KR102086804B1 - Composition for preventing a biofilm formation - Google Patents
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Abstract
본 발명은 폴리크레줄렌(policresulen)을 포함하는 것을 특징으로 하는 바이오필름(biofilm) 형성 억제용 조성물로서, 본 발명에 따른 바이오필름 형성 억제용 조성물은, 미생물에 의한 바이오필름 형성시에 이용되는 비수용성 다당류의 수용성을 높여 바이오필름의 형성을 억제할 수 있다.The present invention is a composition for inhibiting biofilm formation, comprising polycrezulen, wherein the composition for inhibiting biofilm formation according to the present invention is a ratio used for biofilm formation by microorganisms. The water solubility of the water-soluble polysaccharide can be increased to suppress the formation of the biofilm.
Description
본 발명은 바이오필름 형성 억제에 우수한 성능을 발휘하는 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition that exhibits excellent performance in inhibiting biofilm formation.
바이오필름(Biofilm)이란, 미생물이 감염되거나 부착된 부분에서 나타나는 것으로서, 폴리머 기질로 감싸이며 미생물에 의하여 형성된 미생물 복합체를 이루는 막으로 생물막 또는 균막이라고도 불린다. 미생물의 경우 다양한 환경에 적응하여 살아가기 위하여 바이오필름이라는 미생물 군집체를 만드는데, 이러한 바이오필름이 미생물의 생존에 중요한 이유는 미생물에게 보호막의 역할을 해줄 뿐만 아니라, 서로 다른 균체들이 만나서 대사(metabolism)를 공유하기도 하고, 유전자 치환(gene transfer)을 통하여 유익한 성질들을 획득하기도 하기 때문이다. 즉, 바이오필름은 각종 균들의 집합체임과 동시에, 균 집단의 보호막 기능을 하기 때문에, 균으로 인한 각종 질병의 직/간접적인 원인이 된다. Biofilm is a film that appears at the infected or attached part of a microorganism, and is also called a biofilm or biofilm as a film that is surrounded by a polymer substrate and forms a microbial complex formed by the microorganism. In the case of microorganisms, microbial colonies called biofilms are made in order to adapt to various environments. The reason why these biofilms are important for the survival of microorganisms is not only to act as a protective film for microorganisms, but also to meet different metabolism. This is because they share the genes and obtain beneficial properties through gene transfer. That is, the biofilm is a collection of various bacteria and at the same time acts as a protective film of the bacterial population, and thus is a direct / indirect cause of various diseases caused by the bacteria.
바이오필름의 형성은 먼저 부유 상태의 미생물이 가역적으로 표면에 부착하여 시작되는데, 미소 콜로니(군락)을 형성하고 이것이 서서히 성장하며, 세포주위로 분비되는 세포외 다당류(Extracelluar polysaccharide, EPS) 중 비수용성 다당류는 미생물의 부착을 보다 용이하게 하며, 비가역적이고 불용성인 바이오 필름을 형성할 수 있게 한다. 대부분의 세균은 EPS 합성능력을 가지고 있고, 생성된 EPS는 세포 외 또는 환경 중으로 배출되어 바이오필름의 구조 유지나 기능 발현에 매우 중요한 역할을 한다.The formation of biofilm begins with the floating microorganisms reversibly attaching to the surface, forming micro colonies, which grow slowly, and are insoluble in the extracellular polysaccharides (Extracelluar polysaccharides (EPS)) secreted into cells. Facilitates the attachment of microorganisms and makes it possible to form irreversible and insoluble biofilms. Most bacteria have the ability to synthesize EPS, and the generated EPS is released into extracellular or environment and plays a very important role in maintaining the structure or functioning of the biofilm.
종래에, 미생물들의 성장을 억제하기 위하여 수많은 항균제등이 사용되고 있었으며, 이러한 항균제는 미생물의 사멸 등 정상적인 세균의 생태계의 파괴를 위한 것이었다. 다만, 이러한 항균제의 사용으로 인하여 내성이 증가하는 문제점이 발생되었는 바, 종래의 미생물의 성장을 억제하는 방법이 아닌 새로운 방법의 미생물 제어 방법이 필요한 시점이다.In the past, a number of antimicrobial agents and the like have been used to inhibit the growth of microorganisms, such antimicrobial agents for the destruction of the normal bacterial ecosystem, such as the killing of microorganisms. However, the use of such an antimicrobial agent has caused a problem of increasing resistance, and it is a time when a new method for controlling microorganisms is needed, rather than a method for inhibiting growth of conventional microorganisms.
