After 72 hours from the start of the culture, the growth of the bacteria was observed with the naked eye, and the growth was “+”, and the growth was suppressed as “−” in comparison with the control group to which nothing was added. Evaluated. The results are shown in Table 1.
その結果、上記キチン・キトサンオリゴ糖類の中で、ＣＯＳ−６が、C. cladosporioides増殖抑制効果を示した（表１）。 As a result, among the chitin / chitosan oligosaccharides, COS-6 showed C. cladosporioides growth inhibitory effect (Table 1).
次に、増殖抑制効果を示したＣＯＳ−６について、その増殖抑制効果を数値化するために、菌数を濁度として測定した。すなわち、C. cladosporioides 胞子をポテトデキストロース培地に懸濁し、４×１０４（ｃｅｌｌｓ／ｍｌ）の懸濁液を調製した。この懸濁液にＣＯＳ−６を最終濃度が１０、１、０．１ｍｇ／ｍｌになるように加え、２７℃で静置培養を行った。また、対照（コントロール）として、ＣＯＳ−６を添加しないものについても同様の培養を行った。そして培養開始４８、７２、及び１２０時間後に、菌数を濁度（ＯＤ６２０ｎｍ）として測定した。その結果を図６に示す。また、図７には、ＣＯＳ−６を１０ｍｇ／ｍｌ添加したときの、培養２４時間後における胞子体の発芽状態の顕微鏡写真を示す。 Next, about COS-6 which showed the growth inhibitory effect, in order to quantify the growth inhibitory effect, the number of bacteria was measured as turbidity. That is, C. cladosporioides spores were suspended in a potato dextrose medium to prepare a suspension of 4 × 10 4 (cells / ml). COS-6 was added to this suspension so that the final concentrations were 10, 1, and 0.1 mg / ml, and static culture was performed at 27 ° C. In addition, as a control, the same culture was performed for those not added with COS-6. And 48, 72, and 120 hours after the start of culture, the number of bacteria was measured as turbidity (OD620 nm). The result is shown in FIG. FIG. 7 shows a photomicrograph of the germination state of the spores after 24 hours of culture when COS-6 was added at 10 mg / ml.
図６に示すとおり、ＣＯＳ−６は濃度依存的にC. cladosporioidesの菌数の増加を抑制した。 As shown in FIG. 6, COS-6 suppressed the increase in the number of C. cladosporioides bacteria in a concentration-dependent manner.
また、図７の顕微鏡写真に明らかなように、コントロール群では、培養２４時間後に菌糸形で増殖する様子が観察されるのに対し、濃度１０ｍｇ／ｍｌでＣＯＳ−６を添加した場合には、菌糸の伸長が抑制されていることが明らかとなった。また、培養時間を更に延長し観察を続けたところ、培養開始７２時間後から、培養液表面にバイオフィルムが形成され始め、培養開始１２０時間後では、コントロール群の培養液表面は完全にバイオフィルムで覆われていた（図８の対照のレーン）。しかし、ＣＯＳ−６添加群では、濃度依存的にバイオフィルムの形成が抑制されていた（図８のＣＯＳ−６添加群のレーン）。 In addition, as is apparent from the micrograph of FIG. 7, in the control group, the growth in a mycelium shape was observed after 24 hours of culture, whereas when COS-6 was added at a concentration of 10 mg / ml, It was revealed that hyphal elongation was suppressed. In addition, when the culture time was further extended and the observation was continued, biofilms started to form on the surface of the culture solution 72 hours after the start of the culture, and after 120 hours of culture start, the surface of the culture solution in the control group was completely biofilmed. (Control lane in FIG. 8). However, in the COS-6 addition group, the formation of biofilm was suppressed in a concentration-dependent manner (lane in the COS-6 addition group in FIG. 8).
＜試験例５＞ ＣＯＳ−６による C. cladosporioidesバイオフィルム形成抑制効果
ＣＯＳ−６による C. cladosporioidesバイオフィルム形成抑制効果を、定量的に評価するために、以下の試験を行った。
<Test Example 5> C. cladosporioides biofilm formation inhibitory effect of COS-6
In order to quantitatively evaluate the C. cladosporioides biofilm formation inhibitory effect of COS-6, the following test was conducted.
すなわち、C. cladosporioides胞子のポテトデキストロース培地懸濁液（４ｘ１０４ ｃｅｌｌｓ／ｍｌ）を調整し、この液１mlを２４ ｗｅｌｌプラスチックプレート（ヌンク社製）に加えた。ここに、ＣＯＳ−６を最終濃度が１０、１、０．１ｍｇ／ｍｌになるように加え、２７℃で７日間静置培養し、培養液表面に形成されるバイオフィルムを回収してその重量を測定した。 That is, a potato dextrose medium suspension of C. cladosporioides spores ( 4 × 10 4 cells / ml) was prepared, and 1 ml of this solution was added to a 24 well plastic plate (manufactured by NUNK). Here, COS-6 was added so that the final concentration would be 10, 1, 0.1 mg / ml, followed by stationary culture at 27 ° C. for 7 days, and the biofilm formed on the surface of the culture solution was recovered and its weight Was measured.
その結果、図９に示すように、ＣＯＳ−６を最終濃度１ｍｇ／ｍｌ以上となるように添加することでバイオフィルム形成が抑制されることが明らかとなった。 As a result, as shown in FIG. 9, it was revealed that biofilm formation is suppressed by adding COS-6 to a final concentration of 1 mg / ml or more.
したがって、キトヘキサオース（ＣＯＳ−６）には、C. cladosporioidesのバイオフィルム形成を抑制させる効果があり、防カビ剤の有効成分として有用であると考えられた。 Therefore, chitohexaose (COS-6) has an effect of suppressing biofilm formation of C. cladosporioides, and was considered useful as an active ingredient of a fungicide.
＜製造例１＞
下記表２の配合で各原料を混合し、防カビ剤を調製した。
<Production Example 1>
Each raw material was mixed according to the formulation shown in Table 2 below to prepare an antifungal agent.
この防カビ剤は、適度に粘性を有し、使用感のよいものであった。 This fungicide had a moderate viscosity and good usability.
＜製造例２＞
下記表３の配合で各原料を混合し、カビ用洗浄剤を調製した。
<Production Example 2>
Each raw material was mixed according to the formulation shown in Table 3 below to prepare a mold cleaning agent.
このカビ用洗浄剤は、適度に粘性を有し、使用感のよいものであった。 This mold cleaning agent had moderate viscosity and good usability.
＜製造例３＞
下記表４の配合で各原料を混合し、防カビ剤を調製した。
<Production Example 3>
Each raw material was mixed according to the formulation shown in Table 4 below to prepare an antifungal agent.
この防カビ剤は、使用感のよいものであった。 This antifungal agent had good usability.
＜製造例４＞
下記表５の配合で各原料を混合し、カビ用洗浄剤を調製した。
<Production Example 4>
Each raw material was mixed according to the formulation shown in Table 5 below to prepare a mold cleaning agent.
このカビ用洗浄剤は、使用感のよいものであった。 This mold cleaning agent had good usability.
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| JP2006353832A JP2008162933A (en) | 2006-12-28 | 2006-12-28 | Antifungal agent, cleaning agent for fungus, resin having antifungal effect and method for suppressing generation of fungus |
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Citations (5)
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2006
- 2006-12-28 JP JP2006353832A patent/JP2008162933A/en active Pending
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