따라서, 본 발명은 항균제 등을 이용하여 정상적인 세균 생태계를 파괴하는 방법이 아닌, 세포 성장에는 영향을 미치지 않아 약제 저항성을 발달할 기회를 약화시키는 항독성(anti-virulence)적 접근 중 하나인 바이오필름 형성 억제용 조성물을 제공하고자 한다.Therefore, the present invention is not a method of destroying a normal bacterial ecosystem using an antimicrobial agent, but a biofilm which is one of anti-virulence approaches that do not affect cell growth and thus weaken the opportunity to develop drug resistance. It is to provide a composition for inhibiting formation.
따라서 본 발명이 해결하고자 하는 과제는, 정상적인 세균의 생태계를 파괴하지 않으면서, 세균에 의한 독성(virulence)를 발휘하는 것을 막기 위한 바이오필름 형성 억제용 조성물을 제공하고자 하는 것이다.Therefore, the problem to be solved by the present invention is to provide a composition for inhibiting biofilm formation to prevent exertion of virulence by bacteria without destroying the ecosystem of normal bacteria.
본 발명이 해결하고자 하는 또 다른 과제는, 이러한 바이오필름 형성 억제용 조성물을 이용하여 구강질환의 예방을 위한 구강용 조성물 또는 물때 생성 방지용 조성물을 제공하고자 하는 것이다.Another problem to be solved by the present invention is to provide a composition for preventing oral generation or a composition for preventing oral disease using the composition for inhibiting biofilm formation.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 폴리크레줄렌(policresulen)을 포함하는 것을 특징으로 하는 바이오필름(biofilm) 형성 억제용 조성물을 제공한다.In order to solve the above problems, the present invention provides a composition for inhibiting biofilm formation, characterized in that it comprises polycrezulen (policresulen).
본 발명의 바람직한 일 실시예에 따르면, 상기 폴리크레줄렌은 상기 조성물 전체 함량에 대하여 0.0005 내지 2중량%를 함유할 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, the polycrezulene may contain 0.0005 to 2% by weight based on the total content of the composition.
또한, 본 발명의 바람직한 일 실시예에 따르면, 상기 바이오필름 형성 억제용 조성물은 스트렙토코쿠스 뮤탄스(Streptococcus mutans), 포르피로모나스 진지발리스(Porphyromonas gingivalis), 프레보텔라 니그레센스(Prevotella nigrescens), 푸소박테리움 누클리아툼(Fusobacterium nucleatum), 세라티아 마르체센스(Serratia marcescens), 메틸박테리움(Methylobacterium), 슈도모나스(Psuedomonas ), 잔토모나스(Xanthomonas), 코리네박테리움(Corynebacterium) 및 바실러스(Bacillus)를 포함하는 군에서 선택되는 하나 이상의 균의 바이오필름의 형성을 억제할 수 있다.Further, according to a preferred embodiment of the present invention, the composition for inhibiting biofilm formation is Streptococcus mutans ( Streptococcus mutans ), Porphyromonas gingivalis ), Prevotella nigrescens , and Fusobacterium nucleatum ), Serratia marcescens), methyl tumefaciens (Methylobacterium), Pseudomonas (Psuedomonas), janto Pseudomonas (Xanthomonas), Corynebacterium (Corynebacterium) and Bacillus (inhibiting the formation of the biofilm of at least one bacterium selected from the group comprising Bacillus) can do.
또한, 본 발명의 바람직한 일 실시예에 따르면, 상기 폴리크레줄렌은 미생물의 바이오 필름 형성과정에서 이용되는 비수용성 고분자와 결합함으로써, 비수용성 고분자의 수용성을 높여 바이오필름의 형성을 억제하게 된다.In addition, according to an embodiment of the present invention, the polycrezulene is combined with the water-insoluble polymer used in the biofilm formation process of the microorganism, thereby increasing the water solubility of the water-insoluble polymer to suppress the formation of the biofilm.
또한, 본 발명의 바람직한 일 실시예에 따르면, 상기 바이오필름은 생물체 유래의 조직 또는 기관, 칫솔, 치실, 치간칫솔, 혀클리너, 구강용 티슈 등의 구강위생 용품의 표면, 치과용품의 표면, 주방용품의 표면, 욕실용품의 표면, 배관 또는 세탁기 세탁조에 형성된 바이오필름일 수 있다.Further, according to a preferred embodiment of the present invention, the biofilm is a surface of oral hygiene products such as tissues or organs derived from living organisms, toothbrushes, dental floss, interdental toothbrush, tongue cleaner, oral tissue, surface of dental supplies, kitchen It may be a biofilm formed on the surface of the article, the surface of the bathroom article, tubing or washing machine washing tub.
본 발명의 또 다른 일 측면에 따르면, 본 발명은 상기 바이오필름 형성 억제용 조성물을 포함하는 것을 특징으로 하는 구강용 조성물 또는 물때 생성 억제용 조성물을 제공한다. According to another aspect of the present invention, the present invention provides a composition for oral cavity or scale production inhibition comprising the composition for inhibiting the biofilm formation.
본 발명의 또 다른 일 측면에 따르면, 본 발명은 폴리크레줄렌을 생물체 또는 비생물체의 표면에 처리하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 바이오필름 형성 억제 방법을 제공한다.
According to another aspect of the present invention, the present invention provides a method for inhibiting biofilm formation, comprising treating polycrezulene on the surface of an organism or a non-organism.
이하, 본 발명을 상세히 설명하기로 한다. 본 명세서 및 청구범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 아니 되며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다. 따라서, 본 명세서에 기재된 실시예와 도면에 기재된 구성은 가장 바람직한 일 실시예에 불과할 뿐이고, 본 발명의 기술적 사상을 모두 대변하는 것은 아니므로, 본 출원시점에 있어서 이들을 대체할 수 있는 다양한 균등물과 변형예들이 있을 수 있음을 이해하여야 한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail. The terms or words used in this specification and claims are not to be construed as limiting in their usual or dictionary meanings, and the inventors may appropriately define the concepts of terms in order to best describe their invention. It should be interpreted as meanings and concepts corresponding to the technical idea of the present invention based on the principle that the present invention. Accordingly, the embodiments described in the specification and the drawings described in the drawings are only the most preferred embodiments, and do not represent all of the technical ideas of the present invention, and various equivalents may be substituted for them at the time of the present application. It should be understood that there may be variations.
본 발명은 폴리크레줄렌(policresulen)을 포함하는 것을 특징으로 하는 바이오필름(biofilm) 생성 억제용 조성물을 제공한다.The present invention provides a composition for inhibiting biofilm production, comprising polycresulen.
본 발명자들은 미생물의 성장을 저해하기 위한 방법으로 항미생물적(anti-microbial) 접근이 아닌, 미생물의 성장을 저해하지 아니하면서 독성(virulence)를 나타내지 않도록 하는 항독성적(anti-virulence) 접근을 시도하고자 하였으며, 이러한 항독성적 접근의 일환으로 바이오필름의 형성의 저해하는 방법을 고려하고자 하였다. 일반적으로 바이오필름의 형성은 미생물이 부착 표면에 가역적인 형태로 흡착되고, 미생물에서 분비되는 세포외 다당류 중 비수용성(불용성) 다당류에 의하여 미생물의 부착을 용이하게 하여서, 비가역적이고 불용성인 바이오 필름이 형성되고 있다. 본 발명자들은 폴리크레줄렌(policresulen) 화합물이 이러한 비수용성 다당류의 수용성을 높여서 바이오필름이 부착 표면에 비가역적으로 흡착되는 것을 억제하고, 물로 씻는(wash-off) 방법을 통하여 바이오필름이 용이하게 제거하게 할 수 있다는 놀라운 사실을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다. 즉, 상기 폴리크레줄렌은 미생물의 표면 부착력을 저해함으로서 바이오필름의 형성을 억제할 수 있다.The present inventors have attempted an anti-virulence approach that does not inhibit the growth of microorganisms but does not exhibit the toxicity without anti-microbial approach as a method for inhibiting the growth of microorganisms. As part of this antitoxic approach, we attempted to consider ways to inhibit the formation of biofilms. In general, the formation of the biofilm is that the microorganisms are adsorbed in a reversible form on the attachment surface, and the attachment of the microorganisms is facilitated by the insoluble (insoluble) polysaccharides among the extracellular polysaccharides secreted from the microorganisms, thereby making the irreversible and insoluble biofilms. It is being formed. The inventors found that polycresulen compounds increase the water solubility of such water-insoluble polysaccharides, thereby preventing the biofilms from being irreversibly adsorbed on the adhered surface and easily removing the biofilms through a wash-off method. It has been found that the surprising fact that it can be done to complete the present invention. That is, the polycrezulene can inhibit the formation of the biofilm by inhibiting the surface adhesion of the microorganisms.
상기 미생물 부착 표면은 미생물이 바이오필름을 형성하는 곳이면 어디든지 제한되지 아니하고, 미생물이 바이오필름을 형성할 수 있는 생물체 또는 비생물체의 표면을 모두 포함될 수 있다. 예를 들면, 생물체 유래의 조직, 기관 또는 금속 표면, 칫솔, 치실, 치간칫솔, 혀클리너, 구강용 티슈 등의 구강위생용품, 타일 표면 등의 치과용품, 주방용품, 욕실용품, 상하수도 배관, 세탁기 세탁조 등 지속적으로 물이 닿는 부위가 될 수 있고, 바람직하게 구강점막, 치아표면, 칫솔 표면 또는 물이 자주 닿는 유리판과 같은 표면이 될 수 있다. The microbial attachment surface is not limited to where the microorganism forms the biofilm, and may include all surfaces of living or non-living organisms capable of forming the biofilm. For example, tissues, organs or metal surfaces derived from living organisms, toothbrushes, dental floss, interdental toothbrushes, tongue cleaners, oral hygiene products such as oral tissues, dental supplies such as tile surfaces, kitchen utensils, bathroom products, water supply and sewer piping, washing machines It may be a region where water is continuously in contact with a washing tank and the like, and preferably, it may be a surface such as an oral mucosa, a tooth surface, a toothbrush surface, or a glass plate which water frequently touches.
이하, 도 1을 이용하여 본 발명에 따른 폴리크레줄렌이 충치균인 스트렙토코쿠스 뮤탄스(Streptococcus mutans)에 의한 바이오필름의 형성을 어떠한 방법으로 억제하는지에 대하여 자세히 설명한다. 우선, A)와 같이 표면에 Streptococcus mutans가 부착하며, 이러한 균들은 B)와 같이 증식을 하게 된다. 또한, Streptococcus mutans은 비수용성 글루칸인 뮤탄(mutan)을 생성하게 되는데, 이러한 뮤탄은 C)와 같이 세균이 표면에 부착하는 것을 용이하게 하며, 세균막의 골조역할을 하게 된다. 이러한 과정을 통하여 D-1)과 같이 점액질 층(slime layer)을 형성하여 바이오 필름의 일종인 프라그(plaque)를 형성할 수 있다. 하지만 D-2)와 같이 폴리크레줄렌을 첨가함으로써, 폴리클레줄렌은 비수용성 뮤탄에 결합하게 되어, 용해성을 증가시키게 되고 바이오필름의 일종인 프라그 혹은 치면 세균막의 형성을 저해할 수 있다.Hereinafter, the polycrezulene according to the present invention will be described in detail how to inhibit the formation of biofilm by Streptococcus mutans , which is a caries. First, Streptococcus mutans adhere to the surface as shown in A), and these bacteria grow like B). In addition, Streptococcus mutans produce mutans, which are water-insoluble glucans, which facilitate the attachment of bacteria to surfaces, such as C), and act as a framework for bacterial membranes. Through this process, a slime layer may be formed as in D-1) to form a plaque, which is a kind of biofilm. However, by adding polycrezulene as in D-2), polyclezulene binds to water-insoluble mutans, increasing solubility and inhibiting the formation of plaque or plaque bacterial membranes, which is a kind of biofilm.
본 발명에 따른 폴리크레줄렌(Policresulene)은 알보칠(Albothyl) 또는 폴리렌(Polilen)으로 불리기도 하며, 하기 화학식 1의 구조를 가지며, 화학식은 (C9H8O4S)n과 같다. Polycresulene according to the present invention may also be referred to as albothyl or polyene, and has a structure represented by the following Chemical Formula 1, where Chemical Formula is the same as (C 9 H 8 O 4 S) n .
본 발명에 따른 바이오필름 생성 억제용 조성물은 조성물 전체 함량에 대하여 0.0005 내지 2중량 %, 바람직하게 0.001 내지 1중량%를 함유할 수 있다, 0.0005중량% 미만일때는 바이오필름 생성 억제 효과가 미미하여, 경제적 투자 대비 효과를 얻을 수 없다는 문제점이 있으며, 2중량 초과일 때는 자극 및 외과적 상처를 일으킬 수 있다는 문제점이 있다.Biofilm production inhibition composition according to the present invention may contain 0.0005 to 2% by weight, preferably 0.001 to 1% by weight based on the total content of the composition, when less than 0.0005% by weight biofilm production inhibitory effect is insignificant, economic investment There is a problem that the contrast effect can not be obtained, there is a problem that can cause irritation and surgical wounds when more than 2 weight.
본 발명에 따른 바이오필름 억제용 조성물은 어떠한 미생물의 바이오필름인지에 대하여 제한되지 아니하나, 스트렙토코쿠스 뮤탄스(Streptococcus mutans), 포르피로모나스 진지발리스(Porphyromonas gingivalis), 프레보텔라 니그레센스(Prevotella nigrescens), 푸소박테리움 누클리아툼(Fusobacterium nucleatum), 세라티아 마르체센스(Serratia marcescens), 메틸박테리움(Methylobacterium), 슈도모나스(Psuedomonas ), 잔토모나스(Xanthomonas), 코리네박테리움(Corynebacterium) 및 바실러스(Bacillus)이 바람직하며, 스트렙토코쿠스 뮤탄스(Streptococcus mutans) 의 바이오필름이 보다 바람직하다.Biofilm inhibition composition according to the present invention is not limited to what kind of microbial biofilm, Streptococcus mutans ( Streptococcus mutans ), Porphyromonas gingivalis ), Prevotella nigrescens , and Fusobacterium nucleatum ), Serratia marcescens), methyl tumefaciens (Methylobacterium), Pseudomonas (Psuedomonas), Pseudomonas janto (Xanthomonas), Corynebacterium (Corynebacterium) and a Bacillus (Bacillus) are preferred, Streptococcus mutans (Streptococcus biofilms of mutans ) are more preferred.
본 발명에 따른 또 다른 일 측면에 따르면, 본 발명에 따른 바이오필름 생성 억제용 조성물은 구강용 조성물로서 사용될 수 있다. 보다 구체적으로 본 발명에 따른 구강용 조성물은 프라그 생성의 주 원인인 스트렙토코쿠스 뮤탄스(Streptococcus mutans)균에 의한 바이오필름의 형성을 억제할 수 있는 바, 충치 억제, 구내염 예방 효과 등 구강 건강 유지 및 개선용으로 사용될 수 있다.According to another aspect of the present invention, the composition for inhibiting biofilm production according to the present invention may be used as a composition for oral cavity. More specifically, the composition for oral cavity according to the present invention can inhibit the formation of biofilm by Streptococcus mutans bacteria, which is the main cause of plaque generation, to maintain oral health, such as caries suppression and stomatitis prevention effect. And for improvement.
본 발명에 따른 구강용 조성물은 통상적으로 구강용 조성물의 제조에 사용되는 성분들로, 습윤제, 연마제, 약효제, 감미제, 방부제, 결합제, 향료, 기포제, 물 등을 더 포함할 수 있다.Oral compositions according to the present invention are typically used in the preparation of oral compositions, wetting agents, abrasives, agonists, sweeteners, preservatives, binders, fragrances, foaming agents, water and the like can be further included.
또한, 본 발명에 따른 또 다른 일 측면에 따르면, 본 발명에 따른 바이오필름 생성 억제용 조성물은 물때 생성 억제용 조성물로 사용될 수 있다. 물때는 칫솔, 치실, 치간칫솔, 혀클리너, 구강용 티슈 등의 구강위생용품, 치과용품, 주방용품, 욕실용품, 정수기, 상하수도 배관, 세탁기의 세탁조 등 지속적으로 물이 닿는 부위에 생길 수 있으며, 이러한 물때는 세라티아 마르체센스(Serratia marcescens), 메틸박테리움(Methylobacterium), 슈도모나스(Psuedomonas ), 잔토모나스(Xanthomonas), 코리네박테리움(Corynebacterium) 및 바실러스(Bacillus)등의 세균이 공기중에 떠다니다가 이물질이나 습기가 많은 곳에서 번식하여 바이오필름을 형성하여 생긴 결과로 추측되고 있다. 즉, 본 발명에 따른 조성물은 이러한 균에 의한 바이오필름 형성을 억제하여 물때 생성을 방지할 수 있다.Further, according to another aspect of the present invention, the composition for inhibiting biofilm production according to the present invention may be used as a composition for inhibiting scale production. In case of water, it can occur in the area where water continuously touches, such as oral hygiene products such as toothbrush, dental floss, interdental toothbrush, tongue cleaner, oral tissue, dental supplies, kitchen utensils, bathroom products, water purifier, water supply and sewer pipe, washing machine of washing machine, this scale is a bacteria such as Serratia Mar body sense (Serratia marcescens), methyl tumefaciens (Methylobacterium), Pseudomonas (Psuedomonas), janto Pseudomonas (Xanthomonas), Corynebacterium (Corynebacterium) and Bacillus (Bacillus) tteodanida the air Is believed to be the result of the formation of biofilms by breeding in places with high foreign matter or moisture. That is, the composition according to the present invention can prevent the generation of scale by inhibiting the biofilm formation by these bacteria.
본 발명에 따른 물 때 생성 억제용 조성물은 통상적으로 물때를 생성 방지용 조성물 제조에 사용될 수 있는 통상적인 물질들을 더 포함할 수 있다.The composition for inhibiting generation of scale according to the present invention may further include conventional materials that may be used to prepare the composition for preventing generation of scale.
또한, 본 발명은 폴리크레줄렌을 생물체 또는 비생물체의 표면에 처리하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 바이오필름 형성의 억제 방법을 제공한다. The present invention also provides a method for inhibiting biofilm formation, comprising treating polycrezulene on the surface of a living or non-living organism.
본 발명에 따른 바이오필름 형성 억제용 조성물은, 미생물에 의한 바이오필름 형성시에 이용되는 비수용성 다당류의 수용성을 높여 바이오필름의 형성을 억제할 수 있다.The composition for inhibiting biofilm formation according to the present invention can increase the water solubility of the water-insoluble polysaccharide used at the time of forming the biofilm by the microorganism, thereby suppressing the formation of the biofilm.
또한, 본 발명에 따른 바이오필름 형성 억제 조성물은 구강용 조성물로 사용되어, 치아의 부식, 치석 형성 입냄새 생성 및 잇몸 질환 등의 방지하여 구강 건강을 증진시킬 수 있다.In addition, the biofilm formation inhibiting composition according to the present invention can be used as a composition for oral cavity, and can promote oral health by preventing tooth corrosion, tartar forming bad breath and gum disease.
또한, 본 발명에 따른 바이오필름 형성 억제 조성물은 물때 생성 억제용 조성물로 사용되어, 구강위생용품, 치과용품, 주방용품, 욕실용품, 정수기, 상하수도 배관, 세탁기 세탁조 등 지속적으로 물이 닿는 부분의 물때 생성을 억제할 수 있다.In addition, the biofilm formation inhibiting composition according to the present invention is used as a composition for inhibiting generation of scale, oral hygiene products, dental supplies, kitchen appliances, bathroom supplies, water purifiers, water and sewage pipes, washing machine washing tank, etc. Production can be suppressed.
본 명세서에 첨부되는 다음의 도면들은 본 발명의 바람직한 실시예를 예시하는 것이며, 전술한 발명의 내용과 함께 본 발명의 기술사상을 더욱 이해시키는 역할을 하는 것이므로, 본 발명은 그러한 도면에 기재된 사항에만 한정되어 해석되어서는 아니 된다.
도 1은 본 스트렙토코쿠스 뮤탄스(Streptococcus mutans)균에 의하여 생성되는 바이오필름의 형성 작용 및 본 발명의 일 실시예에 따른 조성물이 스트렙토코쿠스 뮤탄스(Streptococcus mutans)균에 의하여 생성되는 바이오필름의 형성을 억제하는 것을 설명하는 도면이다.
도 2는 유리판에서의 바이오필름 부착 억제실험 결과 그래프이다.
도 3은 유리판에서 바이오필름 부착 억제실험 결과의 사진이다.
도 4는 구강(치아)에서의 바이오필름 부착 억제에 관한 In - vitro 실험 결과 사진이다.
도 5는 뮤탄의 수용성 증가 방법을 도식적으로 나타낸 그림이다.
도 6은 뮤탄의 수용성 증가 실험 결과 그래프이다.The following drawings, which are attached to this specification, illustrate exemplary embodiments of the present invention, and together with the contents of the present invention serve to further understand the technical spirit of the present invention, the present invention is limited to the matters described in the drawings. It should not be construed as limited.
Figure 1 is the Streptococcus mutans (Streptococcus mutans) the formation of biofilm produced by the fungus action and composition in accordance with one embodiment of the present invention produced by the bacterium Streptococcus mutans (Streptococcus mutans) Biofilm It is a figure explaining suppressing formation of a.
2 is a graph showing the results of inhibiting biofilm adhesion on a glass plate.
Figure 3 is a photograph of the biofilm adhesion inhibition test results in the glass plate.
Figure 4 relates to the inhibition of biofilm adhesion in the oral cavity (tooth) In - vitro Experimental results are photographs.
5 is a diagram schematically showing a method for increasing water solubility of mutans.
6 is a graph showing the results of increasing the water solubility of mutans.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예 등을 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 실시예들에 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 발명의 실시예들은 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.Hereinafter, examples and the like will be described in detail to help the understanding of the present invention. However, embodiments according to the present invention can be modified in many different forms, the scope of the invention should not be construed as limited to the following examples. The embodiments of the present invention are provided to more completely explain the present invention to those skilled in the art.
실시예Example
<바이오필름 부착 억제 실험-유리판에서의 효과 실험><Biofilm adhesion inhibition experiment-effect experiment on glass plate>
스트렙토코커스 뮤탄스균을 BHI 배지에서 37℃조건으로 밤새 배양하였다. Streptococcus mutans was incubated overnight at 37 ° C. in BHI medium.
유리판에서의 바이오필름 부착 억제 실험은 유리판(커버글라스, cover glass)을 넣은 시험관에 스트렙토코커스 뮤탄스균을 배양하는 방식으로 진행되었다. 각 시험관에 커버글라스를 넣고, 측정하고자 하는 하기 표 1에 따른 폴리크레줄렌을 농도에 맞게 BHI 배지에 희석시키고 프라그를 형성시키기 위하여 1%의 농도가 되도록 수크로오즈(sucrose)를 BHI배지에 첨가하여 각각의 시험관에서 밤새 배양하였다. Biofilm adhesion inhibition experiment on the glass plate was carried out by culturing Streptococcus mutans bacteria in a test tube with a glass plate (cover glass). Put the cover glass in each test tube, and dilute the polycrezulene according to the following Table 1 to the concentration in BHI medium, and add sucrose to the BHI medium to a concentration of 1% to form plaque. Incubated overnight in each test tube.
각 커버글라스를 수거하여, 커버글라스 표면의 프라그를 크리스탈 블루(crystal blue)로 염색한 뒤 메탄올로 추출하여 UV spectrometer를 이용하여 590nm에서 흡광도를 측정하여 그 양을 정량 하였으며, 그 결과는 도 2 및 도 3에 나타내었다.Each cover glass was collected, and the plaques on the surface of the cover glass were stained with crystal blue, extracted with methanol, and the absorbance was measured at 590 nm using a UV spectrometer. 3 is shown.
도 2는 비교예 1, 실시예 1-1 및 1-2의 바이오필름 생성양을 상대적으로 나타낸 그래프이며, 도 3는 비교예 1, 실시예 1-1 및 1-2에 사용하였던 커버글라스를 크리스탈 블루로 염색한 상태의 사진을 나타낸다. 이를 통하여 폴리크레줄렌이 0.25%포함된 실시예 1-2에서는 유리판에서의 프라그의 생성은 76%억제한 것을 알수 있었으며, 폴리크레줄렌 농도가 0.5%인 실시예 1-1경우에는 프라그의 생성을 100%를 억제한 것을 알 수 있었다.
2 is a graph showing the biofilm production amount of Comparative Example 1, Examples 1-1 and 1-2, and FIG. 3 is a cover glass used in Comparative Example 1, Examples 1-1 and 1-2. The photograph shows the state dyed with crystal blue. As a result, in Example 1-2 containing 0.25% of polycresulane, it was found that the generation of plaque in the glass plate was 76% inhibited. In Example 1-1, in which the concentration of polycresulane was 0.5%, the generation of prag It turned out that 100% was suppressed.
<바이오필름 부착 억제 실험-구강(치아)에 관한 <Biofilm adhesion inhibition experiment-about oral cavity (tooth) InIn -- vitroin vitro 효과 실험> Effect Experiments>
스트렙토코커스 뮤탄스균을 BHI 배지에서 37℃조건으로 밤새 배양하였다. 측정하고자 하는 표 2에 따른 폴리크레줄렌을 농도에 맞게 BHI 배지에 희석시키고 프라그를 형성시키기 위하여 1%의 농도가 되도록 수크로오즈(sucrose)를 BHI배지에 첨가하였다. 24 well에 하이드록시아파타이트 디스크를 넣어 치아표면과 같은 조건을 만든 이후, 밤새 배양된 스트렙토코커스 뮤탄스균을 접종하였으며, 접종 후 37℃ 조건으로 밤새 추가 배양하였다. 하이드록시아파타이트 표면을 증류수로 세척하고 표면에 부착된 프라그를 Red-Cote로 착색하여 다양한 농도의 폴리크레줄렌의 적용 시 프라그 생성의 억제력을 관찰하였으며, 그 실험 결과는 도 4에 나타내었다.Streptococcus mutans was incubated overnight at 37 ° C. in BHI medium. Sucrose was added to the BHI medium to a concentration of 1% to dilute polycrezulene according to Table 2 to be measured in BHI medium to form a plaque. The hydroxyapatite disk was placed in 24 wells to make the same conditions as the tooth surface, and then inoculated with Streptococcus mutans cultured overnight, and further incubated overnight at 37 ° C. after inoculation. The surface of the hydroxyapatite was washed with distilled water and the plaque attached to the surface was stained with Red-Cote to observe the inhibitory effect of plaque formation upon application of various concentrations of polycrezulene, and the experimental results are shown in FIG. 4.
도 4는 비교예 2, 실시예 2-1 내지 2-5의 착색한 프라그를 보여주는 사진이다. HAP DISK 상의 착색된 면적 비교를 통하여 폴리크레줄렌을 15ppm 포함한 경우 프라그의 생성을 60% 억제한 것으로 나타났으며, 폴리크레줄렌을 60ppm 포함한 경우 프라그의 생성을 99% 억제한 것을 알 수 있었다.
Figure 4 is a photograph showing the colored plaques of Comparative Example 2, Examples 2-1 to 2-5. The comparison of the colored areas on HAP DISK showed that the production of plaque was suppressed by 60% when the content of polycrezulene was 15ppm, and the production of plaque was suppressed by 99% when the content of polycrezulene was 60ppm.
<비수용성 <Insoluble 글루칸인Glucan 뮤탄(mutan)의Mutan 수용성 증가 실험> Increased water solubility test
1. 뮤탄(mutan) 준비1. Mutan preparation
스트렙토코커스 뮤탄스균을 프라그를 형성시키기 위하여 1%의 농도가 되도록 수크로오즈(sucrose)를 첨가한 BHI 배지에서 37℃조건으로 밤새 배양하였다. 워싱 후 침전된 프라그를 2N NaOH에 녹인 후, HCl 을 첨가하여 침전시킨 뒤 워싱하고 다시 침전시킨 뒤 다시 2N NaOH에 녹여 프라그 내의 뮤탄을 정제한다. 정제된 뮤탄은 Anthrone method로 glucose 대비 그 양을 분석 하여 2N NaOH에 뮤탄을 0.1%로 희석 하여 이를 앞으로 뮤탄 용액이라 한다.Streptococcus mutans was incubated overnight at 37 ° C. in BHI medium to which sucrose was added to a concentration of 1% to form plaques. After washing, the precipitated plaque is dissolved in 2N NaOH, precipitated by addition of HCl, washed, precipitated again, and dissolved in 2N NaOH again to purify mutan in the plaque. Purified mutans were analyzed by anthrone method, and the amount of mutan was diluted by 0.1% in 2N NaOH. This is called mutan solution.
2. 뮤탄과 폴리크레줄렌의 반응 및 침전된 뮤탄 양 분석2. Reaction of mutans and polycrezulene and analysis of precipitated mutanes
뮤탄 용액 50ul에 측정하고자 하는 표 3에 따른 폴리크레줄렌을 농도에 맞게 희석한 수용액 50ul 및 120ul의 2N HCl을 혼합하여 3시간 상온에서 반응을 시킨다. 10분간 원심분리 후 증류수로 워싱 한다. 이후, 침전된 뮤탄을 50ul 2N NaOH에 녹이고, 그 중 20ul에 100ul 0.2% anthrone(진한황산)을 첨가하여 10분간 가열한 뒤 680nm에서 흡광도를 측정하여 반응 전 뮤탄의 흡광도와 비교하여 침전된 뮤탄의 양을 측정하였다.50 ul of mucre solution, polycrezulene according to Table 3 to be measured according to the concentration of 50ul and 120ul of 2N HCl diluted according to the concentration is mixed and reacted at room temperature for 3 hours. After centrifugation for 10 minutes, wash with distilled water. Thereafter, the precipitated mutan was dissolved in
폴리크레줄렌이 어떠한 방식으로 뮤탄의 수용성을 증가시키는 지에 대하여는 도 5에 모형을 통하여 나타내었으며, 실험의 결과는 도 6에 나타내었다.How polycrezulene increases the water solubility of mutan is shown through the model in Figure 5, the results of the experiment is shown in Figure 6.
Claims (8)
An oral product comprising the composition of claim 1.
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